Роль молекул адгезии в патогенезе псориаза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, доктор наук Шерстенникова Александра Константиновна

• Шерстенникова Александра Константиновна
• доктор наук
• 2023

Оглавление диссертации доктор наук Шерстенникова Александра Константиновна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О РОЛИ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ В ПАТОГЕНЕЗЕ ПСОРИАЗА (ОБЗОР ЛИТЕРЫ)

1.1. Характеристика иммунной системы кожи

1.2. Роль молекул адгезии в миграции иммунокомпетентных клеток

1.2.1. Семейство селектинов

1.2.2. Семейство интегринов

1.2.3. Семейство иммуноглобулинов

1.2.4. Молекулы межклеточной адгезии в клинической практике

1.3. Механизмы миграции лейкоцитов

1.3.1. Механизмы миграции нейтрофилов

1.3.2. Механизмы миграции моноцитов

1.3.3. Механизмы миграции лимфоцитов

1.4. Механизмы миграции лейкоцитов посредством лейкоцитарно-тромбоцитарной адгезии

1.5. Современные представления о патогенезе псориаза

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Общая характеристика обследованных пациентов

2.2. Методы исследования

2.2.1. Иммунологические методы исследования

2.2.2. Гематологические методы исследования

2.2.3. Методика определения соматотипа

2.3. Методы статистической обработки результатов исследования

ГЛАВА 3. СОДЕРЖАНИЕ НЕЙТРОФИЛОВ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ МОЛЕКУЛЫ АДГЕЗИИ, У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ

3.1. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, у практически здоровых и больных псориазом

3.2. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от пола

3.3. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста больных псориазом

3.4. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста манифестации псориаза

3.5. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от продолжительности заболевания

3.6. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от стадии псориаза

3.7. Содержание нейтрофилов, экспрессирующих молекулы адгезии, у больных псориазом в зависимости от соматотипа

3.8. Корреляционный анализ между молекулами адгезии и нейтрофилами палочкоядерными, с 2-мя, 3-мя, 4-мя, 5-ю сегментами в ядре

3.9. Соотношение содержания нейтрофилов периферической крови и капиллярной крови, выделяемой с поверхности псориатической папулы

ГЛАВА 4. СОДЕРЖАНИЕ МОНОЦИТОВ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ

МОЛЕКУЛЫ АДГЕЗИИ, У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ

4.1. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у практически здоровых и больных псориазом

4.2. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от пола

4.3. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста больных псориазом

4.4. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста манифестации псориаза

4.5. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от продолжительности заболевания

4.6. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от стадии псориаза

4.7. Содержание моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у больных псориазом в зависимости от соматотипа

4.8. Корреляционный анализ между молекулами адгезии и промоноцитами, собственно моноцитами, полиморфноядерными моноцитами

4.9. Соотношение содержания моноцитов периферической крови и капиллярной крови, выделяемой с поверхности псориатической папулы

ГЛАВА 5. СОДЕРЖАНИЕ ЛИМФОЦИТОВ, ЭКСПРЕССИРУЮЩИХ

МОЛЕКУЛЫ АДГЕЗИИ, У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ

5.1.Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у практически здоровых и больных псориазом

5.2. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у больных псориазом в зависимости от пола

5.3. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста больных псориазом

5.4. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от возраста манифестации псориаза

5.5. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от продолжительности заболевания

5.6. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в зависимости от стадии псориаза

5.7. Содержание лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, у больных псориазом в зависимости от соматотипа

5.8. Корреляционный анализ между молекулами адгезии и малыми, средними, большими лимфоцитами

5.9. Соотношение содержания лимфоцитов периферической крови и капиллярной крови, выделяемой с поверхности псориатической папулы

ГЛАВА 6. ЛЕЙКОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНАЯ АДГЕЗИЯ У БОЛЬНЫХ

ПСОРИАЗОМ

6.1. Межклеточные контакты периферической крови у практически здоровых и больных псориазом

6.2. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от пола

6.3. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста больных псориазом

6.4. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста манифестации псориаза

6.5. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от продолжительности заболевания

6.6. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от стадии псориаза

6.7. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от соматотипа больных псориазом

6.8. Корреляционный анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов

ГЛАВА 7. ХАРАКТЕР ВЗАИМООТНОШЕНИЙ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ

КЛЕТОК С УРОВНЕМ ЭКСПРЕССИИ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ У БОЛЬНЫХ

ПСОРИАЗОМ

7.1. Характер взаимоотношений Т-лимфоцитов периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

7.2. Характер взаимоотношений СВ4+СБ25+Т-клеток периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

7.3. Характер взаимоотношений естественных киллеров периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

7.4. Характер взаимоотношений NKT-клеток периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

7.5. Характер взаимоотношений В-лимфоцитов периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

7.6. Характер взаимоотношений CD95+ периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

ГЛАВА 8. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

8.1. Механизмы миграции нейтрофилов у больных псориазом

8.2. Механизмы миграции моноцитов у больных псориазом

8.3. Механизмы миграции лимфоцитов у больных псориазом

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль молекул адгезии в патогенезе псориаза»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. В связи с высокой распространённостью заболевания, хроническим, нередко очень тяжелым течением, несовершенством современных методов лечения, неясными представлениями об этиологии и патогенезе, проблема псориаза является одной из самых актуальных в дерматологии (Скрипкин Ю.К., 1997; Asumalahti K., 2003; Трофимова И.Б., 2006; Потекаев Н. Н., 2013). Псориазом страдает 0,5-5,5% населения земного шара и эти данные варьируют в зависимости от климатического региона. Общеизвестно, что псориаз характеризуется гиперпролиферативными процессами в эпидермисе, нарушениями дифференцировки кератиноцитов и сочетающимися воспалительными реакциями в дерме. Заболевание считается системным с поражением различных систем организма: опорно-двигательной, нервной, эндокринной, сердечно-сосудистой, дыхательной, пищеварительной, репродуктивной и преимущественными проявлениями на коже (Волжанина Т.Ю., и др., 2011; Газиев А.Р., и др., 2013; Матусевич С.Л., и др., 2013; Davidovici B.B., 2010; Reich K., 2012; Tablazon I.L, 2013; Соколовский Е.В., 2017). В настоящее время предложено множество концепций, объясняющих патогенез псориаза, но до сих пор ни одна из них не является общепризнанной, да и прогресс в лечении на основе предложенных теорий незначительный. У больных псориазом выявлены значительные нарушения в системе клеточного и гуморального иммунитета (Кормейн Р.Х., Асгар С.С.,1983; Козинец Г.И., Макаров В.А., 1997; Формен Дж.К., 1998; Пухальский А.Л., Кузьменко Л.Г., 1998; Бонекох Б., 2009). Повышенная экспрессия в очагах поражения кожи цитокинов ИЛ-^, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12, ИЛ-17, ИЛ-19, ИЛ-21, ИЛ-23 и ФНО-а, подтверждает иммуноопосредованный характер псориатического процесса (Шарапова Г.Я., Короткий Н.Г., Молоденков М.Н., 1993; Грибова А.А., 2004; Хайрутдинов В.Р., Самцов А.В., 2021). Вместе с тем, в каскаде множества иммунопатологических реакций, способствующих возникновению псориатического процесса, не ясен механизм миграционной активности иммунокомпетентных клеток в кожу, а также роль молекул адгезии в этом процессе (Powrie F., Coffman R., Bevilacqua M.1993).

Учитывая факт, что источником цитокинов являются иммунокомпетентные клетки, от функционального состояния и количества которых зависит активность патологического процесса, можно предположить, что блокирование процессов миграции иммунокомпетентных клеток в кожу с применением моноклональных антител может быть решением патогенетического лечения псориаза. В свою очередь, возникает необходимость в изучении механизмов регуляции миграционной активности иммунокомпетентных клеток у больных псориазом, с целью последующего влияния на уровень цитотоксичности, лимфопролиферации и апоптоза непосредственно в пораженной коже, а также возможность избежать многочисленных побочных результатов (Курдина М.И., 2005; Кубанова А.А., 2008; Цыган В.Н., 2014). Таким образом, актуальность исследования обусловлена поиском клинически значимых мишеней для противовоспалительной терапии до продукции патогенетически значимых цитокинов, в роли которых могут выступать молекулы адгезии.

Степень разработанности темы диссертационной работы. Известно, что молекулы адгезии экспрессируется на лейкоцитах, эндотелиальных клетках, фибробластах, клетках Лангерганса, обеспечивая этапы миграции: «роллинга», «прочной адгезии», «трансмиграции». Данные о роли молекул адгезии в патогенезе псориаза противоречивы, разрозненны и находятся на стадии накопления фактов (Алейник Д.Я., 2006; Кхедри Ф., 2015; Караулов А.В., 2016; Boer O., Smith C. 1995; Bressan A., Picciani B., et al. 2018). Высокий уровень молекул межклеточной адгезии ICAM-1 и LFA-1 отмечается на эндотелии сосудов в области псориатических высыпаний, а применение моноклональных антител к LFA-1 (препарат Эфализумаб) подавляет псориатический процесс (Lebwohl M., et al. 2003; Kapper T.S., 2003). В доступной литературе нет информации о комплексе исследований относительно содержания нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, задействованных на всех основных этапах миграции в дерму, в условиях псориаза. Отсутствуют данные о влиянии агрегации тромбоцитов периферической крови на миграцию нейтрофилов. Не ясна взаимосвязь процессов апоптоза и миграционной

активности иммунокомпетентных клеток. До настоящего времени вопрос о локализации, активации и дифференцировки иммунокомпетентных клеток является дискутабельным.

Цель исследования: выявить роль молекул адгезии в патогенезе псориаза.

Задачи исследования:

1. Обосновать концепцию определения клинически значимой мишени на различных этапах миграционного процесса иммунокомпетентных клеток с учетом индивидуализированного подхода для проведения противовоспалительной терапии псориаза до продукции патогенетически значимых цитокинов.

2. Оценить уровень экспрессии молекул адгезии (Ь-селектин, LFA-1, ICAM-1, LFA-3, РЕСАМ-1) на нейтрофилах и частоту контактов их с агрегатами тромбоцитов периферической крови, а также соотношение с концентрацией нейтрофилов капиллярной крови, выделенной из псориатической папулы, у больных псориазом в зависимости от пола, возраста, длительности заболевания, возраста манифестации, стадии заболевания и соматотипа.

3. Определить содержание в периферической крови моноцитов, экспрессирующих молекулы адгезии Ь-селектина, LFA-1, 1САМ-1, LFA-3, РЕСАМ-1, и соотношение с уровнем моноцитов капиллярной крови псориатической папулы с учетом их морфологических особенностей в зависимости от стадии заболевания.

