Структурно-функциональная организация хромосом и изменение генома у трансгенных сельскохозяйственных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, доктор биологических наук Козикова, Лариса Васильевна

• Козикова, Лариса Васильевна
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Козикова, Лариса Васильевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Структурно-функциональная характеристика хромосом и гетерохроматина

1Л .2. Характеристика генома птиц

1.1.3. Нарушения структуры и функции хромосом

1.1.4. Использование методов трансгеноза для изучения структурно-функциональных характеристик хромосом

1.2. Линейная дифференцированность хромосом

1.2.1. Дифференциальная окраска хромосом 36 1.2.2.0рганизация генома и линейная дифференцированность хромосом

1.3. Репродукция хромосом 41 1.3.1 .Молекулярные аспекты репликации ДНК

1.3.2.Клеточный цикл

1.3.3.Меж- и внутрихромосомная асинхронность синтеза ДНК

1.4. Трансгеноз

1.4.1. Методы генетической модификации генома млекопитающих

1.4.2. Введение рекомбинантных плазмид в ядро оплодотворенной яйцеклетки

1.4.3. Эффективность трансгеноза у лабораторных и сельскохозяйственных животных

1.4.4. Молекулярные механизмы трансгеноза

1.4.5. Экспрессия генных конструкций

1.4.6. Выведение линий трансгенных животных

1.4.7. Особенности роста трансгенных животных

1.4.8. Активация эмбрионального генома

1.4.9. Перспективы использования трансгенных животных 78 1.5. Заключение к обзору литературы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Материал исследования

2.2. Приготовление препаратов митотических хромосом 87 2.2.1 .Получение препаратов митотических хромосом из культуры эмбриональных фибробластов кур

2.2.2. Приготовление препаратов хромосом из клеток костного мозга

2.2.3. Культивирование лейкоцитов периферической крови и приготовление препаратов хромосом

2.3 Метод авторадиографии

2.3.1. Применение авторадиографии для исследования репродукции хромосом.

2.3.2. Анализ радиоавтографов

2.3.3. Авторадиографический анализ зигот кроликов и получение ультратонких срезов

2.4. Методы, выявляющие линейную дифференцированность хромосом

2.4.1. G-окраска хромосом кур и свиней

2.4.2. RBA-окраска хромосом кролика

2.5. Деиситометрия

2.6. Морфометрический анализ и статистическая обработка материала

2.7. Кариотипирование хромосом кроликов и свиней

2.8. Получение вазектомированных кроликов

2.9. Получение зародышей кролика на стадии двух пронуклеусов

2.10. Подготовка доноров и реципиентов свиней

2.11. Метод микроиньекции генов в пронуклеусы зигот

2.12. Трансплантация зародышей

2.13. Получение эмбрионов коров in vitro

2.13.1. Созревание ооцитов in vitro

2.13.2. Оплодотворение ооцитов коров in vitro и получение зигот

2.13.3. Культивирование in vitro эмбрионов коров

2.14. Методы, используемые при анализе экспрессии репортерных генов

2.14.1 .Экспрессия GFP-гена

2.14.2. Экспрессия LacZ гена

2.15. Скрининг трансгенных животных

2.16. Генетические конструкции, использованные для микроиньекции в ранние эмбрионы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Морфометрический анализ макрохромосом кур

3.1.1. Размеры и морфология макрохромосом кур

3.1.2. Аберрации хромосом у эмбрионов кур

3.1.3. Влияние криоконсервации и сроков хранения семени на частоту и спектр хромосомных аберраций у кур

3.2. Линейная дифференцированность хромосом кур

3.2.1. Характеристика G-полос в макрохромосомах кур

3.2.2. Картирование G-полос первой пары аутосом домашних кур

3.3. Репродукция хромосом кур

3.3.1. Определение параметров G2- и S- периодов

3.3.2. Включение 3Н-тимидина в макро- и микрохромосомы цыплят 136 3.3.2.1.Репродукция хромосом кур в культуре эмбриональных фибробластов

3.3.3. Межхромосомная асинхронность синтеза ДНК

3.3.3.1. Межхромосомная асинхронность репликации ДНК в эмбриональных фибробластах кур

3.3.3.2. Межхромосомная асинхронность репликации ДНК в клетках костного мозга цыплят

3.3.4. Внутрихромосомная асинхронность синтеза ДНК

3.3.4.1. Внутрихромосомная асинхронность репликации ДНК в начале S-периода

3.3.4.2. Внутрихромосомная асинхронность синтеза ДНК в конце S-периода

3.3.5. Взаимосвязь линейной структуры хромосом с внутрихромосомной асинхронностью репликации ДНК на примере 1-й аутосомы кур

3.4. Характеристика репликационной активности генома кролика методом RBA-маркирования

3.4.1.Идентификация хромосом кролика и кариотипирование

3.4.2. Характеристика репликационной активности генома кролика во второй половине S-периода

3.4.3. Сравнительная характеристика хромосом разных уровней конденсации

3.5.Первый раунд репликации ДНК в пронуклеусах кроликов

3.6. Перенос генов соматотропной оси в зиготы кроликов

3.6.1. Получение ранних эмбрионов на стадии зиготы с оценкой их качества

3.6.2. Влияние процесса микроинъекции и величины микроигл на выживаемость эмбрионов

3.6.3. Влияние различных манипуляций, включая трансплантацию, на жизнеспособность зародышей до момента рождения

3.6.4.Анализ интеграции генетических конструкцций

МТ-1 / bGH и МТ-1 /hGRF в геном кроликов

3.6.5. Фенотипические показатели трансгенных кроликов с перенесенными генами hGRF и bGH

3.6.6. Характер наследования трансгенов hGRF и bGH и фенотипический анализ

3.6.7. Изучение стабильности генома кроликов, полученных из эмбрионов, в которые микроинъецировали генную конструкцию МТ-1 /hGRF.

3.7. Введение гена рилизинг фактора гормона роста человека в оплодотворенные яйцеклетки свиней с последующим генетическим анализом

3.7.1. Получение ранних эмбрионов свиней и оценка их качества

3.7.2 Визуализация пронуклеусов и микроинъекция генной конструкции hGRF в зиготы свиней

3.7.3. Гибридизационный анализ интеграции гена hGRF в геном свиней

3.7.4. Фенотипические показатели трансгенных свиней

3.7.5. Цитогенетический анализ и изучение уровня стабильности генома свиней, полученных из эмбрионов, в которые микроинъецировали ген hGRF

3.7. Экспрессия репортерных генов у доимплантационных зародышей сельскохозяйственных животных

3.7.1. Экспрессия генов Lac Z у ранних эмбрионов кроликов

3.7.2. Экспрессия GFP гена у эмбрионов коров, полученных in vitro

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно-функциональная организация хромосом и изменение генома у трансгенных сельскохозяйственных животных»

Актуальность проблемы. Исследования по теме диссертации проводили в рамках федеральной целевой программы фундаментальных и прикладных исследований по научному обеспечению развития агропромышленного комплекса Российской Федерации. Государственный регистрационный номер НИР 01.200.118849.

Анализ кариотипов и идентификация хромосом позволили выявить наследственные аномалии животных и человека, создавать хозяйственно-ценные гибриды. Изучение типов хромосомных перестроек показали взаимосвязь структуры и функции хромосом, что послужило основой создания одного из тест систем мутагенной активности различных агентов, а также осуществлять цитогенетический контроль пород домашних животных (Яковлев А.Ф., 1985). Одна из основных функций хромосом - репродукция осуществляется по длине хромосомы и находится в тесной связи с конденсацией и генетической активностью. В метафазной хромосоме эти зоны разновременной репликации разграничены во времени и пространстве. Стабильность репликационной структуры и ее специфичность для каждой хромосомы указывает на высокую упорядоченность укладки хромосомной нити в метафазной хромосоме, строго воспроизводящуюся в ряду клеточных поколений (Захаров и др., 1982).

Репродукция хромосом протекает в S- периоде по строго регламентированной программе, которая определяется как геномными, так и внегеномными факторами. Отклонение отдельных хромосом от стандартной программы синтеза ДНК, как правило, приводит к хромосомным аномалиям. Факт чередования рано и поздно реплицирующихся районов, различный характер их конденсации и ряд других сопутствующих свойств, представляются не случайными и требуют дальнейшего изучения.

Изучение репродукции хромосом кур представляется достаточно удобным по сравнению с другими видами сельскохозяйственных животных в виду того, что в кариотипе птиц наряду с хорошо идентифицирующимися макрохромосомами присутствуют микрохромосомы. Сведения о репродукции хромосом кур весьма скромные и не дают полного представления об интенсивности этого процесса в течение S-периода.

Последние два десятилетия характеризуются значительными успехами в области направленной генетической трансформации клеток животных. Трансформация генома стала возможной благодаря достижениям генной инженерии, а также использованию новых методов переноса генетической информации как в соматические клетки, так и в зародыши млекопитающих и птиц. Успехи экспериментальной эмбриологии в выделении яйцеклеток животных, культивировании, трансплантации и манипуляции с эмбриональными клетками, позволили разработать системы, используемые в опытах по генетической трансформации. Ценность таких опытов заключается в возможности получения трансгенных животных с измененным генотипом, фенотипом и передачи трансформированных признаков потомкам.

Существует несколько достаточно надежных методов генетической трансформации зародышей млекопитающих. В их число входит получение генетических химер, интродукция чужеродных генов в зародыши посредством соматических клеток и спермиев, трансфекция, а также микроинъекция клонированных генов непосредственно в пронуклеусы зигот. Многочисленными работами как отечественных, так и зарубежных авторов показано, что последний из методических подходов более эффективен ( Зиновьева, Эрнст, 2004).

Развитие методов генетической инженерии и исследование структуры нуклеиновых кислот позволило глубже понять механизмы действия генов как у прокариотов, так и у эукариотов, на клеточном уровне и на уровне целого организма. Между тем возникает ряд вопросов о закономерностях структурных перестроек в геноме, о механизмах работы специфических генов в процессе развития эукариотических организмов, о тканевой специфичности и дифференциальной активности групп генов.

В последние годы проблема переноса генетической трансформации перешла в стадию активных поисков возможности практического применения генетической инженерии в медицине и сельскохозяйственном производстве. Так, были получены трансгенные животные с повышенными темпами роста, измененным количеством и качеством молока, шерсти, увеличенной плодовитостью. Создаются животные, которые могут быть источниками органов для ксенотрансплантации, а также животные - биореакторы ценных биологически активных препаратов таких как гемоглобин, фактор свертываемости крови, альфа-антитрипсин, интерферон и др. (Андреева, Тарантул, 2003; Зиновьева, Эрнст, 2004; Cozzi et al., 2000).

Положительные результаты переноса генов в соматические клетки млекопитающих и достижения экспериментальной эмбриологии стимулировало развитие нового этапа - переноса генов на уровне целого организма. С усовершенствованием ряда методик появилась возможность вводить с помощью микроинъекций в одноклеточные эмбрионы гомо- и гетерологичные гены, искусственные конструкции генов, фрагменты хромосом или целые хромосомы и даже целые геномы. Современные методы анализа ДНК позволяют с помощью рестриктаз охарактеризовать структуру донорского гена, интегрированного в геном реципиента, число копий и уровень экспрессии. Усовершенствование методов клонирования и секвенирования предоставили возможность создать рекомбинантные генно-инженерные конструкции, сочетающие в себе целевые гены и регуляторные элементы, позволяющие воздействовать на разные уровни экспрессии генов, усиливая их траскрипционную активность в сотни раз.

Трансгенные организмы оказались ценной, перспективной моделью для изучения различных аспектов во многих областях теоретической и прикладной биологии, таких как исследование структурных особенностей хроматина и индивидуальных различий между генами одного организма и геномами разных организмов. Возможности использования трансгенных животных постоянно расширяются, и накопленная информация в ближайшем будущем найдет применение в биотехнологии и хозяйственной деятельности человека, что очень важно ввиду демографических и экологических кризисов перенаселенной планеты. Степень риска при использовании трансгенных организмов следует учитывать с учетом долговременных интересов жизнеобеспечения общества (Жученко, 2003).

В многочисленных публикациях по трансгенозу в основном констатируются факты получения трансгенных организмов с использованием разных генетических конструкций, но не уделяется достаточное внимание видовым особенностям раннего эмбриогенеза, последствиям микроинъекции зигот с изучением дестабилизации реципиентного генома. Актуальность проблемы генетической трансформации животных, а также недостаточная изученность функционально-структурной организации генома сельскохозяйственных животных и влияния различных факторов на эффективность трансформации определили цели и задачи данного исследования.

