Изучение рецептор-опосредуемого трансгенеза в клетки эмбрионов млекопитающих доимплантационных стадий развития и анализ ДНК трансгенных животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Иванова, Маргарита Михайловна

• Иванова, Маргарита Михайловна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Иванова, Маргарита Михайловна

Оглавление с.

Принятые сокращения

ВВЕДЕНИЕ

Глава I Обзор литературы

1.1 Краткое описание основных этапов эмбриогенеза

млекопитающих

1.1.1. Доимплантационные стадии развития

1.1.3. Происхождение различных тканей

1.1.4. Активация генома зародыша

1.2. Трансгенные животные

1.2.1. Использование трансгенных животных

1.2.2. Эффективность получения трансгенных животных

1.2.3. Методы получения трансгенных животных

1.2.3.1. Метод инфирования эмбрионов ретровирусами

1.2.3.2. Метод введения чужеродного гена в эмбрионы посредством микроинъекций

1.2.3.3. Использование эмбриональных стволовых клеток

1.2.3.4. Использование липосом

для получения трансгенных животных

1.2.3.5. Метод высокоскоростной механической инъекции

1.2.3.6. Сперматозоиды-как вектор для получения трансгенных животных

1.3. Транспорт ДНК в клетку с помощью

рецептор-опосредуемого эндоцитоза

1.3.1. Рецептор-опосредуемый эндоцитоз

1.3.2. Введение ДНК в клетки с помощью рецептор-опосредуемого эндоцитоза

1.3.3.Транспорт чужеродной ДНК методом рецептор-опосредуемого трансгенеза in vivo

Глава 2 Материалы и методы

2.1. Материалы

2.1.1. Лабораторные животные

2.1.2. Вирусы и бактериальные штаммы

2.1.3.Плазмидные вектора

2.1.4.Ферменты и другие реактивы

2.2. Методы

2.2.1. Синтез конструкций

2.2.2. Получение животных с датированным сроком беременности

2.2.3. Извлечение эмбрионов

2.2.4. Видео-интенсификационная микроскопия

2.2.5. Проведение трансфекции in vitro

2.2.6. Культивирование эмбрионов

2.2.7. Трансфекция эмбрионов кролика и овцы

2.2.8. Введение конструкций с помощью внутриматочного зонда

2.2.9. Введение конструкций с использованием полостной операции

2.2.10. Выделение ДНК из эмбрионов доимплантационных стадий развития

2.2.11. Выделение ДНК из эмбрионов постимплантационных стадий развития

2.2.12. Синтез и последовательность праймеров для ПЦР

з

2.2.13. Анализ ДНК методом ПЦР

2.2.14. Гибридизация синтезированных ПЦР продуктов

2.2.15. Блот-гибридизационный анализ

Глава 3. Результаты исследований

3.1. Изучение транспорта конструкций в эмбрионы млекопитающих на доимплантационных стадиях развития

3.1.1. Анализ транспорта конструкций в эмбрионы методом видео-интенсификационной микроскопии

3.1.2. Выживаемость эмбрионов доимплантационных стадий развития после культивирования с конструкцией

3.1.3. Анализ транспорта конструкции в процессе развития эмбрионов доимлантационных стадий

3.1.3.1. Подбор оптимальных условий для анализа эмбрионов методом ПЦР

3.1.3.2. Анализ включения аденовируса в состав конструкций

3.1.3.3. Транспорта конструкции при

введении ДНК большого размера

3.1.3.4. Зависимость эффективности трансгенеза конструкции от

стадии развития

3.1.3.5. Введение чужеродного генетического материала в составе конструкции

в эмбрионы овцы

3.2. Рецептор-опосредуемый транспорт р01_2С\/ в эмбрионы до имплантационных стадий развития

in vivo

3.2.1.Введение конструкции рС1_2С\/-(инсулин-р1_)-(стрептавидин-р1_)- Ad5neo

3.2.2.Введение конструкции р01_2С\/(5нМ)-(инсулин-р1_)-(стрептавидин-р1_)-СЕЮ

3.2.3.Введение конструкции pGL2CV(0,4HM)-(HHcynnH-pL)-(стрептавидин-рЦ-СЕЮ

3.3. Рецептор-опосредуемый транспорт pCMVLaLuc in vivo

3.3.1.Введение конструкции рСМ\/1_а1_ис(2нМ)-(инсулин-р1-)-(стрептавидин-р1_)-СЕ1_0

3.3.2. Введение конструкции рСМ\/1_а1_ис(0,66нМ)-(инсулин-р|_)-(стрептавидин-р|_)-СЕ1_0

3.3.3. Введение конструкции рСМ\/1_а1_ис--(инсулин-р1_)-(стрептавидин-р1_)-Е0376

3.4. Введение конструкции с линейной формой плазмиды

3.5. Влияние введения конструкции in vivo на течение беременности

Глава 4. Обсуждение результатов

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Принятые сокращения. Ас1- аденовирус

ВИМ - видео-интенсификационная микроскопия

ДНК- дезоксирибонуклеиновая кислота

мРНК- матричная РНК

н.- нуклеотид

р-плазмида

р1_ - полилизин

п.н.- пара нуклеотидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

РНК - рибонуклеиновая кислота

трис - трис-гидроксиметиламинометан

т.п.н. - тысяча пар нуклеотидов

ЭДТА - эти ленд иаминтетраацетат

Айбпео - дефектный аденовирус 5, содержащий ген

неомицинтрансферазы СЕЮ - аденовирус птиц РА\/

Е08-76-утиный аденовирус (синдром снижения яйценоскости)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение рецептор-опосредуемого трансгенеза в клетки эмбрионов млекопитающих доимплантационных стадий развития и анализ ДНК трансгенных животных»

ВВЕДЕНИЕ.