4. Исследовать содержание фенотипов лимфоцитов периферической крови СВ3СВ4СБ8, СВ3СВ4СБ25, СВ3СВ16СБ56, СВ10СВ19СБ5, СВ19СВ5СБ23 у больных псориазом с учетом характера взаимоотношений их с уровнем экспрессии молекул адгезии (Ь-селектин, LFA-1, 1САМ-1, LFA-3, РЕСАМ-1) на лимфоцитах периферической крови у больных псориазом в зависимости от пола, возраста, длительности заболевания, возраста манифестации, стадии заболевания и соматотипа.

5. Определить соотношение лимфоцитов СВ3СВ4СБ25 периферической крови с уровнем больших лимфоцитов крови, выделенной из капиллярной крови псориатической папулы.

6. Оценить взаимосвязь экспрессии молекул адгезии и рецептора CD95+ на нейтрофилах, моноцитах и лимфоцитах в периферической крови.

Научная новизна. Впервые установлена роль молекул адгезии в патогенезе псориаза в зависимости от пола, возраста, длительности заболевания, возраста манифестации, стадии воспаления дерматоза и соматотипа. Выявлено, что при трансформации прогрессирующей стадии в стационарную в капиллярную кровь псориатической папулы наиболее активно мигрируют нейтрофилы, содержащие 2 сегмента в ядре. Для миграции нейтрофилов с 3-мя и 4-мя сегментами в ядре в псориатическую папулу, в отличие от 2-х сегментных форм, необходимо дополнительное вспомогательное взаимодействие с агрегатами тромбоцитов, опосредованное молекулами LFA-1 и PECAM-1. Показано, что с наступлением регрессирующей стадии в капиллярную кровь псориатической папулы мигрируют полиморфноядерные моноциты, связанные непосредственно с молекулами адгезии PECAM-1. Установлено, что лимфопролиферативная реакция происходит непосредственно в псориатической папуле. Выявлена прямая зависимость низкого содержания в венозной крови Т-лимфоцитов CD3+CD4-CD8- и Т-хелперов CD3+CD4+CD8- с уровнем экспрессии молекулы PECAM-1 на лимфоцитах при переходе прогрессирующей стадии в стационарную. Низкие концентрации Т-лимфоцитов CD3+CD16-CD56+ в периферической крови у больных псориазом связаны с молекулами адгезии, задействованными на этапе «роллинга», «прочной адгезии» и «трансмиграции». ^ЖТ-клетки CD3+CD16+CD56+ и Т-лимфоциты CD3+CD16+CD56- в венозной крови у больных псориазом не определяются по сравнению с группой контроля. С наступлением стационарной стадии псориаза миграции подвержены В-лимфоциты, не имеющие молекулу CD5+ (CD10+CD19+CD5- и CD19+CD5-CD23+). Потеря рецептора CD10+ не сказывается на миграционной активности В-клеток. При проявлении стационарной стадии псориаза выявлен механизм, ограничивающий реализацию повреждающего потенциала мигрирующих клеток, заключающийся в экспрессии на них молекулы CD95 на всех этапах миграционного процесса.

Теоретическая и практическая значимость работы. Научно обоснована и сформулирована тактика для разработки метода лечения псориаза при переходе воспалительного процесса из прогрессирующей стадии в стационарную с учетом действия молекул адгезии. Определена клинически значимая мишень на различных этапах миграционного процесса иммунокомпетентных клеток с учетом индивидуализированного подхода для проведения противовоспалительной таргетной терапии псориаза до продукции патогенетически значимых цитокинов. Научно обосновано, что молекула РЕСАМ-1, экспрессируемая нейтрофилами и иммунокомпетентными клетками, является клинически значимой мишенью для проведения таргетной противовоспалительной терапии при переходе воспалительного процесса из прогрессирующей стадии псориаза в стационарную на этапе трансмиграции клеток до продукции ими патогенетически значимых цитокинов. Предложена методология определения критериев миграционной активности нейтрофильных лейкоцитов в псориатическую папулу в зависимости от их морфологии с учетом индивидуализированного подхода и обозначены их диапазоны: об активности миграционного процесса свидетельствует увеличение содержания нейтрофилов в капиллярной крови, выделенной с поверхности псориатической папулы, более 36,0% и снижение концентрации нейтрофилов в венозной крови ниже 56,0%, что связано с миграцией в псориатическую папулу преимущественно нейтрофилов, содержащих 2 сегмента в ядре, и, экспрессирующих молекулу РЕСАМ-1, при трансформации прогрессирующей стадии псориаза в стационарную, особенно, у больных с эндоморфным соматотипом. В ходе исследования получены новые данные, являющиеся основой для разработки лечебной тактики, направленной на купирование воспаления посредством влияния на условия, определяющих трансмиграцию нейтрофилов в зависимости от их морфологии из периферической крови в псориатическую папулу. Снижение миграционной активности нейтрофильных лейкоцитов с 3-мя и 4-мя сегментами в ядре, связанных с молекулой адгезии РЕСАМ-1, достигается путем блокирования дополнительного вспомогательного взаимодействия с агрегатами тромбоцитов. Определены детерминанты гуморального иммунитета,

связанные с благоприятным течением псориатического процесса. Концентрации в венозной крови В-лимфоцитов CD10+CD19+CD5- более 0,003 109 кл/л и CD19+CD5-CD23+ более 0,1 109 кл/л при наличии положительных корреляций с лимфоцитами, экспрессирующих молекулы адгезии L-селектина, LFA-1, LFA-3, ICAM-1 и PECAM-1 свидетельствуют о переходе воспалительного процесса из прогрессирующей стадии псориаза в стационарную. Сформулирована методика оценки лимфопролиферативной активности иммунокомпетентных клеток непосредственно в псориатической папуле: увеличение концентрации больших лимфоцитов в капиллярной крови, выделенной с поверхности псориатической папулы, более 19,0% и снижение содержания их в венозной крови менее 2,0% в сочетании с низкой концентрацией лимфоцитов CD3+CD4+CD25- (менее 0,72-109 кл/л) и CD3+CD4-CD25- (менее 0,51 109 кл/л) свидетельствует об активности трасмиграции иммунокомпетентных клеток в условиях развития прогрессирующей стадии воспалительного процесса. Утрата корреляций между концентрациями CD3+CD4+CD25- и CD3+CD4-CD25- и молекулами адгезии L-селектина, LFA-1, LFA-3, ICAM-1 и PECAM-1 свидетельствует о трансформации воспалительного процесса из стационарной стадии псориаза в регрессирующую. Разработан метод определения риска развития тяжелого течения псориаза на основании полученных данных относительно ограничения реализации повреждающего потенциала нейтрофилов и иммунокомпетентных клеток, мигрирующих в псориатическую папулу, через апоптоз на этапах «роллинга или скольжения», «прочной адгезии» и «трансмиграции» при переходе воспалительного процесса из прогрессирующей стадии псориаза в стационарную. Низкая концентрация нейтрофилов (менее 1,62-109 кл/л), моноцитов (менее 0,1 109 кл/л) и лимфоцитов (менее 0,37-109 кл/л), имеющих молекулу CD95, и отсутствие корреляций с уровнем экпсрессии молекул адгезии L-селектина, LFA-1, LFA-3, ICAM-1 и PECAM-1, свидетельствует о препятствии трансформации воспалительного процесса в стационарную стадию и способствует дальнейшему нарастанию прогрессирующей стадии псориаза.

Методология и методы исследования. В диссертационном исследовании использованы иммунологические, гематологические, гистологические, соматометрические и статистические методы исследования.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Клинически значимой мишенью для проведения противовоспалительной таргетной терапии псориаза является молекула РЕСАМ-1.

2. Для миграции нейтрофилов с 3-мя и 4-мя сегментами в ядре в капиллярную кровь псориатической папулы, в отличие от 2-х сегментных форм, необходимо дополнительное вспомогательное взаимодействие с агрегатами тромбоцитов, опосредованное молекулами LFA-1 и РЕСАМ-1.

3. Лимфопролиферация происходит непосредственно в псориатической папуле. Увеличение активности лимфопролиферации свидетельствует об активности трасмиграции иммунокомпетентных клеток в условиях развития прогрессирующей стадии воспалительного процесса.

4. Этапы миграционного процесса нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов в условиях псориаза сопряжены с апоптозом и зависят от стадии псориаза.

Внедрение результатов работы в практику. Результаты работы внедрены и применяются в практической деятельности Университетского медицинского центра ФГБОУ ВО СГМУ (г. Архангельск) Минздрава России; используются при преподавании на кафедрах патологической физиологии, кожных и венерических болезней ФГБОУ ВО СГМУ (г. Архангельск) Минздрава России, а также кафедрах патологической физиологии и дерматовенерологии ФГБОУ ВО "СЗГМУ им. И.И. Мечникова" Минздрава России (акт внедрения от 7.06.2019).

Личный вклад автора. Автор сформулировал цели, задачи и дизайн исследования, провел анализ обзора литературы, организовал и участвовал в проведении методов исследования, сформировал базу данных и статистически обработал ее, сформулировал выводы и практические рекомендации.

Степень достоверности результатов и апробация результатов. Достоверность результатов подтверждается достаточным объемом лабораторного материала, использованием современных высокоинформативных методов

исследования и адекватным выбором методов статистического анализа. Основные материалы исследования доложены в рамках XLV Ломоносовских чтениях, (Архангельск, 2016); XI Международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине» (СПб., 2016); Научно-практической конференции «Современные проблемы охраны здоровья военнослужащих» (СПб., 2016); IV Интернет-конференции с межд. участием «Актуальные проблемы военной и экстремальной медицины» (Гомель, 2016); Всероссийской междисциплинарной научно-практической конференции с международным участием «Инфекции, передаваемые половым путем и репродуктивное здоровье. Современные методы диагностики и лечения кожных заболеваний» (Казань, 2017); XVI Всероссийском съезде дерматовенерологов и косметологов (Москва, 2017); XXIII съезде Физиологического общества имени И.П. Павлова (Воронеж, 2017); XI Научно-практической конференции «Санкт-Петербургские дерматологические чтения» (СПб., 2017); XLVI Ломоносовских чтений, (Архангельск, 2017); Всероссийской научно-практической конференции «Боткинские чтения» (СПб., 2018); XLVII Ломоносовских чтений (Архангельск, 2018).

