СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ ГАЛАНТУСА тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.04.02, кандидат наук Боков Дмитрий Олегович

• Боков Дмитрий Олегович
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Боков Дмитрий Олегович

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ботанико-фармакогностическая характеристика двух видов галантуса (подснежника)

1.1.1. Характеристика семейства Амариллисовых (AmaryШdaceae)

1.1.2. Характеристика рода Галантус, или Подснежник ^а1ап^ш L.)

1.1.3. Характеристика подснежника Воронова и подснежника белоснежного

1.2. Химический состав метаболома подснежников Воронова и белоснежного

1.2.1. Состав и содержание амариллисовых алкалоидов двух видов подснежников

1.3. Фармакологическая активность, применение в медицине двух видов подснежников

1.4. Биологическая активность, физико-химические свойства, биосинтез амариллисовых алкалоидов двух видов подснежников

1.5. Физико-химические методы анализа амариллисовых алкалоидов

1.5.1. Тонкослойная хроматография в анализе амариллисовых алкалоидов

1.5.2. Высокоэффективная жидкостная хроматография и газовая хроматография в анализе амариллисовых алкалоидов

1.5.3. Спектрофотометрия в анализе амариллисовых алкалоидов

1.6. Стандартизация сырья и препаратов подснежников

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ,

2.1. Характеристика объектов исследования

2.2. Методы анализа, оборудование

49

49

2.2.1.Определение амариллисовых алкалоидов

2.2.2.Определение флавоноидов

2.2.3. Определение гидроксикоричных кислот

2.2.4. Определение органических кислот

2.2.5. Определение аминокислот

2.2.6. Определение углеводов

2.2.7. Определение элементного состава

2.2.8. Определение биологической активности

2.3. Реактивы и стандартные образцы

2.4. Валидация методов, обработка полученных результатов

ГЛАВА 3. МАКРОСКОПИЧЕСКИЙ И МИКРОСКОПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ГОМЕОПАТИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ПОДСНЕЖНИКОВ ВОРОНОВА И БЕЛОСНЕЖНОГО

3.1. Изучение внешних признаков сырья подснежников

3.2. Изучение микроскопических признаков сырья подснежников

3.2.1. Микроскопия листьев

3.2.2. Микроскопия цветков

3.2.3. Микроскопия луковиц

3.2.4. Микроскопия корней

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 4. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

ГОМЕОПАТИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ ПОДСНЕЖНИКОВ

4.1. Изучение амариллисовых алкалоидов ГомЛРС подснежников

4.1.1. Анализ амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС подснежников качественными реакциями

4.1.2. Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ТСХ

4.1.3. Изучение алкалоидного состава ГомЛРС подснежников методом ГХ-МС

4.1.4. Количественное определение суммы амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС подснежников методом СФМ

4.2. Изучение флавоноидов ГомЛРС подснежников

4.3. Изучение гидроксикоричных кислот ГомЛРС подснежников

4.4. Изучение органических кислот ГомЛРС подснежников

4.5. Изучение аминокислот ГомЛРС подснежников

4.6. Изучение углеводов ГомЛРС подснежников

4.7. Изучение элементного состава ГомЛРС подснежников

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 5. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ НАСТОЕК

ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ ПОДСНЕЖНИКОВ ВОРОНОВА И БЕЛОСНЕЖНОГО

5.1. Определение компонентного состава НГМ методом ГХ-МС

5.2. Изучение амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников

5.2.1. Подтверждение присутствия амариллисовых алкалоидов в НГМ подснежников качественными реакциями

5.2.2. Изучение состава амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников методом ТСХ

5.2.3. Изучение состава амариллисовых алкалоидов НГМ подснежников методом ГХ-МС

5.2.4. Количественное определение суммы амариллисовых алкалоидов в НГМ подснежников методом СФМ

5.3.Изучение флавоноидов НГМ подснежников

5.4. Изучение гидроксикоричных кислот НГМ подснежников

5.5. Изучение органических кислот НГМ подснежников

5.6. Изучение аминокислот НГМ подснежников

5.7. Изучение углеводов НГМ подснежников

5.8. Изучение элементного состава НГМ подснежников

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА И ВАЛИДАЦИЯ ВЭЖХ-УФ МЕТОДА

КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АМАРИЛЛИСОВЫХ АЛКАЛОИДОВ

6.1. Пробоподготовка образцов для анализа

6.2. Детектирование амариллисовых алкалоидов в извлечениях из ГомЛРС и НГМ

6.3. Поиск оптимальных условий для эффективного хроматографического разделения амариллисовых алкалоидов

6.4. Валидационные характеристики методики

6.4.1. Химические реактивы и материалы

6.4.2. Оборудование и его параметры

6.4.3. Условия хроматографического анализа и детектирование

6.4.4. Расчет содержания суммы амариллисовых алкалоидов

6.4.5. Приготовление стандартных растворов галантамина и ликорина

6.4.6. Приготовление образцов контроля качества и калибровочных образцов

6.4.7. Параметры пригодности хроматографической системы и метрологические характеристики методики

6.4.8. Специфичность

6.4.9. Линейность

6.4.10. Относительный коэффициент чувствительности детектора

6.4.11. Предел обнаружения и количественного определения

6.4.12. Правильность

6.4.13. Повторяемость и точность

6.4.14. Аналитическая область методики

6.4.15. Стабильность

6.4.16. Устойчивость

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 7. РАЗРАБОТКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ КАЧЕСТВА ГОМЕОПАТИЧЕСКОГО ЛЕКАРСТВЕННОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ

МАТРИЧНЫХ ПОДСНЕЖНИКОВ ВОРОНОВА И БЕЛОСНЕЖНОГО

7.1. Определение влажности сырья, органической и минеральной примесей

7.2. Определение плотности, сухого остатка НГМ

7.3. Определение содержания амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС, НГМ

7.4. Определение срока годности НГМ двух видов подснежников

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 8. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ ПОДСНЕЖНИКОВ ВОРОНОВА И БЕЛОСНЕЖНОГО

8.1. Исследование цитотоксических эффектов НГМ подснежников Воронова, белоснежного

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

Практические рекомендации

Перспективы дальнейшей разработки темы

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ЛИТЕРАТУРА

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Акт внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России результатов диссертационного исследования

Приложение 2. Направление проектов ФС в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»

Приложение 3. Проект ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие -Galanthus woronowii planta tota recens»

Приложение 4. Проект ФС «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная»

Приложение 5. Проект ФС «Подснежник белоснежный растения целые свежие -Galanthus nivalis planta tota recens»

Приложение 6. Проект ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная»

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «СТАНДАРТИЗАЦИЯ СЫРЬЯ И НАСТОЕК ГОМЕОПАТИЧЕСКИХ МАТРИЧНЫХ ГАЛАНТУСА»

Актуальность темы

По данным ВОЗ рост числа функциональных нарушений и хронических заболеваний нервной системы, которые нуждаются в длительной терапии, отмечается во всем мире. Прослеживается постоянно возрастающий спрос населения на эффективные и безопасные лекарственные препараты (ЛП) природного происхождения, в число которых входят также гомеопатические ЛП (ГомЛП). Гомеопатические лекарственные препараты обладают щадящим, мягким действием, что позволяет применять их при длительном лечении хронических заболеваний. Безопасность и эффективность ГомЛП подтверждена многолетним опытом применения в зарубежной и отечественной практической медицине. В современной номенклатуре преобладают ГомЛП, изготовленные на основе настоек гомеопатических матричных (НГМ), для производства которых используется гомеопатическое лекарственное растительное сырье (ГомЛРС) [6, 18, 28].

Среди лекарственных растений (ЛР) особое положение занимают представители рода Галантус, или Подснежник (Galanthus L.), получившие широкое распространение в рецептах народной медицины разных стран. Луковицы подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) использовались как природный источник алкалоида галантамина, из которого получают галантамина гидробромид, антихолинэстеразный ЛП, применяющийся для лечения полиомиелита и других неврологических заболеваний. Однако, основное свое применение целые растения подснежника нашли в гомеопатии. Фармакопейная статья (ФС) на НГМ подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.), полученную из всего ЛР целиком, включена в Гомеопатическую фармакопею США в качестве субстанции растительного происхождения для получения ЛП [152]. Настойка подснежника белоснежного входит в состав гомеопатических монопрепаратов зарубежного (Boiron, Helios Homeopathy и др.) производства. Подснежник Воронова входит в перечень ГомЛП, разрешенных к медицинскому применению в соответствии с приказом Минзравмедпрома России

от 29.11.9S № 33S [82]. В РФ препарат «Галантус Воронова» (разведения 3, 6, 12, 30, S0) в форме гранул, капель изготавливают и отпускают гомеопатические аптеки с рецептурно-производственным отделом [47, 48]. Эти ГомЛП применяются для лечения неврологических и сердечно-сосудистых заболеваний [26]. На данный момент, в РФ отсутствует нормативная документация на ГомЛРС и НГМ двух видов подснежников, поэтому экспериментальные исследования по стандартизации ГомЛРС и НГМ представляют несомненный интерес. Степень разработанности темы исследования

Изучением компонентного состава и содержания амариллисовых алкалоидов (АА) G. woronowii и G. nivalis занимались отечественные и зарубежные ученые Проскурнина Н.Ф., Яковлева А.П., Арешкина Л.Я.., Калашников И.Д. , Boit H.G., Felton D.G.I., Clemo G.R., Briggs C.K., Sarikaya B.B., Bastida J., Be^ov S [29]. Другие группы биологически активных соединений (БАС) мало изучены: в доступной литературе имеются отрывочные данные по составу флавоноидов других видов подснежников [36], химический состав ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis не исследовался. Цель исследования

Целью настоящей работы явилось научное обоснование характеристик подлинности и показателей качества фармацевтических субстанций растительного происхождения - ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis. Задачи исследования

Для достижения поставленной нами цели необходимо было решить следующие задачи:

1. проанализировать отечественные и зарубежные научные информационные источники, касающиеся биологических особенностей, состава БАС ГомЛРС G. woronowii, G. nivalis и НГМ на их основе;

2. изучить в сравнительном аспекте анатомо-морфологическое строение ГомЛРС двух видов подснежника и установить основные диагностические признаки для идентификации ГомЛРС;

3. определить качественный состав и содержание основных БАС (амариллисовых алкалоидов, флавоноидов, органических и гидроксикоричных кислот, аминокислот, углеводов, элементного состава) ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis;

4. разработать методики подтверждения подлинности и оценки количественного содержания суммы амариллисовых алкалоидов в ГомЛРС и НГМ;

5. определить показатели качества ГомЛРС и НГМ подснежников и установить их нормы;

6. провести изучение биологической активности НГМ подснежников и их разведений;

7. разработать проекты ФС на ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis.

Научная новизна

Получены новые данные в ходе сравнительного изучения внешних и микроскопических признаков ГомЛРС G. woronowii и G. nivalis, установлены диагностические значимые признаки (строение луковиц, наличие воскового налета на листьях, строение клеточных включений, метрологическая характеристика). С применением современных инструментальных физико-химических методов (ГХ-МС, ВЭЖХ-УФ, УЭЖХ-УФ-МС, ААС, РФА и др.) изучен качественный состав и определено содержание основных БАС: амариллисовых алкалоидов (галантаминового, тацеттинового, ликоринового, гемантаминового типов), флавоноидов (гликозидов кверцетина, кемпферола и изорамнетина), органических (яблочной, янтарной, щавелевой) и гидроксикоричных (нео-, крипто-, хлорогеновой) кислот, аминокислот, углеводов (свободных и связанных), установлен элементный состав. Разработана и валидирована ВЭЖХ-УФ (HILIC) методика определения содержания амариллисовых алкалоидов (в пересчете на галантамин/ликорин) в ГомЛРС и НГМ. Проведено изучение биологической активности НГМ и разведений G. woronowii и G. nivalis в опытах in vitro на культуре клеток Hela и Fet MSC, установлены оптимальные разведения НГМ (D0, D1, D2, C1), обладающие наиболее выраженным цитостатическим действием.

Теоретическая значимость работы

Полученные результаты экспериментальных исследований позволяют значительно расширить представления о химическом составе БАС, анатомо-морфологических признаках и биологической активности ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis. Научно обоснованы характеристики подлинности и показатели качества фармацевтических субстанций растительного происхождения - ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis. Практическая значимость работы

Применение разработанных фармакопейных статей в контрольно-аналитических лабораториях позволит проводить контроль качества и стандартизацию ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis. Основные положения, выносимые на защиту:

• Результаты сравнительного морфолого-анатомического изучения ГомЛРС (луковиц, корней, листьев, цветков) G. woronowii и G. nivalis;

• Данные по компонентному составу и содержанию БАС (амариллисовых алкалоидов, флавоноидов, органических и гидроксикоричных кислот, аминокислот, углеводов, элементного состава) в ГомЛРС и НГМ подснежников;

• Результаты изучения характеристик подлинности и показателей качества ГомЛРС и НГМ G. woronowii и G. nivalis;

• Результаты оценки биологической активности НГМ подснежников и их разведений.