I. Актуальность проблемы.

Создание трансгенных животных привело к интенсивному развитию в течении последних 15 лет нового направления в биотехнологии - эмбриоинженерии, базирующегося на достижениях молекулярной биологии, генной инженерии, эмбриологии. В настоящее время созданы линии трансгенных лабораторных и сельскохозяйственных животных, которые используются как продуценты некоторых биологически активных веществ в фармакологии, в качестве моделей для изучения различных заболеваний и в других областях биотехнологии.

Для получения трансгенных животных сейчас наиболее широко применяют такие технологии, как микроинъекция в пронуклеус зиготы, использование рекомбинантных ретровирусных векторов, липосомы, эмбриональные стволовые клетки. Но несмотря на значительные успехи данных методов в получении трансгенных животных, проблема низкой выживаемости эмбрионов, составляющей 10-20%, низкой эффективности переноса и интеграции чужеродного генетического материала, составляющей 0,2-5%, при высокой трудоемкости методов не решена и сегодня. Особенно актуален вопрос об эффективности существующих технологий переноса чужеродного генетического материала в эмбриональные клетки при получении трансгенных сельскохозяйственных животных, так как эмбрионы коров, овец, свиней не обладают прозрачной цитоплазмой и для определения локализации пронукпеусов перед микроинъекцией необходимы специальные предварительные манипуляции с зиготами. Кроме того, следует учитывать

большие материальные затраты при получении трансгенного животного: например, стоимость трансгенного теленка достигает 500.000 $.

Поэтому одна из задач современной генной эмбриоинженерии - создание метода, позволяющего снизить трудоемкость процесса введения чужеродной ДНК в эмбриональные клетки млекопитающих доимплантационных стадий развития.

2. Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы являлась разработка и изучение нового метода переноса чужеродного генетического материала в эмбриональные клетки, основанного на использовании механизма рецептор-опосредуемого эндоцитоза, позволяющего снизить трудоемкость способа доставки чужеродной ДНК, а также в изучении возможности вводить различный генетический материал в составе ДНК-переносящей конструкции на основе применения одних и тех же компонентов.

В процессе работы предстояло решить следующие задачи:

' 1. Разработать способ позволяющий использовать рецептор-опосредуемый эндоцитоз для введения чужеродного генетического материала в эмбриональные клетки млекопитающих in vitro.

2. Определить эффективность трансгенеза с помощью ДНК-переносящей конструкции в эмбрионы млекопитающих доимплантационных стадий развития in vitro.

3. Разработать способы доставки ДНК-переносящей конструкции в эмбрионы мышей доимплантационнных стадий развития, не извлекая их из организма беременной самки.

4. Проанализировать состояние введенного чужеродного генетического материала в геноме эмбрионов на разных стадиях эмбриогенеза и у новорожденных.

Научная новизна и практическая значимость.

Методом рецептор-опосредуемого трансгенеза было получено 24 эмбриона мыши постимплантационных стадий развития и один новорожденный с перенесенной чужеродной ДНК.

Впервые было показано, что рецептор-опосредуемый транспорт чужеродного генетического материала может быть применен не только для трансгенеза соматических клеток и тканей, но и для эмбрионов млекопитающих первых дней жизни.

Показана высокая эффективность транспорта ДНК-переносящей конструкции в эмбрионы мышей, кроликов на стадиях зиготы, 2-бластомеров, морулы и бластоцисты, и в эмбрионы овец на стадии морулы.

Установлено, что ДНК-переносящая конструкция не является токсичной для эмбрионов и выживаемость составляет 70%-90%, как и у контрольных животных, при культивировании in vitro.

Показано, что включение в состав ДНК-переносящей конструкции аденовирусов, способствующих выходу ДНК из эндосом, значительно облегчает процесс доставки генетического материала к ядру эмбрионов доимплантационных стадий развития .

Проведенные эксперименты показали возможность получения трансгенных животных непосредственно при введении ДНК-переносящей конструкции в организм беременной самки за счет транспорта чужеродного

генетического материала в эмбрионы в полости организма, что, соответственно, повышает выживаемость эмбрионов.

Работа представляет не только научный, но также имеет практический интерес, так как разработанный метод доставки чужеродного генетического материала в эмбрионы, использующий механизм рецептор-опосредуемого эндоцитоза, может быть в дальнейшем использован для введения рекомбинантого гена в эмбрионы сельскохозяйственных животных.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Иванова, Маргарита Михайловна

выводы.

