УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СХЕМЫ ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ВИДА KLEBSIELLA OXYTOCA С ПОМОЩЬЮ ФАГОВОГО БИОПРЕПАРАТА тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Садртдинова Гузелия Рафиковна

• Садртдинова Гузелия Рафиковна
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Садртдинова Гузелия Рафиковна

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Таксономия бактерий рода Klebsiella

1.2 Распространение бактерий вида K. oxytoca и факторы их патогенности

1.3 Методы выделения и идентификации бактерий вида K. oxytoca

1.4 Бактериофаги бактерий рода Klebsiella

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Изучение биологических свойств бактерий вида K. oxytoca

3.1.1 Изучение морфологических и тинкториальных свойств K. oxytoca

3.1.2 Изучение культуральных свойств K. oxytoca

3.1.3 Изучение биохимических свойств K. oxytoca

3.2 Оптимизация схемы выделения и идентификации K. oxytoca

3.3 Выделение бактерий K. oxytoca из объектов ветеринарно-санитарного надзора, патологического материала и объектов внешней среды

3.4 Методы выделения и изучения биологических свойств бактериофагов

K. oxytoca

3.4.1 Методы выделения бактериофагов K. oxytoca

3.4.2 Изучение основных биологических свойств выделенных фагов K.oxytoca85

3.4.2.1 Морфология негативных колоний фагов K. oxytoca

3.4.2.2 Определение литической активности фагов K. oxytoca

3.4.2.3 Спектр литической активности фагов K. oxytoca

3.4.2.4 Специфичность действия исследуемых фагов K. oxytoca

3.5 Оптимизация технологических параметров изготовления и контроля индикаторного биопрепарата на основе специфичных бактериофагов

K. oxytoca

3.5.1 Приготовление рабочих фаголизатов K. oxytoca

3.5.2 Испытание биопрепарата на основе бактериофагов K. oxytoca

3.6 Подбор оптимальных условий постановки РНФ

3.6.1 Определение количественного показателя РНФ

3.6.2 Подбор оптимального временного показателя постановки РНФ

3.7 Подбор параметров РНФ для индикации бактерий вида К. оху1оеа в объектах ветеринарно-санитарного надзора

3.7.1 Исследование с помощью РНФ проб воды, контаминированных бактериями вида К. оху1оеа

3.7.2 Исследование с помощью РНФ комбикорма, контаминированного бактериями вида К. оху1оеа

3.7.3 Исследование с помощью РНФ фекалий, контаминированных бактериями вида К. оху1оеа

3.7.4 Исследование с помощью РНФ фарша, контаминированного бактериями вида К. оху1оеа

3.7.5 Изучение эффективности сконструированного фагового биопрепарата

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1 - Методические рекомендации по выделению и идентификации

бактерий вида К. оху1оеа из объектов ветеринарно - санитарного надзора

Приложение 2 - Методические рекомендации по ускоренной индикации и идентификации бактерий вида К. оху1оеа в объектах ветеринарно - санитарного

надзора с применением специфических бактериофагов

Приложение 3 - Временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторных бактериофагов К. оху1оеа\ Кох-9 УГСХА и Кох-11 УГСХА

Приложение 4 - Акты внедрения результатов исследования кандидатской диссертации в учебный процесс

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «УСОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СХЕМЫ ИНДИКАЦИИ И ИДЕНТИФИКАЦИИ БАКТЕРИЙ ВИДА KLEBSIELLA OXYTOCA С ПОМОЩЬЮ ФАГОВОГО БИОПРЕПАРАТА»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы. Бактерии рода Klebsiella- третий по частоте грамотрицательный возбудитель инфекций животных и человека (Киселева Б.С., 1985; Сельникова О.П. с соавт., 1992; Ольховик О.П., 2009; Анганова Е.В., 2012; Онищенко Г.Г., 2002, 2014). Чаще всего негативное проявление осуществляют виды: Klebsiella pneumoniae подвид pneumoniae, Klebsiella pneumoniae подвид rhinoscleromatis и Klebsiella oxytoca. Данные микроорганизмы могут быть причиной метрита и бесплодия у лошадей, мастита у коров, гематогенного остеомиелита, конъюнктивитов, менингитов, сепсисов, острых кишечных инфекций, легочных поражений у животных и человека (Красноголовец В.Н., 1996; Красиков А.П., 1998; Roberts D.E. et al., 2000; Brisse D., et al., 2000; Золотухин С.Н., 2004; Бульканова Е.А., 2004: Андросик Н.Н., 2008).

Широкое распространение клебсиелл в окружающей среде обусловлено выработанной устойчивостью микроорганизма ко многим внешним факторам, в том числе и к антимикробным средствам (Меджидов М.М., 2008). В животноводстве неправильное применение подстилочных материалов в виде торфа или опилок, нарушение условий содержания животного, приводит к контаминации клебсиеллами кормов и воды (Sampimon O.C. et al., 2006). Выделение клебсиелл из различных природных источников, выражает значимость бактерий рода Klebsiella как микроорганизмов-индикаторов санитарного состояния внешней среды (Abbott S.L., 2007; Речкин А.И., 2006, 2007, 2008).

Выделение и идентификацию бактерий вида K. oxytoca проводят бактериологическим методом с использованием целого ряда дифференциально-диагностических питательных сред и тест-систем, что требует значительных затрат времени. ^пользование для бактериологической идентификации микроорганизмов многокомпонентных питательных сред не решает проблемы из -за схожести многих ферментативных реакций у различных представителей семейства Enterobacteriaceae (Омарова С.М. с соавт., 2012; Саидова П.С., 2015). Использование в лабораторных исследованиях ПЦР является эффективным

(Козыровская Н.А., 1994; Кулуев Б.Р., 2012), но, из-за сложности методик и высокой стоимости необходимого оборудования, является недоступным для большинства исследователей.

Решение проблемы ускорения идентификации и индикации возбудителей различных инфекций может обеспечить использование фаговых биопрепаратов (Leclerc H. et al., 2000; Алешкин А.В., 2013; Асланов Б.И., 2015). Работы Е.А. Булькановой с соавт. (2006) приводят данные о положительных результатах идентификации и индикации бактерий рода Klebsiella методом фагодиагностики.

Степень разработанности темы исследования. Попытки по созданию и применению препаратов на основе клебсиеллезных бактериофагов проводились многими исследователями, как в медицинской, так и в ветеринарной практике. В 2011 году по решению Минздрава РФ в продаже появились биопрепараты терапевтического назначения: «Бактериофаг клебсиелл поливалентный очищенный» (состоящий из смеси стерильных фильтратов фаголизатов бактерий K. pneumoniae, K. ozaenae, K. rhinoscleromatis), «Пиобактериофаг» (состоящий из смеси стерильных фильтратов фаголизатов Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis), P. aeruginosa, E. coli, K. pneumoniae, K. oxytoca), «Секстафаг» (состоящий из смеси стерильных фильтратов фаголизатов бактерий Staphylococcus, Streptococcus, Proteus (P. vulgaris, P. mirabilis), P. aeruginosa, энтеропатогенных E. coli, K. pneumoniae) (производитель ФГУП «НПО «Микроген»). В 2006 году Е.А. Булькановой с соавт. были разработаны биотехнологические параметры изготовления и контроля биопрепарата на основе бактериофагов К-10 УГСХА и К-81 УГСХА, для ускоренной индикации и идентификации энтеробактерий вида K. pneumoniae в патологическом материале, кормах, пищевом сырье и объектах внешней среды. Биопрепарата фаговой природы, который можно было бы использовать с целью индикации и идентификации бактерий вида K. oxytoca в практике на сегодняшний день нет. Все современные исследования сосредоточены на изучении биологических характеристик клебсиеллезных фагов и анализе лишь терапевтической эффективности.

Цель диссертационного исследования - усовершенствование схемы индикации и идентификации бактерий вида K. oxytoca с помощью фагового биопрепарата.

Задачи исследования:

1. Изучить основные биологические свойства бактерий вида K. oxytoca на примере референс-штамма K. oxytoca ATCC 8724. На основании полученных данных сконструировать дифференциально-диагностическую среду, подобрать систему бактериологических тестов и апробировать ускоренную схему выделения и идентификации бактерий вида K. oxytoca.

2. За счет оптимизации известных схем выделения бактериофагов, получить специфические бактериофаги активные в отношении K. oxytoca.

3. Изучить основные биологические свойства (морфологию негативных колоний, литическую активность и ее спектр, специфичность, температурную устойчивость, устойчивость к хлороформу) выделенных бактериофагов.

4. Селекционировать выделенные бактериофаги, отвечающие требованиям, предъявляемым к индикаторным биопрепаратам, и сконструировать специфический индикаторный биопрепарат из активных штаммов бактериофагов.

5. С использованием сконструированного биопрепарата, разработать и апробировать схему ускоренной индикации и идентификации бактерий вида K. oxytoca.

Научная новизна исследований. Впервые предложена комплексная схема выделения и идентификации бактерий вида K. oxytoca, включающая использование дифференциально-диагностической среды KL-1 УГСХА, системы бактериологических тестов и сконструированного фагового биопрепарата. Получены новые штаммы бактериофагов, активные в отношении бактерий вида K. oxytoca, выделенные из объектов внешней среды. Подобраны оптимальные параметры схемы постановки реакции нарастания титра фага (РНФ) бактерий вида K. oxytoca, позволяющие проводить ускоренную индикацию искомого микроорганизма в различном материале.

Теоретическая и практическая значимость работы. Сконструирована дифференциально-диагностическая среда KL-1 УГСХА и подобрана система бактериологических тестов, позволяющих выделить и типировать бактерии рода Klebsiella до вида K. oxytoca за 72 часа. Предложены новые штаммы бактериофагов (Kox-9 УГСХА и Kox-11 УГСХА) для конструирования индикаторного биопрепарата.

Разработаны методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий вида K. oxytoca из объектов ветеринарно - санитарного надзора (приложение 1). Разработаны методические рекомендации по ускоренной индикации и идентификации бактерий вида K. oxytoca в объектах ветеринарно -санитарного надзора с применением специфических бактериофагов (приложение 2). Разработана временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторных бактериофагов К. oxytoca: Кох-9 УГСХА и Кох-11 УГСХА (приложение 3).

Материалы диссертационного исследования используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий (приложение 4) на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы факультета ветеринарной медицины и биотехнологии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина» (бакалавриата по направлениям: 06.03.01 -«Биология» (дисциплины: «Микробиология», «Спецпрактикум», «Санитарная микробиология»), 36.03.01 - «Ветеринарно-санитарная экспертиза» (дисциплины: «Биотехнология», «Микробиология», «Ветеринарная санитария», «Бактериальные токсикозы и токсикоинфекции»); специалитета по направлению: 36.05.01 -«Ветеринария» (дисциплины: «Ветеринарная микробиология и микология», «Биотехнология»)) и Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова» (бакалавриата по направлениям: «Биология» профиль - 06.03.01 - Фитодизайн в

садово-парковом и ландшафтном строительстве в следующие программы: «Микробиология и вирусология», «Введение в биотехнологию», «Методы биомониторинга и биондикации»; профиль - 06.03.01 - Экономика природопользования и экологический менеджмент в следующие программы: «Микробиология и вирусология», «Введение в биотехнологию», «Экология микроорганизмов», «Методы лабораторных исследований», «Методы биомониторинга и биоиндикации»; «Педагогическое образование» - профиль -44.03.05 - Биология, химия / География, экология в следующие программы: «Микробиология», «Основы биотехнологии», «Методы биомониторинга и биоиндикации», «Вирусология», «Индикация состояния окружающей среды»; магистратуры по направлениям: «Биология» - профиль - 06.04.01 -Биотехнология с основами нанотехнологии в следующие программы: «Биотехнология», «Клеточные технологии», «Частная микробиология», «Микробиологические методы исследования», «Нанотехнологии в биотехнологии»).

Методология и методы исследования. Методологическую основу работы составили анализ литературы по проблеме и традиционные общепринятые методики исследований (эксперимент). В работе использовали методы: микробиологические, биотехнологические, с последующей компьютерной статистической обработкой и научным анализом полученных данных.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Схема ускоренной идентификации бактерий вида K. oxytoca на основе дифференциально-диагностической среды KL-1 УГСХА с системой бактериологических тестов позволяет выделить и идентифицировать бактерии данного вида за 72 часа.

2. Схема выделения бактериофагов K. oxytoca, позволяющая выделить изоляты фагов, активных в отношении данного вида.

3. Биологические свойства селекционированных бактериофагов соответствуют свойствам, предъявляемым к свойствам индикаторного биопрепарата.

4. Схема ускоренной идентификации бактерий вида К. oxytoca на основе дифференциально-диагностической среды КЬ-1 УГСХА с использованием сконструированного фагового биопрепарата позволяет выделить и идентифицировать бактерии данного вида за 48 часов.

