Разработка фагоиндикации и усовершенствование идентификации Hafnia Alvei с использованием специфического бактериофага тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Золотухин, Дмитрий Сергеевич

• Золотухин, Дмитрий Сергеевич
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Золотухин, Дмитрий Сергеевич

СОДЕРЖАНИЕ

Введение

1. Обзор литературы

1.1. История открытия и таксономическая характеристика бактерий

На/та аЫег

1.2. Биологические свойства

1.2.1. Морфология

1.2.2. Культуральные свойства

1.2.3. Ферментативные свойства На/та аЬе1

1.3. Эпизоотологические данные и распространение На/та аЬег

1.4. Источники инфекции и пути заражения

1.5. Клиническая картина

1.5.1. Патологоанатомические изменения

1.6. Выживаемость и устойчивость к физико-химическим факторам

1.7. Чувствительность к антибактериальным препаратам

1.8. Диагностика

1.9. История изучения бактериофагов

1.10. Применение бактериофагов в лабораторной практике

1.11. Масс-спектрометрия нуклеиновых кислот в молекулярной

диагностике на основе метода ионизации - МА1Х)1-ТОР

2. Собственные исследования

2.1. Объекты и методы исследований

2.2. Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1. Выделение бактерий На/та аЬе1 из объектов ветеринарного

надзора и патологического материала

2.2.2. Чувствительность к антибиотикам бактерий На/та аЬе1

2.2.3. Поиск бактериофагов На/та аЬег и селекция клонов фагов

2.2.4. Характеристика фагов бактерий На/та д/уе/

2.2.4.1. Морфология негативных колоний

2.2.4.2. Литическая активность бактериофагов На/та аЬе1

2.2.4.3. Диапазон литической активности бактериофагов На/та аЬег

2.2.5. Температурная устойчивость бактериофагов На/та а/уе/

2.2.6. Устойчивость бактериофагов На/та аЬег к воздействию хлороформа

2.2.7. Изменение литической активности гафниозных бактериофагов

при хранении

2.2.8. Специфичность действия бактериофагов На/та я/уе/

2.3. Определение морфологии фаговых частиц Н.аЬе1

2.3.1. Изучение генома бактериофага Н-1 УГСХА

2.4. Разработка технологических параметров изготовления и контроля

индикаторного бактериофага На/та аЬег

2.4.1. Характеристика индикаторного штамма На/та аЬе1

2.4.2. Работа с индикаторным бактериофагом Н-1 УГСХА

2.4.3. Определение оптимального соотношения количества фаговых корпускул и бактериальных клеток для получения фага с высоким титром

2.4.4. Приготовление маточного фага

2.4.5. Контроль фагового препарата

2.5. Разработка схемы ускоренной идентификации бактерий На/та аЬе1

2.6 Идентификация бактерий На/та а/уег масс-спектрометрическим

методом

2.7. Разработка оптимальных условий постановки РНФ

2.7.1. Определение количественного показателя РНФ, имеющего диагностическое значение

2.7.2. Установление оптимального времени, обеспечивающее наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями

2.7.3. Разработка схемы постановки РНФ для индикации бактерий

На/та аЬе1 в объектах ветеринарного надзора

2.7.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной

бактериями На/та а/уе/ с помощью РНФ

бактериями На/та аЬе1 с помощью РНФ

2.7.3.3. Исследование фекалий, контаминированных бактериями

На/та а/уе/ с помощью РНФ

2.7.3.4. Исследование мяса, контаминированного бактериями

На/та аЬе1 с помощью РНФ

2.7.3.5. Исследование трупов пчел в неблагополучной по гафниозу пасеке на присутствие бактерий На/та я/уе/ с использованием

РНФ

Заключение

Выводы

Практические предложения

Перечень сокращений и условных обозначений

Список литературы

Приложения

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка фагоиндикации и усовершенствование идентификации Hafnia Alvei с использованием специфического бактериофага»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. В последние годы значительно возросло количество заболеваний животных и человека, вызванных условно-патогенными микроорганизмами или протекающих с их участием (Золотухин, Каврук, Васильев, 2005). Одним из таких микроорганизмов является представитель семейства Еп-terobacteriaceae относящийся к роду Hafnia с единственным видом Hafnia alvei.

Несмотря на то, что Hafnia alvei известны как маловирулентные представители нормальной микрофлоры слизистых оболоческ и кожи человека и животных, имеются научные данные о том, что они способны вызывать ряд заболеваний у человека, таких как менингит (Mojtabaee, Siadati, 1978), диарею (Жу-магельдина и др., 2006-2009; Washington et al., 1971; Albert et al., 1991), гастоэн-тероколиты, пневмонии, инфекции мочевыводящих путей и другие воспалительные процессы (Ginsberg, Goldsmith, 1988; Washington et al., 1971; Frick et al., 1990), (Fields et al., 1967; Caravalho et al., 1990; Berger, 1977; Albert et al., 1991; Ratnam, 1991; Reina et al., 1993; Ridell et al., 1994).

В 2005-2009 годах были проведены исследования, по результатам которых было предложено гафниоз человека выделить в отдельную нозологическую единицу (Сыздыков, Кузнецов, Жумагельдина, 2009).

З.Т. Жумагельдиной с соавторами было изучено бактерионосительство Н. alvei дикими, сельскохозяйственными и мелкими домашними животными (собаками) на территории Восточного Казахстана; ими доказана природная очаговость инфекции, связанная серыми крыссами (Жумагельдина и др., 2006-2009).

О гафниях, как возбудителях желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных телят и поросят-сосунов сообщают С.Н. Золотухин (2004); С.Н. Золотухин, JI.C. Каврук, Д.А. Васильев (2005).

Имеются отдельные публикации, свидетельствующие о способности гафний вызывать заболевания у беспозвоночных и позвоночных животных (Шуст-рова, Дубровский, 1991; Литвин и соавт., 1996; Кузьмин, Квятковский, 2005; Денисенко, 2006; Ручкин, Евтеева, 2007).

Гафниоз пчел зарегистрирован самостоятельной нозологической едини-

цей как заболевание этих насекомых (другое название - паратиф пчёл) (Полтев, Нешатаева, 1977). Чувствительными к гафниозу являются и осы. Это заболевание распространено во всех странах мира. Гафниоз чахще всего возникает во время зимовки пчел, в конце зимы и ранней весной.

Предрасполагающими факорами возникновения заболевания являются нарушения связанные с содержанием пчелиных семей, а именно - повышенная влажность, низкая температура в гнезде, прохладная и дождливая погода и пр. Особенно тяжелое течение заболевания отмечается при наличии падевого меда и незапечатанных сотах, малом запасе перги (Новиков, 2005). На/та аЬе могут передаваться от неблагополучных по гафниозу пчелиных семей к благополучным с контаминированным медом или пергой, а также через воду в общих поилках, через загрязненные ульи и другой инвентарь, используемый на пасеках. Особенно тяжело протекает заболевание в вышеуказанных случаях, вызывая не только ослабление, но гибель большого количества пчел или даже целых семей. Заражение чаще всего происходит алиментарно через корм и воду, бактерии быстро размножаюются в желудочно-кишечном тракте, вызывая интоксикацию у насекомых, при этом нарушаются процессы расщепления и всасывания питательных веществ, усиливается перистальтика кишечника, которая сопровождается признакам диареи. Затем зозбудитель проникает в гемолимфу, вызывая септицемию, что часто приводит к гибели пчел (Полтев, Нешатаева, 1977).

Успех борьбы с любым инфекционным заболеванием зависит от своевременной диагностики болезни, основой которого является лабораторные исследования. Методы лабораторной диагностики заболеваний вызываемых На/та я/уе/ основаны на стандартных методиках, связанных с выделением чистой культуры возбудителя и изучением их биологических свойств (Золотухин, 2004; Золотухин, Каврук, Васильев, 2005; Сыздыков, Кузнецов, Жумагельдина, 2009). Этот метод трудоёмок, требует затрат большого количества времени, питательных сред и реактивов. Несмотря на сложность и трудоемкость этого метода он не всегда дают реальную картину, достаточную для идентификации возбудителя инфекции.

Имеющиеся на вооружении бактериологов современные методы идентификации микроорганизмов (ИФА, ПЦР, масс-спектрометрия) хотя и являются высокочувствительными и специфичными, но они не доступны рядовым бактериологическим лабораториям из-за высокой стоимости оборудования и расходных материалов.