1. Впервые показано, что с помощью рецептор-опосредуемого эндоцитоза возможен эффективный транспорт чужеродной ДНК в эмбрионы млекопитающих доимплантационных стадий развития in vitro.

2. Показана высокая эффективность транспорта ДНК-переносящей конструкции в эмбрионы мышей, кроликов на стадии зигота, морула, и в эмбрионы овец на стадии морула (80-90%). ДНК-переносящая конструкция не токсична для эмбрионов, выживаемость составляет 70%-90%, в то время как выживаемость эмбрионов при культивировании in vitro в среде М16 80%-98%.

3. Впервые показана возможность использования рецептор-опосредуемого трансгеноза в эмбрионы мышей доимплантационных стадий развития in vivo без извлечения эмбрионов из репродуктивных органов самки.

4. С использованием рецептор-опосредуемого трансгеноза получены трансгенные эмбрионы мышей разных стадий развития (от 8 до 19 дней), а также новорожденное трансгенное животное. С помощью ПЦР-амплификации и блот-гибридизации показано наличие чужеродной ДНК в геноме трансгенных животных на разных стадиях развития.

5. Показано, что трансгенные эмбрионы разных стадий эмбриогенеза и новорожденный, полученные в результате рецептор-опосредуемого трансгеноза, содержат в клетках чужеродную ДНК как в эписомальной форме, так и в интегрированном с клеточной ДНК состоянии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Иванова, Маргарита Михайловна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ.

1. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. «Мир». Москва. Т. 1 стр 410-417.

2. ГловерД. Клонирование ДНК. Методы. 1988.

3. Пратт X. Эксперименты с предимплантационными эмбрионами мыши.// Биология развития млекопитающих. Методы. Ред. Манк М. Москва. 1990. с. 28-38.

4. Соболев А.С., Розенкранц АА, Никитин В.А. Способ генетической трансформации молочной железы животного и устройство для введения генетического материала в молочный проток молочной железы животного.// Патент. RU2025487, C12N. A61D. 1994.

5. Соболев А.С., Розенкранц А.А., Иванова М.М., Смирнова О.А., Никитин В.А., Народицкий Б.С., Эрнст Л.К. Способ получения трансгенных животных.// Патент. С 12N. МКИ 5. А01К67/00. 1996.

6. Al-Shawi R., Ansell J.D., Bishop J.O., Simons J.P., West J.D. Failure to produce transgenic mice by exposing to spermatozoa to DNA.// Mouse Genome. 1990. V. 86. P.224.

7. Bach F. and Fineberg H.V. Last chance to stop and think on risks of xenotransplants.// Nature 1998. V. 391. P. 320-326.

8. Bachiller D., Schellander K., Peli J., Ruther U. Liposome -mediated DNA uptake by sperm cells. // Mol. Reprod. Dev. 1991. V. 30. P. 194-200.

9. Berns A.J., Krimpenfort P.J. Transgenic mice depleted in mature T-cells and methods for making transgenic mice.// Patent. Gl. 5175384. A1. 688546. NL. 1993.

10. Brem G. Inheritance and tissue-specific expression of transgenesinrabbits and pigs.11 Mol. Reprod. Dev. 1993. V36. P 242-244.

Bolin S.R., Turek J.J., Runnels L.J., Gustafson D.P. Pseudorabies virus, porcine parvovirus, and porcine enterovirus interactions with the zona pellucida of the porcine embryo. // J. Vet. Res. 1984 V.44. P. 36-44.

12. Bowen R.A., Reed M.L., Schnieke A., Seidel G;E., Stacey A., Thomas W.K., Kajikawa O. Transgenic cattle resulting from biopsied embryos : expression of c-ski in a transgenic calf. // Biol. Reprod. 1994. V. 50. P. 664-668.

13. Braskett B.G., Baranska W., sawicki W., Koprowski H. Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and its transfer to ova through fertilization.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1971. V. 68. P. 353-357.

14. VBrem G., Besenfelder U., Aigner B., Muller M., Liebl I., Schutz G., Montoliu L. YAC transgenesis in farm animals: rescue of albinism in rabbits.// Mol. Reprod. Dev. 1996. V. 44. P. 56-62.

15. Brenin D.R., Talamonti M.S., lannaccone P.M. Transgenic technology: an overview of approaches useful in surgical research.// Surg. Oncol. 1997. V. 6. P. 99-110.

16. Brinegar C.,Gilmore J., Johnson M., Walker N. Methods and apparatus for ice-medicated introduction of substances into biological material in a non-lethal manner.// Patent. WO 9201802 A1 920206, 1992.

17. Brinster R. L. , Chen H. Y., Trumbuer M., Senear A. W., Palmiter R. D. Somatic expression of herpes thymidine kinase in mice following injection of a fusion gene into eggs.// Cell. 1981. V. 27. P. 223-231.

18. Brinster R. L., Chen H. Y., Warren R., Sarthy A., Palmiter R. D. Regulation of mettallothionein-thymidinekinase fusion plazmids injected into mouse eggs. // Nature. 1982. V. 296. P. 39-42.