5. Схема ускоренной индикации бактерий вида К. oxytoca позволяет обнаружить в РНФ штаммы клебсиелл в минимальной концентрации 103 м.к./мл за 22 часа.

Степень достоверности и апробация результатов. Диссертационные исследования проведены при финансовой поддержке «Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере» (договор № 1636 ГУ1/2014 от 07.03.2014). Материалы диссертации доложены и обсуждены на следующих конференциях: Международный молодежный научный аграрный форум «Наука, инновации и международное сотрудничество молодых ученых» (17-20 сентября 2014, Ульяновск), Вторая научно-практическая конференция с международным участием «Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности» (22-24 сентября 2014, Санкт-Петербург), Международная научно-практическая конференция «Биотехнология: реальность и перспективы» (1 -3 декабря 2014, Саратов), Международная научно-практическая конференция «Актуальные вопросы контроля инфекционных болезней животных» (11-12 декабря 2014, Покров), Международная научно-практическая конференция «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» (5-6 февраля 2015, Ульяновск), Международная научно-практическая конференция «Вклад молодых ученых в аграрную науку» (22-23 апреля 2015, Кинель), VII Международная научно-практическая конференция «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения»(4-5 февраля 2016, Ульяновск), Международная научно-практическая Интернет-конференция «Современное экологическое состояние природной среды и научно-практические аспекты рационального природопользования» (29 февраля 2016, Астрахань), Третья научно-практическая конференция с международным

участием «Бактериофаги. Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности» (13-15 октября 2016, Москва), VIII Международная научно-практическая конференция «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения» (7-8 февраля 2017, Ульяновск).

По теме диссертации опубликовано 23 работы, из них 3 в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследований, результатов исследования и их обсуждения, заключения, выводов, практических предложений, списка сокращений и условных обозначений, списка использованной литературы, списка иллюстративного материала, приложений. Материалы диссертации изложены на 165 страницах, включают в себя 43 таблицы и 55 рисунков.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Таксономия бактерий рода Klebsiella

Род Klebsiella считается одним из первых изученных родов в семействе Enterobacteriaceae. Он был назван Trevisan в 1885 году в честь немецкого микробиолога Klebs. Типовым видом является вид K. pneumoniae. Чистую культуру бактерий в 1882 году выделил Friedländer. В том же году Frisch впервые описал бактерии данного рода, выделенные от больного страдающего гранулематозным заболеванием носа и верхних дыхательных путей (склерома носа). В 1887 году Trevisan дал название данному виду бактерий - «Klebsiella rhinoscleromatis» (Brisse S. et al, 2004).

Abel в 1893 году занимался изучением и описанием капсульных бацилл известных как «Bacillus mucocus ozaenae» полученных из гнойных выделений носа человека. Впоследствии бактерии данного вида были переведены в род Klebsiella под видом K. ozaenae.

Изучение болезней, вызываемые представителями рода Klebsiella, привело к дифференциации рода на три вида: К. pneumoniae, К. ozaenae и К. rhinoscleromatis. Но появления новых методов придавало сложности и неоднозначности таксономической картине. Виды постоянно пересматривались, объединялись, исключались из рода.

Дальнейшее изучение и дифференциация рода Klebsiella на виды привело к сложности систематики. Так, австрийский педиатр Escherich, после долгих исследований имеющихся штаммов, вид K. pneumoniae переименовал в «Bacterium lactis aerogenes» (1885), а Kruse (1896) в «Bacillus aerogenes», потом в «Aerobacter aerogenes» и в дальнейшем Hormaeche, Edwards в «Enterobacter aerogenes» (1960). Такая путаница была связана с тем, что штаммы и K. pneumoniae и A. aerogenes хорошо ферментатировали углеводы (глюкоза, лактоза, сахароза, маннит, сорбит и т.д.), давали положительную реакцию Фогеса-Проскауэра и образовывали капсулы. Разъяснил сложившуюся картину своими

опытами M0ller (1955). Одним из дифференцирующих признаков он предложил тест на декарбоксилазу и изучение подвижности бактерий. В 1960 году Hormaeche, Edwards выяснили, что K. pneumoniae неподвижна и оринитиндекарсобксилаза отрицательна, в то время как A. aerogenes подвижна и орнитиндекарбокилаза положительна. Для устранения путаницы A. aerogenes был переведен в род Enterobacter и включен в вид E. aerogenes. Исторически такое разделение можно считать условным, поскольку коллекция типовых штаммов была недоступна.

Тем не менее, E. aerogenes по фенотипическим признакам, связанности ДНК и последовательности 16S rRNA намного ближе к K. pneumoniae, чем E. cloacae. Перевод E. aerogenes в род Klebsiella произошел под видом K. mobilis. В это время появились три основные классификации - ^wan (1960), Bascomb (1971) и 0rskov (1984) (таблица 1).

Таблица 1 -Классификация видов бактерий рода Klebsiella в различных таксономических системах

Классификационная система

по Cowan no Bascomb по 0rskov

K. aerogenes K. edwardsii K. aerogenes/ oxytoca / edwardsii K. pneumoniae

subsp.pneumoniae

subsp. edwardsii K. pneumoniae subsp.ozaenae

subsp.atlantae sensu stricto subsp. rhinoscleromatis

K. pneumoniae sensu lato K. oxytoca

K. ozaenae K. ozaenae K. terrigena

K. rhinoscleromatis K. rhinoscleromatis K.planticola (syn.K.trevisanii)

K. «unnamed group»

E. aerogenes K. ornithinolytica

Flügge (1886) занимался изучением бактерий выделенных из старого молока. Бактерия Bacillus oxytocus perniciosus в 1923 году уже была известна как Aerobacter oxytocum, а в 1956 году ученые работали с K. oxytoca. Долгое время штаммы K. oxytoca относились к индолоположительныму подвиду K. pneumoniae (0rskov I. et al., 1977, 1984). Но с появлением новых методик и технических возможностей были показаны отличия в последовательности ДНК и четкие различия между K. oxytoca и K. pneumoniae.

Расширение спектра биохимических тестов и изучение ДНК позволило выделить и другие виды бактерий рода Klebsiella: K. terrigena, K. planticola (Bagley S.T. et al., 1981; Monnet D. et al., 1994). Причем оба вида были выделены из окружающей среды. В 1986 году, на основании полученных результатов изучения гомологичности последовательности нуклеотидов в ДНК, К. planticola и К. trevisanii были объединены в один вид К. planticola (Grimont A.D. et al., 2006).

В ходе проведенных исследований учеными разных лабораторий бактерии Calymmatobactrium granulomatis были отнесены к бактериям рода Klebsiella под видом K. granulomatis. Частичное секвенирование генома (ген rpo B) Calymmatobactrium granulomatis подтвердило выводы Drancourt et al. (2001) о родстве с K. pneumoniae.

Следует отметить, что систематику клебсиелл нельзя считать завершенной, в частности, в 2001 году виды K. planticola, K. ornithinolytica, K. terrigena было предложено отнести к другому роду - Raoultella (Sakazaki R. et al., 1989; Al Hulu S.M. et al., 2009). Построение филогенетического дерева и определение видов к роду Klebsiella или Raoultella основывалось на анализе нуклеотидной последовательности 16S rRNA (рисунок 1).

Рисунок 1 - Филогенетическое дерево бактерий рода Klebsiella и Raoultella, основанное на анализе нуклеотидной последовательности 16S rRNA гена (Arenas N.E. et

al., 2009)

Принцип метода основан на ПЦР амплификации полной или частичной последовательности гена с последующим определением нуклеотидной последовательности. Протяженность 16S rRNA составляет приблизительно 1540 п.н., нуклеотидная последовательность чередуется участками консервативными для всех видов бактерий с вариабельными, что позволяет подобрать универсальные праймеры для ПЦР амплификации практически полной последовательности (Nonnecke B.L. et al., 1984; Minami J. et al., 1992; Merino S. et al., 2000; Kanki M. et al., 2002; Arenas N.E. et al., 2009; Stojpwska K.A. et al., 2016).

Филогенетический анализ 16S rRNA доказывает невозможность объединения видов K. planticola, K. ornithinolytica, K. terrigena в один род, поскольку результаты анализа показывают лишь вариативность внутри популяции бактерий и способность эволюции генома, что приводит к бактериальной адаптации в различных условиях окружающей среды (Пестова Н.Е., 2011).

На основании результатов секвенирования генов rpoB, gyrA, infB, mdh (кодируют синтез малат дегидрогеназы), phoE (кодирует фосфатный транспортер) и nifH (кодирует синтез нитроген редуктазы, участвующий в фиксации азота) различных штаммов клебсиелл, включая бактерии, выделенные из риса, кукурузы, сахарного тростника, бананов, а также человека (Cstanheira M. et al., 2009), в 2003 году учеными было предложено выделить в роду новый вид - K. variicola.

Таким образом, на сегодняшний день таксономия клебсиелл имеет следующую структуру:

1. Klebsiella pneumoniae включает следующие подвиды:

1 а) Klebsiella pneumoniae subspecies pneumoniae (изучены: Schroeter, 1886; 0rskov, 1984). Возбудитель инфекций мочеполовых путей, гнойных абсцессов печени, пневмонии. Типовые штаммы - АТСС 13883, NCTC 9633, CDC 298-53, CIP 82.91.

2 б) Klebsiella pneumoniae subspecies ozaenae (изучены: Abel, 1893; 0rskov, 1984). Возбудитель инфекций мочеполовых путей, дыхательных путей, цистита. Типовые штаммы - АТСС 11296, NCTC 5050, CIP 52.211.

3 в) Klebsiella pneumoniae subspecies rhinoscleromatis (изучены: Trevisan, 1987; 0rskov, 1984). Возбудитель инфекций дыхательных путей, склеромы. Типовые штаммы - АТСС 13884, NCTC 5046, CIP 52.210.

2. Klebsiella oxytoca (изучены: Flügge, 1886; Lautrop, 1956). Возбудитель инфекций мочеполовых путей, ЖКТ, мозговых оболочек глаза, стоматитов. Типовые штаммы - АТСС 13182.

3. Klebsiella granulomatis (изучены: Aragäo, Vianna, 1913; Carter et al., 1999). Возбудитель хронических генитальных язв. Типовые штаммы отсутствуют в связи с изучением вида в настоящее время.

4. Klebsiella planticola (изучены: Bagley et al., 1981). Возбудитель инфекций ЖКТ, гастроэнтерита. Типовые штаммы - АТСС 33531, CIP 100751, V-236, CDC 4245-72.

5. Klebsiella ornithinolytica (изучены: Sakazaki et al., 1989). Возбудитель инфекций дыхательных путей, ЖКТ. Типовые штаммы - АТСС 31898, NIH 90-72.

6. Klebsiella terrigena (изучены: Izard et al., 1981). Возбудитель урогенитальных инфекций, конъюнктивита. Типовые штаммы - АТСС 33257, CIP 80-07, CUETM 77-176.

7. Klebsiella mobilis (изучены: Bascomb et al., 1971). Возбудитель инфекций ЖКТ (наиболее часто у младенцев). Типовые штаммы - АТСС 13048, NCTC 10006, CIP 60.86, CDC 819-56.

8. Klebsiella variicola (изучены: Rosenblueth et al., 2004). Возбудитель фитопатогенных заболеваний. Типовые штаммы- F2R9, ATCC BAA-830, CFNE 2004.

9. Klebsiella singaporensis (изучены: Li et al., 2004). Типовые штаммы отсутствуют в связи с изучением вида в настоящее время.

10. Klebsiella michiganensis (изучены: Saha et al., 2013). Типовые штаммы- W14, ATCC BAA-2403, DSM 25444. Патогенный потенциал изучается.

11. Klebsiella quasipneumoniae (изучены: Brisse et al., 2014). Типовые штаммы - A030, SB11, CIP 110771, DSM 28211. Патогенный потенциал изучается.

1.2 Распространение бактерий вида K. oxytoca и факторы их

патогенности

Бактерии, принадлежащие к роду Klebsiella, относят к убиквитарным микроорганизмам. В настоящее время выделяют два основных биотопа бактерий:

1. Бактерии колонизируют слизистую оболочку тонкого кишечника и верхних отделов респираторного тракта у различных животных и человека. Основной возбудитель заболеваний: K. pneumoniae подвид pneumoniae, K. pneumoniae подвид rhinoscleromatis и K. oxytoca (Davis T.J., 1974; Bagley S. et al.,1978; Bodey G.P., 1989; Байрамова А.С., 1991; Ковалева Е.П., 1993; Береснева Е.В., 2003; Борисенкова А.Н., 2003; Евтеева Н.И., 2005, 2007, 2008; Al-Anazi S.M. et al., 2008; Bleich A. et al., 2008; Chang- Ro Lee, 2016).