Методология и методы исследования

В методологии фармакогностического исследования, как научно-обоснованной и целесообразно организованной последовательности действий, присутствует ряд блоков, среди которых информационно-аналитический, морфолого-анатомический, фитохимический, стандартизационный и фармако-биологический. В нашей работе мы использовали целый комплекс методов, среди которых спектральные (РФА, ААС, УФ-спектрофотометрия), хроматогра-фические (ТСХ, ВЭЖХ, УЭЖХ, ГХ, КЭ с различными типами детектирования -

МС-, УФ-, рефрактометрическое), биологические (макро- и микроскопический анализ, оценка цитотоксичности), фармакопейные методики ГФ XIII изд. Статистическую обработку результатов проводили в соответствии с требованиями ГФ XIII изд. с использованием ПО «Microsoft Office Excel 2010».

Достоверность научных положений и выводов

Выводы, научные положения и результаты основаны на большом объёме экспериментальных исследований, подкреплены исчерпывающими доводами и логически вытекают из результатов экспериментов. В работе применялся комплекс сертифицированного современного оборудования с действующими свидетельствами о поверке. Методики, разработанные в ходе работы, были валидированы, что позволило получить достоверные и воспроизводимые результаты. Экспертная оценка подтвердила достоверность первичных материалов. В исследовании задействован максимально доступный объём литературных научных источников, как зарубежных, так и отечественных авторов.

Апробация результатов исследования

Основные положения и результаты исследований доложены на: научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Инновации в медицине и фармации 2014», «Инновации в медицине и фармации 2015» (Минск, 2014, 2015 гг.), международной научно-практической конференции «Перспективы внедрения инновационных технологий в фармации» (Орехово-Зуево, ноябрь 2014 г.), финале общероссийского научно-практического мероприятия «Эстафета вузовской науки-2014» в рамках III молодежного медицинского форума «MedWAYS -перспективные научные направления-2014» (Москва, декабрь 2014 г.), XXV, XXVI, XXVII Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2015, 2016, 2017 гг.), III, IV, V научно-практической конференции «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2015, 2016, 2017 гг.), V International scientific-practical conference "Fundamental science and technology - promising developments" (North

Charleston, USA, February 2015), VI научно-практической конференции «Актуальные проблемы оценки безопасности лекарственных средств» (Москва, март 2015 г.), VI международной научной конференции «SCIENCE4HEALTH 2015». Клинические и теоретические аспекты современной медицины (Москва, апрель 2015 г.), 69-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы современной медицины и фармации - 2015» (Минск, апрель 2015 г.), V Юбилейной Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, апрель

2015 г.), International scientific and practical conference of young scientists and students «Topical issues of new drugs development» (Kharkov, April 2015), научном форуме «Бутлеровское наследие-2015» (г. Казань, май 2015 г.), на отборочном этапе «Московский молодёжный старт-2015» программы «УМНИК» в рамках Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и студентов с международным участием «Медицинская весна 2015» (Москва, май 2015 г.), XIV научной конференции молодых ученых и специалистов с международным участием «Молодые ученые - медицине» (Владикавказ, май 2015 г.), в рамках конкурса «Московский молодёжный старт 2015» (Летний финал) по программе «Участник Молодёжного Научно-Инновационного Конкурса» («УМНИК») (Москва, июнь 2015 г.), 1-й ежегодной конференции студентов и молодых ученых по Фармации (г. Москва, июнь 2015 г.), III Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации» (Санкт-Петербург, ноябрь 2015 г.), III, IV научно-практической конференции с международным участием: «Молодые учёные и фармация XXI века» (Москва, декабрь 2015, 2016 гг.), XXIII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» в рамках конкурса научных работ молодых ученых (Москва, апрель

2016 г.), VII International scientific conference "SCIENCE4HEALTH 2016" (Moscow, April 2016), VI Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (Санкт-Петербург, апрель 2016 г.), 20th International Congress: "Phytopharm 2016" (Saint-

Petersburg, July 2016), научно-практической конференции, посвящённой 70-летию Ботанического сада «Лекарственные растения Ботанического сада» (Москва, сентябрь 2016 г.), конкурсе научных работ школы молодых ученых «Основы здорового питания и пути профилактики алиментарно-зависимых заболеваний» (г. Москва, ноябрь 2016 г.).

Апробация работы состоялась на научной конференции кафедры фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (18 апреля 2017 г., Москва).

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения, изложенные в диссертационной работе, соответствуют формуле паспорта специальности 14.04.02 - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», а именно пунктам 2, 3, 6 областей исследования.

Личный вклад автора

Автору принадлежит первостепенная роль в выборе объекта и направления исследования, постановке цели и решении задач, проведении экспериментальной работы, обобщении полученных результатов, статистической обработке и анализе данных. Весь объем экспериментальной работы выполнен автором самостоятельно. Автором лично проведена разработка, валидация методик определения АА в ГомЛРС и НГМ подснежников методом ВЭЖХ-УФ в режиме гидрофильных взаимодействий. Вклад автора является определяющим на всех этапах проводимого исследования: начиная от постановки цели и задач до их практической реализации, обсуждения результатов исследования в научных публикациях, выступлениях с докладом и непосредственного внедрения в практику.

Внедрение результатов исследования

Разработаны проекты фармакопейных статей для включения в ГФ РФ: «Подснежник Воронова растения целые свежие - Galanthus woronowii planta tota recens», «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», «Подснежник белоснежный растения целые свежие - Galanthus nivalis planta tota recens», «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная». Проекты ФС переданы для утверждения в ФГБУ «Научный центр экспертизы

средств медицинского применения» в установленном порядке (Сопроводительное письмо от 13.12.16, Вх. № 19972). Результаты диссертационного исследования используются в учебном процессе кафедры фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (акт внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России от 07. 12. 2016).

Связь исследования с проблемным планом фармацевтической науки

Выполнение диссертационной работы проводилось в рамках плана и в соответствии с тематикой научно-исследовательской работы на кафедре фармакогнозии ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по теме: «Совершенствование образовательных технологий додипломного и последипломного медицинского и фармацевтического образования» (номер государственной регистрации 01.2.011.68237).

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 255 стр., включая приложения (основной текст 207 стр.), машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследований, 6 экспериментальных глав, выводов, библиографического указателя, включающего 190 источников, из которых 77 на иностранных языках и 6 приложений. Работа иллюстрирована 84 рисунками и 64 таблицами.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 43 печатные работы, из них 11 статей -в профильных журналах, включенных в перечень ведущих периодических изданий ВАК РФ, 5 статей - в журналах, входящих в международные базы данных (индексируемых в Scopus и 3 статьи также в Web of Science).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ботанико-фармакогностическая характеристика двух видов галантуса (подснежника)

1.1.1. Характеристика семейства Амариллисовых (Amaryllidaceae)

Амариллисовые (Amaryllidaceae J.St.-Hil.) - это обширное семейство однодольных растений (Liliopsida Batsch). Ранее семейство также входило в состав порядка Лилиецветные (Liliales Perleb) [5]. Согласно современной системе таксономической классификации APG III семейство относится к порядку Спаржецветные (Asparagales Bromhead) [139]. Амариллисовые включают около 85 родов и более 1100 видов, которые распространены на каждом континенте (кроме Антарктиды). Наибольшее разнообразие достигается в субтропической и тропической зонах, и лишь некоторые виды произрастают в зоне умеренного климата. Большинство амариллисовых сконцентрировано в 3-х локациях: Средиземноморье, Центральной и Южной Америке, тропической и Южной Африке. В РФ и Ближнем Зарубежье произрастает 7 родов и около 35 видов. Растения семейства Амариллисовые обнаруживаются в самых разнообразных местообитаниях, но большая часть, как правило, приурочена к возвышенностям, от самых подножий гор и вплоть до высоты 4-5 тыс. метров [56].

Амариллисовые - травянистые многолетние луковичные растения, реже с клубнелуковицами или корневищами. Высота их может быть несколько сантиметров, а может достигать и нескольких метров. У растений листья, как правило, линейные, обычно кожистые, плотные, кутикула хорошо развита, устьица, расположены на верхней и нижней сторонах листьев. Зачастую, листья имеют восковое плотное покрытие в виде налета, благодаря которому отмечается наличие характерного сизоватого оттенка. Жилкование листьев дугонервное, часто выделяющийся на нижней поверхности листа киль образуется за счёт центральной жилки. Размер листьев может колебаться от нескольких сантиметров до 1 метра и более. В листьях амариллисовых накапливается значительное количество слизей, которые свободно вытекают из листа в случае его

повреждения. Они накапливаются в полостях, которые расположены между проводящими пучками, образованными в ходе облитерации клеток. В слизи накапливаются специфические АА и содержится много рафид. Тип листорасположения - очередное, причём у большинства амариллисовых двурядно-очередное. Стебель представлен цветоносом без листьев, он полый внутри или заполнен паренхимной тканью. Цветки крупные, обычно собраны в соцветие зонтик, иногда завиток, завязь нижняя (главное отличие амариллисовых от лилейных). Формула цветка - * Р3+3 Аз+з 6(з). По типу плод представлен коробочкой, реже - ягодой. Амариллисовые, обычно, перекрестноопыляемые растения, но изредка у них возможно и самоопыление. Это явление характерно, прежде всего, для поникающих цветков, как у подснежника, у которых тычинки перед началом поникания цветка немного возвышаются над гинецеем и из пыльников, конусовидной формы, пыльца осыпается прямо на рыльце. При выделении нектара его небольшое количество обнаруживается в бороздках с внутренней стороны зелёного пятна на сегментах околоцветника, так происходит у подснежников и белоцветников ^еищиш), но главной функцией пятна является указание входа для насекомых-опылителей. Корона, привенчик цветка -прекрасные опознавательные знаки [5, 56].

Также разнообразны строение семян и плодов амариллисовых и их способы распространения на местности. В одном случае с созреванием плода цветонос теряет тургор, начинает полегать на почву под тяжестью коробочки; последняя особым образом раскрывается - по гнёздам, поскольку ткани околоплодника, высыхая, скручиваются, то тут же семена рассыпаются по поверхности земли. Подобное вскрытие семенных коробочек отмечено у белоцветников, подснежников. В другом случае мясистая коробочка разрывается благодаря прорастающим в ней семенам. Семена амариллисовых отличаются разнообразием по строению и по форме. Они могут быть округлыми, угловатыми, с небольшим пленчатым крылом, которое окаймляет семя, а также способствует распространению растений на значительные расстояния. Но в особенности интересны семена со специальными структурами - элайосомами, как, например, у белоцветника и

подснежника. Этот семенной придаток с охотой поедается муравьями, которые уносят семена по подземным ходам, тем самым способствуя их распространению. Большинство амариллисовых - это декоративные (садовые - подснежник, белоцветник, нарцисс, комнатные - амариллис, гиппеаструм, кринум, кливия и многие др.) и лекарственные растения [2, 5, 56].

1.1.2. Характеристика рода Галантус, или Подснежник (Galanthus L.)

Триба подснежниковых (Galantheae) насчитывает четыре рода и около сорока видов [56], их ареал это - Средняя Европа, Средиземноморье, Кавказ, Иран, Афганистан и Центральная Азия. Цветки одиночные, по два или несколько в зонтике; два прицветника срастаются в трубку основаниями. Много семязачатков в каждом гнезде; семя большинства видов с элайосомой. Наиболее многочисленным родом трибы является подснежник (Galanthus, гречск. gala "молоко", anthos "цветок"), в его состав входит около семнадцати видов, которые распространены в Южн. и Сред. Европе, а также в М. Азии и на Кавказе [56].

В соответствии с базой данных семейств растений - World Checklist of Selected Plant Families [184] - род Galanthus насчитывает около девятнадцати видов и два гибрида с естественным происхождением [17]. Советский ботаник Артюшенко З.Т., критически подходя к более ранним предложенным классификациям рода, существенно пересматривает его систематику [2]. Далее на рис. 1.1.2.1 приводится наиболее совершенная систематика рода Galanthus L., которая учитывает целый комплекс признаков (морфологические и анатомические признаки, хромосомные числа и др.) [2].

Подснежники обитают в разных экологических условиях: среди кустарника, по опушкам лесов, в горах и предгорьях, встречаются на высоте до 2500 м над уровнем моря. В природном фитоценозе некоторые виды способны образовывать заросли на значительных площадях [56].

Секция 1. Galanthus Секция II. Viridifolii Kem.- Nath

1. П. белоснежный (G. nivalis L.); 2. П. королевы Ольги (G. reginae-olgae Orph.); 3. П. корфский (G. corcyrensis Stern); 4. П. греческий (G. graecus Orph. ex Boiss.); 5. П. Элвиса (G. elwesii Hook.); 6. П. складчатый (G. plicatus Orph.); 7. П. византийский (G. byzantinus Baker) 8. П. кавказский (G. caucasicus (Baker) Grossh.); 9. П. альпийский (G. alpinus Sosn.); 10. П. Борткевича (G. bort- kewitschianus G. Koss); 11. П. икарийский (G. ikariae Baker); 12. П. широколистный (G. platyphyllus Traub et Mold.); 13. П. Краснова (G. krasnovii Khokhr.); 14. П. Фостера (G.fosteri Baker); 15. П. закавказский (G. transcaucasicus Fomin); 16. П. киликийский (G. cilicicus Baker); 17. П. лагодехский (G. lagodechianus Kem.-Nath.)

