Фармакогностическое изучение и стандартизация сырья ириса болотного тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Тихомирова Екатерина Алексеевна
- Специальность ВАК РФ00.00.00
- Количество страниц 171
Оглавление диссертации кандидат наук Тихомирова Екатерина Алексеевна
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика семейства ирисовых (Iridaceae)
1.2. Характеристика рода ирис (Iris L.)
1.3. Ботаническая характеристика ириса болотного
1.4. Химический состав ириса болотного
1.5. Фармакологическое действие и хозяйственное применение ириса болотного
1.6. Анализ нормативной документации на виды ирисов
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ
ГЛАВА 2. ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ХАРАКТЕРИСТИК ПОДЛИННОСТИ КОРНЕВИЩ ИРИСА БОЛОТНОГО
3.1. Изучение внешних признаков сырья
3.2. Микроскопический анализ корневищ ириса болотного
3.3. Сравнительное изучение корневищ ириса болотного и возможных примесей
3.3.1. Сравнительный анализ внешних признаков
3.3.2. Сравнительное изучение анатомического строения
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА КОРНЕВИЩ ИРИСА БОЛОТНОГО
4.1. Установление состава основных групп биологически активных веществ
4.2. Количественное определение биологически активных веществ в корневищах ириса болотного
4.2.1. Определение влажности и экстрактивных веществ
4.2.2. Определение содержания полисахаридов
4.2.3. Определение отдельных фракций полисахаридов и состава моносахаров
4.2.3.1. Выделение фракций полисахаридов
4.2.3.2. Анализ состава моносахаров
4.2.4. Определение содержания дубильных веществ
4.2.4.1. Определение суммы дубильных веществ в пересчете на танин
4.2.4.2. Определение суммы дубильных веществ, осаждаемых коллагеном
4.2.4.3. Определение фенольных соединений с использованием реактива Фолина - Чокальтеу
4.2.4.4. Валидация методики определения фенольных соединений с использованием реактива Фолина -Чокальтеу
4.2.4.5. Анализ компонентного состава катехинов
4.2.5. Определение содержания органических кислот
4.2.6. Определение содержания эфирного масла и жирных кислот
4.2.7. Определение содержания флавоноидов
4.2.7.1. Определение суммы флавоноидов и отдельных компонентов
4.2.7.2. Определение содержания изофлавонов
4.2.8. Определение содержания сапонинов
4.3. Изучение минерального состава корневищ ириса болотного
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ
ГЛАВА 5. ПОЛУЧЕНИЕ И АНАЛИЗ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ФОРМ КОРНЕВИЩ ИРИСА БОЛОТНОГО
5.1. Получение и анализ водных извлечений из корневищ ириса болотного
5.2. Получение и характеристика водно-спиртовых извлечений ириса
болотного
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ
ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ КОРНЕВИЩ ИРИСА БОЛОТНОГО
6.1. Изучение антимикробной активности
6.2. Изучение антиоксидантной активности
ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение А. Характеристика гомеопатических препаратов ириса
Приложение Б. Требования нормативной документации к сырью ириса
Приложение В. Параметры хроматографического разделения биологически
активных веществ в корневищах ириса болотного
Приложение Г. Схемы анализа биологически активных веществ корневищ
ириса болотного методом тонкослойной хроматографии
Приложение Д. Схема выделения полисахаридных фракций из корневищ
ириса болотного
Приложение Е. Проект фармакопейной статьи «Ириса болотного корневища
Iridispseudacori rhizomata»
Приложение Ж. Проект инструкции по сбору и сушке корневищ ириса
болотного
Приложение И. Акт внедрения результатов научно-исследовательской работы в работу Испытательной лаборатории Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Центр лекарственного
обеспечения Департамента здравоохранения города Москвы»
Приложение К. Акт внедрения результатов научно -исследовательской
работы в учебный процесс
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Другие cпециальности», 00.00.00 шифр ВАК
Совершенствование контроля качества и стандартизации сырья и водных извлечений, содержащих антраценпроизводные, дубильные вещества, полисахариды и флавоноиды2015 год, кандидат наук Боровикова, Наталья Анатольевна
Фармакогностическое изучение некоторых видов рода Geranium L.2013 год, кандидат фармацевтических наук Разаренова, Ксения Николаевна
Фармакогностическое изучение и стандартизация сырья Malus sylvestris (Яблони лесной)2019 год, кандидат наук Нестерова Надежда Викторовна
Фармакогностическое изучение надземной части сабельника болотного (Comarum palustre L.) произрастающего на Северо-Западе России2009 год, кандидат фармацевтических наук Скляревская, Нелли Владимировна
Фармакогностическое изучение отдельных представителей рода Dioscorea L.2015 год, кандидат наук Бу Вэй
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение и стандартизация сырья ириса болотного»
ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования
Ирис болотный (Iris pseudacorus L.) широко распространен в Европейской части России. Содержит биологически активные вещества (БАВ), среди которых флавоноиды, дубильные вещества, полисахариды, сапонины, терпеноиды и оказывает фармакологические эффекты широкого спектра действия: противовоспалительный, отхаркивающий, ранозаживляющий,
кровоостанавливающий, противомикробный, противопаразитарный и др. Корневища ириса болотного разрешены в РФ к медицинскому применению в качестве компонента сбора по прописи М.Н. Здренко, применяемого как средство вспомогательной терапии при лечении онкологических заболеваний. Как моносырье в настоящее время корневища ириса болотного применяются только как компонент биологически активных добавок (БАД) и в народной медицине при воспалительных заболеваниях верхних дыхательных путей, инфекциях мочевыводящих путей, маточных кровотечениях.
Для применения корневищ ириса болотного в официнальной медицине в качестве лекарственной растительной субстанции, кроме того, для получения лекарственных препаратов необходимо наличие современной нормативной документации (НД). Документом, регламентирующим качество корневищ ириса болотного, является фармакопейная статья ФС № 42-17-72 «Корневища касатика желтого», не соответствующая современным требованиям. Для дальнейшего расширения использования в медицинской практике необходимо провести углубленное фармакогностическое изучение сырья.
В связи с тем, что свободное произрастание ириса болотного в Европейской части Российской Федерации предполагает заготовку сырья от дикорастущих растений, необходимо провести сравнительный анализ с возможными примесями.
Степень ее разработанности
В отечественной и зарубежной научной литературе представлены отдельные работы (Затыльникова О.А., Ковалев В.Н., Михайленко О.А., Базарнова Н.Г., Sary H.G., Jung-Lye Kim, Kassak Р. и др.), касающиеся изучения сырья различных видов ириса: молочно-белого, сибирского, радужного, карликового и др. Изучались таксономические, биоморфологические и фенологические особенности растения, произрастающего в различных регионах России (Новаковская Т.В., Родионенко Г.И.). Ирис болотный рассматривался с позиций получения клеточной культуры (работы Тарбеевой Д.В.). Подробных исследований ириса болотного как источника фармацевтической растительной субстанции (химический состав, фармакологическая активность, вопросы стандартизации) не проводилось.
Цель и задачи исследования
Целью исследования является углубленное всестороннее фармакогностическое изучение корневищ ириса болотного, необходимое для последующего совершенствования нормативной документации и получения суммарных экстракционных препаратов из него.
Для исполнения поставленной цели были выделены следующие задачи:
1. Провести сбор, исследование и анализ научной литературы и нормативной документации по растениям рода ирис и, в частности, ириса болотного.
