Биохимические и иммунохимические свойства натрийуретического пептида В-типа и его предшественника тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Тамм, Наталья Никитична

• Тамм, Наталья Никитична
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тамм, Наталья Никитична

Список используемых сокращений.

Введение.

2 Обзор литературы.

2.1 Натрийуретические пептиды.

2.1.1 Семейство натрийуретических пептидов. История открытия.

2.1.2 Строение натрийуретических пептидов.

2.2 Натрийуретический пептид В-типа.

2.2.1 Регуляция синтеза BNP.

2.2.2 Синтез и секреция BNP.

2.3 Строение и функционирование рецепторов натрийуретических пептидов.

2.3.1 Активация рецепторов А-типа.

2.4 Физиологическое действие BNP.

2.4.1 Действие НП на сердечнососудистую систему.

2.4.2 Действие BNP на эндокринную систему.

2.4.3 Действие НП на работу почек.

2.4.4 Действие натрийуретических пептидов в легких.

2.4.5 Фиброз и гипертрофия сердечной ткани.

2.5 Молекулярные формы BNP в крови.

2.5.1 N-концевой фрагмент предшественника BNP.

2.5.2 Пост-трансляционные модификации молекулы предшественника BNP.

2.5.3 Пост-трансляционные модификации молекулы NT-proBNP.

2.6 Инактивация натрийуретического пептида В-типа и его предшественника.

2.7 Формы BNP, проявляющие физиологическую активность.

2.8 Сердечная недостаточность.

2.8.1 Классификация сердечной недостаточности.

2.8.2 Эпидемиология сердечной недостаточности.

2.8.3 Биохимические аспекты патогенеза сердечной недостаточности.

2.8.4 Использование натрийуретических пептидов для диагностики сердечной недостаточности.

2.8.5 Количественное определение BNP в диагностике острой сердечной недостаточности.

2.8.6Диагностика бессимптомной дисфункции левого желудочка.

2.8.7 Неспецифические изменения кош{ентраг{ии BNP (NT-proBNP).

2.8.8 Использование BNP в оценке прогноза выживаемости.

2.8.9 Определение BNP (NT-pro BNP) для оценки эффективности терапии С H.

2.8.10 Использование BNP в терапии СН.

2.8.11 Пороговые концентрации BNP и NT-proBNP, используемые для постановки диагноза CH.

2.8.12 Методы измерения концентрации BNP в крови.

2.8.13 Диагностические системы для количественного определения NT-proBNP.

2.8.14 Диагностические системы для количественного определения proBNP.

2.8.15 Стандарты для BNP и NT-proBNP диагностических систем.

3 Материалы и методы.

3.1 Материалы.

3.1. 2 Образцы плазмы и сыворотки крови.

3.2 Методы.

3.2.1 Конъюгирование пептидов с белком-носителем.

3.2.2 Иммунизация кроликов и получение политональных антител специфичных к BNP человека.65 /у

3.2.3 Иммунизация мышей и получение линий гибридомных клеток, продуцирующих моноклональные антитела, специфичные к BNP.

3.2.4 Иммуноферментный и иммунофосфоресцентный анализы.

3.2.5 Конъюгирование антител.

3.2.5.1 Конъюгирование антител со стабильным хелатом европия.

3.2.5.2 Конъюгирование антител с производным биотина.

3.2.6 Иммуноферментный анализ.

3.2.7 Иммунофосфоресцентный анализ.

3.2.8 Сэндвич — иммунофосфоресцентный анализ.

3.2.9 Сэндвич-иммунофосфоресцентный анализ с направленной сорбцией антител на планшете.

3.2.10 ДСН-гель-электрофорез по методу Лэммли [167].

3.2.11 ДСН-гель-электрофорез в трис-трициновой буферной системе.

3.2.12 Иммобилизация антител, либо конъюгата пептида с трансферрином, на BrCN-активированной сефарозе.

3.2.13 Приготовление аффинного носителя с использованием Sulfolink Coupling Gel.

3.2.14 Создание молекулярно-генетической конструкции pET-23a(+)-proBNP для экспрессии рекомбинантного proBNP в клетках Е. coli.

3.2.15 Экспрессия и очистка рекомбинантного proBNP.

3.2.16 Алкшшрование SH-групп препарата рекомбинантного proBNP под действием йодацетамида.

3.2.17 Экстракция эндогенных BNP и proBNP из образцов плазмы крови с использованием картриджей Sep-Pak С18.

3.2.18 Хроматографическое разделение белков.

3.2.18.1 Гель-фильтрация.

3.2.18.2 Ионообменная хроматография.

3.2.18.3 Обратно-фазовая хроматография.

3.2.19 Масс-спектрометрический анализ рекомбинантного proBNP.

3.2.20 Получение Fab -фрагментов антител.

3.2.21 Конъюгирование Fab-фрагментов антител 24С5 с синтетическим BNP.

4 Результаты и их обсуждение.

4.1 Получение поликлональных и моноклональных антител, специфичных к BNP человека.

4.1.1 Конъюгирование пептидов, соответствующих различным участкам аминокислотной последовательности BNP человека, с белком-носителем.85 ¡*

4.1.2 Получение поликлональных антител, специфичных к BNP человека.

4.1.3 Получение линий гибридомных клеток, продуцирующих антитела, специфичные к BNP человека.