Рис.1.1.2.1. Классификация рода Galanthus L. согласно Артюшенко З.Т. [2].

Подснежники - это небольшие растения, размер высоты у которых достигает 30 см, а единственный поникающий молочно-белый цветок - до 3-4 см. У цветка сегменты околоцветника располагаются в два круга: наружные вогнутые, ланцетные; внутренние сегменты клиновидные, почти в половину короче, на верхушке имеется вырезка, которая окаймлена зелёным небольшим пятном подковообразной формы. Для некоторых видов характерно второе зелёное пятно, которое располагается в основании внутренних сегментов, например, у п. греческого и п. византийского. Плод - многосеменная локулицидная мясистая коробочка; семена снабжены элайосомами. В Европе подснежники культивируются давно, особенно их любят выращивать в Англии. Эти растения очень легко подвергаются натурализации. Подснежники хорошо переносят зимы в условиях открытого грунта даже в северных районах, в частности в Санкт-Петербурге и Кировске, где их успешно культивируют в полярно-альпийском ботаническом саду им. Аврорина Н. А [2, 56].

1.1.3. Характеристика подснежника Воронова и подснежника белоснежного

Подснежник Воронова (рис. 1.1.3.1) - G. woronowii Losinsk, син. П. икарийский - G. ikariae Baker, 1893, G. ikariae subsp. ikariae Stern, 1956. Был описан в 1935 г. Лозиной-Лозинской А.С. и назван в честь Юрия Николаевича Воронова. Обитает преимущественно в лиственных низкогорных лесах, обычно не поднимаясь выше 500-700 м над уровнем моря. Массово встречается близ Черноморского побережья Кавказа, от Геленджика и далее на юг. Растет в приморских и внутренних регионах Грузии и на северо-востоке Турции (недалеко от черноморского побережья, рис. 1.1.3.2) [2, 54].

Рис. 1.1.3.1. Подснежник Воронова (G. woronowii Losinsk).

Рис. 1.1.3.2. Ареал подснежника Воронова: О - точки произрастания.

Подснежник белоснежный (Рис. 1.1.3.3) - G. nivalis L. 1753, G. nivalis var. europaeus Beck, 1894. Это первый вид рода Galanthus, описанный Карлом Линнеем в 1753 г. в его знаменитой «Species plantarum» [2, 5].

Рис. 1.1.3.3. Подснежник белоснежный (Galanthus nivalis L.)

Растение занимает обширный ареал, охватывающий пространство между 40 и 52-м градусом северной широты, 2-м градусом западной долготы и 32-м градусом восточной. Самая западная точка ареала находится во Франции, самая южная в Греции, самая северная и самая восточная - на Украине (рис. 1.1.3.4). Произрастает в нижнем, в среднем, а также в альпийском поясах. Растет обычно в широколиственном лесу по опушкам, среди кустарника, встречается на открытых местах (полонинах), от 100 до 1500 метров над уровнем моря [2, 54].

Рис. 1.1.3.4. Ареал подснежника белоснежного. О - точки произрастания.

1.2. Химический состав метаболома подснежников Воронова и белоснежного

С точки зрения оказываемого фармакологического эффекта основной группой БАС двух видов подснежников выступают алкалоиды (так называемые «амариллисовые алкалоиды»), группы ликорина, галантамина, гомоликорина, гемантамина, нарциклазина, тирамина и тацеттина (более чем 50 алкалоидов с установленной структурой) [17, 29, 138].

Помимо АА в подснежниках исследователями обнаружены и другие группы БАС. G. nivalis содержит лектины - гликопротеины, которые обладают способностью к высокоспецифичному связыванию остатков углеводов на поверхности клеток, вызывая их агглютинацию, например маннозосвязывающий агглютинин подснежника (GNA); жирные кислоты (лауриновая (C11H23COOH),

пальмитиновая (CH3(CH2)14COOH), стеариновая (С17Н35СООН), олеиновая (СНз(СН2)7СН=СН(СН2)7СООН), линолевая (СНз(СН2)з-(СН2СН=СН)2 (CH2)7COOH), линоленовая (СНз(СН2СН=СН)з (CH2)7COOH), эйкозановая (С19Н39СООН), хенейкозановая (С20Н41СООН), докозановая (С21Н43СООН), трикозановая (С22Н45СООН), тетракозановая (С23Н47СООН)), циклопропан-карбоновые кислоты. Данные по содержанию сопутствующих групп БAС для G. woronowii отсутствуют [80].

1.2.1. Состав и содержание амариллисовых алкалоидов двух видов подснежников

Исследователями из бывшего ВНИХФИ им. С. Орджоникидзе -Проскурниной Н.Ф., Яковлевой A.H и Aрешкиной Л.Я. - из сырья G. woronowii были выделены следующие AA: галантамин, галантин, галантамидин и ликорин [83, 84, 85, 86, 87]. Яковлевой A.H идентифицированы два AA - нивалидин и тацеттин [112, 113]. Методом гравиметрии установлено суммарное содержание AA в луковицах G. woronowii, которое составило 1,8 % , а индивидуального галантамина - 0,36% [84, 113].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Боков Дмитрий Олегович, 2018 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Андреев, Н., Анчев, М., Кожухаров, Ст. и др. Определител на висшите растения в България: (Плаунообразни, хвощообразни, папратообразни и цветни растения)/Под общата ред. на Ст. Кожухаров //София: Наука и изкуство. - 1992. - 787 с.

2. Артюшенко, З.Т. Амариллисовые (Amaryllidaceae Jaume St-Hilaire) СССР. Морфология, систематика и использование / З.Т. Артюшенко. - АН СССР. Ботан. ин-т им. В.Л. Комарова. Л. : Наука, 1970. - С. 41-83.

3. Асоева, Е.З. Разделение и изучение количественного состава алкалоидов подснежника Краснова / Е.З. Асоева, E.H. Вергейчик // Биол. науки. - 1967. -№ 7. - С. 98-101.

4. Березов, Т.Т. Биологическая химия / Т.Т. Березов, Б.Ф. Коровкин - Москва: Медицина, 2004.

5. Биологический энциклопедический словарь. Гл. ред. М. С. Гиляров - 2-е изд., исправл. - М.: Сов. Энциклопедия, 1986. - 864 с.

6. Боков, Д.О. Текущее состояние и дальнейшие перспективы фармакогностических исследований представителей подкласса Лилииды (Liliidae)/ Д.О. Боков, И.А. Самылина// Инновации в медицине и фармации 2014: материалы дистанционной научн.-практич. конф. студентов и молодых ученых( 11 ноября 2014 г.). Минск: БГМУ, 2014. - С. 503-507.

7. Боков, Д.О. Использование современных физико-химических методов анализа (ВЭЖХ/МС/МС, спектрофотометрии) для идентификации и определения содержания биологически активных соединений в лекарственном растительном сырье и препаратах на его основе / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Сборник материалов Международной научно-практической конференции «Перспективы внедрения инновационных технологий в фармации». Орехово-Зуево(24-25 ноября 2014 г): МГОГИ, 2014. - С.27-36.

8. Боков, Д.О. Изучение, стандартизация препаратов на основе представителей Amaryllidaceae, перспективных для фармакологической регуляции нейродегенеративных заболеваний и мигрени / Д.О. Боков, И.А. Самылина//

Материалы финала общероссийского научно-практического мероприятия «Эстафета вузовской науки-2014» III молодежный медицинский форум «MedWAYS - перспективные научные направления-2014» (4-5 декабря 2014 г).- М.: Изд-во Первого МГМУ им. И.М. Сеченова, 2014. - С. 102.

9. Боков, Д.О. Современные аспекты применения в гомеопатии некоторых лекарственных растений (сем. AmaryШdaceae, ТпШасеае) средней полосы России при лечении неврологических расстройств / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Гомеопатический ежегодник. Сборник материалов XXV Московской международной гомеопатической конференции «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (23 - 24 янв. 2015 г).- М.: Московский гомеопатический центр, 2015. - С. 180-183.

10.Боков, Д.О. Химический состав и применение в медицине подснежника / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Материалы III науч.-практ. конф. «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения (19 февраля 2015 г.). Сеченовский вестник. - 2015. - №1 (19). -С. 78-79.

11.Боков, Д.О. Методические подходы к оценке безопасности гомеопатических лекарственных средств на основе лекарственного растительного сырья подснежников / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Материалы VI науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы оценки безопасности лекарственных средств» (19 марта 2015 г.). Сеченовский вестник. - 2015. - № 2(20). - С. 88-89.

12.Боков Д.О., Самылина И.А. Характеристика представителей рода Galanthus Ь., как источников гомеопатических препаратов / Д.О. Боков, И.А. Самылина //Сб. мат. конгресса (тезисы докладов) XXII Российский Национальный Конгресс «Человек и лекарство» (6-10 апреля 2015 г.), Москва. - 2015. - С. 180.

13.Боков, Д.О. Компонентный состав биологически активных соединений и использование гомеопатических препаратов подснежника / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Клинические и теоретические аспекты современной медицины: материалы VI Международной научной конференции «SCIENCE4HEALTH 2015» (14-18 апреля 2015 г.). - Москва: РУДН, 2015. - С. 66.

14.Боков, Д.О. К вопросу о стандартизации гомеопатических лекарственных средств двух видов подснежника / Д.О. Боков // Сборник тезисов докладов 69-й научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы современной медицины и фармации - 2015». - Минск: БГМУ, 2015. - С. 1662.

15. Боков, Д.О. Биологическая активность алкалоидов подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.) и подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Фармация (спец. выпуск): сб. матер. V Юбилейной Всеросс. науч. конф. студентов и аспирантов с междунар. участием «Молодая фармация - потенциал будущего», (20-21 апреля 2015 г.) -СПб.: Изд-во СПХФА, 2015. - С. 391-396.

16. Боков, Д.О. Хромато-масс-спектрометрическое исследование компонентного состава настойки гомеопатической матричной подснежника Воронова / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Сб. мат. Всероссийской науч.-практ. конф. молодых ученых и студентов с международным участием «Медицинская Весна-2015» (г. Москва, 19 мая 2015 года). - М.: Издательство ПМГМУ имени И.М. Сеченова, 2015. - С. 375

17.Боков, Д.О. Алкалоиды двух видов подснежника: химический состав, биосинтез и фармакологические свойства / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Медицинский альманах. - 2015. - № 2 (37). - С. 125-130.

18. Боков, Д.О. Современное состояние ботанико-фармакогностических исследований представителей рода Подснежник (Galanthus L.) / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Инновации в медицине и фармации 2015:материалы дистанционной научно-практической конференции студентов и молодых ученых. - Миснк: БГМУ. 2015. С. 801-804.

19.Боков, Д.О. Спектрофотометрия в анализе двух видов подснежника (Galanthus L.) / Д.О. Боков, И.А. Самылина, Д.М. Попов // Бутлеровские сообщения. -2015. - Т. 42. - № 5. - С. 71-77.

20.Боков, Д.О. Подснежники в гомеопатической фармации /Д.О. Боков, И.А. Самылина // Сборник материалов III Всероссийской научно-практической

конференции с международным участием «Инновации в здоровье нации» (1011 ноября 2015 г.) - СПб.: Изд-во СПХФА. - 2015. - C. 185-188.

21.Боков, Д.О. Исследования по оптимизации подходов к стандартизации гомеопатического лекарственного растительного сырья подснежников в рамках современных ресурсосберегающих технологий/ Д.О. Боков, И.А. Самылина// Сб. науч. трудов III научно-практической конференции с международным участием: «Молодые учёные и фармация XXI века». - М., ВИЛАР, 2015г. - С. 184-186.

22. Боков, Д.О. Требования к качеству гомеопатического лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных видов галантуса (Galanthus L.) в отечественной и зарубежной нормативной документации / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Сб. мат. XXVI Московской междунар. гомеопатической конф. «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (22-23 января 2016 г.). Гомеопатический ежегодник «Гомеопатическая книга» Новосибирск. 2016. - С. 145-147.

23.Боков, Д.О. Исследования по стандартизации гомеопатического лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.). / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Материалы IV науч.-практ. конф. «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения» (26 февраля 2016 г.). Сеченовский вестник (электронное приложение к журналу). - 2016. - № 2(24). - С.39-40 .

24. Боков, Д.О. Изучение биологически активных соединений гомеопатического лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных двух видов подснежника / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Материалы IV науч.-практ. конф. «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения» (26 февраля 2016 г.). Сеченовский вестник (электронное приложение к журналу). - 2016. - №2 (24). - С. 18.

25. Боков Д.О. Разработка методики спектрофотометрического количественного определения амариллисовых алкалоидов в сырье и настойке гомеопатической

матричной галантуса (подснежника) / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Сборник материалов XXIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» (11-14 апреля 2016 г.). Тезисы докладов. - М.: Видокс, 2016. - С. 220.

26.Боков Д.О. Представители рода Подснежник (Galanthus L.) - история медицинского применения, актуальные проблемы стандартизации гомеопатического лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на его основе / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2016. - №2 (15). - С. 108-113.

