Ранний эмбриогенез американской норки (Mustela vison) in vivo и in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.25, кандидат биологических наук Кизилова, Елена Александровна

• Кизилова, Елена Александровна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Кизилова, Елена Александровна

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Очерк биологии размножения куницеобразных (Carnivora, Mustelidaé)

1.1.1. Брачный период и беременность:

1.1.2. Межвидовые гибриды:

1.2. Ранний эмбриогенез

1.2.1. Оогенез

1.2.2. Динамика образования фолликулов

1.2.3. Овуляция и регуляция овуляции

1.2.4. Оплодотворение

1.2.5. Дробление, образование морулы и бластоцисты

1.2.6. Регуляция эмбриональной диапаузы

1.2.7. Эмбрион в диапаузе и активация развития

1.2.8. Имплантация и плацентация

1.3.Применение методов экспериментальной эмбриологии к куницеобразным

1.3.1. Получение фертильной спермы и ее криоконсервация

1.3.2. Гормональная стимуляции оогенеза in vivo и суперовуляция

1.3.3. Гормональная стимуляция оогенеза in vitro

1.3.4. Искусственное осеменение и оплодотворение in vitro

1.3.5. Культивирование эмбрионов in vitro

1.3.6. Культивирование эмбрионов in vivo

1.3.7. Трансплантация эмбрионов;

1.3.8. Криоконсервация эмбрионов

1.3.9. Выделение эмбриональных стволовых клеток, получение трансгенных и химерных животных

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ранний эмбриогенез американской норки (Mustela vison) in vivo и in vitro»

Актуалъностъ проблемы. За последние два десятилетия многие виды млекопитающих стали объектами эмбриологических исследований. Эксперименты на лабораторных грызунах и сельскохозяйственных копытных существенно расширили t представления о тонких механизмах генетической и клеточной регуляции развития [Perreault 1992; Thompson 1996; Евсиков 1997]. С другой стороны, сложнейшие поисковые исследования с использованием экспериментальной индукции развития, трансплантации ядер и трансгенеза быстро трансформируются в надежные рутинные техники [Hogan et al., 1986; Monk 1986]. Мощным инструментом в этих исследованиях являются линии эмбриональных стволовых клеток [Robertson 1987]. Прогресс современной биологии развития млекопитающих очевиден и наиболее показателен на примере удачного клонирования [Wilmut et al., 1997].

Область практического применения новых методов экспериментальной эмбриологии и генетики развития млекопитающих достаточно широка - от ускорения генетического прогресса производственных сельскохозяйственных популяций и оптимального использования производителей [Hammer 1985; Bowen et al., 1994] до охраны биоразнообразия. Так, стратегия экстренного спасения видов, находящихся под угрозой исчезновения, включает в себя искусственное оплодотворение, ксено- и алогенную трансплантацию и криоконсервацию эмбрионов [Wild 1989, 1992; Ротт 1981, 1995, 1996].

Успешное применение методов экспериментальной эмбриологии и генетики развития млекопитающих невозможно без подробных описательных и сравнительных данных о видоспецифичных особенностях онтогенеза [Wilmut et al., 1991; Bowen et al., 1994]. Для трансгенеза необходима точная хронология стадии зиготы. Разделение бластомеров и трансплантация ядер невозможна без точной информации об активации зародышевого генома. Для усдешной криоконсервации требуются сведения о функциональной морфологии клеточных типов. Для получения инъекционных химер необходимы данные о генезисе бластоцисты. Таким образом, биотехнологическим исследованиям обязательно предшествует получение морфологических описаний и их сравнительный анализ. Корректные описания особенно актуальны для хищных, которые стали использоваться в планомерных экспериментах с ранним развитием сравнительно недавно [Goodrowe et al., 1988; Pope et al., 1989; Donoghue et al, 1990; Goodrowe 1992; Roth et al, 1994].

Нет сомнений в том, что биотехнологические методы будут активно применяться на хищных в целом, и на куницеобразных в частности. Однако, разработка названных методов на куницеобразных представляет собой достаточно сложную проблему [Murphy 1992]. Многие виды этого семейства имеют индуцированную овуляцию и эмбриональную диапаузу. Первая особенность репродукции не позволяет получать синхронные ооциты, вторая - снижает приживляемость эмбрионов после манипуляций.

Тем не менее, американская норка (Mustela vison) является удовлетворительным "модельным" объектом. Во-первых, к настоящему моменту накоплены и систематизированы подробные сведения о частной генетике и кариотипе этого вида, разработана техника трансплантации эмбрионов и получены линии эмбриональных стволовых клеток. Во-вторых, у американской норки изучены физиологические механизмы стимуляции полового созревания, эструса и беременности; указаны конкретные требования к оптимальному проведению гона [Hansson 1947; Enders 1952; Ness et al 1988; Sundqvist et al., 1989 и др.]. И, наконец, американская норка является объектом пушного звероводства и обладает большой хозяйственной ценностью, что стимулирует и мотивирует научно-исследовательские работы. Так, до сих пор не потеряла актуальности проблема получения трансгенных норок, обладающих повышенной секрецией инсулин-подобного фактора роста и соматотропного гормона. Предполагается, что такие животные будут иметь улучшенные промышленные качества [Murphy 1992]. Получение трансгенных норок, несущих "нонсенс"-последователькости к вирусу алеутской болезни, может быть рассмотрено как первый шаг к формированию стада норок, невосприимчивых к этому опасному эпидемическому заболеванию.

Второй рассматриваемый в диссертации вид, хорь степной (Mustela eversmanni), наиболее близок по своим репродуктивным характеристикам к исчезающим видам и подвидам куницеобразных ÇMustela eversmanni amurensis, M. altaica raddei, M lutreola turovi, M. strigidorsa, M. nigripes) [Murphy 1989; Mead et al., 1990; Терновский и Терновская 1994]. Хорь степной не имеет выраженной облигатной диапаузы, которая снижает приживляемость эмбрионов особенно после экспериментального воздействия. Поэтому нам представлялось вполне резонным применить метод криоконсервации на виде, репродуктивная биология которого не предполагает дополнительных сложностей с трансплантацией эмбрионов.

2. Цели и задачи исследования. Целью данной работы было морфологическое изучение раннего развития норки и адаптация ряда эмбриологических методов для норки и хорька. Были поставлены следующие конкретные задачи:

1. Описание пронуклеарной стадии развития у норки, изучение динамики образования пронуклеусов и кариогамии.

2. Визуализация пронуклеусов в зиготах американской норки разного возраста.

3. Описание ультраструктурной организации эмбрионов норки на стадиях дробления, компактизации и кавитации; изучение морфо-функциональных изменений ядрышка в дробящихся эмбрионах.

4. Изучение бластоцистогенеза у американской норки: описание роста бластоцисты, преобразований внутренней клеточной массы и трофобласта в периимплантационный период развития.

5. Оценка эмбриональной смертности в предимплантационный период развития, выделение наиболее уязвимых стадий и возможных причин элиминации эмбрионов. л

6. Оценка ультраструктурных изменений в бластоцистах хорька после заморозки под защитой глицерина и диметилсульфоксида, поиск оптимальной стадии для криоконсервации эмбрионов норки.

7. Использование гомо- и гетеротипического сокультивирования эмбриональных стволовых клеток норки в качестве in vitro модели взаимодействия эмбриональных клеток.

3. Научная новизна. В результате проведенной работы были дополнены и уточнены описания стадий зиготы, дробления, компактизации и кавитации, стадии подготовки к имплантации у американской норки. Была изучена динамика изменений липидных включений при дифференцировке эмбриональных клеток норки in vivo и in vitro. Разработана методика визуализации пронуклеусов в зиготах норки. Оценены постадийно эмбриональные потери в предимплантационный период развития у норки. Изучены ультраструктурные изменения бластоцисты хорька при заморозке, обосновано применение диметилсульфоксида в качестве приемлемого криопротектора. Предложена и разработана новая оригинальная экспериментальная модель, имитирующая in vitro взаимодействия эмбриональных клеток норки.

Таким образом, полученные данные содержат новую информацию о раннем эмбриональном развитии американской норки и о возможностях расширенного применения к куницеобразным таких современных методов экспериментальной эмбриологии млекопитающих, как манипуляции с зиготами, криоконсервация эмбрионов и использование эмбриональных стволовых клеток.

3. Апробация результатов. Материалы диссертации были доложены на Международной конференции памяти акад. A.A. Баева, Москва, 1996 г; на 42-ом Национальном генетическом конгрессе, Кашамбу, Бразилия 1996 г; на 6-ом Конгрессе INFASA, Хельсинки, 1996 г; на 5-ом Конгрессе ICVM, Манчестер, 1997 г; на 2-ом 8

Международном симпозиуме "Физиологические основы повышения продуктивности пушных зверей", Петрозаводск, 1998 г и на 5-ом Всероссийском симпозиуме "Биология клетки в культуре", Санкт-Петербург, 1998 г.

4.0бъем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, результатов и их обсуждения, выводов, списка литературы и приложения. Работа изложена на 249 страницах, включая список литературы и приложения. Диссертация имеет 14 таблиц, расположенных в тексте, и 5 таблиц, вынесенных в приложение. Работа иллюстрирована 11 рисунками, расположенными в тексте, и 35 рисунками, вынесенными в приложение. Список литературы включает 272 источника.

Заключение диссертации по теме «Гистология, цитология, клеточная биология», Кизилова, Елена Александровна

ВЫВОДЫ

1. Впервые показано, что у норки стадия зиготы длится in vivo около 22-26 h.p.c. Отцовский пронуклеус оформляется к 42-46 h.p.c., материнский - к 44-48 h.p.c. Миграция пронуклеусов завершается к 48-52 h.p.c. Кариогамия идет по общему для млекопитающих плану, видоспецифична только динамика проядрышек. Полученные описания стадии зиготы и хронология событий оплодотворения являются более точными, чем все опубликованные ранее.

2. Впервые установлено, что оптимальный способ визуализации пронуклеусов у норки - мягкое (1500xg 2 мин) центрифугирование зигот, достигших возраста 52-54 h.p.c. Этот способ слабо влияет на жизнеспособность зигот как in vitro, так и in vivo.

3. Установлено, что видоспецифические особенности в прохождении поляризации, компактизации и кавитации связаны, по всей вероятности, с медленным темпом дробления и транспорта эмбрионов по яйцеводам. Впервые показано, что ультраструктурные и цитохимические преобразования ядрышка, свидетельствующие об активации эмбрионального генома, завершаются не позднее 12-кл стадии развития.

