Разработка и совершенствования средств и методов экстренной постэкспозиционной защиты центральной нервной системы животных от вируса бешенства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат ветеринарных наук Лебедько, Евгений Иванович

• Лебедько, Евгений Иванович
• кандидат ветеринарных наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Лебедько, Евгений Иванович

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Эпидемиологическое и эпизоотологическое значение бешенства в инфекционной патологии человека и животных.

2.2. Ситуация и особенности бешенства в современном мире.

2.3. Чувствительность животных и человека к бешенству, биологические хозяева, источники и резервуар возбудителя инфекции.

2.4. Характеристика возбудителя.

2.5. Патогенез бешенства.

2.6. Инкубационный период и формы клинического проявления болезни.

2.7. Иммунитет при бешенстве.

2.8. Специфические средства профилактики и методы их применения при экстренной (постэкспозиционной) защите ЦНС животных и человека от внедрения вируса бешенства.

2.9. Неспецифические коммерческие противовирусные препараты и перспективы их использования для защиты животных при бешенстве.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и совершенствования средств и методов экстренной постэкспозиционной защиты центральной нервной системы животных от вируса бешенства»

Актуальность темы

Бешенство или гидрофобия (Rabies - лат., Lyssa - греч., Tollwut - нем., La Rage - франц., Rabies- англ., La Rabbia- итал.) - древнейшая неизлечимая, нейровирусная болезнь человека и животных, с раневым механизмом передачи вируса от животных к животным и от животных к человеку (Груздев К.Н., Недосеков В.В., 2001; Knobel D.L. et al, 2005).

Ежегодно в мире за антирабической помощью обращается более 12 млн. человек. Более 50 тыс. человек и около 1 млн. животных погибают после укусов бешеными животными. Для более 3 миллиардов людей существует угроза подвергнуться нападению бешеных животных (Rotivel V. Et al, 1998; WHO technical report series, 2004; Бюл. ВОЗ 7.12, 2007).

В РФ ситуация по бешенству также продолжает оставаться напряженной с тенденцией к ухудшению эпизоотической и эпидемиологической обстановки (Бешенство в РФ. Информационный билютень, Москва, 2006; Хисматуллина Н.А. с соавт., 2005; Мовсесянц А.А., 2005).

Защищенность людей от этой смертельной вирусной инфекции во многом определяется частотой случаев бешенства среди животных, живущих рядом с человеком, а защищенность самих животных - от эффективности иммунизации антирабическими вакцинами.

Согласно действующим инструкциям антирабические вакцины, в частности из штамма Щелково-51, применяются не только для профилактической (предэкспозиционной), но и при вынужденной двукратной иммунизации, которую начинают проводить не позднее 48 часов после возможного инфицирования животных. Фактически её осуществляют во время инкубационного периода болезни, продолжительность которого позволяет создавать, при своевременной вакцинации, состояние э невосприимчивости ЦНС к вирусу бешенства до его проникновения в этот орган. Однако, при несвоевременном обращении за помощью, а также при многочисленных укусах опасной локализации существует угроза опережающего продвижения возбудителя болезни к ЦНС и развития последствий, в результате которых жертвы перед гибелью становятся опасными источниками инфекции.

Такая возможность обуславливает необходимость разработки и совершенствования средств и методов экстренной (постэкспозиционной) защиты ЦНС ценных и редких животных от вируса бешенства. Целесообразность проведения исследований в этом направлении признана и экспертами ВОЗ по бешенству. При этом ими отмечается необходимость «разработки недорогих эффективных схем постэкспозиционной вакцинации ценных (домашних и диких) животных, с возможным применением антирабических антител и неспецифических противовирусных препаратов (Комитет экспертов ВОЗ по бешенству; 8 доклад - Женева, 1994).

Актуальным остается вопрос о механизме защиты «забарьерного органа» - ЦНС от вируса бешенства.

Новая гипотеза (Иванов B.C., Самуйленко А.Я., 2001), предполагающая возможность нетрадиционного дистантного воздействия антител и «неких» растворимых факторов, способных проникнуть в забарьерный орган, на клетки ЦНС, многое объясняет, но из-за отсутствия экспериментальных доказательств остается невостребованной. Результаты нашего поиска подходов к решению обозначенных выше актуальных проблем представлены в соответствующих главах настоящей работы.

Цели и задачи исследований

Цель исследований:

1. Разработать и совершенствовать технологию получения и применения специфических средств экстренной защиты ЦНС животных от вируса бешенства;

2. Определить перспективы применения неспецифических противовирусных препаратов для экстренной защиты ЦНС животных от возбудителя бешенства;

3. Провести поиск нетрадиционных и экспериментальных подходов к решению проблемы экстренной защиты ЦНС животных и человека от вируса бешенства.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Разработать доступный рациональный способ получения высокоактивной, стабильной при хранении, стандартизированной антирабической сыворотки;

2. Определить время проявления её протективной активности на уровне ЦНС, при подкожной и внутримышечной инокуляции животным;

3. Определить уровень защиты ЦНС животных от вируса бешенства в зависимости от дозы вводимых им подкожно вируснейтрализующих антител;

4. Изучить влияние сывороточных антирабических антител на развитие поствакцинального иммунитета при двукратной вакцинации животных в зависимости от дозы и времени введения антител;