4.2 Разработка иммунохимической системы для количественного определения BNP.

4.3 Получение и очистка рекомбинантного proBNP, экспрессированного в клетках Escherichia coli (Е. coli).100 г

4.3.1 Создание молекулярно-генетической конструкции pET-23a(+)-proBNP для экспрессии рекомбинантного proBNP в клетках Е. coli.

4.3.2 Очистка рекомбинантного proBNP.

4.4 Анализ BNP-иммунореактивных форм в крови больных с СН.

4.5 Исследование иммунохимических свойств эндогенного proBNP.

4.6 Создание системы для дифференциальной детекции proBNP.

4.7 Исследование стабильности BNP и proBNP.

4.8 Разработка нового метода иммуноанализа для количественного определения нестабильных молекул.

4.8.1 Исследование чувствительности новой системы 24C5-Ab-BNP2 к протеолитической деградации BNP.

4.9 Влияние протеолитической деградации на определение концентрации BNP в крови больных.

Выводы.

Благодарности.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биохимические и иммунохимические свойства натрийуретического пептида В-типа и его предшественника»

Натрийуретический пептид В-типа (BNP) относится к семейству пептидных гормонов, сходных по структуре и участвующих в регуляции объема крови, кровяного давления и водно-солевого баланса организма. Помимо BNP, семейство натрийуретических пептидов (НП) включает в себя натрийуретический пептид А-типа (ANP) и натрийуретический пептид С-типа (CNP). Характерной особенностью НП является 17-членная кольцевая структура, образованная дисульфидной связью между двумя остатками цистеина. Одиннадцать из семнадцати аминокислотных остатков (а.к.о.) кольцевой структуры у всех представителей семейства НП идентичны, тогда как концевые фрагменты пептидов выраженной гомологии не имеют. BNP синтезируется кардиомиоцитами в форме предшественника, proBNPi-ios, состоящего из 108 а.к.о. Под действием специфической протеазы proBNP расщепляется на два фрагмента -физиологически активный С-концевой фрагмент (BNP77-108) и N-концевой фрагмент (NT-proBNPi-76), физиологическая активность которого к настоящему моменту не установлена. Все три пептида - BNP, NT-proBNP и proBNP присутствуют в кровотоке.

Концентрация BNP и NT-proBNP в крови здоровых доноров не превышает 60 и 200 пг/мл, соответственно. Однако при развитии сердечной недостаточности (СН) уровень синтеза и секреции BNP и NT-proBNP значительно увеличивается и может достигать 7-10 нг/мл в случае BNP и нескольких десятков нг/мл в случае NT-proBNP. СН - сложный клинический синдром, возникающий при нарушении сократительной способности сердца. Наиболее частой причиной СН является снижение способности левого желудочка (ЛЖ) к выбросу крови в аорту. В настоящее время СН является одним из наиболее распространенных осложнений сердечнососудистых заболеваний и оказывает существенное влияние на продолжительность и качество жизни пациентов. Клинические симптомы ранних стадий СН являются неспецифическими, что осложняет диагностику данного заболевания. В последние годы важным инструментом для исключения СН и оценки уровня дисфункции ЛЖ является определение концентрации BNP (или NT-proBNP) в крови пациента с использованием иммунохимических диагностических систем. Использование высокочувствительных методов иммуноанализа, основанных на применении моноклональных антител, является единственным возможным способом количественного определения пептидов, представленных в крови в столь низких концентрациях.

Несмотря на широкое применение в клинической практике, до последнего времени практически ничего не было известно о биохимических особенностях BNP, обнаруживаемого в крови человека. Недостаточность знаний о пептиде связана, прежде всего, с его низкой концентрацией в крови и недостаточной чувствительностью имеющихся в настоящее время методов исследования. Данные о том, в какой форме маркер существует в кровотоке, могут быть полезны как для разработки методов достоверного и надежного определения уровня пептида в крови больных, так и для решения более общих фундаментальных задач - совершенствования существующей теории функционирования натрийуретических пептидов человека.

Таким образом, основной целью данной диссертационной работы было изучение биохимических и иммунохимических особенностей BNP человека и его предшественника proBNP с использованием такого высокочувствительного и высокоточного инструмента как моноклональные антитела.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Получить и охарактеризовать набор моноклональных антител, специфически взаимодействующих с различными участками молекулы BNP человека.

2. Создать молекулярно-генетический конструкт для экспрессии рекомбинантного proBNP человека в клетках Е. coli. Разработать метод очистки препарата рекомбинантного proBNP.

3. На основе метода иммуноанализа сэндвич-типа разработать системы для количественного определения BNP и proBNP в образцах.

4. Исследовать биохимические и иммунохимические свойства BNP и его предшественника proBNP, присутствующих в крови больных с сердечной недостаточностью.

2 Обзор литературы

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Тамм, Наталья Никитична

Выводы

1. Получены и охарактеризованы моноклональные антитела, специфичные к различным участкам молекулы BNP человека.

2. Создана система экспрессии и разработан метод получения высокоочищенного препарата рекомбинантного proBNP.

3. Показано, что в крови больных с сердечной недостаточностью концентрация proBNP значительно превышает концентрацию BNP, а соотношение proBNP/BNP варьирует у разных больных.