4. Впервые выстроен полный ряд "внутренняя клеточная масса - первичная полоска" у норки. В соответствии с ним бластоцистогенез разбит на пять стадий. Показано, что нарастание трофобласта может происходить за счет митотической активности его клеток, а плоидность его ядер может увеличиваться путем метафазной и анафазной реституции и незавершенной цитотомии. Предполагается, что существует механизм, регулирующий in vivo митотическую активность и пространственную организацию трофобласта. Бластоцистогенез у норки полностью соответствуют поверхностному центральному типу имплантации, видоспецифические особенности объясняются редукцией эмбриональной диапаузы у этого вида.

5. Установлено, что наиболее уязвимые стадии в предимплантационном развитии норки - это зигота и бластоциста. Ведущими причинами эмбриональной гибели в этот период развития можно считать аномалии оплодотворения, повреждающее действие сперматозоидов второго покрытия и избирательное повреждение трофобласта поздних бластоцист.

133

6. На основе гомотипического сокультивировання разных линий эмбриональных стволовых клеток в суспензии и монослое впервые показано, что у норки различия по генотипу и эмбриональному происхождению не препятствуют взаимодействию стволовых клеток in vitro. Гомо- и гетеротипическое сокультивирование ЭСК норки может быть использовано в качестве имитационной модели дифференцировки химерных агрегатов и дополнительного in vitro теста для оценки плюрипотентности ЭСК.

7. Впервые установлено, что для консервации эмбрионов не адекватны такие широко распространенные криопротекторы, как диметилсульфоксид и глицерин. Наиболее серьезные деструктивные изменения наблюдаются в липидных гранулах. В результате анализа собственных и литературных данных установлено, что в раннем развитии куницеобразных невозможно выделить стадию полной утилизации липидных гранул во всех клеточных типах. щ

Благодарности

Автор посвящает эту работу памяти к.б.н. Леонида Филипповича Максимовского, который непосредственно руководил его изысканиями.

Автор выражает глубокую благодарность д.б.н., профессору О.Л. Серову за внимание и координацию работы на всех этапах ее выполнения, а также коллегам и соавторам, принимавшим участие в этой работе: н.с. А.Н. Голубице, н.с. А.И. Железовой и Л.А. Чугаевой за помощь в проведении гона, получении эмбрионов и за полезные советы по оптимальному использованию экспериментального материала; к.б.н., с.н.с. С.И. Байбородину и д.б.н. А.Ю. Керкису за активное участие в проведении электронно-микроскопического анализа; к.б.н., с.н.с. Ю.Г. Терновской за любезно предоставленные эмбрионы хорька; к.б.н., с.н.с. С.Я Амстиславскому за проведение процедур криоконсервации; к.б.н., с.н.с. MA. Сукоян, к.б.н., с.н.с. Н.М. Матвеевой и к.б.н. C.B. Ватолину за любезно предоставленные линии ЭСК и помощь в культивировании; с.н.с. Шилову А.Г. за консультации по получению и анализу полутонких срезов и любезно предоставленные красители.

Автор выражает особую благодарность д.б.н., профессору А.П. Дыбану, к.б.н., с.н.с. Г.К. Исаковой, к.б.н., с.н.с. Е.В. Зыбиной, к.б.н., с.н.с. Т.Г. Зыбиной и к.б.н., с.н.с Трапезову О.В. за плодотворную дискуссию. Ч

Автор отдельно благорит к.б.н., с.н.с. И.И Любечанского за помощь в обработке данных морфометрического анализа; A.B. Дубинина, И.Э. Смелянского, Д.М. Ларкина и Г.П. Бородина за предоставленую оргтехнику.

Автор признателен рабочим и бригадиру норковой фермы Экспериментального хозяйства ИЦГ СО РАН, без участия которых данная работа не имела бы места.

Заключение

Имеющиеся источники позволяют произвести анализ изученности эмбриогенеза куницеобразных. Под изученностью мы понимаем здесь полноту описаний стадий развития, их сравнительный анализ и экспериментальную проверку гипотез о регуляции развития. Учитывался также такой показатель, как частота применения на куницеобразных экспериментальных методов, которые были разработаны, по большей части, на лабораторных грызунах и сельскохозяйственных копытных. Разумеется, предпринятый анализ не претендует на исчерпывающую полноту охвата источников. Тем не менее, по его результатам можно сделать некоторое заключение о направлении исследований в этих областях.

На Рис.1 представлены данные о печатных работах, посвященных эмбриогенезу куницеобразных. Как видно из рисунка, подавляющая часть работ посвящена изучению гормональной регуляции овуляции и имплантации. Данные о стадии зиготы и дроблении отрывочны и частично устарели [Hamilton 1934; Hammond and Walton 1934; Enders 1938; .<i

Chang 1965a,b, 1968]. Представления об эмбрионе в диапаузе, об активации развития и имплантации, напротив, последовательно дополняются и уточняются с применением современных методов изучения клетки [Paria et al., 1994; Mead, Eroschenko 1995; Moreua et al., 1995, 1996; Polejaeva et al., 1997; Исакова и Жоголева 1996, 1997].

3 4 5 Стадии эмбриогенеза

I Эмбриогенез i Гормональная регуляция репродуктивной функции самок

Рис. 1. Изученность эмбриогенеза куницеобразных с 1908 по 1998 гг

1 - оогенез, овуляция; 2 - оплодотворение, стадия зиготы; 3 - дробление, кавитация; 4 - эмбриональная диалауза; 5 - активация развития, имплантация; 6 - предплодный и плодный периоды развития; 7 - образование плаценты.

На Рис. 2 представлены данные о применении современных методов экспериментальной эмбриологии к куньим. Наибольшее число работ за период с 1969-1999 гг. посвящено стимуляции оогенеза in vivo. Сведения о культивировании ооцитов in vitro, о получении клонов, химерных и трансгенных животных у куницеобразных, как и в целом у хищных, отсутствуют. Методы манипуляций с отдельными бластомерами и методы хирургического разделения ранних эмбрионов также не разработаны.

25

123456789 Методы

Рис.2 Применение методов экспериментальной эмбриологии к куницеобразным

1 - получение фертилыюй спермы и ее криоконсервация; 2 - стимуляция оогенеза in vivo и суперовуляция; 3 -стимуляция оогенеза in vitro; 4 - искусственное осеменение и оплодотворение in vitro; 5 - культивирование эмбрионов in vivo и in vitro; 6 - криоконсервация эмбрионов; 7 - трансплантация эмбрионов; 8 - выделение ЭСК; 9 - тонкие манипуляционные методы (получение клонов, трансгенных и химерных организмов, выделение бластомеров, разделение эмбрионов и т.д.).

Несмотря на выраженное многоплодие, индуцированная овуляция у куницеобразных препятствует получению достаточного количества синхронных ооцитов и зигот. Облигатная диапауза, в свою очередь, снижает уровень приживляемости трансплантированных эмбрионов, особенно после манипуляций. Возможно, поэтому у куницеобразных до сих пор не разработана программа множественной овуляции и трансплантации эмбрионов (МОЕТ). Определенно, некоторое значение имеет и то обстоятельство, что в пушном звероводстве не решены две главные проблемы воспроизводства животных: стерильность, либо низкая фертильность самцов и высокая эмбриональная смертность [Sundqvist et al., 1989; Murphy 1992]. Так, пренатальные и ранние постнатальные потери у американской норки составляют около 25%, что гораздо выше, чем у других доместицированных видов млекопитающих [Murphy 1992].

Помимо "индустриальных", в семействе имеется как минимум 14 видов, к которым в перспективе также могут быть приложены методы экспериментальной эмбриологии (Табл. 2 Приложения). Это так называемые "угрожаемые" (endangered) виды и подвиды, имеющие разный статус в зависимости от угрозы их исчезновения [Категории МСОП. 1997]. Программа экстренного спасения вида, включавшая в себя гормональную стимуляцию

38 овуляции и искусственное осеменение, была с успехом применена в США на черноногом хорьке (Mustela nigripes) [Murphy 1989; http://www.wwfcanada.org/facts/ferret.html].

Однако биология размножения большей части угрожаемых видов куницеобразных практически не изучена [Табл. 1 Приложения; http://www.wcmc.org.Uk/cgi-bin/arlinput.p; http://www.iucn.org/themes/ssc/redlist/]. Поэтому необходимы дальнейшие исследования в этой области не только на "модельных", но и на самих угрожаемых видах.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Животные

Ранее было показано, что у американской норки мутации окраски меха оказывают плейотропное действие на репродуктивную функцию. Как правило, у гомозигот и комбинативных гомозигот наблюдается снижение плодовитости. В свою очередь, гетерозиготность по некоторым генам окраски меха у норок часто ведет к гетерозису по плодовитости [Евсиков и Беляев 1970; Беляев и др. 1972; Евсиков 1987]. Чтобы исключить добавочные эффекты, связанные с генотипами эмбриона и матери, для описаний мы использовали эмбрионы, полученные преимущественно от самок Standard, крытых самцами того же генотипа. В работе также были использованы норки шэдоу (Sh/+) и серо-голубые (рр). Норки содержались в стандартных условиях на звероферме Экспериментального хозяйства ИЦГ СО РАН. Во всех экспериментах использовалась схема покрытий по двум периодам гона 1+2 через 6-7 суток. Такая схема основана на естественных волнах созревания ооцитов у американской норки и является классической [Hansson 1947; Enders 1952]. Двукратное покрытие по второму периоду гона с интервалом 24 часа сокращает количество пропустовавших самок в случае, если первое покрытие по каким-то причинам оказалось неплодотворным. Самок-доноров эмбрионов забивали путем дислокации шейных позвонков. Гормональная обработка перед гоном и в течение гона не применялась.

В сезоны гона 1991, 1993-1996 гг. самки подсаживались в клетку к самцу, момент коитуса регистрировали визуально и полагали за нулевую отметку. Возраст зигот измеряли в часах после коитуса (h.p.c.), возраст дробящихся эмбрионов и бластоцист измеряли в днях после коитуса (d.p.c.). В работе использовались также самки горностая и хорька степного, любезно предоставленные Терновским Д.В. и Терновской Ю.Г. Спаривание у этих видов осуществлялось в вольерах, гормональная обработка не применялась.

2.2. Получение эмбрионов

Ооциты и зиготы получали на 44-46, 48-50 и 52-54 h.p.c., промыванием яйцеводов буфером Дульбекко [Секирина и др 1981; Железова и Секирина 1982; Hogan et al 1986; Monk et al 1987]. Дробящиеся эмбрионы и ранние бластоцисты вымывали через 3, 4, 5, 6, 7 и 8 d.p.c. из яйцеводов тем же раствором. Бластоцисты вымывали буфером Дульбекко из матки на 7-8, 10-12, 13-15, 18-20, 20-22 и 24 d.p.c Зародыши, прошедшие имплантацию, фиксировались in utero и позднее препарировались из имплантационных камер в чашках Петри под бинокулярной лупой: определялась стадия развития эмбриона, выделялись зародышевые оболочки.