Цель работы и задачи исследования. Целью исследования являлось изучение структурно-функциональной организации хромосом у интактных животных, а также у эмбрионов и животных после введения генов соматотропной оси в зиготы разных видов сельскохозяйственных животных. В этой связи в настоящей работе были поставлены следующие задачи:

- провести морфометрический анализ и определить уровень спонтанных аберраций хромосом в эмбрионах кур в норме и при использовании криоконсервированного семени;

- охарактеризовать структурную дифференцированность хромосом кур;

- выявить характер включения 3Н-тимидина в макрохромосомы и микрохромосомы кур с учетом внутри- и межхромосомной асинхронности репликации ДНК;

- показать взаимосвязь линейной структуры хромосом с внутрихромосомной асинхронностью репликации ДНК на примере 1-й аутосомы кур;

- охарактеризовать репликационную активность генома кролика и ее взаимосвязь с процессом конденсации методом RBA-маркирования;

- изучить первый раунд репликации ДНК в пронуклеусах кролика;

- получить трансгенных кроликов и свиней с введенными генами соматотропной оси с учетом анализа интеграции генов, фенотипических показателей, характера наследования трансгенов;

- изучить уровень стабильности генома кроликов и свиней, полученных из эмбрионов, в которые микроинъецировали ген рилизинг фактора гормона роста (hGRF);

- исследовать экспрессию репортерных генов у предимплантационных зародышей сельскохозяйственных животных.

Научная новизна. Впервые детально выявлены скорость и порядок репликации ДНК хромосом кур в течение всего S - периода с регистрацией характера включения 3Н-тимидина через каждый час, что позволило определить относительное содержание ДНК в макрохромосомах (73.7%) и микрохромосомах (26.3%). Репродукция макро- и микрохромосом идет на протяжении всего S-периода, но с преимущественным синтезом ДНК микрохромосом в первой его половине, за исключением W-хромосомы, которая репродуцируется в конце S-фазы. Синтез ДНК в ZZ-хромосомах проходит синхронно в течение всего S-периода. На основе нормализации денситометрических профилей впервые проведено картирование G-полос первой пары аутосом кур с количественной характеристикой длины, локализации и интенсивности окрашивания этих полос. При сопоставлении G-полос с локализацией зерен серебра по длине 1-й хромосомы в начале S-фазы метка преимущественно локализуется в светлоокрашенных зонах, в конце периода синтеза ДНК характер распределения зерен серебра по длине аутосомы полностью совпадает с локализацией темных G-полос. На примере сравнительного анализа RBA-окрашенных хромосом показана взаимосвязь процессов репликации и конденсации хромосом кролика, находящихся на разных уровнях конденсации.

Получены трансгенные кролики и свиньи с интеграцией векторных последовательностей и полноценных копий гена рилизинг фактора гормона роста человека и гормона роста быка, под контролем промотора металлотионеина мыши (МТ-1). Выявлено два ярко выраженных фенотипических эффекта: увеличение и уменьшение массы тела по сравнению со своими сверстниками. Трансгенные потомки первого поколения наследовали способность к замедленному или ускоренному росту. У тансгенных кроликов и свиней наблюдали снижение либидо у самцов, повышенную эмбриональную и постнатальную смертность.

Впервые количественно определена степень дестабилизации генома при воздействии чужеродных генов (частота микроядер и множественные ассоциации хромосом) у животных, полученных из зигот с введенными экзогенными генами.

Теоретическая и практическая ценность работы. Теоретическая значимость представленной работы заключается в получении достаточно полной картины репродукции хромосом кур в течение S-периода. Скорость синтеза ДНК макрохромосом и микрохромосом кур в S-фазе изменяется в узких пределах с перепадом около 12%. Интенсивность репликационных процессов значительно (на три четверти) снижается в конце S-фазы. Показана низкая индивидуальная изменчивость скорости синтеза ДНК в макрохромосомах. Подтверждена связь внутрихромосомной асинхронности репликации ДНК с линейной (блочной) дифференцированностью и процессом конденсации хромосом. На одноклеточной эмбриональной стадии вскрыта взаимозависимость асинхронного синтеза ДНК в пронуклеусах и морфологических изменений в процессе роста и развития, выявлены два типа хроматина, отличающихся по времени репликации ДНК.

При введении генов соматотропной оси в зиготы и ранние эмбрионы кроликов и свиней получена устойчивая интеграция экзогенного материала в геноме реципиентов с появлением новых фенотипических признаков, наследуемых в ряду поколений. Трансгенные кролики передавали ген рилизинг фактора гормона роста потомству первого поколения с частотой 50%.

Практическая значимость диссертационной работы состоит в совершенствовании приемов приготовления препаратов хромосом из тканей ранних эмбрионов кур и количественной оценки результатов дифференциального окрашивания, которые необходимы для проведения цитогенетического контроля племенных животных, линий и пород, ветеринарной цитогенетики и картировании хромосом.

Приемы использования репортерных генов для отбора трансгенных эмбрионов и введение MAR-последовательностей значительно повышают эффективность получения трансгенных животных.

Использование методов определения частоты микроядер и ассоциаций хромосом позволяет судить о степени дестабилизации генома животных с перенесенными генами.

Апробация работы. Материалы исследований были представлены и обсуждены на: научной конференции по птицеводству (Загорск, 1975); всесоюзном симпозиуме по структуре и функции ядра (Алма-Ата, 1977); Ш всесоюзном обществе генетиков и селекционеров (ВОГИС) им. Вавилова (Ленинград, 1977); VII всесоюзном симпозиуме по структуре и функции ядра (Харьков, 1980); IV всесоюзном обществе генетиков и селекционеров (ВОГИС) им. Вавилова (Кишинев, 1981); XXXIII Европейской ассоциации животноводства (Ленинград, 1982); III национальной конференции Болгарии по цитогенетике (Пловдив, 1984); I всесоюзной конференции по цитогенетике сельскохозяйственных животных (Москва, 1985); VI и VIII интернациональных симпозиумах по актуальным проблемам генетики птиц (Чехословакия, Смоленицы, 1985, 1989); на XXV заседании Польского биохимического общества (Торунь, 1989); IV национальной конференции Болгарии по цитогенетике (Враца, 1989); всесоюзном совещании по трансплантации эмбрионов сельскохозяйственных животных (Алма-Ата, 1989); международном семинаре по биотехнологии животных (Чехословакия, Нитра, 1990); IV франкочехословацком заседании по теме " от ооцита к эмбриону" (Прага, 1990); V международном симпозиуме по интенсификации получения качественной продукции (Чехословакия, Нитра, 1990); XV и XVI симпозиумах генетических дней Чехословакии (Чешские Будеевицы, 1991, 1992); XIII Чехословацком семинаре по репродукции сельскохозяйственных животных (Липтовский Ондрей, 1992); XVI симпозиуме генетики сельскохозяйственных животных Словакии (Нитра, 1993); международной конференции общества генетиков им. Г. Менделя, посвященной 40-ю двойной спирали ДНК (Чехословакия, Брно,

1993); X интернациональном симпозиуме по актуальным проблемам генетики птиц (Словакия, Нитра, 1993); международном симпозиуме по гликокортикоидным гормонам (США, Санта Барбара, 1993); I всероссийском обществе генетиков и селекционеров (ВОГИС) им. Вавилова (Саратов, 1994); международной конференции по фундаментальным проблемам и перспективам развития животноводства на европейском севере (Петрозаводск, 1996); международном симпозиуме "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных (Ленинград,

1994); I международной конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных" (Киев, 1994); международном симпозиуме "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке изменения геномов сельскохозяйственных животных (С.-Петербург, 1994); XIII симпозиуме Польского общества генетиков (Варшава); XXV заседании FEBS (Копенгаген, 1998); конференции, посвященной 80-летию МВА им. Скрябина "Совершенствование племенных и продуктивных качеств животных и птиц " (Москва, 1999); первом Польском конгрессе по биотехнологии (Вроцлав, 1999); II всероссийском обществе генетиков и селекционеров (ВОГИС) им. Вавилова (С.-Петербург, 2000); конференции "Актуальные проблемы биологии в животноводстве", ( Боровск, 2000); международном совещании "Молекулярные фермы" (Франция, Ля Гранд Мотте, 2000); I международном конгрессе по биотехнологии (Москва, 2002); международном симпозиуме "Дни польской науки в России " (С.-Петербург, 2002); XXXXXIII Европейской ассоциации животноводства (Египет, Каир,

2002); 2 -й международной научно-практической конференции "Научно-технический прогресс в животноводстве России - ресурсосберегающие технологии производства экологически безопасной продукции животноводства", (Московская обл., Дубровицы 2003); международной научной конференции "Молекулярная генетика, геномика и биотехнология", (Минск, 2004); III всероссийском обществе генетиков и селекционеров (ВОГИС) им. Вавилова (Москва, 2000); международной конференции "Сохранение генетических ресурсов", (С.-Петербург, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 114 научных работ, в том числе 3 методических рекомендации. Работы опубликованы в материалах международных конференций, журналах: «Генетика», «Зоотехния.», «Цитология», «Цитология и генетика», «Сельскохозяйственная биология», «Folia Biologia», «J. of Reproduction and Fertility», «J. Animal Feed Sci.», «Animal Science Papers and Reports», Сб. научных трудов «Генноинженерные сельскохозяйственные животные » (Министерство науки и технической политики Российской Федерации РАСХН)».

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, полученных результатов и их обсуждения, выводов и списка цитированной литературы из 378 источников, среди которых 298 на иностранных языках. Диссертация изложена на 321 страницах, содержит 36 таблиц, 57 рисунков. Основные положения, выносимые на защиту:

Заключение диссертации по теме «Генетика», Козикова, Лариса Васильевна

Выводы

1. Разработаны приемы приготовления препаратов хромосом из тканей 3-х дневных эмбрионов, позволяющие определить уровень спонтанных нарушений хромосом кур. Частота таких нарушений у кур породы леггорн, составила 5.88%.

2. По своим морфометрическим параметрам и по локализации G-полос макрохромосомы кур легко идентифицируются и проявляют гетероморфизм среди гомологов. Проведено картирование G-полос первой пары аутосом с количественной оценкой длины, локализации и интенсивности окрашивания этих полос.

3. Репродукция макро- и микрохромосом кур идет на протяжении всего S-периода с преимущественной репликацией ДНК микрохромосом в первой половине S-фазы, в отличие от W-хромосомы, активно синтезирующейся в конце периода синтеза ДНК. Половые ZZ-хромосомы петухов репродуцируются в течение S-фазы синхронно. По количественной регистрации включения 3Н-тимидина на протяжении всей S-фазы определено относительное количество ДНК в макрохромосомах (73.7%) и микрохромосомах (26.3%).

4. Внутрихромосомная асинхронность синтеза ДНК в течение S-периода тесно связана с особенностями линейной дифференцированности хромосом кур.

5. Методом RBA-окрашивания охарактеризована репликационная активность генома кролика второй половины S-фазы. Показана взаимосвязь процессов репликации и конденсации хромосом кролика на примере сравнительного анализа RBA-окрашенных хромосом, находящихся на разных уровнях конденсации.

6. ДНК - репликативные процессы функционально связаны с морфологическими изменениями в пронуклеусах кролика. В начале S-фазы мужской пронуклеус в своем объеме уступает женскому, но обладает более сильно выраженной репликативной активностью. В середине S-фазы, когда оба пронуклеуса одинаковы по своим размерам, синтез ДНК протекает с одинаково сильной интенсивностью. Во второй половине S-периода мужской пронуклеус становится больше женского, но интенсивность репликации ДНК затухает по сравнению с женским. Выявлены два типа хроматина, которые отличаются по времени репликации ДНК уже на одноклеточной эмбриональной стадии развития.

7. Методом микроинъекции генов соматотропной оси в ранние эмбрионы получены трансгенные животные: 11 трансгенных кроликов с интегрированными генами рилизинг фактора гормона роста человека;

5 трансгенных кроликов, в геноме которых интегрированы векторные последовательности и гены гормона роста быка; 4 трансгенных свиньи, несущих в своем геноме ген рилизинг фактора гормона роста человека.

8. Эффективность переноса генов соматотропной оси у кроликов составила 10,2% к числу родившихся (от 1.9 до 22.2%) или 1.7% к числу трансплантированных эмбрионов (от 0.27 до 4.7%). У свиней эффективность трансгеноза была 15% к числу родившихся или 1.4% к числу трансплантированных эмбрионов.