Бактерии вида K. oxytoca присутствует при заболеваниях у широкого круга млекопитающих (Орешкин А.С., 2000; Аблов А.М., 2014; Вахрушева Т.И., 2017) и насекомых. Так, частой причиной метритов, эндометритов, миометритов, цервицитов, вагинитов половых органов и нарушением, как следствие, оплодотворяемости у лошадей является, наряду с E. coli, клебсиеллы (в том числе K. oxytoca) (Hogenauer C. et al., 2006; Семенцов В.И., 2009; Соболев В.Е., 2012; Смирнова Л.И., 2014; Azevedo C. et al., 2016; Estel K.E. et al., 2016). Самые крупные вспышки метритов отмечены в 1928 году в США и в 1986 году во Франции. Последние сообщения о метритах отмечены в Португалии в 2010 году, Израиль- 2012 год. В России случаев контагиозного метрита лошадей не отмечено (Информационно-аналитический центр, Россельхознадзор).

Бактерии вида K. oxytoca часто связывают с маститами у коров (Сидоренко С.В., 2004; Pitkala A. et al., 2004; Mdegela R.H. et al., 2009; Milka P. et al., 2014; Osman K. et al., 2014) и с различными заболеваниями тяжелого течения у лошадей, собак, обезьян, морских свинок и птиц (кур, гусей, уток) (Racklyef D.J. et al., 2000; Roberts et al., 2000). Сообщения о заболеваниях у лемуров с фатальным исходом в 1989 году были во Французской Гвинее (Nemet Z. et al., 2011). В России на неблагополучных по клебсиеллезу птицефабриках возбудитель

выделяется от всех возрастных групп бройлеров, из инкубационных яиц и эмбрионов. Частота выделения зависит от возраста птицы. Из замерших эмбрионов клебсиелл изолируют от 20,8% до 50,0% случаев, от цыплят 130 -дневного возраста - 16,6% — 50%, цыплят старше 40 дней и взрослой птице -11,2% - 55,5% (Ольховик О.П., 2009). С июня по октябрь 2015 года в Ставрополе отмечены случаи возникновения вспышек заболевания клебсиеллезом в хозяйствах по разведению кроликов, свиней и КРС (телята).

Высказываются предположения, что переносчиками и источниками бактерии в больницах и госпиталях являются тараканы (Dillon et al., 2002).

У человека бактерии вида K. oxytoca могут входить в состав нормальной микрофлоры кишечника, носоглотки и кожных покровов (Smith S.A. et al., 2009; Леванова Л.А., 2016). Взаимодействие бактерий вида K. oxytoca и человека отмечается в диапазоне от бессимптомного носительства (нахождение в кишечнике человека в норме) до тяжелых форм заболевания, в частности это касается внутрибольничных инфекций (Frindlander C., 1982; Westbroock G.L., 2000; Pisharath et al., 2005; Yeruham I. et al., 2006; Zollner- Schwetz I. et al., 2008; Joainig M.M. et al., 2010; Б.Р., 2013; Хамидова Т.М., 2015; Тусматов Ш.М., 2016). Долгое время бактерии данного вида расценивали как возбудителей у человека лишь респираторных инфекций, однако позднее была установлена их способность вызывать бактериемии, инфекции нагноительного характера у рожениц и новорожденных, воспалительные поражения мозговых оболочек, суставов, мочеполовой системы, кишечника (Nakahama C., 2003; Gupta A. et al., 2003).

2. Окружающая среда. Бактерии выделяют из смывов с различных предметов, проб воды (Seidler R.J. et al., 1977; Павлова И.Б., 2007), почвы, с древесины и растений (включая сельскохозяйственного назначения) (Grimont F.et.al., 1981; Orskov, 1984; Brown C., 1973; Seidler R.J., 1975; Boehme S. et al., 2004; Аклан Н.Ш.М., 2006). Диапазон объектов, с которых выделяли бактерии данного вида, достаточно широк (Хаммади А.А.Р.Д, 2013): промышленные сточные воды, продукты растениеводства (Brown C., Seidler R.J., 1973), пища с высоким содержанием сахаров (Duncan, Razzell, 1972; Mundt et al., 1978),

замороженные концентраты фруктовых соков (Fuentes et al., 1985), растения и деревья (Brown C., Seidler R.J., 1973).

Бактерии вида K. oxytoca выделяют из корней растений. Установлено, что бактерии могут фиксировать азот, в связи с чем классифицируются как ассоциативный фиксатор азота или диазотроф. В качестве примеров выделения данного вида из таких источников отметим: корни риса, почва с сельскохозяйственных угодий (в том числе пастбищ), гниющая древесина (Seidler R.J. et al., 1981), корни кукурузы, корни ячменя и других злаковых.

Важная роль бактерий рода Klebsiella в начале нозокомиальных инфекций, эпидемиология и факторы патогенности были рассмотрены в 1998 году Podschun и Ullman (1990, 1992, 2001).

К основным факторам патогенности K. oxytoca относят (Маслова Э.И., 1980; Газиев Г.М., 1988; Arakawa Y.M. et al., 1989; Бондаренко В.М., 1998, 2000; Yigit Y. et al., 2000; Бушуева Е.Н., 2002; Усаева Я.С., 2007; Борисовец Д.С., 2009; Alison D. et al., 2014) (рисунок 2):

- наличие капсулы (определяют резистентность клебсиелл к поглощению фагоцитами и комплемент-зависимому цитолизу, а также действию различных антибактериальных субстанций);

- наличие слизи (ее продуцируют мукоидные штаммы, но не из капсульного слоя; состав слизистого слоя остается неизвестным, его потеря приводит к значительному снижению вирулентности. Образование слизи кодируют плазмидные гены, потеря которых приводит к исчезновению вирулентных свойств);

- структура адгезии и колонизации (образование экзополимеров, биопленочных сообществ) (Носова Е.С., 2008);

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Садртдинова Гузелия Рафиковна, 2017 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Аблов, А.М. Выделение условно-патогенных энтеробактерий из биоматериала животных и птиц (по данным Иркутской межобластной ветеринарной лаборатории) / А.М. Аблов, Е.В. Анганова // Сибирский медицинский журнал. -2014. - Т. 130, № 7. - С. 106-109.

2. Акимкин, В.Г. Бактериофаги: исторические и современные аспекты их применения: опыт и перспективы / В.Г. Акимкин, О.С. Дарбеева, В.Ф. Колков // Клиническая практика. - 2010. - № 4. - С. 48-54.

3. Аклан, Н.Ш.М. Распространенность и биологические свойства клебсиелл в условиях техногенной нагрузки крупного промышленного города: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.16/ Аклан Набила Шаеф Мохаммед. -Волгоград, 2006. - 23 с.

4. Алексахина, Н.Н. Влияние оксидов металлов на рост, гемолитические и серологические свойства Klebsiella pneumoniae / Н.Н. Алексахина, Л.В. Мирясова, И.А. Баснакьян //Микробиология. - 2002. - № 6.- С. 13 - 18.

5. Алешкин, А.В. Области применения бактериофагов // Бактериофаги микроорганизмов, значимых для животных, растений и человека. - Ульяновск: Ульяновская ГСХА. - 2013. - С. 29-32.

6. Амосова, Л. А. Подбор питательной среды для культивирования бактерий рода Salmonella, Escherichia, Proteus, Klebsiella, Pasteurella, Mannheimia // Эпизоотология, иммунология, фармакология и санитария. - 2013. - № 1. - С. 3-7.

7. Анганова, Е.В. Условно-патогенные энтеробактерии: доминирующие популяции, биологические свойства, медикоэкологическая значимость: автореф. дис. ... д-ра биол. наук: 03.02.03 / Анганова Елена Витальевна. - Иркутск, 2012. -46 с.

8. Андросик, Н.Н. Современные проблемы энтеробактериальных болезней и пути их решения // Эпизоотология, иммунобиология, фармакология и санитария: международный научно-теоретический журнал. - 2008. - № 1. - С. 9-15

9. Асланов, Б.И. Бактериофаги - эффективные антибактериальные средства в условиях глобальной устойчивости к антибиотикам // Медицинский совет. Гастроэнтерология. - 2015. - № 13. - С. 106-110.

10. Байрамова, A.C. Распространение клебсиелл в акушерских стационарах и некоторые биологические свойства выделенных штаммов /А.С. Байрамова, А.П. Батуро, Э.К. Мурадова, Г.А. Юсова, Р.А. Агаева // ЖМЭИ. 1991 .-№ 8.- С. 40-43.

11. Батуро, А.П. Энтеробактерии. Частная микробиология. Клиническая лабораторная аналитика в пяти томах. Под общей редакцией В.В.Меньшикова. -М.: Агат-Мед, 2003. T. IV. - С. 398-411.

12. Береснева, Е.В. Роль ассоциации энтеропатогенных бактерий и гельминтов в инфекционной патологии птиц: дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03, 03.00.19 / Береснева Елена Владимировна. - г. Ставрополь. - 2003. - 140 с.

13. Бойцов, А.Г. Бактериофаги / А.Г. Бойцов, А.А. Порин, О.Н. Ластовка // СПб: Санкт-Петербургская медицинская академия, 2006. - 99 с.

14. Бондаренко, В.М. Секретируемые факторы патогенности энтеробактерий / В.М. Бондаренко, А.Р. Мавзютов // ЖМЭИ. - 2002. -№ 1.- С. 8489.

15. Бондаренко, В.М. Экспериментальная модель кишечного клебсиеллеза / В.М. Бондаренко, Н.И. Потатуркина-Нестерова, А.С. Нестеров // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1998. -№ 1. - С. 3-6.

16. Борисенкова, А.Н. Спектр микрофлоры, выделяемой от птиц в хозяйствах различного технологического направления / А.Н. Борисенкова,Р.Н. Коровин, Т.Н. Рождественская // РацВетИнформ. -2003. -№ 10. - С. 6-8.

17. Борисовец, Д.С. Факторы патогенности бактерий рода Klebsiella и патогенез клебсиеллеза у сельскохозяйственных животных // Экология и животный мир: международный научно-практический журнал. - 2009. - № 1. - С. 4-10.

18. Бульканова, Е.А. Биологические свойства бактерий рода Klebsiella и их значение в патологии животных / Е.А. Бульканова, С.Н. Золотухин, Е.Н. Митрохина //

Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2004. -№ 12.- С. 34-40.

19. Бульканова, Е.А. Выделение бактериофагов рода Klebsiella из объектов внешней среды / Е.А. Бульканова, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Сборник научных трудов межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых Приволжского федерального округа. - Самара, 2005. - С. 189-191.

20. Бульканова, Е.А. Выделение бактериофагов рода Klebsiella из сточных вод / Е.А. Бульканова, С.Н. Золотухин // Вестник Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии. - 2004. - № 12.- С. 40-42.

21. Бульканова, Е.А. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Klebsiella, конструирование на их основе биопрепарата: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07, 03.00.23 / Бульканова Елена Анатольевна. - Саратов, - 2006. - 21 с.

22. Бульканова, Е.А. Выделение, диагностика и идентификация бактерий рода Klebsiella // Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых. - Ульяновск: Ульяновская ГСХА им.П.А.Столыпина, 2004. - С. 257-262.

23. Бульканова, Е.А. Изучение устойчивости клебсиеллёзных бактериофагов к воздействию температуры и хлороформа / Е.А. Бульканова, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Молодежь и наука XXI века: Материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина, 2006. - С. 333-336.

24. Бульканова, Е.А. Фагоидентификация бактерий рода Klebsiella / Е.А. Бульканова, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Роль молодых ученых в реализации национального проекта «Развитие АПК»: Материалы международной научно-практической конференции. - Москва: Московский государственный агроинженерный университет им. В.П. Горячкина, 2007. - С. 222-225.

25. Бухарова, Е.В. Патогенный потенциал Klebsiella spp. и Staphylococcus aureus при ассоциативном симбиозе у детей первого года жизни / Е.В. Бухарова, В.В. Долгих, С.М. Попкова, Е.Б. Ракова, Н.М. Шабанова, У.М. Немченко, Е.И.

Иванова, Л.В. Сердюк// Успехи современного естествознания. - 2014. - № 12-2. -С. 20-24.

26. Бушуева, E.H. Факторы вирулентности условно-патогенной микрофлоры при урогенитальных инфекциях // Материалы VIII съезда Всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов. - М., 2002. - Т. 1.- С. 146.

27. Вахрушева, Т.И. Патоморфологические изменения при клебсиеллезе у кроликов // Вестник Красноярского государственного аграрного университета. -2017. - № 2 (125). - С. 44-54.

28. Габрилович, И.М. О взаимодействии фагов Klebsiella с чувствительными клетками / И.М. Габрилович, Т.Ч. Жугова // Вирусы микроорганизмов. - Пущино: Научный центр биологических исследований РАН СССР. - 1981. - С. 112 - 113.

