Регуляция процессов пролиферации и апоптоза компонентами сфингомиелинового цикла при гепатоканцерогенезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Заварзин, Виталий Александрович

• Заварзин, Виталий Александрович
• кандидат медицинских наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Заварзин, Виталий Александрович

Список принятых в работе сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Гепатоканцерогенез: основные механизмы развития

1.1.1. Гепатоцеллюлярная карцинома: этиология и патогенез

1.1.2. Моделирование экспериментальной гепатоцеллюлярной карциномы при введении N - нитроздиэтиламина

1.2. Молекулярные механизмы регуляции пролиферации клеток 18 1.2.1. Нарушение регуляции пролиферахивной активности при ^ канцерогенезе

1.3. Биологическая роль апоптоза в онкогенезе

1.3.1. Молекулярные механизмы передачи внутриклеточных сигналов апоптотической гибели

1.3.2. Нарушение механизмов индукции апоптоза при канцерогенезе

1.4. Биоэффекторная роль сфинголипидов в регуляции жизнедеятельности клетки

1.4.1. Сфингомиелиновый цикл: состав, локализация, свойства

1.4.2. Регуляция пролиферации и апоптоза клеток компонентами сфингомиелинового цикла

1.4.3. Роль сфинголипидов в канцерогенезе

1.4.4. Сфинголипиды и противоопухолевые препараты 40 Заключение по обзору литературы

Глава 2.

2.1. Материал

2.2. Методы исследований

2.2.1. Моделирование гепатоцеллюлярного рака у крыс

2.2.2. Схема проведения эксперимента

2.2.2.1. Схема добавления липосом, содержащих компоненты сфингомиелинового цикла, в среду инкубации при индукции 45 гепатоцеллюлярного рака на модели in vitro

2.2.2.2. Схема введения липосом, содержащих компоненты сфингомиелинового цикла, при индукции гепатоцеллюлярного 46 рака в модели in vivo

2.2.3. Выделение клеток печени путем перфузии органа раствором коллагеназы

2.2.4. Определение жизнеспособности кариоцитов с помощью трипанового синего

2.2.5. Определение синтеза ДНК в клетках печени

2.2.6. Регистрация апоптоза методом фрагментации ДНК

2.2.7. Получение гомогената ткани печени крыс

2.2.8. Определение активности сфингомиелиназы

2.2.9. Определение активности церамидазы *

2.2.10. Определение белка микробиуретовым методом

2.2.11. Получение липидного экстракта по Фолчу

2.2.12. Определение содержания компонентов сфингомиелинового цикла (сфингомиелин, церамид, сфингозин) в ткани печени крыс 51 методом тонкослойной хроматографии

2.2.13. Приготовление этанольного раствора фосфатидилхолина

2.2.14. Приготовление липосом

2.2.15. Морфологическое исследование печени крыс

2.2.16. Статистическая обработка результатов

Глава 3. Результаты и их обсуждение 55 3.1. Изучение влияния курсового введения липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на морфологические показатели в 55 печени крыс в динамике гепатоканцерогенеза

3.1.1. Изменение морфологической картины печени крыс в динамике гепатоканцерогенеза

3.1.2. Изучение влияния курсового введения не нагруженных («пустых») липосом на морфологические показатели печени крыс 57 в динамике гепатоканцерогенеза

3.1.3. Изучение влияния курсового введения липосом, нагруженных сфингомиелином, на морфологические показатели 58 печени крыс в динамике гепатоканцерогенеза

3.1.4. Изучение влияния курсового введения липосом, нагруженных церамидом, на морфологические показатели печени 60 крыс в динамике гепатоканцерогенеза

3.2. Оценка влияния введения липосом, содержащих компоненты сфингомиелинового цикла, на пролиферативную активность 63 клеток печени крыс в динамике гепатоканцерогенеза

3.2.1. Оценка пролиферативной активности клеток в динамике развития гепатоцеллюлярного рака при введении липосом, 63 содержащих сфингомиелин или церамид, на модели in vitro

3.2.2. Оценка пролиферативной активности клеток в динамике развития гепатоцеллюлярного рака при введении липосом, содержащих компоненты сфингомиелинового цикла, на модели in vivo

3.3. Оценка влияния введения липосом, содержащих компоненты сфингомиелинового цикла, на активность программированной клеточной гибели трансформированных гепатоцитов в динамике гепатоканцерогенеза

3.3.1. Оценка влияния липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на процесс апоптоза трансформированных клеток печени крыс в модели in vitro

3.3.2. Оценка влияния липосом, содержащих сфингомиелин или церамид на процесс апоптоза клеток печени крыс, на фоне 74 развития гепатоцеллюлярной карциномы в модели in vivo

3.4. Влияние липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на функциональную активность сфингомиелинового цикла в 83 динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы

3.4.1. Изменение активности сфингомиелиназы в трансформированных клетках печени крыс при развитии 83 гепатоцеллюлярного рака

3.4.2. Изменение активности сфингомиелиназы в печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин или 88 церамид в динамике гепатоканцерогенеза

3.4.3. Изменение активности церамидазы в трансформированных ^ клетках печени крыс при развитии гепатоцеллюлярного рака

3.4.4. Изменение активности церамидазы в печени крыс при курсовом введении липосом-, содержащих сфингомиелин или 92 церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярной карциномы

3.5. Изучение содержания компонентов сфингомиелинового цикла в печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака

3.5.1. Изменение содержания сфингомиелина в трансформированных клетках печени крыс в динамике развития 95 гепатоцеллюлярной карциномы

3.5.2. Изменение содержания сфингомиелина в трансформированных клетках печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, в динамике развития гепатоцеллюлярного рака

3.5.3. Изменение содержания церамида в трансформированных клетках печени крыс при развитии гепатоцеллюлярной карциномы

3.5.4. Изменение содержания церамида в трансформированных клетках печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака

3.5.5. Изменение содержания сфингозина в клетках печени крыс в динамике развития гепатоцеллюлярной карциномы

3.5.6. Изменение содержания сфингозина в трансформированных клетках печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Регуляция процессов пролиферации и апоптоза компонентами сфингомиелинового цикла при гепатоканцерогенезе»

Актуальность темы. Рак печени различного генеза в настоящее время имеет широкую распространенность и является острейшей медико -социальной проблемой. Ежегодно в мире от гепатоцеллюлярной карциномы погибает 1 25000 человек [80]. Заболеваемость этим злокачественным новообразованием имеет географические отличия. В Европе злокачественные опухоли гепатобилиарной зоны встречаются у 1 - 3 чел. на каждые 100 тыс. населения, в различных регионах Африки и Дальневосточной Азии ими заболевают 10 - 15 чел. на 100 тыс. населения [57]. В России первичный рак печени составляет 3 - 5 % в общей структуре злокачественных новообразований. Ежегодно регистрируется более 8000 новых случаев заболевания. Мужчины заболевают в 2 раза чаще, чем женщины. В 1992 году интенсивный показатель заболеваемости раком печени и внутрипеченочных желчных протоков в России составил 5,7 на 100000 населения, а в 2001 году

- 4,9 на 100000 населения [23]. В России наибольшие показатели заболеваемости данным злокачественным новообразованием были отмечены в республике Саха (Якутия) - 11,0 на 100000 населения.

Исследование механизмов гепатоканцерогенеза является актуальной задачей современной онкологии. Известно, что злокачественная трансформация сопровождается прибавлением клеточной массы, которое опережает клеточную гибель либо за счет активации процессов пролиферации, либо вследствие угнетения процессов апоптоза, а чаще всего

- за счет сочетанного нарушения обоих этих процессов [24, 169, 171]. Блокирование процесса апоптоза, связанное с постоянным действием промоторов опухолевого роста, приводит к фенотипическим изменениям трансформированных клеток, которые приобретают повышенную способность к пролиферации и утрачивают способность к дифференцировке. Благодаря этим свойствам они имеют преимущества перед клетками нормальных тканей при росте и выживании в одинаковых условиях [24, 48, 65,74,157].

Долгое время считалось, что традиционно используемые в онкологической практике лекарственные препараты вызывают гибель опухолевых клеток путем повреждения ДНК клеток или блокированием в них важнейших путей метаболизма [58, 72]. Сейчас достоверно известно, что антибластомная активность многих из этих препаратов также связана со способностью индуцировать в клетках - мишенях апоптоз [4, 74, 107, 156, 163, 164]. Поэтому поиск и отбор лекарственных средств, способных индуцировать апоптоз, представляет собой важное направление в оптимизации схем терапии злокачественных заболеваний.

Благодаря успеху липидологии стало известно, что липиды являются не только основным структурными элементом клеточных мембран, но также играют определяющую роль в различных клеточных процессах, в том числе -пролиферации и апоптозе. Важное значение в регуляции клеточных функций принадлежит продуктам расщепления сфингомиелина: церамиду и сфингозину; [108, 117, 120, 121, 122, 136]. Известно, что сфинголипиды являются иммуномодуляторами и вторичными мессенджерами, играющими существенную роль в гистогенезе тканей, росте и дифференцировке клеток, онкогенезе [2, 30, 34, 59, 60, 72, 84, 134, 100, 161].

Однако ряд вопросов, важных для понимания роли компонентов сфингомиелинового цикла в регуляции пролиферации и апоптоза при гепатоканцерогенезе, остается неисследованным. Кроме того, является актуальным изучение компонентов сфингомиелинового цикла с целью поиска новых факторов антиканцерогенеза, применение которых позволит существенно снизить риск развития рака печени и улучшить результаты химиотерапии больных данной патологией. Цель работы: изучить роль компонентов сфингомиелинового цикла в регуляции процессов пролиферации и апоптоза при экспериментальном гепатоканцерогенезе.

Для достижения данной цели были сформулированы следующие задачи:

1. Оценить влияние сфингомиелина и церамида на морфологическую картину печени крыс в процессе экспериментального гепатоканцерогенеза.

2. Изучить влияние сфингомиелина и церамида, заключенных в липосомы, на пролиферативную активность и индукцию апоптоза клеток гепатоцеллюлярной карциномы на модели in vitro.

3. Оценить изменение пролиферативной активности и индукции апоптоза клеток печени крыс в процессе развития гепатоцеллюлярной карциномы, а также при курсовом внутривенном введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, в динамике гепатоканцерогенеза на модели in vivo.

4. Исследовать активность сфингомиелиназы и церамидазы, содержание компонентов цикла сфингомиелина (сфингомиелин, церамид, сфингозин) в норме и в процессе развития гепатоцеллюлярной карциномы, а также после курсового введения липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Введение липосом, нагруженных церамидом, приводит к подавлению экспериментального гепатоканцерогенеза, индуцированного N-нитроздиэтиламином, и препятствует формированию гепатоцеллюлярной карциномы.

2. Введение липосом, нагруженных сфингомиелином, в моделях in vitro и in vivo, приводит к наиболее выраженному подавлению пролиферации и индукции апоптоза трансформированных гепатоцитов на ранних стадиях формирования гепатоцеллюлярной карциномы.

3. Введение церамида, заключенного в липосомы, при индукции гепатоцеллюлярного рака на моделях in vitro и in vivo подавляет пролиферацию и активирует апоптотическую гибель трансформированных гепатоцитов на поздних стадиях гепатоканцерогенеза.

Научная новизна

Впервые показано, что курсовое введение липосом, содержащих сфингомиелин, на фоне индукции гепатоцеллюлярного рака приводило к более длительному течению воспалительного процесса и задержке формирования гепатоцеллюлярной карциномы до 35 суток по сравнению с группой животных — опухоленосителей, без введения липосом. При введении липосом, нагруженных церамидом, на фоне введения N -нитроздиэтиламина, отмечено наличие минимальной степени выраженности воспалительного процесса и не выявлено структур злокачественных опухолей на протяжении всего периода наблюдений.

Впервые проведено комплексное исследование влияния метаболитов цикла сфингомиелина, заключенных в липосомы на активность пролиферативных процессов и индукцию апоптоза трансформированных гепатоцитов в динамике гепатоканцерогенеза на моделях in vitro и in vivo. Выявлено, что сфингомиелин, введенный в составе липосом, в моделях in vitro и in vivo, на фоне развития гепатоцеллюлярной карциномы приводит к наибольшему подавлению уровня пролиферации и наиболее выраженной индукции апоптоза трансформированных гепатоцитов на ранних стадиях опухолевого роста (до 35 суток). При введении церамида, заключенного в липосомы, аналогичное влияние на изучаемые показатели наблюдалось на поздних стадиях (60 - 90 сутки) формирования гепатоцеллюлярного рака.

Впервые показана корреляционная зависимость между увеличением содержания сфингомиелина и повышением пролиферативной активности клеток гепатоцеллюлярной карциномы в процессе канцерогенеза. При этом отмечена обратная корреляционная зависимость между снижением содержания церамида и сфингозина и повышением пролиферативной активности трансформированных гепатоцитов.

Установлено, что курсовое введение липосом, нагруженных церамидом на фоне введения N - нитроздиэтиламина iv vivo приводит к активации сфингомиелиназы и церамидазы и повышению содержания церамида и

13 . сфингозина с достижением максимальных значений данных показателей на 60 - 90 сутки наблюдений, что способствует, по данным корреляционного анализа, наибольшему снижению пролиферативной активности и индукции апоптоза гепатоцитов на данном этапе наблюдений. Теоретическая и практическая значимость работы

Результаты исследования существенно расширяют фундаментальные представления о механизмах регуляции пролиферативной активности и апоптотической гибели клеток метаболитами сфингомиелинового цикла в динамике гепатоканцерогенеза. Данные о взаимосвязи активности ключевых ферментов сфингомиелинового цикла с интенсивностью процессов пролиферации и апоптоза могут послужить основой для выбора дополнительных информативных критериев при оценке биохимических характеристик трансформированных гепатоцитов, которые, в свою очередь можно использовать в качестве факторов прогноза опухолевой трансформации. Полученные данные показывают принципиальную возможность использования сфингомиелина и церамида с целью ингибирования гепатоканцерогенеза и служить основой для создания новых противоопухолевых и антиканцерогенных средств. Публикации

По теме диссертации опубликовано 15 печатных работ, в том числе 2 статьи в журналах, рекомендованных ВАК. Апробация работы

Основные результаты работы представлены на VIII Русско - Корейском Международном симпозиуме (Томск, 2004); на конференции молодых ученых НИИ онкологии ТНЦ СО РАМН (Томск, 2005); симпозиуме FEBS № 05 - 28W «Recent Advances in Lipid Metabolism and Related Disorders», (Dijon, France, 2005); V Сибирском Физиологическом съезде, (Томск, 2005); 9 International Conference «Eicosanoids and Other Bioactive Lipids in Cancer, Inflammation and Related Diseases», (San Francisco, USA, 2005); Международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки», (Тюмень, 2005); на региональной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической онкологии», (Томск, 2006); на Всероссийской научно - практической конференции «Онкология сегодня. Успехи и перспективы», (Казань, 2006). Объем и структура диссертации

Заключение диссертации по теме «Онкология», Заварзин, Виталий Александрович

ВЫВОДЫ:

1. При курсовом внутривенном введении церамида в составе липосом на фоне индукции гепатоцеллюлярной карциномы N - нитроздиэтиламином в печени животных не выявлено структур злокачественных новообразований. Введение липосом, содержащих сфингомиелин, задерживало мофологически зарегистрированное фомирование гепатоцеллюлярной карциномы на семь дней по сравнению с группой животных с гепатоцеллюлярным раком без введения липосом.

2. Добавление сфингомиелина, заключенного в липосомы, в суспензию трансформированных гепатоцитов in vitro до 35 суток наблюдений снижало пролиферативную активность на 42 % и повышало уровень индукции апоптоза клеток в 1,9 раза по сравнению с аналогичными показателями клеток гепатоцеллюлярной карциномы. Введение липосом, нагруженных церамидом, in vitro приводило к снижению синтеза ДНК на 51% и активации апоптоза клеток печени в 2 раза по сравнению с соответствующим показателем трансформированных гепатоцитов на поздних этапах исследования (60 - 90 сутки).

3. При курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин, in vivo, набольшее подавление уровня пролиферации на 44% и индукции апоптоза в 2,2 раза по сравнению с группой животных - опухоленосителей, без введения липосом, отмечено на ранних стадиях развития гепатоцеллюлярной карциномы (до 35 суток). Введение церамида в составе липосом in vivo приводило к снижению пролиферативной активности на 40% и стимуляции апоптотической гибели клеток печени в 3,1 раза на 90 сутки наблюдений по сравнению с аналогичными показателями группы животных с развитием гепатоцеллюлярного рака без введения липосом.

4. Процесс гепатоканцерогенеза у крыс сопровождается активацией сфингомиелиназы и церамидазы на 35 сутки наблюдений и дальнейшим снижением активности ферментов на 90 сутки эксперимента, а также увеличением содержания сфингомиелина и снижением содержания сфингозина и церамида на всех сроках эксперимента в сравнении с аналогичными показателями группы интактных животных.

5. Курсовое введение липосом, содержащих сфингомиелин, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака приводило к выраженной активации сфингомиелиназы и церамидазы на 28 и 35 сутки наблюдений, к 90 суткам развития гепатоцеллюлярной карциномы происходило снижение активности данных энзимов. Введение липосом, нагруженных церамидом, на фоне на фоне введения N - нитроздиэтиламина у крыс приводило к активации сфингомиелиназы и церамидазы.

6. Была получена прямая корреляционная зависимость между увеличением содержания сфингомиелина и повышением пролиферативной активности клеток гепатоцеллюлярной карциномы в процессе канцерогенеза и обратная корреляционная зависимость между снижением содержания компонентов сфингомиелинового цикла (церамида, сфингозина) и повышением пролиферативной активности трансформированных гепатоцитов. Увеличение количества церамида и сфингозина было связано с повышением уровня апоптотической гибели клеток в процессе канцерогенеза.

125

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время литературные данные, свидетельствующие о роли компонентов сфингомиелинового цикла в развитии гепатоцеллюлярного рака крайне немногочисленны. Известно, что фосфолипиды являются важным структурным компонентом хромосом, хроматина, ядерного матрикса. Сфинголипиды являются регуляторами активности ферментов и участвуют в функционировании ряда медиаторных систем, нарушение которых приводит к дисбалансу между процессами пролиферации и апоптоза при канцерогенезе. Многие авторы полагают, что одной из причин усиления пролиферации трансформированных клеток может быть изменение баланса между сфинголипидами, которые могут действовать кооперативно, противоположно или независимо друг от друга, определяя тем самым судьбу клетки (апоптоз, пролиферация, дифференцировка и т.д.) [66, 72]. Вероятно, одной из причин усиления пролиферации опухолевых клеток может быть изменение структуры сфингоидных оснований и жирнокислотных остатков в церамидах опухолей по сравнению с нормой [33, 73].

Таким образом, изучение роли сфинголипидов в механизмах регуляции пролиферации и апоптоза при канцерогенезе позволит расширить представления о патогенезе рака печени, а также обосновать поиск новых препаратов, которые могут существенно снизить риск развития рака печени и войти в новые схемы терапии злокачественных новообразований.

Эти обстоятельства послужили отправным пунктом при постановке цели, которая заключалась в изучении роли компонентов сфингомиелинового цикла в регуляции процессов пролиферации и апоптоза при экспериментальном гепатоканцерогенезе. При этом предполагалось:

1. Оценить влияние сфингомиелина и церамида на морфологическую картину печени крыс в процессе экспериментального гепатоканцерогенеза.

2. Изучить влияние сфингомиелина и церамида, заключенных в липосомы, на пролиферативную активность и индукцию апоптоза клеток гепатоцеллюлярной карциномы на модели in vitro.

3. Оценить изменение пролиферативной активности и индукции апоптоза клеток печени крыс в процессе развития гепатоцеллюлярной карциномы, а также при курсовом внутривенном введении липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, в динамике гепатоканцерогенеза на модели in vivo.

4. Исследовать активность сфингомиелиназы и церамидазы, содержание компонентов цикла сфингомиелина (сфингомиелин, церамид, сфингозин) в норме и в процессе развития гепатоцеллюлярной карциномы, а также после курсового введения липосом, содержащих сфингомиелин или церамид, на фоне развития гепатоцеллюлярного рака.

В работе изучали роль компонентов сфингомиелинового цикла в регуляции процессов пролиферации и. апоптоза на модели экспериментального гепатоканцерогенеза и использовали трансформированные клетки, выделенные путем перфузии печени in situ.

Исследование морфологических показателей печени крыс при курсовом введении липосом, содержащих сфингомиелин, на фоне развития гепатоцеллюлярной карциномы показало более длительное течение воспалительного процесса и формирование гепатоцеллюлярной карциномы на более поздних этапах исследования по сравнению с группой животных, которым не вводили липосомы. При внутривенном курсовом (с 14 - х по 28 -е сутки) введении церамида, заключенного в липосомы, отмечена минимальная степень выраженности воспалительного процесса, при этом признаки структур злокачественной опухоли в исследуемых тканях отсутствовали в течение всего периода наблюдений.

Введение липосом, содержащих сфингомиелин в моделях in vitro и in vivo, на фоне развития гепатоцеллюлярной карциномы, приводило к максимальному подавлению уровня пролиферации на ранних стадиях опухолевого роста (до 35 суток). При введении липосом, нагруженных церамидом, аналогичное снижение данного показателя наблюдалось лишь на 60 - 90 сутки наблюдений.

В представленной работе было изучено влияние сфингомиелина и церамида на активность процесса апоптотической гибели трансформированных клеток в динамике гепатоканцерогенеза. Введение липосом, нагруженных сфингомиелином приводило к активации процесса апоптоза трансформированных гепатоцитов в моделях in vitro и in vivo к 35 суткам гепатоканцерогенеза. На поздних этапах гепатоканцерогенеза (60 — 90 сутки) сфингомиелин не оказывал значительного влияния на данный показатель, тогда как церамид, введенный в составе липосом приводил к активации апоптотической гибели трансформированных гепатоцитов.

В результате проведенных исследований нами было показано, что введение компонентов сфингомиелинового цикла приводило к изменениям в активации ключевых ферментов сфингомиелинового цикла: сфингомиелиназы и церамидазы. Курсовое введение липосом, содержащих сфингомиелин на фоне развития гепатоцеллюлярного рака приводило к активации сфингомиелиназы и церамидазы к 35 суткам развития гепатоцеллюлярного рака, однако на поздних этапах гепатоканцерогенеза происходит снижение активности данных энзимов. Введение церамида в составе липосом на фоне введения N-нитроздиэтиламина у крыс приводило к активации сфингомиелиназы и церамидазы в течение всего периода наблюдений. Необходимо подчеркнуть, что сигналопередающий каскад от различных сфингомиелиназ активирует различные пути регуляции апоптоза и пролиферативной активности клеток.

Полагают, что активация кислой сфингомиелиназы приводит к усилению митогенной стимуляции посредством активации NF - кВ через ras — raf-MAPKK сигнальный путь (рис. 15).

СФИНГОМИЕЛИН

СФИНГОМИЕЛИНАЗА

ЦЕРАМИДАЗА

Ингибирование

BCL-2 Формирование пор в митохондриях

Фрагментация ДНК Д

ПРОЛИФЕРАЦИЯ

АПОПТОЗ

Рис. 15 Схема влияния метаболитов цикла сфингомиелина на внутриклеточные пути пролиферативных, про - и антиапоптических сигналов на основании данных литературы. Примечание: КК - казеинкиназа II, РК С - протеинкиназа С, МАРК, SAPK, JNK, ERK - митоген -активируемые протеинкиназы.

Установлено, что ингибирование синтеза церамида приводило к увеличению циклина D1, которое влекло за собой повышение митотической активности гепатоцитов. Ингибирование активности церамидазы приводило к увеличению содержания церамида в клетках гепатомы, которое в свою очередь, изменяло ультраструктуру митохондрий и увеличивало выход цитохрома С в цитоплазму и активировало каспазу 3. Авторы считают, что кислая церамидаза может опосредовать гепатоканцерогенез, а ее антагонисты могут быть использованы в терапии рака печени.

Известно, что активация нейтральной мембраносвязанной сфингомиелиназы катализирует гидролиз сфингомиелина до церамида и фосфатидилхолина. На втором этапе церамидаза гидролизует церамид до сфингозина и жирной кислоты. Церамиды и сфингозины, как правило оказывают различные эффекты как на пролиферацию и дифференцировку клеток, так и на процесс апоптоза. Согласно данным других авторов, сфингозин способен индуцировать как пролиферацию, так и апоптоз. Изменение содержания сфингозина приводит к обратимому ингибированию протеинкиназы С, активации митоген - активируемых протеинкиназ (ERK, SAPK), активации фосфолипазы D с образованием, фосфатидной кислоты. Установлено, что фосфатидная кислота активирует гены с - fos, с - туе и индуцирует синтез ДНК, непосредственно участвуя в процессе пролиферации. С другой стороны сфингозин может влиять на экспрессию гена bcl - 2, тем самым регулируя процесс апоптоза. Ингибирование протеинкиназы С сфингозином и другими ингибиторами этого фермента резко усиливает проапоптотическое действие церамида. Клетки, устойчивые к апоптозу, не могут одновременно накапливать церамид и сфингозин. В нашем исследовании одновременное накопление церамида и сфингозина отмечено при курсовом введении липосом, нагруженных церамидом, животным с индукцией гепатоцеллюлярного рака на модели in vivo. В данной опытной группе выявлена обратная корреляционная зависимость между увеличением содержания церамида (г = - 0,89 , р < 0,05) и сфингозина (г - 0,83, р < 0,05) и снижением пролиферативной активности гепатоцитов на фоне введения N - нитроздиэтиламина. Необходимо подчеркнуть, что повышение содержания церамида и сфингозина было связано с активацией уровня апоптотической гибели гепатоцитов (г = 0,87 , р < 0,05) и (г = 0,92, р < 0,05) в данной опытной группе.

Таким образом, можно предположить, что именно комбинированное действие церамида и сфингозина является необходимым условием для подавления пролиферации и стимуляции апоптотической гибели в опухолевы клетках.

Особый интерес представляет изменение активности сфингомиелиназы и содержания сфингомиелина цикла на различных этапах воспалительного процесса и гепатоканцерогенеза. Так с 60 суток наблюдений, активность сфингомиелиназы у крыс, которым на фоне развития рака печени вводили липосомы, содержащие сфингомиелин снижалась и была менее выраженной по сравнению с аналогичными показателями в остальных опытных группах. Однако, на более поздних этапах развития рака печени концентрация сфингомиелина возростала к 90 суткам наблюдений. Как известно, уровень сфингомиелина - это динамическая величина, которая определяется скоростью его синтеза de novo и скоростью его деградации под действием сфингомиелиназы. Сфингомиелин в клетке может синтезироваться двумя путями: 1) при взаимодействии церамида с цитидинфосфат-холином; 2) при взаимодействии церамида с фосфатидилхолином и переносом холина на сфингомиелин. Снижение содержания сфингозина и церамида может указывать на преобладание синтеза сфингомиелина de novo на поздних этапах гепатоканцерогенеза. Необходимо подчеркнуть, как при развитии хронического гепатита, так и при развитии рака печени изменения активности сфингомиелиназы и содержания сфингомиелина сжожи на поздних стадиях течения хронического гепатита и на поздних этапах развития гепатоцеллюлярного рака [92]. Дальнейшие исследования позволят использовать эти критерии для прогнозирования процесса озлокачествления при развитии хронического воспалительного процесса печеночной паренхимы.

Таким образом, нами установлено, что регуляция как пролиферативной активности опухолевых клеток, так и индукции апоптоза может осуществляться компонентами сфингомиелинового цикла через влияние на функциональную активность ключевых ферментов метаболизма сфингомиелинового цикла, что приводит к сдвигам в содержании сфинголипидов, которые являются одним из компонентов сложного регуляторного пути передачи внутриклеточного сигнала. Выявленные возможности направленной регуляции метаболизма сфинголипидов в опухолевой клетке позволят найти более эффективные биохимические пути индукции програмированной гибели клеток, контроля их роста и дифференцировки для предотвращения процесса злокачественной трансформации.

123

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Заварзин, Виталий Александрович, 0 год

1. Алесенко А.В. Функциональная роль сфингозина в индукции пролиферации и гибели клеток / А.В. Алесенко // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1.-С. 75 - 82.

2. Абраменко И.В. Оценка параметров апоптоза в диагностике онкологических заболеваний, их прогнозе и оптимизации схем терапии / И.В. Абраменко, А.А. Фильченков // Вопросы онкологии. 2003. - Т. 49, № 1. - С. 21 -29.

3. Архипенко И.В. Современные представления о липосомах и перспективы их использования в пульмонологии / И.В. Архипенко, В.А. Невзорова, Б.И. Гельцер // Терапевтический архив. 1998. - № 3. - С. 78 -81.

4. Блюгер А.Ф., Карташова О .Я. Успехи гепатологии / А.Ф. Блюгер, О.Я. Карташова. Рига. - 1977. - с.247.

5. Божков А.И. Липидный обмен и структурно-функциональные особенности мембран эндоплазматического ретикулума регенерирующей печени крыс / А.И. Божков, В.Л. Длубовская // Биохимия.-1992.-Т.-57.-вып.1.- С. 8-14.

6. Белоусова А.К. Загадки гена опухолевого супрессора р53/ А.К. Белоусова // Экспериментальная онкология. 1996. - Т. 18. - С. 197 - 207.

7. Бабенко Н.А. Влияние тиреоидных гормонов и диацилглицеринов на метаболизм сфингомиелина в ядрах клеток печени крыс разного возраста / Н.А. Бабенко, И.С. Филоненко // Биохимия. 2000. - Т.57, № 3. - С. 371377.

8. Бабенко Н.А. Регуляция активности сфингомиелиназ и фосфолипазплазматических мембран клеток печени крыс разного возраста / Н.А. Бабенко // Биохимия. 1991 - Т. 56, № 2. - С. 346 - 353.

9. Бурлакова Е.Б. Мембранные липиды как переносчики информации / Е.Б. Бурлакова, Г.В. Архипова, А.Н. Голощапов // Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982. — С.21 — 37.

10. Биохимические основы патологических процессов / Под. Ред. E.G. Северина. -М.: Медицина, 2000.- 304с.

11. Бердинских Н.К. Изменение белков клеточных мембран в процессе канцерогенеза, вызванного N нитроздиэтиламином / Н.К. Бердинских, Д.Р. Король, В.И. Лившиц // Биохимия. - 1990. - Т. 55, № 3, С. 432 - 437.

12. Барсуков Л.И. Липосомы / Л.И. Барсуков // Соросовский образовательный журнал. 1998. - № 10. - С. 2 - 9.

13. Буеверов А.О. Иммунологические механизмы повреждения печени / А.О. Буеверов // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. - № 5. - С. 18-21.

14. Введение в методы культуры клеток, биоинженерии органов и тканей // В.П. Шахов, И.А. Хлусов, Г.Ц. Дамбаев и др. STT.: 2004. - 386 с.

15. Влияние фактора некроза опухоли на уровень свободного сфингозина и активность сфингомиелиназы в клетках и ядрах печени мышей. / С.А. Русаков, Г.Н. Филипова, М.Ю. Пушкарева и др. / Биохимия. 1993. - Т. 58, №3,- С. 724-731.

16. Василенко И.А. Полиморфизм фосфолипидов в модельных и биологических мембранах / И.А. Василенко, Р.П. Евстегнеева // Известия АН СССР. Серия биологическая. 1986. - Вып.4. - С. 550-560.

17. Владимирская Е.Б. Апоптоз и его роль в регуляции клеточного равновесия / Е.Б. Владимирская // Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - № 11. — С. 25 — 31.

18. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптотической смерти клеток / Е.Б. : Владимирская // Гематология и трансфузиология. 2002. - Т. 47, № 2.1. С. 35-41.

19. Ганцев LLI.X. Онкология / Ш.Х. Ганцев. М.: Медицинское информационное агенство, 2004. 516 с.

20. Григорьев М.Ю. Апоптоз в норме и патологии / М.Ю. Григорьев, Е.Н. Имянитов // Медицинский академический журнал. 2003. - Т. 3, № 3. - С. 3-11.

21. Галицкий В.А. Канцерогенез и механизм внутриклеточной передачи сигналов / В.А. Галицкий // Вопросы онкологии. 2003. - Т. 49, № 3. - С. 278-294.

22. Грибанов Г.А. Особенности структуры и биологическая роль лизофосфолипидов. / Г.А. Грибанов // Вопросы Медицинской Химии. -1991.-Т. 37,№4.-С. 2- 10.

23. Гелынтейн В.И. Эволюция гиперпластических очагов в печени крыс при воздействии диэтилнитрозамина / В.И. Гелынтейн, Т.А. Чипышева, Г.А. Банников // Экспериментальная онкология. 1984. - Т. 6, №1. - С. 17 -21.

24. Готье С.В. Гепатоцеллюлярная карцинома / С.В. Готье // Российский Журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. - № 5. -С. 19-26.

25. Грегориадис Г.А. Липосомы в биологических системах / Г. Григориадис, А. Алисон. М.: Медицина, 1983. - 283 с.

26. Дятловицкая Э.В. Липиды как биоэффекторы / Э.В. Дятловицкая // Биохимия.- 1998.-Т. 63, № 1.-С. 3-5.

27. Дятловицкая Э.В. Гликосфинголипиды и злокачественный рост / Э.В. Дятловицкая // Вопросы мед.химии. 1992. - Т. 38, № 6. - С. 21-23.

28. Дятловицкая Э.В. Сфинголипиды и злокачественный рост / Э.В. Дятловицкая // Биохимия. 1995. - Т. 45, № 5. - С. 843 - 849.

29. Дятловицкая Э.В. Зависимость биоэффекторных свойств сфинглоипидов от строения их гидрофобного фрагмента / Э.В. Дятловицкая // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1. - С. 67 - 74.

30. Ивашкин В.Т. Клеточная и молекулярная биология воспаления печени / В.Т. Ивашкин // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии. 1998. - № 5. - С. 13 - 18.

31. Изменение уровня эндогенного сфингозина в ядрах печени крыс при индуцированной сверхэкспрессии онкогенов циклогесемидином / А.В. Алесенко, П.Я. Бойков, Л.Б. Дробот и др. // Биохимия. 1994. - Т. 59, № 7. -С. 1076- 1087.

32. Изменение активности нейтральной и кислой изоформ сфингомиелиназы в гепатоме 22, в регенерирующей и ишемизированной печени / А.В. Алесенко, Е.С. Зубов, Л.Б. Дудник и др. // Вопросы медицинской химии. - 1999. - Т. 45, № 6, С. 472 - 481.

33. Изменение уровня эндогенного сфингозина в ядрах регенерирующей печени крыс / А.В. Алесенко, Э.А. Пантаз, М.Ю. Пушкарева и др. // Биохмиия. 1993. Т. 58, № 3. - С. 461 - 470.

34. Кондакова И.В. Влияние NO генерирующих соединений на опухолетоксическое действие доксорубицина / И.В. Кондакова, Г.В. Загребельная, Е.Ц. Чойнзонов// Бюлл. эксп. биологии и мед. - 2004. - Т 137, №6-с. 664-666.

35. Кармалита Е.Г. Активность фосфолипазы А2 различной локализации в липосомах / Е.Г. Кармалита, В.Ю. Серебров, С.В. Новицкий и др. // Бюлл. Эксп. биологии и мед. 2002. - № 9, - С. 291 - 294.

36. Кобляков В.А. Индукторы суперсемейства цитохрома Р 450 как промоторы канцерогенеза / В.А. Кобляков // Биохимия. - 1998,- Т. 63, № 8, -С. 1043 - 1058.

37. Кольман Я. Наглядная биохимия / Я. Кольман, К.Г. Ремм. М.: Мир, 2000.-469 с.

38. Колб В.Г. Справочник по клинической биохимии / В.Г. Колб, B.C. Камышников. Минск, 1982. - 350 с.

39. Краснопольский Ю.М. Некоторые аспекты технологии получения липосомальных форм лекарственных препаратов / Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец // Химико фармацевтический журнал. - 1999. -№10.-С. 20-23.

40. Камышников B.C. Справочник по клинико биохимической лабораторной диагностике / B.C. Камышников. - Т. 1. - 2 - е изд. - Мн.: Интерпрессервис, 2003. - 495 с.

41. Когтева Г.С. Ненасыщенные жирные кислоты как эндогенные биорегуляторы / Г.С. Когтева, В.В. Безуглов // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1, С. 6 - 16.

42. Липосомальные формы цитостатиков в онкологии / И.В. Василенко, Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец / Вестник Российской АМН- 1998.-№5, С. 35-40.

43. Лихтенштейн А.В. Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы / А.В. Лихтенштейн, B.C. Шапот // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. 1998. - № 3. - С. 25 - 44.

44. Мартынова Е.А. Влияние сфинголипидов на активацию Т — лимфоцитов /Е.А. Мартынова // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1.- С. 122132.

45. Модуляция фумонизином Bi содержания продуктов сфингомиелинового цикла и экспрессии рецептора CD3 в иммунокомпетентных органах / Е.А. Мартынова, А.С. Соловьев, А.В. Хренов и др.//Биохимия. 1995. - Т. 60, № 4, С. 618 - 624.

46. Морголис Л.Б. Липосомы и их взаимодействие с клетками / Л.Б. Морголис, Л.Д. Бергельсон. М.: Наука. - 1986. - 232 с.

47. Методы биохимических исследований / Под. ред. проф. М.И. Прохоровой. Издательство Ленинградского университета. - 1982. - 271с.

48. Молекулярные основы канцерогенеза у человека / Ф.Л. Киселев, О.А. Павлиш, А.Г. Татосян. М.: Медицина, 1990. - 316 с.

49. Оборотова Н.А. Липосомальные лекарственные формы противоопухолевых препаратов / Н.А. Оборотова // Химико -фармацевтический журнал. 2001. - Т. 35, № 4. - С. 32 - 38.

50. Патологическая физиология / Зайко Н.Н., Быць Ю.В., Атаман А.В. и др. // К.: «ЛОГОС», 1996. 664с.

51. Пальцев М.А. Патологическая анатомия / М.А. Пальцев, Н.М. Аничков. Т. 1. - М.: Медицина, 2001. - 528с.

52. Пальцев М.А. Патологическая анатомия / М.А. Пальцев, Н.М. Аничков. Т.2,4.1. - М.: Медицина, 2001. - 736с.

53. Программированная клеточная гибель/ Под. Ред. Проф. B.C. Новикова. СПб.: Наука, 1996. - 276 с.

54. Проказова Н.В. Влияние лизофосфотидилхолина на передачу трансмембранного сигнала внутрь клетки / Н.В. Проказова, Н.Д. Звездина, А.А. Коротаева // Биохимия. 1998. - Т.63, № 1. - С. 38-47.

55. Проказова Н.В. Эффект лизофосфатидилхолина в трансмембранной передачи сигнала / Н.В. Проказова, Н.Д. Звездина, А.А. Коротаева // Биохимия. 1999. - Т.63, № 1.-С. 46-54.

56. Проблемы и перспективы производства фосфолипидов / И.А. Василенко, Ю.М. Краснопольский, А.Е. Степанов, В.И. Швец // Химико -фармацевтический журнал. 1998. - № 5. - С. 9 - 15.

57. Пирс Э. Гистохимия / Э. Пирс. М.: Наука, 1962. 962 с.

58. Препаративная биохимия липидов / Л.Д. Бергельсон, Э.В. Дятловицкая, Ю.Г. Молотковский и т.д. М.: Наука, 1981.- 256 с.

59. Райхлин Н.Т. Регуляция и проявления апоптоза в физиологических условиях и опухолях / Н.Т. Райхлин, А.Н. Райхлин // Вопросы онкологии. 2002. - Т. 48, № 2. - С. 159 - 171.

60. Роль сфингозин 1 - фосфата в клеточном росте, пролиферации и смерти / С. Шпигель, О. Кувилье, Л. Эдзаль и др. // Биохимия. - 1998. - Т. 69, № 1 - С. 83 - 88.

61. Роль бутилгидрокситолуола в метаболической инактивации диэтилнитрозамина: Исследование денитрозующей активности микросом

62. В.Ю. Аршинов, Т.С. Шуляковская, В.А. Рыкова, А.П. Саприн // Доклад АН СССР. 1984. - Т. 274, № 2, С. 442 - 444.

63. Роль фактора некроза опухоли альфа и активации сфингомилинового цикла в индукции апоптоза в условиях ишемии реперфузии печени / А.В. Алесенко, Э.И. Гальперин, Л.Б. Дудник, В.Г. Коробко // Биохимия. -2002. - Т. 67, № 12. - С. 1632 - 1642.

64. Регуляция воспаления и фиброза печени цитокинами при ее хронических поражениях / С.Н. Маммаев, А.Е. Лукина, Ю.О. Шульпекова и др. // Клиническая лабораторная диагностика. 2001. - № 12. - С. 51 — 54.

65. Сала А. Лейкотриены: липидные биоэффекторы воспалительных реакций/ А. Сала, С. Зарини, М. Бола // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1. -С. 101 -г-110.

66. Стручков В.А. Структурные и функциональные аспекты ядерных липидов нормальных и опухолевых клеток / В.А. Стручков, Н.Б. Стражевская // Биохимия. 2000. - Т. 65, № 5, С. 620 - 643.

67. Сфинганин в сфингомиелинах опухолей и регенерирующей печени мышей / Э.В. Дятловицкая, А.Г. Кандыба, A.M. Козлов, О.Г. Сомова // Биохимия. 2001. - Т. 66, № 5, С. 624 - 627.

68. Фильченков А.А. Современные представления о роли апоптоза в опухолевом росте и его значении для опухолевой терапии / А.А. Фильченков // Экспериментальная онкология. 1998. - № 20. - С. 259 — 270.

69. Фильченко А.А., Стойка Р.С. Апоптоз и рак / А.А. Фильченко, Р.С. Стойка. К: Морион, 1999. - 184 с.

70. Футерман А. Роль церамидов в регулировании роста и развития нейронов / А. Футерман // Биохимия. 1998. - Т. 63, № 1, С. 89 - 100.

71. Хансон К.П. Программированная клеточная гибель (апоптоз) молекулярные механизмы и роль в биологии и медицине / К.П. Хансон // Вопр. мед. химии. 1997. - Т. 43, № 5. - с. 402 - 415.

72. Хроматография. Практическое приложение метода. / Э. Хефтман, Т. Кастер, А. Нидервизер и т.д. М.: Мир, 1986. - 336 с.

73. Швембергер И.Н. Апоптоз: роль в нормальном онтогенезе и патологии / И.Н. Швембергер, Л.Б. Гинкул // Вопросы онкологии. 2002. -Т. 48,№2.-С. 153 - 158.

74. Шерлок Ш. Заболевания печени и желчных путей / Ш. Шерлок, Дж. Дули. М.: Гэотар Медицина, 1999. - 864 с.

75. Apoptosis of human colon carcinoma HT 29 cells induced by ceramide / X.F. Zhang, B.X. Li, C.Y. Dong, K. Ren // World J. Gastroenterol. - 2006. -Vol. 12, № 22. - P. 3581 - 3584.

76. Apoptosis (programmed cell death) and functional changes in aging neutrophils. Modulation by inflammatory mediators / C. Haslett, A. Lee, J.S. Savill, et al. // Chest. 1991. - Vol. 99, № 3. - P. 68.

77. Apoptosis of cultured mouse luteal cells induced by tumor necrosis factor alpha and interferon - gamma / T. Jo, T. Tomiyama, K. Ohashi, et al. // Anat. Rec. - 1995.-Vol. 241,№ 1.-P. 70-76.

78. Alesenko A.V. The role of spingomyelin cycle metabolites in transductions of signal cell proliferation, differentiation and death: from modular to integrative signaling / A.V. Alesenko // Membr. Cell Biol. 2000. - Vol. 13. -P. 303 - 320.

79. Alesenko A.V. Neutral sphingomyelinase: localization in rat liver nuclei and involvement in regeneration proliferation / A.V. Alesenko, S. Chatterjee // Mol. Cell Biochem. - 1995. - Vol. 143, № 2. - P. 169 - 174.

80. An S. Sphingosine 1 - fosfate - induced cell proliferation, survival and related signaling events mediated by G protein - coupled receptors edg 3 edg 5 / S. An, Y. Zheng, T. Bleu // J. Biol. Chem. - 2000. - Vol. 275. - P. 288 - 296.

81. Alkaline sphingomyelinase activity is decreased in human colorectal carcinoma / E. Hertervig, A. Nillson, L. Nyberg, R.D. Duan // Cancer. 1997. -Vol. 79.-P. 448-453.

82. Amundadotir L.T. Signal transduction pathways activated and required for carcinogenesis in response to specific oncogenes / L.T. Amundadotir, P. Leder // Oncogene. 1998. - Vol. 16. - P. 737 - 746.

83. Activation of cAMP signaling transiently inhibits apoptosis in vascular smoots muscle cells in a site upstream of caspase 3 / S.N. Orlov, N. Thorin — Trescases, N.O. Dulin et al. // Cell Death and Differentiation. - 1999. - Vol. 6. -P. 661-672.

84. Blake A.J. Hepatobiliary malignancy / A.J. Blake, GJ. Gores. // Clinics in liver disiase. 1999. - Vol. 7, № 3. - P. 736-743.

85. Chen M. Supression of Bel 2 messenger RNA production may mediate apoptosis after ionizing radiation, tumor necrosis factor alpha, and ceramide / M. Chen // Cancer Res. - 1995. - Vol. 55, № 5. - P. 991 - 994.

86. Cohen J J. Apoptosis: the physiologic pathway of cell death / J.J. Cohen // Hosp. Pract. 1993. - Vol. 28, № 12. - P. 35 - 43.

87. Cleveland J.L. Мус mediated apoptosis in myeloid progenitor cells / J.L. Cleveland, D.S. Askew, G. Pacham // Bull. Cancer. - 1994. - Vol. 46, № 2. - P. 167-172.

88. Cleary M.L. The bcl 2 gene and protein in malignant lymphomas / M.L. Cleary//Bull. Cancer. - 1991.-Vol. 78, № 11. - P. 187 - 193.

89. Cutler R.G. Sphingomyelin and ceramide as regulators of development and lifespan / R.G. Cutler, M.P. Mattson // Mech. Ageing Dev. Vol. 122. - P. 895 -908.

90. Collins R.N. Sphingolipid transport in mitotic HeLa cells / R.N. Collins, G. Warren//J. Biol. Chem. 1992. - Vol. 267. - P. 24906 - 24911.

91. Diveca N. Phospholipid signaling / N. Diveca, R.F. Irvine // Cell. 1995. - Vol. 80, № 2. - P. 269 - 278.

92. Dinarello C.A. The biological properties of interleukin 1 / C. A. Dinarello // Eur. Cytocine Netw. - 1994. - Vol. 5, № 6. - P. 517 - 531.

93. Don C. The cell and molecular biology of gepatic fibrogenesis / C. Don, M.D. Rockey // Infections Disease Clinics of North America. 2000. - Vol.14, №3.-P. 357-365.

94. Duan R.D. Anticancer compounds and sphingolipid metabolism in the colon / R.D. Duan // In vivo. 2005. - Vol. 19. - P. 293 - 300.

95. Distribution of alkaline sphingomyelinase activity in human beings and animals. Tissue and species different / R.D. Duan, E. Hertervig, L. Nyberg at al. //Dig. Dis. Sci. 1996. - Vol. 41. - P. 1801 - 1806.

96. Detection of alkaline sphingomyelinase activity in human stool: proposed role as new diagnostic and prognostic marker of colorectal cancer / L. Di Marzio, A. Di Leo, B. Cinque at al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. -2005.-Vol. 14.-P. 856-862.

97. Divecha N. Phospholipid signaling / N. Divecha, R.F. Irvine // Cell. -1995. Vol. 80. № 2. - P. 269 - 278.

98. Eastman A. Activation of programmed cell death by anticancer agents: cisplatin as model system / A. Eastman // Cancer Cells. 1990. - Vol. 2, № 48. -P. 275-280.

99. Exton J.H. Signaling through phosphatidylcholine breakdown / J.H. Exton // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265. - P. 1- 4.

100. Friedman S. Celular death and necrosis: chemical and morphologic changes in rat liver / S. Friedman, G.Yamasaki, L. Wong // J. Biol. Chem. — 1999. -Vol. 269. -P. 10551- 10558.

101. Friedman S. The role of cytokines in oncology / S. Friedman, G.Yamasaki, L.Wong //J. Biol. Chem.-1999.-Vol. 269.-P. 10551- 10558.

102. Futerman A. H. The complex life of simple sphingolipids / A.H. Futerman, Y.A. Hannun // EMBO Rep. 2004. - Vol. 5. - P. 2607 - 2613.

103. Fukuda. Distribution of sfingosine kinase activity in mouse tissues:; contribution of SPHK1 / Fukuda, Y.A. Kinara, Y. Igarasi // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol. 309. - P. 155 - 160.

104. Green D.R. Introduction: apoptosis in the immune system / D.R. Green, T.G. Cotter // Semin. Immunol. 1992. - Vol. 4, № 6. - P. 355 - 362.

105. Green D.R. Activation induced apoptosis in lymphocytes / D.R. Green, D.W. Scott // Curr. Opin. Immunol. - 1994. - Vol. 6, № 3. - P. 476 - 487.

106. Hakomori S. Functional role of glycosphingolipids in cell recognition and signaling / S. Hakomori, Y. Igarashi // J. Biochem. 1995. - Vol. 118.1. P. 1091-1103.

107. Hannun Y. A. Enzymes of sphingolipid metabolism: from modular to integrative signaling / Y.A. Hannun, C. Luberto, K.M. Argraves // Biochemystry. 2001. - Vol. 40. P. 4893 - 4903.

108. Hannun Y. A. Ceramide: an intracellular signal for apoptosis / Y. A. Hannun, L.M. Obeid // Trends Biochem. Sci. 1995. - Vol. 20, № 2.1. P. 73 77.

109. Hannun Y.A. Functions of sphingolipids and sphingolipid breakdown products in cellular regulation / Y.A. Hannun, R.M. Bell // Science. Vol. 243.-P. 500-506.

110. Hannun Y.A. Ceramide and the eukaryotic stress response / Y.A. Hannun, L.M. Obeid//Biochem. Soc. Trans. 1997. - № 25.-P. 1171-1175.

111. Hofmann K. Ceramide in apoptosis: does it really matter ? / K. Hofmann, V.M. Dixit // Trends Biochem. Sci. № 23. - P. 374 - 377.

112. Inversion of the intracellular Na+/ K+ ratio blocks apoptosis in vascular smooth muscle at the site upstream of caspase 3. / S.N. Orlov, N. Thorin -Trescases, S.V. Kotelevtsev // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274, № 23. - P. 16545- 16552.

113. Induction of apoptotic DNA fragmentation and cell death by natural ceramide // L. Ji, G. Zhang, S. Uematsu et. al. // FEBS Lett. 1995. - Vol. 398, №2.-P. 211-214.

114. Ionizing radiation acts on cellular membranes to generate ceramide and initiate apoptosis / A. Haimovits Fridman, C.C. Kan, D. Echleiter et al. // J. Exp. Med. - 1994.-Vol. 180.-P. 525 -534.

115. Identification of sphingomyelin turnover as an effector mechanism for the action of tumor necrosis factor alpha and interferon / M.Y. Kim, C. Linardie, L.M. Obeid, Y.A. Hannun // J. Biol. Chem. 1991. - Vol. 266, № 1. -P. 484 -489.

116. Jacobs L.S. Sphingolipids as mediators of effects of platelet derived growts factor in vascular smoots muscle cells / L.S. Jacobs, M. Kester // Amer. J.Physiol. - 1993.-Vol. 265, №3.-P. 740-747.

117. Jarvis W.D. Induction of apoptotic DNA damage and cell death by activation of the sphingomyelin pathway / W.D. Jarvis, R.N. Kolesnik, F.A. Fornari // Proc Nat. Acad. Sci. USA. 1994. - Vol. 91, № 1. - P. 73 -78.

118. Jayadev S. Role of ceramide in cell cycle arrest / S. Jayadev, B. Liu, A.E. Bielawska // J. Biol. Chem. 1995 Vol. 270, №5.-P. 2047 - 2052.

119. Jacobson M.D. Programmed cell death and bcl 2 protection is very low oxygen / M.D. Jacobson, M.C. Raff// Nature. - 1995. - Vol. 374, № 6525. - P. 814-816.

120. Korsmeyer S.J. Bcl 2: a repressor of lymphocyte death / S.J. Korsmeyer //Immunol. Today. - 1992. - Vol. 13,-P. 285-288.

121. Kolesnik R.N. Sphingomyelinse action inhibits phorbol ester induced differentiation of human promyelocytic leukemic (HL - 60) cells / R.N. Kolesnik // J. Biol. Chem. - 1989. - Vol. 264, № 13. - P. 7617 - 7623.

122. Knight C.R. Apoptosis: a potential role fos cytosolic transglutaminase and its importance in tumor progression / C.R. Knight, R.C. Rees, M. Griffin // Biochem. Biophys. Acta. 1991. - Vol. 1096, № 2. - P. 312 - 318.

123. Liscovith M. Lipid second messengers / M. Liscovitch, L.C. Cantley // Cell. 1994. Vol. 77. - P. 329 - 334.

124. Laytragoon Lewin N. Programmed cell death: the influence of CD40, CD95 (Fas or Apo 1) and their ligands / N. Laytragoon - lewin // Med. Oncol. -1998.-Vol. 15.-P. 15-19.

125. Medina O.P. Targeted liposomal delivery in cancer / O.P. Medina, Y. Zhu, K. Kairemo // Curr. Pharm. Des. 2004. - Vol. 10, № 24. - P. 2981 -2989.

126. Marchesini N. Acid and neutral sphingomyelinases: roles and mechanisms of regulations / N. Marchesini, Y.A. Hannun // Biochem. Cell Biol. 2004. -Vol. 82.-P. 27-44.

127. Mathias S. Characterization of ceramide activated protein kinase: stimulation by tumor necrosis factor alpha / S. Mathias, K.A. Dressier, R.N. Kolesnik // Proc. Nat. Acad. Sci. USA. - 1991. - Vol. 88, № 22. - P. 10009 -100031.

128. Nibbering C.P. Sphingomyelins of rat liver: biliary enrichment with molecular species containing 16: 0 fatty acids as compared to canalicular — enriched plasma membranes / C.P. Nibbering, M.C. Carey // J. Membr. Biol. -1999.-Vol. 167.-P. 165-171.

129. Nillson A. Absorbtion and lipoprotein transport of sphingomyelin / A. Nillson, Riu Dong Duan // J. Lipid Res. - 2006. Vol. 47, № 1. - P. 154 - 171.

130. Neutral ceramidase gene: role in regulating ceramide induced apoptosis / M.S. Choi, M.A. Anderson, Z. Zhang, D.B. Zimonjic, et al. // Gene. - 2003. -Vol. 315.-P. 113 -122.

131. Oberhammer F.A. Effect of three tumor promoters on the stability of hepatocyte cultures and apoptosis after transforming growth factor beta 1 / F.A. Oberhammer, H.M. Qin // Carcinogenesis. - 1995. - Vol. 16, № 6. - P. 1363- 1371.

132. P53 mediated cell death: relationship to cell cycle control / E. Yonish -Rounach, D. Grunwald, S. Wilder et al. // Mol. Cell Biol. - 1993. - Vol. 1, № 1, -P. 39-47.

133. Purification, localization and expression of human intestinal alkaline sphingomyelinase / R.D. Duan, Y. Cheng, G. Hansen at al. // J. Lipid Res. -2003. Vol. 44. - P. 1241 - 1250.

134. Packham G. с Мус and apoptosis/ G. Pachham, J.L. Cleveland // Biocem. Biophys. Acta. - 1995.-Vol. 1242, № 1.-P. 11-28.

135. Perry R.J. Molecular mechanisms and regulations of ceramide transport / R.J. Perry, N.D. Ridgway // Biochem. Biophys. Acta. 2005. - Vol. 1734. - P. 220-234.

136. Pushkareva M. Ceramide: an endogenous regulator of apoptosis and growth suppression / M. Pushkareva, L.M. Obeid, Y.A. Hannun // Immunol. Today. 1995. - Vol. 16, № 6. - P. 294 - 297.

137. Role of ceramide activated protein phosphatase in ceramide — mediated signal transduction / R.A.Wollf, R.T. Dobrowsky, A.Bielawska et. al. // J. Biol. Chem. - 1994. - Vol. 269, № 30. - P. 19605 - 19609.

138. Reed J.S. Bel 2 and the regulation of programmed cell death / J.S. Reed //J. Cell. Biol. - 1994. - Vol. 124, № 1. - P. 1 - 6.

139. Silins I. Sphingolipids suppress preneoplastic rat hepatocytes in vitro and in vivo /1. Silins, М/ Nordstand, J. Hogberg, U. Stenius // Carcinogenesis. -2003.- Vol. 24, №6.-P. 1077- 1083.

140. Siskind L.G. Ceramide forms channels in mitochondrial outer membranes at physiologically relevant concentrations // L.G. Siskind, R.N. Kolesnick, M. Colombini // Mitochondrion. 2006. - Vol. 6, № 3. - P. 118 - 125.

141. Sphingomyelin protects against apoptosis and hyperproliferation induced by deoxycholate: potential implications for colon cancer / A. Mocheta, P. Ponticasa, K.J. van Erpecum et al. // Dig. Dis. Sci. 2003. - Vol. 48. - P. 1094 -1101.

142. Schmels E.M. Sphingolipids in chemoprevention of colon cancer / E.M. Schmels // Front. Biosci. 2004. - Vol. 9. - P. 2632 - 2639.

143. Sachs L. Control of the programmed cell death in normal and leukemic cells: new implications for therapy // Blood. 1993. - Vol. 82, № 1. - P. 15 -21.

144. Savill J. Apoptosis in disease / J. Savill // Eur. J. Clin. Invest. 1994. -Vol. 24,№ 11.-P. 715-723.

145. Schwarze M.M. Prevention of myeloma cell apoptosis by bcl — 2 expression or interleukin 6 mediated up - regulation of bcl - x / M.M. Schwarze, R.G. Hawley // Cancer Res. - 1995. - Vol. 55, № 11. - P. 2262 -2265.

146. Shultse S. The role of diacylglicerol and ceramide in tumor necrosis factor and interleukin 1 signal transductions / S. Shultse, T. Machleidt, M. Kronke // J.Leukoc.Biol. - 1994. - Vol. 56, № 5. - P. 533 - 541.

147. Soluble Fas/APO 1 in tumor cells: a potential regulator of apoptosis? /L.

148. B. Owen Schaub, L.S. Angelo, R. Radinsky et al. // Cancer Lett. -1995.-Vol. 94, № l.-P. 1-8.

149. Spiegel S. Signal transduction through lipid second messengers / S. Spiegel, D. Foster, R;. Kolesnick // Curr.: Opinion Cell Biol. 1996. - № 8. - P. 159-167.

150. Sphingosine stimulates cellular proliferation by the protein kinase С — independent pathway / N. Zhang, N.E. Backley, K. Gibson, S. Spiegel // J. Biol. Chem.- 1990.-Vol. 346, №2.-P. 76-81.

151. Story M. Signal transduction during apoptosis: implication for cancer therapy / M. Story, R. Kodum // Front Biosci. 1998. - Vol. 3. - P. 365 - 375.

152. Schultse Hermann R. Apoptosis in the liver and its role hepatocarcinogenesis / R. Schultse - Hermann, W. Bursch, Low - Baselli // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 1991. - Vol. 111. - P. 339 - 348.

153. Sampson A.P. Cellular signaling in cell death /А. Sampson, D.A. Spencer,

154. C.P. Green // J. Clin. Pharmacol. 1990. - Vol. 30. - P. 861-869.0 to

155. Thorgeirsson S.S. Dysregulation of apoptosis in hepatocellular carcinoma / S.S. Thorgeirsson, T. Teramoto // Semin. Liver Diss. 1998. - Vol. 18. - P. 115-122.

156. The role of cytokines in oncology / W. Lange, W. Brugger, F.M. Rosental, et al. // Intern. J. Cell. Clon. -1991. Vol. 9, № 4. - P. 252 - 273.

157. Trofta P.P. Cytocynes: an owerviev / P.P. Trofta // Amer. J. Reprod. Immunol. 1991.-Vol. 25-P. 131-141.

158. Thompson E. A. Apoptosis in the pathogenesis and treatment of disease / E.A. Thompson // Science. 1995. - Vol. 267, № 5203. - P. 1456 - 1462.

159. The bcl 2 oncogene: apoptosis and neoplasma / TJ. McDonnel, M.C. Marin, B. Hsu et al. // Rad. Res. - 1993. - Vol. 186, № 3. -P. 307 - 312.

160. Wells A. Apoptosis, oncosis and necrosis / A. Wells // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1999. - Vol. 31. - P. 637-643.