9. Интеграция рост стимулирующих генов hGRF и bGH в геном кроликов имеет два протвоположно выраженных фенотипических эффекта: увеличение или уменьшение массы тела по сравнению со своими сверстниками. Отрицательными фенотипическими эффектами у тансгенных кроликов и свиней можно считать снижение либидо у самцов, увеличение количества мертворожденных животных, высокая эмбриональная и постнатальная смертность трансгенных кроликов, свиней и их потомков.

10. После интеграции генов hGRF и bGH в геном трансгенных кроликов и свиней трансгенные потомки первого поколения наследовали не только генотип, но и фенотипические особенности, такие как замедленные или ускоренные темпы роста по сравнению с контрольными сверстниками.

11. После введения чужеродных генов, в ранние эмбрионы кроликов, частота эритроцитов с микроядрами у родившихся животных, была в два раза выше в экспериментальной группе по сравнению с контрольной группой, а у свиней - в 3 раза.

12. Впервые показана повышенная способность метафазных хромосом трансгенного хряка с интегрированным геном рилизинг фактора гомона роста человека, находящегося под контролем металлотионеинового гена мыши, к образованию множественных ассоциаций хромосом.

13. У кроликов начало активации экспрессии гена Lac Z, под контролем CMV-промотора выявлено на стадии 6-бластомеров, а под контролем SV-40 промотора - на стадии 4-бластомеров.

14. У трансгенных эмбрионов обнаружена экспрессия репортерных генов, как во всех клетках, так и в отдельных бластомерах, причем интенсивность экспрессии гетерогенна, даже в пределах одного эмбриона. Применение MAR-последовательностей в виде коинъекции приводит к увеличению выхода трансгенных эмбрионов.

15. Регистрация характера экспрессии GFP гена в эмбрионах коров позволяет отбирать только трансгенные эмбрионы, что значительно повышает эффективность трансгеноза.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ И РЕАЛИЗАЦИЯ

РЕЗУЛЬТАТОВ.

Полученные результаты позволили расширить понимание клеточных механизмов структурно-функциональной организации хромосом кур, кроликов и свиней в норме и после введения чужеродных генов на ранних стадиях развития.

На основе материалов диссертации разработаны методические рекомендации по исследованию хромосом, дифференциальной окраске и использованию приемов генетической инженерии для оценки изменения генома сельскохозяйственных животных, которые могут найти применение в различных молекулярно-цитогенетических лабораториях, а также методологию и полученные результаты могут использовать специалисты, работающие в области биотехнологии.

Разработанные методы исследования хромосом имеют большую практическую значимость при экологическом мониторинге окружающей среды, оценке племенных животных и при применении различных технологий в сельском хозяйстве.

При практическом использовании животных, которым были микроинъецированы чужеродные гены, необходимо проведение цитогенетического мониторинга. Применение репортерных генов и MAR-последовательностей повышают выход трансгенных эмбрионов.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Хроматиновая организация ядра является эволюционно консервативной и отражает структурно-функциональную организацию генома. В течение клеточного деления геном клеток подвергается значительным структурным изменениям, особенно в течение митоза от его начала до сегрегации.

Известно, что все клетки эукариотов проходят клеточный цикл, который контролируется большим комплексов белков, центральными из которых являются циклины, специфичные для каждой фазы. Разно дифференцированные ткани характеризуются индивидуальными особенностями клеточного цикла, т.е. длительность периодов митотического цикла зависит от стадии развития и типа дифференцировки клеток.

Одна из важнейших функций хромосом - это удвоение генетической информации в S-периоде, при этом, синтез ДНК начинается полилокально и одновременно во всех хромосомах набора. Следует подчеркнуть, что каждая хромосома обладает специфичной репликационной структурой, по-видимому, стабильной для данного типа клеток. Наличие внутрихромосомной асинхронности репликации ДНК тесно связано с ее линейной дифференцированностью. Межхромосомная асинхронность синтеза ДНК, как правило, более выражена к концу S-периода.

Необходимо отметить, что уже на уровне сегментов хромосом существуют временные закономерности репликации, выражаемые как удвоение участков хромосом в определенные промежутки S-фазы и в определенном порядке. Геном птиц является уникальным по своей структуре среди теплокровных животных наличием микрохромосом. Синтез ДНК в микрохромосомах завершается, как правило, раньше, чем в макрохромосомах. Почти у всех изученных видов птиц отмечен синхронный характер редупликации ZZ-хромосом и позднее время синтеза W-хромосомы самок.

Наличие эу- и гетерохроматина в хромосомах отражено в такой функциональной характеристике, как репликация ДНК. Известно, что для гетерохроматина характерно позднее завершение репликации. G-диски также характеризуются поздним завершением репликации, но эти структуры хромосом были названы интеркалярным гетерохроматином, к свойствам которого относят повышенную способность к негомологичному спариванию, чувствительность к индуцированным разрывам, обогащенность умеренно повторяющимися блоками нуклеотидов (Henning, 1999). Репликация ДНК является высоко контролируемым и координированным процессом, необходимым для поддержания генома (Waggener, 2002).

В настоящее время - эра хромосомной инженерии, которая находит применение в области генотерапии, функции генов, геномной организации, введения в геном генов и хромосом в сочетании с методами цитогенетики. При введении чужеродной генетической информации непосредственно в геном эукариотов важно получение устойчивой интеграции и функционирования экзогенного материала в геноме реципиента с появлением новых признаков, наследуемых в ряду поколений. При этом наиболее приемлемой является ранняя предъимплантационная эмбриональная стадия развития организма. Таким образом, при трансгенозе идет модификация генома на уровне индивидуальных генов.

Чужеродные гены вводят в зародышевые клетки животных с помощью, рекомбинантных молекул ДНК, содержащих сигналы репликации и транскрипции. Наличие интегрированного трансгена определяют у родившихся животных, абортированных плодов или эмбрионов по присутствию в их геноме последовательностей ДНК донорского типа методами дот- блот-гибридизации по Саузерну.

Показано, что прокол пронуклеуса и микроинъекция генно-инженерных конструкций достоверно снижают жизнеспособность эмбрионов по сравнению с контролем. Отмечено, что у потомства животных, развившихся из таких зигот, значительно возрастает количество различных аномалий тканей, повышается частота рождение не жизнеспособных потомков.

Чужеродные гены, как и собственные, могут активироваться в соответствующие периоды онтогенеза в одной или во многих тканях. Следует учитывать, что при экспрессии одного и того же чужеродного гена трансгенные животные отличаются по месту локализации его в геноме, и представляют собой два уникальных животных, отличающихся друг от друга по ряду свойств, среди которых стабильность трансгена, характер и степень их экспрессии.

Для изучения экспрессии на разных этапах онтогенеза удобно использовать репортерные гены, индукцию экспрессии которых можно вызвать либо методами гистохимии, либо под влиянием ультрафиолета с определенной длиной волны. Наиболее распространен ген зеленого флуоресцентного белка (GFP), выделенного из медузы Aequorea victoria. Экспрессия этого гена проявляется в стабильной флуоресценции под ультафиолетовым светом. Усиление экспрессии генов приобретает большое значение в трансгенозе. Показано, что MAR/SAR элементы в ряде случаев обладают эффектом энхансеров. У трансгенных эмбрионов выявлен мозаичный и 100% паттерн экспрессии.

В ряде случаев интродукция генов соматотропной оси в геном млекопитающих приводит к изменению фенотипа. Эти исследования показали, что вес и скорость роста животных можно увеличить в 1.5-2 раза за счет экспрессии трансгена. У трансгенных сельскохозяйственных животных также отмечен эффект отставания роста при экспрессии чужеродных генов. У сельскохозяйственных животных эффективность получения быстро растущих трансгенных животных значительно ниже, чем у лабораторных. Наблюдали как отсутствие интенсивности роста и развития, так и значительно опережающих по весу и росту контрольных сверстниц трансгенных кроликов и свиней с эффективной экспрессией генов гормона роста и рилизинг фактора гормона роста.

Выведение трансгенных линий животных показало, эти животные передавали ген рилизинг фактора гормона роста потомству с частотой до 50%. Тем не менее, чужеродный ген гормона роста экспрессировался не у всех потомков, при этом часто животные обладали пониженной плодовитостью или были стерильными.

В настоящее время МТ (микроядерный тест) и цитогенетический анализ используют в целях биомониторинга. МТ, как показатель геномной нестабильности, особенно актуален при введении в геном чужеродных генетических конструкций и изучении их воздействий на геном трансгенных животных и их потомков. Частота эритроцитов с микроядрами была в 2-3 раза выше (Р<0.001) в экспериментальной группе по сравнению с контрольной группой. Эти данные указывают на достоверное повышение кариотипов с генетическими нарушениями в соматических клетках, полученных из эмбрионов, которым были введены рекомбинантные молекулы ДНК с геномами соматотропной оси.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Козикова, Лариса Васильевна, 2005 год

1. Андреева JT.E. Получение трансгенных лабораторных и сельскохозяйственных животных методом микроинъекции генов в зиготы и эмбрионы. // Автореф. Дисс. канд. биол. наук: Инст. Мол. Ген. АН СССР. М. 1989. С. 17.

2. Андреева J1.E., Хайдарова Н.В., Солодухина Л.И. Эксперименты по микроинъекции гена рилизинг фактора человека в зиготы и эмбрионы свиней. //Докл. ВАСХНИЛ. 1990. №7. С.46-51.

3. Андреева J1.E., Тарантул Трансгенные животные. // Проблемы и перспективы молекулярной генетики. Наука. М. 2003. С.184-217.

4. Вайсман Б.Л., Голинский С.И., Каледин А.С. и др. Опыты по интеграции в геном мышей клонированных генов тимидинкиназы вируса герпеса и SV-40. // В кн.: Молекулярные механизмы генетических процессов . V Всесоюзн. симпоз. Тез. докл. М. 1983. С. 12.

5. Вайсман Б.Л., Голинский Г.Ф. Общие закономерности и контролирующие механизмы раннего эмбриогенеза млекопитающих в норме и патологии. // Сб. научных работ под ред. А.П. Дыбана, Л. 1985. С.108-114.

6. Вайсман Б.Л., Голинский С.И., Каледин А.С. и др. Трансформация генома мышей с помощью микроинъекции гена тимидинкиназы вируса герпеса в оплодотворенные яйцеклетки // Молекулярная генетика, микробиол. и вирусол. 1986. №3. С.28-34.

7. Газарян К.Г., Тарантул В.З. Элементы генома, регулирующие транскрипцию структурных генов у эукариот. // Онтогенез. 1985. Т. 16. №4. С.325-345.

8. Газарян К.Г., Андреева Л.Г., Серова И.А. и др. Получение трансгеннык кроликов и мышей, содержащих ген гормона роста быка. // Молекулярная генетика. 1988. №10. С.23-26.

9. Газарян К.Г., Андреева Л.Г., Кузнецов Е.Н. и др. Получение трансгенного кролика, несущего транскрибирующийся ген рилизинг фактор гормона роста человека. // Докл. АН СССР. 1989. Т.305. №3. С.726-728.

10. Гиндилис В.М. Митотическая спирализация хромосом и кариограмный анализ у человека.// Цитология. 1966.Т.8.№2. С. 144-156.

11. Голденкова И.В. Репортерные системы: возможности для изучения различных аспектов регуляции экспрессии генов. // Успехи соврем, биол. 2002. Т.122. №6. С.515-526.

12. Гольдман И.Л., Эрнст Л.К., Гоголевский П.А. Теоретические вопросы получения трансгенных животных. Эксперименты на кроликах. // Сельхоз. биол. 1995. №1. С.93-103.

13. Городецкий С.И., Дыбан А.П., Вайсман Б.Л. Стимуляция и торможение роста мышей, несущих ген гормона роста человека. // Бюлл. Эксперим. Биол. и мед. 1986. Т. 101. №6. С.698-702.

14. Дмитриев С.Д., Захаров В.М. Оценка цитогенетического гомеостаза в природных популяциях некоторых видов мелких мышевидных грызунов. // Онтогенез. 2001. Т.ЗЗ. №6. С.447-454.

15. Дыбан А.П., Баранов B.C. Современные проблемы оогенеза// М. Наука, 1977. С.200-233.

16. Дыбан А.П., Городецкий С.И. Трансгенные млекопитающие: изучение фенотипических эффектов гормона роста человека, интродуцированного животным. // Биотехнология. 1987. Т.З. № 3. С.352-357.