29. Габрилович, И.М. Об использовании бактериофагов для идентификации клебсиелл / И.М. Габрилович, А.Б. Азаматова, Т.А. Хакешева // Проблемы клинической микробиологии в неинфекционной клинике. М., 1983. - С. - 139 - 140.

30. Газиев, Г.М. Определение факторов патогенности клебсиелл / Г.М. Газиев, А.П. Батуро, А.А. Плетнев // Этиология острых кишечных заболеваний: сб. науч. трудов. - М., 1988. - С. 86 - 90.

31. Ганюшкин, В.Я. Бактериофаги Salmonella cholerae-suis сравнительная характеристика и практическое применение: автореф. дис. ... д-ра. ... вет. наук: 16.00.03 / Ганюшкин Виктор Яковлевич. Ульяновск, 1984. - 45 с.

32. Ганюшкин, В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии / В.Я. Ганюшкин // Ульяновск, 1988. - 84 с.

33. Ганюшкин, В.Я. Специфичность литического действия сальмонеллезных бактериофагов // Вопросы ветеринарной микробиологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. - Ульяновск, 1994. - С. 2226.

34. Гельфанд, Б.Р. Эпидемиологический мониторинг нозокомиальных инфекций / Б.Р. Гельфанд, Б.З. Белоцерковский, И.А. Милюкова, Е.Б. Гельфанд, Т.В. Попов, Д.Н. Проценко, Б.Т. Чурадзе // Инфекции в хирургии. - 2013. - № 2. -С. 44-50.

35. Горченина, Л.В. Среды для выделения клебсиелл. / Л.В. Горченина, Б.С. Киселёва // ЖМЭИ. - 1985. - № 1 .- С. 19-22.

36. Джапаридзе, Г.Г. Перспективы использования бактериофагов для диагностики, лечения и профилактики инфекции, вызываемые бактериями рода клебсиелла и энтеробактер / Г.Г. Джапаридзе, А.О. Голиджашвили, А.Б. Капанадзе // Перспективы использования препаратов бактериофага для превенции и лечения инфекции, вызванных патогенными и условно-патогенными микроорганизмами: материалы международного семинара. - Тбилиси, 2005. - С. 40.

37. Дохтукаева, А.М. Чувствительность к антибиотикам некоторых представителей родов Klebsiella / А.М. Дохтукаева, Я.С. Усаева // Приоритетные направления развития науки и образования. - 2016. -№ 4-1 (11).- С. 12-17.

38. Евтеева, Н.И. Klebsiella sp. в природной среде / Н.И. Евтеева, А.И. Речкин //Научная мысль информационного века. - 2008. - Прага, 2008. - Т. 11. С. 9-11.

39. Евтеева, Н.И. Новые природные резервуары и биологические свойства штаммов Klebsiella pneumoniae / Н.И. Евтеева, А.И. Речкин // Симбиоз Россия 2008: Сборник научных трудов I Всероссийского, с международным участием конгресса студентов и аспирантов биологов. - Казань, 2008. - С. 114-119.

40. Евтеева, Н.И. Экологические аспекты существования энтеробактерий / Н.И. Евтеева, А.И. Речкин // Современные проблемы медицинской микробиологии: Материалы всероссийской научной конференции / Под ред. А.П. Щербо, В.Д. Бадикова, В.Г. Кубася. - СПб.: ГНУ ИОВ РАО, 2007. - С. 188-189.

41. Евтеева, Н.И. Энтеробактерии в ближайшем окружении человека / Н.И. Евтеева, А.И. Речкин // Популяции в пространстве и во времени: Сборник

материалов VIII Всероссийкого популяционного семинара. - Н. Новгород, 2005. -С. 89-91.

42. Ефимова, М.Г. Оптимизация способа получения поливалентного бактериофага / М.Г. Ефимова, Е.В. Функнер // Медицинские иммунобиологические препараты в XXI веке: разработка, производство и применение: Материалы Всероссийской научной конференции с международным участием. - Уфа, 2005. - С. 269-271.

43. Ефимова, Н.П. Разработка технологии изготовления суппозиториев с клебсифагом / Н.П. Ефимова, М.А. Каменева, Д.В. Грязнова, Е.В. Функнер // Актуальные вопросы вакцинно-сывороточного дела в XXI веке: Материалы конференции. - Пермь, 2003. - С. 238-242.

44. Ефимочкина, Н.Р. Свойства энтеробактерий, выделенных из молочных продуктов / Н.Р. Ефимочкина, Н.В. Ростова, Ю.М. Маркова, Ю.В. Короткевич, С.А. Шевелёва // Молочная промышленность. - 2015.- № 11.- С. 3336.

45. Журавская, Н.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов бактерий вида Yersinia pseudotuberculosis / Бактериофаги микроорганизмов значимых для животных, растений и человека: результаты научных исследований сотрудников кафедры микробиологии / Под ред. Д. А. Васильева, С. Н. Золотухина. - Ульяновск, 2013. - С. 89-100.

46. Золотухин, Д.С. Выделение бактериофагов энтеробактерий рода Hafnia и изучение их литической активности / Д.С. Золотухин, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы IV Международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская ГСХА, 2012. - Т. 1. - С. 257-262.

47. Золотухин, Д.С. Фагопрофилактика смешанной кишечной инфекции поросят-сосунов, вызываемой патогенными энтеробактериями / А.С. Мелехин, Д.А. Васильев, Д.С. Золотухин // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы IV

международной научно-практической конференции. - Ульяновск, 2012. - Т. 1. - С. 262-267.

48. Золотухин, Д.С. Характеристика энтеробактерий рода Hafnia // Материалы 1-ой региональной студенческой научно-практической конференции по природоведению. - Ульяновск, 2011. - С. 73-75.

49. Золотухин, Д.С. Энтеробактерии рода Hafnia / Д.С. Золотухин, Д.А. Васильев // Настоящее и будущее биотехнологии в решении проблем экологии, медицины, сельского, лесного хозяйства и промышленности: Научно-практический семинар с международным участием. - Ульяновск, 2011. - С. 29-32.

50. Золотухин, Д.С. Этиология смешанных кишечных инфекций у поросят сосунов /А.С. Мелехин, Д.С. Золотухин, С.Н. Золотухин // Вестник ветеринарии. - 2011. - Т. 59, № 4. - С. 75-77.

51. Золотухин, С.Н. Выделение и селекция клонов бактериофагов патогенных энтеробактерий/ С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев, Л.С. Каврук, Н.И. Молофеева, Л.П. Пульчеровская, Б.М. Коритняк, Е.А. Бульканова, Н.А. Феоктистова, Е.Н. Пожарникова, А.С. Мелехин, Н.Г. Барт, Н.П. Катмакова // Профилактика, диагностика и лечение инфекционных болезней, общих для людей и животных: Материалы международной научной конференции - Ульяновск, 2006. - С. 227 - 231.

52. Золотухин, С.Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных. - Ульяновск. - 2004. - С. 64 - 75.

53. Зубик, Т.М. Дифференциальная диагностика инфекционных заболеваний / Т.М. Зубик, К.С. Иванов, А.П. Казанцев, А.Л. Лесников // Л.: Медицина, 1991. -376 с.

54. Зуева, Л.П. Бактериофаги - факторы эволюции госпитальных штаммов и средства борьбы с инфекциями/ Л.П. Зуева, Б.И. Асланов, А.А. Долгий, А.Е. Гончаров, А.И Архангельский // Эпидемиология и инфекционные болезни. Актуальные вопросы. - 2012. - № 1. - С. 9-13.

55. Зурабов, А.Ю. Создание отечественной коллекции бактериофагов и принципы разработки лечебно-профилактических фаговых препаратов / А.Ю.

Зурабов, Н.Н. Каркищенко, Д.В. Попов, Е.Л. Жиленков, В.М. Попова // Биомедицина. - 2012. - № 1. - С. 134-138.

56. Казьянин, А.В. Создание производственной коллекции штаммов-продуцентов для получения комплексного фагового препарата / А.В. Казьянин, Е.В. Функнер // Химия, химическая технология и биотехнология на рубеже тысячелетий: материалы международной научно конференции. - Томск, 2006. - С. 381-383.

57. Калина, Г.П. Среды узконаправленного действия для обнаружения и количественного учета клебсиелл // Микробиология. - 1980. - № 6. - С. 28 - 32.

58. Карамышева, Н.Н. Выделение профага бактерий Desulfovibrio desulfuricans/ Н.Н. Карамышева, Д.А. Васильев, Ю.В. Пичугин, С.Н. Золотухин // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы международной научно-практической конференции. Ульяновск: УГСХА им. П.А. Столыпина, 2012. - Т. 1. - С. 267-271.

59. Карсакова, М.А. Изучение биохимических свойств полученных штаммов бактерий рода Klebsiella / М.А. Карсакова, Ш.А. Айрапетян, О.А. Дубровская, Е.А. Ляшенко // Актуальные проблемы инфекционной патологии и биотехнологии: Материалы V-й Всероссийской (с международным участием) студенческой научной конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2012. - С. 33-35.

60. Катаева, Л.В. Оценка литической активности некоторых бактериофагов / Л.В. Катаева, А.А. Вакарина, Н.Ф. Нижегородцева // Бактериофаги: Теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия им. П.А. Столыпина, 2013. - Т. II. - С. 15-22.

61. Катер, Э. Бактериофаги: биология и практическое применение / Э. Катер, А. Сулаквелидзе. - М.: Научный мир, 2012. - 640 с.

62. Киселева, Б.С. Результаты идентификации клебсиелл при различных заболеваниях новорожденных и детей раннего возраста / Б.С. Киселева, Г.И. Гедзе, Т.Л. Солодова // Микробиология. - 1982. - № 7. - С. 52 - 57.

63. Киселева, Б.С. Род Klebsiella // Энтеробактерии: Руководство / Под ред. В.И. Покровского. - М.: Медицина, 1985. - С. 171 - 172.

64. Ковалева, Е.П. Инфекции, вызванные условно-патогенными микроорганизмами / Е.П. Ковалева, А.Р. Рейзис // Профилактика внутрибольничных инфекций / Под ред. Е.П. Ковалевой, Семиной: руководство для врачей. - М., 1993. - С. 56 - 69.

65. Козыровская, H.A. Молекулярно-биологические методы детекции и идентификации микроорганизмов в окружающей среде / Н.А. Козыровская, Г.Л. Ковтунович // Биополимеры и клетка. - 1994. - Т. 10. - № 3-4. - С. 5-23.

66. Красиков, А.П. Клебсиеллезы и патогенность для животных / А.П. Красиков, Д.В. Конин // Материалы учебно-методической и научо-производственной конференции. - Омск: ОмГАУ. - 1998. - С. 70-71.

67. Красноголовец, В.Н. Клебсиеллезные инфекции / В.Н. Красноголовец, Б.С. Киселева. - М.: Медицина, 1996. - С. 256.

68. Крылова, М.Д. Применение бактериофагов для типирования бактерий // Бактериофагия. - М.: Медгиз, 1961. - С. 220 - 257.

69. Кулуев, Б.Р. Опыт молекулярно-генетической диагностики острых кишечных инфекций / Б.Р. Кулуев, Д.Я. Хайдарова, Д.Н. Дубровская, А.Р. Мавзютов, Р.Ш. Магазов, Н.Н. Ворошилова // Медицинский вестник Башкортостана. - 2012. - Т. 7, № 1. - С. 59-63.

70. Лабинская, А.С. Микробиология с техникой с техникой микробиологических исследований. - М.: «Медицина», 1978. - 278 с.

71. Леванова, Л.А. Значение биологических свойств клебсиелл в формировании нарушений микробиоценоза кишечника / Л.А. Леванова, Ю.В. Захарова // Фундаментальная и клиническая медицина. - 2016. - Т. 1, № 1.- С. 4650.

72. Ляшенко, Е.А. Индикация бактерий рода Klebsiella с помощью специфических бактериофагов, в объектах ветеринарного надзора / Е.А. Ляшенко, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: материалы международной научно-практической конференции. - 2013. - С. 36-40.

73. Ляшенко, Е.А. Индикация бактерий рода Klebsiella, с помощью специфических бактериофагов, в объектах ветеринарного надзора / Е.А. Ляшенко, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин // Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2013. - С. 36-40.

74. Ляшенко, Е.А. Обнаружение бактерий рода Klebsiella с помощью реакции нарастания титра фага в пищевом сырье и продуктах питания / Е.А Ляшенко, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы V международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2013. - С. 101-104.

75. Ляшенко, Е.А. Основные биологические свойства выделенных бактериофагов бактерий рода Klebsiella / Е.А. Ляшенко, Д.А. Васильев, С.Н. Золотухин //Бактериофаги: теоретические и практические аспекты применения в медицине, ветеринарии и пищевой промышленности: Материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2013. - С. 80-84.