Поэтому, перед микробиологами стоит задача изыскания более простых и доступных методов индикации и идентификации бактерий На/та а1че1.

Степень разработанности проблемы. В настоящее время в лабораторной практике для детекции и идентификации некоторых видов бактерий успешно используют бактериофаги (Ганюшкин, 1988; Чанишвили и др., 2005; Пожарникова, 2008; Пульчеровская и др., 2009; Караваева, 2012).

Существует методы индикации и идентификации микроорганизмов с помощью специфических бактериофагов (реакция нарастания титра фага, метод «стекающая капля» (Ганюшкин, 1967; Феоктистова, 2006; Шестаков, 2010), метод электрооптического и электроакустического анализа микробных суспензий для детекции микроорганизмов (Караваева, 2012) и т.п. Эти методы специфичны, не требуют больших затрат времени, материалов и специального оборудования (за исключением электрооптического и электроакустического анализа).

К сожалению, биологическая промышленность нашей страны не производит бактериофаги, специфичные в отношении На/та аЬе1, и в арсенале врачей-бактериологов отсутствуют диагностические гафниозные бактериофаги, как следствие этого нет инструктивных документов по их применению. Сложившая в стране выше обозначенная ситуация и послужила основанием для наших исследований.

Цель работы - разработка фагоиндикации и усовершенствование идентификации На/та аЬег с использованием специфического бактериофага.

Задачи исследования:

1. Выделить из патологического материала и объектов внешней среды полевые изоляты На/та аЬег и изучить их основные биологические свойства.

2. Выделить и селекционировать бактериофаги На/та аЬеи

3. Изучить основные характеристики выделенных бактериофагов.

4. Определить оптимальные параметры для изготовления индикаторного бактериофага с высоким титром.

5. Разработать схему ускоренной идентификации На/та аЫе'1 с помощью изготовленного фагового препарата и оптимальные параметры фагоиндикации На/та аЬег в объектах ветеринарного надзора.

6. Провести опыт фагоиндикации На/та в патологическом материале из неблагополучной по гафниозу пасеки.

Научная новизна. Выделены новые штаммы бактериофагов, активные в отношении На/та аЫег. Впервые изучены основные биологические свойства выделенных фагов. Впервые разработаны биотехнологические параметры фа-гоидентификации и фагоиндикации На/та аЫе1 в объектах ветеринарно-санитарного надзора. Доказана эффективность использования селекционированного бактериофага с диагностической целью.

Теоретическая и практическая значимость. Получен штамм бактериофага, который предложено использовать для изготовления диагностического препарата. Разработаны технологические параметры получения диагностического фагового биопрепарата.

В схему бактериологического исследования при диагностике заболеваний, вызываемых На/та аЬе1, внесена фагоидентификация и разработана схема индикации этих микроорганизмов с помощью селекционированного бактериофага.

Создана коллекция гафниозных бактериофагов.

Разработаны «Временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторного бактериофага Н-1 УГСХА» и «Методические рекомендации по индикации и идентификации бактерий На/та акт в объектах санитарного надзора с применением специфического бактериофага», одобренные Научно-техническим советом ФГБОУ ВПО «Ульяновская ГСХА им. П.А. Столыпина» и утвержденные первым проректором-проректором по научной работе В.А. Исайчевым (протокол №3 от 18.06.2013 г.)

Результаты диссертационных исследований вошли в монографию «Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека» в соавторстве (2013), а также используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении лабораторных занятий со студентами факультета ветеринарной медицины ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная академия имени П.А. Столыпина» и ФГБОУ ВПО «Саратовский государственный аграрный университет имени Н.И. Вавилова».

Методология и методы исследования. Основу данного исследования составляют комплексный анализ и системный подход в изучении рассматриваемой темы. При проведении исследований авторами были проведены общенаучные методы: теоректико-методологический анализ литературных источников, эмпирические методы исследования в форме наблюдения, эксперимента, описание, измерение и сравнительно-сопоставительного анализа. Применение указанных методов, а также анализ фактического материала позволил обеспечить объективность полученных результатов и выводов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Из 42 обследованных хозяйств Приволжского Федерального округа Hafnia alvei выделены в 14 (33,3%). Идентифицированные культуры были чувствительны к гентамицину, левомицетину, цефотоксину и устойчивы к тетрациклину, линкомицину, цефозалину, ампициллину, бензилпенициллину.

2. Выделенные и отселекционированные гафниозные бактериофаги имели высокую литическую активность (108-109), разный диапазон литической активности (в пределах 28,6% - 85,7%), обладали строгой видовой специфичностью, были термостабильны и устойчивы к действию хлороформа.

3. По морфологическим характеристикам выделенные бактериофаги было предложено отнести к отряду Caudovirales, семействам Myoviridae и Sifoviridae.

4. Бактериофаг Н-1 УГСХА относится к роду (филогенетической группе) FelixOl- подобных бактериофагов с линейной ДНК размером 86760 п.н. имеет 118 открытых рамок считывания, кодирующих белки размером от 50 до 1400 аминокислотных остатков.

5. Разработанные параметры РНФ с целью ускоренной индикации На/та позволяют обнаружить названные бактерии в концентрации 103 в 1 г исследуемого материала в течение 18-24 часов.

6. Разработанная схема бактериологического исследования с помощью диагностического бактериофага На/та аЬе1 позволяет выделить и идентифицировать названные микроорганизмы за 34 часа.

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы ФГБОУ ВПО «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина» при финансовой поддержке Минобрнауки России в рамках реализации федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России» на 2009 - 2013 годы (соглашение №8267 от 10.08.2012).

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены и обсуждены на 1-ой региональной студенческой научно-практической конференции по природоведению (Ульяновск, 2011), Научно-практическом семинаре с международным участием: «Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности» (Ульяновск, 2011); 1-ом, 2-ом и 3-м этапах Всероссийского конкурса на лучшую научную работу аспирантов вузов МСХ РФ по ветеринарным наукам (Ульяновск, Казань, Москва, 2012); П-ой Международной научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы инфекционной патологии в ветеринарной медицине» (г. Покров, 2012), IV Международной научно-практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2012); Международной научно-практической конференции «Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности» (Ульяновск, 2013).

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 10 работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендованным ВАК РФ, и одна монография.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 119 страницах

машинописного текста, состоит из введения; обзора литературы; объектов и методов исследования; результатов исследований и их обсуждения; заключения; выводов; практических предложений; перечня сокращений и условных обозначений; списка литературы и приложений. Работа содержит 30 таблиц и 14 рисунков. Список литературы составляет 179 наименований, из них 75 - зарубежных авторов.

1. Обзор литературы

1.1. История открытия и таксономическая характеристика бактерий Hafnia alvei

Бактерии рода Hafnia известны более 100 лет. В 1905-1915 гг. их называли Bacillus asciaticus и Bacillus haratyphi alvei (Sakazaki, Tamura, 1991). Современное название рода Hafnia было дано V. Moller в 1954 году (Речкин, Евтеева, 2007), которое произошло от старого названия города Копенгаген. Первые исследования свойств этих микроорганизмов провели S. Stuart и R. Rustigain (1943), официально зарегистрировали их как Paracoli биотип 32011 (Ratnam, 1991).

В 1958 году род Hafnia был включён в семейство Enterobacteriaceae. В литературных источниках разных лет эти микроорганизмы упоминаются под следующими названиями: биотип 32011, группа Hafnia, Enterobacter alvei, Bacteria asiaticus, Enterobacter Hafnia и др. (Frick, Kunz, Vogt, Turina, 1990; Albert, Alam, Islam, 1991; Reina, Hervas, Borrell, 1993). В конце прошлого века Albert с соавторами описали несколько изолятов, сходных с Hafnia alvei (Cara-valho, McMillan, Ellis, Betancourt, 1990).

Палеомикробиологи выделили и идентифицировали H. alvei из содержимого кишечника, полученного от 12000-летнего мастодонта, найденного в Мичигане и Огайо (Ridell, Siitonen, Paulin, 1994).

В течение многих лет таксономическое положение этих бактерий являлось предметом дискуссии, а клиническое и эпидемиологическое значение единственного представителя рода Hafnia некоторое время оставалось неясным, хотя общепризнано, что эти микроорганизмы могут быть оппортунистическими патогенами у хозяев с ослабленной иммунной системой (Washington et al., 1971; Günthard, Pennekamp, 1996).