2. Провести всеобъемлющее морфолого-анатомическое изучение корневищ ириса болотного, собранных в Московской области, изучить вариативность значимых диагностических признаков при измельчении сырья;
3. Провести сравнительный морфолого-анатомический анализ корневищ ириса болотного с возможными примесями - ирисом бледным и аиром болотным;
4. Используя современные физико-химические методы, изучить качественный состав БАВ (биологически активных веществ), провести количественную
оценку содержания основных групп БАВ, исследовать микроэлементный состав корневищ ириса болотного;
5. Изучить состав полисахаридов (ПСХ) растения и дать количественную оценку каждой группы полисахаридов;
6. Охарактеризовать дубильные вещества (ДВ) корневищ ириса болотного: качественный состав, количественное содержание в сырье;
7. Изучить возможность получения из корневищ ириса болотного лекарственных форм (отвары и настойки аллопатические и гомеопатические), и провести их анализ по основным показателям качества на основании требований Государственной Фармакопеи Российской Федерации (ГФ РФ).
8. В рамках требований доказательной медицины экспериментально изучить антимикробную и антиоксидантную активность корневищ ириса болотного.
Научная новизна
Для ириса болотного, произрастающего в Московском регионе, впервые получены полные научно-обоснованные экспериментальные данные по составу БАВ корневищ растения. С использованием современных физико-химических методов анализа, а именно: спектрофотометрия (СФМ), тонкослойная хроматография (ТСХ), высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ), газожидкостная хроматография (ГЖХ), атомно-абсорбционная спектроскопия (ААС) и др., - установлено присутствие полисахаридов, дубильных веществ, флавоноидов, тритерпеновых сапонинов, органических кислот (ОК), эфирного масла (ЭМ), дана характеристика минерального состава корневищ ириса болотного. Дана количественная оценка БАВ, для чего к изучаемому сырью адаптированы известные фармакопейные методики. Получены новые данные по составу полисахаридов, дубильных веществ, минеральному комплексу растения.
В ходе анатомо-морфологического изучения получены новые, углубленные данные, характеризующие корневища ириса болотного, и позволяющие дифференцировать их от возможных примесей. Определены биометрические
характеристики диагностических признаков. Установленные признаки визуализированы.
Из корневищ ириса болотного в лабораторных условиях получены отвары аллопатический и гомеопатический и настойки аллопатические и гомеопатические матричные. Дана характеристика полученных лекарственных форм, определены основные показатели качества.
Экспериментально, с позиций доказательной медицины, установлено антибактериальное и антимикотическое действие и антиоксидантная активность корневищ ириса болотного из Московской области.
Теоретическая и практическая значимость работы
Полученные в ходе исследования результаты позволили собрать новую углубленную информацию относительно состава БАВ ириса болотного и количественно охарактеризовать его. Разработанный и использованный автором комплекс испытаний включает в себя многоступенчатую оценку подлинности сырья (установление диагностических микроскопических характеристик, уточненных и расширенных, качественные реакции и хроматографическое обнаружение БАВ) и количественное определение в изучаемом сырье основных показателей - суммы полисахаридов, дубильных веществ, а также других групп БАВ (суммы флавоноидов, органических кислот, тритерпеновых сапонинов, эфирного масла). Эти данные могут быть применены при идентификации сырья и оценке его качества, а также послужить базой при создании новых лекарственных средств из корневищ ириса болотного. Результаты изучения фармакологической (антимикробной, антимикотической, антиоксидантной) активности можно использовать при дальнейших исследованиях в целях расширения сферы применения сырья и препаратов ириса болотного.
Уточненные данные по морфолого-анатомическому строению корневищ ириса болотного и содержащимся в них БАВ применены при подготовке проекта фармакопейной статьи ФС «Ириса болотного корневища», отвечающего
современным фармакопейным требованиям. В него внесены новые разделы: «определение основных групп БАВ», «количественное определение», показатели безопасности. Дополнены разделы «внешние признаки» (описаны внешние признаки измельченного и порошкованного сырья), «микроскопические признаки» (визуализированы и добавлены особенности микроскопических признаков измельченного и порошкованного сырья, также размеры и встречаемость основных диагностических признаков). Применение в фармацевтической практике разработанной НД приведет к совершенствованию технологии заготовки сырья ириса болотного, полученные в работе результаты позволят более точно проводить рутинный анализ сырья ириса болотного. Данные по лекарственным формам ириса могут быть использованы в производстве препарата «Ириса болотного корневища» и готовых лекарственных форм (ГЛФ).
На основе полученных в ходе работы с сырьем дикорастущего растения ириса болотного данных подготовлен проект Инструкции по сбору и сушке корневищ ириса болотного. Документ содержит информацию, необходимую для правильной заготовки и обработки сырья, а также отделения возможных примесей. В проект Инструкции включено подробное описание внешнего вида растения, условий его произрастания и фаз вегетации (цветение, плодоношение, период покоя), описание сырья - корневищ ириса болотного, приведено описание возможных примесей и отличительные признаки растения и сырья - ириса бледного и аира болотного. Предложены условия и периодичность заготовки сырья, правила сушки, описание сырья и числовые показатели согласно требованиям ГФ РФ.
Методология и методы исследования
В ходе выполнения анализа печатных изданий по теме диссертационной работы использовались все доступные источники информации, включая нормативную документацию РФ и зарубежных стран, научную и справочную литературу. Задействованы все этапы фармакогностического анализа и
стандартизации лекарственного растительного сырья (ЛРС) и лекарственных растительных препаратов (ЛРП): морфолого-анатомический, анализ химического состава, микробиологический. В работе были использованы современное оборудование и методики макро- и микроскопического изучения, химического и физико-химического методов анализа. Статистическая обработка производилась согласно методикам и требованиям Государственной Фармакопеи Российской Федерации XIV издания (ГФ РФ XIV изд.)
Положения, выносимые на защиту
• Результаты детального изучения морфолого-анатомического строения корневищ ириса болотного цельных, измельченных, порошка;
• Результаты определения характерных отличительных признаков сырья ириса болотного и возможных примесей;
• Результаты изучения состава БАВ и минеральных компонентов корневищ ириса болотного;
• Результаты изучения водных и водно-спиртовых экстракционных лекарственных форм из корневищ ириса болотного;
• Результаты изучения антимикробной и антиоксидантной активности корневищ ириса болотного.
Степень достоверности и апробация результатов
Полученные результаты и сделанные выводы основаны на достаточном количестве экспериментальных исследований. В работе использовано современное сертифицированное оборудование. Научные положения, выводы и практические рекомендации обоснованы и являются логическим заключением экспериментальных исследований. Методики, разработанные в ходе работы, были валидированы, что позволило получить достоверные и воспроизводимые результаты. Экспертная оценка подтвердила достоверность первичных материалов.
В работе использован достаточный объем отечественных и иностранных литературных источников.
Основные положения и результаты представлены на: Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медицинская весна-2016» (Москва, 2016), научно-практической конференции «Инновации в медицине и фармации - 2016» (Минск, 2016), IV научно-практической конференции с международным участием: «Молодые учёные и фармация XXI века» (Москва, ВИЛАР, 2016), IV и V научно-практических конференциях «Современные аспекты использования растительного сырья и сырья природного происхождения в медицине» (Москва, 2016, 2017), Республиканской научно-практической конференции с международным участием «Перспективы разработки и внедрения лекарственных средств на основе сырья отечественного и зарубежного происхождения» (Душанбе, 2018), Международной научной конференции «Перспективы лекарственного растениеведения» в честь 100-летия со дня рождения профессора А.И. Шретера (Москва, ВИЛАР, 2018), VII Международной научно-методической конференции «Фармобразование-2018» (Воронеж, 2018); XXVII и XXIX Международных гомеопатических конференциях «Развитие гомеопатического метода в современной медицине» (Москва, 2017, 2019), III научно-практической конференции «Международная интеграция в сфере химической и фармацевтической промышленности» (Москва, РУДН, 2018), International Conference «Scientific research of the SCO countries: synergy and integration» (Beijing, China, 2019), Международной научно-практической конференции «Ароматические и лекарственные растения: интродукция, селекция, агротехника, биологически активные вещества, влияние на человека» (Ялта, 2021), II Международном российско-китайском симпозиуме молодых ученых (Москва, 2021); VIII Международной научно-методической конференции «Фармобразование-2022» «Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Актуальные вопросы разработки и исследования новых лекарственных средств» (Воронеж, 2022).