27.Боков, Д.О. Компонентный состав гидрофильной фракции биологически активных соединений гомеопатического лекарственного растительного сырья и настоек гомеопатических матричных подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и белоснежного (Galanthus nivalis L.) /Д.О. Боков, И.А. Самылина//Сборник материалов VI Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация -потенциал будущего» (25-26 апреля 2016 г.) - СПб.: Изд-во СПХФА, 2016. -С. 567-570.

28.Боков, Д.О. Современные подходы к стандартизации сырья, настоек гомеопатических матричных подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.) / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Медицинский альманах. - 2016. - №4 (44). - С. 147-150.

29.Боков, Д.О. Состав амариллисовых алкалоидов подснежника Воронова и подснежника белоснежного/Д.О. Боков, И.А. Самылина// Фармация. - 2016. -№ 4 (65). - С. 15-18.

30. Боков, Д.О. Фармакогностическое исследование некоторых видов рода Galanthus L. (Amaryllidaceae) /Д.О. Боков, И.А. Самылина// В сборнике: Лекарственные растения Ботанического сада Научно-практическая конференция, посвящённая 70-летию Ботанического сада ФГБОУ ВО Первого Московского государственного медицинского университета имени И.М. Сеченова. Москва, 2016. - С. 24.

31.Боков, Д.О. Определение органических кислот в пищевых продуктах и лекарственном растительном сырье / Д.О. Боков, А.Д. Малинкин, И.А. Самылина, В.В. Бессонов // Сборник материалов школы молодых ученых «Основы здорового питания и пути профилактики алиментарно-зависимых заболеваний» (г. Москва, 23-25 ноября 2016). - С. 29-34.

32. Боков, Д.О. Идентификация флавоноидов настоек гомеопатических матричных Galanthus woronowii Losinsk. и Galanthus nivalis L. методом ультраэффективной жидкостной хроматографии с фотодиодноматричным и тандемным квадрупольным масс-селективным детекторами / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Химико-фармацевтический журнал. - 2016. - №7 (50). - С. 28-34.

33.Боков, Д.О. Сравнительное исследование химического состава настоек гомеопатических матричных подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.) методом газовой хроматографии с масс-селективным детектором/ Д.О. Боков, И.А. Самылина// Химико-фармацевтический журнал. - 2016. - №10 (50). - С. 33-40.

34. Боков, Д.О. Тонкослойная хроматография в анализе амариллисовых алкалоидов/ Д.О. Боков, И.А. Самылина// Фармация. - 2016. - № 7 (65). - С. 812.

35.Боков, Д.О. Фитохимический анализ свободных и связанных углеводов настоек гомеопатических матричных Galanthus woronowii Losinsk. и Galanthus nivalis L. методами ВЭЖХ/РМД, ВЭЖХ/ФДМ/ Д.О. Боков, И.А. Самылина, С.Д. Николов // Химико-фармацевтический журнал. - 2016. - №12 (50). - С. 38-41.

36. Боков, Д.О. Исследование флавоноидов гомеопатического лекарственного растительного сырья подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и подснежника белоснежного (Galanthus nivalis L.) методом УЭЖХ/ФДМ/МС / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Химия растительного сырья. - 2016. - №4. - С. 131-142.

37. Боков, Д.О. Рациональные подходы к стандартизации сырья целых свежих растений G.woronowii и G. nivalis, настоек гомеопатических матричных на их

основе/ Д.О. Боков, И.А. Самылина // Сб. науч. трудов IV научно-практической конференции с международным участием: «Молодые учёные и фармация XXI века». - М., ВИЛАР, 2016 г. - С. 167-170 .

38.Боков, Д.О. Определение амариллисовых алкалоидов в сырье и настойках подснежника Воронова (Galanthus woronowii Losinsk.) и белоснежного (Galanthus nivalis L.) / Д.О. Боков, И.А. Самылина// Сб. мат. XXVII Московской междунар. гомеопатической конф. «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (27-28 января 2017 г.). Гомеопатический ежегодник «Гомеопатическая книга» Новосибирск. 2017. - С. 134-135.

39.Боков, Д.О. Содержание галантамина и ликорина в Galanthus woronowii и G. nivalis (Amaryllidaceae) в условиях интродукции / Д.О. Боков, И.А. Самылина // Растительные ресурсы. - 2017. - № 1 (53). - С. 135-143.

40.Боков, Д.О. Изучение метаболома свежих целых растений и настоек гомеопатических матричных Galanthus woronowii и G. nivalis/ Д.О. Боков, И.А. Самылина// Материалы V науч.-практ. конф. «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения» (15 марта 2017 г.). - 2017. - С. 33-36.

41.Бубева-Иванова, Л. Алкалоиды Galanthus nivalis L. var. gracilis (Celak). VIII Сообщение. Алкалоиды семейства Amaryllidaceae / Л. Бубева-Иванова, Х. Павлова // Фармация, Болгария. - 1965. - №15. - С. 103-105.

42.Валкова, А. Идентификация и определение алкалоидов в Galanthus nivalis L. var. gracilis и Leucojum aestivum / А. Валкова //Фармация, Болгария. - 1961. -№ 11. - С. 17-22.

43.Володина, А.Д. Полярографическое определение галантамина в Ungernia victoris / А.Д. Володина, Е.К. Добронравова // Химия природ. соедин. - 1970. -№ 4. - С 450-453.

44.Володина, А.Д. Спектрофотометрическое определение ликорина в растительном сырье и препарате/ А.Д. Володина, Е.К. Добронравова, Т.Т. Шакиров // Химия природ. соедин. - 1972. - № 6 (8). - С. 761 - 763.

45.Ганеман, С. Чистая Материя Медика / С. Ганеман. - М.: ОЛЛО, 1999. - Т.1. -424 с.

46.Гейсс, Ф. Основы тонкослойной хроматографии / Ф. Гейсс; М.: Мир, 1999. -405 с.

47. Гомеопатическая аптека «Гом 7» [Сайт аптеки]. URL: http://gom-7.ru/product/galantus-voronova-granuly-10-g/

48. Гомеопатическая аптека «Дамиана» [Сайт аптеки]. URL: http://damiana.ru/spisok.html

49.Горбунова, Г.М. Галантамин из некоторых видов семейства Amaryllidaceae II / Г.М. Горбунова, A.B. Патудин, В.Д. Горбунов // Химия природ. соедин.. -1978. - № 3 (14). - С. 420-422.

50. Государственная Фармакопея СССР, X издание. - М.: Медицина, 1968. - 1079 c.

51.Государственная фармакопея РФ XIII издания. Миндрав РФ [Офиц. сайт]. URL: http://www.femb.ru/feml. Москва, 2015.

52.Государственный реестр лекарственных средств. Миндрав РФ [Офиц. сайт]. URL: http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx

53.Деримедведь, Л.В. БАДы на основе янтарной кислоты. Фармакологический анализ/ Л.В. Деримедведь, В.А. Тимченко// Провизор. - 2002. - Вып. 13. - С. 10-13.

54.Диев, М.М. Галянтусы / М.М. Диев // Москва: Товарищество научных изданий КМК. - 2014. - 167 с.

55. Добронравова, Е.К. Хроматографическое поведение галоидных солей алкалоидов на окиси алюминия / Е.К. Добронравова, А.Х. Саттарова, Т.Т. Шакиров // Химия природ. соедин. - 1982. - №1. - С. 127-129

56.Жизнь растений: В 6-ти т. /Гл. ред. А. Л. Тахтаджян. Цветковые растения/ Под ред. А. Л. Тахтаджяна. - М.: Просвещение, 1982. - C. 104-116.

57.Жогова, А.А. Разработка методик идентификации и определения содержания иридоидов в лекарственном растительном сырье. Автореф. канд. фарм. наук. М., 2015, 24 с.

58.Иванова, Л.Б. Фитохимическое исследование Galanthus nivalis varr.gracilis. / Л.Б. Иванова //Болгария. Фармация, 1957. - № 1 - С. 82-83.

59.Иванова, Л.Б. Относно алкалоидного сьдьржания на Galanthus nivalis var. gracilis Celak. / Л.Б. Иванова, В. Иванов // Тр.Н.-и. ин-т фармация. - 1961. -№3. - С. 70.

60.Йорданов, Д. Род Galanthus L. Флора Народной Республики Болгарии /Д. Йорданов (Ред)// Издательство Болгарской Академии наук, София. - Том 2. -С. 318-319.

61.Калашников, И.Д. Алкалоиды Galanthus nivalis/ И.Д. Калашников //Химия природных соединений. - 1970. - №3. - С. 380.

62. Калашников, И.Д. Исследование подснежника белоснежного, произрастающего в западных областях УССР, как источника галантамина: автореф. дисс. ... канд. фарм. наук. /Калашников Иван Дмитриевич. -Львовский гос. мед. ин-т., Львов, 1970. - 20 с.

63.Киселева, Т.Л. Гомеопатическая фармация: введение и руководство // Сборник учебных пособий для системы послевузовского профессионального образования провизоров / Т.Л. Киселева, А.А. Карпеев. - М.:ФНКЭЦ ТМДЛ Росздрава, 2005. - 438 с.

64.Клышев, Л.К. Флавоноиды растений (распространение, физико-химические свойства, методы исследования) / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина - Алма-Ата, 1978. - 220 с.

65.Копытько, Я.Ф. Регламентация качества настоек гомеопатических матричных и сырья для их изготовления в России и за рубежом / Я.Ф. Копытько, Т.А. Сокольская, Т.Д. Даргаева // Традиционная медицина. - 2010. - №23. - С. 5356.

66.Костенникова, З.П. Анализ и стандартизация гомеопатических лекарственных средств растительного происхождения / З.П. Костенникова, Л.В. Акашкина // Фармация. - 1993. - № 6. - С. 59-62.

67.Кочетков, Н.К. Химия углеводов / Н.К. Кочетков, А.Ф. Бочков, Б.А. Дмитриев. - Москва: Химия, 1967. - 671 с.

68. Краснов, Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексеюк [и др.]. - Томск: Изд-во ТГУ, 1987. - 184 с.

69.Кретович, В.Л. Биохимия растений, 2-е изд., перераб. и доп. / В.Л. Кретович. -Москва: Высшая школа, 1986. - 503 с.

70.Ладыгина, Е.Я. Химический анализ лекарственных растений/ Е.Я. Ладыгина, Л.Н. Сафронич, В.Э. Отряшенкова [и др.]; под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич. - М.: Высшая школа, 1983. - 176 с.

71.Лобанова, И.Ю. Выделение и изучение состава флавоноидов листьев осины обыкновенной / И.Ю. Лобанова, В.Ф. Турецкова//Химия растительного сырья. - 2011. - № 2. - С. 117-122.

72.Малинкин, А.Д. Определение лекарственных средств неорганической природы методом капиллярного электрофореза: автореф. дисс. ... канд. фарм. наук./Малинкин Алексей Дмитриевич. - М., 2016. - 24 с

73.Малинкин А.Д. Применение капиллярного зонального электрофореза для определения катионов калия, кальция, натрия и магния в растворах для инфузий /А.Д. Малинкин// Вестник Воронежского государственного университета. Серия: Химия. Биология. Фармация. - 2013. - № 1. - С. 186-189.

74.Машковский, М.Д. Влияние галантамина на чувствительность скелетной мускулатуры к ацетилхолину /М.Д. Машковский// Фармакология и токсикология. - 1955. - №18(4). - С. 21-27.

75.Машковский, М.Д. К фармакологии нового алкалоида галантамина / М.Д. Машковский, Р.Н. Кругликова-Львова // Фармакология и токсикология. - 1951. №14 (6). - С. 27.

76.Медведев, Ю.В. Исследование содержания фенолокислот в лекарственном и пищевом растительном сырье методом ВЭЖХ: автореф. дисс. ... канд. фарм. наук./Медведев Юрий Владимирович. - М., 2010. - 24 с.

77. Методы фармакогностического анализа лекарственного растительного сырья, в 2-х ч. Ч. II. Химический анализ: / Г.И. Калинкина [и др.]. - Томск: СибГМУ, 2008. - 55 с.

78. Новикова, И.Ю. Применение физико-химических методов в анализе галантамина (обзор) /Новикова И.Ю., А.А. Тулаганов //Химико-фармацевтический журнал. - 2002. - Т. 36. - №. 11. - С. 44-48.

79.Патудин А.В. Гомеопатические лекарственные средства, разрешенные в Российской Федерации для применения в здравоохранении и ветеринарии /А.В. Патудин, В.С. Мищенко, Л.И. Ильенко - М.: «Знак», 2011. - 352 с.

80.Патудин, А.В. Биологически активные вещества гомеопатического лекарственного сырья/ А.В. Патудин, Н.С. Терёшина [и др.] - М.: 2009. - 588 с.

81.Препарат «Нивалин» (галантамина гидробромид). URL: http://nivalin.ru/ (дата обращения 21.03.2016).

82.Приказ МЗ МП РФ № 335 от 29.11.95 «Об использовании метода гомеопатии в практическом здравоохранении».