Долгое время бактерий Hafnia alvei считали условно-патогенными микроорганизмами, которые являются обитателями желудочно-кишечного тракта человека и животных. Однако в 70-е годы XX века появились первые публикации, где H.alvei описывали как микроорганизмы, способные самостоятельно

вызывать ряд заболеваний у животных и человека, в том числе менингит (Mojtabaee, Siadati, 1978), диарею (Washington et al., 1971; Albert et al., 1991), некротизирующий энтероколит (Ginsberg, Goldsmith, 1988), пневмонию (Washington et al., 1971; Frick et al., 1990), инфекции мочевыводящих путей (Fields et al., 1967), эндофтальмит (Caravalho et al., 1990) и инфекции мягких тканей (Berger et al., 1977).

Hafnia alvei, как возбудители бактериальных гастроэнтеритов у людей, были описаны в некоторых клинических наблюдениях (Frick, Kunz, Vogt, Turina, 1990; Литвин, Емельяненко, Пушкарёва, 1996).

Подробно клинико-эпидемиологические проявления гафниоза человека изучены небольшим количеством современных исследователей (Сергевнин и соавт., 1998; Грачёва и соавт., 2006, Жумагельдина и др., 2006-2009).

Во многих странах относительно хорошо изучена эпизоотология и клинические проявления гафниоза пчёл (паратиф пчёл), а также имеются отдельные публикации о гафниозе беспозвоночных и позвоночных животных (дождевых червей, сивучей и др.) (Шустрова, Дубровский, 1991; Литвин и соавт., 1996; Кузьмин, Святковский, 2005; Новиков, 2005; Денисенко, 2006; Речкин, Евтеева, 2007).

Имеется много противоречивых данных об экологических особенностях этих микроорганизмов, их популяционной генетике, роли в развитии заболеваний у человека и животных, генетических и фенотипических методах, используемых для обнаружения разных биоваров и геноваров в пределах вида H. alvei и выявления факторов патогенности.

1.2. Биологические свойства

1.2.1. Морфология

Бактерии рода Hafnia - мелкие с закруглёнными концами полиморфные палочки, длиной 1-2 мкм и шириной 0,3-0,5 мкм, по Граму окрашиваются отрицательно. Спор и капсул не образуют. Особенностью бактерий рода Hafnia alvei является то, что они подвижны при 20°С, а при 37°С утрачивают подвижность. При 20°С они обладают газообразованием, а при 37°С - нет (Тарасова, Феокти-

стова, Золотухин, 2007; Albert, Alam, Islam, 1991).

А. А. Поляков с соавт., с помощью электронной микроскопии впервые изучили ультраструктуру возбудителя гафниоза пчел. Ими установлено, что гафнии имеют структуру, похожую на других грамотрицательных микроорганизмов, особенно на возбудителей сальмонеллезов животных. Ими показано, что бактерии имеют клеточную стенку сложного стрения. Цитоплазматическая мембрана плотно прилегает к цитоплазме и состоит из трех слоев. В нутрии клетки содержаться вакуоли и рибосомы. Нуклеоид представлен в виде обширной осмиофобной зоны, в которой залегают нити ДНК (Поляков и соавт., 1973).

1.2.2. Культуральные свойства

Hafnia alvei являются факультативными анаэробами. Хемоорганотрофы: обладают и дыхательным, и бродильным типами метаболизма. Растут на всех обычных питательных средах слабощелочной реакции (Frick, Kuzn, Vogt, Turina, 1990; Хоулт, Криг, Снит, Стейли, Уильяме, 1997; Klapholz, Lessnau, 1999).

Бактерии растут в пределах 12-43°С, оптимальная температура 30-37°С при pH - 7,2-7,4. В жидких средах (МПБ, бульоне Хоттингера, пептонной воде) через 18-24 ч S-формы растут в виде равномерного помутнения среды, осадок легко разбивается при встряхивании пробирки. R-формы образуют осадок на дне пробирки, надосадочная жидкость остается прозрачной. На плотных средах (МПА, агаре Хоттингера) в первые сутки роста образуют S-формы мелкие и средние по размеру выпуклые колонии округлой формы с ровными краями, гладкой блестящей поверхностью, серовато-белого цвета. R-формы колоний гафний плоские, суховатые, с неровными краями (Поздеев, Федоров, 2007). На средах Эндо и Левина S-колонии полупрозрачные, мутноватые, бесцветные либо розовато-серые колонии диаметром 3-4 мм. На агаре Плоскирева дают скудный рост, колонии в первые сутки роста имеют росинчатый вид, полупрозрачные, голубовато-серого цвета; на вторые-третьи сутки колонии увеличиваются в размере и приобретают серовато-белый цвет.

1.2.3. Ферментативные свойства На/та

При изучении ферментативной активности бактерий На/та аЬе1 обращает на себя внимание изучение её в зависимости от температуры культивирования. Эта особенность используется с целью дифференциальной диагностики На/та от сходных культур при постановке реакции с метиленовым красным, Фогеса-Проскауэра, при учёте ферментации глюкозы, утилизации цитрата в среде Симонса, а также в ряде случаев при определении подвижности. Бактерии рода На/та ферментируют глюкозу обычно с образованием газа, манит, арабинозу, глицерин, ксилозу, мальтозу, рамнозу, трегалозу; не ферментирует адонит, дульцит, инозит, сорбит, рафинозу и эскулин. Вариабельные реакции проявляют в отношении сахарозы, салицина, целлобиозы, утилизации цитрата в среде Симонса и малоната, а также в тестах с метиленовым красным и Фогеса-Проскауэра. Гафнии не образуют индол и сероводород, не разжижают желатин и не гидролизуют мочевину, не обладают фенилаланиндезоминазой и оргинин-дегидролазой, но декарбоксилируют лизин и орнитин (Иванов, 1972; Хоулт, Криг, Снит, Стейли, Уйльямс, 1997; Золотухин, Каврук, Васильев, 2005). Биохимические маркеры бактерий рода На/та приведены в таблице 1. Таблица 1 - Ферментативные свойства бактерий разных родов семейства

Enterobacteri асеае

Тесты Escherichia Citrobacter Enterobacter Klebsiella Salmonella Proteus Morganella Edwardsieila Yersinia (22-24°С) Providencia Hafnia (22-24°С)

Глюкоза + + + + + + + + (к) + ±

Лактоза + + + +

Сахароза ± ± + + — ± — ± ± ± ±

Маннит + + + + + — — ± + + +

Дульцит ± ± — ± ±

Мальтоза ± + + + + ± — + + — +

Сорбит + + + + + — — — ± ± —

Реакция с метилротом + + — ± + + + + + + —

Реакция Фогес-Проскауэра — — + ± — ± — — ± — ±

Среда Симонса — + + + + ± — — — + ±

Тесты Escherichia Citrobacter Enterobacter Klebsiella Salmonella Proteus Morgan el 1а Edwardsiella Yersinia (22-24°С) Providencia Hafnia (22-24°С)

Индол + ± — ± — ± + + ± + —

Сероводород — ± — — + ± — ± — — —

Мочевина — ± ± + — + + — + + —

Желатин — — ± — — + — — — — —

Фенилаланин + + — — + —

Лизин + — ± + + — — + — — +

Орнитин ± ± + — + ± + + ± — +

Примечание - «+» - ферментация сахара с образованием кислоты и газа, рост на среде

Симонса, образование индола, расщепление мочевины и т.д. « - » - отрицательный результат, «±» - различные показатели

(к) - ферментация сахара с образованием только кислоты.

1.3. Эпизоотологические данные и распространение Hafnia alvei Бактерии Hafnia alvei на протяжении более 50 лет изучались как возможные возбудители инфекций животных и человека.

Как показывают исследования, проведённые в Австралии, помимо объектов окружающей среды (водные источники), гафний выделяли от 158 видов животных, причём было установлено, что отмечалась различная тропность к разным хозяевам в зависимости генотипа гафний, которые различались и по биохимическим характеристикам (Okada, Gordon, 2003).

Наиболее известны гафнии как возбудители инфекционного поноса или паратифа пчёл. Само название вида alvei произошло от латинского «alveus», что означает «улей» или «принадлежащий к улью». Ewing (1986) ставил под сомнение правомочность названия alvei, исходя из позиции, изложенной выше, что микроорганизм «ничего не делает улью», т.к. не имеет ничего общего с «Bacillus paratyphi-alvei» (цит. по Janda, Abbott, 2006). Однако в последующем Н. alvei была выделена из кишечника пчёл, а также из мёда, после чего некоторые

из этих штаммов были включены в коллекцию ВССМ (Брюссель, Бельгия) (Са-лимов, 1978).