2.3. Манипуляции с эмбрионами.

В одной серии экспериментов зиготы центрифугировали в микропробирках в среде Виттена на микроцентрифуге Eppendorf при 1500xg в течение 1-2 или 5 минут. В другой серии зиготы перед центрифугированием инкубировались в растворе цитохалазина В (5 мкг/мл в среде Виттена 30 мин при 37°С) или в растворе колцемида (0.1 мкг/мл в среде Виттена 30 мин при 37°С). Действующие концентрации цитохалазина В и колцемида были взяты из аналогичных исследований, выполненных на лабораторных животных [Hogan et al 1986; Monk et al 1987]. Часть зигот культивировали 24 и 72 часа в среде Виттена с добавлением 10% эмбриональной сыворотки теленка в воздушной атмосфере с 5% ССЬ при 37°С, среда менялась ежедневно.

2.4. Криоконсервация эмбрионов

Процедура замораживания зародышей соответствовала описанной нами ранее для горностая [Amstislavsky et al., 1993Ь]. Перед замораживанием в среду с зародышами добавляли криопротектор - 1.4 М диметилсульфоксид (ДМСО) или 1.4 М глицерин). После эквилибрации эмбрионы помещали в пластиковые пайеты и замораживали при помощи программного замораживателя со скоростью 0,3°С / мин до температуры - 40°С. После эквилибрации в течение 30 мин при этой температуре, пайеты с эмбрионами опускали в .«i сосуд с жидким азотом. Криоконсервацию эмбрионов при температуре жидкого азота проводили в течение 1-7 суток. Зародыши размораживали стандартным способом в водяной бане при 37 С. После размораживания эмбрионы помещали в среду М-16 и содержали в термостате при 37°С в атмосфере СОг (5%).

2.5. Прижизненная микроскопия и фотография

Стадия развития и жизнеспособность эмбрионов определялись под бинокулярной лупой в соответствие с конвенциональными критериями [Кауффолд и др. 1990]. Морфологические исследования эмбрионов и прижизненная фотография были выполнены на инвертированном микроскопе Labovert с применением интерференционно-контрастной и фазово-контрастной оптики (Leitz, Germany).

2.6. Фиксация эмбрионов и заключение в смолу

Для морфологического анализа на полутонких срезах предимплантационные и ранние постимплантационные эмбрионы фиксировали 1 ч. в растворе глутаральдегида (ГА) и формальдегида (ФА) (2.5% и 2.5% соотвественно) на стандартном фосфатном буфере (PBS, pH 7.6-7.8), промывали в трех сменах того же буфера в течение 15-20 мин и проводили постфиксацию в 1% водном растворе четырехоксида осмия (OSO4). После процедуры постфиксации эмбрионы заключались в блоки из агарозы (2% агарозы на PBS pH 7.6-7.8). Проводка осуществлялась в стеклянных микрочашках объемом не менее 2 мл с

Г ( г rocv/ «

Б-МЫнту i üs\¿4 двукратной сменой действующего раствора под визуальным контролем. Заключение эмбрионов в агарозные блоки позволило провести массовую обработку материала, существенно снизить артефакты проводки и пропитки ткани, уменьшить потери материала, неизбежно связанные с многократным переносом очень мелких образцов (размером значительно менее 1мм) по батарее проводки и заливки. Применение агарозных блоков позволило предварительно ориентировать образцы для получения оптимальной плоскости резки.

Для микроскопического и ультрамикроскопического изучения ранних эмбрионов хищных традиционно применяется заключение в эпон и аралдит [Самошкина 1981; Aubert et Convinec 1986; Farstad et al 1993; Enders and Mead 1996]. В нашей работе использовался эпон. Дегидратация и заключение образцов в эпон проводились стандартно (Миронов и др 1994):

1. батарея этанола повышающейся концентрации,

30%, 40%, 50%,70%, 96%) по 15 мин в каждом

2. абсолютный этиловый спирт две смены по 15 мин

3. этиловый спирт/ацетон (1:1) 15 мин

4. ацетон две смены по 7 мин

5. ацетон/смола (3:1) 1 час

6. ацетон/смода (1:1) 1 час

7. ацетон/смола (1:3) 1 час

8. смола 1 час

9. смола на 1 ночь Была использована заключающая смола следующего состава: Ероп 812 45% (по объему);

Epon DDSA 40%;

EponMNA 15%.

Смесь хорошо перемешивалась, к ней добавлялся катализатор полимеризации Epon DMP-30 (2% от объема заливочной среды) [Миронов и др, 1994]. Для полимеризации образцы переносили в свежую порцию смолы. Полимеризация происходила при 58° С в течение 48 часов.

2.7. Получение и окраска полутонких срезов

Срезы толщиной от 0.5 мкм до 10 мкм готовились на ультрамикротоме Reichert (Austria). Перед резкой образцы ориентировались так, чтобы полученная проекция была оптимальной - для обзорного препарата и последующей реконструкции. Для центрифугированных зигот оптимальная плоскость сечения была перпендикулярна плоскости раздела тяжелой и легкой фракций цитоплазмы. Для 2-клеточных эмбрионов оптимальная плоскость сечения была параллельна максимальной проекции бластомеров и перпендикулярна плоскости контакта бластомеров. Для 8-кл, 16-кл клеточных эмбрионов и морул плоскость сечения выбиралась без предварительной специальной ориентации. Для бластоцист оптимальная плоскость сечения была параллельна оси симметрии бластоцисты -линии, проходящей через ВКМ и противоположный ВКМ участок мурального трофобласта. Зиготы резали по принципу строгих серий с шагом 1,5 мкм. Каждый серийный срез зарисовывали на рисовальном аппарате РА-6 (Россия). Реконструкции осуществлялись стандартно [Туркевич 1967; Gondos et al 1972, Автандилов 1977].

Полутонкие срезы окрашивались фуксином, фуксином и толуидиновым синим, фуксином и азуром2, толуидиновым синим, метиленовым синим, крезил-виолетом, орсеином, азуром 2, пиронином, пиронином и метиленовым синим, сафранином О по стандартным методикам [Шилов 1976; Hamphrey and Pittman 1974; Миронов и др. 1994]. В ряде случаев непосредственно перед окраской срезы освобождали от смолы и деосмировали также стандартным методом [Миронов и др. 1994].

Серии ультратонких срезов (500-800 А) готовили на ультрамикротоме Ulracut Е (Austria), контрастировали уранил-ацетатом и цитратом свинца [Миронов и др 1994] и изучали в микроскопе JEM-100 C(JEOL, Japan) в диапазоне увеличений 2000-16000 X.

2.8. Подготовка сухо-воздушных препаратов и Ag-NOR окраска

Для цитохимического изучения активности ядрышек бластомеров использовались сухо-воздушные препараты эмбрионов, приготовленные по методу Тарковского [Hogan et al 1986; Monk 1997; Эванс 1990; Пратт 1990] с последующей окраской Ag-NOR [Dyban et al 1990]. Ранее оба метода были успешно адаптированы для американской норки [Isakova 1989; Исакова и др. 1992].

Сухо-воздушные препараты дробящихся эмбрионов американской норки готовили по двум протоколам.

Протокол №1 (по Isakova 1989)

1. вымывание эмбрионов, перенос в чистую каплю среды Виттена;

2. гипотония в 0,7% р-ре цитрата Na;

3. фиксация эмбрионов в р-ре Карнуа, в стеклянной микропосуде с притертыми крышками в течение 1-2 ч на холоде;

4. перенос фиксированных эмбрионов в капле фиксатора на чистые предметные стекла и быстрое размягчение препарата в ледяной уксусной кислоте;

5. сушка препарата.

Протокол №2 (по Железова А.И. личное сообщение) о

1. вымывание эмбрионов, перенос в чистую каплю среды Виттена;

2. перенос эмбрионов в 5% р-р проназы (Sigma) на буфере Дульбекко;

3. гипотония в 0.9% р-ре цитрата Na с добавлением кристаллического альбумина (1 альбумина на 1 мл р-ра);

4. гипотония в 1% р-ре цитрата Na;

5. перенос эмбриона на чистое сухое стекло в микрокапле гипотонирующего р-ра;

6. фиксация эмбриона на стекле ледяным фиксатором Карнуа (метанол/уксусная кислота в соотношении 3/1);

7. сушка препарата и очень быстрая обработка эфиром для растворения жиров.

В процессе подготовки препаратов использовались либо тот, либо другой способ. Однако для дробящихся эмбрионов норки более приемлемым, по всей видимости, является второй протокол с его мягкой гипотонией и конечной моментальной обработкой эфиром для вымывания обильных липидных включений.

Далее сухо-воздушные препараты окрашивали по методу Ag-NOR [Dyban et al 1990] в модификации для норки [Isakova 1989]. Предварительно готовили р-р А (2 г желатина в 100 мл деионизированной воды и 1мл муравьиной кислоты) и р-р Б (4 г AgNCh в 8 мл деионизированной воды). На препарат наносили 1 каплю р-ра А и 2 капли р-ра Б, закрывали чистым покровным стеклом и помещали в термостат на 70° С до желто-коричневой окраски. Далее промывали в дистиллированной воде и слегка докрашивали хроматин по Гимза.

2.9. Подготовка и анализ тотальных препаратов

Для приготовления тотальных препаратов производили микродиссекцию бластоцист, ранних постимплантационных эмбрионов и эмбриоидных телец. У бластоцист предварительно механически удаляли z. pellucida. Операция диссекции проводилась на микроманипуляторе с использованием специальных стеклянных рвущих игл [Никитин 1986]. Для предотвращения коллапса бластоцисты, ранние постимплантационные эмбрионы и ЭТ предварительно фиксировали в ГА и ФА (2.5% и 2.5% соответственно на PBS, рН 7.6-7.8) в течение 1 ч. Клеточные пласты иссекались на приблизительно квадратные фрагменты со стороной 150-300 мкм. Предварительно нами было исследовано, что именно на образцах такого размера нивелируется, казалось бы, неизбежный артефакт, вызванный кривизной клеточного пласта. Дело в том, что при подготовке тотального препарата образцы большего размера мнутся и сморщиваются, а меньшие по размеру образцы часто теряются в процессе окрашивания и заключения в глицерин.