Апробация работы состоялась на заседании кафедры фармацевтического естествознания Института фармации имени А.П. Нелюбина ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (13.12.2023, г. Москва).
Личный вклад
Главная роль в выборе объекта изучения и направления исследования принадлежит автору. Цели и задачи исследования сформулированы именно автором работы. Непосредственно автором подготовлен план исследования ЛРС и ЛФ, выбраны методы определения и показатели для изучения состава БАВ и основные группы для стандартизации сырья (дубильные вещества, полисахариды, флавоноиды, органические кислоты, сапонины, эфирное масло). На каждом этапе исследования автору принадлежит основная роль. Автором лично получены и интерпретированы все хроматограммы ВЭЖХ, ГЖХ и показания другого измерительного и вспомогательного оборудования. Получены и обработаны спектры поглощения стандартных образцов, извлечений из сырья, лекарственных форм. Автором проведено внедрение и валидация методики количественного определения фенольных соединений в корневищах ириса болотного в пересчете на галловую кислоту; получены сходимые результаты. Установлены такие показатели качества, как влажность сырья, коэффициент водопоглощения, зола общая и нерастворимая в хлористоводородной кислоте, минеральный состав и показатели безопасности сырья. Автором работы осуществлены все манипуляции и расчеты при исследовании антимикробной, антимикотической, антиоксидантной активности изучаемого сырья. Диссертант сам провел статистическую обработку полученных результатов исследований. Результаты работы были доложены в научных публикациях и внедрены в работу научно-практических и образовательных учреждений непосредственно автором. Текст диссертации и автореферата подготовлены именно автором.
Внедрение результатов исследования
Полученные в ходе диссертационного исследования результаты многоуровневого изучения корневищ ириса болотного использованы при подготовке проекта фармакопейной статьи «Ириса болотного корневища». Расширены и разработаны разделы фармакопейной статьи: внешние признаки, микроскопические признаки, определение основных групп БАВ, испытания, количественное определение основных групп БАВ, числовые показатели и некоторые показатели безопасности.
Подготовлен проект инструкции по сбору и сушке корневищ ириса болотного. Впервые для ЛРС ириса болотного российского региона произрастания создан нормативный документ, регламентирующий правила заготовки. Уточнены характеристики производящего растения, заготавливаемого сырья, возможных примесей, условия произрастания, числовые показатели качества сырья.
Методика количественного определения суммы фенольных соединений в корневищах ириса болотного методом СФМ внедрена в работу аккредитованной испытательной лаборатории Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Центр лекарственного обеспечения Департамента здравоохранения города Москвы» (Акт внедрения б/н от 03.10.2023 г.).
Результаты изучения основных групп БАВ корневищ ириса болотного, характеристик подлинности сырья использованы в учебном процессе кафедры фармацевтического естествознания ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) (Акт внедрения №000327-У от 24.11.2023 г.).
Соответствие диссертации паспорту научной специальности
Научные положения диссертации соответствуют п. 2, 3, 6 паспорта научной специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия.
Связь исследования с проблемным планом фармацевтической науки
Диссертационная работа выполнена согласно плану и соответственно с тематикой научно-исследовательской работы кафедры фармацевтического естествознания Института фармации им. А.П. Нелюбина ФГАОУ ВО Первый МГМУ имени И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет) по теме: «Фармакогностическое изучение лекарственного растительного сырья, лекарственных сборов, лекарственных форм из сырья и разработка методов их стандартизации с учетом влияния антропогенных факторов, оценки качества и сертификации».
Публикации по теме диссертации
По результатам исследования по теме диссертации автором опубликовано 20 печатных работ, в том числе 2 научные статьи в журналах, включенных в Перечень рецензируемых научных изданий Сеченовского Университета (Перечень ВАК при Минобрнауки России), в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук; 1 научная статья в журнале, индексируемом в международной базе Scopus, 2 иные научные публикации по результатам исследования, 15 публикаций в сборниках материалов Международных и Всероссийских научных и научно-практических конференций.
Структура и объем диссертации
Диссертация изложена на 171 странице, включая приложения (объем основного текста 142 страницы), машинописного текста. Работа состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, включающей 6 глав, общих выводов, списка литературы (204 источника, в том числе 86 иностранных). Работа содержит 37 таблиц, 40 рисунков, 7 схем. Из них в Приложении 8 таблиц, 7 схем, 3 рисунка, а также Проект фармакопейной статьи «Ириса болотного
корневища», Проект Инструкции по сбору и сушке корневищ ириса болотного, Акт внедрения в работу испытательной лаборатории Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Центр лекарственного обеспечения Департамента здравоохранения города Москвы», Акт внедрения в учебный процесс кафедры фармацевтического естествознания Института фармации им. А.П. Нелюбина ФГАОУ ВО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет).
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1. Характеристика семейства ирисовых (Iridaceae)
Семейство ирисовых (Iridaceae Juss.), одно из крупных семейств класса Однодольные (Monocotyledones), порядка Спаржецветные (Asparagales). К представителям семейства относятся порядка 1800 видов, принадлежащих к примерно 75-80 родам. На основании отличий в строении цветка в семействе выделяют основные подсемейства - собственно ирисовые (Iridoideae) и иксиевые (Ixioideae), внутри которых возможно дальнейшая классификация по трибам [26,77].
Наиболее полно представлены ирисовые в южно-африканской области (около 45 родов) и центральной южно-американской (немного меньше). Дальше всех на северные территории проникают представители рода ирис (Iris L.) и сисюринхий (Sisyrinchium L.) [26].
Растения семейства ирисовых произрастают, преимущественно, на открытых пространствах, например, берега водоемов (ирис болотный), опушки разреженных лесов (ирис безлистный), равнинные луга (ирисы, виды сисюринхия), степи, даже пустыни.
Большая часть ирисовых являются многолетними травами. Стебли травянистых растений семейства могут достигать в высоту до 2 м (роды ирис и уотсония). Листья ирисовых чаще бесчерешковые с влагалищеобразным основанием у низовых листьев; длинные и широкие; мечевидные, линейные, в некоторых случаях ланцетные. Имеются верховые листья, прицветники и предлистья. Жилкование параллельное, как у большинства однодольных. Цветки большей частью обоеполые, актиноморфные или зигоморфные с двухсторонней симметрией, с прицветниками. Околоцветник простой венчиковидный, состоит из шести листочков, расположенных в два круга. Листочки одинаковые, но могут отличаться по форме, размеру и цвету, могут быть слитыми в трубку. У растений рода ирис, цветки которых опыляются насекомыми, внутренние лепестки
направлены вверх, а наружные отогнуты для посадки насекомых. Окраска цветков разнообразна. В большинстве случаев тычинки три, реже две. Завязь нижняя трехгнездная или редко верхняя. Рыльце пестика с 3 лепестковидными лопастями. В завязи 2-50 семязачатков. Формула цветка: |Рз+зили(з+з) A3G (3)
Длительность цветения растений семейства ирисовых составляет от одного до нескольких дней. Опыление главным образом энтомофильное. Плод -многосеменная коробочка, вскрывающаяся, реже невскрывающаяся. Семена разнообразной формы с большим эндоспермом и небольшим цилиндрическим зародышем. В семенах присутствуют флобафены, липиды; эндосперм толстостенный, маслянистый. В эндосперме содержится запас гемицеллюлозы, алейроновые зерна и липиды, реже крахмал [190].