Материалы диссертации опубликованы в 28 печатных изданиях, из них 1 6 работ в изданиях, рекомендованных в ВАК Российской Федерации для опубликования результатов докторской диссертации, изданы 1 монография и 1 учебно-методическое пособие.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 231 страницах компьютерного текста и включает следующие разделы: введение, обзор литературных источников, описание материалов и методов исследования, 5 глав собственных исследований и обсуждения полученных результатов, заключение, выводы, практические рекомендации и список литературы, включающий 202 источник (86 отечественных и 116 зарубежных). Диссертация проиллюстрирована 63 таблицами и 34 рисунками.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О РОЛИ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ В ПАТОГЕНЕЗЕ ПСОРИАЗА (ОБЗОР ЛИТЕРЫ)

1.1. Характеристика иммунной системы кожи

Кожа человека проявляет себя, как орган иммунной системы, имеющий высокоэффективные комплексы клеточных и гуморальных компонентов, необходимых для распознавания антигена и его обезвреживании (табл. 1).

Таблица 1.

Иммуноциты эпидермиса и дермы

Клетки кожи Продукты синтеза Функции

ЭПИДЕРМИС

ИЛ: 1,3, 6,7,15,

Т№а, ГМ- , М-КСФ,

Кератиноциты ИФНа, в, ТФР в, хемокины TARC, МCD, СТАСК Защитная, строительная,

Клетки Лангерганса ИФН, ИЛ-1, 12, ГМ-КСФ, в-хемокины Представление и обработка антител Т-хелперам

ДЕРМИС

Тканевые макрофаги ИЛ-1, В, 15, Т№а, ИФНа Секреция цитокинов, фагоцитоз,

Фибробласты ИФН в, ИЛ-6, 7, КСФ Секреция цитокинов

Эндотелиальные клетки ИЛ-1, 6, Т№, КСФ Секреция цитокинов, контроль миграции

Ту5 -клетки (дендритные Т-лимфоциты) ИФНу Предшественники киллеров. Регуляторные клетки

СБ4+-Т-клетки ИЛ-2, 3,4, 5, ИФНу, Т№а Хелперы (в основном клеточного ответа),

регуляторные клетки (СЭ25)

СБ8+-Т-клетки ИФНу Предшественники цитотоксических Т-лимфоцитов

В-лимфоциты lg, ИЛ-1 Предшественники продуцентов АТ

Иммунологическая система кожи человека соединяет черты местного функционирования и интегрированности в общую иммунную систему всего организма. При повреждении целостности кожного покрова возникает активизация ее иммунной функции, что приводит к устранению локального агрессивного агента и к формированию на уровне всего организма иммунной памяти (Кошевенко Ю.Н., 2001; Махнева Н.В., 2017).

В 1978 году J. Wayne Streilein высказал предположение о наличии специализированного отдела иммунной системы, который он обозначил как «лимфоидная ткань, ассоциированная с кожей» (SALT, Skin Associated Lymphoid Tissue). Под этим определением J. Wayne Streilein соединил интегрированную систему, состоящую из антиген-представляющих клеток (АПК), расположенных в эпидермисе, тропных к эпидермису Т-лимфоцитов, самих кератиноцитов, а также лимфатических узлов, дренирующих эпидермис. Затем система SALT была расширена за счет введения в нее различного рода иммунных клеток, расположенных в эпидермисе и, главным образом, в дерме: макрофагов, тучных клеток, гранулоцитов, эндотелия кровеносных и лимфатических сосудов (Махнева Н.В., 2017).

Кератиноциты - это главная структурно-функциональная единица эпидермиса, формирующая защитный роговой слой и синтезирующая кератин. Кроме того, эти клетки способны продуцировать как факторы роста, так и интерлейкины. Кератиноциты имеют все типичные морфологические и биохимические свойства эпителиальных клеток, хранят цитокератины, создают свойственные зоны межклеточных контактов. На мембране кератиноцитов располагаются специальные адгезивные молекулы (интегрины, кадхерины и катенины), которые выполняют роль участия в развитии межклеточных контактов клеток эпидермиса, а также для рекрутинга, в случае необходимости, из дермы других иммунологических клеток, например, Т-лимфоцитов (Ярилин А.А., 2001; Белова О.В., Арион В.Я., 2007; Cabrijan L., et all, 2011).

Во время антигенной нагрузки, например, при бактериальной агрессии, радиационного повреждения, микотической инфекции и т.д., физиологическая

активность кератиноцитов изменяется. Так, при активации инфекционного очага на кератиноцитах повышается количество рецепторов для молекул адгезии -интегринов, что способствует им потенциально вступать в прямые контакты с мигрирующими в эпидермис лимфоцитами и множеством других иммунных клеток. Зарождается способность экспрессировать антигены HLA-DR (Белова О.В., и др., 2008). Кератиноциты синтезируют ИЛ-1, необходимый для триггерного процесса пролиферации самих кератиноцитов, а также фибробластов и лимфоцитов. Отличительной особенностью от макрофагов человека и моноцитов, выделяющих, главным образом, ИЛ-1 в, является то, что кератиноциты в огромном количестве выделяют ИЛ-1 а. Кератиноциты секретируют важные цитокины такие как в-ИФН, а также осуществляющие функции гемопоэтинов: GM-CSF, ИЛ-3, ИЛ-6, ИЛ-7 (Маслов Д.И., 2007).

1.2. Роль молекул адгезии в миграции иммунокомпетентных клеток

Молекулы адгезии - это белки, расположенные на клеточной мембране, которые ассоциированы с ней и осуществляют непосредственный контакт и взаимодействие клеток друг с другом. В большинстве случаев молекулы межклеточной адгезии занимают полностью всю толщу мембраны клетки, и тем самым, связаны с цитоскелетом, что позволяет при миграции вступать в непосредственный контакт с другими клетками или двигаться по межклеточному матриксу. Молекулы межклеточной адгезии имеют множество лигандов со сниженным сродством, однако, авидность взаимодействия их усиливается за счет кластерного расположения и создания участков с многоточечными связываниями (Пальцев М.А., 1995; Smith C.J., 2008).

Взаимодействие и контакт всех типов клеток может изменяться в результате повышения количества молекул адгезии на клеточной мембране либо при видоизменении их авидности и/или аффинности. С целью усиления активации межклеточного взаимодействия вырастает количество молекул адгезии на плазматической мембране. Выделяют два механизма роста молекул адгезии на

клеточной мембране: быстрый и медленный. Быстрый, осуществится в течение нескольких минут и связан с секрецией готовых молекул адгезии из внутриклеточных везикул, поступающих на клеточную мембрану. Для реализации медленного механизма необходимо несколько часов, поскольку требуется, в первую очередь, синтезировать сами молекулы адгезии, а затем передвигать их на мембрану (Veale D., 1995; Hayashida K., et all., 2010).

Все молекулы адгезии в зависимости от их химической природы делятся на пять структурных групп (табл. 2).

Таблица 2.

Основные функции молекул межклеточной адгезии

№ Семейство молекул адгезии Функция Молекулы

адгезия лейкоцитов к L-селектин, P-селектин, Е-селектин

1. Селектины эндотелиальным

клеткам

2. Интегрины межклеточные адгезивные рецепторы LFA-1, LFA-2, LFA-3

3. Суперсемейство иммуноглобулинов межклеточная адгезии ICAM-1, ICAM-2, ICAM-3, VCAM-1, JAM, ESAM, PECAM-1, MAdCAM-1

4. Кадгерины межклеточные адгезивные белки Е-кадгерин, N-кадгерин, Р-кадгерин, VE-кадгерин

5. Хоминговые рецепторы рециркуляция лимфоцитов в лимфоидную ткань кожно-лимфоцитарный антиген (CLA)

1.2.1. Семейство селектинов

Селектины - трансмембранные гликопротеины, которые имеют от двух до девяти повторов комплемент-регуляторных белков (Petri B., et al., 2008). Эти гликопротеины имеют три домена: наружный, который представлен N-концевым лектиновым доменом, промежуточный домен, включающий в себя эпидермальный фактор роста - EGF, и нескольких коротких консенсусных повторов, примыкающих к мембране или домены, контролирующие комплемент. Контакт с молекулами кальмодулина на актине у селектинов возникает через их

цитоплазматический отдел (Fernandez-Borja, et al., 2010). Для взаимодействия

2+

селектинов со своими лигандами обязательно необходимо наличие ионов Са (Kerr J.R, 1999). В современной литературе среди многочисленных селектинов выделяют основные три группы гликопротеинов: Е (от Endothelial -эндотелиальный), Р (от Platelet - тромбоцитарный), L (от Lymphocyte -лимфоцитарный).

Молекула L-селектина располагается на мембране нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов и способствует осуществлению первого этапа миграции роллинга или скольжения этих клеток вдоль эндотелия (HafeziMoghadam A., Thomas K.L., Prorock A.J., at al., 2001).

Показано, что молекула L-селектина контролирует роллинг процесс лейкоцитов вдоль стенки эндотелия микроциркуляторного русла - феномен, который большинство исследователей обозначают, как начало адгезии лейкоцитов к эндотелию, приводящий их накапливанию в зоне воспаления (Rosen S.D., 2004). Расщепляют L-селектин металлопротеиназы клеточной поверхности мембраны, что может понижать функциональную активность данной молекулы в механизмах адгезии (Male D., et al., 2006).

Основными лигандами молекулы L-селектина являются иммунокомпетентные клетки CD34, эндогликан и GlyCAM-1 на клетках эндотелия. Молекулы CD34 и эндогликана локализованы в неактивной зоне на эндотелиальных клетках. После активации этих клеток они приобретают свойство связываться с молекулой L-селектином. Молекулы GlyCAM-1 находятся в форме трансмембранного белка и в растворимой форме (Mitsui A., et al., 2015).

Молекула L-селектина свободно поддается шеддингу и образовывает малую связь с адрессинами, поэтому опосредованное взаимодействие между эндотелиальной клеткой и L-селектином лейкоцитов весьма неустойчив. Это проявляется в перекатывании лейкоцитов вдоль стенки сосудов. Затем после этого процесса синтез Р- и Е-селектинов на поверхности эндотелиальных клеток и адгезионные свойства происходят достаточно интенсивно, чтобы «задержать» и «ухватить» циркулирующие в кровотоке лейкоциты. При дефиците молекулы Р-

селектина скольжение лейкоцитов полностью прекращается, а недостаток молекулы L-селектина не нарушает начавшийся процесс скольжения лейкоцитов, хотя в тоже время существенно понижает его. Молекулы Р-селектина локализуются в секреторных везикулах (тельцах Weibel-Palade) эндотелиальных клеток и а-гранулах тромбоцитов. При активации эндотелиальных клеток микроциркуляторного русла провоспалительными медиаторами - оксидантами, гистамином, лейкотриенами, тромбином молекулы Р-селектина начинают усиленно синтезироваться на поверхности клетки. Кроме активации тромбоцитов, молекула Р-селектина принимает участие в начальных этапах движения лейкоцитов в область воспаления (Petri B., et al., 2008).