После диссекции образцы постфиксировали в р-ре OsCU, промывали в PBS и окрашивали сафранином О [Кисели 1962]. В результате хроматин окрашивался в ярко-алый тон, цитоплазма оставалась прозрачной, липидные гранулы становились ярко-черными. Использование такой контрастной окраски позволило легко идентифицировать интерфазные ядра и фигуры митоза среди липидных гранул. В ряде случаев клеточные границы на тотальных препаратах импрегнировали серебром [Роскин 1951; Ромейс 1954; Кисели 1962]. Препараты заключали в 10% р-р глицерина на PBS (рН 7.6-7.8) и анализировали, используя масляную иммерсию.

Метод тотального препарата удобен тем, что в процессе подготовки препарата сохраняется пространственное положение всех частей эмбриона. Тотальные препараты активно использовалась в изучении эмбриогенеза рыб, рептилий и птиц, а так же при исследовании плоских эпителиев (мезентерий, перикард, амнион) млекопитающих [Методы биологии развития 1974]. Наблюдение на тотальных препаратах с успехом применялось при описании эмбриогенеза у кролика [Viebahn et al 1995]. Поскольку в эмбриогенезе куньих, как и у кролика, присутствует стадия экспансии бластоцисты, эта методика оказывается адекватной поставленной задаче.

2.10. Морфометрия

Морфометрический анализ был применен в исследовании процесса образования пронуклеусов (а), при описании роста бластоцисты (Ь) и при изучении генезиса производных трофобласта (с). а) В процессе реконструкции зигот на каждом срезе измерялись диаметры пронуклеусов и диаметр зиготы. Допуская предположение, что форма пронуклеусов и зиготы приближена к шару, по максимальным значениям диаметров рассчитывались ожидаемые объемы пронуклеусов и зигот. Ожидаемый объем пронуклеуса (Ут) вычисляется как

Ут = 1/6 7tD3, (1) где D - максимальное значение диаметра пронуклеуса в серии срезов (мкм).

Реальный объем пронуклеуса (Ур) вычисляется как

VP = 1/4 7ih (Di2 + D22 + D32 +.+ Dn2), (2) где h - толщина среза (мкм), которая в нашем случае при автоматической подаче блока равнялась 1,5 мкм; Di, D2 , D3, . Dn - диаметр пронуклеуса на 1, 2, 3, . п серийном срезе [Автандилов 1977].

Ядерно-цитоплазматическое отношение рассчитывалось, как это было ранее предложено [Austin and Walton 1960], только для зигот с центрально-расположенными пронуклеусами (52-54 h.p.c.) по формуле, использованной теми же авторами:

R = (Vmp + Vfp)/V с, (3) где R - нуклео-цитоплазматическое отношение; V,np - объем мужского пронуклеуса (мкм3); VfP - объем женского пронуклеуса (мкм3); Vc - объем цитоплазмы зиготы (мкм3).

Ь) Экспандированные бластоцисты куньих часто впадают в коллапс. Во избежание коллапса сразу после вымывания из матки бластоцисты фиксировались в 2.5 % ГА на PBS рН 7.6-7.8. Эта схема фиксации часто используется для электронной микроскопии, т.к. она вносит мало артефактов на субклеточном уровне [Миронов и др. 1994]. Предварительно нами было установлено, что различия в размерах бластоцист, вымытых из одной и той же самки, до и после фиксации недостоверны для р<0.999 (Табл. 1). Таким образом, сама процедура фиксации в 2.5 % ГА на PBS рН 7.6-7.8 не вызывает деформации или изменения размеров ни у ранних, ни у поздних бластоцист и поэтому может быть использована для морфометрического анализа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Кизилова, Елена Александровна, 1999 год

1. Adams С.Е. Observation on the induction of ovulation and expulsion of uterine egg in the mink, Mustela vison 1. J. Reprod. Fert. 1981a. V. 63 (1). P. 241-248.

2. Adams C.E., Rietveld A.R. Duration of copulation and fertility in mink, Mustela vison II Theriogen. 1981b. Y. 15. P. 449-452.

3. Ahmad M.S., Kitts W.D., Krishnamurti G.R. Mink semen studies. I. Liquid preservation and prospect of freezing spermatozoa // Theriogen. 1975. V. 4(1). P. 15-22.

4. Amstislavsky S., Amstislavskaya Т., Stein M., et al. Embryo cryobanking for conserving laboratory and wild animal species II Scand. J. Lab. Anim. Sci. 1996. V. 23(1). P. 269-277.

5. Amstislavsky S., Lindeberg H., Jarvinen M., et al. Ex situ preservation of Mustelidae: primer of application of genetic resource bank concept with the use of polecats as the model species // Scientifur. 1999., in press.

6. Amstislavsky S.Ya., Maksimovsky L.F., Ternovskaya Yu.G., et al Cryopreservation of carnívora embryo. Mustela erminea II Scientifur. 1993b.V.17. No.2. P.127-131.

7. Amstislavsky S.Ya.,Maksimovsky L.F.,Ternovskaya Yu.G., et al. Ermine reproduction and embryo development gústela erminea) . II Scientifur. 1993c. V.17. No.4. P.293- 298.

8. Anderson G.B. Interspecific pregnancy: barriers and prospects // Biol. Reprod. 1988. V. 38. P 1-17.

9. Ashley Т., Pocock N. A proposed model of chromosomal organization in nuclei at fertilization // Genética. 1981. V. 55 (3). P. 161-169.

10. Aubert I., Canivene R. Nidation differee chez mustelides: etude ultrastructurale utero-blastocytaire chez le blairean europeen, la martre et la foine // Arch. Biol. (Bruxelles). 1986. V. 97(2). P. 157-186.

11. Austin C.R. Fertilization and development of the egg // In: Reproduction in domestic animals. Cole H.H., Cupps P.T. (Eds). New-York: Academic Press. 1959. P. 400-431.

12. Austin C.R. The mammalian egg. Britain Oxford Blackwell. 1961.183 P.

13. Austin CR and Walton A Fertilization. Marshall's physiology of reproduction 1. London: Longman-Green. 1960. P. 310-396

14. Baevsky U.B. The effect of embryonic diapause on the nuclei and mitotic activity of mink and rat blatocysts // In: Delayed implantation. Chicago: University of Chicago Press. 1968. P. 141-153.

15. Biggiogera M., Martin Т.Е., Gordon J., et al Physiologically inactive nucleoli contain nucleoplasmic ribonucleoproteins: immunoelectron microscopy of mouse spermatids and early embryos // Exp. Cell Res. 1994. V. 213. P. 55-63.

16. Bowen R.A. Fertilization in vitro of the feline ova by spermatozoa by the ductus deferens И Biol. Reprod. 1977. V. 17. P. 144-147.

17. Bowen RA, Reed ML, Schnicke A et al. (): Transgenic cattle resulting from biopsied embryos // Biol, of Reprod. 1994. V. 50. P. 664-668.

18. Calarco P. G., McLaren A. Ultrastructural observation of preimplantation stages of the sheep // J. Emryol. Exp. Morphol. 1976. V. 36(3). P. 609-622.

19. Caniveng R., Bonnin-Laffarque M. Inventory of problems raised by the delayed ovo-implantation in the European badger (Meles meles) II In: Delayed implantation, ed Enders A.C. University of Chicago Press. 1963. P. 324-347.

20. Chang M.C. Cleavage of unfertilized ova in immature ferrets // Anat. Rec. 1950. V. 108. P. 31-44.

21. Chang M.C. Development of transferred ferret eggs in relation to the age of corpora lutea II J. Exp. Zool. 1969. V. 171. P. 459-464.

22. Chang M.C.,Fertilizing life of the ferret sperm in the females tract // J. Exp. Zool. 1965a. V. 158. P. 87100.

23. Chang M.C. Implantation of ferret ova fertilized by mink sperm // J.Exp. Zool. 1965b. V. 160. P. 67-80.

24. Chang M.C. Natural occurrence and artificial induction of parthenogenetic cleavage of ferret ova // Anat. Rec. 1957. V. 128. P. 187-200.

25. Chang M.C. Reciprocal insemination and egg transfer between ferrets and mink // J. Exp. Zool. 1968. Y.168. P.49-60.

26. Chang M.C., Yanagimachi R. Fertilization of ferret ova by deposition of epididimal sperm into the ovarian capsule with special references to the fertilizable life of ova and capacitation of sperm // J. Exp. Zool. 1963. V. 154. P. 175-188.

27. Chartrein I., Niar A., King W.A., et al. Development of the nucleolus in the tardy goat embryos // Garnet. Res. 1987. V. 18. P. 201-213.

28. Concannon P.W., Pilbeam T., Travis H. Advanced implantation in mink (Mustela visori) treated with medroxiprogesterone acetate during early embryonic diapause // J. Embryol. Exp. Morphol. 1980. V. 58. P. 1-6.

29. Cran D.C. Qualitative and quantitative structural changes during pig oocyte maturation // J. Reprod. Fertil. 1985. V. 74 (1). P. 237-245.

30. Crozet N., Theron M.C., Chemineau P. Ultrastructure of in vivo fertilization in the goat // Garnet. Res. 1987. V. 18(2). P. 191-199.

31. Daniel J.C. Dormant embryos in mammals // Bioscience. 1970. V. 20. P. 411-415.

32. Daniel J.C. Studies on growth of the mink blastocyst // J. Embryol. Exp. Morphol. 1967. V. 17(2). P. 293-302.

33. Das S.K., Tsukamura H., Paria B.C. et al. Differential expression of epidermal growth factor receptor (EGF-R) gene and regulation of the EGF-R bioactivity by progesteron and estrogene in the adult mouse uterus//Endocrynology. 1994. V. 134. P. 917-981.

34. David H. Elektronenmikroskopische Organ pathologie. Berlin: VEB Verlag, 1967. 360 P.

35. Deanesly R. Delayed implantation in the stoat (Mustela erminea) // Nature. 1943. V. 151 (380). P. 365.

36. Deanesly R. The reproductive process of certain mammals. IX Grouth and Reproduction in the stoat (Mustela erminea) II Philos. Transact. Royal Society. 1935. B.225. P.459-492.

37. Dieguez L., Soler C., Perez-Sanchez F., et al. Morphometric characterization of normal and abnormal human zygotes // Hum. Reprod. 1995. V. 10 (9). P. 2339-2342.

38. Donoghue A.M., Johnston L.A., Seal U.S. et al. In vitro fertilization and embryo development in vitro and in vivo in the tiger (Pantera ttgris) // Biol. Reprod. 1990. V. 43. P. 733-744.

39. Douglas D.A., Pierson R.A., Murphy B.D. Ovarian follicular development in mink {Mustela vison) // J. Reprod. Fert. 1994. V. 100(2). P. 583-590.

40. Dresser B.L., Gelwicks E.J., Wacks H.B. et al. Embryo cryopreservation and transfer in the domestic cat (Felis catus) // Proceeding of Internal Congress On Animal Reproduction And Artifitial Insemination. 1988. V. 2(160). P. 3.