19. Brinster R. L., Chen H. Y., Messing A., Van Dyke T., Levine A. J., Palmiter R. D. Transgenic mice harboring SV 40 T-antigen genes develop characteristic brain tumors.// Cell. 1984. V.37. P.359-365.

20. Brinster R. L., Chen H. Y., Trumbauer M. E., Yagle M. K., Palmiter R. D. Factors affecting the efficiency of introducing foreign DNA into mice by microinjecting eggs.// Proc. Nat. Acad. USA . 1985. V. 82. P. 438-442.

21. Brinster R.L., Sandgren E.P., Behringer R.R., Palmiter R. D. No simple solution for making transgenic mice. // Cell. 1989. V. 59. P. 239-241.

22. Bris-Lawrie K.A. and Temin H.M. Recent advances in retrovirus vector technology.// Cur. Opin. Gen. Dev. 1993. V 3. P.102-109.

23. Bolin S.R., Turek J.J., Runnels L.J., Gustafson D.P. Pseudorabies virus, porcine parvovirus, and porcine enterovirus interactions with the zona pellucida of the porcine embryo.// Am. J. Vet- Res. 1983. V. 44 P.1036-1039.

24. Burwen S.J., Jones A.L. The association of polypeptid hormones and growth factors with the nuclei of target cells.// Trends Biochem. Sci. 1987. V. 12. P. 159-162.

25. Canceco R.S., Sparks A.E., Page R.L., Russel C.G., Johnson J.L., Velander W.H., Pearson R.E., Drohan W.N., Gwazdauskas F.C. Gene transfer efficiency during gestation and the influence of co-transfer of non-manipulation embryos on production of transgenic mice.// Transgenic Rec. 1994 V. 3. P. 20-25.

26. Chada K., Magram J., Raphael K., Radice G., Lasy T., Constantini F. Specific expression of a foreign beta-globin gene in erythroid cells of transgenic mice.// Nature. 1985. V.314. p. 377380.

27. Chan P., Su B.C., Tredway D.R., Seraj M., Seraj I.M., King A. Uptake of exogenous human papilloma virus L1 DNA by oocytes and detection by the polymerase chain reaction. //J. Assist. Reprod. Genet. 1992. V. 9 P.531-533.

28. Chardonnet Y., Dales S. Early events in the interaction of adenoviruses with HeLa cells. I. Penetration of type 5 and intracellular release of the DNA genome. //Virology. 1970. V. 40 P.462-477.

29. Chen S.S. and Wrathall A.E. The importance of the zona pellucida for disease control in livestock by embryo transfer.// Br. Vet. J. 1989. V. 145 P. 129-140.

30. Cibelli J.В., Stice S.L., Golueke P.J., Kane J.J., Lerry J., Blackwell C., Ponce de Leon F.A., robl J.M. Cloned transgenic calves produced from nonquiescent fetal fibroblasts.// Science. 1998. V.280(5367). P. 1256-1258.

31. Cook D.R., Maxwell I.H., Glode L.M., Maxmell F., Stevens J.O., Purner M.B., Wagner E., Curiel D.T., Curiel T.J. Gene therapy for B-cell lymphoma in a SCID mouse model using an immunoglobulin - regulated diphtheria toxin gene delivery by a novel adenovirus-polylysine conjugate. // Cancer Biother. 1994. V. 9. P. 131-141.

32. Cotten M., Wagner E., Zatloukal K., Phillips S., Curiel D. Т., and Birnsteil M.L. High-efficiency receptor-mediated delivery of small and large (48 kilobase) gene constructs using the endosome disruption activity of defective or chemically inactivated adenovirus particles.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. V. 89. P. 6094-6098.

33. Cotten M., Wagner E., Birnstiel M.L. Receptor mediated transport of DNA into eukariotic cells.// In Methods in Enymology. 1993. V£17. P.618-644.

34. Cotten M., Wagner E., Zatloukal K., Birnsteil M. L. Chicken adenovirus (CELO) particles augment receptor-mediated DNA

delivery to mammalian cells and yield exceptional levels of stable transformation.//J. Virol. 1993. V.67. P.3777-3785.

35. Cotten M . Adenovirus-augment, receptor mediated gene delivery and some solution to the common toxity problems.// Curr Top Microbiol Immunol 1995 (Pt 3) P.283-295.

36. Cristiano R. J., Smith L.C. and Woo S.L. Hepatic gene therapy: adenovirus enhancement of receptor -mediated gene delivery and expression in primary hepatocytes.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. V. 90. P. 2122-2126.

37. Cristiano R.J., Smith L.C., Kay M.A., Brinkley B.R., Woo S.L. Hepatic gene therapy: efficient gene delivery and expression in primary hepatocytes utilising a conjugated adenovirus-DNA complex.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. V. 90. P. 11548-11552.

38. Curiel D.T., Aqarval S., Wagner E., Cotten M. Adenovirus enhancement of transferrin-polylysine-rriediated gene delivery.// Proc. Natl. Acaid. Sci. USA 1991. V.88. P.8850-8854.