В основе их энтомопатогенного действия лежат неспецифические меха-

низмы, связанные с выработкой ряда ферментов при размножении в теле насекомого, что ведёт к гибели последнего (Шустрова, Дубровский, 1991; Кузьмин, Святковский, 2005).

Гафниоз пчел встречается во всех странах. Возникает заболевание обычно во время зимовки насекомых или ранней весной. Предрасполагающими факторами являются неблагоприятные условия содержания и плохие погодные условия (холод, высокая влажность, наличии в падевого меда, недосток перги). Заражение пчел происходит алиментарно через контаминировнный мед, пергу, воду, загрязненные поилки и кормушки. Заболевание часто приводит к гибели всей пчелиной семьи (Новиков, 2005; Gunthard, Pennekamp, 1996; Mojtabaee, Siadati, 1978; Бессарабов, Вашутин, Воронин, 2007).

Инкубационный период длится от 3 дней до двух недель. При попадании в пищеварительный тракт насекомых возбудитель быстро там размножается, вызывет сильную интоксикацию. При этом нарушаются процессы пищеварения, что приводит к усилиенной перистальтике кишечника и дареи. Далее возбудитель проникает в гемолимфу и вызывает септицемию и гибель пчёл.

При заболевании во время зимовки отмечают возбуждение (шум) внутри улья, распад зимнего клуба, выход насекомых через леток. Пчелы слбо ползают движения скованы, брюшко у них сильно увеличено. При диареи фекалии жидкие, липкие, коричневого цвета, имеют неприятный запах. Пчёлы не могут летать и погибают. Если не все пчелы погибли, семья выглядит ослаблено. Весной больные семьи малоподвижны. Стенки улья и соты испачканы фекалиями неприятного запаха, жёлто-бурого цвета. На дне улья множество мёртвых пчёл. При вскрытии пчел наблюдают в кишечника больных содержимое грязно-белого или светло-серого цвета. Летом такие семьи отстают в развитии, медленно строят соты и не используют медосбор (Литвин, Емельяненко, Пушкарё-ва, 1996; Кузьмин, Святковский, 2005).

При изучении 642 австралийских млекопитающих D.M. Gordon и F. Fitz Gibbon (1999) установили, что Н. alvei занимает третье место по частоте выделения из кишечника животных после Escherichia coli и Enterobacter cloaceae

(Janda, Abbott, 2006). По данным авторов гафнии часто выделялись из кишечника плотоядных сумчатых и мышевидных грызунов. Гафнии выделяли из содержимого кишечника щенков сивуча (Eumetopias jubatus), бактериологически обследованных в июне-июле 2004 г. на Камчатке (мыс Козлов) и Командорских островах (о. Медный, Россия). Эти микроорганизмы были выделены от 47,83% исследованных щенков (Денисенко, 2006).

При проведении исследований в ряде Национальных парков США и Канады гафний спорадически выделяли из образцов фекалий, собранных у гризли (Ursus arctos) и чёрных медведей (Ursus americanus) (Derlet, Carlson, 2002).

Имеются сообщения о выделении гафний от соколов, ястребов и сов, обитающих в условиях альпийского высокогорья, не имеющих контакта с человеком (Winsor, Bloebaum, Mathewson, 1981).

Исследования, проведённые в горах Западных Карпат Словакии в 20022003 гг., по изучению фекалий свободноживущих молодых и взрослых особей альпийской завирушки {Prunella collaris), показали наличие у них ассоциации микроорганизмов трёх родов: Hafnia, Bifidobacterium и Pseudomonas. При этом, превалирование тех или иных микроорганизмов в фекалиях зависело от сезона: летом преобладали Hafnia, а также Enterococcus, Escherichia и Serratia, в то время как представители родов Bacillus, Klebsiella, Pantoea, Pseudomonas, Staphylococcus и Yersinia чаще выделялись в другое время года (Janiga, Sedla-rova, Rigg, Novotna, 2007).

Гафнии широко распространенны среди летучих мышей, рептилий, беспозвоночных, насекомых и рыб (Goldstein, Agyare, Vagvolgyi, Halpern, 1981; Okada, Gordon, 2003).

S. Okada и D.M. Gordon (2003) впервые показали связь между распределением генотипов Н. alvei и специфическими экологическими нишами (Okada, Gordon, 2003). Так, 2-я ДНК-группа гафний, по данным авторов, преимущественно ассоциировалась с пресноводными рыбами, в то время как 1-я ДНК-группа ассоциировалась с птицами, лягушками, беспозвоночными и водными источниками. Обе группы были в равной степени представлены среди млекопи-

тающих и рептилий.

Доказано, что Н. alvei могут вызывать у кроликов диарею и повреждение эпителия, сходное с поражениями, вызванными энтеропатогенными кишечными палочками (Hyma, Lacher, Nelson, 2005).

Имеются литературные данные, свидетельствующие о том, что бактерии Н. alvei вызывают пневмонии (вплоть до развития пневмонических абсцессов лёгких) у коз (Sharma, Boro, Borah, 1991) и аборты у лошадей (Mukherjee, Das, Paranjape, Marwahlndian, 1986).

Таким образом, Н. alvei может обусловливать у животных не только бессимптомное носительство и спорадические случаи болезни, но и эпизоотические вспышки.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Золотухин, Дмитрий Сергеевич, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Агафонов, В.И. Эпидемиология тифо-паратифозных инфекций и их профилактика в войсках / В.И. Агафонов, Д.Т. Хохлов, М.А. Золочевский // Военно-медицинский журнал, 1984. - №6. - С. 36-39.

2. Адаме, М. Бактериофаги / М.Адамс // М., Изд-во иностр. литература,

1961.

3. Адельсон, Л.И. Бактериофаги, активные по отношению к энтеропато-генным кишечным палочкам / Л.И. Адельсон // Вопросы микробиологической диагностики и бактериофагии. -М., 1962. - С. 184-194.

4. Анпилов, Л.И. Профилактическая эффективность сухого поливалентного дизентерийного бактериофага в организованных коллективах / Л.И. Анпилов, A.A. Прокудин // Военно-медицинский журнал, 1984. - №5. - С. 39-40.

5. Бабков, В.В. Биологическая характеристика умеренных бактериофагов Е. coli 0124:В17 / В.В. Бабков // Проблемы бактериофагии и биология кишечных бактерий: сб. кафедры микробиологии I Лен. мед. ин-та им. акад. И.П. Павлова. - Л., 1973. - 53 с.

6. Бабков, В.В. О лизогении среди энтеропатогенных кишечных палочек серологических групп Olli: В4, 026:В6 и 0124; В17 / В.В. Бабков, Э.К. Ленц // Проблемы бактериофагии и биологии кишечных бактерий: сб. кафедры микробиологии 1 Лен. Мед. ин-та им. акад. И.П. Павлова. - Л., 1973. - 163 с.

7. Бактериофаги в ветеринарии: реальность и перспективы / Л. Натидзе [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер, междунар. семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 15.

8. Башмаков, Г.А. Индикация дизентерийных бактерий на поверхности методом реакции нарастания титра фага / Г.А. Башмаков // Военно-медицинский журнал. - 1961. - № 4. - С. 39 - 42.

9. Биологические свойства патогенных энтеробактерий, выделенных из крови больных / H.A. Поликарпов [и др.] // Журн. микробиол. - 1985. - № 10. -С. 15-19.

10. Блохина, И.JI. Новое в классификации энтеробактерий / И.Л. Блохина, К.Я. Соколова, Г.Ф. Левалова // ЖМЭИ. - 1992. - №1. - С.49-52.

11. Бондаренко, В.М. Гемаглютинирующая и адгезивная способность штаммов клебсиелл и энтеробактер / В.М. Бондаренко, М.М. Баккус, В.И. Бри-лис // Журн. микробиол. - 1987. - № 7. - С. 3 - 6.

12. Бульканова, Е.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров их применения: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Бульканова Елена Анатольевна. - Саратов, 2006. - 20 с.

13. Васильев, Д.А. Учебно-методическое пособие по методам общей бактериологии / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, Н.М. Никишина // Ульяновск, 1998.- 151 с.

14. Вилькомирская, Т.С. О диагностическом значении реакции нарастания титра фага при дизентерии / Т.С. Вилькомирская // ЖМЭИ. - 1971. -№ 1.-С. 136-138.