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Шерстенникова Александра Константиновна, 2023 год

овые

Больные псориазом

МАЛЫЕ (

псор

СРЕДНИЕ (0,32)

0,14)

СРЕДНИЕ * (0,34*)

РЕСЛМ-1-►

РЕСЛМ-1

БОЛЬШИЕ (0,34)

БОЛЬШИЕ (0,47**)

(д)

Рис. 20. Корреляция между содержанием молекул адгезии Ь-селектина (а), ЬБЛ-1 (б), 1СЛМ-1 (в), ЬБЛ-3 (г), РЕСЛМ-1 (д) и МАЛЫМИ, СРЕДНИМИ и БОЛЬШИМИ лимфоцитами. В скобках указаны корреляционные значения по Спирмену и достоверность коэффициента корреляции * р<0,05 и ** р<0,01.

Корреляционный анализ лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, в

Корреляционный анализ показал наличие статистически значимых корреляций на этапе «роллинга» между содержанием молекулой Ь-селектина с концентрацией средних (р=0,37; р=0,002) и больших (р=0,27; р=0,02), но не малых лимфоцитов (р=0,11; р=0,34) только у больных псориазом, имеющих соматотип эндоморфов. У мезоморфов и эктоморфов аналогичные корреляции были слабыми и статистически недостоверными.

На этапе «прочной адгезии» содержание лимфоцитов, имеющих молекулу ЬБЛ-1, коррелировали с уровнем средних и больших лимфоцитов у эндоморфов и мезоморфов, тогда как у эктоморфов подобных корреляций не регистрировали.

Уровень лимфоцитов с молекулой ЬБЛ-3 коррелировал с концентрациями больших лимфоцитов у эндоморфов, а также со средними и большими лимфоцитами у мезоморфов, в отличии от эктоморфов, у которых данных корреляций не выявлено.

Статистически значимых корреляций между уровнем лимфоцитов, имеющих молекулу 1СЛМ-1, и концентрациями малых, средних и больших лимфоцитов у больных псориазом в зависимости от соматотипа не обнаружено.

зависимости от соматотипа

На этапе «трансмиграции» у больных псориазом выявлены статистически достоверные корреляции между уровнем лимфоцитов с молекулой PECAM-1 и концентрациями больших лимфоцитов только у эндоморфов и мезоморфов.

Таким образом, корреляционный анализ показал наличие статистически значимых корреляций у больных псориазом, имеющих эндоморфный и мезоморфный соматотип, между большими лимфоцитами и молекулами адгезии LFA-1, LFA-3 и PECAM-1. Кроме того, у больных - эндоморфов регистрировали статистически значимую корреляцию между большими лимфоцитами и молекулой L-селектина. Учет данных корреляций, позволяет утверждать об усиленной миграции, именно, больших лимфоцитов, но не малых и средних по размеру лимфоцитов у больных с эндоморфным и мезоморфным соматотипами.

Следовательно, в условиях гиперпролиферации кератиноцитов, что и наблюдают при псориазе, содержание малых лимфоцитов не изменялось. Не было и статистически достоверных корреляций между концентрациями малых лимфоцитов, и молекулы L-селектина, LFA-1, ICAM-1, LFA-3 и PECAM-1. В связи с этим можно предположить отсутствие существенной роли малых лимфоцитов в патогенезе гиперпролиферации кератиноцитов при псориазе. Изменений в концентрации средних лимфоцитов у больных псориазом не отмечено. Корреляции между содержаниями средних лимфоцитов и молекулы LFA-1 и LFA-3, наблюдали как у больных псориазом, так и в группе сравнения. Отличие заключалось в том, что в условиях гиперпролиферации кератиноцитов отмечены статистически достоверные корреляции между уровнями средних лимфоцитов с молекулами ICAM-1 и PECAM-1.

Наибольшие изменения касались содержания в венозной крови больших лимфоцитов, уровень которых существенно был снижен. Как известно, большие лимфоциты служат свидетельством лимфопролиферации (Зак К.П., 1992).

Создается впечатление, что в условиях гиперпролиферации кератиноцитов либо снижается лимфопролиферативная реакция, либо увеличивается миграция именно больших, но не средних, а тем более малых лимфоцитов. В пользу увеличения миграционной активности больших лимфоцитов может указывать тот

факт, что воспалительный процесс сопровождается лимфопролиферацией, и псориаз в этом смысле не исключение (81§типёвёоШг Н., е1 а1., 2001). С другой стороны, наличие статистически достоверных корреляций между концентрациями больших лимфоцитов с молекулами ЬБЛ-1, 1САМ-1, ЬБЛ-3 и РЕСАМ-1, при отсутствии таковых корреляций в группе сравнения может указывать на преимущественную миграцию лимфоцитов, вступивших в лимфопролиферацию.

Таким образом, при псориазе наблюдают усиленную миграцию больших лимфоцитов из периферической крови, о чем свидетельствуют снижение их абсолютного числа и наличие статистически значимых корреляционных связей с молекулами ЬБЛ-1, ЬБЛ-3, 1САМ-1 и РЕСАМ-1.

5.9. Соотношение содержания лимфоцитов периферической крови и капиллярной крови, выделяемой с поверхности псориатической папулы

Сравнение соотношения концентрации лимфоцитов и их популяции в капиллярной крови, выделяемой с поверхности псориатической папулы, и венозной крови показало отсутствие различий в содержании общего количества лимфоцитов (30,53% (26,83;45,22) и 34,0% (28,0;43,0); 1^=0,01; р=0,89) (рис. 21).

31%

34%

Венозная кровь

Капиллярная кровь псориатической папулы

Рис. 21 . Соотношение содержания лимфоцитов венозной крови и капиллярной

крови папулы

Итак, несмотря на отсутствие видимых различий в содержании лимфоцитов венозной крови у больных псориазом, изменения все же были, и они заключались

в статистически значимом снижении концентрации больших лимфоцитов в структуре лимфоцитограммы. В капиллярной крови псориатической папулы содержание больших лимфоцитов резко нарастало (рис. 22).

50 40 30 20 10 0

Капиллярная кровь псориатической папулы Венозная кровь

*

I

Малые лимфоциты Средние лимфоциты Большие лимфоциты

Рис. 22. Соотношение содержания популяций лимфоцитов венозной крови и капиллярной крови псориатической папулы в зависимости от размера цитоплазмы

(Ме (%) (025; 075))

Как известно, большие лимфоциты являются свидетельством лимфопролиферации (Пичугина Л.В., 2008). Складывается впечатление, что в условиях гиперпролиферации кератиноцитов увеличивается миграция именно больших, но не средних, а тем более малых лимфоцитов. В пользу увеличения миграционной активности больших лимфоцитов может указывать тот факт, что воспалительный процесс сопровождается лимфопролиферацией и псориаз в этом смысле не исключение. С другой стороны, наличие статистически значимых корреляций между концентрациями больших лимфоцитов и лимфоцитов, экспрессирующих молекулы ЬБА-1, 1САМ-1, ЬБЛ-З и РЕСАМ-1, при отсутствии таковых корреляций в группе сравнения, может дополнительно указывать на преимущественную миграцию лимфоцитов, вступивших в лимфопролиферацию.

ГЛАВА 6. ЛЕЙКОЦИТАРНО-ТРОМБОЦИТАРНАЯ АДГЕЗИЯ У БОЛЬНЫХ ПСОРИАЗОМ

Межклеточные взаимодействия или контакты посредством молекул адгезии обеспечивают целостность тканей, содействуют миграции лейкоцитов в очаг воспаления, что необходимо для реализации иммунного ответа. Отдельное внимание представляет исследование непосредственного взаимодействия тромбоцитов с лейкоцитами. Учитывая, что взаимодействия тромбоцитов с нейтрофилами, моноцитами и лимфоцитами выявляются не только при острых нарушениях кровообращения, хронических воспалительных процессах (Hack C.E., 2003), а также и при нормальных или физиологических состояниях, можно с уверенностью сказать, что данные контакты есть проявление биологического процесса, необходимого для сохранения постоянства внутренней среды организма (Солпов А.В., 2005; Li Y., et al., 2010).

Известно, что в нормальном физиологическом состоянии на лейкоцитах экспрессируется небольшое число молекул адгезии, необходимых для миграции этих клеток за пределы сосудистого русла, то есть интактные лейкоциты в имеют слабое адгезивное свойство. Из этого следует, что лейкоцитам необходим прямой контакт с тромбоцитами, поскольку, именно тромбоциты, формируют кооперацию для наиболее эффективного перевода этапа «роллинга» в этап «прочной адгезии», за счет контакта кровяных пластинок с коллагеновыми волокнами стенок сосудов (Solpov A.V., Shenkman B., Vitkovsky Yu.A., 2007).

6.1. Межклеточные контакты периферической крови у практически здоровых и

больных псориазом

Было исследовано наличие или отсутствие факта непосредственных межклеточных контактов периферической крови у больных псориазом.

I

■ ^

-')

'Ь

Г Ъж г

*

а) нейтрофил-лимфоцит

б) нейтрофил-моноцит

в) нейтрофил-нейтрофил

Рис.23. Межклеточные контакты нейтрофилов периферической крови: нейтрофил-лимфоцит (а), нейтрофил-моноцит (б), нейтрофил-нейтрофил (в).

Окраска Романовский-Гимзе. Ув.1000.

Как следует из полученных данных (таб. 40), у больных псориазом наличие контактов между нейтрофилами регистрировали существенно меньше, чем в группе контроля (71,8% против 91,8%; %2=7,25; р=0,009). Контакты в периферической крови нейтрофилов с моноцитами и лимфоцитами как у больных псориазом, так и в группе контроля происходили одинаково часто: 59,2% и 65,3%; Х2=0,46; р=0,56 и 70,4% и 75,5%; ^=0,38; р=0,67, соответственно.

Таблица 40.

Межклеточные контакты периферической крови у практически здоровых и больных псориазом (Ме (%) (025; 075))

Показатели (%) Практически здоровые п=50 Больные псориазом п=82 Уровень статистической значимости (р)

1 2 3 4

Контакты между нейтрофилами имеются 91,8 (45) 71,8 (51) X2 =7,25; р=0,009

отсутствуют 8,2 (4) 28,2 (20)

Контакты нейтрофилов и моноцитов имеются 65,3 (32) 59,2 (42) X2 =0,46; р=0,56

Контакты нейтрофилов и лимфоцитов имеются 75,5 (37) 70,4 (50) X2 =0,38; р=0,67

отсутствуют 24,5 (12) 29,6 (21)

Таким образом, в периферической крови межклеточные контакты существуют между нейтрофилами, между нейтрофилами и моноцитами, нейтрофилами и лимфоцитами. Контакты между нейтрофилами в условиях псориаза наблюдались значительно реже, чем в группе контроля. Различий в наличии контактов между нейтрофилами и моноцитами, нейтрофилами и лимфоцитами у больных псориазом и группы контроля не выявлено.