41. Dyban A.P., Severova E.L., Zatzepina O.V.et al. The silver-stained NOR- and argentophilic nuclear proteins in early mouse embryogenesis: a cytological study // Cell Differ. Dev. 1990. V. 29. P. 165-179.

42. Eckstein P., Zukerman S. Morphology of the reproductive tract. In: Marshall's Phisiology ofi

43. Reproduction. "Longman Green". London: 1960a V. 1(1), P.43-147.

44. Ekstein P., Zykerman S. The oestrous cycle in the mammalia. In: Marshalls physiology of reproduction. London: Longman-Green 1960b V. 1(1). P. 226-359.

45. Elofsson L., Lagerkvist G., Gustafson H. et al. Mating systems and reproduction in mink // Acta Agricult. Scandinavia 1989. V. 59. P. 23-41.

46. Enders A.C. Comparative studies on the endometrium of delayed implantation // Anat. Rec. 1961. V. 139. P. 483-487.

47. Enders A.C. Histological observation on the chorio-allantois placenta of the mink // Anat. Rec. 1957. V.127. P. 231-245.

48. Enders A.C. Reproduction in the mink // Procl. Amer. Phil. Soc. 1952. Y. 96. P. 291-320.

49. Enders A.C., Eders R.K., Shlafke S. An electron microscope study of the gland cells of the mink endometrium*// J. Cell Biol. 1983. V. 18. P. 405-418.

50. Enders A.C., Schlafke S. Implantation in the ferret: epithelial penetration // Am. J. Anat. 1972. V. 133. P. 291-316.

51. Enders A.C., Schlafke S.,Hubbard N.E. et. al. Morphological changes in the blastocyst of the western spotted skunk during activation from delayed implantation. // Biol. Reprod. 1986. V. 34. P. 423 437.

52. Enders A.E., Mead R.A. Progression of the trophoblast into the endometrium during implantation in the western spotted skunk // Anat. Rec. 1996. V. 244. P. 297-315.

53. Enders R.K. The ovum of the mink (Mustela vison) // Anat. Records. 1938. V. 72. P. 469.

54. Enders R.K., Pearson A.K. Mink blastocysts in vitro //Anat. Record. 1946. V. 96. P. 570.

55. Evans M.J., Kaufman M.H. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryo // Nature. 1981. V. 292. P.154-156.

56. Farstad W., .Hyttel P., Grondahl C., Mondain-Monval M., Smith A.J. Fertilization and early embryonic development in the blue fox (Alopes lagopus) // Mol. Reprod. Dev. 1993. V. 36. P. 331-337.

57. Fasleabas A.T., Mead R.A., Rourke A.W. Presence of an inhibitor of plasminogen activator in uterine fluid of the spotted skunk during delayed implantation // Biol. Reprod. 1984. V.30. P. 311-322.

58. Ferrer F., Garcia C., Villar J., Arias M. Ultrastrural study of the early development of the sheep embryo

59. Anat. Hystol. Embryol. 1995. 24(3). P. 191-196. ■<t

60. Fleming T. P., Johson M. H. From egg to epithelium // Ann. Rev. Cell Biol. 1988. V. 4. P. 459-485.

61. Gardner R.L., Johnson M.H. Investigation of early mammalian development using interspecific chimaeras between rat and mouse // Nature New Biology. 1973. V. 246. P. 86-89.

62. Staib E.B. Giant otter. ElsV: Staib Feb. 1994. 36 P.

63. Gondos B., Bhiraleus P., Conner L.A. Pronuclear membrane alteration during approximation of pronuclei and initiation of cleavage in the rabbit // J. Cell Sci. 1972. V. 10(1). P. 61-78.

64. Goodrowe K.L. Feline reproduction and artifitial breeding techniques // Anim. Reprod. Sci. 1992. V. 28(1-4). P. 389-397.

65. Goodrowe K.L., Wall R.G., O'Brien S.J. et al. Developmental competence of domestic cat follicular oocytes after fertilization in vitro // Biol. Reprod. 1988. V. 39. P. 355-372.

66. Gulamhhusein A.P., Beck F. Light and electron microscopic observation at the pre- and early post-implantatiort'stages in the ferret uterus // J. Anat. 1973. V. 115(2). P. 159-174.

67. Gulamhusein A.P., Thawley A.R. Plasma proestrogen levels in the stoat // J. Reprod. Fert. 1974. V.36. P.405-408.

68. Guraya S.S. A histochemical analysis of lipid yolk deposition in the oocytes in cat and dog // J. Exp. Zool. 1965. V. 163. P. 123-136.

69. Gustafsson H., King W.A., Elofsson L. Studies on ovarian follicular development and preimplantation embryonic development in mink // Theriogenol. 1987. V. 27(1). P. 234.

70. Hadek R. Mammalian fertilization: an atlas of ultrastructure // New York: Academic Press. 1959. 296 P.

71. Hamilton WJ. The early stages in development of the ferret fertilization to the formation of the prochordal plate//Trans. Royal. Soc. Edinb. 1934. V.58. P. 251-260.

72. Hammer RE, Pursel VG, Rexroad CE, et al. Production of transgenic rabbit, sheep and pigs by microinjectioii. //Nature 1985. 315: 680-682.

73. Hammond J. Gonadotropin-induced ovulation in mink // J. Mammal. 1952. V.33. P. 218-233.

74. Hammond J., Walton A. Notes on ovulation and fertilization in ferret// J. Exp. Biol. 1934. Vol. 11. P. 307-319.

75. Hammond J. Failure of progesteron treatment to affect delayed implantation in mink // J. Endocrynol. 1951. V.7. P. 330-334.

76. Hansson A The physiology of reproduction in mink with special reference to delayed implantation // 1947. Acta Zool. 28: 1-136.

77. Harley E.B. Implantation, development of the fetus and fetal membranes // In: Reproduction in domestic animals. Cole H.H., Cupps P.T. (Eds). New-York: Academic Press. 1959. P. 433-450.

78. Hastings R.A., Enders A.C. Junctional complexes in the preimplantation rabbit embryo // Anat. Rec. 1975. V. 181 (1). P. 17-33.

79. Hogan B., Constantini F., Lacy B. Manipulating the mouse embryo. A laboratory manual. New York: Spring Harbor Laboratory. 1986. 332 P.

80. Hoist P.A., Phemister R.D. The prenatal development of the dog: preimplantation events // Biol. Reprod.1971. V. 5. P. 194-206.

81. Howard J.C., Bush H.M., Morion C. et al. Semen cryopreservation in ferrets (Mustela putorius furo) and pregnances after laparoscopic intrauterine insemination with frozen-thowed spermatozoa // J. Reprod. Fert. 1991. V. 22(1). P. 109-119.

82. Humphrey C.D., Pittman F. E. A simple methylene blue azur 2 - basic fuchsin stain for epoxy-embedded tissue sections // Stain Technol. 1974. V. 49. P. 9-14.

83. Hunter R.H.F. Fertilization in the pig : sequence of nuclear and cytoloplasmic events // J. Reprod. Fert.1972. V. 29. P. 395-406.

84. Hyttel P., Callesen H., Greve T. Ultrastructural features of preovulatory oocytes maturation in superovulated cattle // J. Reprod. Fert. 1986. V. 76 (2). P. 645-656.

85. Isakova G.K. Chromosomes and infertility in the mink // In: Cytogenetics of Animals, Oxon: CAB International. 1989. P. 133-149.

86. Jarosz S., Barabasz J.E., Szelesczuk K.O. Estrus-indusig trial using oil PMSG in mink // Scientifur 1987. V. ll.J>. 127-128.

87. Jarosz S.J., Duketov W.R. Effect of progesterone and medroxyprogesterone acetate on pregnancy length and litter size in mink//Lab. Anim. Sci. 1985. V. 35. P. 156-158.

88. Johnston L.A., Donoghue A.M., O'Brien S.J. et al. "Rescue" and maturation in vitro of follicular oocytes collected from nondomestic felid species // Biol. Reprod. 1991. V. 45(6). P. 898-906.

89. Kashiwazaki N., Ohtani S., Nagashima H, et al. Production of normal piglets from hatched blastocysts frozen at -196° C // Theriogenol. 1991. V.35. P.221.

90. Kim J.W., Kitts W.D., Ahmad M.S., et al. The ultrastructure of mink (Mustela vison) spermatozoa // Can. J. Zool, 1979. V. 57(4). P. 924-933.

91. Konrad J., Mouka J., Hanek J. Induction of oestrus in anaphrodisiac mink females by serum gonadotropins //Vet. Med. (Praha). 1977. V. 17. P.487-493.

92. Kothary R., Clapoff S., Darling S., et al. Inducible expression of an hsp68-lacZ hybrid gene in transgenic mice // Development. 1989. V. 105. P. 707-714.

93. Koyama H., Suzuki H., Yang X., et al. Analysis of polarity of bovine and rabbit embryos by scanning electron microscopy // Biol. Reprod. 1994. V. 50 (1). P. 163-170.

94. Kukle M., Longo F.J. Cytological events leading to the cleavage of golden hamster zygotes // J. Morphol. 1975. V. 146(2). P. 197-213.

95. Lallemand Y., Brulet P. An in situ assessment of the routes and of colonization of the mouse embryo by embryonic stem cells and their descendents // Development. 1990. V. 110. P. 1241-1248.

96. Laurincik J., Hyttel P., Kopecny V. DNA synthesis and pronucleus development in pig zygotes obtained in vivo: an autoradiographic and ultrastructural study // Mol. Reprod. Dev. 1995. V. 40 (3). P. 325-332.

97. Laurincik J., Kopecny V., Hyttel P. Detailed analysis of pronucleus development in bovine zygotes in vivo: ultrastructure and cell cycle chronology // Mol. Reprod. Dev. 1996. V. 43. P. 62-69.

98. Laurincik J., Kopecny V., Hyttel P. Pronucleus development and DNA synthesis in bovine zygotes in vivo // Theriogenology. 1994. V. 42. P. 1285-1293.

99. Le Guen P., Crozet N. Microtubule and centrosome distribution during sheep fertilization.i

100. Europ.J.Cell.Biol. 1989. v. 48(2), p.239-249.

101. Leiser R., Koob B. Development and characteristics of placentation in the Carnivore, the domestic cat // J. Exp. Zool. 1993. V. 266. P. 643-656.

102. Levron J., Munne S., Willadsen S., et al. Male and female genomes associated in a single pronucleus in human zygotes // Biol. Reprod. 1995. V. 52 (3). P. 653-657.