5. Изучить динамику проявления иммуногенности отечественной антирабической вакцины «Рабикан» в процессе её пятикратной (в 0-ой, 3-ий, 7-ой, 14-ый, 30-ый день) инокуляции белым крысам и мышам, предварительно иммунизированных в 0-вой день антирабической сыворотки;

6. Исследовать эффективность комбинированного и раздельного применения коммерческих неспецифических противовирусных препаратов 7 амиксина и рифампицина для защиты ЦНС животных от возбудителя бешенства;

7. Изучить влияние амиксина и рифампицина на развитие антирабического поствакцинального иммунитета;

8. Исследовать эффективность комбинированного применения неспецифических (амиксина и рифампицина) и специфических (антирабической вакцины) средств при экстренной защите ЦНС животных от вируса бешенства;

9. Исследовать возможность дистантного воздействия антирабической сыворотки на репродукцию вируса бешенства в чувствительных клетках in vitro.

Научная новизна

Впервые, с применением отечественных антирабических вакцин из вируса бешенства шт. «Щелково- 51», разработан эффективный способ получения стабильной при хранении стандартизированной сухой антирабической сыворотки крупного рогато скота, обладающей выраженной вируснейтрализующей in vitro и протективной активностью на уровне ЦНС.

Впервые получены и представлены данные характеризующие динамику проявления позитивных и негативных последствий пассивной иммунизации на развитие поствакцинального иммунитета и защищенность ЦНС животных от вируса бешенства.

Впервые показано, что экстренная защита ЦНС от вируса бешенства может проводиться по схеме, предусматривающей интрацеребральное введение животным отечественной инактивированной антирабической вакцины «Рабикан» и подкожно инокуляцию им комплексных коммерческих неспецифических препаратов - амиксина и рифампицина.

Практическая значимость работы

Разработан доступный экономичный способ получения высокоактивной антирабической сыворотки крови крупного рогатого скота и изготовления из неё стандартизированного стабильного при хранении сухого антителосодержащего антирабического препарата, обладающего выраженной вируснейтрализующей (in vitro) и протективной (in vivo) активностью.

Полученные результаты нашли своё отражение в перечисленных ниже технических документах:

1. Технические условия на референс - сыворотку антирабическую сухую (ТУ 9388-131-00494189, согласованных с заместителем руководителя Россельхознадзора 3 марта 2008 года);

2. Инструкция по изготовлению референс — сыворотки антирабической сухой, утвержденной директором ВНИТИБП 12 ноября 2007 г.;

3. Инструкция по применению референс - сыворотки антирабической сухой, утвержденной заместителем руководителя Россельхознадзора 3 марта 2008 г.

Проведенные исследования позволили также аргументировать целесообразность использования сыворотки крови крупного скота антирабической сухой для экстренной постэкспозиционной защиты ЦНС ценных животных от вируса бешенства и конкретизировать схему применения этого антителосодержащего антирабического препарата в комбинации с антирабическими вакцинами, в частности, изготовленными из вируса бешенства штамм Щелково -51.

Предложенная нами технология позволяет получать сухую антирабическую сыворотку крови крупного рогатого скота, которая является однородным, высокостабильным вируснейтрализующим препаратом, обладающим выраженной протективной активностью на уровне ЦНС в первые часы и дни после её подкожного введения животным в комбинации с антирабической вакциной, изготовленной из вируса бешенства штамм Щелково -51, или без нее.

Экстренную постэкспозиционную иммунизацию животных целесообразно проводить по схеме рекомендованной ВОЗ для людей, предусматривающей однократную инъекцию антител и пятикратное введение антирабической вакцины.

Экстренная защита животных от бешенства может основываться на интрацеребральном введении им антирабической вакцины «Рабикан», подкожной инокуляции амиксина и рифампицина, и последующей вакцинации согласно действующим наставлениям.

Антирабическая сыворотка крови крупного рогатого скота может воздействовать дистантно на накопление антигена вируса бешенства в монослойной культуре клеток ВНК-21.

Основные положения выносимые на защиту

1. Предложенная нами технология позволяет получать сухую антирабическую сыворотку крови крупного рогатого скота, которая является однородным, высокостабильным вируснейтрализующим препаратом, обладающим выраженной протективной активностью на уровне ЦНС в первые часы и дни после её подкожного введения животным в комбинации с антирабической вакциной, изготовленной из вируса бешенства штамм Щелково - 51, или без нее.

2. Экстренную постэкспозиционную иммунизацию животных целесообразно проводить по схеме рекомендованной ВОЗ для людей, предусматривающей однократную инъекцию антител и пятикратное введение антирабической вакцины.

3. Экстренная защита животных от бешенства может основываться на интрацеребральном введении им антирабической вакцины «Рабикан», подкожной инокуляции амиксина и рифампицина, и последующей вакцинации согласно действующим наставлениям.

4. Антирабическая сыворотка крови крупного рогатого скота может воздействовать дистантно на накопление антигена вируса бешенства в монослойной культуре клеток ВНК-21.

Апробация

Основные положения диссертационной работы отражены в итоговых отчетах ГНУ ВНИИТБП за 2006-2009 гг. Материалы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета ГНУ ВНИИТБП (2006-2009 гг.) а также на Международной конференции «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов» 20-21 декабря 2007 года (Щелково, 2007 г.), на конференции молодых ученых Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К.И. Скрябина, 17 марта 2008 года (Москва, 2008 г.).

Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 4 статьи, в том числе 1 -публикация в журнале, рекомендованном ВАК РФ «Ветеринарная медицина» №2 - 3.

Объем и структура работы

Диссертационная работа изложена на 108 страницах и включает: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты собственных исследований, обсуждение, выводы, практические предложения и список литературы, содержащий 120 источников. Работа иллюстрирована 13-тью таблицами и дополнена приложениями.

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Лебедько, Евгений Иванович

5. Выводы

1. Разработана технология получения и применения сухой антирабической сыворотки крупного рогатого скота для экстренной постэкспозиционной защиты ценны и редких животных от вируса бешенства.

2. Антирабическая сыворотка крупного рогатого скота является однородным, высокостабильным вируснейтрализующим препаратом, обладающим выраженной протективной активностью на уровне ЦНС в первые часы и дни после её подкожного введения животным, в комбинации с антирабической вакциной из вируса бешенства штамм Щелково - 51, или без неё.

3. Отрицательным последствием применения антирабической сыворотки при вакцинации животных по применяемой для людей схеме (0, 3, 7, 14, 30) является «провал» поствакцинального иммунитета на 7-ой или 14-й день, который характеризуется практически полным исчезновением антител из крови животных и многократным снижением резистентности их ЦНС к возбудителю бешенства. Однако, негативное влияние пассивной иммунизации на развитие активного иммунитета преодолевается через 15 дней после 5-й вакцинации.

4. Применение антирабической сыворотки в сочетании с антирабической вакциной является важным условием спасения редких и ценных животных от бешенства. Очевидно также, что иммунизацию животных целесообразно проводить по схеме, рекомендуемой ВОЗ для людей, которая предусматривает однократную инъекцию им антител и последующую вакцинацию в 0, 3, 7, 14 и 30-й день.

5. Антирабическая вакцина «Рабикан», изготовленная из вируса бешенства штамм «Щелково - 51», начинает защищать ЦНС от вируса бешенства уже через 3-е суток после её введения в этот орган. В течение последующих 2-3-х суток ЦНС животных приобретает практически полную невосприимчивость, по крайней мере, к 10-15 ЛД5о вируса бешенства. Такой способ использования антирабической вакцины, в комплексе с неспецифическими препаратами - амиксином и рифампицином, может найти практическое применение в качестве запасного варианта, когда нет возможности по каким-либо причинам осуществлять экстренную защиту ценных животных от бешенства путем сочетания пассивной и активной иммунизации.

6. Антирабическая сыворотка крови животных может воздействовать на систему вирус - клетка через кварцевую мембрану и снижать накопление антигена вируса бешенства в культуре клеток ВНК — 21. Эти результаты могут служить свидетельством справедливости основного положения известной гипотезы, предполагающей, что защита (невосприимчивость) ЦНС к вирусу бешенства индуцируется дистантным (бесконтактным) воздействием антител на клетки ЦНС и опосредуется энерго — информационным полем специфических антител, циркулирующих в кровеносных сосудах ЦНС.

6. Практические предложения

1. Экстренную постэкспозиционную защиту ценных и редких животных от бешенства рекомендуется осуществлять по схеме ВОЗ, применяемой для людей, предусматривающей однократную инъекцию лошадиного антирабического иммуноглобулина в дозе 40 МЕ/кг и пятикратное введение антирабической вакцины в 0-вой, 3-ий, 7-ой, 14-ый и 30-ый день.

2. В качестве стандартизированного более экономичного и доступного антирабического антителосодержащего препарата для экстренной пассивной иммунизации ценных и редких животных предлагается применять высушенную сыворотку крови крупного рогатого скота, полученную в результате двукратной иммунизации животных антирабической вакциной, содержащей в своем составе инактивированный вирус бешенства штамм Щелково - 51 и сапонин.

3. При отсутствии препаратов, содержащих антирабические антитела, экстренная постэкспозиционная защита животных от бешенства может быть осуществлена путем интрацеребрального введения им антирабической вакцины «Рабикан», подкожной инокуляции амиксина и рифампицина и последующей вакцинации согласно действующим инструкциям.

4. Полученные нами результаты подтверждают возможность бесконтактного (дистантного) воздействия антирабических антител на репродукцию вируса бешенства в чувствительных клетках, указывают на перспективность исследований, направленных на создание средств, способных изменять, усиливать или, наоборот, гасить излучение биологических объектов. Представляется, что работа в этом направлении может привести к новым практическим решениям, идеям, предложениям в самых разных областях науки.

7. Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Иванов И.В., Бронникова В.В., Лебедько Е.И., Елизова Н.А. Эффективность комбинированного применения амиксина и рифампицина при защите ЦНС животных от вируса бешенства. Мат. Международной научно-практической конференции, посвящ. 80-летию И.А. Хорькова, Щелково, 2006, 62-64.

2. Иванов B.C., Иванов И.В., Лебедько Е.И. Применение специфических и неспецифических препаратов при защите центральной нервной системы животных от вируса бешенства. Мат. Международной научно-практической конференции (20-21 декабря 2007 г.) Щелково 2007. Стр. 90-95

3. Лебедько Е.И., Иванов B.C., Иванов И.В., Масимов Н.А. Применение специфических и неспецифических препаратов при защите центральной нервной системы животных от вируса бешенства. - Ветеринарная медицина.-2008, №2-3-стр. 17-19.