Представляло интерес изучение количества непосредственных межклеточных контактов в периферической крови на 100 нейтрофилов. Выявлено, что у больных псориазом регистрируется всего 1 контакт нейтрофил-нейтрофил, что существенно меньше, чем в группе контроля: 1,0 (0,0;2,0) против 3,0 (1,5;4,5); 2=2,35; р=0,000. Количество контактов в периферической крови нейтрофилов с моноцитами и нейтрофилов с лимфоцитами в пересчете на 100 нейтрофилов было равно 1 как у больных псориазом, так и в группе контроля.

Следовательно, в условиях псориатического процесса нейтрофилы значительно реже контактируют между собой. На 100 нейтрофилов приходилось по одному контакту нейтрофилов с моноцитами и нейтрофилов с лимфоцитами как у больных псориазом, так и в группе контроля.

Важным представляло изучение контактов в периферической крови нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов с агрегатами тромбоцитов, поскольку агрегаты тромбоцитов играют роль «катализаторов» миграции лейкоцитов и служат дополнительным вспомогательным механизмом их движения в очаг воспаления (Shenkman В., Solpov A., Vitkovsky Yu., et al., 2006).

Выявлено, что контакты палочкоядерных нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов регистрируются только у половины больных псориазом и половины обследуемых из группы контроля: 52,1% и 55,1%; х2=0,1; р=0,85. Контакты 2-х сегментных форм нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов происходят чаще: у 95,9% лиц из группы контроля и у 71,8% больных псориазом. (%2=11,23; р=0,0006). Наблюдаемое различие между больными псориазом и группой контроля статистически значимое (х2 =11,23; р=0,0006). С тромбоцитами факт наличия контактов 3-х, 4-х и нейтрофилов с 5-ю сегментами в ядре наблюдается у всех обследуемых из группы контроля. Значительно реже наблюдаются соответствующие контакты в условиях псориаза. Так с агрегатами тромбоцитов 3-х сегментные нейтрофилы контактируют только у 80,3%; х2=10,94; р=0,0007, 4-х сегментные формы у 76,1%; х2=13,67; р=0,0007, нейтрофилы с 5-ю и более сегментами - у 49,3%; х2=35,49; р=0,0001.

Как следует из представленных данных (рис. 24) у больных псориазом на 100 нейтрофилов приходится по 7,0 (3,0;15,0) контактов с агрегатами тромбоцитов, что в два раза меньше, чем в группе контроля: 26,0 (23,0;31,0); Z=3,18; p=0,0001. В основном с агрегатами тромбоцитов в периферической крови контактировали нейтрофилы с 3-мя, 4-мя, 5-ю и более сегментами, т.к. на 100 нейтрофилов с 1 - и 2-сегментами приходилось по одному контакту с агрегатами тромбоцитов. В условиях псориаза количество непосредственных контактов 3-х сегментных форм нейтрофилов значительно меньше, чем в группе контроля: 4,0 (1,0;11,0) против 11,0 (9,0;13,0); Z=3,07; p=0,001. Также существенно реже контактировали с агрегатами тромбоцитов нейтрофилы, содержащие 4, 5 и более сегментов: 2,0 (0,39;8,0) против 9,0 (6,0;12,0); Z=3,08; p=0,001 и 1,0 (0,0;4,0) против 4,0 (2,5;6,0); Z=2,57; p=0,001.

20

10

0

**

I

-1 *

^ е

¿г

V

# У У /

у у /

Практически здоровые

Больные псориазом

Рис. 24. Содержание коагрегатов тромбоцитов с нейтрофилами венозной крови у практически здоровых и больных псориазом * р<0,05; ** - р < 0,001 (непараметрический критерий Колмогорова - Смирнова).

Таким образом, контакты односегментных нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов регистрируются только у половины больных псориазом и половины обследуемых из группы контроля. В условиях псориаза непосредственные контакты нейтрофилов с 3-мя, 4-мя, 5-ю и более сегментами в ядре с агрегатами тромбоцитов в периферической крови встречаются значительно реже, чем в группе контроля.

У больных псориазом количество контактов моноцитов с агрегатами тромбоцитов было несколько меньше, чем в группе контроля: 3,0 (1,0;8,0) против 5,0 (2,0;7,5); 2=1,03; р=0,23. Данная тенденция формировалась за счет того, что меньше с агрегатами тромбоцитов контактировали промоноциты: 0,0 (0,0;2,0) против 1,0 (0,0;1,0); 2=0,83; р=0,49 и собственно моноциты: 1,0 (0,0;2,0) против 2,0 (1,0;4,0); 2=1,11; р=0,16, но не полиморфноядерные моноциты (таб. 41).

Количество контактов между лимфоцитами и агрегатами тромбоцитов, что у больных псориазом, что у практически здоровых лиц было одинаковым. При этом у больных псориазом реже имели контакт с агрегатами тромбоцитов средние

и большие лимфоциты: 2,0 (1,0;4,0) против 3,0 (2,0;4,0); 2=1,5; р=0,02 и 0,0 (0,0;1,0) против 1,0 (0,0;2,0); 2=1,26; р=0,08 (таб. 47).

Таблица 41.

Контакты агрегатов тромбоцитов с моноцитами и лимфоцитами у практически

здоровых лиц и больных псориазом (Ме (025; 075))

Показатели Практически здоровые п=50 Больные псориазом п=82 Уровень статистической значимости (р)

1 2 3 4

Контакты агрегатов тромбоцитов с моноцитами

Моноцитами 5,0 (2,0;7,5) 3,0 (1,0;8,0) 2-3 2=1,03; р=0,23

Промоноцитами 1,0 (0,0;1,0) 0,0 (0,0;2,0) 2-3 2=0,83; р=0,49

Собственно моноцитами 2,0 (1,0;4,0) 1,0 (0,0;2,0) 2-3 2=1,11; р=0,16

Полиморфноядерными моноцитами 2,0 (1,0;3,5) 2,0 (0,0;3,0) 2-3 2=0,8; р=0,54

Контакты агрегатов тромбоцитов с лимфоцитами

Лимфоцитами 5,0 (3,0;11,0) 5,0 (2,0;8,0) 2-3 2=1,05; р=0,21

Малыми лимфоцитами 1,0 (1,0;2,0) 2,0 (0,0;4,0) 2-3 2=1,05; р=0,21

Средними лимфоцитами 3,0 (2,0;4,0) 2,0 (1,0;4,0) 2-3 2=1,5; р=0,02

Большими лимфоцитами 1,0 (0,0;2,0) 0,0 (0,0;1,0) 2-3 2=1,26; р=0,08

Таким образом, в условиях псориаза нейтрофилы и средние по размеру лимфоциты реже непосредственно контактируют с агрегатами тромбоцитов. Различий между больными псориазом и группой контроля по количеству контактов моноцитов с агрегатами тромбоцитов не было.

6.2. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической

крови в зависимости от пола

Количество непосредственных контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови (табл. 42) у мужчин больных псориазом существенно меньше, чем у мужчин из группы контроля: 4,0 (2,0;5,25) против 30,0 (25,0;34,0); 2=3,49; р=0,00.

Таблица 42.

Контакты агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами у больных псориазом и

практически здоровых лиц в зависимости от пола (Ме (025; 075))

Количество Практически Больные Уровень

коагрегатов здоровые псориазом статистической

тромбоцитов муж жен муж жен значимости (р)

п= 22 п= 28 п=43 п=39

1 2 3 4 5 6

с 30,0 26,0 4,0 27,0 2-4 2=3,49; р=0,00

нейтрофилами (25,0; (21,25; (2,0; (18,5; 3-5 2=0,97; р=0,3

34,0) 29,0) 5,25) 35,5)

с палочко- 0,0 1,0 0,0 2,0 2-4 2=0,98; р=0,28

ядерными (0,0; (0,0; (0,0; (1,0; 3-5 2=1,01; р=0,25

2,0) 2,0) 0,25) 3,0)

с 2-х 3,0 2,0 1,0 3,0 2-4 2=1,62; р=0,01

сегментными (1,0; (1,0; (0,0; (1,0; 3-5 2=0,73; р=0,65

4,0) 3,0) 2,0) 4,0)

с 3-х 11,0 10,5 2,0 10,0 2-4 2=3,39; р=0,00

сегментными (9,5; (9,0; (0,0; (5,0; 3-5 2=1,08; р=0,19

14,0) 13,0) 2,25) 13,0)

с 4-х 10,0 7,0 1,0 7,0 2-4 2=3,63; р=0,00

сегментными (7,0; (6,0; (0,0; (3,0; 3-5 2=0,93; р=0,34

12,5) 9,75) 2,0) 10,5)

с 5-ю 4,0 3,5 0,0 4,0 2-4 2=3,26; р=0,00

сегментными (3,0; (2,0; (0,0; (1,5; 3-5 2=0,64; р=0,79

и более 6,0) 5,75) 0,0) 7,5)

Среди женщин различий не было: 26,0 (21,25;29,0) и 27,0 (18,5;35,0); 2=0,97; р=0,3. Палочкоядерные нейтрофилы всех реже контактировали с агрегатами тромбоцитов, как у мужчин, так и у женщин без статистически значимых различий.

В основном контакты осуществляли нейтрофилы, содержащие 3- и 4-сегмента в ядре. При этом различия в количестве контактов регистрировались

только у мужчин, но не у женщин. Так у мужчин больных псориазом на 3 -х сегментные формы нейтрофилов приходилось только по 2,0 (0,0;2,25) контакта с агрегатами тромбоцитов, тогда как у мужчин из группы контроля по 11,0 (9,5;14,0); 2-4 Z=3,39; p=0,00. На 4-х сегментные формы приходилось 1,0 (0,0;2,0) против 10,0 (7,0;12,5); Z=3,63; p=0,00 (табл. 48).

Таким образом, в основном контакты с агрегатами тромбоцитов осуществляли нейтрофилы, содержащие 3- и 4- сегмента в ядре. У мужчин больных псориазом количество изучаемых контактов было существенно ниже.

6.3. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста больных псориазом

В ходе анализа контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в зависимости от возраста больных псориазом статистически значимых различий не выявлено (табл. 43).

Следует отметить, что у больных в возрасте 31-40 лет в сравнении с больными 21-30 лет наблюдалась тенденция к снижению числа контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов: 5,0 (0,0;19,0) против 19,0 (4,5;27,5); Z=0,43; p=0,99; за счет более редких контактов 3-сегмнетных: 0,0 (0,0;5,5) против 6,0 (1,0;12,5); Z=0,68; p=0,73.

В возрасте старше 41 года количество изучаемых контактов вновь увеличилось.