По характеру строения подземных органов ирисовые довольно разнообразны: встречаются корневищные, клубневые и клубнелуковичные. Корневища чаще всего крупные, большой длины, мясистые (как у ирисов), но встречаются и тонкие, как, например, у видов сисюринхия. На одном корневище растения могут располагаться плотно друг к другу (ирис тонколистный) или разреженно (ирис песчаный). Благодаря разнообразию и приспособленности подземных органов ирисовые прекрасно распространяются вегетативным способом.
1.2. Характеристика рода ирис (Iris L.)
Название растению дал еще в IV в. до н.э. Гиппократ за многообразную окраску лепестков цветка (от древнегреческого «ípí<;» - радуга). Карл Линней сохранил за растением его древнее имя - «Iris» (в латинском варианте). В России слово «ирис» как ботаническое название растения появилось только во второй половине XIX века. До этого периода использовались народные названия «касатик» (листья как коса) или «петушок» (от украинского «швник»).
Растения рода Ирис встречаются на всех континентах во всех климатических регионах. Ареал рода охватывает регионы Северного полушария с умеренным и
субтропическим климатом, распространяясь почти до 70о северной широты. Наибольшее количество видов ириса приходится на страны Средиземноморья, Юго-Западную и Среднюю Азию. В России ирисы встречаются от севера Сибири до южных регионов, Кавказа и Дальнего Востока. Растения предпочитают нейтральные и слабокислые почвы, обладают большой адаптивной способностью даже к каменистым и малоплодородным землям. Географию распространения видов на территории Российской Федерации проследить сложно, но Алексеева Н.Б. с коллегами предложила выделить 9 основных групп согласно занимаемому ареалу, в том числе в Европейскую группу были включены ирис безлистный, песчаный, кожистый. К эндемичным видам они отнесли ирис ненастоящий, ложноненастоящий, кожистый, ирис Тимофеева [2].
Существую разные мнения об объеме рода и его классификации. По информации The Plant List род включает 362 вида, которые в соответствии с различными системами разделяют на 5-6 подродов. Наибольшее количество видов (98) включает подрод ирис, растения которого делятся на 6 секций. Разделяют ирисы на основании того, подземная их часть является корневищем или луковицей, а затем уже внутри этих групп выделяют подгруппы бородатых, безбородых и хохлатых ирисов для корневищных и дальнейшие уточнения по местам произрастания (сибирские, германские, испанские и др.) [25,67,68,70,168,199]. В современных исследованиях для разделения ирисов на подроды и секции используются молекулярные методы, как например, электрофорез белков семян [85].
К роду «ирис» относятся многолетние травянистые растения, чаще всего корневищные. Стебель представлен длинным однолетним цветоносом, состоящим из междоузлий, от которых отходят длинные листья. Стебли разветвленные или простые, одиночные или расположены пучками. Листья различаются по расположению: нижние с широким основанием, срединные, наиболее типичные и нормально развитые, и верховые, в основном прикрывающие и защищающие цветки. Листья большей частью плоские мечевидной формы. Размеры листа в длину колеблются от 10 см (ирис карликовый) до 200 см (ирис болотный). [112]
Корневища чаще всего крупные, протяженные, состоят из нескольких годичных звеньев. Цветки ирисов крупные, одиночные либо собраны в немногоцветковые соцветия. Строение цветка ирисов в основном повторяет признаки семейства. Плод - вскрывающаяся коробочка зеленого, зелено-бурого или пурпурного цвета округлой или вытянутой формы с выступающими ребрами, заполненная многочисленными семенами [27,70,118,146].
В связи с разной распространенностью и устойчивостью были выделены виды ириса, которым угрожает полное уничтожение (ирис остродольный) или сокращение численности (ирис колхидский). Ирис болотный отнесен к группе хорошо изученных и культивируемых видов, но которые могут быть уничтожены человеком в дикой природе [2].
1.3. Ботаническая характеристика ириса болотного
Ирис болотный (Iris pseudacorus L.) имеет несколько синонимов, многие из которых народные: ирис ложноаирный, аировидный, касатик желтый, ирис желтый, ирис водный.
Похожие диссертационные работы по специальности «Другие cпециальности», 00.00.00 шифр ВАК
Фитохимическое изучение травы и корней сабельника болотного (Comarum palustre L.)2022 год, кандидат наук Стругар Йована
«Фармакогностическое изучение кульбабы осенней (Leontodon autumnalis L.) и кульбабы шершавоволосистой (Leontodon hispidus L.)»2016 год, кандидат наук Гончаров Николай Николаевич
Фармакогностическое изучение герани сибирской (Gеranium Sibiricum L.)2015 год, кандидат наук Позднякова, Татьяна Александровна
Фармакогностическое изучение золотарника кавказского (Solidago caucasica Kem.-Nath.)2014 год, кандидат наук Федотова, Виктория Владимировна
Фармакогностическое изучение девясила иволистного2015 год, кандидат наук Азарова, Анна Владимировна
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тихомирова Екатерина Алексеевна, 2024 год
Использованные СО - - - + - - - - - - - -
Показания к применению - - - - - + - - - - - -
Побочные эффекты, - - - - - + - - +/- - - -
предосторожности
Дозировка - - - - - + - - +/- - - -
Примечание:
+/- - показатель присутствует не в каждой фармакопейной статье
*1 - для каждого ЛРС есть отдельно фармакопейная статья для порошка
*2 - присутствуют в ФС только на те виды, в которых являются показателем качества
Приложение В. Параметры хроматографического разделения биологически активных веществ в корневищах ириса болотного
Таблица В.1 - Параметры разделения фенольных соединений (ПФ: бутанол-ледяная уксусная кислота-вода в соотн. 4:1:2)___
Условия Экстрагент Танин, Галловая
Яг детектирования Вода Вода, НС1 Спирт 96% Спирт 96%, НС1 р-р кислота, р-р
0,20 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + - -
ЖАК + + + + - -
0,32 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + - -
ЖАК + + + + - -
0,34 УФ 365 УФ 254 ЖАК - - - + + - -
0,47 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + + -
ЖАК + + + + + -
0,52 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + - -
ЖАК + + + + - -
0,60 УФ 365 УФ 254 ЖАК + + + + - -
0,74 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + - -
ЖАК + + + + - -
0,89 УФ 365 - - - - - -
УФ 254 + + + + - +
ЖАК + + + + - +
0,96 УФ 365 УФ 254 ЖАК - - + + - -
Таблица В.2 - Параметры разделения фенольных соединений (ПФ бутанол-ледяная уксусная кислота-вода в ^ соотн. 4:1:2) ___
Rf Условия Вода Вода, Спирт Спирт Танин, Галловая
детектирования HCl 96% 96%, HCl р-р к-та, р-р
0,22 УФ 254 + + + + - -
Ванилин, HCl + + + + - -
0,33 УФ 254 + + + + - -
Ванилин, HCl + + + + - -
0,36 УФ 254 - - - + - -
Ванилин, HCl - - - + - -
0,47 УФ 254 + + + + + -
Ванилин, HCl + + + + + -
0,55 УФ 254 + + + + - -
Ванилин, HCl + + + + - -
0,76 УФ 254 + + + + - -
Ванилин, HCl - - - - - -
0,89 УФ 254 + + + + - +
Ванилин, HCl + + + + - +
Таблица В.3 - Параметры разделения моносахаридных остатков