103. Lindeberg H., Amstislavsky S., Jarvinen M. and Valtonen M. Preliminary results of in vitro culture of in vivo produced polecat (Mustela putorius) embryos // Nordiske Jordbruksforskeres Forening. 1998. Sem. 295. P. 7.

104. Longo FJ (1985) Fine structure of the mammalian egg cortex // Am. J. Anat. V. 174(3) 303-315.

105. Longo FJ Fertilization: a comparative ultrastructural review // Biol. Reprod. 1973. V. 9 149-173.

106. Mahi C.A., Yanagimachi R. Capacitation, acrosome reaction and sperm penetration by canine spermatozoa'in a simple defined medium // Garnet. Res. 1978. V. l.P. 101-109.

107. Maro B, Johnson MH, Pickring SJ, et al. Changes in actin distribution during fertilization of mouse egg // J.Embryol.Exp.Morph. 1984. V. 81: 211-237.

108. Martinet L., Allais C., Allain D. The role of prolactin and LH in luteal function and blastocyst growth in mink (Mustela vison) // J. Reprod. Fert. 1981. V.29. Suppl. P. 119-130.

109. McConnel J. Molecular basis of the cell cycle control in early mouse embryos // Intern. Rev. Cytol. 1991. V. 129. P. 75-90.

110. McRae A. Effect of ovariectomy on blastocyst expansion and survival in ferrets (Mustela putorius furo) II Reprod. Fert. Dev. 1992. V.4. P.239-247.

111. Mead R.A. Reproduktion of the eastern form of the spotted skunk (genus Spilogale) II J. Exp. Zool. 1968. V. 156. P. 119-136.

112. Mead R.A. Delaed implantation in mustelids with special emphasis on the spotted skunk. In: Embryonic diapause in Mammals. J. Reprod. Fert. 1981a. Suppl. V. 29. P. 11-24.

113. Mead R.A. Embryonic diapause in vertebrates // J. Exp. Zool. 1993. V. 266. P. 629-641.

114. Mead R.A., Concannon P.W., McRae M. Effect of progestins on implantation in the western spotted skunk// Biol. Reprod. 1981b. V. 25. P. 128-133.

115. Mead R.A.," Eroshenko V.P. Changes in uterine estrogen and progesterone receptors during delayed implantation and early implantation in the spotted skunk // Biol. Reprod. 1995. V. 53. P. 827-833.

116. Mead R.A., Joseph M.M., Neirinckx S. Optimal dose of human chorionic gonadotropin for inducing ovulation in the ferret // Zoo Biol. 1988. V. 7. P. 263-267.

117. Mead R.A., McRaw M. Is estrogen required for implantation in the ferret? // Biol. Reprod. 1992.V.27. P. 540-547.

118. Mead R.A., Neirinckx S., Czekala N.M. Reproductive cycle of the steppe polecat (Mustela eversmanni) II J.Reprod. Pert. 1990. V.88. P. 353-360.

119. Mead R.A., Rourke A.W. Accumulation of RNA during embryonic diapause and the preimplantation period in the western spotted skunk // J. Exp. Zool. 1985. V. 235. P. 65-70.

120. Mead R.A., Rourke A.W., Swannack A. Changes in uterine protein synthesis during delayed implantation,in the western spotted skunk and its regulation by the hormones // Biol. Reprod. 1979. V. 21. P. 39-46.

121. Minhas B.S., Capehart J.S., Bowen M.J. et al. Visualization of pronuclei in living bovine zygotes // Biol. Reprod. 1984. V. 30(3). P. 687-691.

122. Monk M: Mammalian development: A practical approach. IRL Press, Oxford Washington DC. 1987.

123. Moreau G. M., Smith L.C., Song J., Murphy B. D. In vitro survival and hatching of mink embryos in diapause // Proceedings from the 6-th International Scientific Congress in Fur Animal Production, Warsaw, 1996 Ed. A. Frindt, M. Brzozowski, P. 91- 97.

124. Murphy B.D. Progress and challenges in the physiology of reproduction in furbearing carnivores // Norveg. L. Agile. Sci. 1992. V.9. Suppl. P. 17-29.

125. Murphy B.D. Reproductive biology of female mustelides // In: Conservation biology and the black-footed ferret // Seal U.S., Bogan M.A., Anderson S.H. (eds.) "Yale. Univ. Press". New Haven: 1989. P. 107-123.

126. Murphy B.D., Concannon P.W., Travis H.F. et al. Prolactin: the hypophyseal factor terminates embryonic diapause in mink // Biol. Reprod. 1981. V.25. P .487-491.

127. Murphy B.D., DiGregorio G.B., Douglas D.A. et al. Interactions between melatonin and prolactin during gestation in mink (Mustela vison) // J.Reprod. Fert. 1990. V. 89920. P.423-429.

128. Murphy B.D., Humphrey W.D., Shepston S.L. Luteal function in mink. The effect of hypophysectomy after the preimplantation rise in progesteron // Anim. Reprod. 1980. V.3. P. 225-232.

129. Murphy B.D., Mead R.A., McKibbin P.E. Luteal contribution to the determination of preimplantation delay in minfe // Biol.Reprod. 1983. V.28. P.497-503.

130. Mystkowska E.T. Development of mouse-bank vole interspecific chimaeric embryos // J. Embryol. Exp. Morph. 1972. V. 333. P. 731-744.

131. Nagashima H., Kashiwazaki N, Ashman R.J., et al. Removal of cytoplasmic lipid enhances the tolerance of porcine embryos to chilling // Biol. Reprod. 1994. V.51. P. 618-622.

132. Nagashima H., Yamakawa H., Niemann H. Freezibility of porcine blastocysts at different peri-hatching stages // Theriogen. 1992. V.37. P.839-850.

133. Ness NN, Einarson EJ, Lohi O, Jorgensen G. Beautiful fur animals and their color genetics. Glostrup Denmark: Scientific. 1988. 210 c.

134. Niemann H. Cryopreservation of ova and embryos from livestock: current status and research needs// Theriogenology. 1991. V. 35 (1). P. 109-124.

135. Niwa K, Ohara K, Hosoi Y and Iritani A. Early events of in vitro fertilization of cat eggs by epididymal spermatozoa // J. Reprod.Fertil. 1985. V. 74. P. 657-660.

136. Panigel M., Kraemer D.C., Kalter S.S., et al. infrastructure of cleavage stages and preimplantation embryos of the baboon // Anat. Embryol. 1975. V. 147 (1). P. 45-62.

137. Papke R.L., Concannon P.W., Travis H.F et al. Control of the luteal function and implantation in the mink by prolactin //J. Anim. Sei. 1980. V. 50. P.1102-1107.

138. Paria B.C., Das S.K., Mead R.A. et al. Expression of epidermal growth factor receptor in theipreimplantation uterus and blastocyst of the western spotted skunk // Biol. Reprod. Fertil. 1994. V. 51(2). P. 205-213.

139. Perreault S.D. Chromatin remodeling in mammalian zygotes // Mutation Research. 1992. V. 296. P. 4355.

140. Pilbeam T.E., Concannon P.W., Travis H.F. The annual reproductive cycle of the mink // J.Anim. Sei. 1979. V.48. P. 578-584.

141. Polejaeva I.A., Reed W.A., Bunch T.D. et al. Prolactin induced termination of obligate diapause of mink (Mustela vison) blastocysts in vitro and susequent establishment of ES-like cells // J. Reprod. Fert. 1997. V. 109(2). P.229-236.

142. Polge C. The freezing of mammalian embryos: perspectives and possibilities// Freezing of mammalian embryos Ciba Foundation Symposium 52, Amsterdam: Elsevier, 1977. P.3-18.

143. Pope C.E., Gelwicks E.J., Wachs K.B. et al. Sucsessfiil interspicies transfer of embryos from indian desert cat (Felis silvestris ornata) to the domestic cat (Felis catus) following in vitro fertilization II Biol. Reprod. 1989. V. 40(1). Suppl. P. 61.

144. Renton J.P., Eckersall P.D., Ferguson J.M., et al. Ovulation, fertilization and early embryonic development in the bictch (Canis familiaris) II J.Reprod. Fert. 1991. V. 93. P. 221-231.

145. Rider V., Heap R.B. Heterologous anti-progesterone monoclonal antibody arrest early embryonic development and implantation in the ferret (Mustela putorius) // J. Reprod. Fert. 1986 V. 76(1). P. 459470.

146. Robertson E.J. Embryo-derived stem cell lines. Teratocarcinomas and embryonic stem cell lenes: a practical approach. 1987. IRL Press Limited. Ch. 4. P. 71-112.

147. Rose J., Oldfield J.E., Stormshak F. Changes in serum prolactin concentration and ovarian prolactin receptors duijng embiyonic diapause in mink // Biol. Reprod. 1986. V.35. P.101-106.

148. Roth T.L., Swansson W.F., Wildt D.E. Developmental competence of domestic cat embryos fertilized in vivo versus in vitro // Biol. Reprod. 1994. V. 51. P. 441-451.

149. Rourke A.C., Mead R.A. Blastocyst protein synthesis during obligate delay of implantation embryo activation in the western spotted skunk // J.Exp. Zool. 1982. V. 221. P. 87-92.

150. Rowlands I. W., Weir B.J. Mammals: non primate euterians. In: Marshall's physiology of reproduction. V.l. Reproductive cycles of vertebrates. Ed. Lamming G.E. Edinburg-London-Melburn-New-York: Churchill Livingstone. 1984. P. 455-659.

151. Ryan K.D., Robinson S.L. A study of spontaneous sexual maturation of the female ferret // Biol. Reprod. 1987. V. 36. P. 333-339.

152. Sandell M. The evolution of seasonal delayed implantation // Quart. Rev. Biol. 1990. V. 65(1). P. 23-42.

153. Sathananthan A.H., Ng S.C., Trouson A.O. et. al. The effects of ultrarapid freezing on meiotic andimitotic spindles of mouse oocytes and embryos. // Gamete Res. 1988. V. 21. P. 385 401.

154. Schatten G. 1982. Motility during fertilization. Int. Rev. Cytol., v79, p. 59-163.

155. Schmidt P, Schiewe M., Wildt D.E. The genotipic response of mouse embryos to multiple freezing variables // Biol. Reprod. 1987. V.37. P. 1121-1128.

156. Selfridge J., Pow A.M., McWhir J. at al. Gene targeting using a mouse HPRT minigene/HPRT-deficient embryonic cell system: inactivation of the mouse ERCC-1 gene // Somatic Cell and Mol. Genet. 1992. V. 18(4). P. 325-336.

157. Sinha A.A., Mead R.A. Morphological changes in the trophoblast, uterus and corpus luteum during delayed implantation and implantation in the western spotted skunk // Am. J. Anat. 1976. V. 145. P. 331-356.