4. Д.А. Салов, И.В. Иванов, B.C. Иванов, Н.М. Пухова, Е.И. Лебедько, ИЛ. Беро. Иммуногенность отечественной низкодозной жидкой антирабической вакцины, «УНИРЭВ» в процессе хранения. Мат. Международной научно-практической конференции, «Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов, посвященной 40-летию Всероссийского научно - исследовательского и технологического института биологической промышленности». Щелково, 2009, стр. 175-179.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Лебедько, Евгений Иванович, 2010 год

1. Абрамова Т.Я., Абрамов В.В., Кожевников B.C. с соавт. Зависимость иммунологических параметров от неврологической памяти у здоровых людей. Гл. Иммунология, 2000, 2, 50-51.

2. Авилов В.М., В.А. Седов, А.С. Коломыщев, В. А. Ведерников, П.Н. Пытал ев, A.M. Голюкин, Г.В. Хахин. Необходим учет новых особенностей эпизоотологии бешенства. Ветеринария, 1998, №6.

3. Апалкин В.А., Ведеркников В.А., Балдина И.В., Яременко Н.А., Гулюкин A.M. Ветеринария, 2004, 12, 3-7.

4. Бредберн М. Концепция гематоэнцефалического барьера. Москва. Медицина. 1983. 480.

5. Бюллетень ВОЗ №49/50, За 7.12.2007, 82, 425-436

6. Бюллетень ВОЗ о распространении заболевания бешенством в мире. 1996, 4, 20-23.

7. Бюллетень ВОЗ о распространении заболевания бешенством в мире. 1995,4, 19-21.

8. Ведерников В.А., Седов В.А., Ивановский Э.В,. Бешенство животных. Москва, «Колос», 1974, 9-91.

9. Ганнушкина И.В. Иммунологические аспекты травмы и сосудистых поражений головного мозга. Москва. Медицина. 1974, 199.

10. Грибенча С.В., Новицкий Ю.А. Бешенство как экспериментальная модель изучение вопросов нейроиммунологии. Аллергология и иммунологи, 2004, т.5, 1,207-209.

11. Грибенча С.В. Бешенство. Медицинская вирусология. Москва, 2008, 586-593.

12. Грибенча С.В. Современные аспекты биологии и профилактики лиссавирусных инфекций. Дисс. на соискание ученой степени доктора медицинских наук, Москва, 1993.

13. Груздев Л.К., Уласов В.И., Груздев К.Н. Экология вируса бешенства и проблемы контроля заболевания «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных». Троицк, 2000, 155.

14. Груздев К.Н., Недосеков В.В. Бешенство животных. Москва «Аквариум», 2001, 303.

15. Гурвич А.Г. Теория биологического поля. Москва, 1944, 155.

16. Гурвич А.Г. Понятие «целого» в свете теории биологического поля. Вкн. Работы по митогенезу и теории биологического поля. Москва. 1947, 141147.

17. Гурвич А.Г., Залкина С.Я., Песочинский Б.С. Учение о раковом тушителе. 1947, 100.

18. Гурвич А.Г., Еремеев В.Ф., Корабчевский Ю.А. Энергетические основы митогенетического излучения и его регистрации на фотоэлектронных умножителях. Москва, 1974, 95.

19. Дудел Дж., Рюэгг И., Шмидт Р., Яниг В. Физиология человека. Москва, «Мир», 1985, 250-264.

20. Журавлев А.И., Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение. Москва, 1975, 127.

21. Иванов B.C., Самуйленко А.Я. К вопросу защиты ЦНС от вируса бешенства и её роли в этом процессе. Мат. Международной н.-п. конференции «Нейроинфекции», г. Покров, 2001, с.53-56.

22. Иванов А.В., Хисматуллина Н.А., Юсупов Р.Х., и др. Эпизоотолого-эпидемиологический надзор за бешенством; методическое руководство. Мин-во сельского хозяйства РФ. Казань. 2006.

23. Иванов B.C., Кузнецов П.П., Школьников Е.Э. Состояние и перспективы борьбы с бешенством животных и человека. Ж. Вестник

24. Иванов B.C. К вопросу о механизме защиты ЦНС от вируса бешенства. Тез. доклада междунар. Конференции «Современные проблемы рабиологии». М. Институт полиомиелита и вирусных энцефалитов. 1988, 22-23.

25. Иванов B.C. К вопросу предэкспозиционной и постэкспозиционной иммунологии животных против бешенства. Докл. Конф. Посвящ. 100 летию открытия вируса ящура. Владимир.1997, 188.

26. Иванов А.В., Хисматуллина Н.А., Юсупов Р.Х., Чернов А.Н. Диагностика и профилактика бешенства животных. Москва. 2007.

27. Иванов B.C., Иванов И.В., Самуйленко А.Я. с соавт. Вакцина антирабическая для животных. (УНИРЭВ). Патент на изобретение № 2366457, 2008.

28. Иванов B.C., Самуйленко А.Я., Кузнецов П.П., Иванов И.В. Перспективы использования индукторов интерферона для повышения эффективности специфических средств экстренной профилактики бешенства.

29. Сб. статей международной научно-практической конференции «Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными экзотическими и зооантропонозными болезнями животных», Покров, 2000, 221-224.

30. Информационный бюллетень. Бешенство в РФ в 2000-2005 годах. Москва, 2006.