17. Дыбан А.П. Цитогенетика раннего развития млекопитающих. // Институт экспериментальной медицины на рубеже тясячелетий. С.-Петербург. Наука. 2000. С.228.

18. Дыбан А.П. Клеточные механизмы начальных стадий эмбриогенеза млекопитающих. // Цитология. 2001. Т.43. №1. С.345.

19. Живаго П.И. Исчерпываются ли изменения кариотипа в онтогенезе сменой гапло- и диплофазы? // Зоол. Ж. 1934. Т. 13. с.473-484

20. Жигачев А.И. Ветеринарная цитогенетика и ее значение для повышения уровня воспроизводства животных. // Матер. Международной конференции по акушерству, гинекологии и биотехнологии воспроизводства животных. С.Петербург. 2001. С.64-66.

21. Жимулев И.Ф., Беляева Е.С. Гетерохроматин, эффект положения гена и генетический сайленсинг. // Генетика. 2003. Т.39. №.2. С. 187-201.

22. Жинкин JI.H. Радиоактивные индикаторы в гистологии. Труды ИЭМ АМН СССР. Л., 1959. С.5-33.

23. Жинкин JI.H. Руководство по цитологии.// М. Наука. 1966. Т.2. С.244.

24. Жученко А.А. Голь генетической инженерии в адаптивной системе селекции растений // Сельхоз. биол. 2003. №1. С.3-33.

25. Завадская Е.С., Захарова Е.С., Кадулин С.Г., Кибардин А.В., Киселев С.В., Гнучев Н.В. Получение рекомбинантного эндостатина в молоке трансгенных мышей. // Генетика. 2001. Т.37. №9. С. 1207-1212.

26. Захаров А.Ф. Хромосомы человека ( проблемы линейной организации) // М. Медицина. 1977. С.57-69.

27. Захаров А.Ф., Бенюш Б.Н., Кулешов Н.П., Барановская Л.И. Атлас хромосом человека. М.: Медицина. 1982. 263 С.

28. Зиновьева Н., Безенфельдер У., Мюллер С., Эрнст Л.К., Брем Г. Исследование экспрессии IGF-1 человека у трансгенных кроликов. Биотехнология 1998, №1.С 3-5.

29. Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К., Брем Г. Трансгенные животные и возможности их использования. // 2000. ВИЖ, С. 128.

30. Зиновьева Н.А., Эрнст Л.К. Проблемы биотехнологии и селекции сельскохозяйственных животных. // 2004. Москва. С.316

31. Евсиков А.В., Соломко А.П. Уровни и характер трансляции у доимплантационных зародышей мыши с подавленным цитокинезом. // Онтогенез. 1999. Т.30. №2. С. 103-109.

32. Епифанова О.И. Терских В.В. Радиоавтография. // М. Высшая школа.

33. Ефремов В.И. Кинетика пролиферации и клеточного цикла в раннем эмбриогенезе куриного зародыша.// Симпоз. По теме: клеточный цикл. JI. 1978.

34. Инин Ю.С., Хахан Ю.В., Бенюш В.Ф. Денситометрический комплекс для исследования криволинейных биоструктур.// Мед. Техника. 1975. Т.6, С.8-11.

35. Кафиани К.А., Костомарова А.А. Информационные макромолекулы в раннем развитии животных. // М. Наука. 1978.

36. Козикова Л.В., Медведев С.Ю., Попов А.В., Андреева Л.Е., Росохацкий С., Булла И., Яковлев А.Ф. Получение трансгенных животных. // Зоотехния. 2000. №11. С.12-13.

37. Конюхов Б.В., Платонов Е.С. Геномный импринтинг у млекопитающих. // Генетика. 2001. Т.37. №1. С.5-17.

38. Корнберг А. Синтез ДНК.// М. Мир. 1977.

39. Кочнева М.Л. Соматическая хромосомная нестабильность у свиней в норме и при патологии. // Сельхоз. биол. 2003. №2. С.69-72.

40. Кузнецов А.В., Кузнецова И.В. Связывание экзогенной ДНК pRK3/lacZ сперматозоидами кролика, ее перенос в ооциты и экспрессия в доимплантационных эмбрионах. // Онтогенез. 1995. Т.26 №4. С.300-309.

41. Кузнецова Т.В., Баранов B.C. Современные цитогенетические методы в пренатальной диагностике. // В кн. «Современные методы диагностики наследственных болезней». М. РАМН. 2001. С.48-60.

42. Лакин Г.Ф. Биометрия // М. Высш. Шк. 1980.

43. Лиманский А.П. Атомно-силовая микроскопия: от визуализации молекул ДНК и белков до измерения силы межмолекулярных взаимодействий. // Успехи соврем, биол. 2003. Т.123.№6. С.531-542.

44. Ломакина Л .Я. Регуляция биосинтеза ДНК в митотическом цикле. Клеточный цикл.// М. Наука. 1973. С.9-37.

45. Льюин Б. Гены.// М. Мир. 1987. С.396-429.

46. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование // М. Мир. 1984. 479 С.

47. Омельянчук Л.В., Трунова С.А., Лебедева Л.И., Федорова С.А. Основные события клеточного цикла, их регуляция и организация. // Генетика. 2004. Т.40. №3. С.393-310.

48. Островерховая Н.В., Назаренко С.А., Лебедев И.Н., Черемных А.Р. Детекция анеуплоидии у спонтанных абортусов методом сравнительной геномной гибридизации // Генетика. 2002. Т.38. №12. С. 1690-1698.

49. Попова Е.А., Кривохарченко Ф.С., Вильянович Л.И. Развитие мышиных эмбрионов in vitro при различных вариантах микроинъекции. // Онтогенез. 2002. Т.ЗЗ. №2. С.107-110.

50. Прыжкова М.В., Закива И.Г., Кибардин А.В., Георгиев Г.П., Киселев С.В. Использование модифицированных эмбриональных стволовых клеток для получения трансгенных животных. // Генетика. 2004. №3. С.311-315.

51. Прокофьев М.И., Городецкий С.И., Мезина М.Н., Юткин Е.В., Елагин В.В., Косоруков B.C. Получение трансгенных кроликов с геном тканевого активатора плазминогена. // Докл. РАСХН. 2002. №6. С.35-37.

52. Прокофьева-Бельговская А.А., Слезингер С.И. Репродукция хромосом в первичной культуре эмбриональных фибробластов человека.// Генетика. 1967. Т.П. С.56-67.

53. Прокофьева-Бельговская А.А. Репродукция хромосом. // Успехи современной генетики .1971 Т.З. С.80-99.

54. Разин С.В., Вербовая JI.B., Гольдман И.Л. Новые подходы к созданию трансгенных животных с высоким уровнем тканеспецифической экспрессии чужеродных генов: конструирование и реконструкция геномных доменов // Генетика. 2000. Т.36. С.1443-1455.

55. Разин С.В. Инициация репликации ДНК у высших зукариот. // Генетика.2003. Т.39. №.2. С.173-181.

56. Родионов А.В. Цитогенетика доместицированных птиц: физические и генетические карты хромосом и проблемы эволюции кариотипа // Автореф. Дисс. на соиск. уч. ст. докт. биол. наук. С.-Петербург. С.-Петербургский Гос.Университетет. 2001. С. 42.

57. Роджерс 3. Авторадиография. М.: Атом издат. 1972 Свердлов Е.Д. Введение в проблемы и перспективы молекулярной генетики. // Наука. М. 2003. С.3-14.

58. Серов О.Л., Матвеева Н.М. Генетическая модификация генома животных на уровне хромосом. //Успехи соврем. Биол. 2001. Т.121. №4. С.388-398. Серов О.Л. Генный и хромосомный контроль развития. // Онтогенез.2004. Т.35. №4. С.245-253.

59. Серова И.А., Андреева Л.Е., Семенова Л. А. Повреждающие действия микроманипуляционной техники, примененной для трансгенеза на развитие мышей. // Рабочее совещание «Криоконсервация генетических ресурсов». Сб. докладов. Пущино. 1998. С. 100-113.

60. Сизов А.А., Лебедев Л.Р., Масычева В.И. Разработка вирус-подобной конструкции для рецептор-опосредовательного транспорта гена чГ-КСФ в клетках костного мозга in vivo. // Биотехнология. №1. С. 13-18.

61. СькстеН.И., Сьенсте Т.Г. Факторы транскрипции и ядерный матрикс. // Молек. Биол. 2001. Т.35. №5. С.739-749.

62. Соколова О.И., Погосьянц Е.Е. Кариотип джунгарсного хомячка Phodopus singorus Pall при дифференциальной окраске хромосом. // Цитология. 1974. Т.16. №10. С.1303-1305.

63. Сингер М., Берг П. Гены и геномы. // М. Мир. 1998. С.369. Сысоев B.C., Александров В.Н. Кролиководство// М. Агропромиздат. 1985. С. 272.

64. Трофимов И.Е., Тиняков Г.Г. Кариотип фазана (Phassianus colchicus) и его сравнение с кариотипом домашней курицы (Gallus domesticus). // Биол. ж. 1933. Т.2. С.33-44.

65. Трофимова J1.B., Яковлев А.Ф. Изменение числа микрохромосом в процессе спирализации макрохромосом. // Генетика. 1977. Т. 13. №5. С.806-810.

66. Хейр А., Разин С.И., Васецкий Е.С. Изменения организации хроматина в раннем развитии и при канцерогенезе. // Онтогенез. 2002. Т.ЗЗ. №2. С.85-89.

67. Хлиманков Д.Ю., Речкунова Н.И., Лаврик О.И. Репликационный комплекс эукариот: изучение структуры и функции методом афинной модификации. // Биохимия. 2004. Т.69. Вып. 3. С.311-327.

68. Холпер Д. Однослойные и суспензионные культуры клеток.//В кн. Методы вирусологии и молекулярной биологии. М. Мир. 1972. С.9-19.

69. Шаталкин А.И. Высший уровень деления в классификации организмов. // Ж. Общей Бил. 2004. Т.65. №1. С. 19-38.

70. Шафей Р.А., Зеленина И.А.Б Семенова М.С. и др. Активность экзогенных генетических конструкций, введенных в клетку методом баллистической трансфекции в онтогенезе мыши. // Онтогенез. 2000. Т.31. №5. С.388-394.

71. Шевелуха B.C. Биотехнология и биобезопасность. // Сельхоз. Биол. 2002. №3. С.3-15.

72. Эрнст Л.К. Проблемы взаимодействия между генотипом и фенотипом у трансгеннных сельскохозяйственных животных. // Сельхоз. Биол. 2001. №2. С.3-9.

73. Эрнст JI.K., Зиновьева Н.А., Брем Г. Современное состояние и перспективы использования трансгенных технологий в животноводстве. // В кн. М. 2002. С.54.

74. Эршлер М.А., Дризе Н.И., Нифонтова И.Н., Терских А.В., Чертков И.Л. Лентивирусный вектор способен к интеграции в геном, так и к существованию и репликации в клетке в виде эписомы. // Бюлл. Эксперим. Биол. и Мед. 2003. Т. 135. №2. С.190-193.

75. Яковлев А.Ф., Трофимова Л.В. Изменение числа микрохромосом в процессе спирализации макрохромосом у Gallus domesticus. // Генетика. 1977. Т.13. №5. С.806-810.

76. Яковлев А.Ф., Березкин В.И. Способ нормализации денситометрических профилей хромосом.// Бюлл. ВНИИ генетики и разведения с.х. животных. 1978. Вып.ЗО. С. 18-22.

77. Al-Shavi R., Kinnaird J., Burke J., Bishop J. Expression of foreign in a line of transgenic mice is modulated by a chromosomal position effect. // Mol. Cell Biol. 1990. V.10. P.l 192-1198.

78. Aladjem M.I., Rodewald L.W., Kolman J.L., Wahl G.M. Genetic dissection of a mammalian replicator in the human B-globin locus // Science. 1998. V.281. P. 1005-1009.

79. Alam G., Cook J.L. Reporter genes: Application to the study of mammalian transcription//Anual. Biochem. 1990. V.188. P. 245-257.

80. Anderson R., Krakauer Т., Camerini-Otero D. DNA metilated gene transfere: recombination between co-transformed DNA sequences and recovery of recombinant in a plasmid. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1982. V.79. P.2748-2752.