Rf Вода 1:4 Вода 1:4, HCl Вода 1:100 Вода 1:100, HCl СО глюкоза СО фруктоза
0,10 - + + -
0,15 + + + -
0,23 + + + -
0,33 + + + -
0,43 + + + + +
0,47 - - - - +
0,60 + + - -
0,70 + + + +
0,82 - - - +
Таблица В.4 - Параметры разделения сапонинов в системе бутанол-этанол-аммиак (7:2:5) _______
Этило- Этило- Метило- Метило- Глицирризиновая
Rf Детек- Вода Вода вый вый вый вый кислота
тор + HCl спирт спирт + HCl спирт спирт + HCl
0,18 254 нм + + + + + + -
ФВК + + + + + + -
0,29 254 нм ФВК - - - - + + + -
0,38 254 нм ФВК - - - - - - + +
0,41 254 нм - - + + + + -
ФВК - - + + + + -
0,44 254 нм ФВК - - + + + + -
0,46 254 нм ФВК - - - - + + -
0,49 254 нм ФВК - - - + - - -
0,91 254 нм ФВК - - + + - - -
Таблица В.5 - Параметры разделения сапонинов в системе спирт этиловый 96% -хлороформ - аммиак 25% - вода (70:40:40:2)
Метило- Метило- Этило- Этило- Глицирри Урсуловая
Rf Детектор вый спирт вый спирт +НС1 вый спирт вый спирт +НС1 зин.к-та к-та
0,29 254нм, H2SO4 + + + + — —
0,52 254нм, H2SO4 + + + + — —
0,62 254нм, H2SO4 + + — — — —
0,66 254нм, H2SO4 — — + + — —
0,68 254нм, H2SO4 + + — — — —
0,70 254нм, H2SO4 -- -- -- -- + --
0,73 254нм, H2SO4 — — + + —
0,78 254нм, H2SO4 + + — — — —
0,80 254нм, H2SO4 — — + + — —
0,84 254нм, H2SO4 — -/+ — — — —
0,94 254нм, H2SO4 — — — — — +
0,97 254нм, H2SO4 -- -- + -- -- --
Таблица В.6 - Параметры разделения органических кислот в системе этиловый
спирт 96% - аммиак (16:4)
Яг Водное извлечение СО лимонной кислоты СО яблочной кислоты СО салициловой кислоты СО щавелевой кислоты СО аскорбиновой кислоты
0,15 + -- -- -- + --
0,22 + -- -- -- -- --
0,29 -- + -- -- -- --
0,33 -- -- -- + -- --
0,42 + -- + -- -- --
0,65 -- -- -- -- -- +
0,74 + -- -- -- -- --
0,88 + -- -- -- -- --
Приложение Г. Схемы анализа биологически активных веществ корневищ ириса болотного методом тонкослойной хроматографии
А Б В
1 - водное извлечение из корневищ ириса, 2 - водное извлечение с добавлением НС1, 3 - спиртовое извлечение, 4 - спиртовое извлечение с добавлением НС1, 5 - раствор танина, 6 - раствор галловой кислоты
Схема Г.1 - Результаты обнаружения фенольных соединений в корневищах ириса болотного (детектирование: А -УФ-свет при 365 нм, Б - УФ-свет при 254 нм, В -
раствор ЖАК)
о о о о О
о о о о
ООО о
ООО о о
ООО о о
ООО о
1 2 3 4 5 6
А Б
1 - водное извлечение из корневищ ириса, 2 - водное извлечение с добавлением НС1, 3 -спиртовое извлечение, 4 - спиртовое извлечение с добавлением НС1, 5 - раствор танина,6 -раствор галловой кислоты
Схема Г.2 - Результаты обнаружения фенольных соединений в корневищах ириса болотного (детектирование: А -УФ-свет при 254нм, Б - обработка раствором
ванилина в кислой среде)
О
О о о о
о о
О О ОО
о о о
о о о
о о о
о о
1 2 3 - 5 6
1 - водное извлечение 1:4; 2 - водное извлечение 1:4 подкисленное; 3 - водное извлечение 1:100; 4 - водное извлечение 1:100 подкисленное; 5 - раствор глюкозы; 6 -раствор фруктозы
Схема Г.3 - Результат обнаружения сахаров в корневищах ириса болотного
о
С)
о
о
о
1:54
1 - водное извлечение из сырья ириса, 2 - СО лимонной кислоты, 3 - СО яблочной кислоты, 4 - СО салициловой кислоты, 5 - СО щавелевой кислоты, 6 - СО аскорбиновой кислоты
Схема Г.4 - Результат обнаружения органических кислот корневищ ириса
болотного
А Б
1 - водное извлечение, 2 - водное извлечение подкисленное, 3 - спиртовое извлечение, 4 - спиртовое извлечение подкисленное, 5 - метанольное извлечение,6 - метанольное извлечение подкисленное, 7 - СО глицирризиновой кислоты
Схема Г.5 - Результат обнаружения сапонинов корневищ ириса болотного в первой системе (детектирование: А - УФ-свет при 254нм, Б - обработка
раствором ФВК)
А Б
1 - метанольное извлечение, 2 - метанольное извлечение подкисленное, 3 - спиртовое извлечение, 4 - спиртовое извлечение подкисленное, 5 - СО глицирризиновой кислоты, 6 - СО урсуловой кислоты
Схема Г.6 - Результат обнаружения сапонинов корневищах ириса болотного во второй системе: А- УФ-свет при 254 нм, Б - после обработки 10% Н2 Б04
Приложение Д. Схема выделения полисахаридных фракций из корневищ
ириса болотного
Схема Д.1 - Схема выделения полисахаридных фракций
Приложение Е. Проект фармакопейной статьи «Ириса болотного корневища
- Iridis pseudacori rhizomata»
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Ириса болотного корневища ФС.2.5. ...
Iridis pseudacori rhizomata
Заготовленные осенью или ранней весной, очищенные и отмытые от земли, освобожденные от корней, остатков листьев, разрезанные на куски высушенные корневища дикорастущего или культивируемого многолетнего травянистого растения ириса болотного - Irispseudacorus L., сем. ирисовых - Iridaceae.
ПОДЛИННОСТЬ
Внешние признаки. Цельное сырье. Куски и звенья корневищ легкие, цилиндрической и четковидной формы, слегка сплюснутые, с кольцевидными утолщениями, могут быть разветвленные. Поверхность корневищ морщинистая; на верхней поверхности встречаются волосистые остатки листьев прошлого вегетативного периода, на нижней имеются следы от срезанных корней. Излом сплошной, зернистый в центре и волокнистый по наружному краю. При рассмотрении излома с помощью лупы заметны проводящие пучки в центральном осевом цилиндре и механические волокна, расположенные ближе к поверхности корневища. Куски корневищ длиной до 20 см, диаметр 2-5 см.
Цвет наружной поверхности розовато-бурый, бурый, темно-бурый, излом розоватый, розовый, следы от корней светлые, почти белые. Запах слабый неспецифический, вкус водного извлечения вяжущий, слегка горьковатый.
Измельченное сырье. Куски корневищ разнообразной формы, проходящие сквозь сито с диаметром отверстий 7 мм.
Цвет буро-розовый, розоватый, с фрагментами одревесневших тканей темно -бурого цвета. Запах слабый. Вкус водного извлечения вяжущий.
Порошок. Смесь кусочков корневищ неопределенной формы бурого и буро-розоватого цвета, проходящая сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм.
Запах слабый. Вкус водного извлечения вяжущий. Примечания. Возможные примеси:
А) Аир болотный (Acorus calamus L.). Корневища аира болотного слабо разветвленные, куски их цилиндрические, прямые или слегка изогнутые, немного сплюснутые. Корневища крупные, длиной до 1,5 м, длина отдельных звеньев до 30 см. Диаметр поперечного среза и излома может достигать 3 см. Излом сплошной без полостей, слабо зернистый или губчато-пористый. Утолщений не имеют. От верхней поверхности отходят листья, цветоносные стебли, остатки листьев прошлого вегетативного периода; после их удаление на поверхности корневища образуются характерные поперечные следы в форме полумесяца. От нижней стороны отходят многочисленные корни белого цвета; после их срезания остаются следы в виде точек. Цвет свежих корневищ буровато-зелено-желтый, на изломе беловато-розоватый, рубцы белые. У высушенных корневищ цвет наружной поверхности темно-желтый, буро-коричневый; излом желто-бурый, рубцы тёмно-коричневые. Поверхность высушенных корневищ продольно-морщинистая. Корневища и в свежем, и в высушенном виде обладают очень специфическим ароматным запахом. Вкус сырья и водного извлечения характерный, пряно-горький.