4. Дано объяснение необычайно высокой стабильности эндогенного BNP, наблюдаемой в крови больных с сердечной недостаточностью.

5. Только антитела специфичные к фрагменту 13-24 молекулы proBNP могут быть использованы при создании системы для дифференциального количественного определения proBNP.

6. Предложен и разработан новый метод для количественного определения нестабильных молекул. Показано преимущество использования данного метода для определения BNP в крови больных с сердечной недостаточностью.

Благодарности

Автор выражает глубокую признательность своему научному руководителю, доктору биологических наук, Алексею Генриховичу Катрухе за чуткое руководство, а также коллективу лаборатории за неоценимую помощь в выполнении данной исследовательской работы.

Автор также выражает свою признательность финской биотехнологической компании Ну Test Оу за предоставленную возможность провести значительную часть исследований, представленных в данной работе, в лаборатории компании в городе Турку.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тамм, Наталья Никитична, 2010 год

1. Henry JP, Pearce JW. The possible role of cardiac atrial stretch receptors in the induction of changes in urine flow. J Physiol 1956;131 (3):572-85.

2. Vesely DL. Natriuretic peptides and acute renal failure. Am J Physiol Renal Physiol 2003;285 (2):F167-77.

3. Vesely DL. Atrial natriuretic hormones originating from the N-terminus of the atrial natriuretic factor prohormone. Clin Exp Pharmacol Physiol 1995;22 (2):108-14.

4. Schulz-Knappe P, Forssmann K, Herbst F, Hock D, Pipkorn R, Forssmann WG. Isolation and structural analysis of "urodilatin", a new peptide of the cardiodilatin-(ANP)-family, extracted from human urine. Klin Wochenschr 1988;66 (17):752-9.

5. Sudoh T, Minamino N, Kangawa K, Matsuo H. Brain natriuretic peptide-32: N-terminal six amino acid extended form of brain natriuretic peptide identified in porcine brain. Biochem Biophys Res Commun 1988; 155 (2):726-32.

6. Levin E. Natriuretic peptides. The New England Journal of Medicine 1998;339:321-8.

7. Richards AM, Lainchbury JG, Nicholls MG, Cameron AV, Yandle TG. Dendroaspis natriuretic peptide: endogenous or dubious? Lancet 2002;359 (9300):5-6.

8. Ogawa Y, Itoh H, Nakao K. Molecular biology and biochemistry of natriuretic peptide family. Clin Exp Pharmacol Physiol 1995;22 (l):49-53.

9. Komatsu Y, Nakao K, Suga S, Ogawa Y, Mukoyama M, Arai H, Shirakami G, Hosoda K, Nakagawa O, Hama N, et al. C-type natriuretic peptide (CNP) in rats and humans. Endocrinology 1991;129 (2):1104-6.

10. Minamino N, Kangawa K, Matsuo H. Isolation and identification of a high molecular weight brain natriuretic peptide in porcine cardiac atrium. Biochem Biophys Res Commun 1988;157 (l):402-9.

11. Tateyama H, Hino J, Minamino N, Kangawa K, Ogihara T, Matsuo H. Characterization of immunoreactive brain natriuretic peptide in human cardiac atrium. Biochem Biophys Res Commun 1990; 166 (3): 1080-7.

12. Hino J, Tateyama H, Minamino N, Kangawa K, Matsuo H. Isolation and identification of human brain natriuretic peptides in cardiac atrium. Biochem Biophys Res Commun 1990; 167 (2):693-700.

13. Mukoyama M, Nakao K, Saito Y, Ogawa Y, Hosoda K, Suga S, Shirakami G, Jougasaki M, Imura H. Human brain natriuretic peptide, a novel cardiac hormone. Lancet 1990;335 (8692):801-2.

14. Mukoyama M, Nakao K, Saito Y, Ogawa Y, Hosoda K, Suga S, Shirakami G, Jougasaki M, Imura H. Increased human brain natriuretic peptide in congestive heart failure. N Engl J Med 1990;323 (ll):757-8.

15. Yoshimura M, Yasue H, Okumura K, Ogawa H, Jougasaki M, Mukoyama M, Nakao K, Imura H. Different secretion patterns of atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide in patients with congestive heart failure. Circulation 1993;87 (2):464-9.

16. Gerbes AL, Dagnino L, Nguyen T, Nemer M. Transcription of brain natriuretic peptide and atrial natriuretic peptide genes in human tissues. J Clin Endocrinol Metab 1994;78 (6):1307-11.

17. Tamura N, Ogawa Y, Yasoda A, Itoh H, Saito Y, Nakao K. Two cardiac natriuretic peptide genes (atrial natriuretic peptide and brain natriuretic peptide) are organized in tandem in the mouse and human genomes. J Mol Cell Cardiol 1996;28 (8): 1811-5.

18. LaPointe MC. Molecular regulation of the brain natriuretic peptide gene. Peptides 2005;26 (6):944-56.

19. Ruskoaho. Pressure Overload Increases GATA4 Binding Activity via Endothelin-1. Circulation 2001;103:730-5.

20. Bhalla SS, Robitaille L, Nemer M. Cooperative activation by GATA-4 and YY1 of the cardiac B-type natriuretic peptide promoter. J Biol Chem 2001 ;276 (14): 11439-45.