81. Anglana M., Apiou F., Bensimon A., Debatisse M. Dynamics of DNA replication in mammalian somatic cells: nucleotide pool modulates origin choice and interorigin spacing. // Cell. 2003. V.l 14. P.385-394.

82. Arrighi F.E., Hsu T.C. Localization of heterochromatin in human chromosomes. // Cytogen. 1971. V. 10. P.81 -86.

83. Arukov Y.G., Wang Y., Belmont A.S. Engineered chromosome regions with altered sequence composition demonstrate heirachical large-scale folding within metaphase chromosome. //J. of Cell Biol. 2003. V.162. P.23-35.

84. Avery O.T., MacLeod C.M., McCarty M. Studies on the chemical nature of the substance inducing transformation of Pneumococcal types. // J. Exp. Med. 1944. V.79. P.137-158.

85. Baarends W.H., Grootegoed J.A. Chromatin dynamics in the male meiotic prophase. //Cytogen. Genome Res. 2003. V.103. P.225-234.

86. Bak P., Bak A., Zeuthen J. Characterization of human unit fibers. // Chromosoma. 1979 V.73. P.301-315.

87. Barbie D.A., Kudlow B.A., Frock R., Zhao J., Johnson B.R., Dyson N., Hrlow E., Vennedy B.K. Nuclear reorganization of mammalian DNA synthesis prior to cell cycle exit. // Molec. And Cell Biol. 2004. V.24. P.595-607.

88. Bartova E., Kuzubek S., Jirsova P. Nuclear structure and gene activity in human differetiated cells. //J. Structural Biol. 2002. V.139. P.76-89.

89. Behringer R., Mathevs L., Palmiter R., Brinster R. Dwarf mice produced by genetic ablation of growth hormone expressing cells. // Genes Develop. 1988. V.2 P.453-461.

90. Belayeva E.S., Zhimulev I.F. Cytogenetic and molecular aspects of position effect variegation in Drosophila melanogaster. 111. Continuous and discontinuous compaction pf chromosomal material // Chromosoma. 1991. V.100. P.453-466.

91. Belmont A.S., Sedat J.W., Agard D.A. A Three-dimensional approach to mitotic chromosome structure: evidence for a complex hierarchical organization. // J. Cell Biol. 1987. V.105. P.77-92.

92. Berezney R.D., Dubey D., Huberman J.A. Heterogenety of eukaryotic replicons, replicon clusters, and replication foci. //Chromosoma. 2000. V.108. P.471-485.

93. Bianchi N. And Molina O.J. Chronology and pattern of replication in Gallus domesticus. // Chromosoma. 1967. V.21. P.387-397.

94. Biery К., Bondioli К., De Mao F. Gene transfer by pronuclear injection in the bovine. // Theriogenology. 1988. V.29. P.224.

95. Blacrburn E. Structure and function of telomeres. //Narure. 1991. V.350 P.569-573.

96. Blankenstein T. Gene Therapy: Principles and Application. // Birkhauser Verlag, Basel-Boston-Berlin. 1999.

97. Blou J.J. Control of chromosomal DNA replication in the early Xenopus embryo. // EMBO J. 2001. V.20. N13. P.3293-3297.

98. Bomar J., Moreira P., Balise J., Collas P. Differential regulation of maternal and paternal chromosome condensation in mitotic zygotes. // J. Cell Sci. 2002. V.l 15. P.2931-2940.

99. Bonnerot C., Grimber G., Briand P., Nicolas J. Patterns of expression of position-dependent integrated transgenes in mouse embryo. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2001. V.87. P.6331-6335.

100. Bosze Z., Hirihi L., Carnwath JW., Niemann H. The transgenic rabbit as model for human diseases as a source of biologically active recombinant proteins. // Transgenic Res. 2003. V.l2. P.541-553.

101. Brem G., Brenig В., Goodman H et al. Gene transfer in rabbits and pigs // 3rd World Condress on Genetics Applied to Livestock Production. 1986. V.12. P.45-51.

102. Brem G. Aspects of the Application of Gene Tranfer as a Breeding Technique for Farm Animals. // Biol. Zent. Bl. 1989. №108. P. 108.

103. Brem G., Muller M. Large transgenic mammals. In: Animal with novel genes // Cambridge, England, Cambridge University Press. 1994. P. 179-244.

104. Bridger J.M. Mammalian artifical chromosomes: modern day feats of engineering- Isambard Kindom Brunei style. // Cytogenet. Genome Res. 2004. V.l07. P.5-8.

105. Brinster R., Chen H., Trumbauer M. Et al. Somatic expression of herpes thymidine kinase in mice following injection of fusion gene into eggs // Cell. 1981. V.27. P.223-231

106. Brinster R., Chen H., Trumbauer M. Et al. Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjection of eggs // Proc. Natl. Acad. Sci. 1985. V.82. P.4438-4442.

107. Brockdorff N. X-chromosome inactivation: closing in on proteins that bind Xist RNA //Trends Genet. 2002. V.18. P.352-358.

108. Brown W.R., Mee P.J., Hong S.M. Artifical cyromosomes : ideal vectors? // Trends Biotechnol. 200. V.18 P.218-223.

109. Brunet-Simon F., Henrion C., Renard J., Duraithon V. Onset of zygotic transcribtion and the rabbit embryo. // Mol. Reprod. and Devel. 2001. V.58. P. 127136.

110. Burdon Т., Wall R. Fate of microinjected genes in preimplantation mouse embryos. // Mol. Reprod. and Develop. 1992. V.33. P.436-442.

111. Burt D.W. Origin and evolution of avian microchromosomes // Cytogenet. Genome Res. 2002. V.96. P. 97-112.

112. Buther K., Lo C. High frequency DNA rearrangements assotiated with mouse centromeric satellite DNA. // J. Mol. Biol. 1986. V.187. P.547-556.

113. Carione D.L., Skalnik D.G. CpG binding protein is crucial for early embryonic development. //Mol. and Cell Biol. 2001. V.21. P.7601-7606.

114. Chada K., Margam J., Raphael K. et al. Specific expression of a foreign B-globin gene in erythroid cells of transgenic mice. //Nature. 1985. V.314. P.377-380.

115. Chan F.W.S., Homan E.J., Ballou L.U. Transgenic cattle produced by reverse-transcribed gene transfer into mature oocytes. // Sci. 2001. V.291. P.309-312.

116. Chan P.C., Wong J.K., Shin C.K., Wong F.W., Lam K.L., Chan K.M. Common carp metallothionein-1 gene: cDNA cloning gene structure and expression studies. // Biochimica et Biophys. 2004. V.1676. P.l62-171.

117. Chandra H.S. Proposed role of W chromosome inactivation and the absence of dosage compensation in avian sex determination // Proc. Roy. Soc. Lond. B. 1994. V. 258. P. 79-82.

118. Cho R.J., Huang M., Campbell M.J. Transcriptional regulation and function during the human cell cycle. // Nature Genetics. 2001. V.27 P.48-54.

119. Chuch R. Embryo manipulation and gene transfer in domestic animals. // Tibtech. 1987. №5. P. 13-19.

120. Claussen U., Michel S., Muhling P., Westermann M., Grummt U-W., Klomeyer-hausshild K., Leihr T. Demystifying chromosome preparation for the concept of chromosome condensation during mitosis. // Cytogenet. Genome Res. 2002. V.98 P.136-146.

121. Cleaver J.F. Thymidine metabolism and cell kinetics. Amsterdam. 1967.

122. Clement W.N. DNA replication patterns in the domestic fowl. // Cytologia. 1971.V.36. P.168-172.

123. Cline M., Stang H., Mrcola K. Gene transfer in intact animals. // Nature. 1980. V.284. P.422-425.

124. Coelho P.A., Oueiroz-Machado J., Sunkel C.E. Condensin-dependent localization of topoisomerase II to an asial chromosomal structure is required for sister chromatid resolution during mitosis. J.of Cell Sci. 2003. V.l 16. P.4763-4776.

125. Combus R., Balls M. The use of transgenic animals in the European Union: The report and recomendations of ECVAM workshop 28. // ATLA. 1999. V.27 Supl.l. P.21-43.

126. Committee for the Standardized Karyotype of the Oryctolagus cuniculus: Standart karyotype of the laboratore rabbit, Oryctolagus cuniculus// Cytogenet. Cell Genet. 1981 .V.32.P.240-248.

127. Committee for the Standardized Karyotype of the Domestic Pig: Standart Karyotype of the domestic Pig. // Hereditas 1988. V.l 09. P. 151-157.

128. Connolly C.N., Futter C.E., Gibson A., Hopkins C.R., Cutler D.F. Transport into and out of the Golgi complex studied by transfecting cell with с DNA encoding horseradish peroxidase. //J. Cell Biol. 1994. V.l 27. P.641-652.

129. Constantini F., Lacy E. Introduction of a rabbit B-globin gene into the mouse germ line // Nature. 1981. V.294. P.92-94.

130. Cook P.R. The nucleoskeletion and the topology of replication. // Cell. 1991. V.66. P.627-635.

131. Cook P.R. The organization of replication and transcription. // Science 1999. V.284.N 5421. P. 1790-1795.

132. Courcelle J., Hanawalt P.C. Rec A- dependent recovery of arrested DNA replication on forks. //Annu. Rev. Genet. 2003. V.37. P.611-646.

133. Cousens C., Carver F.S., Wilmut J. et al. Use of PCR-based methods for selection of integrated transgenes in preimplantation embryos. // Mol. Reprod. Dev. 1994. V.36. P.384-391.

134. Cozzi E., Soi В., Holmes В., White D. Genetic engineering of the donor as an approach to clinical xenotransplantation. // Transplantant Proc. 2000. V.3. P.2701-2703.

135. CraigJ.M., Bickmore W.A. Chromosome bands- flavours to savour // BioEssays. 1993. V.15. P.344-354.

136. Cremer Т., Cremer C. Chromosome territories, nuclear architecture and gene regulation in mammalian cells. //Nat. Rev. Genet. 2001. V.2. P.292-301.

137. Cryderman D.,Cuaycong M., Elgin S., Wallrath L. Characterization of sequences assotiated with position-effect variegetion at pericentric sites in Drosophila heterochromatin. // Chromosoma. V.107. P.277-285.

138. Csink A., Henikoff S. Something from nothing: the evolution and utility of satellite repeats. //TIG. 1998. V.14. P.200-204.

139. Cubitt A.B., Heim R., Adams S.R., Boyd A.E., Gross L.A., Tsien R.Y. Understanding improving and using green fluorescent proteins. // Appl. Gen. 1995. V.1.P.561-573.

140. Cuvier O., Hirano T. A role of topoisomerase II in linking DNA replication to chromosome condensation. // J. of Cell Biol. 2003. V.160. P.645-655.

141. Cyranoski D. Crunch time for Korea's clones. // Nature. 2004. V.429. P.12-14.

142. De Boer L.E. and van Brink J.M. Cytotaxonomy of the Ciconiiformes (Aves), with karyotypes of eight species new to cytology// Cytogenet. Cell Genet. 1982. V.34.P. 19-34.

143. De la Barre, Gerson A.F., Gount V., Creaven M., Allis S.D., Dimitrov S. Core histone N-termini play an essential role in mitotic chromosome condensation. // J. EMBO. V.19. P.379-391.

144. De la Serna I.L., Imbalzano A.N. Unfolding heterochromatin for replication. // Nature Genet. 2002. V.32. P.560-562.

145. Dernburg A., Sedat J., Hawley R. Direct evidence of a role for heterochromatin in meiotic chromosome segregation. // Cell. 996. V.86. P. 135-145.

146. De Wet J.R., Wood K.V., Deluca M., Helsinki D.R., Subramani S. Firefly luciferase gene: structure and expression in mammalian cells. // Mol. Cell Biol. 1987. V.7. P.725-737.

147. Di Berardino D., Di Meo C.D. International system for chromosome nomenclature of domestic bovids. // Cytogenet. Cell Genet. 2001. V.92. P.284-299.

148. Dobie K., Nicols A., Rout S. Variegated transgene expression in mouse mammary gland is determined by the transgene integration locus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V.93. P.6659-6664.

149. Dorer D., Henikoff S. Expansions of transgene repeats cause heterochromatin formation and gene silencing in Drosophila cells. // Cell. 1994. V.77. P.993-1002.

150. Dorer D., Henikoff S.Transgene repeat arrays interact with distant heterochromatin and cause silencing in cis- and trans-. //Genetics. 1997. V.147. P.l 181-1190.