Б) Ирис бледный (Iris pallida Lam.). Корневища ириса бледного крупные, стелющиеся, разветвленные, четковидные, кольцевидно неравномерно-утолщенные. Немного сплюснутые, отдельные звенья трапециевидной или овально-прямоугольной формы. Длиной могут достигать 1 м, отдельные звенья около 10-20 см. Корневища сплошные, полостей на изломе нет; излом зернистый, немного волокнистый, диаметр до 5-7 см. От верхней поверхности отходят листья, остатки листьев прошлого вегетативного побега; от нижней поверхности отходят тонкие шнуровидные корни. Поверхность корневищ беловато-серая, излом беловато-бежевый. Поверхность высушенных корневищ слабо морщинистая. Запах слабый неспецифический, вкус водного извлечения неспецифический, слабо сладковатый. Если есть высокая вероятность попадания примеси ириса бледного,
сырье целесообразно заготавливать во время или сразу после цветения - цветки ириса бледного крупные, голубого цвета.
Микроскопические признаки. Цельное сырье. При рассмотрении микропрепарата поперечного среза корневища под микроскопом должна быть видна покровная ткань (эпидермис), состоящая из продольно вытянутых, плотно прилегающих друг к другу клеток. В зрелых корневищах может отсутствовать, тогда роль покровной ткани выполняют одревесневшие слои паренхимы. Основная ткань корневища разделена слоем эндодермы на первичную кору и центральный осевой цилиндр. Эндодерма однорядная с подковообразными утолщениями клеточных стенок. В коре крайне редко встречаются закрытые коллатеральные пучки, в центральном цилиндре разбросаны концентрические центрофлоэмные сосудисто-волокнистые пучки, в большом количестве возле эндодермы, более свободно в центре цилиндра. Основная ткань корневища - запасающая паренхима, клетки толстостенные, округлой или овальной формы, расположены рыхло, ближе к центру корневища с промежутками (Рисунок Е.1). В клетках паренхимы обнаруживаются крахмальные зерна размером 2-20 мкм или скопления до 70-100 мкм, в большем количестве в клетках паренхимы вблизи эндодермы и проводящих пучков. В отдельных клетках паренхимы присутствуют мелкие капли эфирного масла (4-20 мкм). В клетках паренхимы коры, реже в цилиндре, присутствуют призматические кристаллы оксалата кальция (20-2000 мкм).
Измельченное сырье. При рассмотрении «давленого» микропрепарата под микроскопом должны быть видны темно-зеленые или буро-зеленые фрагменты эпидермиса, состоящие из продольно вытянутых клеток; обрывки и отдельные клетки одревесневшей паренхимы; фрагменты запасающей паренхимы и отдельные клетки с крахмальными зернами, редко с небольшими каплями эфирного масла. Обнаруживаются клетки-идиобласты с бурым содержимым (дубильные вещества), кристаллы оксалата кальция. Встречаются группы сосудов и одиночные спиральные сосуды, механические волокна.
Порошок. При рассмотрении под микроскопом порошка обнаруживаются бесцветные группы клеток паренхимы, буро-зелёные фрагменты эпидермиса,
темно-бурые элементы одревесневшей паренхимы, клетки-идиобласты с коричневым содержимым, группы сосудов и обрывки сосудов со спиральным утолщением. Встречаются кристаллы и обломки кристаллов оксалата кальция.
Рисунок Е.1 - Ириса болотного корневища 1 - фрагмент поперечного среза (а - эпидермис, б - паренхима первичной коры, в
- эндодерма, г - концентрические центрофлоэмные проводящие пучки, д -кристаллы оксалата кальция), ув. х40; 2 - покровная ткань молодого корневища (а
- эпидермис, б - паренхима первичной коры), ув. х100; 3 - фрагмент поперечного среза (а - эндодерма с подковообразными утолщениями, б - концентрические
центрофлоэмные проводящие пучки), ув. х100; 4 - центрофлоэмный проводящий пучок, окрашивание раствором Люголя (а - ксилема, б - флоэма, в - склеренхима,
г - группы крахмальных зерен, д - клетки паренхимы), ув. х100; 5 - фрагмент паренхимы, окрашивание раствором Люголя (а - скопления крахмальных зерен), ув. х1000; 6 - «давленый микропрепарат» (а - фрагмент эпидермиса, б - клетки
паренхимы, в - кристаллы оксалата кальция), ув. х100; 7 - «давленый микропрепарат» (а - спиральные сосуды, б - клетки паранхимы), ув. х100; 8 -микропрепарат порошка (а - фрагменты эпидермиса, б - фрагменты паренхимы, в
- группы сосудов, г - кристаллы оксалата кальция, д - опробковевшие ткани, е -
клетки паренхимы с пигментированным содержимым), ув. х40; 9 - группа сосудов (микропрепарат порошка), ув. х400.
Определение основных групп биологически активных веществ
1. Тонкослойная хроматография
Приготовление растворов
Раствор стандартного образца (СО) галловой кислоты. Около 0,05 г (точная навеска) СО галловой кислоты растворяют в 50 мл 50% этанола, раствор перемешивают. Срок годности раствора - не более 30 суток, хранить в прохладном, защищенном от света месте.
Раствор стандартного образца (СО) танина. Около 0,05 г (точная навеска) СО танина растворяют в 50 мл 50% этанола, раствор перемешивают. Срок годности раствора - не более 30 суток, хранить в прохладном, защищенном от света месте.
Раствор для детектирования. 1,0 г железа (III) аммония сульфата растворяют в воде, подкисляют 6 мл разведенной азотной кислоты 16 % и доводят объем раствора водой до 100 мл (раствор железо-аммонийных квасцов, ЖАК).
Допустимо в качестве проявляющего реагента использовать 1% раствор железа (III) хлорида. Для его приготовления 1,0 г железа (III) хлорида растворяют в 100 мл спирта 96 % при перемешивании. Раствор фильтруют в теплом виде через бумажный фильтр и доводят до объема в мерной колбе на 25 мл (испытуемый раствор).
Навеску сырья около 5,0 г, измельченного до замера частиц 2 мм, помещают в колбу объемом 50 мл, заливают 20 мл воды очищенной и нагревают с обратным холодильником в течение 10 минут.
На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля наносят 5 мкл испытуемого раствора и рядом по 2 мкл раствора СО галловой кислоты и СО танина. Пластинку с нанесенными пробами сушат при комнатной температуре в течение 5 минут и помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 40 минут смесью растворителей: бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:2). Хроматографируют восходящим способом.
Когда фронт подвижной фазы пройдет около 80-90% длины хроматографической пластинки от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей при комнатной температуре.
Пластинку просматривают в ультрафиолетовом свете при длине волны 254
нм.
На хроматограмме СО галловой кислоты должна обнаруживаться зона адсорбции темно-синего цвета. На хроматограмме СО танина должна обнаруживаться зона адсорбции темно-синего цвета ниже уровня зоны адсорбции галловой кислоты.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться одна зона адсорбции на уровне СО галловой кислоты и одна зона адсорбции на уровне СО танина. Допускается обнаружение других зон адсорбции темно-синего цвета (фенольные соединения).