83.Проскурнина Н.Ф. Об алкалоидах Galanthus woronowii // III. Строение галантина. Докл. АН СССР, 1953. - Т. 90, №4. - С. 565-567

84.Проскурнина, Н.Ф. Об алкалоидах Galanthus woronowii. Часть I / Н.Ф. Проскурнина, Л.Я. Арешкина // Журнал общей химии. - 1947. - №17, Вып 6. -С. 1266.

85.Проскурнина, Н.Ф. Об алкалоидах Galanthus woronowii. Часть II O выделении нового алкалоида / Н.Ф. Проскурнина, А.П. Яковлева // Журнал общей химии. - 1952. - №22, Вып. 10. - C. 1899.

86.Проскурнина, Н.Ф. Об алкалоидах Galanthus woronovii III. О строении галантамина / Н.Ф. Проскурнина, А.П. Яковлева, С. Орджоникидзе //Журнал общей химии. - 1955. - №25. - С. 1035-1039.

87.Проскурнина, Н.Ф. Об алкалоидах Galanthus woronowii. V. Выделение галантамидина / Н.Ф. Проскурнина, А.П. Яковлева // Журнал общей химии. -1956. - №26, Вып 1. - С. 172-173.

88. Пятигорская Н.В. Современные требования к производству гомеопатических лекарственных средств / Н.В. Пятигорская, Н.А. Замаренов, А.Е. Гехт, В.В. Береговых // Традиционная медицина. - 2010. - №20. - С. 8-13.

89.Руководство Р. 4.1. 1672-03 «Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище» //Минздрав России. -М.: Федеральный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004. - 240 с.

90.Садыков, Ю.Д. Содержание алкалоидов в Ungernia victoris Vved. Таджикской ССР / Ю.Д. Садыков, М. Ходжиматов // Растит. рес. - 1988. - №24 (3). - С. 410 - 414.

91.Саканян, Е.И. Лекарственные формы и их место в современной гомеопатической практике / Е.И. Саканян, Н.Д. Бунятян, М.Н. Лякина [и др.] // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. -2014. - №2. - С. 60-63.

92. Саканян, Е.И. К вопросу разработки фармакопейных стандартов качества на гомеопатические лекарственные средства / Е.И. Саканян, М.Н. Лякина, Т.Б. Шемерянкина [и др.] //Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2016. - № 9-1. - С. 116-119.

93.Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас в 3-х томах/ И.А. Самылина, В.А. Ермакова, Н.В. Бобкова, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. - Т.1. -192 с.

94.Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас в 3-х томах/ И.А. Самылина, В.А. Ермакова, Н.В. Бобкова, О.Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР - Медиа, 2009. - Т.2. -384 с.

95. Самылина, И.А. Научные подходы к разработке общих фармакопейных статей на гомеопатические лекарственные формы / И.А. Самылина, З.П. Костен-никова, Н.С. Терёшина, Ю.В. Цуканов // Фармация. - 2010. - №3. - С. 53-56.

96. Самылина, И.А. Научные основы разработки и стандартизации лекарственных растительных средств / И.А. Самылина, В.А. Куркин, Г.П. Яковлев // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. -2016. - № 1. - С. 41-44.

97. Список проектов общих фармакопейныйх статей и фармакопейных статей по гомеопатии. Минздрав РФ [Офиц. сайт]. URL: https://www.rosminzdrav.ru/ministry/61/11/materialy-po-deyatelnosti-

deparatamenta/stranitsa-856/spisok-proektov-obschih-farmakopeynyyh-statey-i-farmakopeynyh-statey-po-gomeopatii (Дата доступа: 04.08.16).

98.Станчев, Б.Д. Влияние нивалина на фагоцитарную активность лейкоцитов крови/ Б.Д. Станчев, Ц. Такева// Фармакология и токсикология. - 1963. - Т. 26, №1. - С. 72-75.

99. Сумина, Е.Г. Тонкослойная хроматография. Теоретические основы и практическое применение / Е.Г.Сумина, С.Н.Штыков, Н.В.Тюрина - Саратов: Изд-во Сарат. ун-та, 2002. - 102 с.

100. Сыроешкин, А.В. О возможности применения лазерного метода для контроля качества высоких разведений жидких лекарственных средств / А.В. Сыроешкин, Т.В. Плетенева, М.А. Морозова и др.// Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. - 2016. - № 3. - С. 3136.

101. Терёшина, Н.С. Принципы стандартизации гомеопатических субстанций из близких видов растительного сырья / Н.С. Терёшина // Вопросы обеспечения качества лекарственных средств. - 2014. - №4. - С. 21-27.

102. Терёшина, Н.С. Современные требования к стандартизации гомеопатического сырья и субстанций / Н.С. Терёшина, И.А Самылина., Ю.В Цуканов., А.В Патудин // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. - 2016. - № 3. - С. 16-20.

103. Тохтабаева, Г.М. Хроматофотоколориметрический метод определения галантамина в листе нарцисса сорта Fortune / Г.М. Тохтабаева // Хим.-фарм. журн. - 1987. - № 6. - С. 703-705.

104. Тутельян, В.А. Методы анализа минорных биологически активных веществ пищи/ В.А. Тутельян, К.И. Эллер - М: «Династия», 2010. - 180 с.

105. ФС 42-1520-80. Листья унгернии Виктора - "Folia Ungerniae victoris".

106. ФС 42-1257-82. Листья унгернии Северцова резаные - "Folia Ungerniae sewertzowii concise".

107. ФС 000247-221111,2011. Галантамина гидробромид.

108. ФС 42-Уз-0032-96. Галантамина гидробромид.

109. Шаршунова, М. Тонкослойная хроматография в фармации и клинической биохимии. т. 2. / М. Шаршунова, В. Шварц, Ч. Михалец - М.: «Мир», 1980. -610 с.

110. Швабе, В. Гомеопатические лекарственные средства: Пер. с нем./Под ред.

B.И. Рыбака. - М.: Б. И., 1967. - 373 с.

111. Ших, Е.В. О гомеопатических лекарственных средствах, разрешенных для медицинского применения в Российской Федерации / Е.В. Ших, В.М. Булаев, О.А. Демидова, Н.Д. Бунятян // Ведомости Научного центра экспертизы средств медицинского применения. - 2014. - № 4. - С. 50-54.

112. Яковлева, А.П. Алкалоиды Galanthus woronowii.VI. Выделение тацеттина / А.П. Яковлева //Журнал общей химии, 1963. - 33 (5). - С.1691-1692.

113. Яковлева, А.П. Изучение алкалоидов подснежника Воронова: автореф. дисс. ... канд. хим. наук. - М.,1964. - 9 с.

114. Abdullaeva, D.U. Alkaloids of KoroZkowia sewerzowii / D.U. Abdullaeva, K. Samikov, R. Shakirov, S.-Yu. Yunusov // Chem. Nat. Compounds. - 1978. - Vol. 14, Iss. 6 - P.702-703.

115. Anallisis: Vino Circe/El Mito de la Diosa Circe. URL: http://jszgblog.blogspot.ru/2013/11/anallisis-vino-circeel-mito-de-la-diosa.html (accessed 26.03.2016).

116. Alzheimer's Association. Fiscal year 2014 annual report http://www.alz.org/annual_report/overview.asp (accessed 14.07.2016).

117. Bastida, J. Chemical and biological aspects of Narcissus alkaloids / J. Bastida, R. Lavilla, F. Viladomat - In the Alkaloids. - 2006, Vol. 63, Cordell, G.A. (Ed.), Elsevier Scientific, Amsterdam. - PP. 87-179.

118. Berkov, S. Alkaloids from Galanthus nivalis /S. Berkov, J. Bastida, F. Viladomat,

C. Codina //Phytochemistry. - 2007. - Vol. 68, No.13. - PP. 1791-1798.

119. Berkov, S. Alkaloid diversity in Galanthus elwesii and Galanthus nivalis / S. Berkov, J. Bastida, B. Sidjimova, F. Viladomat, C. Codina //Chem. Biodivers. -2011. - Vol. 8, No.1. - P. 115-130.

120. Berkov, S. Development and validation of a GC-MS method for rapid determination of galanthamine in Leucojum aestivum and Narcissus ssp.: A metabolomic approach /S. Berkov, J. Bastida, F. Viladomat, C. Codina //Talanta. -2011. - Vol. 83, No 5. - P. 1455-1465.

121. Berkov, S. GC-MS of amaryllidaceous galanthamine-type alkaloids /S. Berkov, F. Viladomat, C. Codina [et al.] // J. Mass Spectrom. - 2012. - Vol. 47, No. 8. - PP. 1065-1073.

122. Berkov, S. Plant sources of galanthamine: phytochemical and biotechnological aspects / S. Berkov, L. Georgieva, V. Kondakova [et al.] // Biotechnol. Biotechnol. Equip. - 2009. - Vol. 23, No. 2. - PP. 1170-1176.

123. Berkov, S. The Genus Galanthus. A Source of Bioactive Compounds. / S. Berkov, J. Bastida, C. Codina. - Phytochemicals. A Global Perspective of Their Role in Nutrition and Health. InTech. - 2012. - PP. 235-254.

124. Bokov, D.O. Homeopathic remedies of snowdrops: key aspects for standardization procedures / D.O. Bokov, I.A. Samylina // Proceedings of the V International scientific-practical conference "Fundamental science and technology -promising developments" (24-25 February 2015). North Charleston, USA. Pharmaceutical sciences, 2015. - No. 2. - PP. 184-186.

125. Bokov, D.O. Phytochemical studies, medicinal uses and pharmaceutical applications of snowdrops / D.O. Bokov, I.A. Samylina // Topical issues of new drugs development: abstracts of international scientific and practical conference of young scientists and student (April 23, 2015). - Kh.: Publishing Office NUPh, 2015. - PP. 60-61.

126. Bokov, D.O. Standardization of homeopathic crude herbal drugs and homoeopathic mother tinctures produced from Voronov's snowdrop (Galanthus woronowii Losinsk.) and common snowdrop (Galanthus nivalis L.) / D.O. Bokov, I.A. Samylina // VII International scientific conference "SCIENCE4HEALTH 2016" (12th april 2016 - 15th april 2016) Moscow: The Faculty of Medicine Peoples' Friendship University of Russia. - P. 17.

127. Bokov D.O. Biologically active compounds of snowdrops and mother tinctures prepared from fresh plants / D.O. Bokov, I.A. Samylina // The 20th International Congress: "Phytopharm 2016"Abstract Book. Saint-Petersburg, Russia (11-14 July 2016). Reviews on clinical pharmacology and drug therapy, 2016 - No. 14. - P. 13.

128. Bokov, D.O. Identification of flavonoids in homeopathic mother tinctures of Galanthus woronowii Losinsk. and Galanthus nivalis L. by ultra-performance liquid chromatography with photodiode arrays and tandem quadrupole mass-selective detectors /D.O. Bokov, I.A. Samylina // Pharm. Chem. J. - 2016. - Vol. 50, No. 7. -P. 458-464.

129. Bokov, D.O. Amaryllidaceae alkaloids GC-MS analysis in Galanthus woronowii and Galanthus nivalis of Russian origin /D.O. Bokov, I.A. Samylina, S.D. Nikolov //Research Journal of Pharmaceutical, Biological and Chemical Sciences. - 2016. -Vol. 7., No. 6. - P. 1625-1629.

130. Bokov, D.O. Macroscopic and microscopic evaluation of Galanthus woronowii Losinsk. and Galanthus nivalis L. homeopathic crude herbal drugs /D.O. Bokov, I.A. Samylina, S.D. Nikolov// International Journal of Pharmacognosy and Phytochemical Research. - 2017. - Vol.9, No.1 - PP. 58-64.

131. Bokov, D.O. Amino acid composition of Galanthus woronowii Losinsk. and Galanthus nivalis L. homoeopathic mother tinctures /D.O. Bokov, I.A. Samylina, S.D. Nikolov // Journal of Chemical and Pharmaceutical Sciences. - 2017. - Vol. 10, No.1 - PP. 345-347

132. Bokov, D.O. Comparison of the chemical compositions of Galanthus woronowii Losinsk. and Galanthus nivalis L. homeopathic mother tinctures by gas chromatography with mass-selective detection /D.O. Bokov, I.A. Samylina // Pharm. Chem. J. - 2017. - Vol. 50. - No. 10. - PP. 659-667.

133. Bokov, D.O. Hydroxycinnamic and organic acids of snowdrops (Galanthus L.) /D.O. Bokov, A.D. Malinkin, I.A. Samylina, V.V. Bessonov // Journal of Applied Pharmaceutical Science. - 2017. - Vol. 7, No. 2. - PP. 36-40.

134. Bokov, D.O. HPLC/RI and HPLC/PDA phytochemical analysis of free and bound carbohydrates in Galanthus woronowii Losinsk. and G. nivalis L.

homeopathic matrix tinctures/D.O. Bokov, I.A. Samylina, S.D. Nikolov// Pharmaceutical Chemistry Journal - Vol. 50. - No. 12. - PP. 810-813.

135. Briggs, S.K. Alkaloids of the Amaryllidaceae. VII. Alkaloids containing the hemiacetol or lactone group / S.K. Briggs, P.F. Highet, R.J. Highet, W.C. Wildman // J. Amer. Chem. Soc. - 1956. - Vol. 78, No. 12. - P. 2899-2904.