151. Dreets M.E., Seuenes H. Quantitation of heterogeneous human heterochromatin: microdensitometric analysis of C- and G- bands. Physiol, and Genet. Reprod. Part "a". New-York-London. 1974. P.29-52.

152. Driel R., Francz P. Nuclear architecture and genome functioning in plants and animals: What can we learn from both? // Exp. Cell Res. 2004. V.296. P.86-90.

153. Droin R., Lemieux N., Richer C.L. Analysis of DNA replication during S-phase by means of dynamic chromosome banding at high resolution. // Chromosoma. 1990. V.99. P.273-280.

154. Drouin R., Richer C.-L. High resolution R-banding at the 1250-band level. Schematic representation and nomenclature of human RBG-banded chromosomes. // Genome. 1989. V.32. P.425-439.

155. Dube J.L., Wang P., Elvin J., Lyons K., Celeste A J. The bone morphogenetic protein 15 gene is X-linked and expressed in oocytes. // Mol. Endocrin. 1998. V.12. P.1809-1817.

156. Duszewska A.M., Reclewski Z., Pienkowski M., Karasiewicz J., Modlinski J.A. Development of bovine embryos on Vero/BRL cell monolayers (mixed co-culture). // Thereogenology 2000. V.54 P. 1239-1247.

157. Dutrellaux B. Nouvean systeme de marguage chromosomigue. Les bandes T // Chromosoma 1973.V.41.P.395-402.

158. Dutrellaux B. Sur la nature et l'origine des chromosomes humains. // L'Expansion Scientifigue. Paris. 1975.

159. Eckhard W., Zakharchenko В., Brem G. Transgenic technology in farm animals- progress and perspectives. // Exp. Physiol. 2000. V.85. P.615-625.

160. Eissenberg J.C., Elgin S. Boundary function in control of gene expression. // Trends. Genet. 1991. V.7. P.335-340.

161. Eissenberg J.C., Ge Y-W., Hartnett T. Increased phosphorylation of HP1, a heterochromatin-associated protein of Drosophila, is correlated with heterochromatin assebly // J. Biol. Chem. 1994. V.269. P.21315-21321.

162. Eissenberg J.C., Wallzath L. Progress in nucleic acid research and molecular biology. // 2003. Acad. Press. Amsterdam, Boston, London, New York, Oxford, Paris, San Diego, Singapore, Sydney, Tokyo. Ed by Moldane K. V.74. P.276-293.

163. Emerson B.V. Specificity of gene regulation. // Cell. 2002. V.109. P.267-270.

164. Evans M., Kaufman M. Establishment in culture of pluripotental cells from mouse embryos. //Nature. 1981. V.292. P. 154-156.

165. Feinberg A., Vogelstein B. A technigue for radiolabelling DNA restriction endonuclease fragments to high specific activity // Analytical Biocem. 1983. V.132. P.6-13.

166. Ferreira J., Paolella G., Ramos C., Lamond A.I. Spatial organization of large-chromosome territories.//J/Cell Biol. 1997. V.l39. P. 1597-1610.

167. Foe V.E., Odell G.M., Edgar B.A. Mitosis and morphogenesis in the Drosophila embryo : point and counter-point // The development of Drosophila melanogaster / Ed. Bate M. N.Y.: Cold Spring Harbor Lab. Press. 1993. P. 149-300.

168. Folger K., Weng E., Wahl G., Capecehi M. Patterns of integration of DNA microinjected into cultures of mammalian cells: evidence for homologous recombination between injected plasmid DNA molecules. // Mol. Cell Biol. 1982. V.2. P. 1372-1387.

169. Ford C.F. Reading Conference 1980. Proceeding of the first international Conference for the standardization of banded karyotypes of domestic animals. // Hereditas. 1980. V.92. P. 145-162.

170. Frederic J. Contribution a letude du caiyotype ches les poulet. // Archives de Biol. 1961. V.72. P.185.

171. Francoise J., Facan S. DNA replication and nuclear architecture. // J. Biochem. 2002. V.85. P.l-9.

172. Garcia M., O'Sullivan R., Peters A.H., Jenuwlin Т., Blaco M.A. Epigenetic regulation of telomere length in mammalian cells by the Suv39hl and Suv39h2 histone methyltransferases. Nature Genet. 2004. V.36. P.94-99.

173. Gasser S.M. Positions of potential : Nuclear organization and gene expression. // Cell. 2001. V.l04. P.639-642.

174. GiannelliP. Human chromosomes DNA synthesis. // S. Karger, Basel. Munchen. New York. 1970.

175. Gilbert D.M. Replication timing and transcriptional control: beyond cause and effect. // Curr. Opin. Cell Biol. 2002.V.14.P.115-125.

176. Gordon J., Seanclos G., Plotkin D. Et al. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1980. V.77. P.7380-7384.

177. Gordon J., Ruddle R. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei // Science. 1981. V.214. P.l244-1246.

178. Gordon J., Ruddle. Gene transfer into mouse embryos: production of transgenic mice by pronuclear injection // Methods Enzymol. 1983. V.101. P.411.

179. Gorman C.M., Moffat L.F., Howard B.H. Recombinant genomes which express chloramphenicol acetyltransferase in mammalian cells. // Mol. Cell Biol. 1982. V.2. P. 1044-1051.

180. Grahan F., Vander E. A new technique for the assay of infectivity of human adenovirus DNA. Virology. 1973. V.52. P.456.

181. GreallyJ.M., Starr D.M., Hwang S. et al. The mouse HI9 locus mediates a transition between imprinted and non-imprinted DNA replication patterns // Hum. Mol. Genet. 1998. V/7 P.91-95.

182. Griffin D.K., Bridger J.M. ICCXV, 15-th International chromosome conference 5-10 th September, 2004 Brunei University, London, UK. // Cytogenet. Genome Res. 2004. V.107. P.3-4.

183. Grunstein M. Yeast heterochromatin : regulation of its assembly and inheritance by histones // Cell. 1998. V.93. P.325-328.

184. Guiller-Gensik Z., Bernheim A., Coullin P. Generation of whole-chromosome painting probes to each chicken macrochromosome // Cytogenet. Cell Genet. 1999. V.87. P.282-285.

185. Haaf Т., Warburton P., Willard H. Integration of human a satellite DNA into simian chromosomes: centromere protein binding and disruption of proper chromosomal segregation. // Cell. 1992. V.70. P.681-696.

186. Hadjidekova V.B., Bulanova M., Bonassi S., Neri M. Micronucleus frequency is increased in peripheral blood lymphocytes of nuclear power plant workers. // Radiat. Res. 2003. V.160. P.684-690.

187. Hammer R., Palmiter R., Brinster R. Partial correction of murine heredity growth disorder by germ line incorporation of a new gene. // Nature. V.312. P.65-67.

188. Hammer R., Brinster R., Rosenfeld. Expression of human growth hormone-realising factor in transgenic mice results in increasing somatic growth // Nature. 1985. V.315. P.413-416.

189. Hammer R.E., Pursel V.G., Rexroad C. Et al. Production of transgenic rabbits, sheep and pigs by microinjection // Nature. 1985. V.315. P.680-683.

190. Hand R. Eukaryotic DNA: Organization of the3 genome for replication. // Cell. 1978. V.l5. P.317-325.

191. Hartmann S., Goldstein J. Effect of genomic position on expression of transduced copies of the white gene of Drosophila. // Sci. 1980. V.220. P.558-561.

192. Hazekamp A., Cock M., Buning T. Adverse effects of transgenesis in farm animals. Abstr. 3-rd Word Congress on Alternative and Animals use in the Life Scienses, Bolonia 29 aug.-2sept. 1999. P. 152.

193. Heap R. Manipulation of growth and lactation. // Proc. Intrernat. Sympos. Exchanding between countries. England. 1989. №9. P.69-79.

194. Heitz E. Der Bau der somatischen Kerne von Drosophila melanogaster // Z. Indukt Abstammungs-Vererbungslehre. 1930. V.54 P.248-249.

195. Henderson A., Roling D. The effect of exogenous DNA insertion at a chromosomal region containing rDNA. Cytogenet. Cell Genet. 1982. V.34. P.310-314.

196. Hendricke C.A., Almeida K.A., Sfitt M.S., Lonnalogadda V.S., Rugo R.F., Kerrison G.F., Engelwad B.P. Spontaneus mitotic homologous recombination at an direct repeat in transgenic mice. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2003. V.l00. P.6325-6320.

197. Henning W. Heterochromatin // Chromosoma. 1999. V.l08. P. 1-9.

198. Herbomel P. From gene to chromosome: organization levels defined by the interplay of transcription and replication in vertebrates // New Biol. 1990. V.2 P.937-945.

199. Hilliker A.J., Appels R., Shaler A. The genetic analysis of Drosophila melanogaster heterochromatin // Cell. V.21. P.607-619.

200. Hogan В., Costantini F., Lacy E. Manipulating the Mouse Embryo: A Laboratory Manual.// Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York, 1986.

201. Holmes V.F., Cozzareli N.R. Closing the ring lines between SMC proteins and chromosome partitioning condesation and supercoiling. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2000. V.98. P.1322-1324.

202. Hortmann M., Obe G. CABAND: Classification of aberrations in multicolor banded chromosomes. // Cytogenet Genome Res. 2003. V.103. P.24-27.

203. Howard F. Pelc S.R. Synthesis of desoxyribonucleic acid in normal and irradiated cells and its relation to chromosome breakage. // Heredity. 1953.V.6.P.261-273.

204. Hsiao P., Deroo В., Archer T. Chromatin remodeling and tissue-selective responses of nuclear hormone receptors. // Biochem. and Cell Biol. 2002. V.80. P.343-351.

205. Huberman J. A. and Riggs A.D. On the mechanism of DNA replication in Mammalian chromosomes. // J. Mol. Biol. 1968. V.32. N2. P.327-341.

206. Jaenisch R. Transgenic animals. // Science. 1988. V.240. P. 1468-1474.

207. Jakob K.M. RHA synthesis during the DNA synthesis period of the first cell cycle in the root meristem of germinating Vicia faba. // J. Mol. Biol. 1972. V.72. P.370-377.

208. Juengel J.L., Hudson N.L., Heath D.A. Growth differentiation factor 9 and bone morphogenetic protein 15 are essential for ovarien follicular development in sheep. Biol. Reprod. 2002. V.67. P. 1777-1789.

209. Kafatos F.C., Jones C.W., Efstratiadis B.R. et al. // Nucl. Acids Res. 1979. V.7. P. 680-683.

210. Karpen G. Position effect variegation and the new biology of heterochromatin. // Curr. Opin. Genet. Dev. 1994. V.4. P.281-291.

211. Klehr D., Vefss K. And Bode J. Scaffold-attaches regions from the human interferon beta domain be used to enhance the stable expression of genes under the control of various promoters // Biochem. 1991. V.30. P. 1264-1270.

212. Kornberg R.D., Klug A. The nucleosome. // Sci Am. 1981. V.244. P.52-64.

213. Koshland D., Strunnikov A. Mitotic chromosome condensation. // A Rev. Cell Dev. Biol. 1996. V.12. P.305-333.

214. Kozikova L., Kalashnikova L., Vasicek D., Baurova M., Babuchik P., Bulla J., Skultetyova I., Rafay J., Rashid S. Prenos bGH genu do samcieho projadra zygoty kralika. // XVI Geneticke dny, Cheske Budejovice. 1992. Czechoslovakia.

215. Kreitz S., Ritzi M., baack m., Knippers R. The human origin recognition complex protein 1 dissociates from chromatin during S phase in Hela cells // J. Biol. Chem. 2001. V.276. P.6337-6342.

216. Kucherlapati R., Eves E., Song K.-Y. Et al. Homologous recombination between plasmids in mammalian cells can be enhanced by teratment of input DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. V.81. P.3153-3157.

217. Q., Stamatoyannopoulas G. Hypersensitive site the human В locus control region functions as a chromatin insulator//Blood. 1994. V.84. P. 1399-1401.

218. Ma H., Samarabandu J., Devdhar R.S., Acharya R., Cheng P.-C., Meng C., Berezney R. Spatial and temporal dynamics of DNA replication sites in mammalian cells. // J. Cell Biol. 1998. V.143. P.1415-1425.

219. Mac Gregor J., Heddle J., Hite M. Gudelines for the conduct of micronucleus assays in mammalian bone marrow erythrocytes. // Mutat. Res. Genet. Toxicol. 1987. V.189. P.103-112.