21. Liang Q, De Windt LJ, Witt SA, Kimball TR, Markham BE, Molkentin JD. The transcription factors GATA4 and GATA6 regulate cardiomyocyte hypertrophy in vitro and in vivo. J Biol Chem 2001;276 (32):30245-53.

22. Pikkarainen S, Tokola H, Kerkela R, Ruskoaho H. GATA transcription factors in the developing and adult heart. Cardiovasc Res 2004;63 (2): 196-207.

23. He Q, LaPointe MC. Interleukin-lbeta regulates the human brain natriuretic peptide promoter via Ca(2+)-dependent protein kinase pathways. Hypertension 2000;35 (1 Pt 2):292-6.

24. Klimpel KR, Molloy SS, Thomas G, Leppla SH. Anthrax toxin protective antigen is activated by a cell surface protease with the sequence specificity and catalytic properties of furin. Proc Natl Acad Sci U S A 1992;89 (21): 10277-81.

25. Molloy SS, Thomas L, VanSlyke JK, Stenberg PE, Thomas G. Intracellular trafficking and activation of the furin proprotein convertase: localization to the TGN and recycling from the cell surface. EMBO J 1994;13 (l):18-33.

26. Vidricaire G, Denault JB, Leduc R. Characterization of a secreted form of human furin endoprotease. Biochem Biophys Res Commun 1993; 195 (2): 1011-8.

27. Nakayama K. Furin: a mammalian subtilisin/Kex2p-like endoprotease involved in processing of a wide variety of precursor proteins. Biochem J 1997;327 ( Pt 3):625-35.

28. Sawada Y, Inoue M, Kanda T, Sakamaki T, Tanaka S, Minamino N, Nagai R, Takeuchi T. Co-elevation of brain natriuretic peptide and proprotein-processing endoprotease furin after myocardial infarction in rats. FEBS Lett 1997;400 (2):177-82.

29. Wu C, Wu F, Pan J, Morser J, Wu Q. Furin-mediated processing of Pro-C-type natriuretic peptide. J Biol Chem 2003;278 (28):25847-52.

30. Yan W, Wu F, Morser J, Wu Q. Corin, a transmembrane cardiac serine protease, acts as a pro-atrial natriuretic peptide-converting enzyme. Proc Natl Acad Sci U S A 2000;97 (15):8525-9.

31. Knappe S, Wu F, Madlansacay MR, Wu Q. Identification of domain structures in the propeptide of corin essential for the processing of proatrial natriuretic peptide. J Biol Chem 2004;279 (33):34464-71.

32. Chan J KO, Wu F, Morser J, Dole WP, Wu Q. Hypertension in mice lacking the proatrial natriuretic peptide convelíase, corin. Proc Natl Acad Sci USA 2005;102:785-90.

33. Wu Q. The serine protease corin in cardiovascular biology and disease. Front Biosci 2007;12:4179-90.

34. Miyagi M, Misono KS. Disulfide bond structure of the atrial natriuretic peptide receptor extracellular domain: conserved disulfide bonds among guanylate cyclase-coupled receptors. Biochim Biophys Acta 2000; 1478 (l):30-8.

35. Potter LR, Hunter T. Guanylyl cyclase-linked natriuretic peptide receptors: structure and regulation. J Biol Chem 2001 ;276 (9):6057-60.

36. Schiffrin EL, Turgeon A, Tremblay J, Deslongchamps M. Effects of ANP, angiotensin, vasopressin, and endothelin on ANP receptors in cultured rat vascular smooth muscle cells. Am J Physiol 1991 ;260 (1 Pt 2):H58-65.

37. Suga S, Nakao K, Mukoyama M, Arai H, Hosoda K, Ogawa Y, Imura H. Characterization of natriuretic peptide receptors in cultured cells. Hypertension 1992; 19 (6 Pt 2):762-5.

38. Lowe DG, Chang MS, Hellmiss R, Chen E, Singh S, Garbers DL, Goeddel DV. Human atrial natriuretic peptide receptor defines a new paradigm for second messenger signal transduction. EMBO J 1989;8 (5): 1377-84.

39. Lopez MJ, Wong SK, Kishimoto I, Dubois S, Mach V, Friesen J, Garbers DL, Beuve A. Salt-resistant hypertension in mice lacking the guanylyl cyclase-A receptor for atrial natriuretic peptide. Nature 1995;378 (6552):65-8.

40. Pandey KN, Oliver PM, Maeda N, Smithies O. Hypertension associated with decreased testosterone levels in natriuretic peptide receptor-A gene-knockout and gene-duplicated mutant mouse models. Endocrinology 1999;140 (11):5112-9.

41. Yasoda A, Komatsu Y, Chusho H, Miyazawa T, Ozasa A, Miura M, Kurihara T, Rogi T, Tanaka S, Suda M, Tamura N, Ogawa Y, Nakao K. Overexpression of CNP in chondrocytes rescues achondroplasia through a MAPK-dependent pathway. Nat Med 2004;10 (l):80-6.

42. Tsuji T, Kunieda T. A loss-of-function mutation in natriuretic peptide receptor 2 (Npr2) gene is responsible for disproportionate dwarfism in cn/cn mouse. J Biol Chem 2005;280 (14):14288-92.