76. Ляшенко, Е.А. Практическое применение индикаторных штаммов бактериофагов бактерий рода Klebsiella / Е.А. Ляшенко, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2012. - С. 292-295.

77. Ляшенко, Е.А. Разработка и применение фагового биопрепарата для диагностики клебсиеллёзной инфекции / Е.А. Ляшенко, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Вестник ветеринарии. - 2011. - № 4 (59). - С. 90-92.

78. Ляшенко, Е.А. Характеристика фагов бактерий рода Klebsiella и разработка параметров практического применения для создания на их основе биопрепарата / Е.А. Ляшенко, С.Н. Золотухин, Д.А. Васильев // Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути их решения: Материалы международной научно-практической конференции. - Ульяновск: Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина. - 2009. - С. 60-63.

79. Маслов, Ю.Н. Показатель чувствительности бактериальных культур к анилиновым красителям как эпидемиологический маркер / Ю.Н. Маслов, И.В. Фельдблюм, О.Г. Пегушина, Л.А. Прохорова, А.Р. Ахмадзянова, Э.Х. Алиева // Медицинский алфавит. - 2015. - Т. 1, № 6.- С. 23-26.

80. Маслова, Э.И. Ферменты патогенности бактерий рода клебсиелла-энтеробактер / Кишечные инфекции в Казахстане. - Алма-Ата, 1980. - Т.21. -С. 3640.

81. Меджидов, М.М. Региональные проблемы антибиотикорезистентности микроорганизмов // Антибиотикорезистентность и антимикробная химиотерапия: Материалы 2-ой всероссийской научно-практической конференции. - Махачкала, 2008. - С. 5-7.

82. Методические указания по микробиологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка сельскохозяйственных животных, вызываемой патогенными энтеробактериями. - М., 1999. - 34 с.

83. МУ 4.2.2039-05 Техника сбора и транспортирования биоматериалов в микробиологические лаборатории [Электронный ресурс]. URL: http: //docs.cntd.ru/document/1200044664.

84. МУК 4.2.2316-08 Методы контроля бактериологических питательных сред Методические указания [Электронный ресурс]. URL: http: //docs.cntd.ru/document/1200067870.

85. МУК 4.2.1890-04 Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам. Методические указания [Электронный ресурс]. URL: http://docs.cntd.ru/document/1200038583.

86. Нифонтова, В.В. Получение бактериофагов и их применение в ветеринарии/ В.В. Нифонтова, Е.О. Чугунова // Вестник Пермского научного центра УрО РАН. - 2015. - № 2 .- С. 54-59.

87. Носова, Е.С. Адгезивная способность и распределение генов, кодирующих адгезины у энтеропатогенных Klebsiella spp / Е.С. Носова, Л.П. Титов // Доклады Национальной академии наук Беларуси. - 2008. - Т. 52, № 4. - С. 78-82.

88. Ольховик, О.П. Клебсиеллёз бройлеров: дис. ... канд. вет. наук: 16.00.03 / Ольховик Оксана Петровна. - М., 2009. - 135 с.

89. Омарова, С.М. Оценка диагностической эффективности алгоритма выделения и ускоренной идентификации условно-патогенных энтеробактерий с использованием отечественных хромогенных питательных сред / М.М. Меджидов, Э.Д. Степанова, Р.Ю. Юнусова, В.Г. Горелова, С.М. Омарова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2012. - № 5. - С. 51-54.

90. Онищенко, Г.Г. Актуальные вопросы надзора за инфекционными заболеваниями на современном этапе // Федеральный справочник. - 2014. - Т. 14/1. - С. 43-52.

91. Онищенко, Г.Г. Контроль за инфекционными заболеваниями — стратегическая задача здравоохранения России в XXI веке. // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2002. - № 6. - С. 4-16.

92. Определитель бактерий Берджи; под редакцией Дж. Хоулта [и др.]; 9-е издание. - Т. 2. Перевод с англ. под редакцией Г.А. Заварзина. - М.: Мир, 1997. - 432 с.

93. Орешкин, А.С. Роль условно-патогенной микрофлоры в заболеваниях молодняка // Ветеринарная газета. - 2000. - № 20. - С. 4.

94. Павлова, И.Б. Атлас морфологии популяций патогенных бактерий/ И.Б. Павлова, Е.М. Ленченко, Д.А Банникова // Монография. - М.: Колос, 2007. -177 с.

95. Пак, С.Г. Лабораторные тесты в диагностике и мониторинге инфекционных заболеваний / С.Г. Пак, В.А. Малов // Клиническая лабораторная диагностика. - 2002. - № 12. - С. 7-8.

96. Патент № 2265056 Российская Федерация, МПК C12Q1/04 C12Q1/04, C12R1:22. Селективная питательная среда для выделения клебсиел/ Ф.Х. Ибрагимов, Л.А. Журавлева, В.Л. Богановский, А.А. Резаев; заявитель и патентообладатель- Ф.Х. Ибрагимов- № 2003108550/13; заявл. 27.03.2003; опубл. 27.11.2005.

97. Патент № 2535881 Российская Федерация, МПК C12R1/01, C12Q1/04, C12N1/20. Способ выделения и идентификации бактерий рода Klebsiella / Е.П. Сиволодский; заявитель и патентообладатель - Е.П. Сиволодский.

98. Пестова, Н.Е. Изучение эффективности применения метода секвенирования ДНК по фрагменту гена 16s рРНК для идентификации микроорганизмов / Н.Е. Пестова, Е.П. Баранцевич, Н.С.Рыбкова // Профилактическая и клиническая медицина. - 2011. - № 4. - С. 57-59.

99. Поздеев, О.К. Энтеробактерии: руководство для врачей / О.К Поздеев, Р.В.Федоров // М.: ГЭОТАР -Медиа, 2007. - 720 с.

100. Покровский, В.И. Медицинская микробиология / В.И. Покровский, О.К. Поздеев // М.: Медицина, 1999. - C. 389 - 393.

101. Препараты бактериофагов для лечения инфекций, вызванных условно-патогенными бактериями / Н.Н. Ворошилова [и др.] // Госпитальная инфекция в реанимации и интенсивной терапии: материалы межрегиональной научно-практической конференции. - Уфа, 1996. - С. 10.

102. Речкин, А. И. Пейзаж энтеробактерий разных природных резервуаров / А.И. Речкин, Н.И. Евтеева, Е.О. Касаткина // Новые технологии в профилактике, диагностике, эпиднадзоре и лечении инфекционных заболеваний: Материалы научной конференции. - Н.Новгород, 2006. - С. 59-61.

103. Речкин, А.И. Микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae в природных сообществах / А.И. Речкин, Н.И. Евтеева // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2008, Т. 1. - С. 222-225.

104. Речкин, А.И. Поиск новых резервуаров для персистенции и участников циркуляции энтеробактерий в естественных экосистемах / А.И. Речкин, Н.И. Евтеева // Вестник Нижегородского университета им. Н.И. Лобачевского. - 2007. - № 6. - С. 99-103.

105. Саидова, П.С. Препарат для ускоренной диагностики инфекций, вызванных энтеробактериями на основе выявления внутриклеточного фермента у клебсиелл / П.С. Саидова, С.М. Омарова, В.Г. Горелова, А.И. Алиева, Р.И. Исаева, С.Ф. Алиева // Российский иммунологический журнал. - 2015. -Т. 9, № 2(1). - С. 156-157.

106. Сельников, О.П. Микробиологическая и патоморфологическая характеристика клебсиеллезной инфекции / О.П. Сельников, Ю.В. Персидский, Ю.А. Барштейн // Микробиология. - 1992. - Т. 54, № 2. - С. 75 - 80.

107. Семенцов, В.И. Клебсиеллез поросят / В.И. Семенцов , И.А. Болоцкий, А.К. Васильев //Ветеринария Кубани. - 2009. - № 6. - С. 15-17.

108. Сиволодский, Е.П. Механизм специфической хромогенной реакции Klebsiella spp. на питательной среде с 5-аминосалициловой кислотой/ Е.П. Сиволодский, Н.В. Ровнов, Л.Н. Петров // Микробиология. - 1994. - № 63(3) - С. 489-494.

109. Сиволодский, Е.П. Хромогенная синтетическая среда «Клебсиелла 5-аск хром-с» для выделения и идентификации клебсиелл // Клиническая лабораторная диагностика. - 2015. - Т. 60, № 5. - С. 48-51.

110. Сидоренко, С.В. Микроорганизмы семейства Enterobacteriaceae: клиническое значение и этиотропная терапия // Consilium Medicum. - 2004. -Т. 6, № 1. -С. 23-26.

111. Смирнова. Л.И. Роль бактерий рода Klebsiella при ассоциативных инфекциях коров и телят в условиях промышленного комплекса / Л.И. Смирнова,

А.В. Забровская, Е.И. Приходько, В.Э. Ярикова, Д.М. Гегирова //Международный вестник ветеринарии. - 2014. - № 2. - С. 7-12.

112. Соболев, В.Е. Цистит лошадей // Иппология и ветеринария. - 2012. -№ 4 (6). - С. 31-34.

113. Тусматов, Ш.М. Видовой состав и характеристика возбудителей внутрибольничной инфекций у больных урологического стационара // Медицина Кыргызстана. - 2016. - Т. 1, № 2. - С. 40-43.

114. Усаева, Я.С. Некоторые факторы патогенности представителей рода Klebsiella / Я.С., Усаева, Ш. Шаипова // Вестник Чеченского государственного университета. - 2007. - № 4 (24). - С. 46-51.

115. Феоктистова, Н.А. Основные биологические свойства фагов бактерий Bacillus cereus / Н.А. Феоктистова, А.И. Калдыркаев, А.В. Алешкин, Д.А. Васильев // Биотехнология: реальность и перспективы в сельском хозяйстве: Материалы международной научно-практической конференции. - Саратов: КУБиК, 2013. - С. 213-215.

116. Хамидова, Т.М. Изучение циркуляции микроорганизмов в стоматологических учреждениях различной формы собственности / Т.М. Хамидова, К.Н. Дабуров // Вестник Авиценны. - 2015. - № 4 (65). - С. 94-98.

117. Хаммади, А.А.Р.Д. Выделение и идентификация изолятов некоторых бактерий, которыми контаминирована свежая говядина в ряде районов багдада / А.А.Р.Д. Хаммади, Д.И. Удавлиев, М. Алькайси, С. Альдури, С. Фахри, С. Али // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. - 2013. - № 1 (9). - С. 4447.

118. Шепелин, А.П., Современные подходы к разработке отечественных питательных сред/ А.П. Шепелин, М.В. Храмов, О.В. Полосенко, И.И. Марчихина, Л.П. Шолохова // Национальные приоритеты России. - 2014. - № 3 (13). -С. 69-71.

119. Юнусова, Р.Ю. Отечественная хромогенная среда для дифференциации клебсиелл / Р.Ю. Юнусова, В.Г. Горелова, Э.Д. Степанова, С.М. Омарова // Клиническая лабораторная диагностика. 2010. - № 3 - С. 49-51.

120. Abbott, S.L. Klebsiella, Enterobacter, Citrobacter, Serratia, Plesiomonas, and other Enterobacteriaceae. In Murray PR Jr, et al., editors. (ed), Manual of clinical microbiology, 9th ed ASM Press, Washington, DC. - 2007. - P. 698-715.

121. Abedon, S. T., Kuhl S. J., Blasdel B. G., Kutter E. M. Phage treatment of human infections / S. T. Abedon, S. J. Kuhl, B. G.Blasdel, E. M. Kutter // Bacteriophage. - 2011. - P. 166-185.

122. Al-Anazi, K.A., Al-Jasser, A.M., Al-Zahrani, H.A., Chaudhri, N., Al-Mohareb, F.I. Klebsiella oxytoca bacteremia causing septic shock in recipients of hematopoietic stem cell transplant: Two case reports / K.A. Al-Anazi, A.M. Al-Jasser, H.A. Al-Zahrani, N. Chaudhri, F.I Al-Mohareb // Cases J. - 2008. - P. 160.

123. Al-Hulu, S.M., Al-Charrakh, A.H., Al-Saadi, M.K. Isolation and characterization of Raoultella ornithinolytica from clinical specimens in Hilla City / S.M. Al-Hulu, A.H. Al-Charrakh, M.K. Al-Saadi // Iraq Med J Babylon. - 2009. - Vol. 7. - P. 42-47.

124. Alison Darby [et al.] Cytotoxic and Pathogenic Properties of Klebsiella oxytoca Isolated from Laboratory Animals / Alison Darby [et al.] // PLoS One. - 2014. -Vol. 9, № 7. - P. 100- 105.