39. Dalton T., Fu K., Palmiter R.D., Andrews G.K. Transgenic mice that overexpress metallothionein-l resisst dietary zinc deficiency.// J. Nutr. 1996. V. 126(4). P. 825-833.

40. Echelard Y. Recombinant protein production in transgenic animals.// Curr. Opin. Biotechnol. 1996. V.7. P.536-40.

41. Elbrecht A., DeMayo F.J., Tsai M.J., O'Malley B.W. Episomal maintenance of a bovine papilloma virus vector in transgenic mice. Il Mol. Cell. Biol. 1987. V. 7. P . 127-129.

42. Epstein P.N., Overbeek P.A. , Means A.R. Calmodulin-induced early-onset diabetes in transgenic mice. // Cell. 1989. V.58. P. 1067-1073.

43. Fender P., Ruigrock R. N.. Gout E.,Buffet S., Chroboczek J. Adenovirus dodecahedron, a new vector for human gene transfer. // Nature biotech. 1997. V. 15. P. 52-56.

in

44. First N.L. New animal breeding techniques and their application.// J Reprod. Fértil. Suppl. 1990. V.41. P.3-14.

45. Fisher K.J., Wilson J.M. Biochemical and functional analysis of an adenovirus-based ligand complex for gene transfer.// Biochem. J. 1994. V.299 P.49-58.

46. Gardner H. G. and Leese R. Non-invasive measurement of nutrient uptake by single cultured preimplantation mouse embryos.// Hun. Reprod. 1986. V1. P.25-37.

47. Gardner H. G., Kaye P. L. Insulin increases cell numbers and morfological development in mouse preimplantation embryos in vitro.//1991. Reprod. Fértil. Dev. V. 3. P 79-91.

48. Gao L., Wagner E., Cotten M., Agarwal S., Harris C., Romer M.U., Miller M., Hu p-C., Curiel D. Direct in vivo gene transfer to airway epithelium employing adenovirus-polylysine DNA complexes.// Hum. Gene. Ther. 1993. V. 4. P. 17-24.

49. Chan P.J., Su B.C., Tredway D.R., Seraj M., Seraj I.M., King A. Uptake of exogenous human papilloma virus L1 DNA by oocytes and detection by the polymerase chain reaction.// J Assist Reprod. Genet. 1992. V.9. P.531-533.

50. Gondo Y., Shioyama Y., Nakao K., Katsuci M. A novel positive detection system of in vivo mutations in rpsL (str A) transgenic mice. // Mutat. Res. 1996. V. 360. P. 1-14.

51. Gordon J. W., Scangos G.A., Plotkin DJ., Ruddle F. H. Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1980. V.77. P.7380-7384.

52. Grosscheldl R., Weaver D., Waltimor D., Constantini F. Introduction of a immunoglobulin gene into the mouse germ line : specific expression in lymphoid cells and synthy functional antibody .// Cell. 1984. V. 38. P .647-658.

53. Clegg K.V., Pico L. Poly(A) lénght, cytoplasmic adenylation, and syntesis of poly(A) + RNA in early mouse embryos.// Dev. Biol. 1983. V. 95. P.331-341.

54.Guy, J., Drabek, D., and Antoniou, M. Delivery of DNA into mammalian cells by receptor-mediated endocytosis and gene therapy.//Mol. Biotechnol. 1995. V.3. P.237-248.

55. Gwatkin R.B. Passage of mengovirus through the zona pellucida of the mouse morula. //J. Reprod. Fértil. 1967. V.13. P.577-578.

56. Harvey M.B., Leco K. J., Arcellana-Panlilio M. Y., Zhang X., Edwards D. R., Schultz . G. A. Roles of growth factors during periimplantation development. // Hum. Reprod. 1995. V. 10. P. 712718.

57. .Haskell R.E., Bowen R.A. Efficient production of transgenic cattle by retroviral infection of early embryos. // Mol. Reprod. Dev. 1995. V. 40. P. 386-390.

58. Heyner S., Rao L.V., Jarett L., Smith R.M. Preimplantation mouse embryos internalize maternal insulin via receptor-mediated endocytosis: pattern of uptake and functional correlations. //Dev. Biol. 1989. V. 134 P.48-58.

59. Hogan B., Constantini F., Lacy E. Manipulating the mouse embryo: a laboratory manual.// Coid Spring Harbor Laboratory. 1986.

60. Howlett S. K., Bolton V. N. Sequence and regulation of morhological and molecular events during the first cell cycle of mouse embryogenesis.// J. Embryol. Exp. Morphol. 1985 V. 87 P 175.

61. Innis MA, Gelfand DH, Sninsky JJ, White TJ (1990): "PCR Protocols. A guide to methods and applications." San Diego, New York, Boston, London, Sydney, Tokyo, Toronto: Academic Press, pp 1-482.

62. Jaenisch R., Jahner D., Nobis P., Simon I., Lohler J., Harbers K., Grotkopp D. Chromosomal position and activation of retroviral genomes inserted into the germ line of mice.// Cell. 1981. V. 24. P. 519-529.

63. Jaenisch R., Harbers K., Schnieke A., Lohler J., Chumakov I., Jahner D., Grotcopp D., Hoffman E. Germline integration of Moloney murine leukemia virus at the MOV13 locus leads to recessive lethal mutation and early embryonic death.// Cell. 1983. V. 32. P. 209-216.

64. Jahner D., Haase K., Mulligan R., Jaenisch R. Insertion of the bactirial gpt gene into the germ line of mice by retroviral infection. // Proc. Acad. Sci. 1985. V.82. p.6927-6931.

65. Jinghua Y., Jeffrey H. Bock, Jerry L. Slightomm, Bryant Villepontean . A 5' (3-globin matrix-attachment region and the polyoma enhancer together confer position independent transcription. II Gene. 1994. V. 132. N2 . P. 32-37.

66. Kanoh Y., Nagashima H. Introdaction of plasmid DNA (pBR322) into mouse blastocyst by pricking method .// Jpn. Anim. Reproud. 1984. V. 30. P. 49-53 (in Japanese).

67. Khillan J.S., Bao Y. Preparation of animals with a high degree of chimerism by one-step coculture of embryonic stem cells and preimplantation embryos. // Biotechniques. 1997. V. 22. P. 544549.

68. KimU. H„ Jung -Ha H.S., Lee H.T., Chung K.S. Development of a positive method for male stem cell-mediated gene transfer in mouse and pig. // Mol. Reprod. Dev. 1997. V. 46. P.515-526.

69. Klein T. M., Wolf E. D., Wu R., Sanford J. C. High velocity microprojectiles for delivering nuclei acids into living cells.// Nature. 1987. V.327. P. 70-73.

70. Krisher R.L., Gibbons J. R., Cansero R.S., Johnson J.L., Russel C.G., Notter D.R., Velander W.H., Gwazdauskas F.C.

114

Influence of time of gene microinjection on development and DNA detection frequency in bovine embryos. // Transgenic. Res. 1994. V. 3. P. 226-231.

71. Kubisch H.M., Larson M.A., Lichen P.A., Wilson J.M., Roberts K.M. Adenovirus-mediated gene transfer by perivitellin microinjection of mouse, rat, cow embryos.// Biol. Rep 1997. V.56 P. 119-124.

72. Laver W.G., Younghusband H.B., Wrigley N.G. Purification and properties of chick embryo lethal orphan virus (an avian adenovirus).// Virology 1971. V.45 P.598-614.

73. Lavilla-Apelo C., H. Kida, and H. Kanagawa. The effect of experemental infection of mouse preimplantation embryos with paramyxovirus sendai.// J. Vet. Med. Sci. 1992. V.54. P.335-340.

74. Lauria A. and Gandolfi F. Recent advances in sperm cell mediated gene transfer. // Mol. Reprod. Dev. 1993. V. 36. P. 255257.

75. Leder P., Vasicek T.J. B-cell deficent transgenic non-human animals.// Patent. WO. 9204440. A1. 920319. 1992.

76. Legge M. Oocyte and zygote zona pellucida permeability to macromolecules.// J.Exp.Zool. 1995. V. 271. P.145-150.

Lin T.P., Florence J, O J.O. Cell fusion induced by a virus within the zona pellucida of mouse eggs.// Nature. 1973. V. 242 P.47-49.

78. Li P., Bellett A.J., Parish C.R. The structural proteins of chick embryo lethal orphan virus (fowl adenovirus type 1).// J. Gen. Virol. 1984. V. 65 P. 1803-15.

79. Lin P., Clarke H.J. Somatic histone H1 microinjected into fertilized mouse eggs is transported into the pronuclei but does not disrupt subsequent preimplantation development.// Mol. Reprod. Dev. 1996. V.44. P. 185-192.

80. Masahiro S., Nrihiro Т., Reico I., Egon A. Gene introduction into mouse blastocysts via "pricking".// Mol. Reprod. Dev. V. 34. P. 349-356.

81. Mendel R. R., Muller В., Schulze J. Dei very of foreign genes to intact barley cells by high-velocity microprojectiles.// Theor . Appl. Genet. 1989. V. 78. P. 31-34.

82. Midoux P., Mendes C., Legrand A., Raimond J., Mayer R., Monsigny M., Roche A.C. Specific gene transfer mediated by lactosylated poly-L-lisine into hepatoma cells.// Nucleic. Acids. Res. 1993. V. 21. P. 871-878.

83. Mintz B. Clonal expression in allophenie mice. // Symp. Int. Soc. Cell. Biol. 1970 V. 9. P. 15.

84. Moens A., Betteridge K.J., Brunet A., Renard J.P. Low levels of chimerism in rabbit fetuses produced from preimplantation embryos microinjected with fetal gonadal cells. // Mol. Reprod. Dev. 1996. V. 43. P. 38-46.

85. Notarianni E., Laurie S., NG A., Sathasivam K. Incorporation of cultured embryonic cells into transgenic and chimeric, porcine fetuses. // Int. J. Dev. Biol. 1997. V. 41. P. 537-540/

86. Page R.L., Butler S.P., Subramanian A., Gwazdauskas F.C., Johnson J.L., Velander W.H. Transgenesis in mice by cytoplasmic injection of polylysine/DNA mixtures. // Transgenic Res. 1995. V. 4. P. 353-360.

87. Palmiter R.D., Brinster R.L. Germline transformation of mice.// Annu Rev. Genet. 1986. V. 20. P. 465-499.

88. Pantaleon M, Kaye PL . IGF-I and insulin regulate glucose transport in mouse blastocysts via IGF-I receptor.// Mol Reprod Dev 1996. V.44 P.71-76.

89. Plank C., Zatloukal K., Cotten M., Mechtler K. and Wagner E. Gene transfer into hepatocytes using asialoglycoprotein receptor mediated endocytosis of DNA complexed with an artifical

ii6

tetraantennary galactose ligand.// Bioconjugate Chem. 1992. V. 3. P. 533-539.

90. Plank C., Oberhauser B., Mechtler K., Koch C., Wagner E. The influence of endosome-disruptive peptides on gene transfer using synthetic virus-like gene transfer systems.// J. Biol. Chem. 1994.V.269 P. 12918-12924.

91. Pursei V.G. and Rexroad C. E. Recent progrss in the transgenic modification of swine and sheep. // Mol. Reprod. Dev. 1993. V. 36. P. 251-254.

92. Rosenkranz A.A., Yachmenev S.V., and Sobolev A.S. The use of artifical constructions for selective transport of genetic material into human cells by means of receptor-mediated endocytosis.// Proc Acad Sei USSR 1990. V.312 P.493-494

93. Rosenkranz A.A., Yachmenev S.V., Jans D.A., Serebryakova N.V., Murav'ev V.l., Peters R., Sobolev A.S. Receptor-mediated endocytosis and nuclear transport of a transfecting DNA construct.// Exp Cell Res. 1992. V. 199 P.323-329.

94. Rosenkranz A.A., Antonenko Y.N., Smirnova O.A., Yurov G.K., Naroditsky B.S., Sobolev A.S. Avian adenovirus induces ion channels in model bilayer lipid membranes.// Biochem Biophys Res Commun 1997. V.236 P.750-753.

95. Rottmann O. J., Stratowa C., Honstein M., Hughes J. Tissue specific expression of hepatitis B surface antigen in mice following liposome-mediated gene transfer into blastocysts.// Zentralbl. Veterinarmed. 1985. V. 32. P. 676-682.

96. Sanford J. C. The biolistic process. // Trends in Biotechnology. 1988. V. 327. P 70-73.

97. Schmidt C.M., Orr H.T. HLA-G transgenic mice: a model for studying expression and function at the maternal/fetal interface. // Immunol. Rev. 1995. V. 147. P. 53-65.

98. Schultz G. A. , Hogan A , Watson A.J., Smith R.M., Heyner S. «Insylin , Insylin-like growth factors and glucoce transporters : temporal patterns of gene expression in early murine and bovine embryos.// Reprod. Fertil. Dev.1992. V.4 p.361-371

99. Schultz G. A., Hahnel A., Arcellana - Panlilo M., Goubau S., Watson A., Harvey M. Expression of IGF ligand and receptor genes durinq preimplantation mammalian development.// Mol. Reprod. Dev. 1993. v.35. P.414-420.

100. Seamark R.F. Progress and emerging problems in livestock transgenesis : a summary perspective. // Reprod. Fertil. Dev. 1994. V. 6. P. 653-657.

101. Seth P., Fitzgerald D., Ginsberg H., Willingham M. and Pastan I. Evidence that the penton base of adenovirus is involved in potentiation of toxicity of Pseudomonas exotoxin conjugated to epidermal growth factor. // Mol. Cell. Biol. 1984. V.4. P. 15281533.

102. Smith R.M., Jarret L. Partial characterization of mechanism of insulin accumulation in H35 hepatoma cell nuclear.// Diabetes. 1990. V.39. P.683-689.

103. Smythe E., Warren G. The mechanism of receptor mediated endocytosys.// Eur J Biochem. 1990. V. 202 P.689-699.

104. Sobolev A.S., Rosenkranz A.A., Smirnova O.A., Nikitin V.A., Neugodova G.L., Naroditsky B.S., Shilov I.N., Shatski I.N., Ernst L.K. Receptor-mediated transfection of murine and ovine mammary glands in vivo. //J Biol Chem 1998. V. 273: in press.

105. Steward C., harbers K., Jahner D., Jaenisch R. X chromosome-linked transmission and expression of retroviral genomes microinjected into mouse zygotes. // Science. 1983. V. 221. P. 760-762.

106. Stewart T. A., Mintz B. Recurrent germ line transmission of the teratorcarciomas genome from the METT-1 culture line to progeny in vivo. // J. Exp. Zool. 1984. V.224. p. 465-469.

107. Stringfellow D.A., Lauerman L.H., Thomson M.S. Trypsin treatment of bovine ova. after in vitro exposure to vesicular stomatitis virus.11 Am. J. Vet. Res. 1989 V.50 P.90-992.