43. Stults JT, O'Connell KL, Garcia C, Wong S, Engel AM, Garbers DL, Lowe DG. The disulfide linkages and glycosylation sites of the human natriuretic peptide receptor-C homodimer. Biochemistry 1994;33 (37): 11372-81.

44. Potter LR, Abbey-Hosch S, Dickey DM. Natriuretic peptides, their receptors, and cyclic guanosine monophosphate-dependent signaling functions. Endocr Rev 2006;27 (1):47-72.

45. Nussenzveig DR, Lewicki JA, Maack T. Cellular mechanisms of the clearance function of type C receptors of atrial natriuretic factor. J Biol Chem 1990;265 (34):20952-8.

46. Juilfs DM, Soderling S, Burns F, Beavo J A. Cyclic GMP as substrate and regulator of cyclic nucleotide phosphodiesterases (PDEs). Rev Physiol Biochem Pharmacol1999; 13 5-67-104. --

47. Lucas KA, Pitari GM, Kazerounian S, Ruiz-Stewart I, Park J, Schulz S, Chepenik KP, Waldman SA. Guanylyl cyclases and signaling by cyclic GMP. Pharmacol Rev 2000;52 (3):375-414.

48. Brown LA, Nunez DJ, Wilkins MR. Differential regulation of natriuretic peptide receptor messenger RNAs during the development of cardiac hypertrophy in the rat. J Clin Invest 1993;92 (6):2702-12.

49. Pidgeon GB, Richards AM, Nicholls MG, Espiner EA, Yandle TG, Frampton C. Differing metabolism and bioactivity of atrial and brain natriuretic peptides in essential hypertension. Hypertension 1996;27 (4):906-13.

50. Hutchinson HG, Trindade PT, Cunanan DB, Wu CF, Pratt RE. Mechanisms of natriuretic-peptide-induced growth inhibition of vascular smooth muscle cells. Cardiovasc Res 1997;35 (1): 158-67.

51. Weidmann P, Gnadinger MP, Ziswiler HR, Shaw S, Bachmann C, Rascher W, Uehlinger DE, Hasler L, Reubi FC. Cardiovascular, endocrine and renal effects of atrial natriuretic peptide in essential hypertension. J Hypertens Suppl 1986;4 (2):S71-83.

52. Holmes SJ, Espiner EA, Richards AM, Yandle TG, Frampton C. Renal, endocrine, and hemodynamic effects of human brain natriuretic peptide in normal man. J Clin Endocrinol Metab 1993;76 (l):91-6.

53. Klinger JR, Warburton RR, Pietras LA, Smithies O, Swift R, Hill NS. Genetic disruption of atrial natriuretic peptide causes pulmonary hypertension in normoxic and hypoxic mice. Am J Physiol 1999;276 (5 Pt l):L868-74.

54. Cao L, Gardner DG. Natriuretic peptides inhibit DNA synthesis in cardiac fibroblasts. Hypertension 1995;25 (2):227-34.

55. Tamura K, Takamori S, Mifune H, Hayashi A, Shirouzu K. Changes in atrial natriuretic peptide concentration and expression of its receptors after pneumonectomy in the rat. Clin Sci (Lond) 2000;99 (4):343-8.

56. Rosenkranz AC, Woods RL, Dusting GJ, Ritchie RH. Antihypertrophic actions of the natriuretic peptides in adult rat cardiomyocytes: importance of cyclic GMP. Cardiovasc Res 2003;57(2):515-22.

57. Kishimoto I, Saito Y, Nakao K. The natriuretic peptide system]. Nippon Rinsho 2000;58 Suppl 1:139-47.

58. Tateyama H, Hino J, Minamino N, Kangawa K, Minamino T, Sakai K, Ogihara T, Matsuo H. Concentrations and molecular forms of human brain natriuretic peptide in plasma. Biochem Biophys Res Commun 1992; 185 (2):760-7.

59. Yandle TG, Richards AM, Gilbert A, Fisher S, Holmes S, Espiner EA. Assay of brain natriuretic peptide (BNP) in human plasma: evidence for high molecular weight BNP as a major plasma component in heart failure. J Clin Endocrinol Metab 1993;76 (4):832-8.

60. Hunt PJ, Yandle TG, Nicholls MG, Richards AM, Espiner EA. The amino-terminal portion of pro-brain natriuretic peptide (Pro-BNP) circulates in human plasma. Biochem Biophys Res Commun 1995;214 (3):1175-83.

61. Crimmins DL. Human N-terminal proBNP is a monomer. Clin Chem 2005;51 (6): 10358.

62. Crimmins DL, Kao JL. A glycosylated form of the human cardiac hormone pro B-type natriuretic peptide is an intrinsically unstructured monomelic protein. Arch Biochem Biophys 2008;475 (1):36-41.

63. Schellenberger U, O'Rear J, Guzzetta A, Jue RA, Protter AA, Pollitt NS. The precursor to B-type natriuretic peptide is an O-linked glycoprotein. Arch Biochem Biophys 2006;451 (2): 160-6.

64. Seferian KR, Tamm NN, Semenov AG, Tolstaya AA, Koshkina EV, Krasnoselsky MI, Postnikov AB, Serebryanaya DV, Apple FS, Murakami MM, Katrukha AG. Immunodetection of glycosylated NT-proBNP circulating in human blood. Clin Chem 2008;54 (5):866-73.