125. Arakawa, Y., Ohta M., Kido N., Mori M., Ito H., Komatsu T., Fujii Y., Kato N. Chromosomal beta lactamase of Klebsiella oxytoca, a new class A enzyme that hydrolyzes broad-spectrum beta-lactam antibiotics. Antimicrob. Agents Chemother / Y.Arakawa, M. Ohta, N. Kido, M. Mori, H. Ito, T. Komatsu, Y. Fujii, N. Kato // Colombia Medica. - 2009. - Vol. 40, № 3. - P. 63-70.

126. Arenas, N.E., Polanco, J. C., Coronado, S.M., Durango, C. J., Gómez, A. Design of a molecular method for subspecies specific identification of Klebsiella pneumoniae by using the 16S ribosomal subunit gene / N.E. Arenas, J. C. Polanco, S.M. Coronado, C. J. Durango, A. Gómez // Colombia Medica. - 2009. - Vol. 40, № 3. - P. 1023-1035.

127. Azevedo, C. [et al.]/ Prevalence of contagious and environmental mastitis-causing bacteria in bulk tank milk and its relationships with milking practices of dairy

cattle herds in Sao Miguel Island (Azores) / C. Azevedo, [et al.]// Trop Anim Health Prod. - 2016. - Vol. 48. - P. 451-459.

128. Bagley, S., Seidler, R.J., Brenner, D.J. Klebsiellaplanticola sp. nov.: a new species of Enterobacteriaceae found primarily in nonclinical environments / S. Bagley, R.J. Seidler, D.J. Brenner // Curr Microbiol. - 1981. - Vol. 6. - P. 105-109.

129. Bagley, S.T., Seidler, R.J. Primary Klebsiella identification with MacConkey-inositol-carbenicillin agar / S.T. Bagley, R.J. Seidler // Appl. Environ. Microbiol. - 1978. - Vol. 36. - P. 536-538.

130. Bagley, S.T., Seidler, R.J., Talbot, H.W., Morrow, J.E. Isolation of Klebsiella within living wood / S.T. Bagley, R.J Seidler, H. W. Talbot, J. E. Morrow // Appl. Environ. Microbiol. - 1978. - Vol. 36. - P. 178-185.

131. Bleich, A., Kirsch, P., Sahly, H., Fahey, J., Smoczek A. [et al]. Klebsiella oxytoca: opportunistic infections in laboratory rodents/ A. Bleich, P. Kirsch,H. Sahly, J. Fahey, A.Smoczek [et al] // Lab Anim. - 2008. - Vol. 42. - P. 369-375.

132. Bodey, G.P. [et al] Klebsiella bacteremia. A 10-year review in a cancer institution / G.P. Bodey [et al] // Cancer. - 1989. - Vol. 64. - P. 2368-2376.

133. Bouza, E., Cercenado, E. Klebsiella and Enterobacter: Antibiotic resistance and treatment implications / E. Bouza, E. Cercenado // Semin. Respir. Infect. - 2002. - Vol. 17, № 3. - P. 215-230.

134. Brenner, D.J., Krieg, N.R. [et al]. Bergey's Manual of Systematic Bacteriology. Vol. 2. The Proteobacteria. Part B. The Gammaproteobacteria / D.J. Brenner, N.R. Krieg [et al] // Springer, - 2005. - P. 1136 - 1138

135. Brisse, S., Van Himbergen, T., Kusters, K., Verhoef, J. Development of a rapid identification method for Klebsiella pneumoniae phylogenetic groups and analysis of 420 clinical isolates / S. Brisse, T. Van Himbergen, K. Kusters, J. Verhoef // Clin Microbiol Infect. - 2004. - Vol. 10. - P. 942-945.

136. Brisse, S., Milatovic, D., Fluit, A.C., Verhoef, J., Schmitz, F.J. Epidemiology of quinolone resistance of Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca in Europe / S. Brisse, D. Milatovic, A.C. Fluit, J. Verhoef, F.J. Schmitz // Eur J. Clin. Microbiol. Infect. Dis. - 2000. - Vol. 19, №1. - P. 64-68.

137. Brisse, S., Verhoef, J. Phylogenetic diversity of Klebsiella pneumoniae and Klebsiella oxytoca clinical isolates revealed by randomly amplified polymorphic DNA, gyrA and parC genes sequencing and automated ribotyping / S. Brisse, J. Verhoef // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. - 2001. - Vol. 51, № 3. - P. 915-924.

138. Brown, C., Seidler, R.J. Potential pathogens in the environment: Klebsiella pneumoniae, a taxonomic and ecological enigma / C.Brown, R.J. Seidler // Appl. Microbiol. - 1973. - Vol. 25. - P. 900-904.

139. Castanheira, M., Desphande, L.M., DiPersio, J.R., Kang, J., Weinstein, M.P., Jones, R.N. First descriptions of bla KPC in Raoultella spp. (R. planticola and R. ornithinolytica): report from the SENTRY antimicrobial surveillance program / M. Castanheira, L.M. Desphande, J.R. DiPersio, J. Kang, M.P. Weinstein, R.N. Jones // J Clin Microbiol. - 2009. - Vol. 47. - P. 4129-4130.

140. Chang-Ro Lee [et al.]. Global Dissemination of Carbapenemase-Producing Klebsiella pneumoniae: Epidemiology, Genetic Context, Treatment Options, and Detection Methods / Chang-Ro Lee [et al.] // Front Microbiol. - 2016. - Vol. 7. - P. 895.

141. Chang, S.C., Fang, C.T., Hsueh, P.R., Chen, Y.C., Luh, K.T. Klebsiella pneumoniae isolates causing liver abscess in Taiwan / S.C. Chang, C.T. Fang, P.R. Hsueh, Y.C. Chen, K.T. Luh // Diagn. Microbiol. Infect. Dis. -2000. - Vol. 37, № 4. -P. 279-284.

142. Davis, T.J., Matsen, J.M. Prevalence and characteristics of Klebsiella species: Relation to association with a hospital environment / T.J. Davis, J.M. Matsen // J. Infect. Dis. - 1974. - P. 402-405.

143. Estell, K.E. [et al.]. Pneumonia Caused by Klebsiella spp. in 46 Horses / K.E. Estell, [et al.] // J Vet Intern Med. - 2016. - Vol. 30, № 1. - P. 314-321.

144. Evteeva, N.I. The new places of reservation Enterobacteriaceae in natural systems / N.I. Evteeva, A.I. Rechkin // Материалы IV международной научно-практич. конференции «Научное пространство Европы - 2008». София, 2008. - Т. 21. - С. 28-30.

145. Farmer, J.J., [et al.]. Biochemical identification of new species and biogroups of Enterobacteriaceae isolated from clinical specimens / J.J. Farmer, B.R. Davis, F.W. Hickman-Brenner, A. McWhorter, G.P. Huntley-Carter, M.A. Asbury, C. Riddle, H.G. Wathen-Grady, C. Elias, G.R. F anning, A.G. Steigerwalt, C.M. O'Hara, G.K. Morris, P.B. Smith, D.J. Brenner // J Clin Microbiol. - 1985. - Vol. 21. - P. 46-76.

146. Friedländer, C. Ueber die Schizomyceten bei der acuten fibrösen Pneumonie / C. Friedländer // Virchows Arch. Pathol. Anat. Physiol. - 1982. - Vol. 87. - P. 319-324.

147. Gill, J.J., Hyman, P. Phage choice, isolation, and preparation for phage therapy / J.J. Gill, P. Hyman// Curr Pharm Biotechnol.- 2010. - P. 1112-1114.

148. Granier, S.A., [et al.]. Recognition of two genetic groups in the Klebsiella oxytoca taxon on the basis of chromosomal ß-lactamase and housekeeping gene sequences as well as ERIC-1R PCR typing / S.A. Granier, L. Plaisance, V. Leflon-Guibout, Lagier E., S. Morand, F.W. Goldstein, M.H. Nicolas-Chanoine // Int J Syst Evol Microbiol. - 2003. - Vol. 53. - P. 661-668.

149. Grazyna Majkowska-Skrobek [et al.]. Capsule-Targeting Depolymerase, Derived from Klebsiella KP36 Phage, as a Tool for the Development of Anti-Virulent Strategy / Grazyna Majkowska-Skrobek [et al.] // Viruses. - 2016. - Vol. 8, № 12. - P. 324.

150. Grimont, F., Grimont, P.A.D., Richard, C.The Prokaryotes: a handbook on habitats, isolation and identification of bacteria/ ed.by M.P.Starr [et.al].-Berlin: Springer-Verlag, - 1981. - P. 2775-2796.

151. Grimont, F. [et al]. The Genus Klebsiella / F. Grimont, [et al] // Prokaryotes. - 2006. - Vol. 6. - P. 159-196

152. Gupta, A. Hospital-acquired infections in the neonatal intensive care unit— Klebsiella pneumoniae / A. Gupta // Semin. Perinatol. - 2002. - Vol. 26, № 5. - P. 340345.

153. Hoffmann, K.M., Deutschmann, A., Weitzer, C., Joainig, M., Zechner, E., [et al]. Antibiotic-associated hemorrhagic colitis caused by cytotoxin-

producing Klebsiella oxytoca / K.M. Hoffmann, A. Deutschmann, C. Weitzer, M. Joainig, E. Zechner, [et al] // Pediatrics. - 2010. - P. 960-963.

154. Högenauer, C., Langner, C., Beubler, E., [et al]. Klebsiella oxytoca as a causative organism of antibiotic-associated hemorrhagic colitis / C. Högenauer, C. Langner, E. Beubler, [et al] // N. Engl. J. Med. - 2006. - P. 2418-26.

155. Hoyles, L., [et al]. Klebsiella pneumoniae subsp. pneumoniae-bacteriophage combination from the caecal effluent of a healthy woman / L. Hoyles, J. Murphy, H. Neve, K.J. Heller, J.F. Turton, J. Mahony, J.D. Sanderson, B. Hudspith, G.R. Gibson, A.L. McCartney, [et al] // Peer J. - 2015. - Vol. 3. - P. 1061.

156. Iniguez, A.L., Dong, Y., Triplett, E.W. Nitrogen fixation in wheat provided by Klebsiella pneumoniae 342 / A.L. Iniguez, Y. Dong, E.W. Triplett // Mol Plant Microbe Interact. - 2004. - Vol. 17. - P. 1078-1085.

157. Izard, D., [et al.]. Klebsiella terrigena, a new species from soil and water / D. Izard, C. Ferragut, F. Gavini, K. Kersters, J. De Ley, H. Leclerc // Int J Syst Bacteriol. - 1981. - P. 116-127.

158. Jansen, N.B., Flickinger, M.C., Tsao, G.T. Production of 2,3-butanediol from D-xylose by Klebsiella oxytoca ATCC 8724 / N.B. Jansen, M.C. Flickinger, G.T. Tsao // Biotechnol. Bioeng. - 1984. - P. 362-369.

159. Joainig, M.M., [et al]. Cytotoxic effects of Klebsiella oxytoca strains isolated from patients with antibiotic-associated hemorrhagic colitis or other diseases caused by infections and from healthy subjects / M.M. Joainig, [et al]. // J. Clin. Microbiol. - 2010. - P. 817-824.

160. Kamelia M Osman [et al.]. Phenotypic, antimicrobial susceptibility profile and virulence factors of Klebsiella pneumoniae isolated from buffalo and cow mastitic milk / Kamelia M Osman [et al.] // Pathog Glob Health. - 2014. - Vol. 108, № 4. - P. 191-199.

161. Kanki, M., Yoda, T., Tsukamoto, T., Shibata, T. Klebsiella pneumoniae produces no histamine: Raoultella planticola and Raoultella ornithinolytica strains are histamine producers / M. Kanki, T. Yoda, T. Tsukamoto, T. Shibata // Appl. Environ. Microbiol. - 2002. - Vol. 68, № 7. - P. 3462-3466.

162. Kumari, S., Harjai, K., Chhibber, S. Efficacy of bacteriophage treatment in murine burn wound infection induced by Klebsiella pneumoniae / S. Kumari, K. Harjai, S. Chhibber // J Microbiol Biotechnol. - 2009. - Vol. 19. - P. 622-628.

163. Leclerc, H., Edberg, S., Pierzo, V., Delattre, J.M. Bacteriophages as indicators of enteric viruses and public health risk in groundwaters / H. Leclerc, S. Edberg, V. Pierzo, J.M. Delattre // J Appl Microbiol. - 2000. - P. 805-821.

164. Lusiak-Szelachowska, M., Weber-D^browska, B., Görski, A. The presence of bacteriophages in human feces and their potential importance / M.Lusiak-Szelachowska, B. Weber-D^browska, A. Görski // Pol Merkur Lekarski. - 2006. - Vol. 21. - P. 381-383.

165. Matsushita, I., Yanase, H. A novel thermophilic lysozyme from bacteriophage phiIN93 / I. Matsushita, H. Yanase // Biochem Biophys Res Commun. -2008. - P. 89-92.