31. Казначеев В.П., Шурин С.П., Михайлова Л.П. Открытие №122. Дистантные межклеточные взаимодействия в системе двух тканевых культур. Офиц.бюлл. комитета по делам изобретений и открытий при совете Министров СССР. 1973, №19,3.

32. Карпов С.П., Прегер С.М., Синельников Г.Е., Федоров Ю.В. Антирабический гамма-глобулин. КН. Гипериммунные сыворотки. Томск. 1976, 298-309.

33. Колабеков М.И. Бешенство животных в Северо-Кавказском регионе. Вестник ветеринарии, 1998, 4, 19-21.

34. Комитет экспертов ВОЗ по бешенству 8-й доклад. Женева, 1994.

35. Крупальник В.Л., Нагасингхе Сампат. Бешенство животных. Лекция, Москва, 2005, 40.

36. Логинова С.Я., Ковальчук А.В., Борисевич С.В. с соавт. Изучение эффективности амиксина при экспериментальной хантавирусной инфекции. Вопр. Вирус., 2002, №5, 25-29.

37. Малашхия Ю.А., Геладзе М.Г. К иммунологической функции микроглии. Вкн современные проблемы физиологии нервной и мышечной систем. Тбилиси. 1985.

38. Малашхия Ю.А., Ратиани Л.Н., Чейшвили Л.Д. Состояние Т- и В-систем иммунитета в нормальной спинномозговой жидкости у людей различных возрастных групп. М. Невропат. И психиатр, 1978. № 11, 16491652.

39. Малашхия Ю.А. Иммунный барьер мозга. Москва. Медицина. 1986. 155.

40. Марченко И.С. Влияние растений через излучения. Брянск. 1978, 120.

41. Машковский М.Д. Лекарственные средства издание 13-ое, т. 2, Харьков, 1998, 341-342.

42. Медуницын Н.В, Вакцинология, Москва, 1999, 63.

43. Методы лабораторных исследований по бешенству. 3-е издание ВОЗ, 1975, 297-303.

44. Михайлова Л.П., Казначеев В.П., Шурин С.П. Информационная роль сверхслабых световых потоков в биологических системах. Вкн. Вопросы биофизики. Новосибирск, 19667, 25-30.

45. Мовсесянц А.А. Вопросы экстренной профилактики бешенства. Medi.ru «Подробно о лекарствах» Бюллетень вакцинация. Бешенство, №1, (37), январь февраль 2005.

46. Недосеков В.В., Вишняков И.Ф., Груздев К.Н. Изучение влияния антигена на формирование антирабического иммунитета. Мат. Международной научно-практической конференции посвящена 40-летию ВНИИВВиМ. Покров, 1998, 239.

47. Немечек С. Введение в нейробиологию. Прага. Авиценум. 1978, с. 413.

48. Николлс, Джг, Мартин А.Р., Валлас Юж. В., Фукс П.А. От нейрона к мозгу, перевод с 4-го английского издания. Москва, 2003, 670.

49. Носик Н.Н., Косякова Н.П. Противовирусный иммунитет. Кн. Медицинская вирусология, МИА, Москва, 2008, 92-101.

50. Орлякин Б.Г. Противовирусный иммунитет. Труды международной научно-проивод. конференции, посвященной 50-летию ВНИИВВиМ, Покров, 2008, 176-183.

51. Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Роль денатурированных клеток в регуляции иммунного ответа. М. Иммунология. 2002, 5. 313-321.

52. Петров Р.В., Дурянин Р.А., Василенко A.M. с соавт. Эндорфиноподобные свойства костномозгового стимулятора антиридуцентов. Доклад акад. Наук СССР, 1982, т. 265, 2, 501-503.

53. Полюшкина Г.С., Горкунов А.А. эпизоотологическая ситуация по бешенству в Московскойц области и пути её улучшения. Вопросы вирусологии, 1998, 1, 47-48.

54. Пухов В.А., Иванов B.C. О спонтанном сверхслабом свечении культуры клеток ВНК-21/13, инфицированных вирусом бешенства. Мат. 4-ой всесоюзной вирусол. конференции «Актуальные вопросы ветеринарной вирусологии». Владимир. 1976, ч.2, 152-153.

55. Родни Уиллоби. Излечимо ли бешенство? Ж. В митре науки (08), август 2007, 41-47.

56. Романцов М.Г., Ершов Ф.И., Голубев С.Ю. с соавт. Индукторы интерферона. Ж. Иммунология. 1998, 6, 43.

57. Селимов М.А. Современная эпизоотологическая ситуация и перспективы элиминации бешенства. Вопрос вирусологии. 1998, №5, 195-198.

58. Селимов М.А. «Бешенство», М. Медицина, 1978.

59. Селькова Е.П., Яковлева В.Н., Симененко Т.А. с соавт. Оценка профилактического эффекта амиксина в отношении острых респираторных инфекций. ЖМЭИ, 2001, 3, 42-46.

60. Тайгомбаева B.C. К оценке различных схем иммунизации людей культуральной антирабической вакциной. Актуал. Вопр. Профилактю инфекц. Заболев. Материалы республиканской научно-практической конференции Фрунзе, 1986, 95-100.

61. Тарусов Б.Н., Доскач Л.Е. Энегоинформационный аспект проблемы адаптации и устойчивости биологических систем. Вкн. Сверхслабые свечения в биологии. Москва. 1969.