136. Boit, H.G. Über Amaryllidaceen-Alkaloide. III. Mitt. Über die Alkaloide der Zwiebeln von Galanthus nivalis / H.G. Boit // Chem. Ber. - 1954. - Vol. 87, No. 5.

- P. 724.

137. Bonner J., Varner J.E. / J. Bonner, J.E. Varner - Plant Biochemistry. -Burlington: Elsevier Science. - 2012. - PP. 525-557.

138. Buckingham, J. Dictionary of Alkaloids, with CD-ROM/ J. Buckingham, K.H. Baggaley, A.D. Roberts, L.F. Szabo, (Eds.). CRC press, 2010. - 2290 p.

139. Chase M.W. An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG III / M.W. Chase // Bot J Linn Soc.

- 2009. - No. 161. - PP. 105-121.

140. Citoglu, G. Antiinflammatory effects of lycorine and haemanthidine / G. Citoglu, M. Tanker, B. Gumusel //Phytotherapy Research. - 1998. - Vol. 12, No. 3. - PP. 205-206.

141. Claessens, H.A. High-performance liquid chromatographic determination of galanthamine, a long-acting anticholinesterase drug, in serum, urine and bile / H.A. Claessens, M. Van Thiel, P. Westra, A.M. Soeterboek // J. Chromatogr. B Biomed. Sci. Appl. - 1983. - Vol. 275. - PP. 345-353.

142. Clement, B. Toxic amines and alkaloids from Acacia rigidula / B.Clement, C. Goff, D. Forbes //Phytochemistry. - 1998. - Vol. 49, No. 5. - PP. 1377-1380.

143. Evidente, A. Further experiments on structure-activity relationships among lycorine alkaloids / A. Evidente, O. Arrigoni, R. Luso [et al.] // Phytochemistry. -1986. - Vol. 25, No. 12. - PP. 2739-2743.

144. Gopalakrishnan, S. Determination of biologically active constituents of the fruits of Cucumis sativus Linn. using GC-MS analysis / S. Gopalakrishnan, T. Kalaiarasi //Int J Biol Pharm Res. - 2013. - Vol. 4. - PP. 523-527.

145. Grutzendler, J. Cholinesterase Inhibitors for Alzheimer's Disease / J.Grutzendler, J.C. Morris // Drugs. - 2001. - Vol. 61, No. 1. - PP. 41-52.

146. Harborne, J.B. The Flavonoids: Advances in Research since 1980 / J.B. Harborne - London: Springer, 2013 (softcover reprint of the original 1st ed. 1988 edition). -621 p.

147. Heinrich, M. Galanthamine from Galanthus and other Amaryllidaceae-chemistry and biology based on traditional use / M. Heinrich // The Alkaloids: Chemistry and Biology. - 2010. - Vol. 68. - PP. 157-165.

148. Heinrich, M. Galanthamine from snowdrop-the development of a modern drug against Alzheimer's disease from local Caucasian knowledge / M. Heinrich, H.L. Teoh // Journal of Ethnopharmacology. - 2004. - Vol. 92, No. 2. - PP. 147-162.

149. Helios Homoeopathy [Official website]. Snowdrop. URL: https://www.helios.co.uk/shop/snowdrop (accessed. 20.03.2017).

150. Hollick, J.J. Pyranone, thiopyranone, and pyridone inhibitors of phosphatidylinositol 3-kinase related kinases. Structure-activity relationships for DNA-dependent protein kinase inhibition, and identification of the first potent and selective inhibitor of the ataxia telangiectasia mutated kinase / J.J. Hollick [et al.] //Journal of medicinal chemistry. - 2007. - Vol. 50, No. 8. - PP. 1958-1972.

151. Holy Moly: Hermes' Anticholinesterase Antidote // Anesthesiology. 2014. Vol.121. P. 371. (doi: 10.1097/01.anes.0000451816.76346.cd) URL: anesthesiology.pubs.asahq. org/article.aspx?articleid=1917625 (accessed 26.03.2016).

152. Homeopatic Pharmacopoeia of the Unated States. (Pharmacopoia of the American institute of homoeopathy/ Copyright 1988 by the Homeopatic Pharmacopoeia Convention of the Unation States.) URL: http://www.hpus.com/ (accessed 11.05.2016).

153. Homoeopathic Repetitorium / Meteria Medica in Tabular Form. Publihed by Dr. Willmar Schwabe, Karlsruhe. 1994 Edition. - 165 p.

154. Hong, S.H. Studies on alkaloids of Amaryllidaceae. VI. Identification of galanthamine and lycoramine by thin-layer chromatography / S.H. Hong, J.F. Li, R.X. Xu // Chih Wu Hsueh Pao. - 1981. - Vol. 23. - PP. 334-337.

155. Ivanov, I. Galanthamine and related alkaloids production by Leucojum aestivum L. shoot culture using a temporary immersion technology / I. Ivanov, V. Georgiev, M. Georgiev [et al.] // Appl. Biochem. Biotechnol. - 2011. - Vol. 163, No. 2. - PP. 268-277.

156. Iwashina, T. The structure and distribution of the flavonoids in plants / T. Iwashina // J. Plant Res. - 2000. - Vol. 113, No. 3. - PP. 287-299.

157. Jagtap, S. HPTLC analysis of flavonoids in bulb extracts of Crinum woodrowii Baker, a critically endangered plant / S. Jagtap // J. Acad. Indus. Res. (JAIR). -2015. - Vol. 3, No. 11. - PP. 567-572.

158. Jin Z. Amaryllidaceae and Sceletium alkaloids // Nat. Prod. Rep. - 2005. - Vol. 22, No. 1. - PP. 111-126.

159. Kaya, G.I. Quantititative determination of lycorine and galanthamine in Galanthus trojanus and G. cilicicus by HPLC-DAD / G.I. Kaya, D.C. Polat, B. Sarikaya [et al.] // Nat. Prod. Commun. - 2014. - Vol. 9, No. 8. - PP. 1157-1158.

160. Leifertova I., Brazdova V. Alkaloids of Galanthus nivalis grown in Slovakian provinces / I. Leifertova, V. Brazdova // Ceskoslovenska Farmacie. - 1967. - No. 16. - PP. 352-354.

161. Likhitwitayawuid, K. Cytotoxic and antimalarial alkaloids from the bulbs of Crinum amabile / K. Likhitwitayawuid, C.K. Angerhofer, H. Chai [et al.] // J. Nat. Prod. - 1993. - Vol. 56, No. 8. - PP. 1331-1338.

162. Li, H.Y. Alkaloids of Lycoris guangxiensis / H.Y. Li, G.E. Ma, Y. Xu, S.H. Hong // Planta Medica. - 1987. - Vol. 53, No. 3. - PP. 259-261.

163. Liu, J. Effects of lycorine on HL-60 cells via arresting cell cycle and inducing apoptosis / J. Liu, W.X. Hu, L.F. He [et al.] // FEBS letters. - 2004. - Vol. 578, No. 3. - PP. 245-250.

164. Liu, X. Lycorine induces apoptosis and downregulation of Mcl-1 in human leukemia cells / X. Liu, J. Jiang, X. Jiao [et al.] // Cancer letters. - 2009. - Vol. 274, No. 1. - PP. 16-24.

165. McNulty, J. Selective apoptosis-inducing activity of Crinum-type Amaryllidaceae alkaloids. / J. McNulty, J. Nair, C. Codina [et al.] // Phytochemistry. - 2007. - Vol. 68, No. 7. - PP. 1068-1074.

166. McNulty, J. Structure-activity studies on the lycorine pharmacophore: A potent inducer of apoptosis in human leukemia cells / J. McNulty, J. Nair, J. Bastida [et al.] // Phytochemistry. - 2009. - Vol. 70, No. 7. - PP. 913-919.

167. Meister, A. Biochemistry of the amino acids / A. Meister - London: Academic Press, 2012. - 631 p.

168. Miksatkova, P. Isoflavonoids in the Amaryllidaceae family / P. Miksatkova, P. Lankova, L. Huml, O. Lapcik // Nat. Prod. Res. - 2014. - Vol. 28, No. 10. - PP. 690-697.

169. Nollet, L.M.L. Handbook of Food Analysis / L. M. L. Nollet, F. Toldra (ed.) -Two Volume Set. - CRC Press, 2015.

170. Noyan, S. The Gracilines: a novel subgroup of the Amaryllidaceae alkaloids / S. Noyan, G.H. Rentsch, M.A. Onur [et al.] // Heterocycles. - 1998. - Vol. 48, No. 9. -PP. 1777-1791.

171. Sandberg, F. Phytochemische Studien uber die Alkaloide von Pancratium maritimum / F. Sandberg, K.-H. Michel //Lloydia. - 1963. - Vol. 26, No. 2. - PP. 78-90.

172. Sarikaya, B.B. Phytochemical investigation of Galanthus woronowii / B.B. Sarikaya, G.I. Kaya, M.A. Onur [et al.] // Biochem. Syst. Ecol. - 2013. - Vol. 51. -PP. 276-279.

173. Shakirov, R. Alkaloids Plants structures properties / R. Shakirov, M.V. Telezhenetskaya, I.A. Bessonova //Chem. Nat. Comp. - 1996. - Vol. 32. - PP. 737858.

174. Stefanov, Zh. Quantitative and qualitative study of the alkaloid composition of wild and introduced Leucojum aestivum L. populations. Part II. Method for the

simultaneous quantitative determination of galanthamine and some of the major alkaloids in the above ground parts and bulbs of the plant / Zh. Stefanov // Farmatsiya (Sofia). - 1977. - No. 27. - PP. 4-10.

175. Stephen, A.M. Plant carbohydrates / A.M. Stephen - Encyclopedia of Plant Physiology. New Series. Volume 8. Secondary plant products [Bell, AE; Charlwood, BV (Editors)]. - 1980. - P. 555-584.

176. Tencheva, J. Reversed-phase liquid chromatography for the determination of galanthamine and its metabolites in human plasma and urine / J. Tencheva, I. Yamboliev, Z. Zhivkova // J. Chromatogr. B, Biomed. Appl. - 1987. - Vol. 421. -PP. 396-400.

177. Thomsen, T. Stereoselectivity of cholinesterase inhibition by galanthamine and tolerance in humans / T. Thomsen, U. Bickel, J. Fischer, H. Kewitz // Eur. J. Clin. Pharmacol. - 1990. - Vol. 39, No. 6. - PP. 603-605.

178. Torras-Claveria, L. Metabolic profiling of bioactive Pancratium canariense extracts by GC-MS / L. Torras-Claveria, S. Berkov, O. Jauregui [et al.] //Phytochemical Analysis. - 2010. - Vol. 21, No. 1. - PP. 80-88.

179. Tsakadze, D.M. Rutin and hyperoside from Glanthus caucasicus/ D.M. Tsakadze, T. N. Kiparenko, A. Abdusamatov // Chem. Nat. Compd. - 1977. - Vol. 13, Iss. 1. -P. 105.

180. Unver, N. Three new tazettine-type alkaloids from Galanthus gracilis and Galanthus plicatus subsp. byzantinus / N. Unver, S. Noyan, T. Gozler [et al.] // Planta medica. - 1999. - Vol. 65, No. 04. - PP. 347-350.

181. Washington Homeopathic Products [Official website]. Galanthus Nivalis - Pills. URL: http.//www.homeopathyworks.com/product.php?xProd=7910 (accessed. 23.03.2016).

182. Weniger, B. Cytotoxic Activity of Amaryllidaceae Alkaloids. / B. Weniger, L. Italiano, P. Beck [et al.] //Planta medica. - 1995. - Vol. 61, No. 1. - PP. 77-79.

183. Willis, J.C. Amaryllidaceae / J.C. Willis - In: Shaw, A.H.K. (Ed.), A Dictionary of the Flowering Plants & Ferns, 8th edn. Cambridge University Press, Cambridge. -1988.

184. World Checklist of Selected Plant Families. URL: apps.kew.org/wcsp (accessed 12.06.2016).

185. Wurst, F. Eine neue Methode zur quantitativen Bestimmung von Galanthamin in Drogenextracten von Leucojum aestivum / F. Wurst, T. Prey, L. Puchinger, E. Bancher // Journal of Chromatography - 1980. - Vol. 188, No. 2. - PP. 452-456.

186. Vera-Avila, H. Plant phenolic amines: Potential effects on sympathoadrenal medullary, hypothalamic-pituitary-adrenal, and hypothalamicpituitary-gonadal function in ruminants / H. Vera-Avila, T. Forbes, R. Randel // Domest. Anim. Endocrinol. - 1996. - Vol. 13, No. 4. - PP. 285-296.

187. Xiaa, L.I. Determination of galanthamine and lycorine in lycoris herb by HPLC / L.I. Xiaa, H.R. Xiong, L.H. Jiang [et al.] // Chin. J. Appl. Chem. - 2010. - Vol. 27, No. 11. - PP. 1362-1364.

188. Youssef, D.T.A. Acetophenones, a chalcone, a chromone and flavonoids from Pancratium maritimum / D.T.A. Youssef, M.A. Ramadan, A.A. Khalifa // Phytochemistry. - 1998. - Vol. 49, No. 8. - PP. 2579-2583.