166. Mdegela, R.H., [et al]. Prevalence of clinical and subclinical mastitis and quality of milk on smallholder dairy farms in Tanzania / R.H. Mdegela, R. Ryoba, E.D. Karimuribo, E.J. Phiri, T. Löken, O.Reksen, [et al] // J South Afr Vet Assoc. - 2009. -P. 163-168.

167. Merino, S., [et al.]. Cloning and sequencing of the Klebsiella pneumoniae O5 wb gene cluster and its role in pathogenesis / Merino S., M. Altarriba, L. Izquierdo, M. Nogueras, M. Regue, J. M.Tomas // Infect. Immun. - 2000. - P. 2435- 2440.

168. Milka, P. [et al.]. Klebsiella Species Associated with Bovine Mastitis in Newfoundland / P. Milka [et al.] // PLoS One. - 2014. - Vol. 9. - № 9. - P. 1065-1118.

169. Minami, J., [et al.]. Biological activities and chemical composition of a cytotoxin of Klebsiella oxytoca / J. Minami, S. Saito, T. Yoshida, T. Uemura, A. Okabe // J Gen Microbiol. - 1992. - P. 1921-1927.

170. Minami, J., [et al.]. Production of a unique cytotoxin by Klebsiella oxytoca / J. Minami, A. Okabe, J. Shiode, H. Hayashi // Microb Pathog. - 1989. - Vol. 7. - P. 203-211.

171. Monnet, D., [et al.]. Difficulties in identifying Klebsiella strains of clinical origin / D. Monnet, J. Freney, Y. Brun, J.M. Boeufgras, J. Fleurette // Zentbl Bakteriol. - 1991. - P. 456-464.

172. Monnet, D., Freney, J. Method for differentiating Klebsiella planticola and Klebsiella terrigena from other Klebsiella species / D. Monnet, J. Freney // J Clin Microbiol. - 1994. - P. 1121-1122.

173. Nakahama, C. Klebsiella infection / C.Nakahama // Nippon Rinsho. - 2003. -Vol. 61. - P. 378-382.

174. Nemet, Z., [et al]. Outbreak of Klebsiella oxytoca enterocolitis on a rabbit farm in Hungary / Z. Nemet, O. Szenci, A. Horvath, L. Makrai, T. Kis, [et al] // The Veterinary record. - 2011. - P. 168-243.

175. Nonnecke, B.J., Newbould, F.H. Biochemical and serologic characterization of Klebsiella strains from bovine mastitis and the environment of the dairy cow / B.J. Nonnecke, F.H. Newbould // Am J Vet Res. - 1984. - Vol. 45. - P. 2451-2454.

176. 0rskov, I., Fife-Asbury, M.A. New Klebsiella capsular antigen, K82, and the deletion of five of those previously assigned / I. 0rskov, M.A. Fife-Asbury // Int J Syst Bacteriol. - 1977. - Vol. 27. - P. 386-387.

177. 0rskov, I., 0rskov, F. Serotyping of Klebsiella / I. 0rskov, F. 0rskov // Methods Microbiol. - 1984. - Vol. 14. - P. 143-164.

178. 0rskov, I. Genus Klebsiella / I. 0rskov // In: Krieg N R, Holt J G, editors. Bergey's manual of systematic bacteriology. Vol. 1. Baltimore, Md: The Williams & Wilkins Co.- 1984. - P. 461-465.

179. Pisharath [et al.] Septicemia and peritonitis in a colony of common marmosets (Callithrix jacchus) secondary to Klebsiella pneumoniae infection / Pisharath [et al.] // Contemp.Top.Lab.Anim.Sci. - 2005. - Vol.44. - P.35-37.

180. Pitkala, A., [et al.]. Bovine mastitis in Finland 2001 — prevalence, distribution of bacteria, and antimicrobial resistance / A. Pitkala, M. Haveri, S. Pyorala, V. Myllys, T. Honkanen-Buzalski // J Dairy Sci. - 2004. - P. 2433-2441.

181. Podschun, R., Pietsch, S., Holler, C., Ullmann, U. Incidence of Klebsiella species in surface waters and their expression of virulence factors / R. Podschun, S. Pietsch, C. Holler, U. Ullmann // Appl Environ Microbiol. - 2001. - P. 3325-3327.

182. Podschun, R., Penner, I., Ullmann, U. Interaction of Klebsiella capsule type 7 with human polymorphonuclear leucocytes / R. Podschun, I. Penner, U. Ullmann // Microb Pathog. - 1992. - Vol. 13. - P. 371-379.

183. Podschun, R. Phenotypic properties of Klebsiella pneumoniae and K. oxytoca isolated from different sources / R. Podschun // Zentbl Hyg Umweltmed. -1990. - P. 527-535.

184. Podschun, R., Fischer, A., Ullmann, U. Siderophore production of Klebsiella species isolated from different sources / R. Podschun, A. Fischer, U. Ullmann // Zentbl Bakteriol. - 1992. - P. 481-486.

185. Racklyeft, D.J., Love, D.N. Bacterial infection of the lower respiratory tract in 34 horses / D.J. Racklyeft, D.N. Love // Aust Vet J. - 2000. - P. 549-559.

186. Riser, E., Noone, P. Klebsiella capsular type versus site of isolation / E. Riser, P. Noone // J Clin Pathol. - 1981. - Vol. 34. - P. 552-555.

187. Roberts, D.E., [et al.]. An outbreak of Klebsiella pneumoniae infection in dogs with severe enteritis and septicemia / D.E. Roberts, H.M. McClain, D.S. Hansen, P. Currin, E.W. Howerth // J. Vet. Diagn. Invest. - 2000. - Vol. 12, № 2. - P. 168-173.

188. Sakazaki, R., [et al.]. Klebsiella ornithinolytica sp. nov., formerly known as ornithine-positive Klebsiella oxytoca / R. Sakazaki, K. Tamura, Y. Kosako, E. Yoshizaki // Curr Microbiol. - 1989. - Vol. 18. - P. 201-206.

189. Sampimon, O.C. An outbreak of Klebsiella pneumoniae mastitis / O.C. Sampimon // Tijdschr.Diergeneeskd. - 2006. - Vol. 131. -P. 2-4.

190. Samson, J.E., [et al.]. Revenge of the phages: defeating bacterial defences / J.E. Samson, A.H. Magadan, M. Sabri, S. Moineau // Nat. Rev. Microbiol. - 2013. -Vol. 11. - P. 675-687.

191. Savino, F., [et al]. Molecular identification of coliform bacteria from colicky breastfed infants / F. Savino, L. Cordisco, V. Tarasco, R. Calabrese, E. Palumeri, [et al] // Acta Paediatr. - 2009. - P. 1582-1588.

192. Seidler, R.J., Morrow, J., Bagley, S.T. Klebsiellae in drinking water emanating from redwood tanks / R.J. Seidler, J. Morrow, S.T. Bagley // Appl. Environ. Microbiol. - 1977. - P. 893-900.

193. Seidler, R.J. The genus Klebsiella (nonmedical aspects) / R.J. Seidler // In: M. P. Starr, H. Stolp, H. G. Trüper, A. Balows, and H. G. Schlegel (Eds.) The Prokaryotes. Springer-Verlag. Berlin, Germany. - 1981- P. 1166-1172.

194. Shapiro, O.H., Kushmaro, A. Bacteriophage ecology in environmental biotechnology processes / O.H. Shapiro, A. Kushmaro // Curr Opin Biotechnol. - 2011. - Vol. 22. - P. 449-455.

195. Slopek, S. Phage typing of Klebsiella / S. Slopek // Methods Microbiol. -1978. - Vol. 11. - P. 193 - 222.

196. Smith, S.A., [et al]. A study of the prevalence of cytotoxic and non-cytotoxic Klebsiella oxytoca fecal colonization in two patient populations / S.A. Smith, S.J. Campbell, D. Webster, M. Curley, D. Leddin, [et al] // Can J Infect Dis Med Microbiol. - 2009. - Vol. 20. - P. 169-172.

197. Stenzel, W., Bürger, H., Mannheim, W. Zur Systematik und Differentialdiagnostik der Klebsiella-Gruppe mit besonderer Berücksichtigung der sogenannten Oxytocum-Typen / W. Stenzel, H. Bürger, W. Mannheim // Zentbl Bakteriol Mikrobiol Hyg Ser A. - 1972. - P. 193-203

198. Stojowska, S.K. A new assay for the simultaneous identification and differentiation of Klebsiella oxytoca strains / S.K. Stojowska // Appl Microbiol Biotechnol. - 2016. - Vol. 100. - № 23. - P. 10115-10123.

199. Todd, M.J., Hausinger, R.P. Purification and characterization of the nickel-containing multi-component urease from Klebsiella aerogenes / M.J. Todd, R.P. Hausinger // J. Biol. Chem. - 1987. - P. 5963-5967.

200. Tullus, K., [et al.]. Epidemiologic typing of international collections of Klebsiella spp.: Computerized biochemical fingerprinting compared with serotyping,

phage typing and pulsed-field gel electrophoresis / K. Tullus, L.G. Burman, S. Haeggman, G. Hutchinson, I. Kuhn // Clin. Microbiol. Infect. - 1999. - Vol. 5, № 4. - P. 184-189

201. Verma, V., Harjai, K., Chhibber, S. Characterization of a T7-like lytic bacteriophage of Klebsiella pneumoniae B5055: a potential therapeutic agent / V. Verma, K. Harjai, S. Chhibber // Curr Microbiol. - 2009. - P. 274-281.

202. Vincent, C.C., [et al.]. Epidemiology of Klebsiella oxytoca-Associated Diarrhea Detected by Simmons Citrate Agar Supplemented with Inositol, Tryptophan, and Bile Salts / C.C. Vincent, [et al.]. // J Clin Microbiol. - 2012. - Vol. 50, № 5. - P. 1571-1579.

203. Westbrook, G.L., [et al.]. Incidence and identification of Klebsiella planticola in clinical isolates with emphasis on new borns / G.L. Westbrook, C.M. O'Hara, S.B. Roman, J.M. Miller // J. Clin. Microbiol. - 2000. - Vol. 38, № 4. - P. 1495-1497.

204. Yeruham, I., [et al.]. A herd level analysis of urinary tract infection in dairy cattle / I. Yeruham, [et al.] // Vet.J. - 2006.- Vol. 171.- P. 172-176.

205. Yigit, H., [et al.]. Novel carbapenem-hydrolyzing beta-lactamase, KPC-1, from a carbapenem-resistant strain of Klebsiella pneumoniae. Antimicrob / H. Yigit, A.M. Queenan, G.J. Anderson, A. Domenech Sanchez, J.W. Biddle, C.D. Steward, S. Alberti, K. Bush, F.C. Tenover // Agents Chemother. - 2001. - ; Vol. 45(4). - P. 11511161.

206. Young, R., Bläsi, U. Holins: form and function in bacteriophage lysis / R. Young, U. Bläsi // FEMS Microbiol Rev. - 1995. - P. 191-205.

207. Young, R. Phage lysis: three steps, three choices, one outcome / R. Young // J Microbiol. - 2014. - P. 243-258.

208. Zollner-Schwetz, [et al]. Role of Klebsiella oxytoca in antibiotic-associated diarrhea / I. Zollner-Schwetz, C. Hogenauer, M. Joainig, P. Weberhofer, G. Gorkiewicz, [et al] // Clinical infectious diseases: an official publication of the Infectious Diseases Society of America. - 2008. - Vol. 47. - P. 74-78.