65. Hammerer-Lercher A, Halfinger B, Sarg B, Mair J, Puschendorf B, Griesmacher A, Guzman NA, Lindner HH. Analysis of circulating forms of proBNP and NT-proBNP in patients with severe heart failure. Clin Chem 2008;54 (5):858-65.

66. Brandt I, Lambeir AM, Ketelslegers JM, Vanderheyden M, Scharpe S, De Meester I. Dipeptidyl-peptidase IV converts intact B-type natriuretic peptide into its des-SerPro form. Clin Chem 2006;52 (l):82-7.

67. Lam CS, Burnett JC, Jr., Costello-Boerrigter L, Rodeheffer RJ, Redfield MM. Alternate circulating pro-B-type natriuretic peptide and B-type natriuretic peptide forms in the general population. J Am Coll Cardiol 2007;49 (11):1193-202.

68. Schou M, Dalsgaard MK, Clemmesen O, Dawson EA, Yoshiga CC, Nielsen HB, Gustafsson F, Hildebrandt PR, Secher NH. Kidneys extract BNP and NT-proBNP in healthy young men. J Appl Physiol 2005;99 (5): 1676-80.

69. Martinez-Rumayor A, Richards AM, Burnett JC, Januzzi JL, Jr. Biology of the natriuretic peptides. Am J Cardiol 2008;101 (3A):3-8.

70. Seymour AA, Asaad MM, Abboa-Offei BE, Rovnyak PL, Fennell S, Rogers WL. Potentiation of brain natriuretic peptides by SQ 28,603, an inhibitor of neutral endopeptidase 3.4.24.11, in monkeys and rats. J Pharmacol Exp Ther 1992;262 (l):60-70.

71. Kenny AJ, Bourne A, Ingram J. Hydrolysis of human and pig brain natriuretic peptides, urodilatin, C-type natriuretic peptide and some C-receptor ligands by endopeptidase-24.11. Biochem J 1993;291 (Pt l):83-8.

72. Chen HH, Lainchbury JG, Burnett JC, Jr. Natriuretic peptide receptors and neutral endopeptidase in mediating the renal actions of a new therapeutic synthetic natriuretic peptide dendroaspis natriuretic peptide. J Am Coll Cardiol 2002;40 (6): 1186-91.

73. Kerr MA, Kenny AJ. The purification and specificity of a neutral endopeptidase from rabbit kidney brush border. Biochem J 1974; 137 (3):477-88.

74. Norman JA, Little D, Bolgar M, Di Donato G. Degradation of brain natriuretic peptide by neutral endopeptidase: species specific sites of proteolysis determined by mass spectrometry. Biochem Biophys Res Commun 1991;175 (l):22-30.

75. Pankow K, Schwiebs A, Becker M, Siems WE, Krause G, Walther T. Structural substrate conditions required for neutral endopeptidase-mediated natriuretic Peptide degradation. J Mol Biol 2009;393 (2):496-503.

76. Goetze JP, Jensen G, Moller S, Bendtsen F, Rehfeld JF, Henriksen JH. BNP and N-terminal proBNP are both extracted in the normal kidney. Eur J Clin Invest 2006;36 (1):8-15.

77. Rutten JH, Boomsma F, van den Meiracker AH. Higher renal extraction of ANP compared with NT-proANP, BNP and NT-proBNP. Eur J Clin Invest 2006;36 (7):514-5.

78. Almirez R, Protter AA. Clearance of human brain natriuretic peptide in rabbits; effect of the kidney, the natriuretic peptide clearance receptor, and peptidase activity. J Pharmacol Exp Ther 1999;289 (2):976-80.

79. Smith MW, Espiner EA, Yandle TG, Charles CJ, Richards AM. Delayed metabolism of human brain natriuretic peptide reflects resistance to neutral endopeptidase. J Endocrinol 2000; 167 (2):239-46.

80. Shimizu H, Masuta K, Aono K, Asada H, Sasakura K, Tamaki M, Sugita K, Yamada K. Molecular forms of human brain natriuretic peptide in plasma. Clin Chim Acta 2002;316 (1-2): 129-35.

81. Pankow K, Wang Y, Gembardt F, Krause E, Sun X, Krause G, Schultheiss HP, Siems WE, Walther T. Successive action of meprin A and neprilysin catabolizes B-type natriuretic peptide. Circ Res 2007;101 (9):875-82.

82. Dickey DM, Burnett JC, Jr., Potter LR. Novel Afunctional natriuretic peptides as potential therapeutics. J Biol Chem 2008;283 (50):35003-9.

83. Pemberton CJ, Johnson ML, Yandle TG, Espiner EA. Deconvolution analysis of cardiac natriuretic peptides during acute volume overload. Hypertension 2000;36 (3):355-9.

84. Heublein BK, Boerrigter G, Cataliotti A, Sandberg SM, Redfield MM, Burnett JC. Immunoreactivity and Guanosine 3',5'-Cyclic Monophosphate Activating Actions of Various Molecular Forms of Human B-Type Natriuretic Peptide. Hypertension 2007;49:1114-9.

