Программированная гибель клеток в механизмах циторедуктивной терапии опухолей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, доктор медицинских наук Блохин, Дмитрий Юрьевич

• Блохин, Дмитрий Юрьевич
• доктор медицинских наук
• 2004

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Блохин, Дмитрий Юрьевич

Список использованных сокращений

Введение

ЧАСТЬ I. ДИНАМИЧЕСКАЯ СТРУКТУРА ХРОМАТИНА

Глава 1. Структура и функции клеточного ядра (Обзор литературы)

1.1. Молекулярный и супрамолекулярныеуровни организации ДНК в 18 клетках эукариот

1.1.1. Первичная структура ДНК

1.1.2. Вторичная структура ДНК

1.1.3. Структуры ДНК высших порядков организации.

1.2. Суперспиральная конформация кольцевых молекул ДНК.

1.3. Суперспиральная ДНК клеточного ядра эукариот.

Глава 2. Результаты собственных исследований

2.1. Капиллярная эластовискозиметрия нуклеоидов эукариот

2.2. Супрамолекулярная организация нуклеоидов эукариот

2.3. Прочно связанные с ДНК «остаточные» белки.

2.4. Белковый состав ядерного матрикса в клетках различных 63 тканей.

2.5. Изменение супрамолекулярного комплекса ДНК под действием 73 противоопухолевых химиотерапевтических препаратов.

Резюме. 80 ЧАСТЬ II. ПРОГРАММИРОВАННАЯ ГИБЕЛЬ ОПУХОЛЕВЫХ КЛЕТОК ПРИ 84 ТЕРАПЕВТИЧЕСКОМ ЛЕЧЕНИИ ОНКОЛОГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

Глава 3. Программированная гибель клеток (Обзор литературы)

3.1. Программированная гибель клеток

3.2. Каспазы

3.3. Рецепторы смерти

3.4. Роль митохондрий

3.5. Роль факторов роста

3.6. Гранзимы

3.7. Белки теплового шока

3.8. Транскрипционные факторы NF-кВ и р

3.9. Протеасом ы

3.10. Другие сигнальные системы гибели/выживания клетки

3.11. Программированная гибель клеток в механизмах циторедуктивной 113 терапии

Глава 4. Материалы и методы исследования

4.1. Материалы.

4.1.1. Клеточные линии и культуры

4.1.2. Противоопухолевые препараты и цитотоксины.

4.1.3. Моноклональные антитела

4.1.4. Реагенты и наборы реактивов

4.2. Методы исследования.

4.2.1. Реакция поверхностной иммунофлуоресценции (РИФ).

4.2.2. Инкубация клеток с противоопухолевыми препаратами in vitro.

4.2.3. Определение доли гиподиплоидных клеток.

4.2.4. Выявление апоптотических клеток методом TUNEL.

4.2.5. Выявление апоптозных клеток методом прижизненного двойного 127 окрашивания Аннексином V-FITC и PI

4.2.6. Проточная цитофлюориметрия.

4.2.7. МТТ- тест пролиферативной активности клеток

4.2.8. Определение половинной ингибирующей концентрации (IC50) 129 противоопухолевых препаратов и цитотоксинов

4.2.9. Получение F(ab')2 фрагментов МКА.

4.2.10. Иммуноблоттинг

4.2.11. Определение активации каспазы-3.

4.2.12. Конкурентная гибридизация кДНК на экспрессионных ДНК- 131 микрочипах.

4.2.13. Анализ протеинового профиля.

4.2.14. Световая светпопольная и фазовоконтрастная микроскопия.

4.2.15. Флюоресцентная микроскопия.

4.2.16. Изготовление иммуномагнитного anmu-Fas препарата

Глава 5. Рецепторно-лигандный и лекарственно-индуцированный апоптоз.

5.1. Характеристика методов регистрации апоптоза.

5.1.1. Гиподиплоидные клетки

5.1.2. Регистрация накопления нитевых разрывов ДНК (TUNEL)

5.1.3. Флиппинг фосфатидилсерина клеточной мембраны

5.1.4. Сопоставление результатов оценки субпопуляции погибающих 144 клеток, полученных разными методами.

5.2. Индукция апоптоза МКА anmu-CD95, TRAIL и 145 противоопухолевыми препаратами.

5.3. Блокирование лекарственно-индуцированного апоптоза F(ab ')2 149 фрагментами anmu-CD95.

5.4. Экспрессия CD95L на поверхности клеток Jurkat после инкубации с 152 противоопухолевыми препаратами

Глава 6. Получение С095-негативных клеточных линий.

6.1. Деплеция С095-позитивной популяции Т-лимфобластных клеток

6.2. Лекарственная индукция апоптоза клеток линии Jurkat/wt и А4.

Глава 7. Сравнительные характеристики клеток двух родственных линий.

7.1. Сравнительный анализ транскрипционной активности генома 168 клеток обеих линий

7.2. Регуляция экспрессии отдельных генов при рецепторно-лигандной 178 индукции апоптоза.

7.3. Протеомный профиль клеток обеих линий.

7.4. Состояние про-и антиапоптогенных сигнальных путей в клетках 183 двух линий.

7.5. Возможная роль CD73 в антиапоптогенной программе клеток 186 линии А4.

Глава 8. Лекарственная чувствительность двух родственных клеточных линий in 191 vitro.

8.1. Сравнительные спектры чувствительности клеток к 191 противоопухолевым лекарственным средствам.

8.2. Анализ клеточных популяций двух линий, переживших 192 цитотоксическую терапию.

8.3. Возможные причины расхождений результатов оценки 206 цитотоксической эффективности.

Часть Ш. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Программированная гибель клеток в механизмах циторедуктивной терапии опухолей»

Актуальность темы

Химиотерапия является основным, а при некоторых нозологических формах и стадиях распространения - единственным методом лечения онкологических заболеваний. Несмотря на богатый арсенал высоко активных противоопухолевых химиотерапевтических препаратов, эффективность лечения ограничивается их не абсолютной селективностью в отношении опухолевых клеток, с чем связано побочное токсическое действие циторедуктивной терапии на клетки нормальных тканей, а также лекарственной резистентностью опухолей.

Понимание молекулярных механизмов цитотоксичности противоопухолевой терапии, возможности их реализации в клетках конкретной опухоли и нормальных (в том числе пролиферирующих) тканей лежат в основе повышения эффективности и избирательности существующих консервативных методов лечения злокачественных новообразований, а также рационального поиска новых соединений с потенциальной противоопухолевой активностью.

Большинство противоопухолевых препаратов, используемых в современной онкологической клинике, были отобраны в результате эмпирического скрининга соединений, избирательно или преимущественно убивающих пролиферирующие опухолевые клетки. До недавнего времени большая часть исследований механизмов действия противоопухолевых лекарств относилась к поиску их внутриклеточных мишеней, изучению природы и характера повреждений, индуцированных взаимодействием препарата с мишенью, а также механизмов резистентности, предотвращающих такое взаимодействие.

Традиционно цитотоксический эффект подавляющего большинства противоопухолевых лекарств связывали с индукцией не совместимых с жизнью необратимых химических повреждений биомакромолекул клеток-мишеней: в первую очередь нуклеиновых кислот и белков. Так, доказано существование коррелятивной связи между количеством индуцированных биомолекулярных повреждений (разрывов молекулы ДНК, внутри- и межнитевых сшивок, сшивок «ДНК-белок» и др.) и цитотоксической эффективностью отдельных противоопухолевых препаратов. Изучению биохимических и молекулярнобиологических аспектов взаимодействия противоопухолевых лекарств с живыми системами (от отдельных биомакромолекул и их супрамолекулярных ансамблей, субклеточных органелл, изолированных клеток до органов и тканей, а также организма в целом) посвящено огромное количество работ.

Вместе с тем, разными исследователями, на разных объектах, с использованием препаратов различной природы и механизма действия обнаруживались факты, которые не могли быть интерпретированы в рамках подобного понимания механизмов цитотоксичности. Попытки поиска новых внутриклеточных мишеней химиотерапевтических агентов значительно продвинули фундаментальные представления о молекулярной структуре и биологических функциях субклеточных органелл, в первую очередь - клеточного ядра, но, вместе с тем, не дали исчерпывающего объяснения механизмов цитотоксичности противоопухолевых лекарств.

Объяснение многим обнаруженным фактам было найдено в связи с интенсивным изучением в последнее десятилетие феномена программированной гибели клеток (111 К). Открытый в начале 70-х годов прошлого века процесс последовательного саморазрушения пораженных ионизирующим облучением тимоцитов долгое время рассматривался исключительно как уникальный механизм интерфазной гибели облученных иммунокомпетентных клеток лимфоидной ткани. Позднее было продемонстрировано глобальное значение процесса программированной гибели клеток для онто- и филогенеза, возникновения органной и тканевой специфичности, процессов эволюции, дифференцировки, специфической реакции на внешние воздействия и др. Только к концу 80-х - началу 90-х годов XX века начали появляться работы о роли ПКГ в реализации цитотоксического эффекта противоопухолевых химиотерапевтических препаратов и ионизирующего облучения на нормальные и опухолевые клетки в процессе специфической терапии онкологических заболеваний. Количество научных публикаций по проблеме лекарственной индукции ПГК в 90-е годы XX века росло лавинообразно, и конец второго тысячелетия отмечен серией аналитических обзоров, суммирующих результаты этих исследований. В частности, в статье

С.Кауфмана и У.Ирншау* приведена таблица лекарственных препаратов, являющихся индукторами 111 К. В нее вошли противоопухолевые соединения практически всех классов, начиная от наиболее «древних» препаратов (эмбихин, 5-фторурацил) до самых современных и перспективных лекарств (гемзар, флудара, паклитаксел, гливек, ритуксимаб, TRAIL). Таким образом, начала складываться концепция, согласно которой 111 К - это активная реакция клеток на воздействие факторов, вызывающих клеточный, в том числе генотоксический, стресс.

Вместе с тем, до сих пор нет единого мнения о роли ПГК в суммарном цитотоксическом эффекте консервативных методов лечения онкологических заболеваний - химио-, радио- и биотерапии. Сохраняет актуальность вопрос, является ли ПГК тем внутриклеточным механизмом, который исполняет процесс самоликвидации поврежденной цитотоксическими воздействиями клетки и определяет в конечном итоге эффективность специфической противоопухолевой терапии.

По современным представлениям, ПГК, часто отождествляемая с апоптозом (хотя последний является лишь частным морфологическим проявлением 111 К), протекает минимум в три стадии: стадия «индукции сигнала», стадия «принятия решения», стадия «исполнения приговора». Четвертой стадией процесса, не имеющей отношения собственно к ПГК, т.е. к исполнению клеткой суицидного акта, но необходимой для утилизации продуктов клеточной деградации, является фагоцитоз клеточных остатков тканевыми макрофагами - стадия «очищения».

Первая стадия обеспечивается возбуждением специфического сенсора. Роль сенсора может исполнять как внутриклеточная молекула, так и внеклеточный домен трансмембранного белка суперсемейства TNF-подобных рецепторов (TNFR1, TNFR2, Fas/APO-l/CD95, АРО-2, АРО-3 и др.) или других рецепторных молекул. Результатом возбуждения соответствующего сенсора является активация каскада последовательных Kaufmann S.H., Earnshaw W.C. Induction of apoptosis by cancer chemotherapy. // Exp. Cell Res.- 2000,- 256.- P. 42-49. ферментативных реакций внутриклеточной передачи и анализа сигнала 111 К. Эта стадия может реализоваться различными путями, с вовлечением разнообразных компонентов каскада. Ее завершенность или, наоборот, блокировка зависят от баланса про- и антиапопто генных факторов, так называемого «клеточного контекста», т.е. от гистогенетических и морфо-функциональных особенностей клетки, ее физиологического состояния, обратимости и интенсивности индуцирующего 111 К стимула, его соответствия «сигналам выживания», и т.д. Таким образом, первичный сигнал к 111 К может быть отменен или заблокирован на стадии «принятия решения». Если трансдукция сигнала не прервана, то результатом каскада является активация эффекторов 111 К - киллерных каспаз, эндонуклеаз и пр., что знаменует начало последней, необратимой и быстрой стадии «исполнения приговора». Активные киллерные каспазы атакуют так называемые ключевые субстраты, в результате чего происходит прогрессивное ферментативное расщепление компонентов клеточного ядра (фрагментация ДНК, ламин ядерной стенки, ключевых ферментов, белков цитоскелета и ядерного матрикса) и органелл; ядро, а затем и вся клетка, распадается на морфологически обособленные фрагменты, окруженные мембраной. Деплеция апоптотических клеток не сопровождается излиянием содержимого их цитозоля в межклеточную среду и не вызывает воспалительной реакции.

Последовательность внутриклеточных событий при возникновении повреждений биомакромолекул представляется следующей. Химическая модификация первичного акцептора (молекулы ДНК, ключевого фермента, субстрата перекисного окисления и др.) воспринимается сенсорной молекулой сигнального пути 111 К, что приводит к остановке деления клетки в одной из «сверочных точек» клеточного цикла и попытке репарации повреждений. При несостоятельности, незавершенности или недостаточности репаративных процессов происходит активация 111 К. Этот механизм цитотоксичности может реализоваться при физическом (ионизирующее и УФ-облучение, тепловой шок и др.), химическом (алкилирующие соединения, ингибиторы топоизомераз, противоопухолевые антибиотики, индукторы оксидативного стресса) и биологическом (функциональные аналоги природных лигандов TNF-подобных рецепторов, дефицит факторов роста, утрата межклеточных контактов) поражении клеток-мишеней. Структурные повреждения или дефицит отдельных компонентов сигнальных путей ПКГ затрудняют проведение сигнала смерти вплоть до его полной блокировки.

Логично предположить, что потенциальная способность клетки-мишени к восприятию сигнала ПГК, полноценность путей его трансдукции и наличие работоспособного эффекторного звена являются необходимыми условиями суицидного клеточного ответа на цитотоксическое воздействие. Напротив, неспособность клетки-мишени к реализации ПГК должна сопровождаться ее резистентностью к цитотоксическому стрессу.

Такое же заключение следует из большого количества исследований, выполненных как с использованием клинического материала, так и с использованием генетически модифицированных клеточных линий. Ряд белков - компонентов цепей внутриклеточной трансдукции сигнала ПГК (р53, bcl-2, bcl-xl, bax, XIAP, SMAC, CD95 и др.) - могут являться биологическими маркерами характера течения опухолевого процесса, чувствительности к специфической терапии и общего прогноза заболевания.

Исследования основных механизмов и закономерностей формирования клеточного ответа на применение средств циторедуктивной противоопухолевой терапии, а также оценка роли репрессии ПГК в становлении фенотипа множественной лекарственной устойчивости являются актуальными проблемами современной онкологии, сочетающими фундаментальные и прикладные аспекты исследования. Экспериментальное доказательство теоретических положений того, что механизм цитотоксического действия противоопухолевых лекарств реализуется путем активации ими программированной гибели клеток-мишеней, а спонтанная или индуцированная репрессия ПГК сопровождается закономерным снижением лекарственной чувствительности опухолевых клеток, может быть квалифицировано как новое крупное научное достижение в области медицинской и биологической науки.

Цель работы: комплексное изучение роли программированной гибели клеток-мишеней в механизмах циторедуктивной противоопухолевой терапии.

Задачи:

1. Разработать методические подходы и экспериментальные модели интерфазного хроматина для исследований формирования клеточного ответа на цитотоксическое воздействие.

2. Определить характер и динамику формирования структурных изменений хроматина клеток перевиваемых опухолевых штаммов мышей при циторедуктивной химио- и радиотерапии in vivo.

3. Проследить динамику индукции и развития программированной гибели опухолевых клеток при действии противоопухолевых химиотерапевтических препаратов, используя комплекс методов регистрации различных стадий 111 К.

4. Исследовать особенности и динамику рецепторно-лигандной индукции апоптоза рецептор-позитивных опухолевых клеток, используя специфическую активацию рецептора смерти CD95 агонистическими моноклональными антителами (аМКА) анти-С095.

5. Получить ряд стабильных С095-негативных клеточных линий человека, используя прием хронической стимуляции рецептора CD95 аМКА анти-С095.

6. Исследовать возможность и особенности рецепторно-лигандной и лекарственной индукции 111 К клеток полученных С095-негативных линий.

7. Провести сравнительный морфо-функциональный, биохимический и генетический анализ полученных С095-негативных клеток.

8. Определить спектры лекарственной чувствительности полученных С095-негативных клеток и их родительских предшественников «дикого типа».

9. Сравнить характер клеточного ответа на проведенное «лечение» и проследить динамику репопуляции клеточных культур Jurkat и А4, используя равноценные по биологической эффективности для клеток каждой линии концентрации противоопухолевых химиотерапевтических средств.

Научная новизна исследований.

На момент начала выполнения работы наши представления о механизмах цитотоксического действия противоопухолевых препаратов ограничивались суммой знаний о молекулярных мишенях различных агентов. Разработан оригинальный методический подход к изучению супрамолекулярной структуры ядра и ее изменений в живых нормальных и опухолевых клетках при их инкубации с цитотоксинами. Обнаружены ранние изменения структуры хроматина опухолевых клеток, возникающие в процессе монотерапии in vivo и in vitro алкилирующими препаратами, противоопухолевыми антибиотиками, комплексными соединениями платины. Изменения структуры хроматина регистрируются при инкубации с противоопухолевыми соединениями только живых опухолевых клеток. Эти изменения не наблюдаются при действии препаратов на частично депротеинизированные клеточные ядра.

На двух клеточных линиях Т-лимфолейкоза человека - Jurkat и Н-9 - показана лекарственная и рецепторно-лигандная индукция ПГК, продемонстрирована эффективность in vitro специфической биотерапевтической деплеции субпопуляции С095+-клеток с использованием агонистических МКА к антигену CD95 (клон IPO-4). Впервые обнаружена потенциальная опасность развития в результате подобных воздействий множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток, которую следует учитывать при разработке новых средств биотерапии.

Впервые методом иммобилизации на ферросиликатных микрочастицах неагонистических aHTH-CD95 МКА (клон ICCM60) получен иммуномагнитный биопрепарат, эффективно индуцирующий образование сигнального комплекса DISC в С095+-клетках линий Jurkat и Н-9.

Впервые методом С095-индуктивной селекции получена уникальная С095-негативная линия А4, клетки которой, в отличие от клеток родительской линии дикого типа Jurkat/wt, не реализуют ПГК при различных воздействиях (резистентны к цис-ДЦП, циклоплатаму, адриамицину, этопозиду, стауроспорину, циклогексимиду, менадиону, перекиси водорода, рентгеновскому и УФ-облучению, дефициту факторов роста, агонистическим МКА к CD95, цитокинам TRAIL и TNFa). Резистентность клеток линии А4 не связана с мутацией гена р53 или с гиперэкспрессией белков Вс1-2 и Bcl-XL. Полученный аналогичным методом CD95-негативный клон линии Н-9 явился резистентным к С095-индуцированной ПГК, но в полной мере сохранил чувствительность к химиотерапевтическим противоопухолевым препаратам, характерную для родительской линии «дикого типа».

Впервые получена библиотека кДНК интактных клеток А4; методом конкурентной гибридизации с использованием ДНК-микрочипов (AfFymetrix) проведен анализ экспрессии этими клетками более двадцати тысяч генов и их транскрипционных вариантов в сравнении с интактными клетками родительской линии Jurkat/wt. Показано, что уровень транскрипционной экспрессии генов основных компонентов каскадов сигнальных путей в клетках обеих линий идентичен.

Впервые получены библиотеки кДНК TRAIL-стимулированных к индукции ПГК клеток А4 и Jurkat/wt; методом конкурентной гибридизации с кДНК соответствующих интактных клеток показано, что набор максимально активируемых и максимально репрессируемых такой стимуляцией генов в клетках обеих линий идентичен.

Впервые выполнен сравнительный анализ белкового состава клеток А4 и Jurkat/wt методом 2D IEF-NEPHGE, являющимся первым этапом протеомного анализа. Обнаружено, что при большой степени сходства протеиновых профилей клеток обеих линий, свидетельствующей о значительной степени их морфо-функционального и метаболического родства, имеются заметные различия в уровне экспрессии отдельных белков.

Впервые сравнительный анализ экспрессии компонентов сигнальных путей выявил гиперэкспрессию в клетках А4 белка теплового шока HSP-90, а также экспрессию на поверхности клеток функционально активного мембраносвязанного энзима 5'-эктонуклеотидазы (CD73) и полное подавление экспрессии молекул адгезии ICAM-3 (CD50).

Впервые исследован спектр лекарственной чувствительности клеток линии А4 в сравнении с родительской линией Jurkat/wt. Показан фенотип множественной лекарственной устойчивости (МЛУ) этих клеток, коррелирующий с резистентностью к индукции ПГК.

Научно-практическая ценность.

В результате исследований показано, что механизмы циторедуктивного действия специфической противоопухолевой терапии с применением большинства лекарственных средств реализуются путем активации собственной программы гибели клеток-мишеней. Репрессия программы клеточной гибели сопровождается формированием у клеток фенотипа МЛУ, существенно ограничивающим возможности консервативных методов лечения онкологических заболеваний. Такая ситуация является следствием несовершенства используемых до настоящего времени систем отбора синтетических и природных соединений с потенциальной противоопухолевой активностью: активные лекарственные вещества, отобранные в клеточных системах с функционирующей программой клеточной гибели, оказываются не эффективными при ее репрессии.

Полученная в результате исследований мультирезистентная линия А4 Т-лимфобластного лейкоза человека депонирована в Российской коллекции клеточных культур (Институт цитологии РАН, С.-Петербург) под номером РККК (П) 682Д и может быть использована в качестве прототипа скрининговой системы с подавленной функцией 111 К для отбора потенциально противоопухолевых соединений, специфическая активность которых не связана с реализацией 111 К.

Продемонстрировано, что устойчивая репрессия опухолевыми клетками 111К может формироваться без применения средств химиотерапии, как одно из проявлений опухолевой прогрессии, в том числе под действием медиаторов неспецифического противоопухолевого иммунитета.

Положения, выносимые на защиту

Цитотоксическое действие противоопухолевых препаратов связано с активацией программы гибели клеток-мишеней.

• Повреждение или репрессия 111 К ведет к становлению фенотипа мультирезистентности клеток к индукторам 111 К, сопровождающимся множественной лекарственной устойчивостью.

• Репрессия 111 К может происходить без участия средств химиотерапии как проявление опухолевой прогрессии.

• При репрессии функции 111К возможности современной циторедуктивной терапии опухолей оказываются исчерпанными. • Такое положение является следствием применяющейся системы отбора противоопухолевых препаратов: активные в отношении клеток-мишеней с функционирующей системой 111 К, они оказываются не эффективными при репрессии суицидной программы.

Соответствие работы плану Научно-исследовательских работ Института.

На всех этапах исследования диссертационная работа выполнялась в рамках основного плана НИР НИИ ЭДиТО ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, в частности, тем РАМН «Поиск новых противоопухолевых агентов , доклиническое изучение их специфической активности и механизма действия», Госрегистрация № 01990011388, шифр № 510 и "Изучение действия некоторых химических и физических факторов и их сочетаний на жизнедеятельность, состав и кинетику популяций опухолевых и нормальных клеток», Госрегистрация № 01200012562, шифр 535.

Апробация результатов исследования.

Апробация диссертации состоялась 20 мая 2004 г. на совместной научной конференции лаборатории фармакоцитокинетики, лаборатории экспериментальной диагностики и биотерапии опухолей, лаборатории биохимической фармакологии, лаборатории экспериментальной терапии метастазов, лаборатории лучевых методов лечения опухолей, лаборатории комбинированной терапии опухолей, лаборатории медицинской биотехнологии НИИ ЭДиТО ГУ РОЩ РАМН, отдела клинической иммунологии НИИ КО ГУ РОНЦ РАМН.

Основные положения диссертации опубликованы в печатных работах, были представлены в качестве стендовых сообщений и докладов:

11-th Nuclear Workshop, Sept. 18-23, 1989, Suzdal, USSR; 15-th Int. Cancer Congress, Aug. 16-22, 1990, Hamburg, Germany; X Всесоюзн. симп. «Структура и функции клеточного ядра», 10-14 окт., 1990, Гродно, СССР; 7-th NCI-EORTC Symp. on new drugs in cancer therapy, March 17-20,

1992, Amsterdam, Netherlands; I Междунар. конф. «Иммунодиагностика и иммунотерапия»,

1995, Витебск, Беларусь; 6-th Int. Workshop on Human Leukocyte Differentiation Antigens,

1996, UK; AACR Spec. Conf., Bolton Landing (Lake George), Oct. 19-23, 1996, New York, USA; 7-th and 8-th Int. Congr. on anti-cancer treatment, Feb. 3-6, 1997 and 1998, Paris, France; Int. Conf. on Hematol. malignancies and high-dose chemotherapy, 1997, Hamburg, Germany; V Росс. Нац. конгр. «Человек и лекарство», 21-25 апр. 1998, Москва, Россия; 10-th NCI-EORTC symp. on new drugs in cancer therapy, June 16-19, 1998, Amsterdam, Netherlands; 5 Всеросс. съезд онкологов «Высокие технологии в онкологии», 4-7 окт. 2000, Казань, Россия; Конф. «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге-2001», 21-25 мая 2001, С.-Петербург, Россия; 18-th Int. Symp. on Mol. aspects of Chemotherapy, Sept. 5-9, 2001, Gdansk, Poland; 4-th World Meeting ADRITELF/APGI/APV, Florence, Italy, April 8-11, 2002; 10-й Междунар. Плеская конф. по магнитным жидкостям, сент. 2002, Плес, Россия; 3-rd Eur. Workshop on Cell Death. Feb. 23-28, 2002, Salobrena, Spain; 18-th UICC Int. Cancer Congr., June 30 - July 5, 2002, Oslo, Norway; 10th Euroconf. on Apoptosis "Charming to Death", Oct. 11-13, 2002, Paris, France; Мед.-фарм. форум, 29 окт.-2 нояб., 2002, Москва, Россия; I Симп. «Применение биомагнитных носителей в медицине», 19-20 нояб. 2002, Москва, Россия; 4-th Int. Conf. "Scientific and clinical applications of magnetic carriers", May 9-11, 2002, Tallahassee, Florida, USA; Miami Nature Biotech. Winter Symp., Feb. 1-5, 2003, Miami, Florida, USA; 5-th Int. Workshop on Adv. Genomics, June 26-27, 2003, Yokohama, Japan; Int. Conf. on Applied Genomics 9-th ESACP/16-th ISDQP Meeting, Oct. 1-4, 2003, Amsterdam, Netherlands; Int. Symp. "New Horizons in Mol. Sciences and Systems: An Integrated Approach", Oct. 16-18, 2003, Okinawa, Japan; 2-я и 3-я Всеросс. Конф. «Отечественные противоопухолевые препараты», март, 2003 и 2004, Москва, Россия.

Объем и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 275 стр. машинописного текста. Диссертация состоит из введения, трех тематических частей, общего заключения, выводов и списка цитированной литературы. Иллюстрации - 77 рисунков и 19 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Блохин, Дмитрий Юрьевич

Выводы:

1. Препараты частично депротеинизированных клеточных ядер, сохраняющие белки ядерного матрикса, ламины ядерной стенки и ДНК в форме суперспирализованных квазициркулярных доменов являются адекватной моделью интерфазного хроматина, пригодной для оценки характера молекулярных повреждений и формирования клеточного ответа на применение средств цитотоксической терапии.

2. Наиболее ранним изменением структуры хроматина клеток перевиваемых лейкозов мышей Р388 и L-1210 является его декомпактизация, приводящая к увеличению гидродинамического радиуса остаточных клеточных ядер, и связанная с частичной релаксацией суперспирализованных доменов ДНК. Позднее наблюдаются изменения белкового состава ядерного матрикса и прогрессирующая утрата молекулой ДНК квазициркулярной структуры. Эти изменения структуры хроматина происходят при действии противоопухолевых препаратов на интактные опухолевые клетки, но не на изолированные клеточные ядра.

3. Противоопухолевые препараты и рентгеновское облучение в экспериментах in vitro индуцируют гибель клеток Т-лимфобластной линии Jurkat с морфо-физиологическими признаками апоптоза. Появление опухолевых клеток с признаками раннего апоптоза регистрируется уже через 3 - 6 ч их инкубации с 10"6 - 10'5 М каждого из препаратов. Скорость накопления в популяции апоптотически погибающих клеток пропорциональна концентрации препарата и времени инкубации.

4. Моноклональные антитела (МКА) к экстрацеллюлярному домену рецептора смерти CD95/Fas/APO-l (клон IPO-4, изотип IgM) эффективно индуцируют апоптоз клеток Тлимфобластных линий Jurkat и Н9. Связывание МКА с рецепторами клеток сопровождается кластеризацией и кэппингом рецепторов, блеббингом клеточной стенки, экстернализацией на поверхность клеток молекул фосфатидилсерина, активацией каспазы-3 и прогрессирующей деградацией ДНК.

5. МКА ГРО-4 оказывают выраженное цитотоксическое действие на антиген-позитивные клетки линий Jurkat и Н9, значительно превосходя по эффективности все исследованные противоопухолевые препараты: IC50 для МКА IPO-4 составляет 2-5 х 10"11 М. Результатом применения данных МКА является полная деплеция антиген-позитивных клеток из клеточной популяции, в связи с чем подобные агонистические МКА могут рассматриваться как биопрепараты с противоопухолевой активностью.

6. Полученная в результате хронической стимуляции рецептора смерти CD95 клеток Jurkat/wt клональная линия А4 сохраняет морфологическое, иммунофенотипическое, цитокинетическое сходство с родительской линией; клетки обеих линий имеют сходный протеиновый профиль и экспрессионную активность генома. Вместе с тем клетки линии А4 приобрели практически абсолютную резистентность к индукции апоптоза как лигандами рецепторов смерти (TRAIL, TNF-a), так и противоопухолевыми цитотоксинами (доксорубицином, этопозидом, ДДП, циклоплатамом, стауроспорином), индукторами оксидативного стресса (Н2О2, менадионом), рентгеновским и УФ-облучением. Резистентность клеток А4 к индукции апоптоза не связана с гиперэкспрессией антиапогггогенных белков Вс1-2 и Bcl-XL или мутацией гена проапоптогенного белка р53. Компонентами антиапоптогенной программы клеток А4 могут являться гиперэкспрессированные в них белки теплового шока HSP-90 и мембраносвязанный фермент 5'-эктонуклеотидаза.

7. В прямом цитостатическом тесте (МТТ) в сравнении с родительской линией Jurkat/wt линия А4 оказалась в 10-200 раз более устойчивой к противоопухолевым препаратам доксорубицину, идарубицину, этопозиду, ДЦП, иринотекану, метотрексату), циклогексимиду, ингибитору топоизомеразы I бисбензимиду Н-33342, аналогу ребеккамицина ЛХС-1006, что соответствует фенотипу ее множественной лекарственной устойчивости.

8. Появление опухолевого клона с репрессией функции 111 К, прямо коррелирующей с формированием фенотипа множественной лекарственной устойчивости, может являться следствием прогрессии опухоли, а также сопровождать применение в целях биотерапии опухолей агонистических МКА к рецептору смерти.

9. Противоопухолевые химиотерапевтические препараты, отобранные в результате скрининга химических и природных соединений в клеточных системах с функционирующей программой апоптоза, оказываются не эффективными в отношении опухолевых клеток с репрессированной программой гибели.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В заключение изложения материалов собственных исследований хотелось бы провести параллель между обнаруженными нами закономерностями и общебиологическим представлением о возникновении и прогрессии злокачественных опухолей, о роли ПГК в этих процессах.

В организме взрослого здорового человека ежедневно образуется около 100 тысяч трансформированных клеток (по разным оценкам это число незначительно варьирует) [334, 342]. Опухолевая трансформация приводит к репродуктивной иммортализации ее возможных потомков, при которой клеточный клон перестает подчиняться «лимиту Хейфлика» (нормальные клетки способны осуществить не более 50 - 60 делений, после чего необратимо утрачивают способность к репродукции, но еще некоторое время сохраняют жизнеспособность).

Причиной опухолевой трансформации, как принято считать в последнее десятилетие, является накопление в одной клетке некоторого критического количества соматических мутаций (важно, что речь идет не о каких-то определенных мутациях, а о комбинации из нескольких наиболее вероятных). Предсуществование терминальных мутаций, затрагивающих протоонкогены, повышает вероятность и, соответственно, увеличивает скорость набора этого критического количества, в связи с чем возрастает риск развития злокачественной опухоли в раннем возрасте.

Данная концепция объединила аргументы сторонников вирусной, химической и радиационной теорий канцерогенеза: действительно, каждый из приведенных факторов является мутагенным, в связи с чем (с точки зрения конечного результата) нет принципиальной разницы в природе возникновения тех или иных соматических мутаций. В то же время, подавляющее большинство трансформированных клеток (правильнее сказать -все, за некоторым редким исключением) подлежит элиминации, и лишь единицам из них может представиться возможность положить начало опухолевому клону. Несмотря на ежедневное возникновение около ста тысяч трансформированных клеток, образование злокачественной опухоли происходит только у некоторых людей (в течение всей жизни); формирование двух независимых новообразований одновременно - достаточно редкое клинически наблюдаемое событие; появление трех и более опухолей различного гистогенетического происхождения в одном организме в одно и то же время относится к казуистическим случаям.

Куда же деваются трансформированные, потенциально опухолевые клетки? Господствующая сегодня теория канцерогенеза предполагает их элиминацию силами двух независимых процессов:

• аутодеструкция клеток при активации процесса их 111 К, вызванной возникновением нерепарированных генетических повреждений;

• активный цитолиз генетически измененных клеточных элементов системой неспецифического противоопухолевого иммунитета.

Второй механизм осуществляется цитолитическим действием NK-клеток (и цитолитических Т-лимфоцитов?), распознающих трансформированные клетки по наличию не свойственных нормальным клеткам поверхностных антигенов (вирус-специфических, опухоле-ассоциированных, др.) или по отсутствию какого-либо из обязательных (например, антигенов Главного комплекса гистосовместимости I класса HLA-ABC).

Первый же обеспечивается силами генетического самоконтроля, включающими процесс 111 К при обнаружении нерепарированных повреждений ДНК (отдельные мутации могут быть отнесены к таким повреждениям). Важная роль в таком распознавании принадлежит белку р53, выполняющему функцию «стража генома» - более половины клинически наблюдаемых злокачественных опухолей либо вовсе не экспрессируют данный белок, либо экспрессируют его неактивные, мутантные формы. Однако наличие у второй половины верифицированных опухолей нормального уровня экспрессии белка р53 «дикого типа» свидетельствует о важности, но не эксклюзивности его роли в осуществлении генетического самоконтроля.

Так или иначе, только одной (или нескольким, или ни одной) из:

100 тыс. х 365 дней х 60 лет = 2,2 млрд. трансформированных клеток, возникающих в организме за 60 лет жизни, может представиться «счастливый шанс» положить начало опухолевому клону. Это может произойти при одновременном «сбое» системы генетического самоконтроля клетки и ее уклонении от системы противоопухолевого иммунитета. Благоприобретенный (с позиции опухолевой клетки) признак наследуется, и все потомки воспроизводят фенотип репрессированной функции ПГК. Такой фенотип позволяет опухолевой клетке получить определенные преимущества для автономизации собственного существования, независимости от требований иерархической соподчиненности.

Моноклональная по своей природе, в процессе развития и прогрессии опухоль приобретает все больший клеточный полиморфизм - результат клонального расщепления популяции при накоплении соматических мутаций потомками с репрессированной функцией генетического контроля. При этом характерные для породившей данную опухоль трансформированной клетки признаки тканевой дифференцировки постепенно утрачиваются, зато активируется экспрессия некоторых эмбриональных белков [1].

Кроме воспроизводства признаков «ускользания» от системы противоопухолевого иммунитета, опухолевые клетки приобретают (или воспроизводят?) механизмы активной агрессии против NK-клеток и макрофагов: ранними признаками прогрессии опухоли являются:

• становление фенотипа устойчивости к оксидативному стрессу (НгОг11) - одному из основных эффекторных механизмов неспецифического противоопухолевого иммунитета,

• активная иммуносупрессия (экспрессия «лигандов смерти», повышение выброса простагландинов - РОЕя-фенотип, др.) [34].

Параллельно опухолевые клетки могут приобретать фенотип МЛУ, связанный с адаптационной экспрессией стресс-активируемых белков (ABC-транспортеры, белки теплового шока, стресс-активируемые протеин-киназы, др.) и активации системы внутриклеточной детоксикации ксенобиотиков (повышение активности каталазы, глутатион-пероксидазы, но не супероксид-дисмутазы [34]).

Последним оплотом в вариантном механизме МЛУ является полная репрессия или ликвидация опухолевой клеткой собственных сигнальных путей ПГК и приобретение таким образом способности не вступать в интерфазную гибель при субнекротических повреждениях. Этот отчаянный шаг позволяет клетке переживать цитотоксическое воздействие ценой разрушения аппарата контроля и поддержания генетической стабильности: клетки с повреждениями в молекуле ДНК больше не способны к самоликвидации и служат основой для ускоренного формирования еще более полиморфной опухолевой популяции.

На этом этапе прогрессии опухоли возможности современной циторедуктивной терапии можно считать исчерпанными. По нашему мнению, это положение является следствием несовершенства применяющейся до сих пор системы отбора противоопухолевых синтетических и природных веществ - практически все из имеющихся сегодня в арсенале клинической химиотерапии лекарственные средства являются индукторами ПГК и не могут реализовывать свою антибластическую активность другими способами.

С этой позиции полученная нами линия клеток А4 представляется моделью общей прогрессии опухолевого заболевания, происходящей без вмешательства средств химиотерапии, но с возможным участием системы противоопухолевого иммунитета. Вполне вероятно, что обнаруженные нами фенотипические признаки клеток А4 (повышенный уровень внешнего экспонирования фосфатидилсерина, транскрипционная активация ряда «лигандов смерти», репрессия некоторых молекул адгезии, изменения субъединичного состава Т-клеточного рецептора и CD1, устойчивость к оксидативному стрессу, и др. - см. Главу 7) являются маркерами произошедшей прогрессии и дедифференцировки клеток «родительской» линии.

Хотелось бы заключить изложение материала цитатой известного молекулярного биолога, нашего соотечественника, в настоящее время успешно работающего в г. Бостон (США), М.Д. Франк-Каменецкого: «Наша схема является лишь моделью, и ее можно сильно критиковать и усовершенствовать, но только тогда, когда она не будет удовлетворять каким-то экспериментам. Мы же эксплуатируем такую модель, и если она логически не противоречива, она имеет право на существование!».

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Блохин, Дмитрий Юрьевич, 2004 год

1. Абелев Г.И. Механизмы дифференцировки и опухолевый рост. // Биохимия,- 2000,65, 1,- С. 127-38.

2. Абраменко И.В., Фильченков А.А. Прогностическое значение апоптического и пролиферативного индексов в солидных новообразованиях. // Онкология,- 2002,- 4, 3,- С.165-170.

3. Абрамова Е.Б., Карпов B.JI. Протеасома: разрушение во имя созидания. // Природа, 2003, № 7, http://www.ibmh.msk.su/vivovoco/VV/JQURNAL/NATURE/0703/ PROTEA.HTM

4. Алесенко А.В., Пантаз Э.А. Различия в составе фосфолипидов ядра и хроматина в ходе пролиферации клеток печени крысы после частичной гепатэктомии // Биохимия,— 1983,—48, № 2,—С. 275—281.

5. Барышников А.Ю., Блохин Д.Ю., Глухоедов Н.П., Ершов O.JL, Иванов П.К., Махлин Р.С., Мошечков Н.Г., Хиникадзе А.В. Устройство магнитной сепарации клеток. / Патент РФ № 2089222 от 10 сентября 1997 г., заявка 95103027/14 от 03.03.95.

6. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. // М., Эдиториал УРСС, 2002, 320 с.

7. Белоусова А.К. Молекулярно-биологические подходы к терапии опухолей. / М., ВИНИТИ,- 1993,- 208 стр.

8. Блохин Д.Ю. Модификация метода серебряного окрашивания белков после аналитического электрофореза в полиакриламидном геле. / Рацпредложение, ВОНЦ АМН СССР, удостов. № 1009, 06.01.88.

9. Блохин Д.Ю. Действие противоопухолевых препаратов на белковый состав ядерного матрикса в клетках перевиваемого лейкоза Р388 мышей. / Сб. «Актуальные проблемы экспериментальной химиотерапии опухолей», мат. III Всесоюзн. совещ.,

10. Черноголовка, 1987, 2, с.81-83.

11. Блохнн Д.Ю. Использование аппарата АВГЭ-1 для аналитического электрофореза белков. / Лабораторное дело, 1988, № 5, с.71-72.

12. Блохин Д.Ю. Конформационные изменения суперспиральной ДНК при взаимодействии с бромистым этидием. / Сб. тез. докл. VIII молодежной конф. по синтетич. и природным соединениям., Ереван, 1986, изд. АН Арм. ССР, с.48-49.

13. Блохин ДЮ. Локализация белковых зон в полиакриламидном геле методом серебряного окрашивания. / Лабораторное дело, 1988, №8, с.30-33.

14. Блохин Д.Ю. Повреждение надмолекулярного комплекса ДНК в механизме действия противоопухолевых препаратов. / Вопросы онкологии, 1985, 31, №11, с.60-66.

15. Блохин Д.Ю. Повреждения нуклеоидов клеток лейкоза Р388 мышей, вызванные противоопухолевыми соединениями. / Сб. «Актуальные проблемы экспериментальной химиотерапии опухолей», мат. III Всесоюзн. совещ., Черноголовка, 1987, 2, с.79-81.

16. Блохин Д.Ю., Соколовская А.А., Михайлов А.Д., Эрикссон Й.Е. CD95-индуцированный апоптоз и мультирезистентный фенотип Т-лимфобластных клеток человека. / Росс. Биотерапевтический Ж., -2003, -№3 С.37-46.

17. Блохин Д.Ю., Соколовская А.А., Власенкова Н.К. Фенотип множественной лекарственной устойчивости клеток линии А4. / Росс. Биотерапевтический Ж., 2004, -№2,-С. 13-14.

18. Блохин Д.Ю., Соколовская А.А., Московцев А.А. Fas-дефицитная линия клеток Jurkat/A4, резистентная к индукторам и лигандам программированной гибели клеток. / Росс. Биотерапевтич. Ж., 2003, № 1, с. 14.

19. Блохин Д.Ю., Чиквашвили Б.Ш. Экспериментальные и клинические аспекты надмолекулярной организации хроматина в опухолевых клетках животных и человека. / Сб. тез.докл. XVI Респ. научн. конф., Тбилиси, изд. МЗ ГССР, 1987,с.395-396.

20. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. Анализ остаточных белков фенолоустойчивых ДНК-белковых комплексов из клеток лейкоза мышей. / Сб. «Структура и функции клеточного ядра», тез. докл. ХВсесоюзн. симп., Гродно, 10-14 октября 1990, Москва, 1990, с. 132.

21. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. Белковый состав ядерного матрикса в клетках различных тканей животных. / Биополимеры и клетка, 1989, 5, №1, с.41-45.

22. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. Белковый состав ядерного матрикса изменяется под влиянием липазы. / Биополимеры и клетка, 1989, 5, №6, с.73-77.

23. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. К вопросу о надмолекулярной организации нуклеоидов эукариот. / Биополимеры и клетка, 1989, 5, №4, с.90-97.

24. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. Капиллярная эластовискозиметрия нуклеоидов эукариот. / Биополимеры и клетка, 1988, 4, №4, с.203-211.

25. Блохин Д.Ю., Стручков В.А. Структурные различия надмолекулярного комплекса ДНК из клеток опухолевых штаммов. / Вопросы онкологии, 1988, 34, №7, с.832-839.

26. Блохин Д.Ю., Стручков В.А., Солнцева Т.И., Шулепова Т.С., Михаевич И.С.,

27. Володин Ю.Ю., Бергольц В.В., Блохин Д.Ю. Обработка данных седиментационного анализа с помощью автоматизированной системы на базе микроЭВМ. / Химико-фармацевтический журнал, 1988, 22, №11, с. 1381-1385.

28. Герасимова Г.К., Блохин Д.Ю., Яворская Н.П. Особенности действия 5-фторурацила на клетки рака яичников и меланомы человека. // Эксп. Онкол.- 1983.- 5, 1,- С.57-61.

29. Глазков М.В. Структурно-функциональная организация ДНК в интерфазном ядре.Структурный аспект//Молекуляр. биология.—1988.—22, № 1.—С. 16—30.

30. Дейчман Г.И. Естественный отбор и ранние изменения фенотипа опухолевыхклеток in vivo: приобретение новых механизмов защиты. // Биохимия,- 2000,- 65, 1.-С. 92-111.

31. Збарский И.Б. Структурная организация и функциональная роль ядерного матрикса // Структурно-функциональные аспекты репликации и репарации ДНК: Материалы Всесоюз. симпоз.— Пущино, 1983.— С. 3—21.

32. Збарский И.Б., Виртанен И., Лехто В.-П. и др. Локализация высокомолекулярных щелочерастворимых полипептидов ядерного матрикса печени крыс, выполняемая с помощью иммунологических методов.//Цитология,- 1982,- 14, 12,-С. 1424-29.

33. Збарский И.Б., Кузьмина С.Н. Скелетные структуры клеточного ядра. / М., Наука. -1991,- 246 стр.

34. Иванов В.И. В-А-переход в ДНК и транскрипция. // Биополимеры и клетка,- 1985,1, 1.-С. 26-32.

35. Иванов П.К., Барышников А.Ю., Блохин Д.Ю., Кадагидзе З.Г., Заботина Т.Н.,

36. Иванов П.К., Блохин Д.Ю. Биомагнитные сорбенты в онкологии. / Тез. Докл. Медико-фармацевтического форума, 29 окт.-2 нояб., 2002, Москва, с. 91.

37. Иванов П.К., Блохин Д.Ю., Голенкина Е.А., Филиппов В.И., Ершов О.Л. Биомагнитные препараты для диагностики и терапии. / Росс. Биотерапевтический Ж., 2003, -№3, С.31-36.

38. Караванов А.А., Афанасьев В.Н. Негистоновые белки хроматина. // Мол. Биол.-1983,- 17, 2.-С.213-33.

39. Комарова Е.А., Гудков А.В. Супрессия р53: новый подход к преодолению побочных эффектов противоопухолевой терапии (обзор). // Биохимия, 2000, 65, № 1, 48-56.

40. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза. //Биохимия, 2000, 65, 5-33.

41. Ленинджер А. Биохимия. / М., Мир,- 1976.- 958 стр.

42. Мельник С.Я. Синтез и изучение гликозидов, производных бисиндола иродственных индоло2,3-а.карбазолов. // В кн. «Экспериментальная онкология на рубеже веков» / М.И.Давыдов, А.Ю.Барышников Ред.- М., изд. ГУ РОНЦ РАМН,-2003,- С.281-93.

43. Михайлов А.Д. Факторы, модулирующие каскады передачи сигналов, и мониторинг спонтанного метастазирования в условиях экспериментальных моделей. // Автореф. дисс. . докт. мед. наук, М., РОНЦ РАМН,- 2002.- 38 стр.

44. Наседкина Т.В., Слезингер С.И. Изменения в структуре нуклеогистоновых фибрилл хромосомы при удалении бивалентных катионов и гистона HI. // Цитология.— 1983,— 25, № 9,— С. 1054—58.

45. Разин С.В., Чернохвостов В.В., Рудин А.В. и др. Белки, особо прочно связанные с ДНК в участках ее прикрепления к матриксу интерфазного ядра. // Докл.АН СССР.— 1982,—263, №4,—С. 1019—21.

46. Сапрыкина Н.С., Блохин Д.Ю. Влияние хинолонов на противоопухолевую активность цитостатиков. / Сб. тез. докл. Всесоюзн. конф. «Актуальные проблемы химиотерапии бактериальных инфекций», 22-24 октября 1991, Москва, ч.З, с.573-574.

47. Свердлов Е.Д. Великое открытие: революция, канонизация, догмы и ересь. // Вестник РАН,- 2003,- 73, 6 С.496-513.

48. Скулачев В.П. Явления запрограммированной смерти. // Соросовский образовательный журнал, 2001, 7, 4-10.

49. Соколовская А.А., Барышников А.Ю., Блохин Д.Ю., Терещенко С.Н., Степанова

50. Е.В., Заботина Т.Н. Исследование роли CD95 рецептор-лигандной системы в лекарственно-индуцированном апоптозе. / V российский национ. конгресс «Человек и лекарство», М., 21-25 апреля 1998, с.200.

51. Соколовская А.А., Заботина Т.Н., Блохин Д.Ю., Иншаков А.Н., Михайлов А.Д., Кадагидзе З.Г., Барышников А.Ю. С095-дефицитные клетки сублинии Jurkat/A4, устойчивые к лекарственно-индуцированному апоптозу. / Эксп. Онкол.- 2001,- т.23, №3,- С. 174-180.

52. Соколовская А.А., Заботина Т.Н., Блохин Д.Ю., Барышников А.Ю. Идентификация лекарственно-индуцированного апоптоза в лейкозных клетках. / Мат. 3 науч. конф. «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге», Медицинская иммунология, 1999, т.1, N3-4, с. 109-110.

53. Соколовская А.А., Заботина Т.Н., Блохин Д.Ю., Барышников А.Ю. Лекарственно-индуцированный апоптоз. / Тез. докл. симп. «Биологические основы терапии онкогематологическиех заболеваний у детей», Москва, 5-6 февраля 1999 г., с.43.

54. Соколовская А. А. Роль СВ95-рецепторно-лигандной системы в лекарственно-индуцированном апоптозе. // Автореферат дисс. . канд. биол. наук, М., РОНЦ РАМН, 2002,- 24 стр.

55. Соколовская А.А., Заботина Т.Н., Московцев А.А., Лукашина М.И., Жданов Р.И., Блохин Д.Ю. Характеристика методов регистрации апоптоза и их использование в экспериментальной и клинической онкологии. / Росс. Биотерапевтический Ж., 2003, -№3, С.53-60.

56. Ставровская А.А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток. //Биохимия, 2000, 65, № 1, 112-126.

57. Стражевская Н.Б., Круглова Н.Л., Стручков В.А. Особенности спектра кругового дихроизма надмолекулярных комплексов ДНК из клеток эукариот. // Мат. 5-го Всесоюзн. Биохим. Съезда,-М,-Наука.- 1986.-2.- С.419-420.

58. Стражевская Н.Б., Стручков В.А., Блохин Д.Ю. Изменение состава ДНК-связанного негистонового белка в тимусе и печени у-облученных крыс. / Радиобиология, 1989, 29, №4, с.441-444.

59. Стручков В.А. О природе «сверхполимерной» дезоксирибонуклеиновой кислоты. // Биофизика,- 1962,- 7, 5,- С.538-550.

60. Стручков В.А., Блохин Д.Ю. Белковый состав ядерного матрикса в клетках разных тканей. / Сб. «Структура и функции клеточного ядра», тез. докл. IX Всесоюзн. симп., Черноголовка, 1987, с. 190.

61. Стручков В.А., Блохин ДЮ. Структурная организация надмолекулярных комплексов ДНК эукариот. / Сб. «Конформационные изменения биополимеров в растворах», тез. докл. VI симп., Тбилиси, 1985, с. 160.

62. Стручков В.А., Блохин Д.Ю. Эластовискозиметрия нуклеоидов клеток эукариот: особенности надмолекулярной организации ДНК в хроматине. / Сб. «Структура и функции клеточного ядра», тез. докл. VIII Всесоюзн. симп., Пущино, 1984, с.96-97.

63. Стручков В.А., Блохин Д.Ю., Стражевская Н.Б. Капиллярная эластовискозиметрия надмолекулярных комплексов ДНК. / Сб. «Конформационные изменения биополимеров в растворах», тез. докл. VI симп., Тбилиси, 1985, с. 159.

64. Стручков В.А., Блохин Д.Ю., Стражевская Н.Б. Роль специфических хромосомальных липопротеидов в петлевой организации ДНК эукариот. / Сб. «Структура и функции клеточного ядра», тез. докл. IX Всесоюзн. симп., Черноголовка, 1987, с. 130.

65. Стручков В.А., Стражевская Н.Б. Капиллярный эластовискозиметр / Авт. Свид. СССР № 1267216,- (51)4, G 01, N 11/08. //Открытия. Изобретения,— 1986,— №40.— С. 152.

66. Стручков В.А., Стражевская Н.Б., Блохин Д.Ю. Роль дисульфидных мостиков остаточного белка в организации хромосомальной ДНК. / Биофизика, 1995, 40, №2, с.296-316.

67. Стручков В.А., Стражевская Н.Б., Блохин Д.Ю. Тиол-индуцированная фрагментация хромосомальной ДНК. / Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 1992, №5, с.529-531.

68. Сумбаев В.В. Оксид азота активатор МАР-киназного каскада в нейронах. // Электр, изд. Таврического Нац. Универс. «Ученые записки ТНУ», 2002,- 14 (53), № 2. http://www.ccssu.crimea.ua/tnu/magazine/scientist/editionl4/tom2biology/article39.htm

69. Сьяксте Н.И., Блохин Д.Ю. Белковый состав комплексов ДНК-матрикс с «прочным» и «слабым» типом связи, выделенных из клеток асцитной карциномы Эрлиха. / Биохимия, 1989, 54, №7, с.1217-1223,

70. Сьяксте Н.И., Забойкин М.М., Эренпрейса Е.А., Лихтенштейн А.В., Шапот B.C. Анализ клеточных нуклеопротеидов методом нуклеопротеид-целит-хроматографии. III. Два типа взаимодействий ДНК с ядерным матриксом. // Мол. Биол.- 1985,- 19, 5,-С.1232-41.

71. Филиппович И.В., Сорокина Н.И. Суперспиральная ДНК клеточного ядра. // Успехи совр. биологии.- 1983.- 95, 2,- С.163-180.

72. Фильченков А.А. Каспазы: регуляторы апоптоза и других клеточных функций. // Биохимия.- 2003,- 68, 4,- С.453-66.

73. Фильченков А.А. Терапевтическое использование модуляторов апоптоза в онкологической практике: реалии и перспективы. // http://www.onco-forum.org/filchenko

74. Фомин В.В., Борисов М.Б., Зайцев А.В., Блохин ДЮ. Измерение количества однонитевых разрывов в ДНК облученных клеток лейкоза Р-388 методом щелочной денатурации. /Бюлл. Эксп. Биол. Мед., 1993, № 4, с.416-418.

75. Чернохвостое В.В. Ядерный матрикс эукариотической клетки: некоторые вопросы выделения, структуры и функционирования. // Успехи совр. биол.— 1985.—99, № 3 — С. 371—84.

76. Чехун В.Ф., Шишова Ю.В. Современные взгляды на механизмы формирования лекарственной устойчивости опухолей. // Онкология 2000,- 2, 1-2,- С. 11-15.

77. Чехун В.Ф., Шишова Ю.В., Юрченко О.В., и др. Синергическое цитотоксическое действие цисплатины и моноклональных антител IPO-4 на клетки эпидермальной карциномы человека линии КВ. // Эксп. онкол.- 1998.- 20.- 210-16.

78. Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью (обзор). // Биохимия, 2000, 65, № 1, 34-47.

79. Штиль А.А. Развитие множественной лекарственной устойчивости как срочный ответ клетки на экзогенные воздействия. //Биол. мембраны, 2003, 20, № 3, 236-43.

80. Яровая О.В., Разин С.В. Два типа участков прикрепления ДНК к ядерному скелету в клетках асцитной карциномы Эрлиха. // Мол. Биол.— 1983.—17, № 2.—С. 303—313.

81. Adams J.M., Cory S. The Bcl-2 protein family: Arbiter of cell survival. // Science, 1998, 281, 1322-26.

82. Adolph K.W., Cheng S.M., Paulson J.R., Laemmli U.K. Isolation of the protein scaffoldfrom mitotic HeLa cells chromosomes //Proc. Nat. Acad. Sci. USA.— 1977.— 74, N11.— P. 4937—41.

83. Agutter P.S., Richardson J.C.W. Nuclear non-chromatin proteinaceous structure: their role in the organization and function of the interphase nucleus. // J. Cell Sci.- 1980,- 44, 3,-P.395-435.

84. Airas L., Jalkanen S. CD73 mediates adhesion od В cells tj follicular dendritic cells. // Blood.- 1996,-88,-P. 1755-64.

85. Ashkenazi A., Dixit V.M. Death receptors: signaling and modulation. // Science, 1998, 281, 1305-08.

86. Ashkenazi A., Pai R.C., Fong S., et al. // Safety of antitumor activity of recombinant soluble Apo-2 ligand. J. Clin. Invest., 1999, 104, 155-62.

87. Ball P. Portrait of a molecule. //Nature.- 2003.- 421,- P.421-422.

88. Basco Z., Everson B.R. and Eluason J. The DNA of Annexin V-binding apoptotic cells is highly fragmented. // Cancer Research. 2000. - 60. -P.4623-4628.

89. Basu S., Binder R.J., Ramalingam Т., Srivastava P.K. CD91 is a common receptor for heat shock proteins gp96, hsp90, hsp70 and calreticulin. // Immunity, 2001, 14, 303-13.

90. Beckman M., Kihlmark M., Iverfeldt K., Hallberg E. Degradation of GFP-labelled POM121, a non-invasive sensor of nuclear apoptosis, procedes clustering of nuclear poresand externalization of phosphstidylserine. // Apoptosis.- 2004,- 9, 3,- P.363-68.

91. Beere H.M. Stressed to death: regulation of apoptotic signaling pathways by the heat shock proteins. // Science's STKE, www.stke.org/cgi/content/fiill/OCsigtrans;2001/93/rel

92. Belka C., Marini P., Lepple-Wienhues A., et al. The tyrosine-kinase Lck is required for CD95-independent caspase-8 activation and apoptosis in response to ionizing radiation. // Oncogene.- 1999,- 18.-P.4983-92.

93. Benyajati C., Worcel A. Isolation, characterization and structure of the folded interphase genome of Drosophila melanogaster. // Cell.- 1976,- 9, 2 P.393-407.

94. Berezney R. Dynamic properties of the nuclear matrix. // "The cell nucleus" / H.Busch ed„ NY, Acad. Press.- 1979.- 7.- P.413-56.

95. Berezney R., Buchholtz L.A. Isolation and characterization of rat liver nuclear matrices containing rat liver high molecular weight DNA. // Biochemistry.- 1981.- 20, 17,- P.4995-5002.

96. Berezney R., Coffey D.S. Identification of a nuclear protein matrix. // Biochem. Biophys. Res. Comms.- 1974,- 60,-P. 1410-17.

97. Berkovic D., Wernicke J.H., Fleer E.A.M. Effects of etherlipid analogs on cell membrane functions. // J. Exp. Therapeutics and Oncology.- 2003,- 3, 4,- P. 185-93.

98. Bernassola F., Scheuerpflug C., Herr I., Krammer P.H., Debatin K.-M., Melino G. Induction of apoptosis by IFNg in human neuroblastoma cell lines through the CD95/CD95L autocrine circuit. //Cell Death Differ., 1999, 6, 652-60.

99. Blokhin D.Yu., Bergoltz V.V., Gerasimova G.K. Pharmacodynamics of new platinum complexes platin and cycloplatam. / J.Cancer Res.& Clin. Oncol., v. 116, 15-th Interntl. Cancer Congress, Hamburg, August 16-22, 1990, part I, Spring-Verlag, 1990, p.429.

100. Boniface J.J., Rabinonowitz J.D., Wufling C., et al. Initiation of signal transduction through the T-cell receptor requires the multivalent engagement of peptide/МНС ligand s. // Immunity.- 1998.- 9.-P.459-66.

101. Bouillet P., Purton J., Godfrey D.I., et al. ВНЗ-only Bcl-2 family member Bim is required for apoptosis of autoreactive thymocytes. // Nature.- 2002.- 415,- P. 922-26.

102. Boulikas Т., Hancock R. The laminae protein is in ultimate contact with the DNA in nuclear skeletons. // Biol. Cell.- 1982.- 45, 2,- Sp. Iss.- P. 106.

103. Boullet P., Strasser A. ВНЗ-only proteins evolutionary conserved pro-apoptotic Bcl-2 family members essential for initiating programmed cell death. // J. Cell Sci., 2002, 115, 1567-74.

104. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. // Anal. Biochem.- 1976,- 12-P.248-54.

105. Brunner T, Yoo NJ, Griffith .S, Ferguson ТА, Green DR. Regulation of CD95 ligand expression: a key element in immune regulation? // Behring Inst Mitt 1996; 97: 161-74.

106. Cande C., Cecconi F., Dessen Ph., Kroemer G. Apoptosis-inducing factor (AIF): key to the conserved caspase-independent pathways of cell death? // J. Cell Sci., 2002, 115, 4727-34.

107. Cascino I., Papoff G., Eramo A., Ruberti G. Soluble Fas/APO-1 splicing variants and apoptosis.//Frontiers Bioscience, 1996,1, 12-18.

108. Cheng P.C., Dykstra M.L., Mitchell R.N., Pierce S.K. A role for lipid rafts in B-cell antigen receptor signaling and antigen targeting. //J. Exp. Med.- 1999.- 190,- P.1549-60.

109. Chin K.V., Tanaka S., Darlington G., Pastan I., Gottesman M.M. Heat shock and arsenite increase expression of the multidrug resistance (MDR1) gene in human renal carcinoma cells. // J. Biol. Chem., 1990, 265, 221-26.

110. Chinnadurai G. CtBP, an unconventional transcriptional corepressor in development and oncogenesis. // Mol. Cell.- 2002,- 9, 2.- P.213-24.

111. Chinnadurai G. CtBP family proteins: more then transcriptional corepressors. // Bioessays.- 2003,- 25, 1,- P.9-12.

112. Coleman M.L., Sahai E.A., Yeo M., Bosch M., Dewar A., Olson M.F. Membrane blebbing during apoptosis results from caspase-mediated activation of ROCK I. // Nature Cell. Biol., 2001, 3, 339-46.

113. Cook P.R. Hypotesis of differentiation and the inheritance of gene superstructure. // Nature.- 1973.-245,- P.23-25.

114. Cook P.R., Brazell I.A. Spectrofluorometric measurements of the binding of ethidium to superhelical DNA. // Eur. J. Biochem.- 1978,- 84, 2,- P.465-77.

115. Cook P.R, Brazell I.A. Supercoils in human DNA. // J. Cell Sci.- 1975.- 19, 2,- P.261-79.

116. Cook P.R., Brazell I.A. Conformational constraints in nuclear DNA. // J. Cell. Sci.- 1976,22, 2,- P.287-302.

117. Cook P.R, Brazell I.A., Jost E. Characterization of nuclear structures containing superhelical DNA. // J. Cell Sci.- 1976,- 22, 2.- P.303-24.

118. Creagh E.M., Sheehan D., Cotter T.G. Heat shock proteins-modulator of apoptosis intumor cells. // Leukemia, 2000, 14, N 7, 1161-73.

119. Cremesti A., Paris F., Grassme H., et al. Ceramide enables Fas to cap and kill. // J. Biol. Chem.- 2001,- 276,- P.23954-61.

120. Darzynkiewicz Z., Juan G., Li X., Gorczyca W., Murakami Т., Traganos F. Cytometry in Cell Necrobiology: Analysis of Apoptosis and Accidental Cell Death (Necrosis). // Cytometry.- 1997.-27,- P. 1-20.

121. Daugas E., Nochy D., Ravagnan L., Loeffler M., Susin S.A., Zamzami N., Kroemer G. Apoptosis-inducing factor (AIF): a ubiquitous mitochondrial oxidoreductase involved in apoptosis.// FEBS Lett., 2000, 476, 118-23.

122. Degli-Esposti M.A., Smolak P.J., Walczak H., et al. Cloning and characterization of TRAIL-R3, a novel member of the emerging TRAIL receptor family. // J.Exp.Med., 1997, 186, 1165.

123. Dhein J, Walczak H, Baumler C, Debatin K-M, Krammer P.H. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-l(Fas/CD95). //Nature.- 1995,-373,-P.438-41.

124. Dive C., Hickman J.A. Drug-target interactions: only the first step in a commitment to a programmed cell death? // Br. J. Cancer, 1991, 64, 192-6.

125. Douvas A.S., Harrington C.A., Bonner J. Major non-histone proteins of rat chromatin: preliminary identification of myosin, actin and tropomyosin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1975.-72, 10,-P.3902-06.

126. Droge P. Protein-induced supercoiling of DNA: a tool to regulate DNA transactions in vivo?//BioEssays.- 1993,- 16.-P.91-99.

127. Eastman A. Activation of programmed cell death by anticancer agents: cisplatin as a model system. // Cancer Cells, 1990, 2, 275-80/

128. El-Naggar A.K., Dinh M., Luna M.A., et al. Genotypic analysis of primary head and neck squamous carcinoma by combined fluorescence in situ hybridization and DNA flow cytometry. //Am. J. Clin. Pathol., 1996, 105, 102-08.

129. Faber A.J., Cook A., Hancock R. A fraction of chromatin bearing nascent RNA. // Eur. J. Biochem.- 1981.- 120, 2.-P.257-61.

130. Fadok V.A., Voelker P.A., Campbell J.J. et al. Exposure of phosphatidylethanol-amine on the surface of apoptotic cells // Exp. Cell. Res.-1992.- 232.-P.430-434.

131. Feder M.E., Hoffman G.E. Heat-shock proteins, molecular chaperones, and the stress response: Evolutionary and ecological physiology. // Annu. Rev. Physiol., 1999, 61, 24382.

132. Fields A.P., Kaufman S.H., Shaper J.H. Isolation, chemical characterization and immune-localization of an acidic non-histone protein to the nucleolus of rat liver nuclei. // 8-th Intntl. Nucle(ol)ar Workshop, Banyuls.- 1983.- P.30.

133. Friesen C, Herr I, Krammer P.H, Debatin K-M. Involvement of the CD95 (APO-l/Fas) receptor/ligand system in drug-induced apoptosis in leukemia cells. // Nature Medicine.-1996.- 2,- P. 574-7.

134. Frisch S.M., Screaton R.A. Anoikis mechanisms. // Current Opinion Cell. Biol.- 2001,-13.-P. 555-562.

135. Fulda S, Los M, Friesen C. Debatin K-M. Chemosensitivity of solid tumor cells in vitro is related to activation of the CD95 system. // Int. J. Cancer.- 1998,- 76,- P. 105-14.

136. Fulda S, Scaffidi C, Santos A, Susin SA, Krammer PH, Kroemer G, Peter ME, Debatin KM. Activation of mitochondria and realese of mitochondrial apoptogenic factors by betulinic acid. // JBC.- 1998,- 273,- P. 33942-48.

137. Fulda S, Strauss G, Meyer E. & Debatin K-M. Functional CD95 ligand and CD95 death-induced cell death and doxorubicin-induced apoptosis in leukemic T cells. // Blood.-2000,- 95,- P.301-8.

138. Fulda S., Scaffidi C., Pietsch Т., Krammer P.H., Peter M.E., Debatin K.-M. Activation of the CD95(Apo-l/Fas) pathway in drug- and g-irradiation-induced apoptosis of brain tumor cells. // Cell Death Differ., 1998, 5, 884-93.

139. Fuller F.B. Decomposition of the linking number of a closed ribbon: a problem from molecular biology. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1978,- 75, 8,- P.3557-61.

140. Gagna C.E., Lambert W.C., Kuo H.-R., Farnsworth P.N. Localization of B-DNA and Z-DNA in terminally differentiating fiber cells in adult lens. // J. Histochem. Cytochem.-1997.-45, 11,- P.1511-21.

141. Gajate C., Mollinedo F. The antitumor ether lipid ET-18-OCH3 induces apoptosis through translocation and capping of Fas/CD95 into membrane rafts in human leukemic cells. // Blood.-2001,-98, 13,- P.3860-63.

142. Gavrieli Y, Sherman Y, and Ben Sasson S. Identification of programmed cell death in situ via specific labeling of nuclear DNA fragmentation // J. Cell Biol. -1992. 119.-P.493-501.

143. Georgiev G.P., Nedospasov S.A., Bakaev V.V. Supranucleosomal levels of chromatin organization. // "The cell nucleus" / H.Busch ed., NY, Acad. Press.- 1978,- P.3-34.

144. Gerace L., Blum A., Blobel G. Immunochemical localization of the major polypeptides of the nuclear pore complex-lamina fractions. Interphase and mitotic distribution. // J. Cell Biol.- 1978,- 79, 2,-P.546-66.

145. Gerasimova G.K., Blokhin D.Yu., Solntseva T.I., Shulepova T.S. Mechanism of action of cycloplatam, a new anticancer platinum II complex. / 7-th NCI-EORTC Symp. on new drugs in cancer therapy, Amsterdam, March 17-20, 1992, poster 168.

146. Gibson S.B., Oyer R., Spalding A.C., et al. // Mol. Cell. Biol., 2000, 20, 205-12.

147. Godard Т., Deslandes E., Lebailly P. et al. Early detection of staurosporine-induced apoptosis//Histchem. Cell Biol. -1999. 112. -P.155-161.

148. Gorczyca W., Gong J., Darzynkiewicz Z. Detection of DNA strand breaks individual apoptotic cells by the in situ by the terminal deoxynucleotidyl transferase and nick translation assays. //Cancer Res. -1993. -52.-P. 1945-1951.

149. Grassnre H., Jekle A., Riehle A., et al. CD95 Signaling via Ceramide-rich Membrane Rafts. //J.Biol.Chem.- 2001.- 276, 23, P. 20589-96.

150. Graziadei L., Riabowol K., Bar-Sagi D. Co-capping of ras proteins with surfaceimmunoglobulins in В lymphocytes. // Nature.- 1990,- 347,- P.396-399.

151. Green D.R., Kroemer G. The central executioner of apoptosis: mitochondria or caspases? // Trends Cell Biol., 1998, 8, 267-71.

152. Green D.R., Reed J.C. Mitochondria and apoptosis. // Science, 1998, 281, 1309-12.

153. Grooteclaes M., Deveraux Q., Hildebrand J., et al. C-terminal-binding protein corepresses epithelial and proapoptotic gene expression programs. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.2003,- 100, 8.-P. 4568-73.

154. Grooteclaes M., Frisch S.M. Evidence for a function of CtBP in epithelial gene regulation and anoikis. // Oncogene.- 2000,- 19, 33.- P. 3823-28.

155. Gruzdev A.D., Shurdov M.A. Topological state of DNA in polytene chromosomes. // Biochim. Biophys. Acta.- 1992,- 1131.-P.35-40.

156. Gulbins E., Grassme H. Ceramide and cell death receptor clustering. // Biochim. Biophys. Acta.- 2002,- 1585,-P. 139-145.

157. Hansen K.R., Resta R., Webb C.F., Thompson L.F. Isolation and characterization of the promoter of the human 5-nucleotidase (CD73)-encoding gene. // Gene.- 1995,- 167 (1-2).-P. 307-12.

158. Hartwig M. The size of independently supercoiled domains in nuclear DNA from normal human and leukemic lymphoblasts. // Biochim. Biophys. Acta.- 1982,- 698, 2,- P.214-17.

159. Haslett С., Savill J. Why is apoptosis important to clinicians? // BMJ, 2001, 322, 1499-50.

160. Herr I., Debatin K.-M. Cellular stress response and apoptosis in cancer therapy. // Blood, 2001, 98, N9, 2603-14.

161. Herr I., Wilhelm D., Meyer E., Jeremias I., Angel P., Debatin K.-M. JNK/SAPK activity contributes to TRIAL-induced apoptosis. // Cell Death Differ., 1999, 6, N 2 130-35

162. Hildebrand J.D., Soriano P. Overlapping and unique roles for C-terminal binding protein (CtBPl) and CtBP2 during mouse development. //Mol. Cell Biol.- 2002,- 22, 15,- P. 5296307.

163. Honge L.D., Mancini P., Davis F.M., Heywood P. Nuclear matrix of HeLa S3 cells. Polypeptide composition during adenovirus infection and in phases of the cell cycle. // J. Cell Biol.- 1977.- 72, 1/- P/194-208.

164. Hostager B.S., Catlett I.M., Bishop G.A. Recruitment of CD40 and tumor necrosis factor receptor-assosiated factors 2 and 3 to membrane microdomains during CD40 signaling. // J. Biol. Chem.- 2000,- 275,- P. 15392-98.189 http://www.sellsalive.com

165. Ichijo H., Nishida E., Irie K., et al. Induction of apoptosis by ASK1, a mammalian MAPKKK that activates SAPK/JNK and p38 signaling pathways. // Scienc.- 1997.-V.275.- P.90-94.

166. Igney F.H., Krammer P.H. Death and anti-death: tumour resistance to apoptosis. // Nature Rev. Cancer, 2002, 2, 277-88.

167. Igo-Kemenes Т., Horz W., Zachau H.G. Chromatin. // Ann. Rev. Biochem.- 1982,- 51,-P.89-121.

168. Itoh N, Nagata S. A novel protein domain required for apoptosis. Mutational analysis of Fas antigen. // J. Biol. Chem.- 1993,- 268,- P.10932-37.

169. Ivanov P.K., Blokhin D.Yu., Baryshnikov A.Yu., et al. The immunomagnetic separation of bone marrow stem cells. / 7-th Interntl. Congress on anti-cancer treatment, Paris,

170. February 3-6, 1997, p.166, poster P163.

171. Ivanov P.K., Polosukhina E.R., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu., et al. Apoptosis during treatment of leukemias. / 7-th Interntl. Congress on anti-cancer treatment, Paris, February 3-6, 1997, p.166, poster PI 62.

172. Jaattela M. Escaping cell death: survival protein in cancer. // Exp. Cell Res.- 1999,- 248-P.30-43.

173. Javeland D., Besancon F. NF-kB activation results in rapid inactivation of JNK in TNFa-treated Ewing sarcoma cells: a mechanism for the anti-apoptotic effect of NF-kB. // Oncogene, 2001, 20, N 32, 4365-72.

174. Jesenberger V., Jentsch S. Deadly encounter: ubiquitin meets apoptosis. // Nature Rev. Mol. Cell Biol., 2002, 3, 112-21.

175. Jiang Y., Woronicz J.D., Liu W., Goeddel D.V. Prevention of constitutive TNF receptor 1 signaling by silencer of death domains. // Science.- 1999,- 283, 5409.- P. 1852-1860.

176. Jost E., Johnson R.T. Nuclear lamina assembly, synthesis and disaggregation during thecell cycle in synchronized HeLa cells. // J. Cell Sci.- 1981,- 47, 1,- P.25-53.

177. Junge S., Brenner В., Lepple-Wienhues A., et al. Intracellular mechanisms of L-selectin induced capping. // Cell Signal.- 1999,- 11,- P.301-08.

178. Jupe E.R, Sinden R.R., Cartwright I.L. Specialized chromatin structure domain boundary elements flanking a Drosophila heat shock gene locus are under torsional strain in vivo. // Biochemistry.- 1995,- 34,- P.2628-33.

179. Kataoka Т., Budd R.C., Holler N., Thome M., Martinon F., Irmler M., Burns K., Hahne M., Kennedy N., Kovacsovics M., Tschopp J. The caspase-8 inhibitor FLIP promotes activation of NF-кВ and Erk signaling pathways. // Curr. Biol., 2000, 10, 640-8.

180. Kaufmann S.H. Induction of endonucleolytic DNA cleaved in human acute myelogenous leukemia cells by etoposide, camptothecin and other cytotoxic anticancer drugs: a cautionary note. // Cancer Res., 1989, 49, 5870-78.

181. Kaufmann S.H. Proteolytic cleavage during chemotherapy-induced apoptosis. // Mol. Med. Today.- 1996,- 2(7).- P.269-303.

182. Kaufmann S.H., Coffey D.S., Shaper J.H. Considerations on the isolation of rat liver nuclear matrix, nuclear envelope and pore complex-lamina. // Exp. Cell Res.- 1981,- 132, 1,- P.105-23.

183. Kawahara A., Ohsawa Y., matsumura H., Uchiyama Y., Nagata S. Caspase-independent cell killing by Fas-associated protein with death domain. // J. Cell. Biol.- 1998,- 143.- P. 1353-60.

184. Kelekar A., Thompson C.B. Bcl-2 family proteins: the role of the BH3 domain in apoptosis. // Trends Cell. Biol., 1998, 8, 324-30.

185. Keller W. Determination of the number of superhelical turns in simian vims 40 DNA by gel electrophoresis. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1975,- 72, 12.- P.4876-80.

186. Kerr J.F. Shrinkage necrosis: a distinct mode of cellular death. // J. Pathol.- 1971,- 105,-P. 13-20.

187. Kerr J.F., Wyllie A.H., Currie A.R. / Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-ranging implication in tissue kinetiks. // Br. J. Cancer, 1972, 26, 239-57.

188. Kimura K., Hirano T. ATP-dependent positive supercoiling of DNA by 13S condensing; a biochemical implication for chromosome condensation. // Cell.- 1997,- 90.- P.625-34.

189. Kingsbury S.R., Gout I.T. Phosphoinositide 3-kinases and cancer. // Exp. Oncol., 2003,-25.-P.3-15.

190. Kitanaka C., Kuchino Y. Caspase-independent programmed cell death with necrotic morphology. //Cell Death Differ., 1999, 6, 505-15.

191. Kiyomiya K.-I., Kurebe M., Nakagawa H., Matsuo S. The role of the proteasome inapoptosis induced by anthracycline anticancer agents. // Int. J. Oncol.- 2002,- 20.- P. 120509.

192. Kondo S, Banara BP, Morimura T, Takeuchi J, Yuan J, Akbasak A, Barnett GH. Interleukin-ip-converting enzyme mediates cisplatin-induced apoptosis in malignant glioma cells. // Cancer Res.- 1995,- 55,- P.6166-71.

193. Koopman G., Reutelingsperger C.P.M., Kuijten G.A.M., Keehnen R.M.J., Pals S.T. & van Ors M.H.J. Annexin V for Flow Cytometric Detection of phosphatidylserine exspression on В cells undergoing apoptosis // Blood. 1994. - 84. - P. 1415-1420.

194. Kopecek P., Altmannova K., Weigl E. Stress proteins: nomenclature, division and function. // Biomed. Papers, 2001,145, N 2, 39-47.

195. Romberg R.D. Structure of chromatin. // Ann. Rev. Biochem.- 1977,- 46,- P.931-54.

196. Kramer P.R., Sinden R.R. Measurement of unrestrained negative supercoiling and topological domain size in living human cells. // Biochemistry.- 1997,- 18,- P.3151-58.

197. Krammer P.H., Dhein J., Walczak H., Behrmann I., Mariani S., Matiba В., Fath M., Daniel P.T., Knipping E., Westendorp M.O. The role of APO-1-mediated apoptosis in the immune system. //Immunol. Rev.- 1994,- 142.-P. 175-91.

198. Krohne G., Franke W.W., Scheer U. The major polypeptides of the nuclear pore complex. //Exp. Cell Res.- 1978,- 116, l.-P. 85-102.

199. Krueger A., Baumann S., Krammer P.H., KirchhofF S. FLICE-inhibitory proteins: regulators of death receptor-mediated apoptosis. // Mol. Cell. Biol., 2001, 21, 8247-54.

200. Kung A.L., Zetterberg A., Sherwood S.W., et al. // Cytotoxic effects of cell cycle phase specific agents: result of cell cycle perturbation. // Cancer Res., 1990, 50, 7307-17.

201. Kuzmina S., Buldayeva Т., Troitskaya L., Zbarsky I. Characterization and fractionation ofrat liver nuclear matrix. // Eur. J. Cell Biol.- 1981,- 25, 2.- P.225-32.

202. Kemp M. The Mona Lisa of modem science. // Nature.- 2003,- 421,- P.419-420.

203. Labat-Moleur F., Guillerment C., Lorimier P. TUNEL apoptic cell detection in tissue sections: critical evaluation and improvement. // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. -1998. 46 (3). -P.327-334.

204. Labat-Moleur F., Guillerment C., Lorimier P. TUNEL apoptic cell detection in tissue sections: critical evaluation and improvement // The Journal of Histochemistry & Cytochemistry. -1998. 46 (3). -P.327-334.

205. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. //Nature.- 1970,- 227,- P.680-85.

206. Laemmli U.K. Levels of organization of the DNA in eukaryotic chromosomes. // Pharm. Rev.- 1979,- 30, 4.- P.469-76.

207. Lamoyi E., and Nisonoff A. Preparation of F (ab') 2 fragments from mouse IgG of various subclasses. //J.Immunol. Methods.- 1983,-56(2).-P.235-43.

208. Landowski Т.Н., Gleason-Gusman M., Dalton W. Selection for drug resistance results in resistance to Fas-mediated apoptosis. // Blood.- 1997,- 89,- P. 1854-61.

209. Lange C.S. The organization and repair of mammalian DNA. // FEBS Lett.- 1974,- 44, N 2,-P. 153-156.

210. Lei K., Davis R.J. JNK phosphorilation of Bim-related members of the Bcl2 family induces Bax-dependent apoptosis. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 2003.- 100, 5,- P. 243237.

211. Levy O. Antimicrobial proteins and peptides of blood templates for novel antimicrobial agents. // Blood, 2000, 96, 8, 2664-72.

212. Lima-de-Faria A. The relation between chromomeres, replicons, operons, transcription units, genes virus and palindromes. // Hereditas.- 1975,- 81.- P.249-84.

213. Liu L.F., Wang J.C. Supercoiling of the DNA template during transcription. // Proc. Natl.

214. Acad. Sci. USA.- 1987.- 84,-P. 1353-58.

215. Liu P., Ying Y., Ко Y.G., Anderson R.G. Localization of platelet-derivedgrowth factor-stimulated phosphorylation cascade in caveolae. // J. Biol. Chem.- 1996,- 271,- P. 1029910303.

216. Liu Z.G., Hsu H., Goaddel D., et al. Dissection of TNF receptor 1 effector functions: JNK activation is not linked to apoptosis while NF-кВ activation prevents cell death. // Cell.-1996.- 87.- P.565-76.

217. Ljungman M., Hanawalt P.C. Presence of negative torsional tension in the promoter region of the transcriptionally poised DHFR gene in vivo. // Nucl. Acids Res.- 1995,- 23/-P. 1782-89.

218. Los M., Herr I., Friesen C., Fulda S., Schulze-Osthoff K., and Debatin K.M. Cross-resistance of CD95- and drug-induced apoptosis as a consequence of deficient activation of caspases (ICE/Ced-3 proteases). //Blood.- 1997,- 90,- P.3118-29.

219. Lowe S.W., Lin A.W. Apoptosis in cancer. // Carcinogenesis.- 2000,- 21, N 3,- P. 485-95.

220. Lowe S.W., Ruley H.E., Jacks t., Housman D.E. p53-dependent apoptosis modulate the cytotoxicity of anticancer agents. // Cell, 1993, 74, 954-67.

221. MacFerlane M., Merrison W., Bratton S.B., Cohen G.M. Proteasome-mediated degradation of Smac during apoptosis: XIAP promotes Smac ubiquitination in vitro. // J. Biol. Chem., 2002, 277, N 39, 36611-16.

222. Makin G., Dive C. Modulating sensitivity to drug-induced apoptosis: the future for chemoterapy? // Breast Cancer Res., 2001, 3, 150-53.

223. Mandic A. Elucidation of pro-apoptotic signaling induced by cisplatin. // http://diss.kib.ki.se/2003/91-7349-449-6/thesis.pdf

224. Martinou J.C., Green D.R. Breaking the mitochondrial barrier. // Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 2001, 2, 63-7.

225. McCready S.J., Akrigg A., Cook P.R. Electron-microscopy of intact nuclear DNA from human cells. //J. cell Sci.- 1979,- 39, 1.-P.53-62.

226. Miller Т.Е., Huang C.Y., Pogo A.O. Rat liver nuclear skeleton and ribonucleoprotein complexes containing hnRNA. // J. Cell Biol.- 1978,- 76, 4,- P.675-91.

227. Miller Т.Е., Huang C.Y., Pogo A.O. Rat liver nuclear skeleton and small molecular weight RNA species. // J. Cell Biol.- 1978,- 76, 4,- P.692-704.

228. Miyashita Т., Reed J.C. Bcl-2 oncoprotein blocks chemotherapy-induced apoptosis in human leukemia cell line. // Blood, 1993, 81, 151-57.

229. Monks C.R., Freiberg B.A., Kupfer H., et al. Three-dimentional segregation of supramolecular activation clusters in T-cells. // Nature.- 1998,- 395,- P.82-86.

230. Muller M., Spiess E., Werner D. Fragmentation of "nuclear matrix" on a mica target. // Eur. J. Cell. Biol.- 1983,- 31.- P. 158-66.

231. Muller M., Strand S., Hug H., et al. Drug-induced apoptosis in hepatoma cells is mediatedby the CD95 (APO-l-Fas) receptor/ligand system and involves activation of wild-type p53. // J. Clin. Invest.- 1997,- 99- P.403-13.

232. Mullinger A.M., Johnson R.T. The organization of supercoiled DNA from human chromosomes. // J. Cell Sci.- 1979,- 38,- P.369-89.

233. Nagata S., Golstein P. The Fas death factor. // Science.- 1995.- 267,- P. 1449-56.

234. Nagy Z.A., Mooney N.A. A novel, alternative pathway of apoptosis triggered through class II major histocompatibility complex molecules. // Mol. Medicine, 2003, 81, 12.-P.757-765.

235. Nakayasu H., Ueda K. Association of actin with the nuclear matrix from bovine lymphocytes. //Exp. Cell Res.— 1983.— 143, N 1,— P. 55—62.

236. Natoli G., Costanzo A., Guido F., et al. Apoptotic, non-apoptotic, and anti-apoptotic pathways of tumor necrosis factor signaling. // Biochem. Pharmacol.- 1998,- 56.- P.915-20.

237. Negoescu A., Lorimier P., Labat-Moleur F. et al. TUNEL: Improvement and evaluation of the method for in situ apototic cell identification. // BIOCHEMICA. -1997. -No.2.

238. Newrzella D., Stoffel W. Functional analysis of the glycosilation of murine acid sphingomyelinase. //J. Biol. Chem.- 1996,-271,-P.32089-95.

239. Nicholson D.W., Ali A., Thornerberry N.A. Identification and inhibition of the ICE/CED-3protease necessary for mammalian apoptosis. //Nature.- 1995.- 376,- P.37-43.

240. Nicoletti I., Migliorati G., Pagliacci M.C., Grignani F., Riccardi C.A. A rapid and simple method for measuring thymocyte apoptosis by propidium iodide staining and flow cytometry. // J. Immunol. Meth.- 1991,- 139,- P.271-80.

241. Nowak W., Gawlowska M., Jarmolowski A., Augustyniak J. Effect of nuclear matrix attachment regions on transgene expression in tobacco plants. // Acta Biochim. Polonica.-2001.-48, 3.-P.637-46.

242. Owen-Schaub L.B. Fas/Apo-1: A cell surface proteinmediating apoptosis. // Cancer Bull., 1994, 46, 141-5.

243. Pederson Т., Bhorjee J.S. Evidence for a role of RNA in eukaryotic chromosome structure. Metabolicaly stable, small nuclear RNA species are covalently linked to chromosomal DNA in HeLa cells. // J. Mol. Biol.- 1979,- 128, 3.- P.451-80.

244. Pockley A.G. Heat shock proteins in health and disease: therapeutic targets or therapeutic agents? // Exp.Rev.Mol.Med., 2001 Cambridge University Press, http://www-ermm.cbcu.cam.ac.uk/0100355-6a.pdf

245. Puthalakath H., Huang D.C., O'Reilly L.A., et al. The proapoptotic activity of the Bcl-2 family member Bim is regulated by interaction with dynein motor complex. // Mol. Cell.-1999.- 3, 3.-P.287-96.

246. Razin S.V., Chernokhvostov V.V., Roodin A.V., et al. Proteins tightly bound to DNA in the regions of DNA attachment to the skeletal structures of interphase nuclei and metaphase chromosomes. // Cell.- 1981,- 27, 1,- P.65-74.

247. Reed J.C. Mechanisms of apoptosis. // Amer. J. Pathol., 2000, 157, N 5, 1415-30.

248. Reginato M.J., Mills K.R., Paulus J.K., et al. Integrins and EGRF coordinately regulate the pro-apoptotic protein Bim to prevent anoikis. // Nat. Cell Biol.- 2003,- 5 (8).- P. 733-740.

249. Resta R., Thompson L.F. T cell signaling through CD73. // Cell Signal.- 1997,- 9, 2,-P.131-39.

250. Rich A., Nordheim A., Wang A.H.-J. The chemistry and biology of left-handed Z-DNA. // Ann. Rev. Biochem.- 1984,- 53,- P/791-846.

251. Rosenman S.J., Ganji A.A., Tedder T.F., Gallatin W.M. Syn-capping of human T-lymphcyte adhesion/activation molecules and their redistribution during interaction with endothelial cells. //J. Leukoc. Biol.- 1993,-53,-P.l-10.

252. Ruiz-Ruiz C., Robledo G., Font J., Izquierdo M., Lopez-Rivas A. Protein kinase С inhibits CD95(Fas/APO-l)-mediated apoptosis least two different mechanisms in Jurkat T cells. // J. Immunol.- 1999.- 163 P.4737-46.

253. S'yakste N.I., Blokhin D.Yu. Protein composition of DNA-matrix complexes with "strong" and "weak" bond types, izolated from Ehrlich's ascites carcinoma cells. / Transl. Biokhimiya, Plenum Publishing Corp., 1990, p.998-1003.

254. Samali A., Cai J., Zhivotovsky В., Jones D.P., Orrenius S. Presence of a pre-apoptotic complex of pro-caspase-3, HSP60 and HSP10 in the mitochondrial fraction of Jurkat cells. // EMBO J., 1999, 18, 8, 2040-48.

255. Sarker S., Chufoor K., Patel K., et al. Nuclear DNA content using computerized image cytometry of squamous cell carcinomas of the head and neck. // J. Laryngol. Otol., 1997, 111,43-47.

256. Scaffidi C., Fulda S., Srinivasan A., Friesen C., Li F., Tomaselli K.J., Debatin K.M., Krammer P.H., Peter M.E. Two CD95 (APO-l/Fas) signaling pathways. // EMBO J., 1998, 17, 1675-87.

257. Schmitt C.A., Lowe S.W. Apoptosis and therapy. // J. Pathol., 1999,187, 127-37.

258. Schmitt C.A., McCurrach M.E., de Stanchina E., Wallace-Brodeur R.R., Lowe S.W. INK4a/ARF mutations promote lymphagenesis and chemoresistance by disabling p53. // Genes Dev., 1999, 13,2670-77.

259. Searle J., Lawson T.A., Abbott P.J., Harmon В., Kerr J.F.R. An electron microscpe study of the mode of cell death induced by cancer-chemotherapeutic agents in populations of proliferating normal and neoplastic cells. // J. Pathol., 1975,116, 129-38.

260. Sekiguchi J.M., Swank R.A., Kmiek E.B. Changes in DNA topology can modulate in vitrotranscription of sertain RNAP III genes. // Mol. Cell. Biochem.- 1989,- 85,- P. 123-133.

261. Sellers W.R., Fisher D.E. Apoptosis and cancer drug targeting. // J. Clin. Invest., 1999, 104, N 12, 1655-61.

262. Shelton K.R., Guthrie V.N., Cochran D.L/ On the variation of the major nuclear envelope (lamina) polypeptides. //Biochem. Biophys. Res. Comms.- 1980,- 93, 3.-P.867-72.

263. Shtil A. Signal transduction pathways and transcriptional mechanisms as targets for prevention of emergence of multidrug resistance of human cancer cells. // Curr. Drug Targets, 2001, 2, 57-77.

264. Sjakste N., Sjakste Т., Vikmanis U. Role of the ubiquitin-proteasome degradation pathway in carcinogenesis, tumor progression and susceptibility to tumor treatment. // Exp. Oncol.-2002.- 24,- P.243-48.

265. Smith H., Berezney R. DNA-polymerase-D is tightly bound to the nuclear matrix of actively replicating liver. //Biochem. Biophys. Res. Comms.- 1980.- 97, 4,- P. 1541-47.

266. Smyth M.J., Takeda K., Hayakawa Y., et al. Nature's TRAIL on a path to cancer immunotherapy. //Immunity.- 2003,- 18,- 1-6.

267. Snell V., Clodi K., Zhao S., Goodwin R., Thomas E.K., Morris S.W., Kadin M.E., Cabanillas F., Andreeff M., Younes A. Activity of TNF-related apoptosis-inducing ligand (TRAIL) in haematological malignancies. // Br. J. Haematol., 1997, 99, 618-24.

268. Sokolovskaya A.A., Baryshnikov A.Yu., Blokhin D.Yu., Zabotina T.N., Kadagidze Z.G. Programmed cell death and response to anti-cancer drugs. / Europ. J. Pharmaceutical sciences, Sept. 2000, vol.11, P.SI05

269. Sokolovskaya A.A., Blokhin D.Yu., Stepanova E.V., Zabotina T.N., Kadagidze Z.G., Baryshnikov A.Yu. Investigation drug-induced apoptosis in vitro. / 10-th NCI-EORTC symp. on new drugs in cancer therapy, Amsterdam, June 16-19, 1998, p. 114, 437.

270. Sokolovskaya A.A., Mikhailov A.D., Moskovtsev A.A., Eriksson J.E., Blokhin D.Yu. Induction of CD95 resistance leads to multiresistant phenotype. / Proc. 2003 Miami Nature Biotech. Winter Symp., Miami, 2003, Feb. 1-5, p. 112.

271. Sokolovskaya A.A., Zabotina T.N., Blokhin D.Yu., Kadagidze Z.G., Baryshnikov A.Yu. Comparative analysis of apoptosis induced various anticancer drugs in Jurkat cells. / Exp.oncol., 2001, v.23, N 1, p.46-50.

272. Spychala J. Tumor-promoting functions of adenosine. //Pharmacol. Therapeutics.- 2000,87,- P.161-73.

273. Strasser A., harris A.W., Jacks Т., Cory S. DNA damage can induce apoptosis in proliferating lymphoid cells via p53-independent mechanisms inhibitable by bcl-2. // Cell,1994, 79, 329-39.

274. Struchkov V.A., Strazhevskaya N.B., Blokhin D.Yu. Role of specific protein S-S bonds in the quasisubunit structure of chromosomal DNA. / Nuclear Structure and Function, // Eds. J.R.Harris, I.B.Zbarsky, Plenum Press, New York, 1990, p.57-60.

275. Struchkov V.A., Strazhevskaya N.B., Blokhin D.Yu. Role of the disulphide bridges of residual protein in the organization of chromosomal DNA. / Pergamon Press, Biophysics,1995, 40, N 2, p.267-286.

276. Suliman A., Lam A., Datta R., Srivastava R.K. Intracellular mechanisms of TRAIL: apoptosis through mitochondrial-dependent and -independent pathways. // Oncogene, 2001, 20, N 17, 2122-33.

277. Syeed S.A., Vohra H., Gupta A., Ganguly N.K. Apoptosis: Molecular machinery. // Curr.Science, 2001, 80, N 3, 349-60.

278. Tatchell K., Van Holde K.E. Compact oligomers and nucleosome phasing. // Proc. Natl.

279. Acad. Sci. USA.- 1978,- 75, 8,-P.3583-87.

280. The Proteasome-Ubiquitin Protein Degradation Pathway / P. Zwickl and W. Baumeister eds., Springer Verlag.- 2002,- ISBN 3-540-43096-2

281. Thornberry N.A., Lazebnik Y. Caspases: Enemies within. // Science.- 1998,- 281.- P. 1312-15.

282. Trapani J.A. Granzymes: a family of lymphocyte granule serine proteases. // GenomeBiol., 2001, 2 (12), rev.3014.1-7.

283. Trauth B.C., Klas C., Peters A.M., et al. Monoclonal antibody-mediated tumor regression by induction of apoptosis. // Science.- 1989, 245,301-5.

284. Tsujimoto Y. // Role of Bcl-2 family proteins in apoptosis: apoptosomes or mitochondria? // Genes Cells, 1998, 3, 697-707.

285. Uchiumi Т., Kohno K., Tanimura H., Matsuo K., Sato S., Uchida Y., Kuwano M. Enhanced expression of the human multidrug resistance 1 gene in response to UV light irradiation. // Cell Growth Diff., 1993, 4, 147-57.

286. Ujhazy E.S., Berleth J.M., Pietkiewich H., et al. Evidence for the involvement of 5'-nucleotidase (CD73) in drug resistance. // Int. J. Cancer.- 1996,- 68, 4,- P.493-500.

287. Van Engeland M., Nieland L. J., Ramaekers F. C., Schutte В., and Reutelingsperger C. P. Annexin V-affinity assay: a review on an apoptosis detection system based on phosphatidylserine exposure. // Cytometry.- 1998. 31. P. 1-9.

288. Van Loo G., Saelens X., van Gurp M., MacFarlane M., Martin S.J., Vandenabeele P. Therole of mitochondrial factors in apoptosis: a Russian roulette with more than one bullet. // Cell Death Differ.- 2002,- 9.- P. 1031-42.

289. Verhagen A.M., Vaux D.L. Cell death regulation by the mammalian IAP antagonist Diablo/Smac. // Apoptosis.- 2002,- 7.- P. 163-6.

290. Vidalain P.O., Azocar O., Servet-Delprat C., et al. CD40 signaling in human dendritic cells is initiated within membrane rafts. // EMBO J.- 2000,- 19,- P.3304-13.

291. Vinograd J., Lebovitz J., Watson R. Early and late helix-coil transition in closed circular DNA. The number of superhelical turns in polyoma DNA. // J. Mol. Biol.- 1968,- 33, 1.-P.173-197.

292. Viola A., Schroeder S., Sakakibara Y., Lanzavecchia A. T lymphocyte costimulation mediated by reorganization of membrane microdomains. // Science.- 1999.- 283,- P.680-682.

293. Vogelstein В/? Kinzler K.W. The multistep nature of cancer. // Trends Genet.- 1993,- 9,-P. 138-42.

294. Walczak H., Miller R.E., Ariail K,. et al. Tumoricidal activity of tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand in vivo. // Nature Medicine.- 1999,- 5 (2).- P. 157-163.

295. Wallace-Brodeur R.R., Lowe S.W. Clinical implications of p53 mutations. // Cell Mol. Life Sci.- 1999.- 55, P. 64-75.

296. Wang J. C. Superhelical DNA//Trends Biochem. Sci.— 1980,— 5, 1.— P. 219—221.

297. Wang X. The expanding role of mitochondria in apoptosis. // Gen. Develop.- 2001,- 15,-P. 2922-33.

298. Waring M. Binding of drugs to supercoiled circular DNA: evidence for and against intercalation. // Progr. Mol. Subcell. Biol. / Springer-Verlag-Berlin, Heidelberg, New York, 1971,-2,-P.216-315.

299. Watson J.D., Crick F.H.C. A structure for Deoxyribose Nucleic Acid. // Nature.- 1953,-171.-P.737-738.

300. Weinberg R.A. How cancer arises. // Sci. American.- 1996,- 275, 3,- P.62-70.

301. Welsh R.S., Vyska K. Organization of highly purified calf thymus DNA. // Biochim. Biophys. Acta.— 1981,—655, N 3,—P. 291—306.

302. Willis S., Day C.L., Hinds M.G., Huang D.C.S. The Bcl-2-regulated apoptotic pathway. // J. Cell Sci.- 2003,- 116, 20,- P. 4053-56.

303. Wojcik C. Proteasomes in apoptosis: villains or guardians? // Cell. Mol. Life Sci., 1999, 56, 908-17.

304. Wu M., Xu L.-G., Li X., Zhai Z., Shu H.-B. AMID, an apoptosis-inducing factor -homologous mitochondrion-associated protein, induces caspase-independent apoptosis. // J. Biol. Chem., 2002, 277, N 28, 25617-23.

305. Wunderlich F., Berezney R., Kleinig H. The nuclear envelope: an interdisciplinary analisis of its morphology, composition and function. // In: "Biological membranes" / D.Chapman, D.F.H.Wallach, eds. NY, Acad. Press.- 1976,- 3.- P.241-333.

306. Wunderlich F., Giese G. The nuclear matrix: modulator of membrane fluidity? // In:"International Cell Biology 1980-1981"/ H.G.Schweiger ed., Springer-Verlag-Berlin, Heidelberg.- 1981.-P.205-13.ч

307. Wunderlich F., Herlan G. A reversibely contractile nuclear matrix. Its isolation, structure and composition. // J. Cell Biol.- 1977.- 73, 2,- P.271-78.

308. Xanthoudakis S., Nicolson D.W. Heat-shock proteins as death determinants. // Nat. Cell Biol., 2000, 2, 9, El63-3.

309. Yonehara S., Ishii A., Yonehara M. A cell killing monoclonal antibody (anti-Fas) to cell surface antigen co-down-regulated with the receptor to tumor necrosis factor. // J.Exp.Med., 1989,169, 1747-56.

310. Yonehara S., Nishimura Y., Kishi S., Ishii A. Expression and function of apoptosis antigen Fas on T-cells in thymus and peryphery. // Tiss. Antigens, 1993, 42, 253.

311. Yuing C., Gorski J. DNA topology regulates rat prolactine gene transcription. // Mol. Cell. Endocrinol.- 1994,- 99,- P.183-192,

312. Zamzami N., Kroemer G. The mitochondrion in apoptosis: how Pandora's box opens. // Nature Rev. Mol. Cell. Biol., 2001, 2, 67-71.

313. Zhivotovsky В., Orrenius S. Defects in the apoptotic machinery of cancer cells: role in drug resistance. // Seminars in Cancer Biol., 2003,13, 125-34.

314. Zimmermann H. 5'-Nucleotidase: molecular structure and functional aspects. // Biochem. J.- 1992,- 285,- P.345-65.