После пластинку обрабатывают раствором ЖАК (или 1 % раствором железа (III) хлорида), сушат при комнатной температуре и просматривают при дневном свете.
На хроматограмме СО галловой кислоты в видимом свете должна обнаруживаться зона адсорбции темно-синего цвета. На хроматограмме СО танина должна обнаруживаться зона адсорбции темно-синего цвета ниже уровня зоны адсорбции галловой кислоты.
На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться не менее двух зон адсорбции темного коричневого или темно-синего цвета, одна из которых на уровне СО галловой кислоты, другая на уровне СО танина. Допускается обнаружение других зон адсорбции темно-синего цвета (дубильные вещества).
2. Качественные реакции
А) Около 1,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих через сито с диаметром отверстий 2 мм, кипятят с 10 мл воды 5 минут. Охлаждают до безопасной температуры, фильтруют через бумажный фильтр. К 2 мл извлечения прибавляют 2 капли 1% раствора железа (III) аммония сульфата, должно наблюдаться черно-синее окрашивание (дубильные вещества).
Б) К 2-3 мл полученного водного извлечения прибавляют 20 мл спирта этилового 95%, наблюдают выпадение белого осадка (полисахариды).
ИСПЫТАНИЯ
Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 10%.
Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 9%.
Зола, нерастворимая в 10% хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 0,5%.
Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, - не более 5%. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм - не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм - не более 5%. Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с размером отверстий 0,18 мм, - не более 5%.
Посторонние примеси.
Корневищ, потемневших в изломе. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 5%.
Кусочки корней, листьев, стеблей. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 1%.
Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 1%.
Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье, порошок - не более 2%.
Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».
Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».
Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: дубильные вещества в пересчете на танин - не менее 8%; сумма фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту - не менее 9%; полисахаридов - не менее 5%; экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, - не менее 12%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, - не менее 15%.
Определение дубильных веществ проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (метод 1).
Сумма фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту.
Приготовления растворов.
Приготовление реактива Фолина-Чокальтеу. В круглодонную колбу помещают 70 мл воды, 10,0 г натрия вольфрамата, 2,5 г фосфорномолибденовой кислоты, 5 мл 85 % фосфорной кислоты, кипятят с обратным холодильником 2 ч, затем охлаждают, разбавляют водой до 100 мл, хорошо перемешивают. Хранят в сосудах темного стекла с притертыми пробками.
Приготовление раствора натрия карбоната 20%. 20 г натрия карбоната безводного растворяют в воде и доводят объем раствора водой до 100 мл.
Приготовление стандартного раствора галловой кислоты. Точную навеску стандартного образца галловой кислоты (порядка 0,015 г) растворяли вводе очищенной в мерной колбе объемом 500 мл.
Приготовление калибровочных растворов галловой кислоты. Из стандартного раствора галловой кислоты отбирают 1; 2; 5; 10; 20 мл в мерные колбы на 100 мл. Раствор сравнения готовят, прибавляя в колбу на 100 мл 1 мл воды. В каждую мерную колбы добавляют по 1 мл раствора Фолина-Чокальтеу, по 10 мл раствора натрия карбоната 20%, доводят водой до метки, перемешивают. Через 30 минут проводят измерение оптической плотности против раствора сравнения при длине волны 750 нм.
По полученным данным строят калибровочный график, где по оси абсцисс -концентрация раствора галловой кислоты, по оси ординат - оптическая плотность.
Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Точную навеску (около 2 г) помещают
в колбу объемом 250 мл, прибавляют 200 мл воды и нагревают на кипящей водяной бане в течение 45 минут. Горячее извлечение фильтруют через бумажный фильтр в мерную колбу объемом 250 мл и доводят до метки водой, перемешивают (раствор А).
10 мл раствора А переносят в мерную колбу на 50 мл, доводят до метки водой (раствор Б). 1 мл раствора Б переносят в мерную колбу объемом 100 мл, прибавляют 1 мл раствора Фолина-Чокальтеу, 10 мл раствора натрия карбоната 20% (раствор В), доводят до метки водой.
Оптическую плотность раствора В измеряют через 30 минут на спектрофотометре при длине волны 750 нм (в диапазоне длин волн 600-900 нм).
Для приготовления раствора сравнения 1 мл воды очищенной помещают в колбу мерную объемом 100 мл, добавляют 1 мл раствора Фолина-Чокальтеу, 10 мл раствора натрия карбоната 20%, доводят водой до метки. Выдерживают такое же время, как испытуемый раствор В.
Содержания суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту и сухое сырье в процентах (Х) рассчитывают по формуле:
с х 250 х 100 х 100 х 100
X =
а х 1 х (100 - ш) х 1000000
где с - концентрация галловой кислоты в извлечении из сырья, определенная по калибровочному графику, мкг/мл;
а - навеска сырья, г;
w - влажность сырья, %.
Полисахариды.
Точную навеску (около 10 г) измельченного сырья с размером частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, помещают в колбу объемом 500 мл со шлифом, приливают 200 мл воды и кипятят с обратным холодильником на электрической плитке 30 минут. Экстракцию повторяют еще дважды (200 мл, второй раз 100 мл воды). Полученные водные извлечения объединяют, центрифугируют или фильтруют через марлю, сложенную в
несколько слоев, и переносят в мерную колбу объемом 500 мл. Доводят водой
объем до метки (раствор А).
25 мл полученного раствора А вносят в центрифужную пробирку,
прибавляют 75 мл 95% спирта, помешивая при нагревании на водяной бане. Через
1 час содержимое центрифугируют (5000 об/мин, около 30 мин). Надосадочную
жидкость фильтруют под вакуумом при остаточном давлении 13-16 кПа через
стеклянный фильтр ПОР16. Осадок количественно переносят на беззольный
фильтр и последовательно промывают 15 мл смесью раствора 95% спирта в воде
(3:1), 10 мл ацетона, 10 мл этилацетата. Фильтр с осадком высушивают на воздухе,
затем при 100-105°С до постоянной массы.
Расчет содержания полисахаридов в пересчете на абсолютно сухое сырье в
процентах (Х) производят по формуле:
(т2 - т±) * 500 * 100 * 100 = т* 25 * (100 - Ш)
где Ш1 - масса фильтра, г; Ш2 - масса фильтра с осадком, г;
ш - масса сырья, г;
потеря в массе при высушивании сырья, %.
Экстрактивные вещества. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания экстрактивных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (метод 1, экстрагент - спирт этиловый 70%; вода; навеска 1,0 г, размер частиц сырья - 1 мм).
Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».
Приложение Ж. Проект инструкции по сбору и сушке корневищ ириса
болотного
Ирис болотный (ирис желтый, касатик желтый) - Iris pseudacorus L., представляет собой многолетнее травянистое корневищное растение семейства Ирисовые (Iridaceae).
Корневища толстые, разветвленные, имеющие кольчатые утолщения, диаметром около 2-5 см, длиной до 50-100 см, отдельные звенья округлой формы длиной около 10 см. Наружная поверхность корневищ буро-коричневая, свежий излом розового цвета, имеет приятный специфический запах. Корневища могут быть прикрыты листьями текущего вегетационного периода и остатками прошлогодних, имеются поперечные следы от листьев. От нижней поверхности корневища отходят шнуровидные белые корни. Корневища чаще расположены почти на поверхности почвы, реже на глубине 3-5 см. Высота взрослого растения может достигать порядка 150 см; листья широколинейной, линейно-ланцетовидной, мечевидной формы, плотные, гладкие с хорошо выраженной центральной жилкой, зеленые с легким сероватым налетом. Ширина листовой пластины около 2-4 см, длина - около 80-100 см. Стебель является цветоносным побегом высотой до 1 м; может быть разветвлен, несет на себе стеблевые листья, один или несколько крупных желтых цветков. Цветки могут быть одиночные или собраны в верхушечные соцветия по 3-8 штук. Сами цветки крупные, до 10 см в диаметре, хорошо заметные ярко-желтые с характерными фиолетовыми прожилками на наружных долях околоцветника (Рисунок Ж.1). Околоцветник шестичленный. Наружные доли околоцветника яйцевидной формы, более крупные и отогнуты вниз; внутренние доли меньше по размеру и более вытянутые. Цветки обоеполые; имеют 3 тычинки, пестик с тремя лопастями рыльца; завязь нижняя, трехгнездная. Плод - вскрывающаяся вытянутая коробочка длиной до 10 см и около 2 см в диаметре, плотно заполненная семенами (10-25 штук). Семена округлой формы, сплюснутые, в диаметре около 0,5 см, коричневого цвета;
располагаются внутри коробочки тремя ровными вертикальными рядами. Семенная кожура хрупкая, глянцевая, с сетчатой поверхностью.