15. Висконти, Р. Генетика бактериофага / Р. Висконти // В кн.: Онтогенез вирусов.-М., 1956.- 141 с.

16. Воронцова, А.А. Применение метода реакции нарастания титра фага при эпидемиологическом и санитарном обследовании / А.А. Воронцова // Кишечные инфекции: Тез.докл. на межинстит.конф. -М., 1961. - С. 127-128.

17. Выделение и селекция клонов бактериофагов патогенных энтеробактерий / Золотухин С.Н., Васильев Д.А., Молофеева Н.И. [и др.] // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: матер, междунар. научн. конф. - Ульяновск, 2006. - С. 227 - 231.

18. Габрилович, И.М. Общая характеристика бактериофагов / И.М. Габрилович // Основы бактериофагии. - Минск. - 1973. - С. 5-24.

19. Гамалея, Н.Ф. Бактериолизины - ферменты, разрушающие бактерии / Н.Ф. Гамалея // Русский архив патологии, 1898. -т.6(№6). - С. 607-613.

20. Ганюшкин, В.Я. Бактериофаги Salmonella choleraesuis, сравнительная характеристика и практическое применение: автореф. дис. ... докт. вет. наук /

Ганюшкин Виктор Яковлевич. - Ульяновск, 1984. - 84 с.

21. Ганюшкин, В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии / В.Я. Ганюшкин // Ульяновск. - 1988. - С.45.

22. Ганюшкин, В.Я. Обследование свиней на носительство сальмонелл и фагопрофилактика / В.Я. Ганюшкин // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. - Ульяновск, - 1990. - С. 20-28.

23. Ганюшкин, В.Я. Реакция нарастания титра фага при диагностике паратифа поросят / В.Я. Ганюшкин // Ветеринария. - 1967. - № 3. - С. 69 - 71.

24. Георгадзе, И.А. Георгий Элиава / И.А. Георгадзе, Е.Г. Макашвили // Грузинская советская энциклопедия, 1979. - Т. 4. - С. 125.

25. Гольдфарб, Д.М. Бактериофагия / Д.М. Гольдфарб // М.: Медгиз. -1961.-225 с.

26. Гольдфарб, Д.М. Индикация брюшнотифозной палочки в воде с помощью реакции нарастания титра фага / Д.М. Гольдфарб, З.С. Островская // ЖМЭИ. - 1957. - №5. - С. 17.

27. Гольдфарб, Д.М. Опыт применения реакции нарастания титра фага для диагностики дизентерии / Д.М. Гольдфарб, В.Н. Кузнецова // ЖМЭИ. -1957.-№8. -С. 90-94.

28. Д'Эрелль, Ф. Бактериофаг и феномен выздоровления / Ф.Д'Эрелль // Тифлисс. гос. ун-т, Тифлис, 1935. - 262 с.

29. Денисенко, Т.Е. Микрофлора щенков сивуча (ЕитеЮр'шь ]иЪаШ$) Камчатки и Командорских островов / Т.Е. Денисенко // Вопросы ветеринарии и ветеринарной биологии: Сб. тр. молодых учёных. - Выпуск 3. - М., 2006. - С. 116-122.

30. Егоров, В.В. Практикум по микробиологии / В.В. Егоров. - М.: Изд-во МГУ, 1986. - С. 35-42.

31. Ершов, Ф.И. Индикация дизентерийных бактерий с помощью РНФ / Ф.И. Ершов // В кн.: Изменчивость микроорганизмов и иммунитет. - М., 1959. -С. 188.

32. Жуков, H.H. Изучение терапевтического эффекта препаратов бактериофага в комплексном лечении гнойных хирургических заболеваний / H.H. Жуков-Вережников, Л.Д. Перемитина, Э.А. Верило [и др.] // Советская медицина. - 1978. - № 12. - С. 64-66.

33. Жумагельдина, З.Т. Клинико-эпидемиологические особенности гаф-ниоза человека: автореф. дис. ... канд. мед. наук / Жумагельдина Зауре Турсын-галиевна - Алматы, 2010. - 26 с.

34. Земцова, И.Н. Применение реакции нарастания титра специфического бактериофага для индикации спор сибиреязвенных бактерий в почве / И.Н. Земцова // Вопросы микробиологии и лабораторной диагностики особо опасных инфекций: Сб. научн. работ противочумных учрежд. - Саратов, 1965. - С. 171.

35. Золотухин, С.Н. Возбудители пищевых отравлений / С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Курс лекций по санитарной микробиологии. Учеб. пособ. -2002-С. 151.

36. Золотухин, С.Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных / С.Н. Золотухин // Ульяновск, 2004. - С. 64 - 75.

37. Золотухин, С.Н. Новые фармакологические средства в ветеринарии / С.Н. Золотухин // Матер. 7 межгосуд. конф. - С.-Пб., 1995. - С. 78 - 79.

38. Золотухин, С.Н. Смешанная кишечная инфекция телят и поросят, вызываемая патогенными энтеробактериями / С.Н. Золотухин, Л.С. Каврук, Д.А. Васильев//- Ульяновск, 2005. - С. 5-8.

39. Золотухин, С.Н. Создание и разработка схем применения диагностических биопрепаратов на основе выделенных и изученных бактериофагов энте-робактерий: автореф. дис. ... д-ра биол. наук / Золотухин Сергей Николаевич. -Ульяновск, 2007. - 39 с.

40. Кажал, Н. Из истории борьбы против микробов и вирусов / Н. Кажал, Р.Ифтимович//- Бухарест: Научное из-во, 1968.-404 с.

41. Камбаратов, П.И. Клиническая оценка РНФ как метода лабораторной диагностики острой дизентерии / П.И. Камбаратов // ЖМЭИ. - 1963. - № 4. - С.

42. Каплан, А.С. Распределение и сохранение дизентерийного поливалентного бактериофага в организме белых мышей после однократного кормле-ния/А.С. Каплан//ЖМЭИ, 1941.-№5-6.-С. 162.

43. Караваева, О.А. Выделение бактериофагов из Azospirillum brasilense Sp7 и их применение для детекции азоспирилл / О.А. Караваева, О.И. Гулий, С.С. Макарихина // Стратегия взаимодействия микроорганизмов и растений с окружающей средой: материалы VI Всероссийской конф. молодых ученых 2428 сентября 2012 г. - Саратов, 2012. - С. 160.

44. Карпов, С.П. Динамика выделения бактериофага из организма фаги-рованных людей / С.П. Карпов, Б.М. Яворская // ЖМЭИ, 1949. - №7. - С. 40-42.

45. Катмакова, Н.П. Разработка и применение диагностического биопрепарата «YP - 09 УГСХА» на основе бактериофагов Yersinia pseudotuberculosis : автореф. дис. ... канд. биол. наук / Катмакова Надежда Петровна. - Ульяновск, 2010.-24 с.

46. Катмакова, Н.П. Селекция псевдотуберкулезных бактериофагов для создания диагностического препарата / Н.П. Катмакова, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Материалы международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследований по инфекционной и про-тозойной патологии животных, рыб и пчел». 9-10 октября, 2008. - Москва, 2008.-С. 129-131.

47. Клинико-микробиологические особенности острой кишечной микст-инфекции, вызванной бактериями Hafnia alvei и ротавирусом / Н.М. Грачёва, Н.И. Леонтьева, В.М. Бондаренко [и др.] // Журн. Микробиол. - 2003. - №2. - С. 62-65.

48. Козелько, О.А. Применение метода РНФ для контроля качества дезинфекции в очагах кишечных инфекций / О.А. Козелько // ЖМЭИ. — 1961. — №2. - С. 36-40.

49. Кольпикова, Т.И. Фаготипирование листерий / Т.И. Кольпикова // Ветеринария. - 1990. - №6. - С. 31-32.

50. Коритняк, Б.М. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Yersinia enterocolitica и их применение в диагностике : автореф. дис. ... канд. биол. наук / Коритняк Богдан Михайлович// - Саратов, 2005.-20 с.

51. Крестовникова, В.А. Фаготерапия и фагопрофилактика и их обоснование в работах советских исследователей / В.А. Крестовникова// ЖМЭИ, 1947. -№11.-С. 56-65.

52. Лебедев, В.И. Опыт применения РНФ в эпидемиологической практике / В.И. Лебедев // ЖМЭИ. - 1963. -№ 12. - С. 29.