Количество контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста больных псориазом статистически значимых различий не показали.

Таблица 43.

зависимости от возраста больных (Ме (025; 075))

Количество коагрегатов тромбоцитов Возраст больных псориазом Уровень статистической значимости (р)

20-30 п=22 31-40 п=22 41-60 п=38

1 2 3 4 5

с нейтрофилами 19,0 (4,5;27,5) 5,0 (0,0;19,0) 24,0 (3,0;27,0) 2-3 2=0,43; р=0,99 2-4 2=0,51; р=0,95 3-4 2=0,45; р=0,98

с палочкоядерными 1,0 (0,0;2,5) 0,0 (0,0;0,0) 1,0 (0,0; 1,0) 2-3 2=0,63; р=0,81 2-4 2=0,55; р=0,91 3-4 2=0,61; р=0,84

с 2-х сегментными 2,0 (1,0;3,0) 1,0 (0,0;3,5) 2,0 (1,0;3,0) 2-3 2=0,63; р=0,81 2-4 2=0,29; р=1,00 3-4 2=0,56; р=0,91

с 3-х сегментными 6,0 (1,0;12,5) 0,0 (0,0;5,5) 11,0 (2,0;14,0) 2-3 2=0,68; р=0,73 2-4 2=0,59; р=0,86 3-4 2=1,03; р=0,23

с 4-х сегментными 4,0 (1,5;8,0) 3,0 (0,0;7,0) 5,0 (0,0;8,0) 2-3 2=0,43; р=0,99 2-4 2=0,37; р=0,99 3-4 2=0,54; р=0,93

с 5-ю сегментными и более 1,0 (0,0;4,5) 0,0 (0,0;3,5) 2,0 (0,0;3,0) 2-3 2=0,43; р=0,99 2-4 2=0,23; р=1,0 3-4 2=0,54; р=0,93

Таким образом, наблюдаемое снижение числа изучаемых контактов у больных 31-40 лет было только в виде тенденции.

6.4. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста манифестации псориаза

При изучении количества непосредственных контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови (табл. 44) выявлены только тенденции, касающиеся меньшего количества контактов в случае манифестации псориаза до 10 лет: 5,5 (2,25;34,0)) и 31-40 лет: 5,0 (0,0;19,0). Максимальное

количество контактов наблюдали при манифестации псориаза у лиц старше 40 лет: 24,0 (3,0;27,0). В основном контактировали нейтрофилы с 3-мя и 4-мя сегментами в ядре, особенно в случае манифестации псориаза старше 40 лет: 11,0 (2,0;14,0) и 5,0 (0,0;8,0).

Таблица 44.

Контакты агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами у больных псориазом в

зависимости от возраста манифестации (Ме (025; 075))

Количество Возраст манифестации псориаза Уровень

коагрегатов 0-10 11-20 21-30 31-40 41 -59 статистической

тромбоцитов п=13 п=21 п=17 п=19 п=12 значимости (р)

1 2 3 4 5 6 7

с нейтрофилами 5,5 12,5 19,0 5,0 24,0 2-3 2=0,55; р=0,91

(2,25; (4,0; (4,5; (0,0; (3,0; 2-4 2=0,45; р=0,98

34,0) 31,5) 27,5) 19,0) 27,0) 2-5 2=0,52; р=0,94

2-6 2=0,68; р=0,73

с палочко- 0,5 1,5 1,0 0,0 1,0 2-3 2=0,72; р=0,67

ядерными (0,0; (0,0; (0,0; (0,0; (0,0; 2-4 2=0,26; р=1,0

3,0) 3,0) 2,5) 0,0) 1,0) 2-5 2=0,73; р=0,64

2-6 2=0,3; р=1,0

с 2-х 1,5 2,0 2,0 1,0 2,0 2-3 2=0,52; р=0,94

сегментными (0,0; (0,75; (1,0; (0,0; (1,0; 2-4 2=0,35; р=1,0

3,5) 4,25) 3,0) 3,5) 3,0) 2-5 2=0,31; р=1,0

2-6 2=0,34; р=1,0

с 3-х 2,5 3,5 6,0 0,0 11,0 2-3 2=0,36; р=0,99

сегментными (0,75; (0,75; (1,0; (0,0; (2,0; 2-4 2=0,53; р=0,93

10,75) 10,25) 12,5) 5,5) 14,0) 2-5 2=0,73; р=0,64

2-6 2=0,72; р=0,66

с 4-х 2,0 2,5 4,0 3,0 5,0 2-3 2=0,52; р=0,94

сегментными (0,0; (1,0; (1,5; (0,0; (0,0; 2-4 2=0,55; р=0,91

10,0) 6,25) 8,0) 7,0) 8,0) 2-5 2=0,21; р=1,0

2-6 2=0,42; р=0,99

с 5-ю 0,0 1,0 1,0 0,0 2,0 2-3 2=0,55; р=0,91

сегментными и (0,0; (0,0; (0,0; (0,0; (0,0; 2-4 2=0,78; р=0,56

более 4,0) 4,25) 4,5) 3,5) 3,0) 2-5 2=0,31; р=1,0

2-6 2=0,42; р=0,99

Таким образом, статистически значимых различий в количестве контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от возраста манифестации псориаза не выявлено. Наблюдаемые тенденции касались

увеличения частоты контактов с 3-мя и 4-мя сегментными формами нейтрофилов в случае манифестации псориаза старше 40 лет.

6.5. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от продолжительности заболевания

Статистически значимых различий в количестве контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от продолжительности заболевания не наблюдалось (табл. 45).

Таблица 45.

Контакты агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами у больных псориазом в

зависимости от продолжительности заболевания (Мё (025; 075))

Количество Продолжительность заболевания Уровень

коагрегатов 0-1 1-3 3-5 5 и более статистической

тромбоцитов п= 17 п=13 п=12 п=40 значимости (р)

1 2 3 4 5 6

с нейтрофилами 24,0 22,0 20,0 6,0 2-32=0,79; р=0,54

(1,5; (9,5; (5,75; (3,0; 2-42=0,55; р=0,91

30,0) 28,0) 30,5) 27,0) 2-52=0,69; р=0,72

с палочко- 1,0 1,0 0,5 1,0 2-3 2=0,15; р=1,0

ядерными (0,0; 2,0) (0,0; (0,0; (0,0; 2,0) 2-42=0,37; р=0,99

2,5) 1,75) 2-52=0,42; р=0,99

с 2-х 1,0 2,0 3,0 2,0 2-32=0,51; р=0,95

сегментными (0,5; 2,0) (1,0; (0,5; (0,0; 3,0) 2-42=0,69; р=0,72

3,5) 5,5) 2-52=0,64; р=0,70

с 3-х 6,0 7,0 8,0 2,0 2-32=0,79; р=0,54

сегментными (0,0; (5,5; (2,5; (1,0; 2-42=0,74; р=0,64

12,0) 10,5) 13,5) 10,0) 2-5 2=0,64; р=0,8

с 4-х 4,0 7,0 4,5 2,0 2-32=0,59; р=0,86

сегментными (0,5; (1,0; (1,5; (0,39; 2-42=0,74; р=0,64

11,5) 9,0) 6,75) 7,0) 2-52=0,86; р=0,44

с 5-ю 3,0 1,0 2,0 0,0 2-32=0,43; р=0,99

сегментными и (0,0; 6,5) (0,5; (0,25; (0,0; 3,0) 2-42=0,37; р=0,99

более 6,0) 6,0) 2-52=0,81; р=0,51

Тенденции касались более высокого числа контактов при продолжительности псориаза до 1 года: 24,0 (1,5;30,0) в основном за счет 3- и 4-

сегментных форм нейтрофилов, в последующие годы количество контактов уменьшалось, достигнув минимума у больных с продолжительностью псориаза более 5 лет: 6,0 (3,0;27,0); Z=0,69; p=0,72.

Таким образом, с увеличением продолжительности псориазом количество контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов уменьшались.

6.6. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической

крови в зависимости от стадии псориаза

Статистически значимых различий при анализе контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от стадии псориаза не выявлено (табл. 46).

Наблюдаемые тенденции касались более частых контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в прогрессирующую стадию псориаза: 15,0 (3,0;29,0) против 6,0 (3,2;27,0); Z=0,69; p=0,71 и против 7,5 (0,75;22,5); Z=0,72; p=0,67. Учитывая структуру сегментограммы, в прогрессирующую стадию несколько чаще, чем в стационарную и регрессирующую контактировали с агрегатами тромбоцитов 1 (1,0 (0,0;) против 0,0 (0,0;2,0); Z=1,02; p=0,24 и против 0,5 (0,0;3,2); Z=0,36; p=0,99), 2-х (2,0 (1,0;5,0) против 1,0 (0,0;3,0); Z=1,09; p=0,18 и против 0,5 (0,0;1,75); Z=0,88; p=0,41) и 3-х (5,0 (1,0;13,0) против 2,0 (1,0;9,7); Z=0,82; p=0,51 и против 4,5 (0,25;11,7); Z=0,44; p=0,99) сегментные формы.

В прогрессирующую и стационарную стадии нейтрофилы с 3-мя сегментами чаще контактировали с агрегатами тромбоцитов, чем нейтрофилы палочкоядерные (W=-3,6; р=0,001 и W=-5,0; р=0,0001), 2-мя (W=-3,38; р=0,001 и W=-4,11; р=0,001) сегментом в ядре. В регрессирующей стадии данные различия не имели статистической значимости (W=-1,6; р=0,11 и W=-1,6; р=0,11). Различия в частоте контактов с агрегатами тромбоцитов между нейтрофилами с 3-мя и 4-мя сегментами в ядре регистрировали только в прогрессирующую стадию (W=-2,83; р=0,005), но не в стационарную (W=-0,09; р=0,92) и не в регрессирующую (W=-1,34; р=0,18) стадии.

Таблица 46.