62. Тарусов Б.Н., Иванов И.И., Петрусевич Ю.М. Сверхслабое свечение биологических систем. Москва, 1967.

63. Тимофеев — Ресовский И.В., Лучник Н.В. О классификации возможных путей воздействия на общий эффект облучения. Труды и-та биологии УФ АН СССР, 1957, 13, 57-69.

64. Федоров Ю.М., Жилина Н.Я., Хадарцев О.С. с соавт. Информационный бюллетень «Бешенство», Москва, 1999.

65. Феннер Ф. Мак-Ослен Б., Миме С., Сэмбрук Д., Уайт Д. Биология вирусов животных, т.2, М.Мир, 1977, 338-339.

66. Хисматуллина Н.А., Чернов А.Н., Юсупов Р.Х., Равилов А.З., Иванов А.В., Зайдуллин М.Ш. Эпизоотологическая ситуация и профилактика бешенства лисиц на территории Татарстана. Ветеринарный врач 2005, №1, 53-58.

67. Хозинский В.В., Сошенко Ю.В. Механизм иммуносепрессивного действия антирабического иммуноглобулина полученного из сыворотки лошадей. Матер. Научной конференции «Современные проблемы рабиологии»., Москва, 1998, 29-30.

68. Хоитов P.M., Игнатьева Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология, Москва, «Медицина», 2000, главы 7-9.

69. Шевелев А.С. Забарьерные органы и проблема иммунологического надзора. Иммунология. 1984, 3, 5-10.

70. Шестопалов A.M., Рассадкин Ю.Н., Аксенов В.И., Устинова Е.Н. Бешенство в Новосибирской области. Проблемы инфекционной патологии в регионах Сибири и Дальнего Востока: Научная конференция. Новосибирск, 1998, 82-83.

71. Шестовалов A.M., Аксенов В.И., Рассадкин Ю.Н., Устинова Е.Н,. Обстановка по рабической инфекции в Новосибирской области. Журнал Микробиология, 199, 5, 115-116.

72. Шестопалов A.M., Кисурина М.И., Груздев К.Н. Бешенство и его распространение в мире. Гл. Вопр. вирус., 2001, 2, 7-12.

73. Штерн JI.C. Гемато энцефалический барьер. М - JI, Биомедгиз, 1935, 544.

74. Arya S.A. Therapeutic failures with rabies vaccine and RIG. Clin. Infect.Dis.-1999 29 - 6.- P. 1605.

75. Bourhy H., Cowley J.A., Larrous F. et al Phylogenetic relationships among rhabdoviruses inferred using the L-palymerase gene. J Gen. Virol. 2005 V86, 28492858.

76. Cawley R., Heaton P.R. Isolation of European bat lissavirus in the U.K// International Rabies Meeting: Abstrcts. Paris, 1997, 403.

77. Cooper N.R., Nemerow G.R., The role of antibodu and complement in the control of viral infections// Invest. Dermatol.-1984, V. 83, 121-127.

78. Deschaux P. // Neuro immunologie: Le systeme immunitaire est-il orrgane sensorial? // Arch. Int. physoil. et biochim., 1988, 96,3, 78-89.

79. Diggelman H., Weissman C. Rifampicin inhibits focus formation in chick fibroblaste infected whis Rousa sarcoma virus. / Nature, London, 1969, 224, 12771279.

80. Finke S., Konzelmann K.K., Replication strategies of rabies virus// Vir. Res., 2005, Vol. 111-P, 120-131.

81. Gacouin A., Bourhy H. et al. Human rabies despite postexposure vaccination. Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis.-1999, v. 18.- N.3. P. 233.

82. Gribencha S.V., Gribanova L.V., Malkov G.B. et al. population structure of some street rabies virus strains// Arch. Virol., 1989, V 104, 347-350.

83. Jackson A.C., Zhen F.F., Pathogenesis of rabies./ J. Neurovirol- 2005, Vol 11,74-75.

84. Henderson S., Leibnitz G., Turbull M. et al False positive human immunodeficiency virus seroconversion is not incommon following rabies vaccination // Clin. Diagn. Immunol. - 2002, V4, 942-943.

85. Hooper D.G. The rade of immyne responses in the patologenesis of rabies. J. Neurovirol. 2005. Vol. 11, 88-92.

86. Hooper P.T. A new Lyssavirus — the first endemic rabies related virus recognired in Australia// Bull. Just. Pasteur., 1997, V. 95, 4. 2009-2018.

87. Kim I.J., Flano E., Woodland D.L., Blackman M.A.// Antibody- mediated contol of persistent gammaherpesvirus infection// J. Immunol-2002, V.168, 8. 39583964.

88. Knobel D.L. et al. Переоценка бремени бешенства в Африке и Азии. Бюллетень ВОЗ, 2005, 360-368.

89. Krueger R.F., Mayer G.D. Tilorone hydrochloride: an orally active antiviral agent, Science, 169, 1213.

90. Lee B.O., Rangel Moreno J. et al// CD4 T-cell-independent antibody response promotes resolution of primary influenza onfection and helps to prevent reinfection // J. Immunol., 2005, Vol 175, 9, 5827-5838.