158. Stouflett I., Modain-Monval M., Simon P. et al. Pattern of plasma progesterone, androgen and oestrogen concentration and in vitro ovarian steroidogenesis during embryonic diapause and implantation in the mink//J. Reprod. Fert. 1989. V. 87. P. 209-221.

159. Stroband H.W., Taverne N., van der Bogaard M. The pig blastocyst: its ultrastructure and the uptake of protein macromolecules // Cell Tissue Res 1984. V. 235 (2). P. 347-356.

160. Sukoyan M.A. and Mazurov M.M. Mink embryonic stem cells line expressing LacZ gene // Braz.J.Gen. 1996. V. 19(3). P. 365.

161. Sukoyan M.A., Golubitsa A.N., Zhelezova A.I., et al. Isolation and Cultivation of blastocyst-derived stem cell lines from american mink (Mustela vison) II Mol. Reprod. Dev. 1992. V. 33. P. 418-431.

162. Sukoyan M.A., Vatolin S.Y., Golubitsa A.N. et al. Embryonic stem cell derived from morulae, inner cell mass and blastocyst in mink// Mol. Reprod. Dev. 1993. V.36. P. 148-158.

163. Sundqvist C., Amador A.C., Bartke A. Reproduction and fertility in the mink (Mustela vison) // J. Reprod. Fert. 1989. V.85(2). P.413-441.

164. Swansson W., Roth T.L., Wildt D.E. In vivo embryogenesis, embryo migration and embryonic mortality in the domestic cat // Biol. Reprod. 1994. V. 51. P. 452-464.

165. Tauson A-H. Gustafsson H. Effect of flushing on embryos and early developmental stages in mink (M. vison) //Acta Agricult. Scandinavia. Sect. A. Anim. Sci. 1994. V. 44. P.43-49.

166. Viebahn C. Epithelio-methenhimal transformation during formation of the mesoderm in the mammalian embryo//Acta Anat. 1995c. V. 154. P. 79-97.

167. Viebahn C., Mayer B., Hrabe de Angelis M. Signs of the principal body axes prior to primitive streak formation in the rabbit embryo//Anat. Embryol. 1995b. V. 192. P. 159-169.

168. Viebahn C., Mayer B., Miething A. Morphology of incipient mesoderm formation in the rabbit embryo: a light and retrospective electron-microscopic study // Acta Anat. 1995a. V. 154. P. 99-110.

169. Whittingham D.G., Leibo S.P., Mazur P. Survival of mouse embryos frozen to 196° C and - 269°C// Science. 1972. V.178. P. 411-414.

170. Wiker S., Malter H., Wright G., et al. Recognition of paternal pronuclei in human zygotes // J. In Vitro Fert. Embryo Transf. 1990. V. 7 (1). P. 33-37.

171. Wildt D.E. Genetic resours banks for concerving wildlife species: justification, examples and becoming organized on a global basis // Anim. Reprod. Sci. 1992. V. 28. P. 247-257.

172. Wildt D.E. Reproductive research in conservation biology: priorities and avenues for support // J. Zoo and Wildlife Medicine. 1989. V. 20(4). P. 391-395.

173. Wildt D.E., Monfort S., Donoghue A.L. et al. Embryogenesis in conservation biology or, how to make en endangered species embryo // Theriogenology. 1992. V. 37(1). P. 161-183.

174. Willey L.M., Jie-Xin W., Harari I. et al. Epidermal growth factor receptor mRNA and protein increas after the four-cell preimplantation stage in murine development // Dev. Biol. 1992. V. 149. P. 247-260.

175. Wilmut I., Hooper M.L., Simons J.P. Genetic manipulation on mammals and its application in reproductive biology//J. Reprod. Fert. 1991. V. 92. P. 245-249.

176. Wilmut I., Schnieke A.E., McWhir J., Kind A.J., Campball K.H.S. Viablle offspring derived from fetal and adult msanmalian cells //Nature 1997. V. 385. P. 810-813.

177. Wright G., Wiker S., Eisner C., et al. Observation on the morphology of pronuclei and nucleoli in human zygotes and implications for cryopreservation//Hum. Reprod. 1990. V. 5 (1). P. 109-115.

178. Yanagimachi R. Mechanisms of fertilization in mammals // In: Mastroianni L. Jr., Biggers I.D. (eds.) Fertilization and embryonic development in vitro. New York: Plenum Press. 1981. P. 81-183.

179. Zeilmaker G.H. Fusion of rat and mouse morulae and formation of chimeric blastocysts // Nature. 1973. V. 247. P. 4073-4088.

180. Абрамов М.Д., Уткин Л.Г. Сверхоплодотворение у норок // Кролиководство и Звероводство. 1965. Т. 12 (5-6)

181. Автандилов Г.Г. Морфометрия в патологии. М: "Медицина". 1977. С. 248.

182. Авцын А.П., Шахлемов В.А. Ультраструктурные основы патологии клетки. М: "Медицина" 1979. 317 Сл

183. Александрова О.А. Исследование внутриядерных телец и кариосферы у двух видов жуков-чернотелок//Автореф. насоиск. уч. ст. к.б.н. С-П. 1997. С. 26.

184. Амстиславский С.Я., Кривохарченко А.С., Ротт Н.Н. Создание генетических криобанков и использование методов биологии развития как способ сохранения редких видов животных. III. Проблемы и перспективы. // Онтогенез. 1997а. Т. 28(6). С. 412-420.

185. Амстиславский С.Я., Максимовский Л.Ф., Зудова Г.А. и др. Суперовуляция, вызванная введением ГСЖК у куницеобразных//Онтогенез. 1997b. Т. 28(5). С. 359-366.

186. Амстиславский С.Я., Максимовский Л.Ф., Терновская Ю.Г. и др. Особенности биологии размножения и развития зародышей у горностая (М. erminea) II Зоол. Ж. 1994. Т. 73(1). С. 124131.

187. Баевский Ю.Б. Некоторые особенности эмбриональной диапаузы у норки // ДАН СССР. 1961. Т. 139(2). С. 499-502.

188. Баевский Ю.Б. Об эмбриональной диапаузе соболя // ДАН СССР. 1955. Т.105(4). С.866-869.

189. Баевский Ю.Б. Эмбриональная диапауза млекопитающих и ее эволюционное значение // Темп индивидуального развития животных и его изменения в ходе эволюции Емельянов С.В. (ред.) М:"Наука". 1968. С. 129-175.

190. Белоус A.M., Грищенко В.И., Паращук Ю.С. Криоконсервация репродуктивных клеток. Киев: Наукова Думка. 1986. 208 С.

191. Беляев Д.К., Евсиков В.И. Матыско Е.К. Генетика плодовитости животных. Сообщение 3: Эффект моногибридного гетерозиса на плодовитость и жизнеспособность норок и перспективы его использования в селекции // Генетика. 1972. Т. 8(1). 62-70.

192. Беляев Д.К., Исакова Г.К., Евсиков В.И. Генетика плодовитости животных животных. Сообщение * VI. Гетероплоидия в эмбриогенезе и ее роль в снижении плодовитости норок // Генетика. 1978. Т. 14(2). С. 242-249.

193. Беляев Д.К., Перельдик Н.М., Портнова Н.Т. Экспериментальное сокращение периода эмбрионального развития соболей (Martes zibeîina) // Ж.О.Б. 1951. T. 12(4). С.260-265.

194. Беляев Д.Л., Исакова Г.К. Спонтанные химеры в раннем в раннем постнатальном периоде у норок//Генетика. 1983. Т.19(9). С.1539-1544.

195. Бернацкий В.Г. Продолжительность беременности у американской норки в зависимости от даты покрытия и окраски // Проблемы пушного звероводства и кролиководства. Научн. Труды НИИ ПЗиК. М:1983. Т.29. С.93-100.

196. Бернацкий В.Г. Длительность беременности норок в зависимости от времени спаривания, возраста и цветового типа // М: Научн. Тр. НИИ ПЗиК. 1983. Т. 29. С. 93-100.

197. Бернацкий В.Г., Носова Н.Г. Многократное оплодотворение у норок // Нуч. Докл. Высш. Школы Биол. Наук. 1976. № 6. С. 74-77.

198. Бернацкий В.Г., Ромбе С.М., Носова Н.Г., и др. Оплодотворяемость норок при искусственном осеменении с гормональным стимулированием овуляции // Проблемы пушного звероводства и кролиководства. Научн. Труды НИИ ПЗиК. М:1974. 146-151.

199. Боннэ Г. "Основашя эмбрюлогии домашних животных". Архивъ Ветеринарныхъ Наукъ. С-Петербургь:, 1898. С. 276.

200. Борхсениус С.Н., Чернова O.A. Микоплазмы: молекулярная и клеточная биология, патогенность, диагностика. Л: "Наука". 1989. !27 С.

201. Бычкова H.A. Морфологическая и гистохимическая характеристика плаценты американской норки // Архив Анатомии, Гистологии и Эмбриологии. 1974. Т. 61 (8). С. 95-98.

202. Вагин Ю.В. Внутриутробная селекция зародышей норок и факторы, определяющие ее направление и интенсивность // ДАН СССР. 1983. Т. 273(4). С. 997-1000.

203. Галанцев В.П., Тулеева Е.Р. Эволюция лактации. "Наука". Л.1987. 120 С.

204. Граков H.H. Лесная куница "Наука". М:1981. 110 С.

205. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих // "Наука". Л: 1988. 228 С.

206. Евсиков A.B. Регуляторные механизмы доимплантационного морфогенеза мыши // Биополимеры и клетка. 1997. Т. 13. N.2.

207. Евсиков В.И. Генетико-эволюционные аспекты проблемы гомеостаза плодовитости млекопитающих (на примере норок) // Генетика. 1987. Т. 23(6). С. 988-1003.

208. Евсиков В.И. Генетические и онтогенетические основы регулирования плодовитости млекопитающих // Дисс. на соиск. уч. ст. д.б.н., Новосибирск: ИЦГ СО АН СССР. 1974. С. 340.

209. Евсиков В.И. Некоторые вопросы генетики норки (Mustela vison, Schreb.) II Дисс. на соиск.уч.ст.к.б.н. Новосибиирск: ИЦГ СО АН СССР. 1965. С. 120.

210. Евсиков В.И., Беляев Д.К. Генетический синтез норок новых окрасок и перспективы их племенного использования//Генетика. 1970. Т. 6(4). С. 155-164.

211. Жданова Н.С., Урженко A.B., Градов A.A. Получение и хромосомный анализ устойчивых к 5-бромдезоксиуридину клеток клональной культуры американской норки // Цитология. 1983. Т. XXV (2). С. 177-181.

212. Железова А.И., Голубица А.Н. Трансплантация бластоцист у норки // ДАН АН СССР. 1978. Т. 238(3). С. 462-466.

213. Железова А.И., Секирина Г.Г. Культивирование in vitro и трансплантация зародышей норки (Mustek vison) //ДАН АН СССР. 1982. Т. 264(3). С. 715-717.

214. Жемкова З П. О гемохориальном типе плаценты норки (gústela vison) // ДАН СССР. 1963. Т. 149 (2). С. 475-477.

215. Зеленин A.B., Кущ A.A., Прудовский И.А. Реконструированная клетка//М:Наука. 1982. С. 205.

216. Зыбина Е.В. Цитология трофобласта. Л. : Наука, 1986. 190 с.

217. Зыбина Е.В., Зыбина Т.Г., Железова А.Н., и др. Клетки трофобласта серебристо-черной лисицы: их особенности и полиплоидизация//Цитология. 1989. Т. 31(4). С. 492-495.

218. Зыбина Е.В., Зыбина Т.Г., Исакова Г.К, и др. Полиплоидные митозы в клетках трофобласта норки//Цитология. 1994. Т. 36(8). С. 869-879.

219. Зыбина Е.В., Зыбина Т.Г., Исакова Г.К., и др. Полиплоидия и политения в клетках трофобласта норки//Цитология. 1992. Т. 34 (11/12). С. 55-59.

220. Иванов П.П., Общая и сравнительная эмбриология. М-Л: ОГИЗ-БИОМЕДГИЗ. 1937. С. 809.

221. Исакова Г.К. Кариологический анализ ранних зародышей норок // Генетика. 1983. Т. 19(10). С. 1742-1743.

222. Исакова Г.К. Монохориальные близнецы у норок // 2 Всес. Конфер. Цитоген. Сельскохоз. Животн. Ленинград, Пушкин. 1988. Л: ИЦ АН СССР. 1989. С. 90-92.

223. Исакова Г.К., Жоголева H.H. О цитологических механизмах, лежащих в основе роста диапаузных бластоцист норки//ДАН. 1996. Т. 347(6). С.825-827.

224. Исакова Г.К., Жоголева H.H. Активность эмбрионального генома норки во время диапаузы (цитогенетический анализ). Число клеток и размер клеточных ядер в бластоцистах разного размера и возраста//Генетика. 1997. Т. 33(6). С. 822-830.

225. Исакова Г.К., Зыбина Т.Г., Зыбина Е.В. Политения в клетках доимплантационных зародышей норок // Доклады Академии наук России. 1992. Т. 326 (5). С. 900-902.

226. Категории МСОП для внесения видов в Красную Книгу. Подготовлено Комиссией по выживанию видов МСОП (SSC/IUCN). Одобрено на 40-м заседании МСОП, Швейцария, Гланд. 30.11.1994. "ЭкоЦентр". Караганда: 1997. 22 с.

227. Кауффолд П., Тамм И., Шихов И.Я. Оценка качества эмбрионов крупного рогатого скота // М. Агропромиздат. 1990. С. 55.

228. Кизилова Е.А., Амстиславский С.Я., Байбородин С.И., и др. Пенетрация эмбрионов in vivo как одна из причин предимплантационных потерь у крысы, американской норки и хорька //

229. Консервация генетических ресурсов. Материалы 15 рабочего сов. (Пущино, 13-15.10.1998). Ред. Гахова Э.Н., Карнаухова В.Н., Утешева В.К. Пущино: ИБК РАН. 1998. С. 160-162.

230. Кикнадзе И.И. Изменение ядерных структур в оогенезе норки // Цитология 1966. Т. 8(3). С. 384387.

231. Кикнадзе И.И., Зыбина Т.Г., Зыбина Е.В. и др. Особенности структуры ядра и формирования кариосферы в оогенезе норки // Цитология 1980. Т. 22(2). С. 127-133.

232. Кисели Д. Практическая микротехника и гистохимия. Будапешт: "Academia Kiado". 1962. С. 399.

233. Колповский В.М. Желточный мешок у американской норки (Mustela vison) II Архив Анатомии, Гистологии и Эмбриологии. 1975. Т. 68(2). С. 57-68.

234. Колповский В.М. Морфология яичников при беременности у норки (Mustela vison) // Зоол. Ж. 1978. Т. 57.,С. 1860-1869.

235. Колповский В.М. Периоды эмбрионального развития Mustela vison Briss (Carnivore) // 1 Междунар. Конгресс по млекопит. 6-12.06.1974. М: ВИНИТИ. 1974. Т. 1. С. 284.

236. Колповский В.М. Положение зародышей американской норки в плодной камере на ранних стадиях развития // Архив Анатомии, Гистологии и Эмбриологии. 1976. Т. 71(10). С. 46-51.

237. Максимовский Л.Ф., Амстиславский С .Я., Голубица А.Н. и др. Доимплантационное развитие зародышей двух видов млекопитающих из семейства куницеобразных (Mustela erminea, M. vison) //Онтогенез. 1994. T. 25(1). С. 45-51.

238. Максимовский Л.Ф., Кизилова Е.А., Железова А.И. и др. Взаимодействие гомотипических и гетеротипических стволовых клеток с развивающимися зародышами // Онтогенез 1998 т29(2) 96103.

239. Маресин В. М. Пространственная организация эмбриогенеза. Москва: "Наука". 1990. С. 168.

240. Методы биологии развития. М: "Наука". 1974. С. 467-469.

241. Миронов A.A., Комисарчик Я.Ю., Миронов В.А. Методы электронной микроскопии в биологии и медицине. "Наука" Санкт-Петербург: 1994. С. 399.

242. Мошонкин H.H. Репродуктивный цикл самок европейской норки (Lutreola lutreola) Н Зоол. Ж. 1983. T. LXII (12). С. 1879-1883.

243. Никитин В.А. Техника изготовления микроинструментов для исследования клеток под микроскопом. АН СССР НЦБИ Пущино. !987. С. 122.

244. Обозная Э.И., Пушкарь Н.С., Макарова О.П. и др. Цитохимия замороженой клетки. Киев : Наукова думка. 1981. 174 с.

245. Павлюченко В.М., Уткин Л.Г., Григорьев М.Ю. и др. Клеточное разведение соболей. "Колос" М-.1979. 184 С.

246. Парфенов В.И. Преобразование ядерных структур в оогенезе некоторых позвоночных (к вопросу о морфогенезе капсулы кариосферы) // Автореф. насоиск. соиск. уч. ст. д.б.н. С-П. 1995. С. 48.

247. ПЕРЕЧЕНЬ (СПИСОК) ОБЪЕКТОВ ЖИВОТНОГО МИРА, ЗАНЕСЕННЫХ В КРАСНУЮ КНИГУ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ (по состоянию на 1 ноября 1997 г.). Приказ Госкомэкологии от19.12.1997.

248. Пратт X. Эксперименты с предимплантационными зародышами мыши // В кн. "Биология развития млекопитающих. Методы". М: Мир. 1990. С. 27-63.

249. Ромейс Б. Микроскопическая техника. "Иностранная литература". Москва: 1954. С. 711.

250. РоскинГ.И. Микроскопическая техника. "Советская наука". Москва: 1951. С. 447.

251. Ротт H.H. Межвидовые пересадки зигот у млекопитающих // Онтогенез. 1987. Т. 18(1). С. 5-11.

252. Ротт H.H. Создание генетических криобанков и использование методов биологии развития как способ сохранения редких видов животных. I. Криоконсервация спермы диких млекопитающих // Онтогенез. 1995. Т. 26(4). С. 270-281.

253. Ротт H.H. Создание генетических криобанков и использование методов биологии развития как способ сохранения редких видов животных. II. Получение и криоконсервация зародышей диких млекопитающих// Онтогенез. 1996. Т. 27(4). С. 245-255.

254. Ротт H.H., Вепринцев Б.Н. Экспериментальные и теоретические предпосылки для решения проблем сохранения генофонда животных методом консервации // Успехи Совр. Биол. 1981. Т. 91. С. 451-466.

255. Секирина Г.Г., Железова А.И., Конописцева Л.А. Культивирование in vitro ранних зародышей норки // ДАН СССР. 1981. Т. 259 (4), С. 977.

256. Семенов В.В., Китаев Э.М., Зеленина Н.В. Ультраструктура яйцеклеток крыс при индукции суперовуляции//Цитология. 1986. Т. 28 (11). С. 1259-1261.

257. Серов В.В., Пауков B.C. Ультраструктурная патология. "Медицина". М: 1975.

258. Сидорович*В.Е. Норки, выдра, ласка и другие куньи. "Ураджай". Минск: 1995.

259. Сукоян М.А. Получение и характеристика линий эмбриональных стволовых клеток американской норки (Mustela vison) II Дисс. на соиск. уч. степ. к. б. н. ИЦГ СО РАН Новосибирск: 1997. С. 74.

260. Сьяксте Н.И. Изменение макромолекулярного состава и организации клеточного ядра при гамето-, эмбрио- и гистогенезе // Онтогенез. 1993. Т. 24(6). С. 5-21.

261. Терновский Д.В. Биология куницеобразных (Mustelidae). "Наука". Новосибирск: 1977. 279 С.

262. Терновский Д.В., Терновская Ю.Г. Экология куницеобразных. "Наука". Новосибирск: 1994. 220 С.

263. Трут Л.Н., Голубица А.Н. Трансплантация бластоцист у серебристо-черной лисицы // ДАН АН СССР. 1980. Т. 249(2). С. 471-473.150

264. Туманов И.Л. О потенциальной полиэстричности некоторых видов куньих // Зоол. Ж. 1977. Т.56(4). С. 619-625.

265. Туркевич Н.Г. Реконструкция микроскопических объектов по гистологическим срезам . М: "Медицина". 1967. С. 175.

266. Фечхеймер Н.С., Исакова Г.К., Беляев Д.К. Механизмы спонтанного возникновения диплоид-триплоидного химеризма у норок (Mustela vison) и кур (Gallus domesticus) II Генетика. 1984. T. 20(12). С. 2048-2054.

267. Шилов А.Г. К методике окрашивания полутонких срезов фиксированного осмием залитого в эпон материала // Вопросы теоретической и прикладной генетики. Новосибирск. 1976. С. 22.

268. Эванс Е.П. Кариотипирование и определение пола гамет, эмбрионов и плодов, гибридизация хромосом // В кн. "Биология развития млекопитающих. Методы". М: Мир. 1990. С. 125-151.

269. Юрченко Т.Н., Козлова В.Ф., Скорняков Б.А., Строна В.И., Регин Н.В. Влияние криопротекторов на биологические системы. "Наукова Думка". Киев : 1989. С. 239.152