Контакты агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами у больных псориазом в зависимости от стадии псориаза (Ме (025; 075))

Количество коагрегатов тромбоцитов Стадии псориаза Уровень статистической значимости (р)

Прогрессирующая п=22 Стационарная п=44 Регрессирую щая п=16

1 2 3 4 5

с нейтрофилам и 15,0 (3,0;29,0) 6,0 (3,2;27,0) 7,5 (0,75;22,5) 2-3 7=0,69; р=0,71 2-4 7=0,72; р=0,67 3-4 7=0,52; р=0,94

с палочко-ядерными 1,0 (0,0;2,0) 0,0 (0,0;2,0) 0,5 (0,0;3,2) 2-3 7=1,02; р=0,24 2-4 7=0,36; р=0,99 3-4 7=0,43; р=0,99

с 2-х сегментными 2,0 (1,0;5,0) 1,0 (0,0;3,0) 0,5 (0,0;1,75) 2-3 7=1,09; р=0,18 2-4 7=0,88; р=0,41 3-4 7=0,56; р=0,9

с 3-х сегментными 5,0 (1,0;13,0) 2,0 (1,0;9,7) 4,5 (0,25; 11,7) 2-3 7=0,82; р=0,51 2-4 7=0,44; р=0,99 3-4 7=0,34; р=1,0

с 4-х сегментными 2,0 (0,39;7,0) 3,0 (0,25;8,7) 1,0 (0,25;3,25) 2-3 7=0,56; р=0,91 2-4 7=0,72; р=0,67 3-4 7=0,78; р=0,57

с 5-ю сегментными и более 1,0 (0,0;3,0) 0,0 (0,0;4,7) 1,0 (0,25;2,5) 2-3 7=0,53; р=0,93 2-4 7=0,4; р=0,99 3-4 7=0,61; р=0,85

Таким образом, с агрегатами тромбоцитов нейтрофилы несколько чаще контактируют в прогрессирующую, чем в стационарную и регрессирующую стадии. В прогрессирующую и стационарную стадии нейтрофилы с 3мя сегментами в ядре чаще контактируют с агрегатами тромбоцитов, чем иные формы нейтрофилов, что находило статистическое подтверждение. В регрессирующую стадию статистически значимые различия в частоте контактов в зависимости от уровня сегментации ядра нейтрофилов исчезали.

6.7. Анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови в зависимости от соматотипа больных псориазом

Больные псориазом, имеющие соматотип эктоморфов, характеризовались наибольшей частотой контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов, что отличало их от эндоморфов: 32,5 (29,7;34,5) против 22,0 (5,0;26,5); 2=1,55; р=0,01; и мезоморфов: против 6,0 (4,0;27,0); 2=1,46; р=0,02 (табл. 47).

Таблица 47.

Контакты агрегатов тромбоцитов с нейтрофилами у больных псориазом в

зависимости от соматотипа (Ме (025; 075)).

Количество Эндоморфы Мезоморфы Эктоморфы Уровень

коагрегатов тромбоцитов п=22 п=37 п=23 статистической значимости (р)

1 2 3 4 5

с нейтрофилами 22,0 (5,0;26,5) 6,0 (4,0;27,0) 32,5 (29,7;34,5) 2-3 7=1,09; р=0,18 2-4 7=1,55; р=0,01 3-4 7=1,46; р=0,02

с палочко- 1,0 0,0 3,0 2-3 7=1,07; р=0,2

ядерными (0,0;2,0) (0,0;2,0) (1,5;3,75) 2-4 7=1,18; р=0,12 3-4 7=1,13; р=0,15

с 2-х 2,0 1,0 2,0 2-3 7=0,68; р=0,73

сегментными (1,0;4,0) (0,0;3,0) (1,25;3,5) 2-4 7=0,36; р=0,99 3-4 7=0,59; р=0,87

с 3-х 5,5 2,0 10,0 2-3 7=0,81; р=0,51

сегментными (1,0;10,0) (1,0;12,0) (8,25;12,5) 2-4 7=1,18; р=0,12 3-4 7=1,24; р=0,09

с 4-х 4,0 2,0 11,0 2-3 7=0,76; р=0,6

сегментными (0,5;8,0) (1,0;7,0) (7,75;12,0) 2-4 7=1,27; р=0,07 3-4 7=1,35; р=0,05

с 5-ю 2,5 1,0 8,0 2-3 7=1,01; р=0,25

сегментными и более (0,0;4,0) (0,0;2,0) (2,75;9,5) 2-4 7=1,18; р=0,12 3-4 7=1,31; р=0,06

Увеличение числа контактов у эктоморфов было связано не только с нейтрофилами, содержащими 3- (10,0 (8,25;12,5) против 5,5 (1,0;10,0); 2=1,18; р=0,12 и против 2,0 (1,0;12,0); 2=1,24; р=0,09) и 4- (11,0 (7,75;12,0) против 4,0 (0,5;8,0); 2=1,27; р=0,07 и против 2,0 (1,0;7,0); 2=1,35; р=0,05) сегмента в ядре, но

и с нейтрофилами, имеющими 5- и более сегментов: 8,0 (2,75;9,5) против 2,5 (0,0;4,0); Z=1,18; р=0,12 и против 1,0 (0,0;2,0); Z=1,31; р=0,06.

Таким образом, больные псориазом, имеющие эктоморфный соматотип, отличались от эндоморфов и мезоморфов более высоким числом контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов в периферической крови. Увеличение числа контактов было связано не только с нейтрофилами, имеющими 3- и 4-сегмента в ядре, но и с нейтрофилами, содержащими 5- и более сегментов.

6.8. Корреляционный анализ контактов нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов

Представляло интерес изучение вопроса: нейтрофилы, несущие какие молекулы адгезии, контактировали с агрегатами тромбоцитов в периферической крови.

В ходе проведения корреляционного анализа не выявлено статистически значимых корреляций у больных псориазом между нейтрофилами, несущими молекулы L-селектина, с числом нейтрофилов, вступивших в непосредственный контакт с агрегатами тромбоцитов.

Напротив, в группе контроля, у которых наблюдалось большее число изучаемых контактов, чем у больных псориазом, регистрировались статистически значимые корреляции между нейтрофилами, несущими молекулу L-селектина, с нейтрофилами, вступившими в контакт с агрегатами тромбоцитов. В основном это были нейтрофилы, содержащие 3- (р=0,35; р=0,01), 4- (р=0,42; р=0,004), 5- и более сегментов в ядре (р=0,3; р=0,04).

Не зарегистрировано статистически значимых корреляций у больных псориазом между концентрациями нейтрофилов, экспрессирующих молекулу ICAM-1, и контактами с агрегатами тромбоцитов. Напротив, в группе практически здоровых лиц были установлены статистически значимые корреляции между содержанием 4-х (р=0,33; р=0,02), 5-ти сегментных (р=0,28; р=0,04) нейтрофилов с молекулой адгезии ICAM-1 и контактами с агрегатами тромбоцитов.

У больных псориазом не было статистически значимых корреляций с нейтрофилами, имеющими молекулу LFA-3. В группе контроля наблюдали корреляции между нейтрофилами с молекулой LFA-3 и нейтрофилами палочкоядерными (р=0,29; р=0,03), 3-мя (р=0,28; р=0,04) и 4-мя (р=0,29; р=0,03) сегментами в ядре, контактировавших с агрегатами тромбоцитов в периферической крови.

При псориазе контакты нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов происходили в том случае, если нейтрофилы экспрессировали молекулы LFA-1 и PECAM-1, а также имели 3- (р=0,27; р=0,02 и р=0,31; р=0,02) и 4- (р=0,31 ; р=0,006 и р=0,31; р=0,02) сегмента в ядре. В группе контроля статистически значимые корреляции регистрировали между нейтрофилами, несущими молекулу LFA-1 и имеющими не только 3- (р=0,61; р=0,0001) и 4- (р=0,48; р=0,001) сегмента, но и 2-(р=0,52; р=0,0001) сегмента в ядре. Контакт нейтрофилов с агрегатами тромбоцитов происходил с нейтрофилами, содержащими молекулу PECAM-1, а также 3- (р=0,47; р=0,03), 5- и более сегментов (р=0,49; р=0,02).

Таким образом, в условиях псориаза регистрируемое снижение количества контактов между нейтрофилами и агрегатами тромбоцитов в периферической крови было сопряжено с отсутствием статистически значимых корреляций с нейтрофилами, несущими молекулы L-селектина, ICAM-1, LFA-3.

ГЛАВА 7. ХАРАКТЕР ВЗАИМООТНОШЕНИЙ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ КЛЕТОК С УРОВНЕМ ЭКСПРЕССИИ МОЛЕКУЛ АДГЕЗИИ У БОЛЬНЫХ

ПСОРИАЗОМ

Выявлению роли нарушений гуморального и клеточного звеньев иммунитета при псориазе посвящены многие работы (Пинсон И.Я., и др., 2006, Караулов А.В., и др., 2016, Ghoreschi K., 2003), но до сих пор остается неясным вопрос о характере взаимоотношений иммунокомпетентных клеток с молекулами адгезии у больных псориазом.

7.1. Характер взаимоотношений Т-лимфоцитов периферической крови с уровнем экспрессии молекул адгезии у больных псориазом

Как известно, среди Т-лимфоцитов выделяют Т-лимфоциты хелперы CD3+CD4+CD8-, имеющие отношение к регуляторной субпопуляции, а также цитотоксические Т-лимфоциты CD3+CD4-CD8+, выполняющие эффекторную функцию. Особенностью Т-клеточного рецептора CD3+ является функциональная способность распознавать чужеродный антиген только в комплексе с собственными клеточными антигенами на поверхности макрофагов и дендритных клеток. Т-лимфоциты CD3+CD4+CD8- способны распознавать пептиды в комплексе с антигенами гистосовместимости класса II, а CD3+CD4-CD8+ распознают в комплексе с антигенами гистосовместимости класса I (Stewart, C.C., et al., 1997). Распознавание антигена Т-клеточного рецептора служит триггерным сигналом усиленной пролиферации и дифференцировки соответствующего клона Т-клеток. В результате они обладают способностью участвовать в элиминации патогена. Такое их свойство осуществится двумя путями. При размножении в цитоплазме инфицированных клеток патогенов, их антигенные пептиды образовывают комплексы с молекулами МНС I, которые распознаются CD3+CD4-CD8+, в результате цитотоксические Т-лимфоциты непосредственно уничтожают инфицированные клетки. При размножении патогенов внутри вакуолей клеток,

при агрессии фагоцитами внеклеточных бактерий и их токсинов их антигенные пептиды создают комплексы с молекулами МНС II, которые распознаются CD3+CD4+CD8- (Фрейдлин И.С., 2001). В последствие Т-хелперы дифференцируются в Т-лимфоциты хелперы, активирующие специфические В-лимфоциты, либо активирующие макрофаги (Disanto, J.P., et al., 1987). На сегодняшний день продемонстрировано, что дубль позитивные Т-лимфоциты с фенотипом CD3+CD4+CD8+ являются высокодифференцированными клетками памяти, и не связаны с преждевременным транспортом данных клеток на стадии ß-селекции из тимуса (W. Knapp, et al., 1987). Дубль-позитивные Т-лимфоциты могут иметь высокое значение в реакциях адаптивного иммунитета в ответ на разнообразные инфекционные агенты. Имеются сведения о повышении количества дубль-позитивных Т-лимфоцитов при длительной антигенной стимуляции, рассеянном склерозе, при инфекционных заболеваниях, миастении, офтальмопатологии и др., а также в старческом возрасте (Borowitz, M.J., et al., 1997).