85. Boerrigter G, Costello-Boerrigter LC, Harty GJ, Lapp H, Burnett JC, Jr. Des-serine-proline brain natriuretic peptide 3-32 in cardiorenal regulation. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol 2007;292 (2):R897-901.

86. Liang F, O'Rear J, Schellenberger U, Tai L, Lasecki M, Schreiner GF, Apple FS, Maisel AS, Pollitt NS, Protter AA. Evidence for functional heterogeneity of circulating B-type natriuretic peptide. J Am Coll Cardiol 2007;49 (10):1071-8.

87. Моисеев ВС. Сердечная недостаточность и достижения генетики. Сердечная недостаточность 2000;1 (4):22-5.

88. ИЗ. Беленков ЮН, Фомин, И . В., Мареев, В. Ю Распространенность хронической сердечной недостаточности в Европейской части Российской Федерации-данные ЭПОХА-ХСН (часть 2). Сердечная Недостаточность 2006;7(3):3-7.

89. Hasking GJ, Esler MD, Jennings GL, Burton D, Johns JA, Korner PI.Norepinephrine spillover to plasma in patients with congestive heart failure:evidence of increased overall and cardiorenal sympathetic nervous activity. Circulation 1986;73:615-21.

90. Wei CM, Heublein DM, Perrella MA, Lerman A, Rodeheffer RJ, McGregor CG, Edwards WD, Schaff HV, Burnett JC, Jr. Natriuretic peptide system in human heart failure. Circulation 1993;88 (3):1004-9.

91. Remme WJ, Swedberg K. Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic heart failure. Eur Heart J 2001 ;22 (17): 1527-60.

92. Cowie MR, Mendez GF. BNP and congestive heart failure. Prog Cardiovasc Dis 2002;44 (4):293-321.

93. Clerico A. The increasing impact of laboratory medicine on clinical cardiology. Clin Chem Lab Med 2003;41 (7):871-83.

94. Luchner A, Stevens TL, Borgeson DD, Redfield M, Wei CM, Porter JG, Burnett JC, Jr. Differential atrial and ventricular expression of myocardial BNP during evolution of heart failure. Am J Physiol 1998;274 (5 Pt 2):H1684-9.

95. McDonagh TA, Robb SD, Murdoch DR, Morton J J, Ford I, Morrison CE, Tunstall-Pedoe H, McMurray JJ, Dargie HJ. Biochemical detection of left-ventricular systolic dysfunction. Lancet 1998;351 (9095):9-13.

96. Cowie MR, Struthers AD, Wood DA, Coats AJ, Thompson SG, Poole-Wilson PA, Sutton GC. Value of natriuretic peptides in assessment of patients with possible new heart failure in primary care. Lancet 1997;350 (9088): 1349-53.

97. Mueller C, Scholer A, Laule-Kilian K, Martina B, Schindler C, Buser P, Pfisterer M, Perruchoud AP. Use of B-type natriuretic peptide in the evaluation and management of acute dyspnea. N Engl J Med 2004;350 (7):647-54.

98. Vasan RS, Benjamin EJ, Larson MG, Leip EP, Wang TJ, Wilson PW, Levy D. Plasma natriuretic peptides for community screening for left ventricular hypertrophy and systolic dysfunction: the Framingham heart study. JAMA 2002;288 (10): 1252-9.

99. Redfield MM, Rodeheffer RJ, Jacobsen SJ, Mahoney DW, Bailey KR, Burnett JC, Jr. Plasma brain natriuretic peptide to detect preclinical ventricular systolic or diastolic dysfunction: a community-based study. Circulation 2004; 109 (25):3176-81.

100. Clerico A, Del Ry S, Maffei S, Prontera C, Emdin M, Giannessi D. The circulating levels of cardiac natriuretic hormones in healthy adults: effects of age and sex. Clin Chem Lab Med 2002;40 (4):371-7.

101. Koglin J, Pehlivanli S, Schwaiblmair M, Vogeser M, Cremer P, vonScheidt W. Role of brain natriuretic peptide in risk stratification of patients with congestive heart failure. J Am Coll Cardiol 2001 ;38 (7): 1934-41.

102. Harrison A, Morrison LK, Krishnaswamy P, Kazanegra R, Clopton P, Dao Q, Hlavin P, Maisel AS. B-type natriuretic peptide predicts future cardiac events in patients presenting to the emergency department with dyspnea. Ann Emerg Med 2002;39 (2): 131-8.

103. Cardarelli R, Lumicao TG, Jr. B-type natriuretic peptide: a review of its diagnostic, prognostic, and therapeutic monitoring value in heart failure for primary care physicians. J Am Board Fam Pract 2003;16 (4):327-33.

104. Richards AM, Lainchbury JG, Nicholls MG, Troughton RW, Yandle TG. BNP in hormone-guided treatment of heart failure. Trends Endocrinol Metab 2002; 13 (4): 151-5.

105. Latini R, Masson S, de Angelis N, Anand I. Role of brain natriuretic peptide in the diagnosis and management of heart failure: current concepts. J Card Fail 2002;8 (5):288-99.

106. Troughton RW, Richards AM, Yandle TG, Nicholls G. Routine measurement of natriuretic peptide to guide the diagnosis and management of chronic heart failure.----Circulation 2004; 109 (25):e325-6; author reply e-6.