53. Лебедев, В.И. РНФ как ранний метод индикации дизентерии в детских учреждениях / В.И. Лебедев // Тр. науч. конф. аспирантов и ординаторов. - М, 1964.-С. 105- 107.

54. Ленев, C.B. Бактериофаги для лечения и специфической профилактики сальмонеллеза птиц / C.B. Ленев, H.A. Дрогалина, С.А. Бугаев // Матер. Ме-ждунар. научн. конф. — Ульяновск, 2006. — С. 417^20.

55. Ленев, C.B. Способ выделения и свойства бактериофагов / C.B. Ленев // Сб. науч. трудов Всеросс. науч. ин-та вет. препаратов. -М., 1991. - С. 24.

56. Лешкович, Н.Л. О диапазоне и специфичности действия чумных фагов 1701, 1710 и их мутантов / Н.Л. Лешкович, В.П. Ермилова // В кн.: Проблемы особо опасных инфекций. - М., 1974. - С. 38-41.

57. Литвин, В.Ю. Патогенные бактерии, общие для человека и растений: проблема и факты / В.Ю. Литвин, E.H. Емельяненко, В.И. Пушкарёва // Микробиология. - 1996.- № 2. - С. 101-104.

58. Лихачев, Н.В. Метод диагностики паратифа свиней при помощи бактериофага / Н.В. Лихачев // Ветеринария. - 1948. - №7. - С. 32.

59. Лурия, С. Общая вирусология / С. Лурия, Д. Дарнелл. - М.: Мир, 1970. -397 с.

60. Миляева, E.H. Определение зараженности предметов бытовой обстановки дизентерийными микробами с помощью реакции нарастания титра бактериофага / E.H. Миляева // ЖМЭИ. - 1958. - № 12. - 34 с.

61. Молофеева, Н.И. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Escherichia coli 0157 и их применение в диагностике: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Молофеева Надежда Ивановна. - Саратов, 2004.-20 с.

62. Новиков, В. Б. Пчёлы, цветы и здоровье / В.Б. Новиков // Пчеловодство. - 2005. - №1. - С. 12-15.

63. Погорельская, С.А. Опыт широкого применения бактериофагов с целью профилактики острых кишечных заболеваний / С.А.Погорельская // ЖМЭИ, 1968. - №4. - С. 34-37.

64. Пожарникова, Е.Н. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Enterobacter, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Пожарникова Е. Н. - Саратов, 2006. - С. 4-19.

65. Поздеев, O.K. Энтеробактерии / О.К.Поздеев, Р.В. Федоров// ГЭО-ТАР-Медиа. - 2007. - 719 с.

66. Покровский, В.И. Медицинская микробиология. / В.И. Покровский, O.K. Поздеев// М.: Медицина. - 1999. - С. 389 - 393.

67. Покровский, В.И. Современные принципы и методы диагностики инфекционных болезней / В.И. Покровский, О.А. Дунаевский // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2001. - № 4. - С. 5 - 7.

68. Покровский, В.И. Энтеробактерии / В.И. Покровский// М.: Медицина, 1985.-С. 171-192.

69. Понявин, Б.Я. Изучение реакции нарастания титра фага в условиях практической лаборатории / Б.Я. Понявин // ЖМЭИ. - 1960. - № 6. - С. 135.

70. Профилактическое применение сухого поливалентного бактериофага с пектином в дошкольных учреждениях / Ю.П. Солодовников, Л.И. Павлова, П.И. Емельянов [и др.] // ЖМЭИ. - 1970. - №5. - С. 131-137.

71. Применение коктейлей бактериофагов для уменьшения популяции Е. coli 0157:Н7 у жвачных животных / Т.Р. Каллавей [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекций, вы-

званных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер, меж-дунар. семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 28.

72. Пульчеровская, Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Пульчеровская Лидия Петровна// Саратов, 2004. - 21с.

73. Пульчеровская, Л.П. Индикация бактерий рода Citrobacter с помощью реакции нарастания титра фага (РНФ)/ Л.П. Пульчеровская, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев// Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии, - 2013. - №1. - С. 60-64.

74. Разработка технологии приготовления бактериофаговых препаратов для лечения птиц / В.В. Перелыгин, Э.А. Светоч, Е.Л. Жиленков [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекций, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер, междунар. семинара. - Тбилиси, 2005. — С. 32.

75. Раутенштейн, Я.И. Бактериофагия / Я.И. Раутенштейн // М.: Из-во АН СССР, 1955.

76. Ревенко, И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике / И.П.Ревенко. - Киев: Урожай, 1978. - С. 41-88.

77. Ревенко, И.П. К диагностике рожи свиней / И.П. Ревенко // Ветеринария. - 1970.-№ 6.-С. 13.

78. Речкин, А.И. Поиск новых резервуаров для персистенции и участников циркуляции энтеробактерий в естественных экосистемах / А.И. Речкин, Н.И. Евтеева // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. -2007.-№6.- С. 99-103.

79. Рубашкина, Б.К. Применение метода нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Б.К. Рубашкина, С.Ф. Казакова // ЖМЭИ. - 1959.-№6.-С. 110-112.

80. Салимов, P.M. Изучение Hafnia, выделенных из мёда / Р.М.Салимов // Ветеринария. - №4. -1978. - С. 44-46

81. Сапир, И.Б. Наблюдения и замечания по поводу лечения дизентерии

бактериофагом / И.Б.Сапир // Труды Московского областного института инфекционных болезней. - М., 1939. - С. 135-151.

82. Сидоров, М.А. Определитель зоопатогенных микроорганизмов. Справочник / М.А. Сидоров, Д.И. Скородумов, В.Б. Федотов // М.: Колос - 1995. -320.

83. Создание биопрепарата на основе выделенных и изученных бактериофагов Enteroccocus faecalis: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Ковалева Елена Николаевна // Саратов, 2009. - 20 с.

84. Создание новой коллекции фаговых клонов адаптированных на госпитальных штаммах грамотрицательных и грамположительных бактерий в 1982 - 2005 г. / JI. Чанишвили, И. Чиракадзе, Д. Моглокелидзе, Н. [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер. междунар. семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 45 - 46.

85. Сравнительное изучение микрофлоры из отделения для новорожденных высокого риска: чувствительность к антибиотикам, бактериофагам и растительным антибактериальным веществам / М. Мшвилдадзе, З.П. Заркуа, Гадуа И.М. [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер, междунар. семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 46 - 47.

86. Стент, Г. Молекулярная биология вирусов бактерий / Г. Стент // М.: Мир, 1965.-452 с.

87. Тарасова, A.B. Бактерии рода Hafnia - возбудители инфекционной болезни пчёл / A.B. Тарасова, H.A. Феоктистова // Ульяновск: ГСХА, 2007. - С. 172-174.

88. Тарасова, A.B. Роль бактерий рода Hafnia в патогенезе желудочно-кишечных заболеваний сельскохозяйственных животных / A.B. Тарасова, Н.А.Феоктистова, С.Н. Золотухин // Ульяновск, ГСХА, 2007. - С. 175-176, 178.

89. Тимаков, В.Д. Об условиях взаимодействия фага и бактериальной клетки / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб // Вестник АМН СССР. - 1958. - №2. -

90. Тимаков, В.Д. Реакция нарастания титра фага (РНФ) / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб // М., 1962. - С. 65-71.

91. Тимаков, В.Д. Экспериментальное обоснование нового принципа обнаружения дизентерийных и брюшнотифозных бактерий с помощью фага / В.Д. Тимаков, Д.М. Гольдфарб // ЖМЭИ. - 1956. -№10. - С. 3-7.

92. Условно-патогенные микробы и их бактериофаги / М.А. Борисова, В.В. Николаевский, О.В. Генералов [и др.] // Нальчик, 1985. - с. 96-99.

93. Фаготипирование клинических штаммов Pseudomonas aeruginosa, выделенных 2001 - 2003 гг. / Т. Квелашвили [и др.] // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: матер, междунар. семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 42.

94. Феоктистова, Н.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Proteus, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Феоктистова Наталья Александровна // Саратов, 2006. - 22 с.

95. Характеристика биологических свойств бактериофагов вида Bacillus subtilis / Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин, И.Н. Хайруллин [и др.] // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - Ульяновск, 2011. -№1 (13).-с. 79-83.

96. Хейс, У. Генетика бактерий и бактериофагов. Основы генетики и молекулярной биологии / У.Хейс. - М.: Мир, 1965. - С. 275 - 368.