Как следует из полученных данных (табл. 48) уровень Т-лимфоцитов, не экспрессирующих рецепторы CD4 и CD8, в периферической крови у больных псориазом было несколько ниже, чем в группе контроля 1,38-109 кл/л (0,83;2,0) против 1,7-109 кл/л (1,1;2,26); Z=0,85; p=0,46. Подобную ситуацию регистрировали также в отношении Т-хелперов CD3+CD4+CD8- 2,23 109 кл/л (1,3;3,1) против 2,48-109 кл/л (1,69;3,3); Z=0,8; p=0,54. Содержание цитотоксических Т-лимфоцитов CD3+CD4-CD8+ было одинаковым: 0,01 109 кл/л (0,01;0,02) и 0,01 109 кл/л (0,007;0,01); Z=0,88; p=0,42. Анализ содержания дубль-позитивных Т-лимфоцитов CD3+CD4+CD8+ с одной стороны показал, что концентрация этих клеток в периферической крови крайне низкая, с другой стороны - выявлена отчетливая тенденция снижения концентрации клеток CD3+CD4+CD8+ в периферической крови у больных псориазом с 0,0004-109 кл/л (0,0001;0,0007) до 0,0002 -109 кл/л (0,00003;0,0008); Z=1,22; p=0,09.

Таблица 48.

Содержание клеток с фенотипом СВ3СВ4СЭ8 периферической крови у практически здоровых и больных псориазом

(Ме; 025; 075)

Показатели, 109кл/л Практически Больные псориазом Уровень статистической значимости (р)

здоровые п= 50 Средние данные п= 82 Прогрессирующая стадия Стационарная стадия Регрессирующая стадия

1 2 3 4 5 6 7

2-3 7=0,85; р=0,46

СБ3+ СВ4-СБ8- 1,7 1,38 1,22 1,57 1,32 4-5 7=0,93; р=0,34

(1,1;2,26) (0,83;2,0) (0,48;1,69) (0,89;2,19) (0,87;2,83) 5-6 7=0,56; р=0,91 4-6 7=0,56; р=0,9

2-3 7=0,8; р=0,54

СБ3+ СВ4+СБ8- 2,48 2,23 2,35 2,18 2,15 4-5 7=0,47; р=0,97

(1,69;3,3) (1,3;3,10) (1,15;3,01) (1,31;3,14) (1,3;3,19) 5-6 7=0,58; р=0,88 4-6 7=0,47; р=0,97

0,01 (0,008;0,02) 2-3 7=0,88; р=0,42

СБ3+ СВ4-СБ8+ 0,01 (0,01;0,02) 0,01 (0,007;0,01) 0,01 (0,04;0,16) 0,01 (0,002;0,02) 4-5 7=0,84; р=0,46 5-6 7=0,5; р=0,96 4-6 7=0,56; р=0,9

2-3 7=1,22; р=0,09

СБ3+ СВ4+СБ8+ 0,0004 0,0002 0,0002 0,0002 0,0004 4-5 7=0,46; р=0,98

(0,0001;0,0007) (0,00003;0,0008) (0,0;0,0009) (0,0;0,0006) (0,0;0,0006) 5-6 7=0,64; р=0,8 4-6 7=0,74; р=0,64

Статистически значимых различий в содержании изучаемых показателей в зависимости от стадии дерматоза не выявлено. Были отмечены лишь тенденции снижения концентрации Т-хелперов CD3+ CD4+CD8- (с 2,35 109 кл/л (1,15;3,01) до 2,18-109 кл/л (1,31;3,14); 2=0,47; р=0,97) на фоне увеличения уровня Т-лимфоцитов с фенотипом СБ3+ СВ4-СБ8- (с 1,22 109 кл/л (0,48;1,69) до 1,57109 кл/л (0,89;2,19); 2=0,93; р=0,34) при переходе прогрессирующей стадии псориаза в стационарную.

Таким образом, статистически значимых различий в концентрации СВ3+СВ4-СБ8-, СВ3+СВ4+СБ8-, СВ3+СВ4-СБ8+, а также дубль-позитивных Т-клеток СВ3+СВ4+СЭ8+ у практически здоровой группы и больных псориазом, в том числе в зависимости от стадии патологического процесса не выявлено. Наблюдали лишь тенденции более низкого содержания СВ3+СВ4-СЭ8- и СВ3+СВ4+СБ8- и СВ3+СВ4+СБ8+, а также тенденции снижения концентрации Т-хелперов CD3+CD4+CD8- на фоне увеличения уровня СВ3+СВ4-СБ8- при переходе прогрессирующей стадии псориаза в стационарную.

Представляло интерес исследование корреляционных связей между содержанием Т-лимфоцитов с лимфоцитами, экспрессирующими молекулы адгезии (рис. 25). Как у больных псориазом, так и у практически здоровых лиц уровеь Т-лимфоцитов СВ3+СВ4-СЭ8- статистически значимо коррелировал с содержанием лимфоцитов, имеющих молекулы Ь-селектина (р=0,34; р=0,003 и р=0,32; р=0,02), ЬБЛ-1 (р=0,52; р=0,001 и р=0,46; р=0,001), ЬБЛ-3 (р=0,31; р=0,008 и р=0,46; р=0,009). Как у больных псориазом, так и в группе контроля, отсутствовала корреляция содержания Т-клеток СВ3+СВ4-СЭ8- с содержанием лимфоцитов, экспрессирующих молекулу 1СЛМ-1 (р=0,19; р=0,11 и р=0,13; р=0,36). Различие было в одном: при псориазе величина СВ3+СВ4-СБ8-коррелировала с уровнем лимфоцитов, экспрессирующих молекулу РЕСЛМ-1 (р=0,4; р=0,002), в группе контроля - нет (р=-0,03; р=0,87). Учитывая тот факт, что с молекулой РЕСЛМ-1, обеспечивается трансмиграция клеток из микроциркуляции в ткани, можно предполагать, что тенденция более низкого содержания СВ3+СВ4-СЭ8- у больных псориазом связано именно с этим.

Точно такая же ситуация была зарегистрирована в ходе проведения корреляционного анализа между содержанием Т-лимфоцитов хелперов и уровнем лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии. Тенденция более низкого содержания клеток CD3+CD4+CD8- у больных псориазом сопровождалась наличием статистически значимых корреляций с уровнем лимфоцитов, имеющих молекулы L-селектина (р=0,36; р=0,002), LFA-1 (р=0,54; р=0,001), LFA-3 (р=0,35; р=0,03). Данные статистически значимые корреляции были также зарегистрированы в группе контроля. Как у больных псориазом, так и в группе контроля, отсутствовала корреляция между содержанием Т-клеток CD3+CD4+CD8- с концентрацией лимфоцитов, имеющих молекулу ICAM-1 (р=0,19; р=0,09 и р=0,08; р=0,54). Различие было в одном: у больных псориазом содержание CD3+CD4+CD8- коррелировало с уровнем лимфоцитов, экспрессирующих молекулу PECAM-1 (р=0,43; р=0,001), в группе контроля - нет (Р=-0,14; р=0,51).

При анализе корреляций между концентрацией цитотоксических Т-лимфоцитов и содержанием лимфоцитов, имеющих молекулы адгезии выявлено, что у больных псориазом наблюдались статистически значимые корреляции с уровнем лимфоцитов, экспрессирующих молекулу L-селектина (р=0,38; р=0,002), LFA-1 (р=0,58; р=0,001) и PECAM-1 (р=0,38; р=0,003). В группе контроля статистически значимая корреляция была выявлена только с уровнем лимфоцитов, имеющих молекулу LFA-1 (р=-0,17; р=0,42). Обращает внимание, наличие статистически значимой корреляции между содержанием цитотоксических Т-лимфоцитов CD3+CD4-CD8+ и уровнем лимфоцитов с молекулой PECAM-1.

Тенденция снижения содержания дубль-позитивных Т-лимфоцитов CD3+CD4+CD8+ у больных псориазом не сопровождалась появлением статистически значимых корреляций с уровнем лимфоцитов, экспрессирующих молекулы адгезии, как это было с Т-лимфоцитами CD3+CD4-CD8- и CD3+CD4+CD8-. У больных псориазом была зарегистрирована корреляция с концентрацией лимфоцитов, имеющих молекулу LFA-1 (р=0,32; р=0,006), а в

группе контроля - обратная корреляция с содержанием лимфоцитов, экспрессирующих молекулу РЕСЛМ-1 (р=-0,45; р=0,02) (рис. 25).

Практически здоровые

Больные псориазом

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,32)

Ь-селектин

СБ3+СБ4+СБ8+ (-0,12)

СБ3+СБ4+СБ8-(0,29*)

СБ3+СБ4-СБ8-(0,19)

Ь-селектин

СБ3+СБ4+СБ8+ (0,12)

СБ3+СБ4-СБ8

(0,34**)

СБ3+СБ4+СБ8-

(0,36*)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,38**)

(а)

Практически здоровые

Больные псориазом

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,46**)

ЬБЛ

СБ3+СБ4+СБ8+ (0,02)

-1 ^

СБ3+СБ4+СБ8-

(0,39*)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,37**)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,52**)

ЬБЛ-

СБ3+СБ4+СБ8+ (0,32**)

СБ3+СБ4+СБ8-(0,54**)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,58**)

(б)

Практически здоровые

Больные псориазом

СБ3+СБ4-СБ8-(0,13)

1СЛМ

СБ3+СБ4+СБ8+ (-0,13)

СБ3+СБ4+СБ8-(0,08)

СБ3+СБ4-СБ8-(0,17)

СБ3+СБ4-СБ8-(0,19)

1СЛМ

-1 /

СБ3+СБ4+СБ8+ (0,01)

СБ3+СБ4+СБ8-(0,19)

СБ3+СБ4-СБ8-(0,10)

(в)

ЬБЛ-3

СБ3+СБ4+СБ8+ (-0,06)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,46**)

СБ3+СБ4+СБ8-(0,38*)

СБ3+СБ4-СБ8-(0,21)

(г)

Практически здоровые

СБ3+СБ4-СБ8-(-0,03)

У СБ3+СБ4+СБ8-1 1 * (-0,14)

РЕСЛМ

СБ3+СБ4+СБ8+ (-0,45*)

к

СБ3+СБ4-СБ8-(-0,17)

(д)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,31**)

ЬБЛ-3

СБ3+СБ4+СБ8+ (-0,04)

СБ3+СБ4+СБ8-

(0,35*)

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,22)

Больные псориазом

СБ3+СБ4-СБ8-

(0,40**)

РЕСЛМ

, /1

СБ3+СБ4+СБ8+ (0,16)

К.

СБ3+СБ4+СБ8-

► (0,43**)

СБ3+СБ4-СБ8-