91. Leibowitz S., Hughjer R.A. Immunology of the nervous system. London, 1983-p 304.

92. Neri P., Bracci L., Rustici M. et al. Sequence homology between HIV-1 gp 120, rabies virus glucoprotein and snake verom neurotoxine. Is the nicotinic acetylcholine receptor an HIV receptor?// Arch. Virol. -1990-Vol.l90-Vol-l 14-p. 265-269.

93. Popp F. A. Photon Storage in Biologicaal Systems In: Electromagnitis Bio-Information. Proceadisings of the symposium, Marburg, September 5, 1977 -Baltimore, 1979.

94. Renox G., Renox M, Biziere КУ/ Brain neocortex and imuthiol regulate the expression of MHC antigens on mouse T lymphocytes // Immunopharmcol. and Immunotoxicol., 1988, 10№ 2, 219-229.

95. Report of the First WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, Geneva, 16-18 September, 1982.

96. Report of the Second WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, Tonbach, 27-28 may 1984.

97. Report of the Third WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, Paris, 12 June 1985.

98. Report of the Fourth WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, St Simons Island, GA, 26-28 may 1986.

99. Report of the Tifth. WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, Geneva, 3 march 1989.

100. Report of the Sixth WHO Consultation on monoclonal antibodies for rabies diagnosis and reseach, Philadelphia, PA, 2-3 April, 1990.

101. Rotivel V, Goudal M, Wirth S. Rabies is a risk for traveling children. Arch. Pediatr. 1998, № 5, 561-567.

102. Selimov M.A., Tatarov A.G., Botvnkin A.D. / Rabies related Yuli virus identification with a panel of monoclonal antibodies // Acta Virol.-1989, 542-545.

103. Sequetin Cunha Elenice M., Lara Maria do Carmo et al// Jsolamento do virus da raiva em Artibens fimbroitus no Estado de San Paulo// Rev. Saude Publica -2005-39, 4, 683-684.

104. Shlyakhov E., Blancou J., Rubinstein E. Vaccines against anthrax in animals, from Louis Pasteur to our day// Rev. Sci Tech 1996- Vol 25, 3, 853-862.

105. Srinivasan A., Burton E.C., Kuehnert M. et al Transmission of rabies from on organ to four transplantant recipient//N. Engl. J. Med, 2005, V. 352 p. 11031111.

106. Suntha-rasamai P., Warrell M., Viravan charisis et al. Purified chick embryo cell regimen for post-exposure prophylaxis.// Epidemiol, and Indefec., 1987, 99, 3, 755-765.

107. Tordo N., Benmansoor A.,. Calisher C. et al. Rhabdoviridae. In: Virus Taxonomy Eight Report of the International Committee on Taxonomy of Viruses/

108. C.M. Fauguet, М.А. Mayo, J. Maniloff, U. , Desselberger L.A. Ball (eds) Elsevier Academic Press, 2005, 623-644.

109. Tsiand H. Current concepts in rabies// Adv. Virus Res, 1995, V.2.-p.2-3.

110. Veterinary public Health Human rabies in the Americas// Weekly Epidemiol. Rec. WHO, 1995-70, 3, 264-266.

111. Wagner R., Rose S. Rabdoviridae: the viruses and their replication. In. Virology/ B.N. Fields, D.M. Knipe, p.M. Howley (eds). N.Y.: Lippincatt - Raven publ., 1996, 11121-1159.

112. Whitby J.E., Johnstone P., Parsons G. et al/ Ten eyar survey of British basts for the existence of rabies// Veter. Rec. - 1996- Vol. 139, 20,491-493.

113. Wilde H., Sirikawin S. Sabcharoen A. et al. Failure of postexposure treatment of rabies in children. Clin. Infect. Sis.-1996- Vol. 22, p. 228-232.

114. Willoughby R.E., Treves K.S., Hoffman G.M. et al Survival after treatment of rabies with induction of coma// N. Engl. J Med. 2005, Vol. 352, 2508-2410.

115. WHO Expert Consultation on Rabies: first resport. WHO technical report serier.-2004-N 931-18 p.

116. Zinkernagel R.M., La Marre A., Ciurea A. et al// Neutralizing antiviral antibody responses// Abv. Immunol. 2001, Vol. 79, p. 53.1. Инструкция

117. По применению референс-сыворотки антирабической сухой (организация-производитель ВНИТИБП; п. Биокомбинат, Щелковского района1. Московской области)1. Общие сведения.

118. Референс-сыворотка антирабическая сухая.

119. Препарат представляет собой лиофилизированную сыворотку крови крупного рогатого скота, гипериммунизированного инактивированной антирабической вакциной из штамма «Щелково-51». Содержание нейтрализующих антител к вирусу бешенства не ниже ЮМЕ/см3.

120. По внешнему виду референс-сыворотка представляет собой сухую аморфную массу серовато-белого цвета с желтовато-коричневым оттенком легко растворимую в дистиллированной воде.

121. Референс-сыворотка пригодна для применения в течение 5 лет со дня изготовления при условии хранения в сухом, темном помещении при температуре от -20 до -40°С.

122. Восстановленная до исходного объема сыворотка может храниться при -20°С не более года.

123. Флаконы с нарушением целостности, без этикетки, содержащие плесень или посторонние примеси, не разбивающиеся при встряхивании хлопья, с истекшим сроком годности бракуют и утилизируют кипячением в течение 15 мин.1.. Биологические свойства.

