Роль гипохлорита в регуляции апоптоза и фагоцитоза миелоидных клеток in vitro тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Ковалева, Анастасия Михайловна

• Ковалева, Анастасия Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Ковалева, Анастасия Михайловна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Роль миелопероксидазной системы в воспалении.

2.1.1. Миелопероксидазная система.

2.1.2. Взаимодействие НОС1 с биомолекулами.

2.2. Типы клеточной смерти.

2.2.1. Апоптоз клеток в условиях хлорирующего стресса.

2.2.1.1. Гибель клеток под действием хлораминов.

2.2.2. Роль глутатиона в апоптозе.

2.3. Роль фагоцитоза в воспалении.

2.3.1. Фагоцитоз апоптотических клеток.

2.3.2. Сигналы для фагоцитоза.

2.3.2.1. Разнообразие рецепторов для распознавания апоптотических клеток

2.3.2.2. Роль фосфатидилсерина в фагоцитозе апоптотических клеток.

2.3.2.3. Окисленные эпитопы, распознаваемые макрофагами.

2.3.2.4. Фагоцитарный синапс.

2.3.3. Иммунологические последствия фагоцитоза апоптотических и некротических клеток.

2.3.4. Фагоцитоз клеток в условиях хлорирующего стресса.

3. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

4.1. Реагенты и оборудование.

4.2. Культивирование клеток.

4.3. Определение содержания апоптотических и некротических клеток в образце с помощью окрашивания AnnexinV/PI.

4.4. Определение концентрации глутатиона.

4.5. Определение общей концентрации белковых SH - групп.

4.6. Определение общей концентрации белка в клетках.

4.7. Определение активности каспазы-3.

4.8. Определение апоптотических клеток по морфологии ядер.

4.9. Клеточные модели, использованные в работе.

4.9.1 Подбор условий окрашивания клеток-мишеней.

4.9.2. Модель токсичного воздействия хлорирующего стресса на клетки в PBS (индукция некроза клеток под действием хлорирующего стресса).

4.9.3. Субтоксичное воздействие хлорирующего стресса на клетки в среде.

4.9.4. Токсичное воздействие хлорирующего стресса на клетки в среде (индукция апоптоза клеток под действием хлорирующего стресса).

4.9.5. Инкубация апоптотических HL-60 клеток с окислителями.

4.10. Анализ фагоцитарной активности макрофагов.

4.11. Приготовление липосом.

4.12. Ингибирование фагоцитоза с помощью липосом.

5. РЕЗУЛЬТАТЫ.

5.1 Разработка метода оценки фагоцитарной активности макрофагов.

5.1.1. Подбор условий для окрашивания клеток-мишеней.

5.1.2. Подбор условий окрашивания макрофагов.

5.1.3. Количественный анализ фагоцитарной активности макрофагов.

5.1.4. Анализ полного и неполного фагоцитоза.

5.2. Субтоксичное воздействие хлорирующего стресса на выживаемость и фагоцитоз нативных лимфоцитов in vitro.

5.3. Влияние токсичного воздействия хлорирующего стресса на фагоцитоз нативных клеток. Роль фосфатидилсерина.

5.4. Изучение влияния хлорирующего стресса на апоптоз и фагоцитоз апоптотических клеток.

5.4.1. Влияние хлорирующего стресса на фагоцитоз апоптотических клеток.

5.4.2. Хлорирующий стресс индуцируют образование разрывов в плазматической мембране апоптотических клеток.

5.4.3. Влияние хлорирующего стресса на экстернализацию фосфатидилсерина на поверхности апоптотинеских клеток.

5.4.4. Ингибирование каспазы-3 в апоптотинеских клетках.

5.4.5. Влияние хлорирующего стресса на уровень глутатиона и белковых SH-групп в нативных и апоптотинеских клетках.

5.4.6. Фосфатидилсерин и окисленный гипохлоритом фосфатидилсерин ингибируют фагоцитоз апоптотинеских клеток.

5.5. Влияние кислородного и нитрозитивного стрессов на фагоцитоз нативных и апоптотинеских клеток.

6. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6.1. Разработка метода анализа фагоцитарной активности макрофагов.

6.2. Влияние гипохлорита на фагоцитоз нативных клеток.

6.3. Роль гипохлорита в фагоцитозе апоптотинеских клеток.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль гипохлорита в регуляции апоптоза и фагоцитоза миелоидных клеток in vitro»

Развитие воспалительного процесса всегда сопровождается окислительным стрессом и гибелью клеток иммунной системы. Основным ферментом, участвующим в воспалительном процессе, является миелопероксидаза. Она секретируется активированными нейтрофилами и посредством продукции гипохлорита осуществляет бактерицидную функцию. В физиологических условиях гипохлорит мгновенно взаимодействует с белками и аминокислотами среды с образованием более стабильных и менее токсичных продуктов — хлораминов. Хлорамины опосредуют эффекты гипохлорита на клетки и могут влиять на различные физиологические процессы, окисляя важнейшие внутриклеточные белки.

Фагоцитоз поврежденных и мертвых клеток является заключительным этапом воспаления и определяет иммунологические последствия этого процесса. Он опосредуется макрофагальными рецепторами, которые распознают специфические эпитопы на поверхности клеток-мишеней, в результате чего индуцируется процесс фагоцитоза. Существуют данные, свидетельствующие об участии окисленных эпитопов на поверхности ЛНП в фагоцитозе их макрофагами.

Мы предположили, что гипохлорит (основной продукт миелопероксидазной системы) может модулировать процессы гибели клеток и последующий фагоцитоз этих клеток макрофагами.

В ходе работы нам удалось показать, что под действием гипохлорита происходит нарушение течения апоптотической программы в клетках: наблюдается ингибирование каспазы-3, снижение уровня экстернаггизированного фосфатидилсерина, клетки переходят в стадию вторичного некроза. Возможным объяснением тому может служить снижение концентрации белковых SH-групп в апоптотических клетках по сравнению с нативными клетками (что является признаком повреждения белков). Следствием нарушения апоптоза в клетках является нарушение фагоцитоза апоптотических клеток, подвергшихся воздействию гипохлорита. В то же время субтоксичное воздействие гипохлорита на нативные клетки не влияет на фагоцитарную активность макрофагов по отношению к этим клеткам. В условиях, когда проявляется токсичный эффект гипохлорита, наблюдается увеличение смертности клеток путем апоптоза и увеличение фагоцитоза таких клеток.

Полученные нами результаты расширяют знания о роли миелопероксидазной системы в регуляции апоптоза клеток и последующего фагоцитоза погибших клеток макрофагами.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Ковалева, Анастасия Михайловна

8. ВЫВОДЫ

1. Разработан новый автоматизированный метод анализа фагоцитарной активности макрофагов на основе конфокальной флуоресцентной микроскопии, позволяющий анализировать большие популяции клеток. Кроме того, метод позволяет анализировать фагоцитоз клеток в условиях моделирования окислительного стресса.

2. Токсичное воздействие хлорирующего стресса вызывает апоптоз клеток и последующий их фагоцитоз. Липосомы, обогащенные фосфатидилсерином, оказывают ингибирующее действие на фагоцитоз таких клеток, что указывает на фосфатидилсерин-зависимый механизм фагоцитоза клеток, погибших в результате воздействия хлорирующего стресса.

3. Субтоксичное воздействие хлорирующего стресса на нативные клетки не вызывает их фагоцитоза макрофагами.

4. Основной внутриклеточный антиоксидант - глутатион защищает нативные клетки от повреждения в результате воздействия хлорирующего стресса. В нативных клетках окисления белковых SH-групп под действием гипохлорита не наблюдается. При апоптозе происходит снижение концентрации восстановленного глутатиона в клетках, в результате чего SH-группы внутриклеточных белков окисляются в условиях субтоксичного воздействия хлорирующего стресса.

5. Под действием хлорирующего стресса нарушается течение апоптоза в клетках (происходит ингибирование каспазы-3, снижается количество фосфатидилсерина на поверхности клеток, нарушается целостность цитоплазматической мембраны).

6. Под действием хлорирующего стресса происходит ингибирование фагоцитоза апоптотических клеток.

7. Несмотря на то, что под действием гипохлорита снижается количество экстернализированного на апоптотических клетках фосфатидилсерина, липосомы, обогащенные фосфатидилсерином, а также окисленным фосфатидилсерином, ингибируют фагоцитоз апоптотических клеток, подвергшихся хлорирующему стрессу.

7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Обобщить результаты, полученные в ходе данной работы можено следующей схемой (Рис 25.). Очевидно, что в процессе воспаления и гибели клеток, миелопероксидазная система играет двоякую роль. Индуцируя гибель клеток по апоптотическому механизму, она способствует разрешению воспалительного процесса и заживлению раны. В то же время, если по каким-то причинам происходит пролонгированное рекрутирование нейтрофилов в очаг воспаления, то под действием хлорирующего стресса может нарушаться процесс апоптоза клеток и последующего их фагоцитоза. Это, в свою очередь, может препятствовать заживлению раны и способствовать развитию хронического воспаления.

НОС1 фагоцитоз, завершение воспаления

V АПОПТОТИЧЕСКАЯ КЛЕТКА Ф нарушение фагоцитоза, развитие воспаления

Рис. 25. Гипотетическая схема участия продуктов хлорирующего стресса в воспалении.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Ковалева, Анастасия Михайловна, 2009 год

1. Anderson Н.А., Hiltbold Е.М., Roche P.A. 2000. Concentration of MHC class II molecules in lipid rafts facilitates antigen presentation. Nat Immunol. 1(2): 156-62.

2. Armstrong J.S. and. Jones D.P. 2002. Glutathione depletion enforces the mitochondrial permeability transition and causes cell death in Bcl-2 overexpressing HL60 cells. FASEB Journal. 16: 1263-5.

3. Aruoma O.I., Halliwell В., Hoey B.M., Butler J. 1988. The antioxidant action of taurine, hypotaurine and their metabolic precursors. Biochem J. 256(1): 251-5.

4. Arur S., Uche U.E., Rezaul K., Fong M., Scranton V., Cowan A.E., Mohler W., Han D.K. 2003. Annexin I is an endogenous ligand that mediates apoptotic cell engulfment. Dev Cell. 4(4): 587-98.

5. Babior B.M. 2000 Phagocytes and oxidative stress. Am J Med. 109(1): 33-44. Review.

6. Balasubramanian K., Chandra J., Schroit A.J. 1997. Immune clearance of phosphatidylserine-expressing cells by phagocytes. The role of beta2-glycoprotein I in macrophage recognition. J Biol Chem. 272(49): 31113-7.

7. Balasubramanian K., Schroit A.J. 1998. Characterization of phosphatidylserine-dependent beta2-glycoprotein I macrophage interactions. Implications for apoptotic cell clearance by phagocytes. J. Biol. Chem. 273: 29272-7.

8. Beaver J.P., Waring P. 1995. A decrease in intracellular glutathione concentration precedes the onset of apoptosis in murine thymocytes. Eur J Cell Biol. 68(1): 47-54.

9. Beckman J.S, Koppenol W.H. 1996. Nitric oxide, superoxide, and peroxynitrite: the good, the bad, and ugly. Am J Physiol. 271: C1424-C1437.

10. Beppu M., Ando K., Saeki M., Yokoyama N., Kikugawa K. 2000. Binding of Oxidized Jurkat Cells to THP-1 Macrophages and Antiband 3 IgG through Sialylated Poly-Nacetyllactosaminyl Sugar Chains. Archives of Biochemistry and Biophysics. 384: 368-374.

11. Berndt C., Mopps В., Angermuller S., Gierschik P., Krammer P.H. 1998. CXCR4 and CD4 mediate a rapid CD95-independent cell death in CD4+ T cells. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 95:12556-12561.

12. Bevers E.M., Comfurius E.M., Dekkers D.W.C., Zwaal R.A. 1999. Lipid translocation across the plasma membrane of mammalian cells. Biochim. Biophys. Acta. 1439: 317-330.

13. Bharat S., Cochran B.C., Hsu M., Liu J., Ames B.N., Andersen J.K. 2002. Pre-treatment with R-lipoic acid alleviates the effects of GSH depletion in PC 12 cells: implications for Parkinson's disease therapy. Neurotoxicology. 23(4-5): 479-486.

14. Borisenko G.G., Iverson S.L., Ahlberg S., Kagan V.E., Fadeel B. 2004. Milk fat globule epidermal growth factor 8 (MFG-E8) binds to oxidized phosphatidylserine: implications for macrophage clearance of apoptotic cells. Cell Death Differ. 11(8): 943-5.

15. Bomer C., Monney L. 1999. Apoptosis without caspases: an inefficient molecular guillotine. Cell Death Differ. 6: 497-507.

16. BracherM., Gould H.J., Sutton B.J., Dombrowicz D., Karagiannis S.N., 2007. Three-colour flow cytometric method to measure antibody-dependent tumour cell killing by cytotoxicity and phagocytosis. J. Immunol. Methods. 323(2): 160.

17. Brown S., Heinisch I., Ross E., Shaw K., Buckley C.D., Savill J. 2002. Apoptosis disables CD31-mediated cell detachment from phagocytes promoting binding and engulfment. Nature. 418(6894): 200-3.

18. Carr A.C., Hawkins C.L., Thomas S.R., Stocker R., Frei B. 2001. Relative reactivities ofiV-chloramines and hypochlorous acid with human plasma constituents Free Radical Biology and Medicine. 30: 526-536.

19. Carr A.C., van den Berg J.J., Winterbourn C.C. 1998. Differential reactivities of hypochlorous and hypobromous acids with purified Escherichia coli phospholipid: formation ofhaloamines and halohydrins. Biochim Biophys Acta. 1392(2-3): 254-64.

20. Carr A.C., Winterbourn C.C. 1997. Oxidation of neutrophil glutathione and protein thiols by myeloperoxidase-derived hypochlorous acid. Biochem J. 327(1): 275-81.

21. Chan P.H. 2001. Reactive oxygen radicals in signaling and damage in the ischemic brain. J Cereb. Blood Flow. Metab. 21: 2-14.

22. Chang M.K., Binder C.J., Torzewski M., Witztum J.L. 2002. C-reactive protein binds to both oxidized LDL and apoptotic cells through recognition of a common ligand: Phosphorylcholine of oxidized phospholipids. Proc Natl Acad Sci USA. 99(20): 13043-8.

23. Chautan M., Chazal G., Cecconi F., Gruss P., Golstein P. 1999. Interdigital cell death can occur through a necrotic and caspase-independent pathway. Curr. Biol. 9: 967-970.

24. Chua B.T., Guo K., Li P. 2000. Direct cleavage by the calcium-activated protease calpain can lead to inactivation of caspases. J. Biol. Chem. 275: 5131-5135.

25. Coppola S., Ghibelli L. 2000. GSH extrusion and and the mitochondrial pathway of apoptotic signalling. Biochem Soc Trans. 28(2): 56-61. Review.

26. Devera G., Stewarta L.J., Pittb A.R.,. Spickett C.M. 2003. Phospholipid chlorohydrins cause ATP depletion and toxicity in human myeloid cells. FEBS Letters. 540: 245-250.

27. Ding J., Wu Z„ Crider B.P., Ma Y., Li X., Slaughter C„ Gong L., Xie X.S. 2000. Identification and functional expression of four isoforms of ATPase II, the putative aminophospholipid translocase. J. Biol. Chem. 275: 23378-23386.

28. Eguchi Y., Shimizu S., Tsujimoto Y. 1997. Intracellular ATP levels determine cell death fate by apoptosis or necrosis. Cancer Res. 57(10): 1835-40.

29. Eiserich J.P., Baldus S., Brennan M-L, Ma W., Zhang C., Tousson A., Castro L, Lusis A.J., Nauseef W.M., White C.R., Freeman B.A. 2002. Myeloperoxidase, a Leukocyte-Derived Vascular No Oxidase. Science. 296: 2391-2394.

30. Elliott K., Ge K., Du W., Prendergast G.C. 2000. The c-Mycinteracting adaptor protein Binl activates a caspaseindependent cell death program. Oncogene. 19: 4669-4684.

31. Emerson D.K., McCormick M.L., Schmidt J.A., Knudson C.M. 2005. Taurine monochloramine activates a cell death pathway involving Bax and Caspase-9. J Biol Chem. 280: 3233-3241.

32. Eming S.A., Krieg Т., Davidson J.M., 2007. Inflammation in Wound Repair: Molecular and Cellular Mechanisms Journal of Investigative Dermatology. 127: 514-525.

33. Englert R.P., Shacter E. 2002. Distinct modes of cell death induced by different reactive oxygen species: amino acyl chloramines mediate hypochlorous acid-induced apoptosis. J Biol Chem. 277: 20518-20526.

34. Erdosova В., Hlavkova L., Prochazkova J., Lichnovsky V. 2002. Part of CD68+ macrophages in the clearence of apoptotic bodies in human metanephros. Biomed Pap Med Fac Univ Palacky Olomouc Czech Repub. 146(2): 41-5.

35. Erwig L.P., Henson P.M. 2007. Immunological consequences of apoptotic cell phagocytosis. Am J Pathol. 171(1): 2-8. Review.

36. Fadok V.A., Bratton D.L., Rose D.M., Pearson A., Ezekewitz R.A., Henson P.M. 2000. A receptor for phosphatidylserine-specific clearance of apoptotic cells. Nature. 405(6782): 8590.

37. Fadok V.A., Voelker D.R., Campbell P.A., Cohen J.J., Bratton D.L., Henson P.M. 1992. Exposure of phosphatidylserine on the surface of apoptotic lymphocytes triggers specific recognition and removal by macrophages. J Immunol. 148(7): 2207-16.

38. Favero T.G, Colter D., Hooper P.F., Abramson J.J. 1998. Hypochlorous acid inhibits Ca(2+)-ATPase from skeletal muscle sarcoplasmic reticulum. J Appl Physiol. 84(2): 425-30.

39. Favero T.G., Webb J., Papiez M., Fisher E., Trippichio R.J., Broide M., Abramson J.J. 2003. Hypochlorous acid modifies calcium release channel function from skeletal muscle sarcoplasmic reticulum. J Appl Physiol. 94(4): 1387-94.

40. Foghsgaard L., Wissing D., Mauch D., Lademann U., Bastholm L., Boes M., Elling F., Leist M., Jaattela M. 2001. Cathepsin В acts as a dominant execution protease in tumor cell apoptosis induced by tumor necrosis factor. J. Cell Biol. 153: 999-1009.

41. Foote C.S., Goyne Т.Е., Lehrer R.I. 1983. Assessment of chlorination by human neutrophils. Nature. 301(5902): 715-6.

42. Forman H.J., Zhang H., Rinna A. 2009. Glutathione: Overview of its protective roles, measurement, and biosynthesis. Molecular Aspects of Medicine. 30: 1-12.

43. Forte M., Bernardi P. 2006. The permeability transition and BCL-2 family proteins in apoptosis: co-conspirators or independent agents? Cell Death and Differentiation. 13: 12871290.

44. Franco R., Panayiotidis M.I., Cidlowski J.A. 2007. Glutathione depletion is necessary for apoptosis in lymphoid cells independent of reactive oxygen species formation. J Biol Chem. 282(42): 30452-65.

45. Fukui К., Kaneda M., Takahashi E., Washio M., Doi K. 1994. Protective effects of sulfhydryl compounds on HOCl-induced intracellular Ca2+ increase in single rat ventricular myocytes. J Mol Cell Cardiol. 26(4): 455-61.

46. Galluzzi L., Joza N., Tasdemir E., Maiuri M.C., Hengartner M., Abrams J.M., Tavernarakis N., Penninger J., Madeo F., Kroemer G. 2000. No death without life: vital functions of apoptotic effectors. Cell Death and Differentiation. 15: 1113-1123.

47. Geske F.J., Monks J., Lehman L., Fadok V.A. 2002.The role of the macrophage in apoptosis: hunter, gatherer, and regulator. Int J Hematol. 76(1): 16-26.

48. Ghibelli L., Fanelli C., Rotilio G., Lafavia E., Coppola S., Colussi C., Civitareale P., Ciriolo M.R. 1998 . Rescue of cells from apoptosis by inhibition of active GSH extrusion. FASEB J. 12(6): 479-86.

49. Ghibelli L., Coppola S., Rotilio G., Lafavia E., Maresca V., Ciriolo M.R. 1995. Non-oxidative loss of glutathione in apoptosis via GSH extrusion. Biochem Biophys Res Commun. 216(1): 313-20.

50. Grimsley C., Ravichandran K.S. 2003. Cues for apoptotic cell engulfment: eat-me, don't eat-me and come-get-me signals. Trends Cell Biol. 13(12): 648-56.

51. Grisham M.B., Jefferson M.M., Melton D.F., Thomas E.L. 1984. Chlorination of endogenous amines by isolated neutrophils. Ammonia-dependent bactericidal, cytotoxic, and cytolytic activities of the chloramines. J Biol Chem. 259(16): 10404-13.

52. Guicciardi M.E., Leist M., Gores G.J. 2004. Lysosomes in cell death. Oncogene. 23: 2881— 2890.

53. Hall A.G. 1998. Medicaid's impact on access to and utilization of health care services among racial and ethnic minority children. J Urban Health. 75(4): 677-92. Review.

54. Halliwell В., Wasil M., Grootveld M. 1987. Biologically significant scavenging of the myeloperoxidase-derived oxidant hypochlorous acid by ascorbic acid. Implications for antioxidant protection in the inflamed rheumatoid joint. FEBS Lett. 213(1): 15-7.

55. Hanayama R., Tanaka M., Miwa K., Shinohara A., Iwamatsu A., Nagata S. 2002. Identification of a factor that links apoptotic cells to phagocytes. Nature. 417(6885): 182-7.

56. Hanayama R., Tanaka M., Miyasaka K., Aozasa K., Koike M., Uchiyama Y., Nagata S. 2004. Autoimmune disease and impaired uptake of apoptotic cells in MFG-E8-deficient mice. Science. 304(5674): 1147-50.

57. Hart S.P., Dransfield I., Rossi A.G. 2008. Phagocytosis of apoptotic cells. Methods. 44 (3): 280-285.

58. Hawkins C.L., Davies M.J. 2005. Inactivation of protease inhibitors and lysozyme by hypochlorous acid: role of side-chain oxidation and protein unfolding in loss of biological function. Chem Res Toxicol. 18(10): 1600-10.

59. Hawkins C.L., Davies M.J. 1998. Hypochlorite-induced damage to proteins: formation of nitrogen-centred radicals from lysine residues and their role in protein fragmentation. Biochem. J. 332: 617-625.

60. Hawkins C.L., Pattison D.I., Davies M.J. 2003. Hypochlorite-induced oxidation of amino acids, peptides and proteins. Amino Acids. 25(3-4): 259-74. Review.

61. Hawkins C.L., Davies M.J. 1998. Reaction of HOC1 with amino acids and peptides: EPR evidence for rapid rearrangement and fragmentation reactions of nitrogen-centered radicals. J. Chem. Soc. 2: 1937-1945.

62. Hazen S.L., Heinecke J. W. 1997. 3-chlorotyrosine, a specific marker of myeloperoxidase-catalysed oxidation, is markedly elevated in low-density lipoprotein isolated from human atherosclerotic intima. J. Clin. InVest. 99: 2075-2081.

63. He Y.Y., Huang J.L., Gentry J.B., Chignell C.F. 2003. Epidermal growth factor receptor down-regulation induced by UVA in human keratinocytes does not require the receptor kinase activity. J Biol Chem. 278(43): 42457-65.

64. Henson P.M., Bratton D.L., Fadok V.A. 2001. The phosphatidylserine receptor: a crucial molecular switch? Nature Rev. Mol. Cell Biol. 2: 627.

65. Henson P.M., Hume D.A. 2006. Apoptotic cell removal in development and tissue homeostasis. Trends in Immunology. 27(5): 244-250.

66. Hirt U.A., Gantner F., Leist M. 2000. Phagocytosis of Nonapoptotic Cells Dying by Caspase-Independent Mechanisms. The Journal of Immunology. 164: 6520-6529.

67. Hodge S., Hodge G., Flower R., Reynolds PN., Scicchitano R., Holmes M. 2002. Up-regulation of production of TGF-P and IL-4 and down-regulation of IL-6 by apoptotic human bronchial epithelial cells. Immunology and Cell Biology. 80: 537-543.

68. Holzbecher J., Ryan D.E. 1980. The rapid determination of total bromine and iodine in biological fluids by neutron activation. Clin Biochem. 13(6): 277-8.

69. Honda Т., Coppola S., Ghibelli L„ Cho S., Kagawa Sh., Spurgers K.B., Brisbay S.M., McDonnell T.J. 2004. GSH depletion enhances adenoviral bax-induced apoptosis in lung cancer cells, Cancer Gene Therapy. 11 (4): 249-255.

70. Hussien M., Delecata R.J., Carey P.D. 2002. Neutrophil hypochlorous acid production is impaired in multiple organ failure patients with candidaemia; reversal with antifungal agents. Inflamm Res. 51(4): 213-7.

71. Huynh M.L., Fadok V.A., Henson P.M. 2002. Phosphatidylserine-dependent ingestion of apoptotic cells promotes TGF-betal secretion and the resolution of inflammation. J Clin Invest. 109(1): 41.

72. Ishimoto Y., Ohashi K., Mizuno K., Nakano T. 2000. Promotion of the uptake of PS liposomes and apoptotic cells by a product of growth arrest-specific gene, gas6. J Biochem. 127(3): 411-7.

73. Kagan V.E., Kuzmenko A.I., Tyurina Y.Y., Shvedova A.A., Matsura Т., Yalowich J.C. 2001. Pro-oxidant and antioxidant mechanisms of etoposide in HL-60 cells: role of myeloperoxidase. Cancer Res. 61(21): 7777-84.

74. Kato Y., Nagao A., Terao J., Osawa T. 2003. Inhibition of myeloperoxidase-catalyzed tyrosylation by phenolic antioxidants in vitro. Biosci Biotechnol Biochem. 67(5): 1136-9.

75. Kenis H., van Genderen H., Deckers N.M., Lux P.A.G., Hofstra L., Narula J., Reutelingsperger C.P.M., 2006. Annexin A5 inhibits engulfment through internalization of PS-expressing cell membrane patches. Experimental Cell Research. 312 (6): 719-726.

76. Khwaja A., Tatton L. 1999. Resistance to the cytotoxic effects of tumor necrosis factor-a can be overcome by inhibition of a FADD/caspase-dependent signaling pathway. J. Biol. Chem. 274: 36817-36823.

77. King C.C., Jefferson M.M., Thomas E.L. 1997. Secretion and inactivation of myeloperoxidase by isolated neutrophils. J Leukoc Biol. 61(3): 293-302.i

78. Krysko D.V., Berghe T.V., D'Herde K., Vandenabeele P. 2008. Apoptosis and necrosis: Detection, discrimination and phagocytosis. Methods. 44(3): 205-221.

79. Krysko D.V., D'Herde K., Vandenabeele P. 2006. Clearance of apoptotic and necrotic cells and its immunological consequences. Apoptosis. 11(10): 1709-26. Review.

80. Lampert M.B., Weiss S.J. 1983. The chlorinating potential of the human monocyte. Blood. 62(3): 645-51.

81. Lankiewicz S., Marc Luetjens C., True Bui N., Krohn A.J., Poppe M., Cole G.M., Saido T.C., Prehn J.H. 2000. Activation of calpain I converts excitotoxic neuron death into a caspase-independent cell death. J. Biol. Chem. 275: 17064-17071.

82. Lavoie J.N., Nguyen M., Marcellus R.C., Branton P.E., Shore G.C. 1998. E4orf4, a novel adenovirus death factor that induces p53-independent apoptosis by a pathway that is not inhibited by zVAD-fmk. J. Cell Biol. 140: 637-645.

83. Learn D.B, Fried V.A, Thomas E.L. 1990. Taurine and hypotaurine content of human leukocytes. J Leukoc Biol. 48(2): 174-82.

84. Lee Y.J., Shacter E. 1999. Oxidative stress inhibits apoptosis in human lymphoma cells.J Biol Chem. 274(28): 19792-8.

85. Lee Y.J., Shacter E. 2000. Hydrogen peroxide inhibits activation, not activity, of cellular caspase-3 in vivo. Free Radic Biol Med. 29(7): 684-92.

86. Leist M., Single В., Castoldi A.F., Kuhnle S., Nicotera P. 1997. Intracellular adenosine triphosphate (ATP) concentration: a switch in the decision between apoptosis and necrosis. J. Exp. Med. 185: 1481-1486.

87. Leist M., Single В., Naumann H. Fava E., Simon В., Ktihnle S., Nicotera P. 1999. Inhibition of mitochondrial ATP generation by nitric oxide switches apoptosis to necrosis. Exp. Cell Res. 249: 396^103.

88. Lelli J.L. Jr., Becks L.L., Dabrowska M.I. Hinshaw D.B. 1998. ATP converts necrosis to apoptosis in oxidant-injured endothelial cells. Free Radic Biol Med. 25(6): 694-702.

89. Li M.O., Sarkisian M.R., Mehal W.Z., Rakic P., Flavell R.A. 2003. Phosphatidylserine Receptor Is Required for Clearance of Apoptotic Cells. Science. 302: 1560.

90. Luciani M.F., Chimini G. 1996. The ATP binding cassette transporter ABC1, is required for the engulfment of corpses generated by apoptotic cell death. EMBO J. 5(2): 226-35.

91. Luschen S., Ussat S., Scherer G., Kabelitz D., Adam-Klages S. 2000. Sensitization to death receptor cytotoxicity by inhibition of FADD/caspase signaling: requirement of cell cycle progression. J. Biol. Chem. 275: 24670-24678.

92. Madejczyk M.S., Ballatori N. 2004 . Activation of plasma membrane reduced glutathione transport in death receptor apoptosis of HepG2 cells. Toxicol Appl Pharmacol. 195(1): 1222.

93. Maianski N.A., Geissler J., Srinivasula S.M., Alnemri E.S., Roos D., Kuijpers T.W. 2004. Functional characterization of mitochondria in neutrophils: a role restricted to apoptosis. Cell Death and Differentiation. 11: 143-153.

94. Malle E., Furtmiiller P.G. Sattler W., Obinger C. 2007 Myeloperoxidase: a target for new drug development? British Journal of Pharmacology. 152 (6): 838-854.

95. Malle, E., Buch, Т., and Grone, H.-J. 2003. Myeloperoxidase in kidney disease. Kidney Int. 64: 1956-1967.

96. Mathiasen I ,S., Lademann U., Jaattela M. 1999. Apoptosis induced by vitamin D compounds in breast cancer cells is inhibited by Bcl-2 but does not involve known caspases or p53. Cancer Res. 59: 4848-4856.

97. Matsumura H., Shimizu Y., Ohsawa Y., Kawahara A., Uchiyama Y., Nagata S. 2000. Necrotic death pathway in Fas receptor signaling. J. Cell Biol. 151: 1247-1256.

98. McDonald PP, Fadok VA, Bratton D, Henson PM. 1999. Transcriptional and translational regulation of inflammatory mediator production by endogenous TGF-beta in macrophages that have ingested apoptotic cells. J Immunol. 163(11): 6164-72.

99. Medzhitov R., Janeway, C.A. 1997. Innate immunity: impact on the adaptive immune response. Current Opinion in Immunology. 9 (1): 4-9.

100. Melino G., Bernassola F., Knight R.A., Corasaniti M.T., Nistico G., Finazzi-Agro A. 1997. S-nitrosylation regulates apoptosis. Nature. 388: 432-433.

101. Mevorach D., Mascarenhas J.O., Gershov D., Elkon K.B. 1998. Complement-dependent clearance of apoptotic cells by human macrophages. J Exp Med. 188(12): 2313-20.

102. Michlewska S., McColl A., Rossi A.G., Megson I.L., Dransfield I. 2007. Clearance of dying cells and autoimmunity. Autoimmunity. 40(4): 267-73.

103. Monnier V., Sell D.R., Nagaraj R.H., Miyata S. 1991. Mechanisms of protection against damage mediated by the Maillard reaction in aging. Gerontology.;37(l-3):152-65. Review.

104. Naskalski J.W., Marcinkiewicz J., Drozdz R. 2002. Myeloperoxidase-mediated protein oxidation: its possible biological functions. Clin Chem Lab Med. 40: 463-8.

105. Nathan C. 2002. Points of control in inflammation. Nature. 420(6917): 846-52. Review.

106. Nicholls S.J., Hazen S.L. 2005. Myeloperoxidase and cardiovascular disease. Arterioscler Thromb Vase Biol. 25: 1102-11.

107. Nuutila J., Lilius E.M. 2005. Flow cytometric quantitative determination of ingestion by phagocytes needs the distinguishing of overlapping populations of binding and ingesting cells. Cytometry A. 65: 93.

108. Oka K., Sawamura Т., Kikuta K., Itokawa S., Kume N., Kita Т., Masaki T. 1998. Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor 1 mediates phagocytosis of aged/apoptotic cells in endothelial cells. Proc Natl Acad Sci USA. 95(16): 9535-40.

109. Okada H., Мак T.W. 2004. Pathways of apoptotic and non-apoptotic death in tumour cells. Nature Reviews Cancer. 4: 592-603.

110. Panasenko O.M, Spalteholz H., Schiller J.U. Arnhold J.U. 2003. Myeloperoxidase-induced formation of chlorohydrins and lysophospholipids from unsaturated phosphatidylcholines. Free Radical Biology & Medicine. 34: 553-562.

111. Panasenko O.M., Evgina S.A., Aidyraliev R.K., Sergienko V.I., Vladimirov Y.A. 1994. Peroxidation of human blood lipoproteins induced by exogenous hypochlorite generated in the system of myeloperoxidase + H2O2 + СГ. Free Radical Biol. Med. 16: 143-148.

112. Park S.Y., Lee S.M., Shin S.W., Park J.W. 2008. Inactivation of mitochondrial NADP+-dependent isocitrate dehydrogenase by hypochlorous acid. Free Radic Res. 42(5): 467-73.

113. Pattison D., Davies M.J. 2001. Absolute rate constants for the reaction of hypochlorous acid with protein side chains and peptide bonds. Chem Res Toxicol. 14(10): 1453-64.

114. Peskin A.V., Winterbourn C.C. 2001. Kinetics of the reactions of hypochlorous acid and amino acid chloramines with thiols, methionine, and ascorbate. Free Radical Biology & Medicine. 30: 572-579.

115. Peskin A.V., Winterbourn С.С. 2003. Histamine chloramine reactivity with thiol compounds, ascorbate, and methionine and with intracellular glutathione. Free Radic Biol Med. 35: 1252-60.

116. Piatt N., Suzuki H., Kuxihara Y., Kodama Т., Gordon S. 1996. Role for the class A macrophage scavenger receptor in the phagocytosis of apoptotic thymocytes in vitro. Proc Natl Acad Sci USA. 93(22): 12456-60.

117. Podrez E.A., Abu-Soud H.M., Hazen S.L. 2000. Myeloperoxidase-generated oxidants and atherosclerosis. Free Radical Biol. Med. 28: 1717-1725.

118. Polyak K., Xia Y., Zweier J.L., Kinzler K.W., Vogelstein B. 1997. A model for p53-induced apoptosis. Nature. 389: 300-305.

119. Prutz W.A. 1998. Interactions Of Hypochlorous Acid With Pyrimidine Nucleotides, And Secondary Reactions Of Chlorinated Pyrimidines With GSH, NADH, And Other Substrates. Archives Of Biochemistry And Biophysics. 349: 183-191.

120. Prutz W.A. 1999. Consecutive halogen transfer between various functional groups induced by reaction of hypohalous acids: NADH oxidation by halogenated amide groups. ArchBiochem Biophys. 371(1): 107-14.

121. Pullar J.M., Vissers M.C., Winterbourn C.C. 2000. Living with a killer: the effects of hypochlorous acid on mammalian cells. IUBMB Life. 50(4-5): 259-66. Review.

122. Pullar J.M.,. Winterbourn C.C., Margret Vissers C.M. 1999. Loss of GSH and thiol enzymes in endothelial cells exposed to sublethal concentrations of hypochlorous acid. Am. J. Physiol. 277: H1505-H1512.

123. Ren Y., Silverstein R.L., Allen J., Savill J. 1995. CD36 gene transfer confers capacity for phagocytosis of cells undergoing apoptosis. J Exp Med. 181(5): 1857-62.

124. Rigotti A., Acton S.L., Krieger M. 1995. The class В scavenger receptors SR-B1 and CD36 are receptors for anionic phospholipids. J. Biol. Chem. 270: 16221-16224.

125. Roberts L.R., Adjei P.N., Gores G.J. 1999. Cathepsins as effector proteases in hepatocyte apoptosis. Cell. Biochem. Biophys. 30: 71-88.

126. Roman R.M., Wendland A.E., Polanczyk C.A. 2008. Myeloperoxidase and coronary arterial disease: from research to clinical practice. Arq Bras Cardiol. 91(1): 11-19.

127. Rosen A., Casciola-Rosen L. 1999. Autoantigens as substrates for apoptotic proteases: implications for the pathogenesis of systemic autoimmune disease. Cell Death Differ. 6(1): 612. Review.

128. Rubartelli A., Poggi A., Zocchi M.R. 1997. The selective engulfment of apoptotic bodies by dendritic cells is mediated by the alpha(v)beta3 integrin and requires intracellular and extracellular calcium. Eur J Immunol. 27(8): 1893-900.

129. Saikumar P., Dong Z., Weinberg J.M., Venkatachalam M.A. 1998. Mechanisms of cell death in hypoxia/reoxygenation injury. 25: 3341-3349.

130. Savill J., Dransfield I., Gregory C., Haslett C. 2002. A blast from the past: clearance of apoptotic cells regulates immune responses. Nat Rev Immunol. 2: 965-975.

131. Savill J., Hogg N., Ren Y., Haselett C. 1992. Thrombospondin cooperates with CD36 and the vitronectin receptor in macrophage recognition of neutrophils undergoing apoptosis. J. Clin. Invest. 90: 1513-1522.

132. Schlegel R.A., Krahling S., Callahan M.K., Williamson P. 1999. CD14 is a component of multiple recognition system used by macrophages to phagocytose apoptotic lymphocytes. Cell Death Differ. 6: 583-592.

133. Schraufstatter I.U., Browne К., Harris A., Hyslop P.A., Jackson J.H., Quehenberger O. Cochrane C.G. 1990. Mechanisms of hypochlorite injury of target cells. J. Clin. Invest. 85: 554-562.

134. Schrijvers D.M., De Meyer G.R., Kockx M.M., Herman A.G., Martinet W. 2005. Arterioscler Thromb Vase Biol. 25(6): 1256-61.

135. Scott R.S., McMahon E.J., Pop S.M., Reap E.A., Caricchio R., Cohen P.L., Earp H.S., Matsushima G.K. 2001. Phagocytosis and clearance of apoptotic cells is mediated by MER. Nature. 411(6834): 207-11.

136. Servaty R., Schiller J., Binder H., Kohlstrunk В., Arnold K., 1998. IR and. NMR Studies on the Action of Hypochlorous Acid on Chondroitin Sulfate and Taurine. Bioorganic Chemistry. 26: 33^13.

137. Solary E., Droin N., Bettaieb A., Corcos L., Dimanche-Boitrel M-T., Garrido C. 2000. Positive and negative regulation of apoptotic pathways by cytotoxic agents in hematological malignancies 14, 10: 1833-1849.

138. Somersan S., Bhardwaj N. 2001. Tethering and tickling: a new role for the phosphatidylserine receptor. J Cell Biol. 155(4): 649-59.

139. Strasser A., O'Connor L., Dixit V.M. 2000. Apoptosis signaling. Annu. Rev. Biochem. 69: 217-245.

140. Takizawa F., Tsuji S., Nagasawa S. 1996. Enhancement of macrophage phagocytosis upon iC3b deposition on apoptotic cells. FEBS Lett. 397(2-3): 269-72.

141. Tang X., Halleck M.S., Schlegel R.A., Williamson P. 1996. A subfamily of P-type ATPases with aminophospholipid transporting activity. Science. 272: 1495-1497.

142. Thomas E.L., Grisham M.B., Melton D.F., Jefferson M.M. 1985. Evidence for a role of taurine in the in vitro oxidative toxicity of neutrophils toward erythrocytes. J Biol Chem. 260(6): 3321-9.

143. Tsutsui H., Ide Т., Kinugawa S. 2006. Mitochondrial oxidative stress, DNA damage, and heart failure. Antioxid Redox Signal. 8: 1737-1744.

144. Ueda S., Nakamura H., Masutani H., Sasada Т., Yonehara S., Takabayashi A., Yamaoka Y., Yodoi J. 1998. Redox regulation of caspase-3(-like) protease activity: regulatory roles of thioredoxin and cytochrome c. J Immunol. 161(12): 6689-95.

145. Ura S., Nishina H., Gotoh Y., Katada Т., 2007. Activation of the JNK pathway by MST1 is essential and sufficient for the induction of chromatin condensation during apoptosis. Mol. Cell. Biol. 10: 00199-07.

146. Van den Dobbelsteen D.J., Nobel C.S., Schlegel J., Cotgreave I.A., Orrenius S., Slater A.F. 1996. Rapid and specific efflux of reduced glutathione during apoptosis induced by anti-Fas/APO-1 antibody. J Biol Chem. 271(26): 15420-7.

147. Vandivier R.W., Fadok V.A., Ogden C.A., Hoffmann P.R., Brain J.D., Accurso F.J., Fisher J.H., Greene K.E., Henson P.M. 2002. Impaired clearance of apoptotic cells from cystic fibrosis airways. Chest. 121(3 Suppl): 89S.

148. Varghese J., Khandre N.S., Sarin A. 2003. Caspase-3 activation is an early event and initiates apoptotic damage in a human leukemia cell line. Apoptosis. 8(4): 363-70.

149. Vercammen D., Brouckaert G., Denecker G., Van de Craen M., Declercq W., Fiers W., Vandenabeele P. 1998. Dual signaling of the Fas receptor: initiation of both apoptotic and necrotic cell death pathways. J. Exp. Med. 188: 919-930.

150. Verhoven В., Schlegel R.A.,Williamson P. 1995. Mechanisms of phosphatidylserine exposure, a phagocyte recognition signal, on apoptotic T lymphocytes. J. Exp. Med. 182: 1597-1601.

151. Vile G.F., Rothwell L.A., Kettle A.J. 2000. Initiation of rapid, P53-dependent growth arrest in cultured human skin fibroblasts by reactive chlorine species. Arch Biochem Biophys. 377(1): 122-8.

152. Vissers M.C., Carr A.C., Chapman A.L. 1998. Comparison of human red cell lysis by hypochlorous and hypobromous acids: insights into the mechanism of lysis. Biochem. J. 330: 131-138.

153. Vissers M.C., Carr A.C., Winterbour C.C. 2001. Fatty acid chlorohydrins and bromohydrins are cytotoxic to human endothelial cells. Redox Rep. 6(1): 49-55.

154. Vissers M.C., Pullar J.M., Hampton M.B. 1999. Hypochlorous acid causes caspase activation and apoptosis or growth arrest in human endothelial cells. Biochem J. 344(2): 4439.

155. Vissers M.C., Stern A., Kuypers F., van den Berg J., Winterbourn C.C. 1994. Membrane changes associated with lysis of red blood cells by hypochlorous acid. Free Radic. Biol. Med. 16: 703-712.

156. Vissers M.C., Winterbourn C.C. 1995. Oxidation of intracellular glutathione after exposure of human red blood cells to hypochlorous acid. Biochem. J. 307: 57-62.

157. Vogt W., Hesse D. 1994. Oxidants generated by the myeloperoxidase-halide system activate the fifth component of human complement, C5. Immunobiology. 192(1-2): 1-9.

158. Volbracht C., Leist M., Kolb S.A., Nicotera P. 2001. Apoptosis in caspase-inhibited neurons. Mol. Med. 7: 36-48.

159. Wagner B.A, Buettner R., Oberley L.W., Darby J., Burns P. 2000. Myeloperoxidase is involved in H202-induced apoptosis of HL-60 human leukemia cells. J Biol Chem. 275(29): 22461-9.

160. Weiss S.J., Klein R., Slivka A., Wei M. 1982. Chlorination of taurine by human neutrophils. Evidence for hypochlorous acid generation. J Clin Invest. 70(3): 598-607.

161. Weiss S.J., Lampert M.B., Test S.T. 1983. Long-lived oxidants generated by human neutrophils: characterization and bioactivity. Science. 222(4624): 625-8.

162. Weitzman S.A., Gordon L.I. 1990. Inflammation and cancer: Role of phagocyte-generated oxidants in carcinogenesis. Blood. 766: 655-663.

163. Whiteman M., Hooper D.C., Scott G.S., Koprowski H., Halliwell B. 2002. Inhibition of hypochlorous acid-induced cellular toxicity by nitrite. Proc Natl Acad Sci USA. 99(19): 12061-6.

164. Whiteman M., Rose P., Siau J.L., Halliwell B. 2003. Nitrite-mediated protection against hypochlorous acid-induced chondrocyte toxicity: a novel cytoprotective role of nitric oxide in the inflamed joint? Arthritis Rheum. 48(11): 3140-50.

165. Williamson P., Schlegel R.A. 2002. Transbilayer phospholipid movement and the clearance of apoptotic cells. Biochim Biophys Acta. 1585(2-3): 53-63. Review.

166. Winterbourn C.C. 1985. Comparative reactivities of various biological compounds with myeloperoxidase-hydrogen peroxide-chloride, and similarity of the oxidant to hypochlorite. Biochim Biophys Acta. 840: 204-10.

167. Winterbourn C.C., Brennan S.O. 1997. Characterization of the oxidation products of the reaction between reduced glutathione and hypochlorous acid. Biochem. J. 326: 87-92.

168. Winterbourn C.C., van den Berg J.J., Roitman E., Kuypers F.A. 1992. Chlorohydrin formation from unsaturated fatty acids reacted with hypochlorous acid. Arch Biochem Biophys. 296(2): 547-55.

169. Woodle E.S., Smith D.M., Bluestone J.A., Kirkman W.M. 3rd, Green D.R., Skowronski E.W. 1997. Anti-human class I MHC antibodies induce apoptosis by a pathway that is distinct from the Fas antigen-mediated pathway. J. Immunol. 158: 2156-2164.

170. Wright C.E., Tallan H.H., Lin Y.Y., Gaull G.E. 1986. Taurine: biological update. Annu Rev Biochem. 55: 427-53.

171. Xiang J., Chao D.T., Korsmeyer S.J. 1996. Bax-induced cell death may not require interleukin 1 P-converting enzymelike proteases. Proc. Natl Acad. Sci. USA. 93: 1455914563.

172. Xue L., Fletcher G.C., Tolkovsky A.M. 1999. Autophagy is activated by apoptotic signalling in sympathetic neurons: an alternative mechanism of death execution. Mol. Cell Neurosci. 14: 180-198.

173. Yamamoto Т., Imoto S., Sekine Y., Sugiyama K., Akimoto Т., Muraguchi A., Matsuda T. 2004. Involvement of NF-кВ in TGF-p-mediated uppression of IL-4 signaling. Biochem. and Biophys.l Research Commun. 313(3, 16): 627-634.

174. Zeevalk G.D., Razmpour R., Bernard L.P. 2008. Glutathione and Parkinson's disease: Is this the elephant in the room? Biomedicine & Pharmacotherapy. 62(4): 236-249.

175. Zhao W., Robbins M.E. 2009. Inflammation and chronic oxidative stress in radiation-induced late normal tissue injury: therapeutic implications. Curr Med Chem. 16: 130-143.