189. Zupko, I. Antitumor activity of alkaloids derived from Amaryllidaceae species / I. Zupko, B. Rethy, J. Hohmann [et al.] // In vivo. - 2009. - Vol. 23, No. 1. - PP. 4148.

190. Zwitserse Apotheek [Official website]. Galanthus Nivalis - UNDA-BOIRON. URL: https://www.zwitserseapotheek.com/nl/g-2981263/#/zoeken_op_naam-galanthus_nivalis (accessed 25.03.2016).

ПРИЛОЖЕНИЯ

1. Акт внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России результатов диссертационного исследования от 7 декабря 2016 г.;

2. Направление проектов ФС в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения»;

3. Проект ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие - Galanthus woronowii planta tota recens»;

4. Проект ФС «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная»;

5. Проект ФС «Подснежник белоснежный растения целые свежие - Galanthus nivalis planta tota recens»;

6. Проект ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная»

Приложение 1. Акт внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России результатов диссертационного исследования.

фгбо;

"УТВЕРЖДАЮ"

ектор по учебной работе У им. И.М. Сеченова Минздрава России

Т.М. Литвинова 201 6 г.

АКТ

внедрения в учебный процесс ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России результатов диссертационного исследования Бокова Дмитрия Олеговича на тему «Стандартизация сырья и настоек гомеопатических матричных галантуса» на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по направлению подготовки 33.06.01 - «Фармация» (направленность подготовки 14.04.02 - «Фармацевтическая химия, фармакогнозия»).

Мы, нижеподписавшиеся, к.ф.н., доцент, зав. учебной частью каф. фармакогнозии Бобкова Наталья Владимировна, д.ф.н., чл.-корр. РАН, проф., зав. каф. фармакогнозии Самылина Ирина Александровна, удостоверяем факт внедрения результатов научной работы Бокова Дмитрия Олеговича в учебный процесс кафедры фармакогнозии Образовательного департамента Института фармации и трансляционной медицины ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России. Материалы исследования используются при чтении лекций и проведении семинаров со студентами 3,4 курсов и интернами, а также в области исследований по стандартизации лекарственного растительного сырья и препаратов, содержащих амариллисовые алкалоиды.

Зав. каф. фармакогнозии ОД ИФиТМ ФГБОУ ВО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, чл.-корр. РАН, д.ф.н., проф.

а?-

И.А. Самылина

Зав. учебной частью каф. фармакогнозии ОД ИФиТМ ФГБОУ ВО Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России, к.ф.н., доц.

Н.В. Бобкова

Приложение 2. Направление проектов ФС в ФГБУ «Научный центр экспертизы средств

медицинского применения»

Министерство Здравоохранения РФ Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования

Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Институт фармации и трансляционной медицины Кафедра фармакогнозии 117418, Москва, Нахимовский пр., д. 45 тел. [phone]

Генеральному директору ФГБУ «Научный центр экспертизы средств медицинского применения» Минздрава РФ, доктору медицинских наук, заслуженному врачу РФ Ю.В. ОЛЕФИРУ

127051, г. Москва, Петровский бульвар, 8, строение 2

Глубокоуважаемый Юрий Витальевич!

Институт фармации и трансляционной медицины федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Первый Московский государственный медицинский университет имени И.М. Сеченова» Министерства здравоохранения Российской Федерации направляет Вам проекты фармакопейных статей (ФС) «Подснежник Воронова растения целые свежие - Galanthus woronowii planta tota recens», «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», «Подснежник белоснежный растения целые свежие - Galanthus nivalis planta tota recens»' «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», для включения в ГФ РФ следующего издания, разработанные сотрудниками кафедры фармакогнозии в результате выполнения диссертационной работы.

Приложение: \

2.

3.

4.

5.

6.

7.

Проект ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие -Galanthus woronowii planta tota recens», на 16 стр. Пояснительная записка к проекту ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие - Galanthus woronowii planta tota recens», на 11 стр.

Проект ФС «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», на 10 стр. Пояснительная записка к проекту ФС «Galanthus woronowii, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», на 11 стр. Проект ФС «Подснежник белоснежный растения целые свежие - Galanthus nivalis planta tota recens», на 16 стр. Пояснительная записка к проекту ФС «Подснежник белоснежный растения целые свежие - Galanthus nivalis planta tota recens», на 11 стр.

Проект ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», на 10 стр. Пояснительная записка к проекту ФС «Galanthus nivalis, Galanthus - Настойка гомеопатическая матричная», на 11 Электронный носитель с материала^

1 экз.

1 экз.

1 экз.

1 экз.

1 экз.

1 экз.

- 1 экз.

Директор института фармации и медицины ФГБОУ ВО Первого МГ Сеченова Минздрава России, к.ф.н.

Зав. каф, фармакогнозии институт! трансляционной медицины ФГБО МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава чл.-корр. РАН, д.ф.н., проф.

Исполнители: Д.О. Боков, 8-(925)-358-84-27

Приложение 3. Проект ФС «Подснежник Воронова растения целые свежие -

Galanthus woronowii planta tota recens»

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Подснежник Воронова растения ФС 42 -

целые свежие Водится впервые Galanthus woronowii planta tota recens_

Настоящая фармакопейная статья распространяется на свежесобранные ранней весной в марте-апреле целые растения дикорастущего или культивируемого подснежника Воронова - Galanthus woronowii Losinsk. семейство амариллисовые - AmaryШdaceae, используемые для приготовления настойки гомеопатической матричной.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Свежее цельное сырьё подснежника Воронова представляет собой растение целиком, состоящее из надземной (листья, цветоносы и цветки) и подземной (луковица и корни) частей. Луковица грушевидной формы, длиной 3,0 см, диаметром 2,5 см. Наружная поверхность слегка морщинистая, покрыта жёлто-коричневыми кожистыми чешуями. Расположение наружных чешуй луковицы ступенчатое. Цвет луковицы после

удаления кроющих чешуй белый. Корни цилиндрические, шнуровидные, длиной до 25 см, в диаметре до 2 мм, белые. Листья простые, широколанцетные, заостренные, ярко-зелёные с желтоватым оттенком с голой блестящей поверхностью, с характерными чечевичками на поверхности и двумя неразвитыми продольными складками, с килем на нижней поверхности, без черешка, суживающиеся у основания и постепенно переходящие в длинные влагалища. Длина влагалища листа 3,5-6,0 см, ширина листа 1,5-2,5 см, длина листа 15-23 см, толщина листа 3,6-4,2 мм. В почке один лист обхватывает другой. Восковой налёт на листьях отсутствует. Край листа цельный, жилкование параллельное. Цветонос цилиндрический, ребристый, голый, длиной 9-15 см, толщиной до 2,5 мм, зелёного цвета. Цветок одиночный, обоеполый, с венчиковидным околоцветником белого цвета, раздельнолепестный; прицветник линейный, пленчатый длиной до 4 см, длина цветоножки 4,5 см, 3 наружных листочка околоцветника обратнояйцевидные, слабовогнутые длиной 2,3 см шириной 1,3 см; 3 внутренних листочка околоцветника шириной 0,8 см, длиной 1,2 см, книзу клиновидно суженные, плоские, прямостоячие, наверху с выемкой и крупным подковообразным зелёным пятном размером 1,6 мм. 6 тычинок на коротких нитях, прикрепленных к основанию околоцветника, длиной 0,6 см, пыльники с остроконечиями; завязь нижняя, трёхгнёздная, продолговатая, длиной 0,3-0,4 см, столбик нитевидный с острым рыльцем. Запах сырья слабый специфический, вкус не определяется.

Микроскопические признаки. Листья. Листовая пластинка дорзовентрального типа в основании треугольной формы имеет длинные края, которые загибаются во внутрь. При рассмотрении с верхней и нижней стороны листа с поверхности видны клетки эпидермиса, вытянутые по длине листа, прямоугольной формы с прямыми стенками (длиной - 200-480 мкм, шириной -25-35 мкм). Стенки клеток эпидермиса имеют четковидное утолщение. Устьица округлые (диаметром - 45-55 мкм), окружены 4 (реже 5) эпидермальными клетками (тетра- и пентацитный типы). Частота встречаемости устьиц с нижней стороны листа - 20-25 на 1 мм2, с верхней - до 10-15 на 1 мм2. Кутикула гладкая,

местами продольно-морщинистая. Мезофилл листа чётко не дифференцирован на палисадную и губчатую ткани, состоит из округлых клеток величиной 35-60 мкм в диаметре. Несколько рядов клеток мезофилла, прилегающих к верхнему эпидермису, имеют незначительно удлиненные в радиальном направлении клетки. В центральной части мезофилл обладает рыхлой структурой, тем самым образуя крупные воздухоносные полости, которые расположены между проводящими пучками. В периферической части мезофилла видны клетки, содержащие пучки рафид оксалата кальция (70-120 мкм), частота встречаемости клеток с рафидами 1-2,5 на 1 мм . Проводящие пучки боковых и центральной жилок коллатерального типа. Сосудисто-волокнистый пучок включает сетчатые и лестничные сосуды и спиральные трахеиды.

Прицветники. Строение прицветника аналогично строению листа.

Цветки. Эпидермис венчика с верхней и нижней стороны состоит из многоугольных прямостенных, почти изодиаметрических клеток (диаметром 6080 мкм) с сосочковидными выростами. Сосочковидные выросты нижнего эпидермиса развиты сильнее. Кутикула продольно-морщинистая. Устьица отсутствуют. Пыльцевые зерна овальной формы, однобороздные, гетерополярные с гладкой поверхностью (длина 21-26 мкм, ширина 16-19 мкм).

Цветонос. Эпидермис цветоноса представлен клетками прямоугольной формы (длиной - 190-470 мкм, шириной - 23-34 мкм), стенки прямые, кутикула ровная. Устьица тетрацитного типа, частота встречаемости устьиц - 19-22 на 1мм , размер аналогичен устьичным комплексам листа. В периферической части мезофилла цветоноса имеются клетки с пучками рафид оксалата кальция (75-135 мкм), частота встречаемости клеток с рафидами 1-2,5 на 1 мм .

Луковица. Наружные чешуи представляют собой омертвевшие оболочки с полностью деформированными клетками паренхимы. Внешний и внутренний эпидермисы наружной чешуи состоят из клеток прозенхимного типа с закругленными углами и четковидными утолщениями. Длина клеток внешнего эпидермиса - 120-230 мкм, ширина - 30-40 мкм. Длина клеток внутреннего эпидермиса - 110-225мкм, ширина - 25-35 мкм. Запасающие чешуи по строению

подобны листу. Внешний и внутренний эпидермисы этих чешуй состоят из овальных клеток, слегка удлиненных в тангентальном направлении или изодиаметрические. Длина клеток внешнего эпидермиса - 130-245 мкм, ширина -55-70 мкм. Длина клеток внутреннего эпидермиса - 120-240 мкм, ширина - 45-65 мкм. Основная паренхима их состоит из тонкостенных округлой формы клеток (диаметром 80-105 мкм), заполненных крахмальными зернами округло-яйцевидной формы (диаметром 5-45 мкм). Крупные крахмальные зёрна имеют 23-х, реже 4-х лучевую трещину. В наружной части паренхимы чешуй наблюдаются клетки с рафидами (длиной 85-145 мкм), которые расположены параллельно продольной оси луковицы в виде пучков, частота встречаемости клеток с рафидами 1,5-3 на 1 мм . Проводящие пучки закрытого коллатерального типа с паренхимной обкладкой, расположены ближе к внутренней стороне чешуй, имеют слабо развитые сосудистую и ситовидную части.

Корни. Корень первичного строения, клетки эпидермиса крупные (30-40 мкм), с утолщенной внешней стенкой, овальной формы, удлинены в радиальном направлении. Волоски представляют собой эпидермальные выросты длиной до 350 мкм. Клетки коровой паренхимы тонкостенные, округлой формы (35-45 мкм) с многочисленными межклетниками различного размера и формы. Внутренняя часть коры имеет клетки овально-многоугольной формы, которые удлинены в радиальном направлении (35-45 мкм). Центральный осевой цилиндр малого диаметра (55-60 мкм). Древесинная часть корня состоит, как правило, из одного крупного сосуда и четырех лучей сосудов малого диаметра (тетрархное строение). Флоэма представлена также четырьмя лучами. Эндодерма выражена нечетко.

Рис. 1. Верхний эпидермис листа (1), нижний эпидермис листа (2). а - устьичный комплекс. Увел. 400*

Рис. 2. Рафиды оксалата кальция в клетках мезофилла листа. Увел. 400*.

и

» V14 '

ч. ^ЛЛг ГТ

Ч ! V \» Vе- \ •

< \ )

■ > >■ V

л, а 1

I

4 ,

.. 1 Ж ■ 1

Г"

\ -- Л s 1 V ! 1

Лг ;

\7

Г' ' '1

С V л

■ , »• ■ I А!

Д'Д" Ч\г\/ч

' *>-4 ч

Ч 1 I г ¥ I г^^Я ' . к У \ I

• ч '

Л ч

I

а' ' х,.^ ' "СЧ N2» >* . 1 М I.к к, ^ч?

Рис. 3. Эпидермис листочка околоцветника с внешней стороны. 1 - клетки эпидермиса; 2 - сосочковидные выросты. Увел. 400*.