124. В реакции нейтрализации (РН) на белых мышах или в культуре клеток определяют и сравнивают конечные разведения испытуемых образцов и референс-сыворотки, обеспечивающие защиту 50% животных от вируса бешенства (KPso)1.I. Порядок применения.

125. Референс-сыворотка предназначена для использования в качестве контроля при определении в сыворотках крови животных специфической активности антирабическихантител в РН в международных единицах.

126. Постановка РН на белых мышах. Подготовка референс-сыворотки.

127. Сухую референс-сыворотку восстанавливают до первоначального объема, указанного на этикетке, стерильной дистиллированной водой, после чего разводят 1:1 ООстерильным физраствором (рН 7,2-7,4). Подготовка испытуемых образцов сыворотки.

128. Испытуемые образцы прогревают в течение 30 минут при 5б°С, а затем охлаждают до 15~20°С.

129. Порядок постановки реакции.

130. КР5о референс-сыворотки и испытуемых образцов рассчитывают по следующей формуле:50. (показатель смертностинепосредственно ниже 50%)lg обратной + г .

131. KPso величины (Показатель (Показатель . х &кРатности' разведенияисходного смертности смертности кразведения непосредственно непосредственновыше 50%) ниже 50%)

132. КР50 антилогарифму полученной величины.

133. Аналогично рассчитывают титр вируса CVS в рабочем разведении, который должен находиться в пределах 30-300 ЛД5о/0,03 см3. Все мыши, инъецированные смесью вируса с разведениями отрицательной контрольной сыворотки должны погибнуть.

134. Специфическую активность сыворотки в международных единицах рассчитывают по формуле:А1. С = ~~ х Y Б

135. А — КР50 испытуемой сыворотки; В КР50 референс-сьшоротки;

136. Y показатель специфической активности референс-сыворотки в международных единицах — МЕ/см3 (указано на этикетке);

137. С показатель специфической активности испытуемой сыворотки в международных единицах — МЕ/см3.

138. Постановка РН в культуре клеток. Реакция нейтрализации проводится в культуре клеток ВНК-21/13 против вируса бешенства штамм CVS-11. Подготовка референс-сыворотки.

139. Восстановленную до исходного объема, указанного на этикетке, стерильной дистиллированной водой референс-сыворотку разводят до активности 0,5 МЕ/см3. Подготовка испытуемых образцов сыворотки.

140. Испытуемые образцы прогревают в течение 30 минут при 56°С, а затем охлаждают до 15-20°С.

141. Порядок постановки реакции.

142. Наблюдение проводят за всей поверхностью каждой лунки. Результат оценивается качественно (плюс или минус): отсутствие флуоресцирующих клеток отрицательная лунка; наличие флуоресцирующих клеток (одна клетка или более) - положительная лунка.

143. Специфическую активность испытуемых сывороток в международных единицах определяют аналогично титрованию на белых мышах.1.. Меры личной профилактики.

144. Реакцию нейтрализации проводят в специализированных лабораториях подготовленные специалисты, вакцинированные против бешенства, с соблюдением техники безопасности.

145. Запрещается прием пищи и воды в помещении, где проводится работа.

146. При попадании компонентов реакции на кожу или слизистые оболочки рекомендуется промыть место контакта большим количеством водопроводной воды с мылом, кожу можно обработать 70% этиловым спиртом.

147. Предметы, контактирующие с вирусом бешенства и зараженными белыми мышами, кипятят в течение 15 минут или дезинфицируют 3% раствором перекиси водорода и моют водой с моющими средствами. Мышей после опыта кремируют.

148. Референс-сыворотку хранят в местах, недоступных для детей.

149. Рекомендовано ФГУ ВГНКИ к регистрации в Российской Федерации. Регистрационный номер ffPjP- У-/, T-JoPjQ1. ОКП 93 8855 СОГЛАСОВАНО:еляпоклонов 200&г.1. Группа Р-31 УТВЕРЖДАЮ:

150. Директор Всероссийского научно-исследоват^янекого-и технологического инся^и^гаЛиологи^еской промьи1. А.Я^Самуйленк : 2007 г.

151. РЕФЕРЕНС-СЫВОРОТКА АНТИРАБИЧЕСКАЯ СУХАЯ

152. ТЕХНИЧЕСКИЕ УСЛОВИЯ ТУ 9388-131-00494i89-051. Срок введения с

153. Без ограничения срока действия1. СОГЛАСОВАНО:

154. Директор ФГУ «Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для^цщотных и кормов»»1. А.Н.Панин1. Ш документеа ;f/.j1. V'XX'V,1. РАЗРАБОТЧИКИ

155. Ведущий научный сотрудник отдела вирусных лекарственных ередств для животных ФГУ ВГНКИ z^py —-— АА.Елаков М ЖЖггууг 4 2007 г.

156. Заведующий отделом противовирусных препаратов ГНУ ВНИТИБП

157. Jj/р у В.С.Иванов «/#у> 2007 г.

158. Ведущий научный сотрудник отдела противовирусных препаратов ГНУ ВНИТИБП

159. Н.М.Пухова «Д МаагуЯс, 2007 г.

160. Аспирант ГНУ* «/Ъ^^Цугуи а,-2007г.1. ИНСТРУКЦИЯ

161. ПО ИЗГОТОВЛЕНИЮ РЕФЕРЕНС-СЫВОРОТКИ АНТИРАБИЧЕСКОЙ СУХОЙ1. Щелково- 2007 г.