108. Strob V., O'Brien R. L„ McMullen M. D., Gollahon K. A., Brinster R. L. High expression of cloned immunoglobulin kappa gene in transgenic mice is restricted to B lymphocytes. // Nature. 1984. V. 310. P. 238-240.

109. Trubetskoy V.S., Torctilin V.P., Kennel S.J., Huang L. Use of N-terminal modified Poly(L-lysine)-antibody conjugate as a carrier for targetid gene delivery in mouse lung endothelial cells.// Bioconjugate Chem. 1992. V. 3. P.323-327.

110. Tsukui T., Mivake S., Azuma S., Ichise H., Saito I., Toyoda Y. Gene transfer and expression in mouse preimplantation embryos by recombinant adenovirus vector.// Mol Reprod Dev 1995. V.42 P.291-297.

111. Tsukui T., Kanegae Y., Saito I., Toyoda Y. Transgenesis by adenovirus-mediated gene transfer into zona-free eggs.// Mol Reprod Dev 1996. V. 42 P.291-297.

112. Van Brunt J. Molecular farming: transgenic animals as bioreactors. Biotechnology. 1988. V.6. N10 P. 1149-1155.

113. Wagner E., Zenke M., Cotten M., Beug H., Birnstiel M. Transferrin -polycation conjugates as carriers for DNA uptake into cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. 1990. V. 87. P. 3410-3414.

114. Wagner E., Cotten M., Foisner R and Birnsteil M. Transferrin-polycation-DNA compexes: the effect of polycations on the structure of the complex and DNA delivery to cells.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1991. V. 88. P. 4255-4259.

115. Wagner E., Zatloukal K., Cotten M., Kirlappos H., Mechtler K., Curiel D.T. and Birnstiel M.L. Coupling of adenovirus to transferrin-polylysine-DNA complex greatly enhances receptor-mediated gene delivery and expression of transfected genes.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. V. 89. P. 6099-6103.

116. Wagner E., Plank C., Zatloukal K., Cotten M. And Birnstiel M. L. Influenza virus haemagglutinin HA-2 N-terminal fusogenic peptides augment gene transfer by transferrin-polylysin-DNA complexes : toward a synthetic virus-like gene transfer venicle.// Proc. Natl. Acad. Sci. 1992. V. 89. P. 7934-7938.

117. Van Doren K., Hanahan D., Gluzman Y. Infection of eucaryotic cells by helper-independent recombinant adenoviruses: early region 1 is not obligatory for integration of viral DNA. //J Virol. 1984. V. 50. P.606-614.

118. Van der Putten H., Botteri F.M., Miller A.D., Rosenfeld M.G., Fan H., Evans R.M., Verma I.M . Efficient insertion of genes into the mouse germ line via retroviral vectors.// Proc Natl Acad Sci USA 1985. V. 82 P. 148-52.

119. Wagner E., Zatloukal K., Cotten M., Kirlappos L., Mechtler K., Curiel D.T., Birnstiel M.L. Coupling of adenovirus to transferrin-polylysine/DNA complexses greatly enhances receptor-mediated gene delivery and expression of transfected genes.// Proc Natl Acaid Sci USA 1992. V.89. P.60099-6103.

120. Weiss R.A. Transgenic pigs and virus adaptation.// Nature. 1998. V. 391. P.327-328.

121. Wiley D. C. and Skehel J. J. The structure and function of the hemagglutinin membrane glycoprotein of influenza virus.// Annu. Rev. Biochem. 1987. V. 56. P. 365-394.

122. Winters WD, Russell WC . Studies on the assembly of adenovirus in vitro. J// Gen. Virol. 1971. V.10. P.1-194.

123. Wu G.Y. and Wu C.H. Receptor-mediated in vitro gene transformation by a soluble DNA carrier system. // J. Biol. Chem. 1987. V. 262. P. 4429-4432.

124. Wyborski D.L., DuCoeur L.C., Short J.M. Parameters affecting the use of the lac repressor system in eukaryotic cells and transgenic animals. // Environ. Mol. Mutagen. 1996. V. 28. P. 447-458.

125. Zauner W., Blaas D., Kuechler E., Wagner E. Rhinovirus-mediated endosomal release of transfection complexes. //J Virol . 1995. V.69 P.1085-1092.

126. Zusman I., Engelhard D., Yaffe P., Ron A., Panet A., Ornoy A. Effects of interferon and encephalomyocarditis virus on in vitro development of preimplantation mouse embryos with and without the zona pellucida.// Teratology 1984. V.29 P.405-409.

127. Zelenin A. V. , Alimov A. A., Zelenina I. A., Semenova M. L., Rodova M. A., Chernov B. K., Kolesnikov V. A. Transfer of foreign DNA into the cells of developing mouse embryos by microprojectile bombardment.// FEBS Lett 1994. V. 315. P. 29-32.

128. Yamamoto F., Furusawa M., Takamatsu K. Intracellular introduction of a fixed quatily of substances by pricking cells using a modified microscope. // Exp. Cell. Res. 1981. V. 135. P. 341345.