220. McLaren A. The impact of pre-fertilization events on post-fertilization development in mammals. // Maternal effects in development. Ed. By B. Newth, M. Balls. Cambridge. 1079. P.287-320.

221. Malinsky J., Koberna K., Stanek D., Masata M., Votruba I., Raska I. The supply of exogenous deoxyribonucleotides accelerates the speed of the replication fork in early S-phase. // J. Cell Sci. 2001. V.l 14. P.747-750.

222. Manbra D.J., Shu-Cheng Chen, T-Y. Yang, Lira S.A. Leukocytes expressing green fluorescent proteins as novel reagents for adoptive cell transfer and bone marrow transplantation studies. // Amer. J. of Pathology. 2001. V.158. P.41-48.

223. Manders E.M.M., Visser A.E., Koppen A., de Leenw W.C., van-Liere R., BrakenhoffG., van Driet R. Four-dimensional imaging of chromatin dynamics during the assembly of the interphase nucleus. // Chromosome Res. 2004. V.l 1. P.537-547.

224. Manuelidis L. Heterochromatic features of an 11 megabase transgene in brain cells. // Proc. Natl. Acad. USA .1991. V.88. P. 1049-1053.

225. Marguant-Le Guienne D., Gerard M., Solari A., Thibault C. In vitro culture of bovine eggs fertilized either in vivo or in vitro. // Reprod. Nutr. Develop. 1989. V.29. P.559-568.

226. Martin P.C. The pattern of autosomal DNA replication in four tissues of the Chinese hamster. //Exp. Cell Res. 1967. V.45. P.85-95.

227. Martinet W., Schrijvers D.M., Kocks M.M. Nucleofection as an efficient nonviral transfection method for human monocytic cells. // Biotechnol. Sett. 2003. V.25.P.1025-1029.

228. Mathews L., Hammer R., Brinster R. Expression of insulin-like growth factor 1 in transgenic mice with elevated levels of growth hormone is correlated with growth. // Endocrinol. 1988. V.123. P.433-437.

229. Matsui S., Sasaki M. Differential staining of nucleolus organizers in mammalian chromosomes. //Nature. 1973. V.246. P. 148-150.

230. Mayo K., Warren R., Palmiter R. The mouse metallothionein 1 gene is transcriptionally regulated by cadmium following tansfection into human or mouse cells//Cell. 1982. V. 29. P.99.

231. Mayo K., Cerelli G., Lebo R. Gene encoding human growth hormone-releasing factor precursor: sequence, and chromosomal assignment // Proc. Nat. Sci. U.S.A. 1985. V.82. P.63-67.

232. Mazzotti G., Gobbi P., Manzoli L., Falconi M. Nuclear morphology during the S- phase. // Microsc. Res. Tech. 1998. V.40. P.418-431.

233. Mc Farlane P. and Callan H.G. DNA replication in the chromosomes of the chicken Gallus domesticus.//J. Cell Sci. 1973. V.13 N3. P.821-839.

234. Mc Knight C., Hammer R., Kuenrel E. Et al. Expression of the chicken transferrin gene in transgenic mice. // Cell. 1983. V.34. P.335-341.

235. McQueen H.A., Fantes J., Cross S.H., Clark V.H., Archibald A.L., Bird A.P. CpG islands of chicken are concentrated on microchromosomes // Nat. Genet. 1996. V.12. P.321-324.

236. McQueen H.A.,Siriaco G., Bird A.P. Chicken microchromosomes are hyperacetylated, early replicating, and gene rich // Genome Research. 1998. V.8 P.621-628.

237. Melini E., Dominco Т., First N. Transcriptional activity in bovine oocyte and embryos. //Theriogenology. 1998. V.49. P.274.

238. MichalskaA., Vize P., Asham R et al. Gene transfer in pigs. // Proc. Aust. Soc. Reprod. Biol. 1986.

239. Mintz В., Chronmiller C., Mett I. A karyotypically normal in vitro line of developmentally totipotent mouse teratocarcinoma cells. // Somatic Cell Genet. 1981. V.7. P.489-396.

240. Mizuno S., Kunita R., Nakabay-Ashi O., Kuroda Y., Arau N., Harata H., Ogawa A., Itoh Y., Terenishi M. Studies on their gene function in sex determination and sex differentiaton. // Cytogenet. Genome Res. 2002. V.99. P.236-244.

241. Moores J.P., Cai A., Hostettler M.E., Arbogust L.A., Vooght J.L., Hyde J.F. Pituitary hormone gene expression and secretion in human growth hormone-releasing hormone transgenic mice: Focus on lactotroph function. // Endocrinology. 2000. V.141. P.81-90.

242. Moorhead P.S., Nowel P.C., Mellman W.J., Bkattips D.M. Huggerford D.A. Chromosome preparation of leukocytes cultured from human peripheral blood// Exp. Cell Res. 1960. V.20. P.613-615.

243. Morton N.E. Parameters of the human genome. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P.7474-7476.

244. Muller U., Lalanda M., Donlon T. et al. Moderately repeated DNA sequences specific for the short arm of the human Y chromosome are present in XX males and reduced in copy number in a XY femals. // Nucl. Acids Res. 1986. V.14. P. 13251340.

245. Muller W.C., Walker D., Hager L. Large- scale chromatin decondensation and recondensation reculated by transcription from a natural promoter. // J. of Cell Biol.2001. V.l54. P.33-48.

246. Murray J., Nancarrow C., Marshal J et al. Production of merino sheep by microinjection of ovine metallothionein-ovine growth hormone fusion genes. // Reprod. Fertill. Dev. 1989. V.l P.147-155.

247. Neuman E., Schaefer-Ridder M., Wang Y., Hofschneider P. Gene transfer into mouse lyome cells by electroporation in high electric fields. // EMBO J. 1982. V.l. P. 841-845.

248. Ohno S., Christian С./ Stenis C. Nuclear organization of microchromosomes Gallus domesticus//Exp. Cell Res. 1962. V.27. P.612-614.

249. Owens P., Michaska A., Owens J. Expression of a porcine growth hormone gene in mice. // Proc. Aust. Phys. And Pharm. Soc. 1989. V.20. P.24-25.

250. Palmiter R., Brinster R., Hammer R. Dramatic growth of mice that develop from eggs microinjected with metallothionein-growth hormone fussion genes // Nature, 1982a. V300. P.611-615.

251. Palmiter R.D., Chen H.Y., Brinster R. M. Differential regulation of metallothionein-thymidine kinase fusion genes in transgenic mice and their offspring. //Cell. 1982b. V.29 P.701-710.

252. Palmiter R., Norstedi G., Gelinas R.G. et al. Methallothionein-human growth hormone fusion genes stimulate growth of mice. // Science. 1983. V.222. P.809-814.

253. Palmiter R.D., Wikie T.M., Chen H.Y., Brinster R. M. Transmission distortion and mosaicism in an unusual transgenic mouse pedigree // Cell. 1984. V.36. P.869-877.

254. Palmiter R., Brinster R. Transgenic mice. // Cell. 1985. V.2. P.343-345.

255. Palmiter R., Hammer R., Brinster R. Expression of growh hormone genes in tansgenic mice. // In: Genetic Manipulation of the Early Mammalian Embryo. Ed. F. Constantini, R. Jaenisch. Cold Spring Harbor. 1985b. P. 122-132.

256. Palmiter R., Brinster R. Germ-line transformation of mice. // Annual Rev. Genet. 1986. V.20. P. 465-500.

257. Pardue M.L., DeBaryshe P.G. Telomeres and telomerase: more than the end of the line // Chromosoma. 1999. V.108. P.73-82.

258. Parrish J.J., Sussko-Parris J.L., Leibfried-Rutledge M.L., Critse E.S., Eyestone W.H., First N.L. Bovine in vitro fertilization with frozen-thawed semen. // Theriogenology 1986. V.25. P.591-600.

259. Paters K.G., Rao P.S., Bell B.S., Kindman A. Green fluorescent fusion proteins: powerful tool for monitoring protein expression in live zebrafish embryos. // Devel. Biol. 1995. V.171. P.252-257.

260. Pell С. Growth promoting properties of recombinant growth hormone. // In Biotechnology in Growth Regulation. Ed. R. Heap. London. 1989. P.85-96.

261. Phi-van Loc., Stratling W. Dissection of the ability of the chicken lysocyme gene 5 matrix attachment region to stimulate transgene expression and to dampen position effects. // Biochem. 1996. V.35. P.735-742.

262. Phi-van Loc., Selke C., von Bodenhausen A., Stratling W.H. An initiation zone of chromosomal DNA replication at the chicken lysozyme gene locus // J. Biol. Chem. 1998. V.273. P. 18300-18307.

263. Pienta K.J., Partin A.W., Coffey D.S. Cancer as a disease of DNA organization and dynamic cell structure. // Cancer Res. 1989. V.49. P.2525-2532.

264. Perry A.C., Wakayama Т., Kishikawa H. Mammalian transgenesis by intra cytoplasmic sperm injection. // Sci. 1999. V.284. №5417. P. 1180-1182.

265. Popov A., Baranova T.V., Suchkova I., Smirnov A., Golubkov V., Sorokin A., Patkin E. The modelling of heterochromatic regions in transgenic mice. // Cytogenet. Cell Genet. 1999. V.85. P.95.

266. Porce de Leon F.A., Y. Li and Weng Z. Early and late replicative chromosomal banding patterns of Gallus domesticus // J. of Heredity. 1992. V.83. P.36-42.

267. Pravtheva D., Wise Т., Ensor N., Ruddle F. Mosaic expression of an Hprt transgene integrated in region of Y heterochromatin. // J. Exp. Zool. 1994. V.266. P.452-468.

268. Prokofieva-Belgovskaya A. A., Slezinger S.I. Replication of human chromosomes in primary cultures of embryonic fibroblasts. // Cytogenetics. 1968. V.15. P.27-28.

269. Pursel V., Rexroad C., Bolt D et al. Progress on gene transfer in farm animals. //Vet. Immunol. Pathol. 1987. V.l 7. P.303-312.

270. Pursel V., Pinkert C., Miller K. et al. Genetic engineering of livestock. // Science. 1989. V.244. P.1281-1288.

271. Quastler H., Sherman F.C. Cell population kinetics in the epitheium of the mouse. // Exp. Cell Res. 1959. V.l7. N3. P.420-438.

272. Quastler H. The analysis of cell population kinetics // In: Cell proliferation. Oxford. Blackwell. 1963. P. 18-36.

273. Radjabli S.L., Bulatova N. Tripsin of banding of avian chromosomes// Mammal. Chromosomes Newsletter. 1974.V.15. P.27-28.

274. Redi C.A., Garagna S., Zacharias H et al. The other chromatin // Chromosoma. 2001. V.l 10. РЛ36-147.

275. Reik W., Collick A., Norris M. Genomic imprinting determined methylation of parental alleles in transgenic mice. // Nature. V.328. P.248-251.

276. Rexroad C., Pursel V. Status of gene transfer in domestic animals. // Proc. 11th International Cong. Anim. Reprod. Devel. 1988. V.5. P.29-35.

277. Rexroad C., Hammer R., Bolr D. Et al. Production of transgenic sheep with growth regulating genes. // Mol. Reprod. Devel. 1989. V.l. P.164-169.

278. Richa J., Lo C. Introduction of human DNA into mouse eggs by injection of dissected chromosome fragments. // Science. 1989. V.245. P. 175-177.

279. Richards E.J., Elgin S.C. Epigenetic codes for heterochromatin formation and silencing: rounding up the usual suspects // Cell. 2002. V.l08. P.489-500.

280. Roberts S., Buck L., Alex R. A structure for amplified DNA. // Cell. 1983. V.33. P.53-83.

281. Roble J.M., Kasinahan P., Sullivan E., Kuroiwa Y., Tomizuka K., Ishida I. Artifical chromosomes vectors and expression of complex proteins in transgenic animals. Theriogenology. 2003. V.59. P. 107-113.

282. Roest H.P., van Klaveren J., de Wit J. Inactivation of the HB6B ubiquitin-conjugation DNA repair enzyme in mice causes male sterility associated with chromatin modification. Cell. 1996. V.86. P.799-810.

283. Rone M. Cromosome preparation and high resolution R- and G-banding techniques. // Cytogenetics of Animals. Ed. By Hainan C.R.E. 1989. P. 11-29.

284. Roschlau K., Rommel P., Roschlau D. Et al. Microinjection of viral vector in bovine zygotes. //Arch.Tierz. Berlin. 1988. V.31. P.3-8.