107. Doust JA, Glasziou PP, Pietrzak E, Dobson A J. A systematic review of the diagnostic accuracy of natriuretic peptides for heart failure. Arch Intern Med 2004; 164 (18): 197884.

108. Pfister R, Schneider CA. Natriuretic peptides BNP and NT-pro-BNP: established laboratory markers in clinical practice or just perspectives? Clin Chim Acta 2004;349 (1-2):25-38.

109. Mueller T, Gegenhuber A, Poelz W, Haltmayer M. Head-to-head comparison of the diagnostic utility of BNP and NT-proBNP in symptomatic and asymptomatic structural heart disease. Clin Chim Acta 2004;341 (l-2):41-8.

110. Quantative immonoradiometric assay kit for the determination of human brain (B-type) natriuretic peptide in plasma product insert]. Shionogi&Co., LTD 2002.

111. Guidelines for the diagnosis and treatment of chronic heart failure. Task force for the diagnosis and treatment of chronic heart failure, European Society of cardiology. Eur Heart J 2001;22:1527-60.

112. Elecsys Systems. Roche Diagnostics product insert]. 2001.

113. Vogeser M, Jacob K. B-type natriuretic peptide (BNP)—validation of an immediate response assay. Clin Lab 2001;47 (l-2):29-33.

114. Biosite Diagnostics Inc. product insert]. 2000.

115. Rawlins ML, Owen WE, Roberts WL. Performance characteristics of four automated natriuretic peptide assays. Am J Clin Pathol 2005; 123 (3):439-45.

116. Hughes D, Talwar S, Squire IB, Davies JE, Ng LL. An immunoluminometric assay for N-terminal pro-brain natriuretic peptide: development of a test for left ventricular dysfunction. Clin Sci (Lond) 1999;96 (4):373-80.

117. Apple FS, Panteghini M, Ravkilde J, Mair J, Wu AH, Tate J, Pagani F, Christenson RH, Jaffe AS. Quality specifications for B-type natriuretic peptide assays. Clin Chem 2005;51 (3):486-93.

118. Waldo SW, Beede J, Isakson S, Villard-Saussine S, Fareh J, Clopton P, Fitzgerald RL, Maisel AS. Pro-B-type natriuretic peptide levels in acute decompensated heart failure. J Am Coll Cardiol 2008;51 (19): 1874-82.

119. Horwich ТВ, Hamilton MA, Fonarow GC. B-type natriuretic peptide levels in obese patients with advanced heart failure. J Am Coll Cardiol 2006;47 (l):85-90.

120. Hemmila I. Fluoroimmunoassays and immunofluorometric assays. Clin Chem 1985;31 (3):359-70.

121. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 1970;227 (5259):680-5.

122. Schagger H, von Jagow G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal Biochem 1987; 166 (2):368-79.

123. Остерман JIA. Хроматография белков и нуклеиновых кислот. Москва: Наука 1985.

124. Harlow Е, Lane, D. Antibodies: a laboratory manual. 1988.

125. Kohno M, Horio T, Yokokawa К, Murakawa К, Yasunari К, Akioka К, Tahara A, Toda I, Takeuchi K, Kurihara N, et al. Brain natriuretic peptide as a cardiac hormone in essential hypertension. Am J Med 1992;92 (l):29-34.

126. Ishizaka Y, Yamamoto Y, Tanaka M, Kato F, Yokota N, Kato J, Kitamura K, Eto T, Kangawa K, et al. Molecular forms of human brain natriuretic peptide (BNP) in plasma of patients on hemodialysis (HD). Clin Nephrol 1995;43 (4):237-42.

127. Schulz H, Langvik ТА, Lund Sagen E, Smith J, Ahmadi N, Hall C. Radioimmunoassay for N-terminal probrain natriuretic peptide in human plasma. Scand J Clin Lab Invest 2001 ;61 (l):33-42.

128. Hunt PJ, Espiner EA, Nicholls MG, Richards AM, Yandle TG. The role of the circulation in processing pro-brain natriuretic peptide (proBNP) to amino-terminal BNP and BNP-32. Peptides 1997;18 (10):1475-81.

129. Murdoch DR, Byrne J, Farmer R, Morton JJ. Disparity between studies of the stability of BNP in blood: comparison of endogenous and exogenous peptide. Heart 1999;81 (2):212-3.

130. Belenky A, Smith A, Zhang B, Lin S, Despres N, Wu AH, Bluestein BI. The effect of class-specific protease inhibitors on the stabilization of B-type natriuretic peptide in human plasma. Clin Chim Acta 2004;340 (l-2):163-72.

131. Buckley MG, Marcus NJ, Yacoub MH, Singer DR. Prolonged stability of brain natriuretic peptide: importance for non-invasive assessment of cardiac function in clinical practice. Clin Sci (Lond) 1998;95 (3):235-9.

132. Evans MJ, Livesey JH, Ellis MJ, Yandle TG. Effect of anticoagulants and storage temperatures on stability of plasma and serum hormones. Clin Biochem 2001 ;34 (2): 10712.

133. Niederkofler EE, Kiernan UA, O'Rear J, Menon S, Saghir S, Protter AA, Nelson RW, Schellenberger U. Detection of endogenous B-type natriuretic peptide at very low concentrations in patients with heart failure. Circ Heart Fail 2008; 1 (4):258-64.