97. Цветков, К.И. Применение специфического бактериофага для диагностики паратифозного аборта кобыл / К.И. Цветков // Ветеринария. - 1941. -№6. - С. 4 - 6.

98. Цулукидзе, А.П. К методике применения бактериофага в хирургической практике/ А.П. Цулукидзе // Вестн. хир. - 1941. - №6 - С. 679-685.

99. Чувствительность патогенных энтеробактерий, выделенных при диареях молодняка животных к антибиотикам и специфическим бактериофагам /

С.Н. Золотухин, А.С. Мелехин, Д.А. Васильев [и др.] // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: матер, междунар. научн. конф. — Ульяновск, 2006. - С. 233 - 236.

100. Шендеров, Б.А. Нормальная микрофлора человека и некоторые вопросы микроэкологической токсикологии / Б.А. Шендеров // Антибиотики и медицинская биотехнология. - 1987. - № 3, Т. 32. - С. 164-170

101. Шестаков, А.Г. Усовершенствование методов выделения, идентификации и индикации бактерий Pseudomonas aeruginosa: автореф. дис. ... канд. биол. наук / Шестаков Андрей Геннадьевич // Саратов, 2010 - 22 с.

102. Шкроб, О.С. Академик Николай Нилович Бурденко (к 125-летию со дня рождения) / О.С. Шкроб // Хирургия. - 2001. - №5. - С. 61-63.

103. Шустрова, Н.М. Природные резервуары условнопатогенных бактерий / Н.М. Шустрова, Ю.А. Дубровский // Сб. науч. тр. НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи «Потенциально-патогенные бактерии в природе». - М., 1991. - С. 30-42.

104. Эпизоотология с микробиологией / Под ред. д-ра вет. наук В.А. Кузьмина и канд. вет. наук А.В. Святковского. - М.: Издательский центр «Академия», 2005. - 432 с.

105. A prospective microbiologic study of bacteriuria in patients with indwelling urethral catheters / J.W. Warren [et al.] // J. Infect. Dis. - 1982. - Vol. 146. -P. 719-723.

106. A survey of the aerobic bacteria in the feces of captive raptors / R.L. Bangaert, A.C. Ward, E.H. Stauber et al. // Avian Dis. - 1988. - V. 32. - P. 53-62

107. Abbott, S.L., O'Connor, J., Robin, T. et al. Biochemical properties of a newly described Escherichia species, Escherichia albertii. // J. Clin. Microbiol. -2003.-V. 41.-P. 4852-4854

108. Ackermann, H.W. Taxonomic changes in tailed of enterobacteria / H.W. Ackermann, M.S. DuBow, M. Gershman // Archies of virology. - 1997. - № 142. -P. 1381 -1390.

109. Activation of the 2'-N-Acetyltransferase Gene [aac(2')-Ia] in Providencia stuartii by an Interaction of AarP with the Promoter Region / P.M. Hawkey [et al.] //

J. Antimicrob. Chemother. - 1984. - Vol. 13. - P. 209-226.

110. Adams, M. H. Bacteriophages / M.H. Adams - Interscience Publishers, Inc., New York, 1959. - 473 p.

111. Adhya, S., and Merril, C. The road to phage therapy// Nature, 2006, Vol. 443, pp. 754-755.

112. Aerobic bacterial flora of garter snakes: development of normal flora and pathogenic potential for snakes and humans / E.J.C. Goldstein, E.O. Agyare, A.E. Vagvolgyi, M. Halpern // J. Clin. Microbiol. - 1981. - V. 13. - P. 954-956

113. Albert, M.J., Alam, K., Islam, M. et al. Hafnia alvei, a probable cause of diarrhea in humans. //Infect. Immun. - 1991. - V. 59. - P. 1507-1513

114. Albert, M.J., Faraque, S.M., Ansaruzzaman, M. et al. Sharing of virulence-associated properties at the phenotypic and genotypic levels between enteropa-thogenic Escherichia coli and Hafnia alvei. // J. Med. Microbiol. - 1992. - V. 37. - P. 310-314.

115. Balmus, G., Samuel, I., Mirza, L. Research on a severe Hafnia epizootic in young laboratory rats // Rev. Pathol. Gen. Physiol. Clin. - 1963. - V. 63. - P. 573580

116. Bergey's manual of determinative bacteriology / D. Bergey [et al.] - Baltimore : Williams and Wilkins Co., 1923.-442 p.

117. Berger, S., Edberg, S.C., Klein, R.S. Enterobacter hafnia infection: report of 2 cases and review of the literature // Am. J. Med. Sei. - 1977. - V. 273. - P. 101-104

118. Boyd, J. S. K. Bacteriophage and heredity / J. S. K. Boyd // Nature. -1954.-V.173.-P. 50-51.

119. Biochemical properties of a newly described Escherichia species, Escherichia albertii / S.L. Abbott, J. O'Connor, T. Robin et al. // J. Clin. Microbiol. -2003.- V.41.-P. 4852-4854

120. Bradley, D.E. The fine structure of bacteriophages / D.E. Bradley, D. Kay // J. Gen. Microbiol. - 1960. - V.23. - P. 553-563.

121. Breed, K. Bergey's manual of determinative bacteriology / K. Breed, E.

Murray, N. Smith - Baltimore, 1957. - 1094 p.

122. Burnet, F.M. Induced lysogenicity and mutation of bacteriophage within lysogenic bacteria / F.M. Burnet, D. Lush. // Australian J. Exptl. Biol. Med. Sci. -1936.-V.14.-P. 27-38.

123. Busch, K.L., Glish, G.L., McLuckey, S.A. Mass Spectrometry/Mass Spectrometry: Techniques and Applications of Tandem. John Wiley & Sons, 1989.

124. Cech NB and Enke CG. Practical implications of some recent studies in electrospray ionization fundamentals. Mass Spectrom. Rev. 2001, 20, 362-387.

125. Cassel-Beraud, A.M., Richard, C. Etude de la flore intestinale aerobie de microcheeiropteres Chaerephon pumila a Madagascar // Bull. Soc. Path. Exot. Filiates. - 1988. - V. 81.-P. 806-810

126. Characterization of an Unusual Strain of Proteus rettgeri Associated with

127. Cotter, R. Time-Of-Flight Mass Spectrometry: Instrumentation and Applications in Biological Research. Washington, D.C.: ACS, 1997.

128. an Outbreak of Nosocomial Urinary-Tract Infection / W.H. Traub [et al.] //Appl. Microbiol. - 1971. - Vol. 22. - P. 278-283.

129. Cope, E.J. Study of Atypical Enteric Organisms of the Schigella Group Am. / E.J. Cope, K. Kilander // J. Public Health. - 1942. - Vol. 32. - P. 352-354

130. Davison, P.F. The physical properties of T7 bacteriophage / P.F. Davison, D. Freifelder // J. Mol. Biol. - 1962. - P. 635-642.

131. Derlet, R.W., Carlson, J.R. An analysis of human pathogens found in horse/mule manure along the John Muir Trail in Kings Canyon and Sequoia and Yo-semite national parks // Wild. Environ. Med. - 2002. - V. 13. - P. 113-118

132. Duguid, J.P. Adhesive properties of Enterobacteriaceae / J.P. Duguid, D.C. Old // Bacterial Adherence ed. E.H. Beachey. - London. - Chapman and Hall. -1980.-P. 187-215.

133. Edwards, P.R. Identification of Enterobacteriaceae / P.R. Edwards, W.N. Ewing // Burgess publ. Co. - Minneeaprolis. - 1972.

134. Endogenous ophthalmitis due to Salmonella arizonae and Hafnia alvei / J.Caravalho Jr, V.M. McMillan, R.B. Ellis, A. Betancourt // South Med. J. - 1990. -V.

83. - P. 325-327

135. Evolutionary genetics of a new pathogenic Escherichia species: Escherichia albertii and related Shigella boydii strains / K.E. Hyma, D.W. Lacher, A.M. Nelson et al. // J. Bacteriol. - 2005. - V. 187, №1-2. - P. S619

136. Ewing, W.H. Ewings Identification of Enterobacteriaceae / W.H. Ewing, P.R. Edwards - 4 th ed. - New York. - Amsterdam, Oxford, Elsevier. - 1986. - V. 536.

137. Extended-Spectrum ß-Lactamases in Enterobacteriaceae in Buenos Aires, Argentina, / M. Quinteros [et al.] // Public Hospitals Antimicrob. - Agents Chemother. - 2003. - Vol. 47. - P. 2864-2867.