СПИСОК ИЛЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Рисунок 1 Филогенетическое дерево бактерий рода Klebsiella и Raoultella,

основанное на анализе нуклеотидной последовательности 16S rRNA гена Рисунок 2 Факторы патогенности у K. oxytoca

Рисунок 3 Схема бактериологического выделения представителей рода Klebsiella Рисунок 4 Выделение и ускоренная идентификация бактерий рода Klebsiella с помощью бактериофагов (I) в сравнении со схемой бактериологического исследования, изложенной в «Методических указаниях по бактериологической диагностике смешанной кишечной инфекции молодняка животных, вызываемой патогенными энтеробактериями» (II) Рисунок 5 Электронная микроскопия фагов Рисунок 6 Общая схема научных исследований

Рисунок 7 Окраска референс-штамма K. oxytoca АТСС 8724 по Граму (увеличение х100)

Рисунок 8 Окраска капсул (по Бурри-Гинсу) K. oxytoca АТСС 8724 (увеличение х100)

Рисунок 9 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на МПА (24 часа) Рисунок 10 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Эндо (24 часа) Рисунок 11 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Левина (24 часа) Рисунок 12 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Плоскирева (24 часа) Рисунок 13 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Chromogenic Urine Agar (24 часа) Рисунок 14 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде CLED Agar (24 часа) Рисунок 15 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Лурия -Бертани (по Миллеру) (24 часа)

Рисунок 16 Рост K. pneumoniae ATCC 13883 на среде Лурия -Бертани (по Миллеру)

Рисунок 17 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на соевом агаре (24 часа)

Рисунок 18 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на гектоеновом энтеро-агаре (48 часов)

Рисунок 19 Определение подвижности штамма K. oxytoca ATCC 8724 в 0,7% агаре (24 часа)

Рисунок 20 Рост K. oxytoca ATCC 8724 в МПБ в течение 24 часов Рисунок 21 Образование индола штаммом K. oxytoca ATCC 8724

Рисунок 22 Отсутствие протеолитической активности у штамма K. oxytoca ATCC 8724

Рисунок 23 Тест на образование сероводорода штаммом K. oxytoca ATCC 8724 на среде Клиглера

Рисунок 24 Утилизация цитратов натрия штаммом K. oxytoca ATCC 8724 на среде Симмонса

Рисунок 25 Сахаролитическая активность штамма K. oxytoca ATCC 8724

Рисунок 26 Разложение мочевины штаммом K. oxytoca ATCC 8724

Рисунок 27 Реакция с метиловым красным (А) и Фогеса-Проскауэра (Б) штамма K.

oxytoca ATCC 8724 (24 часа) Рисунок 28 Определение орнитиндекарбоксилазной активности у штамма K. oxytoca ATCC 8724

Рисунок 29 Восстановление нитратов штаммом K. oxytoca ATCC 8724 Рисунок 30 Рост K. oxytoca ATCC 8724 на среде Хью-Лейфсона Рисунок 31 Гемолитическая активность штамма K. oxytoca ATCC 8724

С. 13

19 23 27

32

42

43

44

46 46 46 46 46

46

47

47 47

47

48

48 51 51

51

51

52 52 52

54

54 54 54

Рисунок 32 Индикаторная рН-система среды KL-1 УГСХА 62

Рисунок 33 Диффузионный метод изучения антибиотикочувствительности штамма K. 63 oxytoca ATCC 8724

Рисунок 34 Рост штамма K. oxytoca ATCC 8724 на KL-1 УГСХА 66

Рисунок 35 Рост штамма K. pneumoniae ATCC 13883 на KL-1 УГСХА 66

Рисунок 36 Рост представителей семейства Enterobacteriaceae на среде KL-1 УГСХА 67

(48 часов культивирования) Рисунок 37 Предлагаемая схема ускоренной идентификация бактерий K.oxytoca с 70

омощью среды KL-^ГСХА и системы бактериологических тестов Рисунок 38 Выделение бактериофагов, активных в отношении штамма K. oxytoca 1, без 77

воздействия на них индуцирующего фактора (по Лурия С., Дарнеллу Д.) Рисунок 39 Схема индукции профага бактерий K. oxytoca рентгеновским облучением 79 Рисунок 40 Фаг Кох-8 УГСХА 82

Рисунок 41 Пассажи фага Кох-9 УГСХА 84

Рисунок 42 Формирование негативных колоний бактериофагами K. oxytoca 84

Рисунок 43 Формирование негативных колоний выделенным бактериофагом Кох-9 87 УГСХА

Рисунок 44 Формирование негативных колоний выделенным бактериофагом Кох-11 87 УГСХА

Рисунок 45 Формирование негативных колоний выделенным бактериофагом Кох-7 87 УГСХА

Рисунок 46 Формирование негативных колоний выделенным бактериофагом Кох-8 87 УГСХА

Рисунок 47 Формирование негативных колоний выделенным бактериофагом Кох-8 87 УГСХА

Рисунок 48 Определение литической активности выделенного бактериофага Кох-9 89 методом Аппельмана

Рисунок 49 Определение литической активности выделенного бактериофага Кох-9 90 методом Грациа

Рисунок 50 Спектр литической активности фага Кох-11 УГСХА (на культуре K. 91 oxytoca 86)

Рисунок 51 Спектр литической активности выделенных бактериофагов (на культуре 92 K. oxytoca 124)

Рисунок 52 Специфичность выделенного бактериофага Кох-11 УГСХА 94

Рисунок 53 Определение специфичности выделенного бактериофага Кох-9 УГСХА 95 методом Фюрта

Рисунок 54 Предлагаемая комплексная схема ускоренной идентификация бактерий 105 вида K. oxytoca

Рисунок 55 Предлагаемая схема постановки реакции нарастания титра фага 111

Таблица 1 Классификация видов бактерий рода Klebsiella в различных 12

таксономических системах Таблица 2 Дифференцирующие признаки основных триб семейства 21

Enterobacteriacea (по Эдварс-Юингу, 1972 год) Таблица 3 Основные признаки внутриродовой дифференциации бактерий Klebsiella 30

(по Bergey's Manual of Systematic Bacteriology, 2005) Таблица 4 Биохимическая активность штамма K. oxytoca ATCC 8724 55

Таблица 5 Оценка культивирования бактерий рода Klebsiella на различных средах 57 Таблица 6 Показатель колониеобразующих единиц на основах сред (K. oxytoca 59 ATCC 8724)

Таблица 7 Показатель колониеобразующих единиц на основах среды (K. pneumoniae 59 ATCC 13883)

Таблица 8 Определение предельной подавляющей концентрации индикаторов- 61

красителей у штаммов бактерий рода Klebsiella и их ассоциантов

Таблица 9 Определение чувствительности штаммов бактерий рода Klebsiella к 64 антибиотикам

Таблица 10 Определение количественного показателя максимальной подавляющей 65 концентрации цефотаксима для K. oxytoca ATCC 8724 и K. pneumoniae ATCC 13883

Таблица 11 Показатель КОЕ в различные временные периоды культивирования 67

Таблица 12 Определение вида бактерий по предлагаемым тестам 69

Таблица 13 Источники выделения бактерий вида K. oxytoca 71

Таблица 14 Результаты апробации среды KL-1 УГСХА 72

Таблица 15 Биохимическая активность 24-х выделенных штаммов бактерий вида K. 73 oxytoca

Таблица 16 Выделенные культуры K. oxytoca 74

Таблица 17 Влияние температурных режимов на рост штаммов K. oxytoca 75

Таблица 18 Выделение бактериофагов K. oxytoca под воздействием УФ-лучей 78

Таблица 19 Результаты выделения бактериофагов K. oxytoca под действием рентгеновского 81 облучения

Таблица 20 Выделение бактериофагов K. oxytoca из объектов внешней среды 83

Таблица 21 Морфология негативных колоний фагов K. oxytoca 86

Таблица 22 Литическая активность бактериофагов K. oxytoca 90

Таблица 23 Спектр литической активности бактериофагов K. oxytoca 93

Таблица 24 Специфичность бактериофагов K. oxytoca 96

Таблица 25 Температурная устойчивость бактериофагов K. oxytoca 97

Таблица 26 Устойчивость бактериофагов K. oxytoca к хлороформу 98

Таблица 27 Активность фага Кох-9 УГСХА в зависимости от времени пассажа 100

Таблица 28 Активность фага Кох-11 УГСХА в зависимости от времени пассажа 100

Таблица 29 Литическая активность фагов Кох-9 УГСХА и Кох-11 УГСХА в 101

зависимости от множественности инфекции

Таблица 30 Активность бактериофагов Кох-9 УГСХА и Кох-11 УГСХА в зависимости 102

от температурного режима культивирования

Таблица 31 Активность индикаторных фагов K. oxytoca 104

Таблица 32 Определение вида бактерий по предлагаемым тестам 107

Таблица 33 Результаты выделения бактерий вида K. oxytoca бактериологическим 107 методом

Таблица 34 Фагоидентификация выделенных штаммов 108

Таблица 35 Показатели диагностического значения РНФ фага Кох-9 УГСХА 112

Таблица 36 Показатели диагностического значения РНФ фага Кох-11 УГСХА 112

Таблица 37 Чувствительность РНФ в зависимости от времени подращивания 113

исследуемого материала

Таблица 38 Чувствительность РНФ в зависимости от времени инкубированя 114

исследуемого материала с исследуемыми бактериофагами

Таблица 39 Увеличение количества фага в искусственно инфицированной бактериями 116

вида K. oxytoca пробе воды

Таблица 40 Увеличение количества фага в искусственно инфицированной бактериями 118

вида K. oxytoca пробе комбикорма

Таблица 41 Увеличение количества фага в искусственно инфицированной бактериями 119

вида K. oxytoca пробе фекалий

Таблица 42 Увеличение количества фага в искусственно инфицированной бактериями 120 вида K. oxytoca пробе мясного фарша

Таблица 43 Литическая активность смеси клебсиеллезных фагов 121

ПРИЛОЖЕНИЯ

Методические рекомендации по выделению и идентификации бактерий вида К. оху1оеа из объектов ветеринарно - санитарного надзора

АГЕНТСТВО ВЕТЕРИНАРИИ УЛЬЯНОВСКОЙ ОБЛАСТИ

УТВЕРЖДАЮ Зам. руководителя Агентства ветеринарии Ульяновской области- заместитель главного государственного ветеринарного инспектора Ульяновской области

ВЫДЕЛЕНИЕ И ИДЕНТИФИКАЦИЯ БАКТЕРИЙ ВИДА К. ОХУТОСА ИЗ ОБЪЕКТОВ ВЕТЕРИНАРНО- САНИТАРНОГО НАДЗОРА

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Ульяновск-2017

Методические рекомендации по ускоренной индикации и идентификации бактерий вида K. oxytoca в объектах ветеринарно - санитарного надзора с применением специфических бактериофагов

МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

по ускоренной индикации и идентификации бактерий вида К.оху1оса в объектах ветеринарно-санитарного надзора с применением специфических

бактериофагов

ФГБОУ ВО Ульяновская ГСХА

Временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторных бактериофагов К. охуЛоеа: Кох-9 УГСХА и Кох-11 УГСХА

ФГБОУ ВО Ульяновская ГСХА

ВРЕМЕННАЯ ИНСТРУКЦИЯ

по изготовлению и контролю лабораторной серии индикаторных бактериофагов К.охуЮса Кох-9 УГСХА и Кох-

11 УГСХА

Акты внедрения результатов исследования кандидатской диссертации в учебный

процесс

УТВЕРЖДАЮ

Прореггор по учебной № воспитательной работе ФГБОУ ВО Ульяновская ГСХА M.B. Постнова - Vf 2017 г.

AKT

внедрения результатов исследования кандидатской диссертации в учебный процесс Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени 1 I.A. Столыпина»

АКТ

внедрения результатов исследования кандидатской диссертации в учебный процесс Федерального государственною бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновский государственный педагогический университет имени И.Н. Ульянова»

Данным актом подтверждается, что результаты исследования диссертационной работы на тему: «Усовершенствование схемы индикации и идентификации бактерий вида Klebsiella oxytoca с помощью фагового биопрепарата», которая представлена на соискание ученой степени кандидата биологических наук, по специальности 06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология, выполненной Садртдиновой Гузелией Рафиковной под руководством профессора, доктора биологических наук Золотухина С.Н. на базе кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологиии и ВСЭ ФГБОУ ВО Ульяновская ГСХА, внедрены е учебный процесс дисциплин бакалавриата и магистратуры по следующим направлениям:

1. Направление подготовки «Биология» (бакалавриат)-Профиль - 06.03.01 - Фитодизайн в садово-парковом и ландшафтном строительстве в следующие программы: Микробиология и вирусология. Введение в биотехнологию, Методы биомониторинга и биондикации: Профиль - 06.03.01 - Экономика природопользования и экологические менеджмент в следующие программы: Микробиология и вирусология Введение в биотехнологию, Экология микроорганизмов, Методь лабораторных исследований, Методы биомониторинга и биоиндикации;

2. Направление подготовки «Педагогическое образование): (бакалавриат)-

Данным актом подтверждается, что материалы диссертационного исследования на тему: «Усовершенствование схемы индикации и идентификации бактерий вида Klebsiella oxytoca с помощью фагового биопрепарата», представленной на соискание ученой степени кандидата биологических наук, по специальности 06.02.02 - Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология, выполненной Садртдиновой Гузелией Рафиковной под руководством доктора биологических наук, профессора Золотухина С.Н. на базе кафедры микробиологии, вирусологии, эпизоотологиии и ВСЭ Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия имени П.А. Столыпина», внедрены в учебный процесс дисциплин:

- бакалавриата по направлениям:

06.03.01 - «Биология» («Микробиология». «Спецпрактикум», «Санитарная микробиология»),

36.03.01 - «Ветеринарно-санитарная экспертиза» («Биотехнология». «Микробиология», «Ветеринарная санитария», «Бактериальные токсикозы и токсикоинфекции»),

- спсциалитета по направлению:

- 36.05.01 - «Ветеринария» («Ветеринарная микробиология и микология», «Биотехнология»).