Цветение приходится на начало лета (июнь-июль, в прохладные годы начало августа), плоды созревают в конце августа-начале сентября. Размножение в основном вегетативное путем разрастания корневища, возможно семенное.
Рисунок Ж.1 - Внешний вид цветущего растения (А) и цветок ириса болотного (Б)
Часто вместе с ирисом болотным произрастает аир болотный (аир обыкновенный) - Acorus calamus L., имеющий схожие внешние признаки. В отличие от ириса болотного корневища аира более вытянутые, цилиндрические, без явно выраженных утолщений, диаметр до 3 см. Корневища буровато-зелено-желтые, на изломе беловатые, обладают специфическим ароматным запахом и горьким вкусом. Листья зеленые, не имеют сероватого воскового налета, мелкие зеленоватые цветки собраны в соцветие - початок длиной до 10-12 см. Плоды не вызревают. Большое внешнее сходство имеет также близкий вид - ирис бледный (Iris pallida Lam.). Отличить его проще всего во время цветения: цветки чаще одиночные, бледно-голубые. Корневище ириса бледного также крупное, излом сплошной, поверхность светло-бурая, беловатая, излом беловатый, имеет схожую
структуру корневища, но отдельные звенья более сплющены, менее вытянутые, округло-прямоугольной, трапециевидной формы. Запах слабый, неспецифичный. Если есть большая вероятность попадания при заготовке примеси ириса бледного, сырье целесообразно заготавливать во время или сразу после цветения.
Произрастает ирис болотный на всей Европейской территории Российской Федерации от таежной зоны до тропиков, на Кавказе, в Сибири, за исключением Крайнего Севера, на Дальнем Востоке. Основные промысловые запасы сосредоточены в средней полосе в лесной зоне Европейской части России. Влаголюбивое корневищное растение, растет по берегам водоемов, может быть частично погружен в воду, переносит умеренную затененность. Чаще встречается отдельными экземплярами, маленькими группами.
Сырьем являются корневища ириса болотного. Заготовку проводят осенью после увядания листьев (конец сентября-октябрь) или ранней весной до распускания листьев. Корневища выкапывают лопатами.
Для обеспечения самовозобновления необходимо оставлять хотя бы по одному экземпляру на каждые 2-5 м2, мелкие корневища. Повторные заготовки на той же площади рекомендуется проводить через 7-8 лет.
Выкопанные корневища очищают от листьев, остатков листьев прошлых лет, от корней, промывают от земли, удаляют поврежденные и почерневшие корневища. Разрезают на куски длиной 10-20 см. Крупные корневища могут быть разрезаны вдоль для лучшей сушки.
Сушат корневища естественным воздушно-теневым способом в хорошо проветриваемых помещениях (чердаки, навесы) в один слой при постоянном переворачивании. В сушилках с искусственным обогревом допускается нагрев до 40-50°С. Сушка считается оконченной, когда корневища с треском разламываются.
Согласно требованиям ГФ XIV изд. сырьем являются высушенные крупные легкие корневища или их куски. Корневища иногда разветвленные, четковидной формы, отдельные звенья овальные с кольцевидными утолщениями, немного сплюснутые. Наружная поверхность морщинистая, на нижней поверхности имеются следы от срезанных корней, на верхней поверхности - следы от
удаленных листьев. Высушенные корневища плотные, излом сплошной без полости, зернистый в центре и волокнистый по наружному краю. Длина кусков корневищ до 10-20 см, диаметр 2-5 см. Крупные куски могут разрезаны вдоль. Цвет наружной поверхности розовато-бурый, излом розоватый (Рисунок Ж.2). Запах слабый неспецифический, вкус вяжущий, слегка горьковатый. Числовые показатели: потеря в массе при высушивании не более 10%; золы общей не более 9%; золы, нерастворимой в 10% соляной кислоте, не более 0,5%; частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, - не более 5%; корневищ, потемневших в изломе не более 5%; кусочков корней, листьев, стеблей не более 1%; органической примеси не более 1%; минеральной примеси не более 2%; дубильных веществ в пересчете на танин не менее 8%, сумма фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту не менее 9%; полисахаридов не менее 5%; экстрактивных веществ, извлекаемых 70% спиртом, не менее 12%; экстрактивных веществ, извлекаемых водой, не менее 15%.
Рисунок Ж.2 - Внешний вид высушенного цельного сырья ириса болотного (А - наружная поверхность корневища; Б, В - свежий излом корневища)
Сухие корневища упаковывают в мешки по 50 кг. Хранят на стеллажах в сухих, хорошо проветриваемых помещениях. Срок годности сырья 5 лет.
Корневища ириса болотного применяют в составе сбора Здренко. Обладают вяжущим, кровоостанавливающим, противовоспалительным, отхаркивающим действием.
Приложение И. Акт внедрения результатов научно -исследовательской работы в работу Испытательной лаборатории Государственного бюджетного учреждения здравоохранения города Москвы «Центр лекарственного обеспечения Департамента здравоохранения города Москвы»
ЦЕНТР ЛЕКАРСТВЕННОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ
ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЗДРАВООХРАНЕНИЯ
Аптеки Столицы
от
ДЕПАРТАМЕНТА ЗДРАВООХРАНЕНИЯ ГОРОДА МОСКВЫ
на №
от
АКТ ВНЕДРЕНИЯ
результатов научно-исследовательской работы Тихомировой Екатерины Алексеевны в работу испытательной лаборатории ЕБУЗ «ЦЛО ДЗМ».
Предмет внедрения: методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту в растительном сырье ириса болотного.
Разработчики методики: Тихомирова Е.А. - аспирант кафедры фармацевтического естествознания Института фармации им. А.П. Нелюбина ПМГМУ им. И.М. Сеченова (Сеченовский Университет), провизор-аналитик испытательной лаборатории ЕБУЗ «ЦЛО ДЗМ», Сорокина A.A. - д.ф.н., профессор.
Цель внедрения: подтверждение возможности использования предложенной в ходе выполнения диссертационного исследования на тему «Фармакогностическое изучение и стандартизация сырья ириса болотного» методики количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту методом спектрофотометрии со стандартным образцом и калибровочным графиком в корневищах ириса болотного.
Результаты внедрения: методика количественного определения суммы фенольных соединений в пересчете на галловую кислоту апробирована, валидирована и успешно внедрена в работу испытательной лаборатории. Методика рекомендована для включения в проект нормативной документации для оценки качества сырья ириса болотного.
127018, г. Москва, ул. Стрелецкая, д. 3, стр. 1, тел. +7 (495) 974-79-22, факс: +7 (495) 974-92-79, e-mail: cloikk@zdiav.mos.ru
Заведующий лабораторией - провиз
Е.Р. Айсина
Приложение К. Акт внедрения результатов научно -исследовательской
работы в учебный процесс
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.