138. Freeman, V.J. Studies on the virulence of bacteriophage infected strains of Corynebacterium diphtheriae / V.J. Freeman // J. Bacteriol. - 1951. - V.61. - P. 675-688.

139. Guth, E.E., Perrella, E. / / J. Med. Microbiol. - 1996. - Vol. 45.-P. 459462.

140. Gaskell, SJ. Electrospray: principles and practice. J. Mass Spectrom. 2000, 35, 677-688.

141. Gunthard, H., Pennekamp, A. Clinical significance of extraintestinal Hafnia alvei isolates from 61 patients and review of the literature // Clin. Infect. Dis. -1996. -V. 22. - P. 1040-1045

142. Hafnia alvei, a probable cause of diarrhea in humans / M.J. Albert, K. Alam, M. Islam et al. // Infect. Immun. - 1991. - V. 59. - P. 1507-1513

143. Hafnia alvei: respiratory tract isolates in a community hospital over a three-year period and a literature review / A. Klapholz, K.-D. Lessnau, B. Huang et al. // Chest. - 1994. - V. 105, №4. - P. 1098-1100

144. Hafnia alvei in stool specimens from patients with diarrhea and healthy controls / J. Ridell, A. Siitonen, L. Paulin et al. // J. Clin. Microbiol. - 1994. - V. 32. -P. 2335-2337

145. Hafnia alvei isolated from an equine aborted foetus / S.R. Mukherjee, A.M. Das, V.L. Paranjape, S.R. Marwahlndian // J. Vet. Med. - 1986. - V. 6. - P. 101-

146. Hausler, T. Viruses vs. Superbugs//MacMillan, New York, 2008.

147. Hawkey, P.M. The Genera Proteus, Providencia, and Morganella / P.M. Hawkey, M.R. Potten, M. Stephens // J. Hosp. Infect. - 1982. - Vol. 3. - P. 369-374.

148. Hawkey, P.M. Selective and differential medium for the primary isolation of members of the Proteeae / P.M. Hawkey, A.M. Cormick, R.A. Simpson // J. Clin. Microbiol. - 1986. - Vol. 23. - P. 600-603.

149. Identification of the bacterium associated with haemorrhagic septicaemia in rainbow trout as Hafnia alvei / I. Gelev, E. Gelev, A. G. Steigerwalt et al. // Res. Microbiol. - 1990. - V. 141. - P. 57 3-576

150. Janda, J.M., Abbott, S.L. The Genus Hafnia: from Soup to Nuts // Clinical Microbiology Reviews. - 2006. - V. 19, №1. - P. 12-18

151. Katznelson, H. Rapid phage plague count method for the detection of bacteria as applied to the demonstration of intern along borne bacterial infection of seed / H. Katznelson, M. Sutton // J. Bact. - 1951. - V. 61. -Nl. - P. 689.

152. Kauffmann, F. Enterobacteriaceae / F. Kauffmann - Capenhagen: Einar Munksgaard. - 1951.

153. Kauffmann, F. Classification and nomenclature of Enterobacteriaceae / F. Kauffmann, P.R. Edwards // Int. Bull. Bacterial. Namencl. Taxon. - 1952. - Vol. 2.-P. 2-8.

154. Kauffmann, F. On the Classification and nomenclature of Enterobacteriaceae. / F. Kauffmann // Riv. 1st. Sieroter. Ital. - 1953. - Vol. 28. - P. 485-491.

155. Kauffmann, F. Enterobacteriaceae. 2nd ed. / F. Kauffmann - Copenhagen, Denmark. - Einar Munksgaard. - 1954.

156. Kauffmann, F. On the classificacion and nomenclature of family Enterobacteriaceae / F. Kauffmann // Intern. Bull. bact. Nomencl. a. Tacsonom., 1963. - V. 13.-P. 187- 193.

157. Kinter, M. & Sherman, NE. Protein Sequencing and Identification Using Tandem Mass Spectrometry. Wiley-Interscience, 2000.

158. Kmet', J.T.V. Susceptibility of Enterobacteriaceae from the alpine ac-

centor Prunella collaris // Acta Vet. Brno. - 2003. - V. 72. - P. 285-288

159. Martin, W.J. Enterobacteriaceae / W.J. Martin, J.A. Washington // Manual of clinical microbiology. - 3rg ed. Eds. E.H. Lennette et al. - Washington D.S.: ASM, 1980.-P. 195-209.

160. McCloskey, J.A. & Simon, M.I. Methods in Enzymology: Mass Spectrometry. Academic Press, 1997.

161. Molecular analysis of type 3 fimbrial genes from Eschirichia coli, Klebsiella and Citrobacter species / P.D. Martino [et al.] // Can. J. Microbiol. - 2003. -Vol. 49.-P. 443-449.

162. Molecular epidemiology of catheter-associated bacteriuria in nursing home patients / G. Rahav [et al.] // J. Clin. Microbiol. - 1994. - Vol. 32. - P. 10311034.

163. Mojtabaee, A., Siadati, A. Enterobacter hafnia meningitis // J. Pediatr. -1978.-V.93.-P. 1062-1063

164. New Members of the Family Enterobacteriaceae / C.A. Stuart [et al.] // J. Bacterial. - 1943. - Vol. 45. - P. 101-119.

165. Okada, S., Gordon, D.M. Genetic and ecological structure of Hafnia al-vei in Australia // Syst. Appl. Microbiol. - 2003. - V. 26, №4. - P. 585-594

166. Pickett, M.J. Manual of Clinical Microbiology / M.J. Pickett, D.G. Hol-lis, E. Bottone // 5th ed., ed. in chief A.Ballows. Washington: Am Soc Mirobiol. -1991.-P. 410-28.

167. Patterns of prevalence among bacterial communities of alpine accentors (Prunella collaris) in the Tatra Mountains / M. Janiga, A. Sedlarova, R. Rigg, M. No-votna // Journal of Ornithology. - 2007. - V. 148. - P. 135

168. Ratnam, S. Etiologic role of Hafnia alvei in human diarrheal illness // Infect. Immun. - 1991. - V. 59. - P. 44-45

169. Reina, J., Hervas, J., Borrell, N. Acute gastroenteritis caused by Hafnia alvei in children // Clin. Infect. Dis. - 1993. - V. 16. - P. 443

170. Septicemia associated with Hafnia alvei in laying hens / F. Real, A. Fernandez, F. Acosta et al. // Avian Dis. - 1997. - V. 41. - P. 741-747

171. Sharma, R.K., Boro, B.R., Borah, P. Incidence of caprine pneumonia and associated bacterial species // Indian J. Anim. Sei. - 1991. - V. 61. - P. 54-55

172. Sharing of virulence-associated properties at the phenotypic and geno-typic levels between enteropathogenic Escherichia coli and Hafnia alvei / M.J. Albert, S.M. Faraque, M. Ansaruzzaman et al. // J. Med. Microbiol. - 1992. - V. 37. - P. 310-314

173. Spach, D.H. Clinical infectious disease: a practical approach / D.H. Spach, W.C. Liles. - ed. by R.K. Root. - New York.: Oxford University Press, 1999. -P. 337-348.

174. Sulakvelidze, A., Alavidze, Z., and Morris, J. G., Jr. Bacteriophage Therapy// Antimicrob. Agents Chemother, 2001, Vol. 45, pp. 649-659.

175. Summers, W. C. Felix d'Herelle and the Origins of Molecular Biology// Yale UniversityPress, New Haven, CT, 1999.

176. The so-called "paracolon" bacteria / B.N. Fields, M.M. Uwayda, L.J. Kunz, M.N. Swartz // Am. J. Med. - 1967. - V. 42. - P. 89-106

177. Typical nosocomial infection with an unusual cause: Hafnia alvei - report of 2 cases and literature review / T. Frick, V. Kunz, M. Vogt, M. Turina // Schweiz Rund. Med. Praxis. - 1990. - V. 79. - P. 1092-1094

178. Washington, J.A. II, Birk, R.J., Ritts, R.E. Jr. Bacteriologic and epidemiologic characteristics of Enterobacter hafniae and Enterobacter liquefaciens // J. Infect. Dis. - 1971. - V. 124. - P. 379-386

179. Winsor, D.K., Bloebaum, A.P., Mathewson J.J. Gram-negative, aerobic, enteric pathogens among intestinal microflora of wild turkey vultures (Cathartes aura) in West Central Texas // Appl. Environ. Microbiol. - 1981. - V. 42. - P. 11231124.