285. Rosochacki S.J. and Kozikova L.V. Transgenic animals with growth hormone and growth hormone related genes. // Molecular farming 2000. Proceeding og the OECD workshop held in La Grande Motte (France), September 3-6, 2000. P. 132-143.

286. Rothschild M.F. From a sow" ear to a silkpurse: real progress in porcine genomics. Cytogenet Genome Res. 2003. V.102. P.95-99.

287. Ruley H., Fried M. Clustered illegitimate recombination events in mammalian cells involving very short sequence homologies. //Nature. 1983. V.304. P.l81-184.

288. Sanberg A.A., Takagi N., Schmidt M.L. Bross I.D. IX Metasynchronous DNA replication in homologs. // Cytogenetics. 1968. V.7 P.298-332.

289. Sanford J., Forrester L., ChapmanV. Methylation patterns of repetitive DNA sequences in germ cells ofMus musculus. // Nucl. Acids Res. 1984. V.12 P.2823-2836.

290. Santos F., Hendrich В., Reik W., Dean W. Dynamic reprogramming of DNA methylation in the early mouse embryo. // Devel. Biol. 2002. V.24. P. 1720182.

291. Savage J.R.K. An introduction to chromosomal aberrations. // Atlas Genet. Cytogen. Oncol. Haematol. 1999. V.3. P.395-402.

292. Scangos G., Ruddle F. Mechanism and application of DNA-mediated gene transfer in mammalian cells- a review. // Gene. 1981. V. 14. P. 1-10.

293. Schmid W. DNA replication patterns of the heterochromosomes in Gallus domesticus. //Cytogenetics. 1962. P.344-352.

294. Schnieke A., Harbers K., Jaenisch K. Embryonic lethal-mutation in mice induced by retrovirus insertion into 1 collagene gene. // Nature. V.304. P.315-320.

295. Seabright M.A. A rapid banding technigue for human chromosomes. // Lancet. 1971. V.2. P.971-972.

296. Selig S., Okumura K., Ward D.C., Cedar H. Delineation of DNA replication time zones by fluorescence in situ hybridization // EMBO J. 1992. V.l 1. P. 12171225.

297. Shoffner R.N. Chromosomes of Birds // The Cell Nucleus. 1974. V.2 P.223261.

298. Simi S., Jones В., Simon W. Intrachromosomal telomeric repeats and stabilization of truncated chromosomes in V79 Chinese hamster cells. Mutat. Res. 1998. V.397. P.229-233.

299. Simon I., Tenzen Т., Vostoslavsky R. et al. Developmental regulation of DNA replication timing at the human B-globin locus // EMBO J. 2001. V.20. P.6150-6157.

300. Simons J.,Wilmut I., Clark A. Et al. Gene transfer into sheep. // Biotechnology. 1988. V.6. P.l79-183.

301. Simpson J.L., Rajkovic F. Ovarian differentation and gonadal failure. // Am. J. Med. Genet. 1999. V.89. P. 186-200.

302. Singh N., Ebrahimi F.A., Gimelbrant A.A., Eusminger A.W., Gribnan J., Chess A. Coordination of the random asynchronous replication of autosomal loci. Nature Genet. 2003. V.33. P.339-341.

303. Stahl A., Vagner-Capodano A. Etude des chromosomes du Poult (Gallus domesticus) par les tecniques de fluorescences. Acad. Sci., Paris. 1972. T.275. Ser. D. P.2367-2369.

304. Steffenson S., Coelho P.A., Cobbe N. A role for Drosophila SMC4 in the resolution of sister chromatids in mitosis. Curr. Biol. 2001. V.l 1. P.295-307.

305. Stief A., Winter D.M., Stratling W.H., Sippel A.E. A nuclear DNA Attachment element mediates elevated and position-independent gene activity. // Nature. 1989. V.341. P.343-345.

306. Strauss W., Dausman Y., Beard C. Et al. Germ Line transmission of yeast artifical chromosome spanning the murine al collagen locus. // Sci. 1993. V.259. P.1904-1907.

307. Sumner A. Chromosomes: Organization and Function. // 2003, Maiden, MA: Blackwell Publishes. PP.238.

308. Sun W.H., DePamphilis M.L. Cell cycle-dependent regulation of the association between origin recognition proteins and somatic cell chromatin // EMBO J. 2002. V.21. P.1437-1446.

309. Swanson L., Simmons D., Arriza J. Novel development specifity in the nervous system of transgenic animals expression growth hormone fussion genes. // Nature. 1985. V.317. P.363-366.

310. Swift G., Hammer R., McDonald R et al. Tissue-specific expression of the rat pancreatic elastase-1 gene in transgenic mice. // Cell. 1984. V.38. P.639-646.

311. Takashi M., Hakamata J., Murakami Т., Takeda S., Kaneko Т., Takeuchi K., Ueda M., Kobayashi E. Establishment of LacZ- transgenic rats: a tool for regenerative research in myocardium. // Biochem. And Biophys. Res. Commun. 2003. V.305. P.904-908.

312. Tatey S.M., Kulkarni A.B. Gene targeting in immunology. // Indian J. of Exp. Biol. 2000. V.38. P.733-745.

313. Vanderbyl S., MacDonald G.N., Sidhu S., Gung L., Telenius A., Perkins E. Transfer and stable transgene expression of a mammalian artifical chromosome into bone marrow-derived human mesenchymal stem cell. Stem Cell. 2004. V.22. P.324-333.

314. Vernet M., Bonnerot C., Briand P., Nicolas J.F. Changes in permissiveness for the expression of microinjected DNA during the first cleavages of mouse embryos. // Mech. Devel. 1992. V.36. P.129-139.

315. Vernet M., Cavard С., Zider A et al. In vitro manipulation of early mouse embryos induces HIVI-LTR lacZ transgene expression. //Development. 1993. V.l 19. P.1293-1300.

316. Vernon R., Flint D. Role of growth hormone in the regulation of adipocyte growth and function. // In Biotechnology in Growth Regulation. Eds. R.B. Heap et al. London. 1989. P.57-71.

317. Vialard F., Cocquet J., Christin-Maitre S., Veitia R., Fellous M. The X chromosome and ovarian function. // Cytogenet. And Genome Res. 2002. V.99. P.218-223.

318. Visser A.E., Jaunin F., Fakan S., Aten J.A. High resolution analysis of interphase chromosome domains. //J. Cell Sci. 2000. V.l 13. P.2585-2593.

319. Vize P., Michalska A., Lioyd B. Et al. Introduction of a porcine growth hormone fusion gene into transgenic pigs promotes growth. // J. Cell Sci. 1988. V.90. P.295-300.

320. Vlassova I.E., Graphodatsky A.S., Belyaeva E.S., Zhimulev I.F. Constitutive heterochromatin in early embriogenesis of Drosophila melanigaster // Mol. Gen. Genet. 1991. V/229. P.316-318.

321. Vogelstein В., Pardoll D.M., Coffey D.S. Supercoiled loops and eucaryotic DNA replication. // Cell. V.22. P.79-85.

322. Wagner E., Stewart Т., Mintz B. The human B-globin gene and functional thymidine kinase in developing mice // Proc. Natl. Acad. Sci. 1981. V.78. P.5016-5020.

323. Wagner E., Covarubias L., Stewart T. et al. Prenatal lethalities in mice homozygous for human growth hormone sequences integrated in the germ line // Cell. 1983. V.36. P.647-656.

324. Wall R.G. Use of transgenic animals in livestock improvement. // Intern. Conf. On Animal Blood Groups Biochem. Polymorphisms. 1988. P.9.

325. Wall R.G. Transgenic livestock: progress and prospects for the fature. // Teriogenology. 1996. V.45. P.57-69.

326. Wall R.J., Kerr D.E., Bodioli K.R. Transgenic dairy cattle: genetic engineering on a large scale. // J. Dairy Sci. 1997. V.80. P.2213-2224.

327. Wang N., Shoffner R.N. Trypsin G- and C-banding for interchange analysis and sex identification in the chicken // Chromosoma. 1974. V.47.P.61-69.

328. Warburton P., Cooke H. Hamster chromosomes containing amplified human a-satellite DNA show delayed sister chromatid separation in the absence of de novo kinetochore formation. // Chromosoma. 1997. V.106. P. 149-159.

329. Waggener J.M. Initiation of DNA replication in multicellular eukaryotes. // J. of Structural. Biol. 2002. V.140. P. 17-30.

330. Wall R.J., Hawk H.W. Making transgenic livestok. Genetic engenering on a large scale. //J/ Cell Biochem. 1992. V.49. P. 113-120.

331. Ward K., Franclin I., Murray J et al. The direct transfer of DNA by embryo microinjection. // 3rd World congress on genetics applied to livestock production. 1986. V.XII. P.6-21.

332. Watson J.D., Crick F.N. The struture of DNA. // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1953. V.18. P.123.

333. Weise F., Liehr Т., Efferth Т., Kuechler A., Gebhart E. Comparative M-FISH and CGH analysis in sensitive and drug-resistant human T-cell lines. // Cytogenet. Genome Res. 2002. V.98. P.l 18-125.

334. Wiethoff C.M., Middaugh C.R. Barriers nonviral gene delivery. // Pharm. Sci. 2003. V.92. P.203-217.

335. Wiley J., Sons L. The cell cycle and development. // New-York, Weinkeim, Brisbane, Toronto. 2001. P.259.

336. Wilson C., Bellen H., Gehrig W. Position effects on eukaryotic gene expression. // Annu. Rev. Cell Biol. 1990. V.6. P.679-714.

337. Wisudkharawn S., Smith D. Different replication pattern of chromocentres and С bands in Lilium henryi. // Chromosoma. 1985. V.93. P.56-59.

338. Xuemei W., Viveiros M.M., Eppig J.J., Bai Y., Fitzpatrick S.L., Matzuk M.M. Zygote arrest 1 (Zarl) is a novel maternal-effect gene critical for the oocyte-to-embryo transition. //Nature Genet. 2003. V32. P.l87-191.

339. Yakovlev A.F. Influence of molecular biology and biotechnology on the development of cytogenetics. // Cytogenetics of Animals. Ed. By Hainan C.R.E. C.A.B International. UK. 1989. P.205-209.

340. Yerle M., Ehard G. High resolution GTG banding pattern of rabbit chromosomes. // Cytogenetics of animals. Ed. by Hainan C.R. C.A.B International. UK. 1989. P.301-304.

341. Yin Zh., Plader W., Malepszy S. Transgene inheritance in plants. // J. Appl. Genet. 2004. V.45. P. 127-144.

342. Yu Y., Bradley A. Engineering chromosomal rearrangements in mice. // Nature Rev. Genet. 2001. V.2. P.780-790.

343. Yuhua Su, Liebhaber- Stephen В., Cooke N. The human growth hormone gene cluster locus control region supports position-independent pituitary and placenta-specific expression in the transgene mouse. // J. Biol. Chem. 2000. V.275. P.7909

344. Yung kim Sun. High-level expression of human lactoferrin in milk of transgenic mice using genomic lactoferrin seguence. // J. Biochem. 1999. V.l26 P.320-325.

345. Zeng F., Don A., Balwin K., Schultz R.M. Transcript profiling during preimplantation mouse development. // Develop. Biol. 2004. V.272. P.383-496.

346. Zhang R., Wang Y., Li S. Co-expression of multiple gene constructs in transgenic mice. //Biotechnol. Lett. 2001. V.23. P. 1249-1255.

347. Zhimulev I.F. Polytene chromosomes, heterochromatin and position effect variegation // Advances in Genetics. 1998. V.37. P.l-566.

348. Zink D., Bornfleth H., Visser A., Cremer C., Cremer T. Organization of early and late replication DNA in human chromosome territories. // Exp. Cell Res. 1999. V.247. P.176-188.

349. Zolotukhin S. Humanized green fluorescent protein genes and methods. Пат. США, МПК6. C12Q G01N 33/5-3. The Univ. Of Florida Res. 09.10.98. Опубл. 19.10.99. НПК 465/1.

350. Zudova D., Reracova O., Kubickova S., Rubes J. Aneuploidy detection in porcine embryos using fluorescence in situ hybridization. Cytogenet Genome Res. 2003. V.l02. P.l76-183.

351. Zuniga- Gonzalez G., Torres-Bugarin O., Zamora-Perez A., Gomez-Meda B.C. Different in the number of micronucleated erythrocytes among young and adult animals including humans. Spontaneous micronuclei in 43 species. // Mutat. Res. 2001. V.494 P.l61-167.