2

Рис. 4. Эпидермис наружной чешуи с внешней стороны (1), клетки паренхимы запасающей чешуи (2). а - крахмальные зерна. Увел. 400*.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография (амариллисовые алкалоиды)

Приготовление растворов

Приготовление раствора стандартного образца (СО) галантамина. Около 10,0 мг (точная навеска) СО галантамина основания помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и растворяют в 8 мл 96 % спирта этилового при перемешивании. Доводят объём раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок хранения раствора 1 мес.

Приготовление раствора стандартного образца (СО) ликорина. Около 10,0 мг (точная навеска) СО ликорина основания помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл и растворяют в 8 мл 96 % спирта этилового при перемешивании. Доводят объём раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок хранения раствора 1 мес.

Приготовление модифицированного реактива Драгендорфа. Раствор I. 0,85 г висмута нитрата основного растворяют в 40 мл воды и 10 мл уксусной кислоты, взбалтывают в течение 15 мин. Раствор II. 8 г калия йодида растворяют в 20 мл воды. Растворы I и II смешивают (основной раствор). Непосредственно перед применением 10 мл основного раствора смешивают с 10 мл 1 % водного раствора аскорбиновой кислоты и 10 мл 95 % этанола.

Приготовление уксусной кислоты 20 %. 20,4 г уксусной кислоты разбавляют водой до 100 мл.

Навеску 2,0 г измельчённого в ступке до кашицеобразного состояния сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 30 мл 10% раствора аммиака, выдерживают в течение 30 мин при постоянном перемешивании. Затем добавляют 15 мл хлороформа и встряхивают в течение 30 мин. Хлороформное извлечение сливают и повторяют операцию ещё два раза с новыми порциями хлороформа (по 15 мл). Извлечения объединяют, хлороформ отгоняют и выпаривают досуха.

Полученный остаток растворяют в 30 мл 10% раствора соляной кислоты. Кислый раствор фильтруют через бумажный складчатый фильтр, подщелачивают раствором аммиака до рН= 9, затем снова последовательно экстрагируют хлороформом 3 раза по 20 мл. Извлечения объединяют, добавляют 10 г безводного сульфата натрия, перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Затем хлороформ отгоняют, полученный остаток растворяют в 3 мл метанола (испытуемый раствор).

На стартовую линию аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой основе размером 10*15 см наносят раздельно полосами 50 мкл испытуемого раствора и 5 мкл СО галантамина и СО ликорина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение 1 часа смесью: диэтиловый эфир - метанол - диэтиламин (90:5:5) и хроматографируют восходящим способом в указанной системе растворителей. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, пластинку вынимают, высушивают на воздухе до удаления следов растворителей. Затем пластинку обрабатывают модифицированным реактивом Драгендорфа и нагревают в сушильном шкафу при температуре 100-105 °С в течение 5 мин.

На хроматограмме раствора СО ликорина должна обнаруживаться зона адсорбции оранжевого цвета; на хроматограмме раствора СО галантамина - зона адсорбции оранжевого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться следующие зоны: зона оранжевого цвета на уровне зоны СО ликорина; зона оранжевого цвета на уровне зоны СО галантамина; допускается обнаружение дополнительных зон.

2. Тонкослойная хроматография (флавоноиды) Приготовление растворов

Раствор стандартного образца (СО) кверцетина. Около 0,005 г СО кверцетина (кверцетина дигидрата) растворяют в 10 мл 96 % спирта этилового при перемешивании до полного растворения. Срок годности раствора не более 3 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Раствор стандартного образца (СО) изорамнетина. Около 0,005 г СО изорамнетина растворяют в 10 мл 96 % спирта этилового при перемешивании до полного растворения. Срок годности раствора не более 3 мес при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Алюминия хлорида раствор 5 %. 5,0 г алюминия хлорида безводного или 9,0 г алюминия хлорида 6-водного растворяют в 80 мл спирта этилового 70%, фильтруют в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора тем же спиртом до метки. Срок годности раствора 3 мес.

Навеску 2,0 г измельчённого в ступке до кашицеобразного состояния сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 25 мл спирта 70 %. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут, периодически встряхивают для смывания частиц сырья со стенок. После охлаждения до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр. Затем полученное спиртовое извлечение упаривают на водяной бане, остаток высушивают в сушильном шкафу при 110 °С в течение 10 минут, затем добавляют 10 мл 15% серной кислоты, перемешивают до растворения осадка. Полученный раствор помещают в коническую колбу, объемом 100 мл, присоединяют к обратному холодильнику, нагревают на кипящей водяной бане в течение 2 часов. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр. Осадок, оставшийся на фильтре, промывают водой очищенной, высушивают в сушильном шкафу при 110 °С в течение 10 минут и растворяют в 5 мл горячего 96% этанола (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля с флуоресцентным индикатором на алюминиевой подложке размером 10 * 15 см наносят 20 мкл испытуемого раствора, рядом наносят 10 мкл раствора стандартного образца СО кверцетина и СО изорамнетина. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей н-бутанол - уксусная кислота ледяная - вода (4:1:2), и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителя пройдет около 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, затем обрабатывают алюминия хлорида раствором 5 % в спирте 70 %, после чего просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме раствора СО кверцетина должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета, на хроматограмме раствора

СО изорамнетина также должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета.

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться следующие зоны адсорбции: зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО кверцетина; зона адсорбции с флуоресценцией желто-зеленого цвета на уровне зоны адсорбции на хроматограмме раствора СО изорамнетина; допускается обнаружение дополнительных зон адсорбции (флавоноиды).

3. Около 2,0 г измельчённого до кашицеобразного состояния помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, добавляют 10 мл 2 % раствора серной кислоты, выдерживают в течение 40 мин на лабораторном встряхивателе, затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр. 3 мл полученного извлечения помещают в пробирку добавляют 3-5 капель 1% раствора кремневольфрамовой кислоты. Появляется муть, переходящая в хлопьевидный осадок (амариллисовые алкалоиды).

4. Около 2,0 г измельченного в ступке до кашицеобразного состояния сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 10 мл спирта 70 %, нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 30 мин. После охлаждения до комнатной температуры извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор). К 5 мл извлечения прибавляют 0,2 г порошка магния и 2 мл концентрированной кислоты хлористоводородной разведенной; постепенно должно появиться розовое окрашивание (флавоноиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не менее 75 %.

Посторонние примеси

Органическая примесь. Не более 0,5 %.

Минеральная примесь. Не более 1 %.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. Определение проводят согласно ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. Определение проводят согласно ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на галантамин не менее 0,05 %.

Сумма амариллисовых алкалоидов

Приготовление растворов

Ацетата аммония раствор 20 Ммоль/л в воде. Около 1,542 г (точная навеска) ацетата аммония переносят в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят водой для хроматографии до метки и перемешивают. При необходимости проводят дегазацию и фильтрацию через мембранный фильтр с размером пор не более 0,45 мкм.

Приготовление подвижной фазы. В мерную колбу вместимостью 1 л вносят 100 мл ацетата аммония раствора 20 Ммоль/л в воде, добавляют 500 мл ацетонитрила и перемешивают, доводят объем колбы до метки ацетонитрилом и снова перемешивают.

Приготовление стандартных растворов галантамина. Около 20,0 мг (точная навеска) субстанции галантамина растворяют в мерной колбе вместимостью 100 мл в ацетонитриле и доводят до метки тем же растворителем, получая стандартный раствор галантамина концентрацией 200 мкг/мл (раствор А1). 10 мл раствора А1 помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили объем колбы тем же растворителем до метки, получая раствор концентрацией 20 мкг/мл (раствор Б1).1 мл раствора А1 помещали в мерную колбу на 100 мл и доводили объем колбы тем же растворителем до метки, получая раствор концентрацией 2 мкг/мл (раствор В1).

Приготовление калибровочных растворов галантамина. Для приготовления калибровочных растворов с концентрацией раствора галантамина 2,5; 5,0; 10,0; 15,0; 25,0; 50,0 мкг/мл, проводят разбавление

стандартных растворов ацетонитрилом в соответствии с таблицей 1.

Таблица 1.

_Приготовление калибровочных растворов галантамина_

Концентрация калибровочного раствора, мкг/мл Концентрация стандартного раствора, мкг/мл Объем стандартного раствора, мл Объем калибровочного раствора, мл

2,5 20 0,125 1

5,0 20 0,25 1

10,0 20 0,5 1

15,0 20 0,75 1

25,0 200 0,125 1

50,0 200 0,25 1

Растворы хранят в плотно закрытой емкости в холодильнике не более 1 мес.

Проверка пригодности хроматографической системы.

Результаты анализа считаются достоверными, если выполняются следующие условия:

1. эффективность хроматографической колонки должна быть не менее 17 000 теоретических тарелок для пика галантамина;

2. коэффициент симметрии для пика галантамина должен быть не менее 0,8 и не более 1,5.

Аналитическую пробу сырья растирают в ступке до кашицеобразного состояния. Около 10,0 г (точная навеска) сырья помещают в центрифужную пробирку объемом 50 мл, добавляют 10 мл метанола, экстрагируют в ультразвуковой ванне при комнатной температуре (25 °С) в течение 40 мин. После пробирку центрифугируют при 3500 об/мин в течение 10 мин, надосадочную жидкость переносят в колбу объемом 100 мл, остаток смешивают с новой порцией экстрагента и повторяют операцию еще два раза. Растворитель упаривают досуха на вакуумном ротационном испарителе при 60 °С, полученный сухой остаток растворяют в 15 мл водного 5% раствора хлороводородной кислоты. К полученному раствору добавляют 15 мл диэтилового эфира, встряхивают в течение 10 мин на лабораторном шейкере, верхний эфирный слой отбрасывают, экстракцию повторяют трижды. Водную фазу подщелачивают,

добавляя 10% раствора аммиака до рН 9, затем проводят трехкратную экстракцию по 20 мл хлороформа. Хлороформные экстракты объединяют, добавляют 10 г безводного сульфата натрия, перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Органический растворитель удаляют на вакуумном ротационном испарителе при 60 °С. Полученный экстракт растворяют в 10 мл подвижной фазы (испытуемый раствор). 1 мл испытуемого раствора помещают в виалы для хроматографирования.

Колонка

Предколонка

ПФ

Способ элюирования Скорость потока Температура колонки Детектор

Длина волны Объем пробы Время записи данных

Условия хроматографирования

- 150*4,6 мм, сорбент поверхностно-пористый непривитый силикагель (С18), 2,7 мкм (Н1ЫС)

- 5*4,6 мм, сорбент поверхностно-пористый непривитый силикагель (С18), 2,7 мкм (Н1ЫС)

Смесь ацетонитрила с ацетата аммония раствором 20 Ммоль/л в воде (9:1)

- изократический

- 0,8 мл/мин

- 35± 2°С

- спектрофотометрический или диодная матрица

- 290 нм

- 20 мкл

- 20 мин

Хроматографируют калибровочный раствор СО галантамина и ликорина с концентрацией 10 мкг/мл, получая не менее 3 хроматограмм. Результаты считаются достоверными, если выполняются требования теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

Хроматографируют последовательно калибровочные растворы и строят калибровочный график зависимости площади СО галантамина от его концентрации. Затем хроматографируют испытуемый раствор, получая не менее 3 хроматограмм.

Расчет содержания суммы амариллисовых алкалоидов проводят методом внешнего стандарта. Обсчету подлежат пик галантамина, а также пики с УФ-спектрами, характерными для амариллисовых алкалоидов (максимумы поглощения при 235 и 290 нм).

Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на галантамин и абсолютно сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

^ • Сд • 10 50 • т • (100 - Ш)

где £ - сумма площадей пиков галантамина и других амариллисовых алкалоидов на хроматограмме испытуемого раствора; Бо - площадь пика на хроматограмме раствора СО галантамина; Сзг - концентрация стандартного раствора, мкг/мл т - масса навески сырья, мкг; Ж - влажность сырья, %.

Содержание суммы амариллисовых алкалоидов в пересчете на галантамин и абсолютно сухое сырье в процентах (X), используя калибровочный график, вычисляют по формуле:

_ С • 10 Х _т~(100—Щ'

где: С - содержание суммы амариллисовых алкалоидов в 1 мл испытуемого раствора, найденное по калибровочному графику, мкг; т - масса навески сырья, мкг; Ж - влажность сырья, %.

Упаковка, маркировка и транспортирование. Осуществляется с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья».

Упаковка. В ящики с отверстиями в боковых стенках и крышках по 0,5 кг

нетто.

Транспортирование. Свежесобранное сырье следует отправлять для переработки немедленно после сбора любым видом транспорта.

Хранение. Хранение ЛРС осуществляется с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов». Сырье подлежит переработке в течение 24 часов с момента сбора.

Сырье для получения настойки гомеопатической матричной.

Зав. кафедры фармакогнозии

Института фармации и трансляционной медицины

ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова

докт. фарм. наук, член-корр. РАН И.А. Самылина

« »

201 г.

Аспирант

кафедры фармакогнозии

Института фармации и трансляционной медицины ФГБОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова