Биотехнологические параметры разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus subtilis в пищевом сырье и продуктах питания тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Мустафин, Али Хамзеевич

• Мустафин, Али Хамзеевич
• кандидат биологических наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мустафин, Али Хамзеевич

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Систематика и идентификация бактерий Bacillus subtilis

1.2. Распространение бактерий В. subtilis в пищевых продуктах

1.3. Бактерии В. subtilis в организме животных

1.4. Бактериофаги и и их применение в лабораторной практике

1.4.1. Фагоидентификация бактерий и фаготипирование

1.4.2. Морфологические и биологические свойства фагов

1.4.2.1. Морфология негативных колоний

1.4.2.2. Морфология бактериальных вирусов

1.4.2.3. Развитие фаговых корпускул в клетке-хозяина

1.4.2.4. Реакция нарастания титра фага

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект, материалы и методы исследований

2.2. Результаты исследований и их обсуждение

2.2.1. Выделение бактерий В. subtilis из объектов

санитарного надзора

2.2.2. Поиск бактериофагов бактерий В. subtilis и селекция

клонов фагов

2.2.3. Изучение биологических свойств фагов бактерий В. subtilis

2.2.3.1. Морфология негативных колоний

2.2.3.2. Спектр логического действия

2.2.3.3. Логическая активность выделенных бактериофагов

В. subtilis

2.2.4. Характеристика выделенных фагов бактерий В. subtilis, выбранных для конструирования биопрепарата на основе индикаторных бактериофагов Bs-13 и Bs-16 серии УГСХА

2.2.4.1. Спектр литического действия бактериофагов Вз-13

и Вб-16 серии УГСХА, входящих в состав биопрепарата

2.2.4.2. Специфичность действия фагов -13 и Вб-16 серии УГСХА, составляющих биопрепарат для индикации

бактерии В. яиЬНШ

2.2.4.3. Температурная устойчивость фагов бактерий В. тлЬП7и Вз-13 УГСХА и Вб-16 УГСХА, входящих в

состав биопрепарата

2.2.4.4. Устойчивость бактериофагов Вэ-13 и Вб-16 серии УГСХА, на основе которых разработан биопрепарат,

к воздействию хлороформа

2.2.4.5. Изменение литической активности фагов Вб-13 и Вз-16 серии УГСХА, составляющих индикаторный биопрепарат, при хранении

2.3. Технологические параметры по изготовлению и контролю лабораторной серии биопрепарата на основе индикаторных

бактериофагов Вз-13 и Вб-16 серии УГСХА

2.3.1. Производственные штаммы индикаторных культур

и порядок работы с ними

2.3.2. Методика культивирования индикаторных фагов,

входящих в состав биопрепарата

2.3.3. Приготовление питательной среды для культивирования бактериофагов, составляющих индикаторный биопрепарат

2.3.4. Технология изготовления бактериофагов, входящих

в состав биопрепарата

2.3.5. Контроль бактериофагов Вз-13 УГСХА и Вб-16 УГСХА, составляющих биопрепарат

2.3.6. Кондиция бактериофагов

2.4. Разработка схемы исследования материала с целью выделения и ускоренной

идентификации бактерий Я subtilis

2.4.1. Подбор параметров исследования

2.4.2. Методика фагоидентификации бактерий В. subtilis

2.5. Разработка оптимальных условий постановки реакции нарастания

титра фага (РНФ)

2.5.1. Определение количественных показателей РНФ, имеющих диагностическое значение

2.5.2. Установление оптимального времени, обеспечивающего

наиболее полноценное взаимодействие фага с бактериями

2.5.3. Использование РНФ для обнаружения бактерий

В. subtilis в объектах санитарного надзора

2.5.3.1. Исследование водопроводной воды, контаминированной бактериями В. subtilis, с помощью РНФ

2.5.3.2. Исследование комбикорма, контаминированного бактериями

В. subtilis с помощью РНФ

2.5.3.3. Исследование проб специй, искусственно контаминированных бактериями В. subtilis, с помощью РНФ

2.5.3.4. Исследование проб мяса, искусственно контаминированного бактериями В. subtilis, с помощью РНФ

2.5.3.5. Результаты исследований проб молока на наличие бактерий

В. subtilis с помощью РНФ

2.6. Изучение эффективности поливалентного фагового биопрепарата

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

ПРИЛОЖЕНИЯ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ГЦ - гуанин - цитозин

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ИФА - иммуноферментный анализ

ЛПС - липополисахарид

М.к. - микробная клетка

М.к./г. - микробных клеток на 1 грамм

Мкм - микрометры

М.к./мл - микробных клеток на 1 миллилитр

МПА - мясопептонный агар

МПа - мега Паскаль

МПБ - мясопептонный бульон

МПЖ - мясопептонная желатина

Н.м. - нанометр

Об./мин - оборотов в минуту

ОКИ - острые кишечные инфекции

ОРЗ - острые респираторные заболевания

РА - реакция агглютинации

РГА - реакция гемагглютинации

РНФ - реакция нарастания титра фага

ПЭГ - полиэтиленгликоль

ПЦР - полимеразно-цепная реакция

ЬТ - термолабильный энтеротоксин

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Биотехнологические параметры разработки фагового препарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus subtilis в пищевом сырье и продуктах питания»

ВВЕДЕНИЕ

Контаминация пищевого сырья и продуктов питания бактериями вида В. subtilis на всех этапах технологического процесса - это серьезная проблема перерабатывающей промышленности. Эти почвенные сапрофиты встречаются повсеместно, отличаются высокой температурной устойчивостью, солетолерантны и способны продуцировать токсины (Беленева 2008; Феоктистова, 2010). При контаминации бациллами пищевое сырье и выработанные из него продукты питания зачастую не изменяют свои органолептические свойства, поэтому определить их присутствие в пище невозможно до тех пор, пока у потребителя не появятся симптомы интоксикации (Динчева, 1970; Пивоваров, 1970; Бахаровская, 2011). Пищевые токсикозы, вызванные бактериями Bacillus subtilis, характеризуются острым течением болезни и могут вызвать летальный исход (Бургасов, 1984; Пучкова, 2005, Медведев, 2010).

Учитывая сложность лабораторной диагностики, остается актуальной проблема унифицированной схемы бактериологического исследования, повышается значимость бактериофагов как высоко специфичного инструмента для индикации микроорганизмов, позволяющего точно идентифицировать пищевые контаминанты, а также осуществлять более детальную дифференциацию отдельных биотипов и фаговаров внутри вида. Возможность фагоидентификации вытекает из специфичности действия бактериофагов, которая может быть настолько выражена, что позволяет дифференцировать не только отдельные виды, но и серологически неотличимые штаммы в пределах одного вида (Малофеева, 2004; Пожарникова, 2006). Поэтому все большее число исследователей предпочитают использовать фаговые тесты, как высокоспецифичный метод, способный дифференцировать близкородственные штаммы (Натидзе, 2005; Феоктистова, 2011).

Типовые высокоспецифичные бактериофаги - это биоиндикаторы, благодаря которым можно проводить мониторирование бактерий отдельных видов, иметь возможность установить источник и путь передачи инфекционного заболевания, т.е. провести его эпидемиологический анализ. Так в Канаде в промежуток с 1986 по 1993 было отобрано 146 изолятов Bacillus cereus, причастных к 18 вспышкам пищевого отравления. Из них 142 штамма было разделено на 17 типов фагов (Ahmed, 1995).

В настоящий момент в Российской Федерации не разработаны методики фагоиндикации и фагоидентификации бактерий Bacillus subtilis в объектах санитарного надзора. Использование подобных методик позволит в сжатые сроки типировать бактерии Bacillus subtilis, используя минимальное количество расходных материалов и трудозатрат в течение 25 часов.

Цель - разработать биотехнологические параметры изготовления фагового препарата для индикации и идентификации бактерий Bacillus subtilis в пищевом сырье и продуктах питания.

Задачи работы:

1. Изучить распространение бактерий В. subtilis в пищевых продуктах.

2. Выделить бактериофаги, активные в отношении бактерий В. subtilis.

3. Селекционировать и изучить основные биологические свойства (морфологию негативных колоний, литическую активность и ее спектр, специфичность, температурную устойчивость, устойчивость к хлороформу, изменение литической активности при хранении) выделенных бактериофагов.

4. Подобрать оптимальный набор выделенных фагов и сконструировать на их основе новый биопрепарат.

5. Разработать технологические параметры изготовления биопрепарата для фагодиагностики бактерий В. subtilis.

6. Разработать схеиу ускоренной индикации бактерий В. subtilis в объектах санитарного надзора методом реакции нарастания титра фага с использованием созданного биопрепарата.

7. Разработать схему идентификации бактерий В. БиЪИШ с помощью бактериофагов.

Научная новизна

Выделены из объектов санитарного надзора и изучены по заданным биологическим свойствам бактериофаги В. хиЫШз, из них отобраны наиболее оптимальные специфические бактериофаги В б -13 УГСХА и Вб -16 УГСХА для создания биопрепарата.

Разработаны биотехнологические параметры изготовления фагового биопрепарата и усовершенствована схема фагоиндикации В. зиЫШя в объектах внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов с применением созданного биопрепарата.

Усовершенствована схема выделения и идентификации бактерий В. зыЫШб в объектах санитарного надзора с помощью созданного фагового биопрепарата.

Практическая значимость работы

Предложенная в диссертационной работе схема фагоидентификации и дифференциации позволяет выделять и типировать штаммы бактерий В. яиЬИШ из объектов внешней среды, пищевого сырья и пищевых продуктов.

Сконструирован биопрепарат на основе специфичных бактериофагов Вэ-13 УГСХА и В э-16 УГСХА и усовершенствована схема индикации бактерий В. яиЫгШ методом реакции нарастания титра фага (РНФ) в течение 25 часов.

По материалам диссертационной работы разработаны и утверждены ректором УГСХА (от 10 марта 2010 г) «Временная инструкция по изготовлению и контролю лабораторной серии фагов Вб-13 УГСХА и Вб-16 УГСХА для индикации и идентификации бактерий В. яиЫШя», «Методические рекомендации по ускоренной индикации и идентификации бактерий В. яиЬиШ в объектах санитарного надзора с применением специфичных бактериофагов», разработаны для сотрудников медико-биологических научных учреждений и специалистов бактериологических лабораторий. Материалы диссертационной

работы используются в учебном процессе при чтении лекций, для практических занятий студентов, работы аспирантов на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ВСЭ Ульяновской государственной сельскохозяйственной академии.

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

1. Предложена усовершенствованная схема выделения бактериофаов из объектов санитарного надзора применительно к бактериям В. БиЫШз изучены биологические свойства выделенных и селекционированных фагов.

2. Создан биопрепарат из селекционированных фагов бактерий В. яиЫШя и технологические параметры его изготовления.

3. Разработана схема идентификации бактерий В. БиЫШя с применением биопрепарата на основе фагов Вб-13 УГСХА и Вб-16 УГСХА ускоряет определение видовой принадлежности В. яиЫШз.

4. Предложена схема ускоренной индикации бактерий В. БиЫШз в объектах санитарного надзора с помощью реакции нарастания титра фага (РНФ) с использованием созданного биопрепарата.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на: Международной научно-практической конференции посвященной 65-летию УГСХА «Актуальные вопросы аграрной науки и образования» (Ульяновск, 2008); Всероссийской научно-практической конференции «Вклад молодых ученых в отраслевую науку с учетом современных тенденций развития АПК» (Москва, 2009); Международной научно - практической конференции «Аграрная наука и образование на современном этапе развития: опыт, проблемы и пути решения» (Ульяновск, 2009); III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» (Ульяновск, 2010); Всероссийском симпозиуме с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов прошлое, настоящее, будущее» (Москва,

2011); Международной научно-практической конференции «Ветеринарная медицина XXI века: инновации, опыт, проблемы и пути их решения» (Ульяновск, 2011).

Работа выполнена на кафедре микробиологии, вирусологии, эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы Федерального Государственного бюджетного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ульяновская государственная сельскохозяйственная академия»

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 статей, 4 из них в журналах, рекомендованных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, списка использованных литературных источников и приложений. Материалы диссертации изложены на 147 страницах, включают 33 таблиц и 7 рисунков. Список использованных литературных источников включает 157 наименований, в том числе 30 зарубежных.

и

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Мустафин, Али Хамзеевич

ВЫВОДЫ

1. Обнаружено 30 культур бактерий В. subtilis при исследовании 74 проб объектов санитарного надзора. Уровень контаминации исследуемых пищевых продуктов бактериям В. subtilis составил 41 %.

2. Выделено из объектов внешней среды 22 изолята фагов, активных по отношению к бактериям В. subtilis, и изучены биологические свойства их изолятов (морфология негативных колоний, спектр литического действия, литическая активность).

3. Изучены биологические свойства бактериофагов и выбраны два штамма фагов Bs-13 УГСХА и Bs-16 УГСХА, которые имели титр 2,8 х 109 -8,0 х 109 по Грациа, обладали выраженной специфичностью к штаммам бактерий В. subtilis, не лизироваликультуры представителей родов Morganella, Klebssiella, Salmonella, Staphylococcus, Streptococcus, Pseudomonas, вида

Y. enterocolitica; и гомологичного рода: В. cereus, В. mycoides, В. megaterium, В. g mesentericus, В. thuringiensis, сохраняли литическую активность в пределах 10 - 109 в течении 12 месяцев при хранении в условиях 2 - 4 °С, были термостабильными и хлороформоустойчивыми.

4. Установлено что оптимальными технологическими показателями для изготовления специфического биопрепарата на основе фагов Bs-13 УГСХА и Bs-16 УГСХА с высокой литической активностью являются: соотношение количества фаговых корпускул к количеству бактериальных клеток индикаторного штамма 1:5, оптимальное время инкубирования при температуре 37 °С - 6 часов.

5. Разработаны биотехнологические параметры изготовления фагового препарата для фагодиагностики бактерий В. subtilis.

6. Разработана схема ускоренной индикации бактерий В. subtilis с помощью реакции нарастания титра фага в объектах санитарного надзора с использованием биопрепарата на основе фагов Bs-13 УГСХА и Bs - 16

УГСХА, которая позволяет обнаружить их за 25 часов.

7. Разработана схема идентификации бактерий В. яиЫШз с помощью сконструированного фагового препарата, позволяющая идентифицировать их в два раза быстрее (48 часов), в отличие от бактериального метода.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Важное место среди микроорганизмов, вызывающих пищевые отравления у животных и человека, занимают бактерии В. яиЫШя. Борьба с любыми болезнями зависит от своевременной диагностики, поэтому усовершенствованию методов лабораторной диагностики заболеваний, вызываемых этими микроорганизмами, уделяется большое внимание. Современные методы диагностики (полимеразно-цепная реакция, иммуно-ферментный анализ), которые могут быть использованы для индикации и идентификации бактерии В. яиЬиШ дорогостоящи и недоступны большинству районных бактериологических лабораторий. Поэтому изысканию простых и доступных методов для лабораторий любого уровня является актуальной проблемой.

В связи с этим наша работа была посвящена изысканию вирулентных специфических бактериофагов, активных в отношении бактерий В. БиЫШз, выделенных из объектов санитарного надзора.

Как указывают В.Д. Тимаков и Д.М. Гольдфарб (1962), идентификация возбудителей инфекционных заболеваний при помощи бактериофагов является очень тонким методом, превосходящим по чувствительности все иммунологические реакции. Поэтому основной задачей проведенных исследований являлось выделение и изучение бактериофагов с типоспецифическими свойствами в отношении бактерий В. яиЬНШ для индикации и идентификации указанных бактерий. Выделение бактериофагов проводилось из объектов санитарного надзора.

При проведении бактериологических исследований 74 проб пищевых продуктов, нами было выделено 30 культур бактерий В. БиЬИШ из 30 проб, что составило 41 %. Этот показатель свидетельствует о широком распространении бактерий В. яиЬиШ в объектах санитарного надзора на территории Ульяновской и Самарской областей, а также Краснодарского края.

В результате исследований нами было выделено и селекционировано 22 изолята бактериофагов, активных в отношении бактерий В. subtilis. Они были изучены по основным биологическим свойствам, которые имеют таксономическое значение: 1) морфологии негативных колоний; 2) специфичности действия; 3) литической активности; 4) спектру литического действия; 5) температурной устойчивости; 6) чувствительности к хлороформу, 6) изменению литической активности фагов при хранении.

Выделенные бактериофаги различались по морфологии образуемых на индикаторных штаммах негативных колоний, поэтому разделены нами на два типа. Была изучена литическая активность селекционированных бактериофагов по методу Грациа (Гольдфарб, 1961) составила от 1,7 х 106 до 8,0 х 109 фаговых корпускул в 1 мл.

Был изучен спектр литического действия бактериофагов: процент лизиса составил 95,0 % на 40 изченных штаммах бактерий В. subtilis. Нужно отметить, что бактериофагов В. subtilis, лизирующих только один штамм, обнаружено не было.

Выделенные фаги исследовали на специфичность: они проявили себя не активными в отношении гетерологичных бактерий и бактерий рода Bacillus.

Воздействие температуры диапазоне 81 - 91°С не оказало существенного влияния на содержание активных корпускул фага в 1 мл. Последующее повышение температуры до 96 °С достаточно равномерно снижало активность бактериофагов. Прогревание при температуре выше 97 °С в 1мл фаголизата активных корпускул фага по показателям негативных колоний мы не обнаружили. Так как изучаемые фаги были термостабильными, метод прогревания в исследованиях мы использовали для инактивации микрофлоры с целью освобождения от них фаголизата. Фаги проявили одинаковую устойчивость к хлороформу - обработка фаговой суспензии хлороформом может также применяться для ее очистки от бактериальных клеток.

На основании проведенных исследовании нами рекомендована следующая система очистки бактериофагов от бактериальных клеток В. subtilis - первоначально необходимо прогреть бактериофаг при температуре 80 °С в течение 45 минут, затем процентрифугировать при 3000 об/м и профильтровать через мембранные фильтры фирмы Millipore (filter type: 0,22 цш GV).

Результаты проведенных исследований соответствуют литературным данным (Хейс, 1965, Ревенко, 1978, Золотухин, 1994) о более высокой устойчивости бактериофагов по сравнению с бактериями к воздействию факторов внешней среды.

Селекционированные бактериофаги В. subtilis при хранении в условиях 2-4 °С в течение 12 месяцев незначительно снижали литическую активность (108- 109) и поэтому могут входить в состав биопрепарата для фагодиндикации и фагоидентификации пищевых контаминантов - бактерий вида В. subtilis .

Проведенные исследования позволили сконструировать биопрепарат на основе фагов Bs-13 УГСХА и Bs-16 УГСХА и разработать технологических параметры для изготовления лабораторных серий препарата. Фаговый биопрепарат рекомендуем использовать в РНФ для индикации бактерий В. subtilis. При этом сокращаются сроки исследования с меньшим расходом сред и реактивов, чем при использовании бактериологического метода.

О высокой чувствительности РНФ для индикации энтеробактерий во внешней среде сообщают многие исследователи (Земцова, 1965; Золотухин, Каврук, Васильев, 2005). Нами изучена возможность использования индикаторных бактериофагов Bs-13 УГСХА и Bs-16 УГСХА для идентификации бактерий В. subtilis.

Существующие методы идентификации бактерий В. subtilis основаны на определении биохимических свойств выделенных культур (Gordon, 1973). Нами предложена схема ускоренной их идентификации с помощью индикаторных бактериофагов Bs-13 УГСХА и Bs-16 УГСХА. Лизис культуры на поверхности питательнога агара служит основанием для отнесения исследуемого штамма к В. subtilis. Для ускоренной индикации сенной бациллы в объектах санитарного надзора нами разработаны оптимальные условия постановки РНФ.

В первую очередь для постановки РНФ определяли концентрации бактериофагов В. яиЫШз, имеющих диагностическое значение. По данным В.Д. Тимакова и Д.М. Гольдфарба (1962), результат РНФ считается отрицательным, если увеличение количества фага в опытной пробе по сравнению с контрольной составляет до 3 раз. Увеличение количества фага от 3 до 5 учитывается как слабо положительная реакция, от 5 до 10 раз - положительная.

Для определения количества фага, имеющего индикаторное значение при обнаружении бактерий В. БиЬиШ, нами проведены эксперименты на МПБ, контаминированном культурами В. ятлЬИШ 26 и В. зиЫШй 4 в концентрации от 101 до 105 м.к./мл. Выбранный критерий гарантировал достоверность результатов, поскольку он позволял исключить технические погрешности при титровании, при которых возможно выявление невысокой степени увеличения количества фага. Достоверность РНФ подтверждали выделением бактерий вида В. &иЫШ$ бактериологическим методом исследования.

Определив количество фага, имеющее индикаторное значение при обнаружении бактерий вида В. яиЫШя в исследуемом тест-объекте, мы приступили к разработке режимов постановки РНФ. Для решения указанной задачи необходимо было провести эксперименты на тест-объекте по выявлению наиболее эффективного временного показателя взаимодействия фага и индикаторной культуры при сохранении остальных параметров (температурный режим, концентрация бактериальной культуры и фаговых корпускул в 1 мл) постановки РНФ. Оптимальное время экспозиции выбирали из шести следующих параметров:

- в предварительном подращивании исследуемого материала в течение 6 часов при температуре 37 °С, после добавления фагов смесь выдерживали в течение 6 часов при температуре 37 °С;

- в предварительном подращивании исследуемого материала в течение 16 часов при температуре 37 °С, после добавления фагов смесь выдерживали в течение 6 часов при температуре 37 °С;

- в предварительном подращивании исследуемого материала в течение 24 часов при температуре 37 °С, после добавления фагов смесь выдерживали в течение 6 часов при температуре 37 °С;

- в увеличении времени контакта исследуемого материала с фагом до 10 часов при температуре 37 °С;

- в увеличении времени контакта исследуемого материала с фагом до 16 часов при температуре 37 °С;

- в увеличении времени контакта исследуемого материала с фагом до 24 часов при температуре 37 °С.

Опытным путем было установлено, что подращивание материала в течение 6 часов позволяет обнаружить сенную палочку с помощью РНФ в

2 2 концентрации 10 м.к./мл для фага Вб-13 УГСХА и 10 м.к./мл для фага Вб-16

УГСХА. При подращивании исследуемого материала в течение 16 и 24 часов чувствительность реакции не повышается и также позволяет обнаружить бактерии В. яиЫШя в количестве 10 м.к./мл для фагов Вз-13 и Вб-16 серии

УГСХА. На проведение исследования затрачивается 40 часов.

Бактериологическим методом это же количество бактерий В.яиЬИШ обнаружить удалось обнаружить через 24 часа подращивания материала, но на постановку реакции было затрачено 96 часов.

В результате исследований установлено, что при увеличении контакта исследуемого субстрата с фагом в течение 10 часов при температуре 37 °С заметное нарастание количества фагов бактерии В. зиЫШя не наблюдается при концентрации гомологичных бактерий не менее 10 м.к./мл. Удлинение сроков инкубации (16 - 24 часа) также не дают возможности получить увеличение количества фага.

Исходя из этого, можно предположить, что значение инкубации в течение 5 часов при температуре 37 °С сводится к тому, что за это время бактерии, находящиеся в исследуемом субстрате в очень малых количествах, размножаются. В результате этого между добавленным индикаторным фагом и бактериями устанавливаются такие количественные соотношения, при которых вероятность встреч между ними повышается, и бактерии инфицируются фагом. Отсюда вытекает, что исход реакции зависит не только от свойств индикаторного фага, но и от биологических особенностей данного возбудителя, обнаруживаемого с помощью РНФ.

Таким образом, из числа испытанных режимов наиболее быстрым и чувствительным является подращивание исследуемого материала с фагом в течение 6 часов при температуре 37 °С. Учет результатов в этом случае проводят через 25 часов. Бактерии В. subtilis удается обнаружить в количестве 102 м.к./г.

Сопоставление результатов бактериологического исследования и РНФ позволили подтвердить специфичность РНФ и высокую чувствительность, которые согласуются с работами многих авторов. Так, В.Я. Ганюшкин (1967), сообщает об исследовании фекалий от 6 поросят, зараженных внутривенно сальмонеллами, что положительная РНФ была через 26 дней у 100 %. Л.П. Пульчеровской (2004), H.A. Феоктистовой (2006) была доказана возможность применение РНФ для обнаружения энтеробактерий бактерий в объектах санитарного надзора. РНФ позволяла определять в искусственно зараженных мясе, комбикормах, фекалиях животных энтеробактерии в концентрации 10 м.к./г. Проведенное параллельно бактериологическое исследование давало отрицательные результаты.

Сведений о применении РНФ для обнаружения бактерий В. subtilis в объектах санитарного надзора мы не встречали. Поэтому необходимо было изучить возможность использования РНФ для обнаружения данных микроорганизмов в вышеобозначенных объектах. Для этого мы провели исследования по выяснению возможности использования РНФ для обнаружения бактерий В. subtilis в продуктах питания, водопроводной воде и комбикормах.

Результаты проведенной серии опытов по искусственной контаминации объектов санитарного надзора бактериями В. яиЬиШ и их индикации с помощью бактериофагов Вз-13 и Вб-16 серии УГСХА, свидетельствуют о положительных результатах, полученных в РНФ при концентрации бактерий В. БиЪНШ 102 м.к./г, как в МПБ; в комбикорме, специях и мясе увеличение количества корпускул фагов наблюдалось при концентрации бактерий В. зиЫШя 103 м.к./г, имеющей диагностическое значение.

В результате проведенных исследований были выполнены все поставленные задачи, предложен диагностический препарат, состоящий из 2 фагов: Ва-13 и Вз-16 серии УГСХА, разработаны технологические параметры для изготовления лабораторной серии бактериофагов. Доказана возможность применения РНФ с целью обнаружения бактерий В. яиЬИШ в объектах санитарного надзора, позволяющая сократить время исследования, уменьшить расход питательных сред и лабораторной посуды, увеличить эффективность обнаружения бактерий В. тЫШь.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мустафин, Али Хамзеевич, 2012 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ

1. Адельсон ЛИ Бактериофаги, активные по отношению к энтеропатогенным кишечным палочкам / ЛИ. Адельсон // Вопросы микробиологической диагностики и бактериофагии. -1962. - С. 184-194.

2. Аврех В.В. О понятии "Серологический тип бактериофагов"/ В.В. Аврех // ХП1 Всесоюзный съезд гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов. Т.2. - 1959. - С. 537-540.

3. Азизбекян Р.Р. Изменение наследственности бактерий путем фаговой конверсии / P.P. Азизбекян // Микробиология. Т.З. - М., 1974. - С. 191-233.

4. Акимович В.В. Микроб / В.В. Акимович, Л.В. Самойлова // Сб. научн. тр. -1960. - Вып.4. - С.265-271.

5. Алымова А.Ф. Применение реакции нарастания титра фага в очагах брюшного тифа / А.Ф. Алымова, В.В. Гортинская, А.П. Кузнецова // Тр. Горьковского гос. мед. ин-та им. С.М.Кирова. - Горький, 1964. - T.XYIII. - С. 10-12.

6. Арский В.Г. Применение реакции нарастания титра фага для диагностики хронической дизентерии / В.Г. Арский, 3.3. Ахметова, А.В. Ясенский // Здравоохранение Таджикистана. - 1961. - № 2. - С. 5-11.

7. Архангельский ИИ. Фаготипирование патогенных стафилококков, выделенных из молока коров / И.И. Архангельский, Б.А. Степанов // Ветеринария. - 1966. -№3. - С. 26-27.

8. Асколонов С.П. Пищевые заболевания, вызываемые спорообразующими бактериями Bacillus subtilis и Bacillus mesentericus / С.П. Асколонов, А.И. Ильченко // Вопросы питания. - Киев: Госмедиздат УССР. - 1962. - С.226-229.

9. Фаги Pseudomonas aeruginosa / А.Г. Шестаков [и др.] // Современное развитие АПК: региональный опыт, проблемы, перспективы: Матер. Всероссийской научно-практ. конф. 26-28 апреля 2005. - Ульяновск, 2005. - 4.5. -С. 227-229.

10. Стронговская Н.В. Сравнительное изучение РНФ для выявления носительства дизентерийных бактерий / Н.В. Стронговская // Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - Симферополь, 1964. - 17 с.

11. Тихоненко A.C. Ультраструктура вирусов бактерий / A.C. Тихоненко // М.: Наука, 1968. - С. 89-168.

12. Африкян Э.К. Энтомопатогенные бактерии и их значение / Э.К. Африкян // Ереван: Изд-во АН АрмССР. - 1973. - 418 с.

13. Бахаровская Е.О. Роль бактерий вида Bacillus mesentericus в контаминации объектов санитарного надзора / Е.О. Бахаровская, H.A. Феоктистова, Д.А. Васильев // Материалы VI Международной научно-практической конференции. - Барнаул, 2011. - С. 353-355.

14. Башмаков Г.А. Индикация дизентерийных бактерий на поверхности методом реакции нарастания титра фага / Г.А. Башмаков // Военно-мед. журн. — 1961.-№ 4.-С. 39-42.

15. Безуглая В.А. Биология бактерий рода Proteus, выделенных из продуктов убоя свиней в УССР, и мероприятия по обеспечению выпуска свинины, благополучной по протею / В.А. Безуглая // Автореф. дис.... канд. биол. наук. -Киев.-1975.-22 с.

16. Беленева И.А. Особенности распространения и свойства бактерий рода Bacillus, ассоциированных с гидробионтами и водой Залива Петра Великого (Японское море) / И.А. Беленева // Микробиология - том 77, № 4, 2008, С. 558565.

17. Бургасов П.Н. Сибиреязвенная инфекция / П.Н. Бургасов, Г.И. Рожков // М.: Медицина. - 1984. - 206 с.

18. Бактериофаги в ветеринарии: реальность и перспективы / JI.JI. Натидзе, [и др.] // Мат. Межд. семинара. - Тбилиси, 2005. - 15 с.

19. Бурлаченко И.В. Теоретические и прикладные аспекты повышения резистентности осетровых рыб в аквакультуре / И.В. Бурлаченко // Дисс. док. биол. наук: 03.00.10. - Москва, 2007. - 319 с. РГБ ОД, 71:07-3/190.

20. Быкова З.И. Некоторые свойства чумных фагов / З.И. Быкова // Тр. Армянской противочумной станции. - М.,1964. - №3. - С. 171-175.

21. Вилькомирская Т.С. О диагностическом значении реакции нарастания титра фага при дизентерии / Т.С. Вилькомирская // ЖМЭИ. - 1971. - № 1. - С. 136-138.

22. Висконти Р. Генетика бактериофага / Р. Висконти // В кн.: Онтогенез вирусов. - М.,1956. - 141 с.

23. Витавская A.B. Биологическая защита хлеба от картофельной болезни хлеба / A.B. Витавская, Г.Н. Дудикова, К.А. Тулемисова // Алмата, 1998. - 432 с.

24. Воронцова A.A. Применение метода реакции нарастания титра фага при эпидемиологическом и санитарном обследовании / A.A. Воронцова // Кишечные инфекции: Тез.докл. на межинстит.конф. -М.,1961. - С. 127-128.

25. Вуд У. Брожение углеводов и родственных соединений / У. Вуд // Метаболизм бактерий М.: Изд-во иностр. лит. - 1963. - 96 с.

26.Габрилович И.М. Лизогения / И.М. Габрилович // Минск, 1970. -С.68-89.

27. Габрилович И.М. Общая характеристика бактериофагов / И.М. Габрилович // Основы бактериофагии. - Минск, 1973. - С.5 - 24.

28. Габрилович И.М. Биологические свойства бактериофагов Serratia marcences / И.М. Габрилович // ЖМЭИ. - 1992. - №6. - С.10-12.

29. Ганюшкин В.Я. Реакция нарастания титра фага при диагностике паратифа поросят / В.Я. Ганюшкин // Ветеринария. -1967. - № 3. - С. 69-71.

30. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги Salmonella choleraesuis, сравнительная характеристика и практическое применение / В.Я. Ганюшкин // Автореф. дис. докт. вет. наук. - М., 1984. - С. 13-34.

31. Ганюшкин В.Я. Бактериофаги сальмонелл и их применение в ветеринарии / В.Я. Ганюшкин // Ульяновск. - 1988. - 45 с.

32. Ганюшкин В .Я. Обследование свиней на носительство сальмонелл и фагопрофилактика / В.Я. Ганюшкин // Вопросы ветеринарной микробиологии,

эпизоотологии и ветеринарно-санитарной экспертизы. — Ульяновск,1990. - С. 20-28.

33. Гольдфарб Д.М. Бактериофагия // Д.М. Гольдфарб // М.: Медгиз,1961. -С. 6-184.

34. Гольдфарб Д.М. Опыт применения реакции нарастания титра фага для диагностики дизентерии / Д.М. Гольдфарб, В.Н. Кузнецова // ЖМЭИ. - 1957. -№8.-С. 90-94.

35. Гольдфарб Д.М. Индикация брюшнотифозной палочки в воде с помощью реакции нарастания титра фага / Д.М. Гольдфарб, З.С. Островская // ЖМЭИ. -1957.-№5.-17 с.

36. Гордина Р.В. Фаготипирование паратифозных В бактерий и действие на них бактериофагов / Р.В. Гордина // Автореф. дис. докт. вет. наук. - М., 1954. -С.24-27.

37. Гуторова Л.Д. Фаготипирование бреславской палочки / Л.Д. Гуторова // ЖМЭИ. - 1958. —№ 12. - С. 53-55.

38. Давиденко Т.А. Фаготипирование S.typhimurium, выделенных в Киеве в 1966-1970 гг. / Т.А. Давиденко, А.М. Зарицкий // В кн.: Кишечные инфекции. -Киев, 1972.-41 с.

39. Дегтярев Ю.А. Реакция нарастания титра фага и ее применение для диагностики брюшного тифа и выявление бактерионосителей / Ю.А. Дегтярев // Тез. докл. ин-та эпидемиол. и гигиены. - Душанбе, 1960. - 12 с.

40. Домарадский И.В. Методика быстрого обнаружения чумного микроба при помощи бактериофага / И.В. Домарадский, О.Н. Мосолова, Л.К. Денисенко // Иркутск, 1957. - С.44-51

41. Динчева E.H. Микробиологическое изучение мясного фарша. / E.H. Динчева //Науч. тр. Высш. ветеринарно-мед. ин-та. - 1970 - Т.22.-С. 139-146.

42. Ершов Ф.И. Индикация дизентерийных бактерий с помощью РНФ / Ф.И. Ершов // В кн.: Изменчивость микроорганизмов и иммунитет. - М., 1959 - 188 с.

43. Жвирблянская А.Ю. Микробиология в пищевой промышленности / А.Ю. Жвирблянская, О.А Бакушинская // М.: Пищевая промышленность, 1966 - 134 с.

44. Заварзин Г.А. Фенотипическая систематика бактерий: Пространство логических возможностей / Г.А. Заварзин // М.: Наука, 1974. - 137 с.

45. Затула Д.Г. Влияние метаболитов споровых сапрофитных бактерий на организм человека и животных / Д.Г. Затула, С.Р. Резник // Киев: Изд. «Наукова Думка», 1973.-С.75-98.

46. Земцова И.Н. Применение реакции нарастания титра специфического бактериофага для индикации спор сибиреязвенных бактерий в почве / И.Н. Земцова // Вопросы микробиологии и лабораторной диагностики особо опасных инфекций: Сб. научн. работ противочумных учрежд. - Саратов, 1965. - 171 с.

47. Золотухин С.Н. Бактериофаги М.то^апи и их применение при желудочно-кишечных заболеваниях поросят / С.Н. Золотухин // Автореф. дис. ... канд. ветеринар, наук. - М, 1994. - 20 с.

48. Золотухин С.Н. Малоизученные энтеробактерии и их роль в патологии животных / С.Н. Золотухин //Ульяновск, 2004. - С.29-37.

49. Золотухин С.Н. Смешанная кишечная инфекция телят и поросят, вызываемая патогенными энтеробактериями / С.Н. Золотухин, Л.С. Каврук, Д.А. Васильев // Ульяновск, 2005. - С.20-25.

50. Иллютович А.Ю. Примене-ние РНФ для индикации дизентерийных бактерий флекснера в организме зараженных кроликов / А.Ю. Иллютович, З.С. Петрова, Е.Е. Голубева // Бюлл. эксп. биол. и мед. - 1958. - № 6. -78 с.

51. Ипатенко Н.Г. Сибирская язва сельскохозяйственных животных. / Н.Г. Ипатенко, В.А. Седов // М., 1987. - 256 с.

52. Камборатов П.И. Значение РНФ при распознавании сальмонеллеза / П.И. Камборатов // ЖМЭИ. - 1963. - № 6. - 35 с.

53. Камборатов П.И. Клиническая оценка РНФ как метода лабораторной диагностики острой дизентерии / П.И. Камборатов // ЖМЭИ. - 1963. -№4.-29 с.

54. Кац-Чернохвостова JI.Я. Проблема фаготипирования брюшнотифозных и паратифозных микробов и ее эпидемиологическое значение / Л.Я. Кац-Чернохвостова // ЖМЭИ. - 1947. -№ 8. -С. 312-315.

55. Кацитадзе Г.К. Применение брюшнотифозного фага Vi-I в РНФ / Г.К. Кацитадзе // ЖМЭИ. -1963. - № 3. - С. 126-127.

56. Козелько O.A. Применение метода РНФ для контроля качества дезинфекции в очагах кишечных инфекций / O.A. Козелько // ЖМЭИ. — 1961. — №2.-С. 36-40.

57. Коритняк Б.М. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Yersinia enterocolitica и их применение в диагностике / Б.М. Коритняк // Автореф. дис____канд. биол. наук. - Саратов, 2005. - 20с.

58. Корнилова Г.В. РНФ при индикации дизентерийных бактерий в воде в сопоставлении с бактериологическим методом / Г.В. Корнилова // Материалы 16 межобластн.научн.-практ.конф.лабор.работников в Зап. Сибири в г. Томске. -1960.-С. 20-21.

59. Красильников H.A. Определитель бактерий и актиномицетов / H.A. Красильников // М.-Л., Изд-во АН СССР. - 1949.

60. Кременчук Г.А. Применение реакции нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Г.А. Кременчук, М.А. Гицевич, К.П. Бояршинова // ЖМЭИ. - 1961. - № 7. - 124 с.

61. Кривиский A.C. Вирусы против микробов / A.C. Кривиский // М.,1962. -С.23-29.

62. Крылова М.Д. Применение бактериофагов для типирования бактерий // М.Д. Крылова // Бактериофагия. - М.,1961. - 220 с.

63. Крылова М.Д. Фаготипы бактерий / М.Д. Крылова // М.,1963. - 76 с.

64. Крылова М.Д. Схема фаготипирования нетоксигенных дифтерийных бактерий типа gravis / М.Д. Крылова // ЖМЭИ. - 1970. - № 12. - С. 16-22.

65. Крылова М.Д. Перспективы и возможности метода фаготипирования бактерий / М.Д. Крылова // Материалы юбилейного симпозиума, посвящен 50-

летию Тбилисского НИИВС. - Тбилиси, 1974. - С. 276-280.

66. Кузнецова В.Н. Применение реакции нарастания титра фага для индикации дизентерийных бактерий в условиях внешней среды / В.Н. Кузнецова, М.И. Хазанов, Т.Н. Ремова // ЖМЭИ. - 1960. - № 6. - 59 с.

67. Лебедев В.И. Опыт применения РНФ в эпидемиологической практике /

B.И. Лебедев // ЖМЭИ. - 1963. - № 12. - 29 с.

68. Левина Е.Н. Люминесцирующие антитела (в изучении патогенных микроорганизмов). / Е.Н. Левина, Р.Б. Гольдин, Ф.С. Носков // М., 1972. - 144 с.

69. Лихачев Н.В. Метод диагностики паратифа свиней при помощи бактериофага / Н.В. Лихачев // Ветеринария. - 1948. - № 7. - 32 с.

70. Лурия С. Общая вирусология / С. Лурия, Д. Дарнелл // М., Мир,1970. -

C.36-47.

71. Мазурин Н.Д. РНФ при диагностике дизентерии / Н.Д. Мазурин, Ц.С. Розина-Япкина // ЖМЭИ. -1963. - № 1. - С. 113-115.

72. Малофеева Н.И. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Escherichia coli 0157 и их применение в диагностике / Н.И. Малофеева // Автореф. дис____канд. биол. наук. - Саратов, 2004. - 20 с.

73. Манина Е.Г. Антигенные особенности клеток четырех вариантов Bacillus brevis var. /Е.Г. Манина, И.Н. Полякова, Е.В. Езепчук//Микробиология. - 1975. -44.-№6.-С. 1086-1089.

74. Матвеева С.М. РНФ в диагностике брюшного тифа / С.М. Матвеева // Тез. докл. на межинстит. конф. по проблеме "Кишечные инфекции". - М.,1961. - С. 146-147.

75. Мац Л.И. Вопросы санитарной бактериологии и вирусологии / Л.И. Мац // М.: Медицина,1965. - С.44-59.

76. Медведев П.В. Оценка уровня зараженности зерна пшеницы различных природно-географических зон Оренбургской области возбудителями картофельной болезни хлеба / П.В. Медведев, А.С. Степанов, В.А. Федотов // Вестник ОГУ, № 2 (108) - Оренбург, 2010. - С. 114-118.

77. Методические указания по проведению обязательного минимума исследований в ветеринарных лабораториях при диагностике болезней животных. // Ветеринарное законодательство. - М., 1972. - Т.2. - С. 181-182.

78. Миляева E.H. Определение зараженности предметов бытовой обстановки дизентерийными микробами с помощью реакции нарастания титра бактериофага / E.H. Миляева // ЖМЭИ. - 1958. - № 12. С. 33-34.

79. Мирзоева В.А. Бактерия группы сенной и картофельной палочек. / В.А. Мирзоева // М.: Изд-во АН СССР, 1959. - 176 с.

80. Никольский В.В. Вирусный гастроэнтерит свиней. / В.В. Никольский // К.: Урожай, 1975. - 69 с.

81. Никитюк Н.М. Фаготипирование Styphimurium, выделенных на различных территориях СССР / Н.М. Никитюк // ЖМЭИ. -1970.-№1 .С. 51-53.

82. Нурызгалиев С.Н. Фаготипирование стафилококков, выделенных от больных гнойными инфекциями / С.Н. Нурызгалиев // Матер. 10 научн. сесс. Алма-Атин. гос. мед. ин-та. - Алма-Ата,1978. - С. 55-57.

83. Оливери С.А. Опыт применения РНФ в лабораторной диагностике кишечных инфекций / С.А. Оливери, М.А. Коростелева, Н.Г. Кострицкий // Кишечные инфекции, главным образом, дизентерия: Материалы итоговой научно-практической конф. - Киев, 1962. - С. 20-21.

84. Омельченко В.Д. Зерна, поврежденные и испорченные микроорганизмами и самосогреванием как критерий санитарно-гигиенического состояния пшеницы и кукурузы / В.Д. Омельченко // Автореф. дисс. ... канд. техн. наук. - М., 1991. - 19 с.

85. Орловский В.И. Развитие микрофлоры в желудочно-кишечном тракте морских свинок. / В.И. Орловский, И.А. Бочков // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунол. -1973. - № 8. - С.141-142.

86. Островская З.С. Диагностика брюшного тифа у больных с помощью РНФ / З.С. Островская // Аннотация научной работы АМН СССР. - 1956. - С. 57-59.

87. Павлова И.П. Изучение морфологии и биологических свойств фагов Вас.

anthracis и Вас. cereus / И.П. Павлова // ЖМЭИ. - 1971. - № 7. - 147 с.

88. Павлова И.П. Вопросы эффективности противосибиреязвенных мероприятий / И.П. Павлова, К.Н. Полянская // Матер. IX пленар. засед. межведомственной комиссии по борьбе с сибирской язвой. - М., 1974. - С. 131132.

89. Пельц О.В. Гигиеническая оценка контаминации муки возбудителями картофельной болезни / О.В. Пельц, Е.Я. Долгушина, H.H. Аксенова, JI.M. Ковалева, Е.В. Костюкова //Медицина в Кузбассе, спецвыпуск. - 2003, №5. -С.74-75.

90. Петрова J1.H. Дифференциране на культури от род Bacillus изолирани от местних полуконсервов / JI.H. Петрова // Ветеринарно-мед. науки. - 1975. - № 8. -12 с.

91. Пивоваров Ю.А. Распространение Bacillus cereus во внешней среде / Ю.А. Пивоваров, P.C. Волкова, В.В. Шелакова // Актуальные вопросы гигиены -Москва, 1970.-С.98-103.

92. Погодаева А.Я. Микрофлора, вызывающая порчу консервированных компотов и фруктово-ягодных соков из местного сырья / А.Я. Погодаева, Ч.Я. Овруцкая // Физиология и биохимия микробов. - Минск: Наука и техника, 1970. -С.116-120.

93. Поддубный Ф.Н. Изучение специфичности и чувствительности РНТФ при индикации дизентерийных бактерий в воде / Ф.Н. Поддубный // ЖМЭИ. -1962. -№1. - С.29-31.

94. Пожарникова E.H. Выделение и изучение биологических свойств бактериофагов рода Enterobacter, конструирование на их основе биопрепарата и разработка параметров практического применения / E.H. Пожарникова // Автореф. дис. канд. биол. наук.-Саратов, 2006.-С.4-19.

95. Понявин Б.Я. Изучение реакции нарастания титра фага в условиях практической лаборатории / Б.Я. Понявин // ЖМЭИ. - 1960. - № 6. -135 с.

96. Покровский В.И. Энтеробактерии. / В.И. Покровский // М.: Медицина, 1985.-С.400-404.

97. Полховский В.А. Реакция агглютинации как метод серологической дифференциации Bacillus cereus II В.А. Полховский // Докл. АН БССР. - 196711. - № 5. - С.436-438.

98. Полховский В.А. Биохимические типы Bacillus cereus, выделенных из различных природных источников / В.А. Полховский // Журн. микробиол., №2, 1970.-С.82-86.

99. Полховский В.А. Нуклеотидный состав ДНК аэробных спорообразующих бактерий. В кн.: Вопросы инфекционной и неинфекционной патологии / В.А. Полховский // Ташкент -1975 - С.183-185.

100. Пульчеровская Л.П. Выделение и изучение основных биологических свойств бактериофагов Citrobacter и их применение в диагностике / Л.П. Пульчеровская // Автореф. дис. канд. биол. наук. Саратов, 2004. - 21 с.

101. Пучкова Л.И. Технология хлеба / Л.И. Пучкова, Р.Д. Поландова, И.В. Матвеева // СПб.: ГИОРД, - 2005.

102. Раутенштейн Я.И. О применении специфических фагов для дифференциации энтомопатогенных бактерий, относящихся к Bac.thuringiensis / Я.И. Раутенштейн, Д.Г. Талалаева, Т.П. Блохина и др. // Микробиология. - 1975. -44. -№ 6. - С.1081-1085.

103. Ревенко И.П. К диагностике рожи свиней / И.П. Ревенко // Ветеринария. -1970. -№6.-13 с.

104. Ревенко И.П. Бактериофаги и их использование в ветеринарной практике / И.П. Ревенко // Киев: Урожай, 1978. - С. 41-88.

105. Резник С.Р. Дополнительный подход к дифференциации споровых бактерий Вас. subtilis и Вас. cereus / С.Р. Резник, И.Б. Сорокулова, А.Ф. Качан // Микробиол. журн. - 1978. - 40. - № 4. - С.448-453.

106. Рубашкина Б.К. Применение метода нарастания титра фага для исследования объектов внешней среды / Б.К. Рубашкина, С.Ф. Казакова // ЖМЭИ. -1959. - №6. - С. 110-112.

107. Русалеев B.C. Фагочувствительность консервированных культур Bacillus

anthracis / B.C. Русалеев // Ветеринария. - 1990. - №9. - 39 с.

108. Русалеев B.C. Фагочувствительность аэробных спорообразующих бактерий / B.C. Русалеев // Ветеринария. - 1990. - №8. - С.29-30.

109. Сергиенко Ф.Е. Новый метод бактерюлопчно д1агностики за допомогою бактерюфага / Ф.Е. Сергиенко // Мпсробюл. журн. АН УССР. - 1936. - №1. - С. 85-112.

110. Смирнов В.В. Спорообразующие аэробные бактерии - продуценты биологически активных веществ / В.В. Смирнов, С.Р. Резник, И.А. Василевская // Киев: Наукова Думка, 1982. - С.117-120.

111. Стронговская Н.В. Сравнительное изучение РНФ для выявления носительства дизентерийных бактерий / Н.В. Стронговская // Автореф. дис. канд. мед. наук. - Симферополь, 1964. - С.6-20.

112. Тимаков В.Д. Экспериментальное обоснование нового принципа обнаружения дизентерийных и брюшнотифозных бактерий с помощью фага / В.Д. Тимаков, Гольдфарб Д.М. // ЖМЭИ. - 1956. - № 10. - С. 3-7.

113. Тимаков В.Д. Об условиях взаимодействия фага и бактериальной клетки / В.Д. Тимаков, Гольдфарб Д.М. // Вестник АМН СССР. - 1958. - № 2. - 37 с.

114. Тимаков В.Д. Реакция нарастания титра фага (РНФ) / В.Д. Тимаков, Гольдфарб Д.М. // М., 1962. - С. 65-71.

115. Тихоненко A.C. Ультраструктура вирусов бактерий / Тихоненко A.C. // М.: Наука, 1968. - 89 с.

116. Топчий М.П. Применение препаратов из живых культур сенной палочки при дисбактериозах у телят / М.П. Топчий // Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Минск, 1979.-21 с.

117. Турова Т.П. Физиология и молекулярная биология болезнетворных микроорганизмов / Т.П. Турова, Н.Б. Бакалдина // Сб. науч. тр. - Горький, 1988. - С.4-8.

118. Феоктистова H.A. Бактерии вида Bacillus mesentericus - возбудители пищевых отравлений / Д.А. Васильев, H.A. Феоктистова, М.А. Юдина //

Материалы III Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» 23-26 ноября 2010 года. - Ульяновск, 2010. - Т.З. - С.82-85.

119. Феоктистова Н.А Литическая активность бактериофагов Bacillus cereus / H.A. Феоктистова, А.И. Калдыркаев, Д.А. Васильев // Материалы Ш Международной научно-практической конференции молодых ученых «Молодежь и наука XXI века» 23-26 ноября 2010 года. - Ульяновск, 2010. - Т.З.

- С.70-72.

120. Феоктистова H.A. Разработка фаговых препаратов индикации и идентификации бактерий рода Bacillus в пищевом сырье и продуктах питания / Д.А. Васильев, А.Х. Мустафин, А.И. Калдыркаев // Материалы Всероссийского симпозиума с международным участием «Биологически активные вещества микроорганизмов прошлое, настоящее, будущее», посвященного 90-летию Заслуженного профессора Московского университета Н.С. Егорова 27-29 января 2011 года. - Москва, 2011. - 86 с.

121. Хейс У. Генетика бактерий и бактериофагов / Хейс У. // М.: Мир, 1965. -С.288-294.

122. Цветков К.И. Применение специфического фактериофага для диагностики паратифозного аборта кобыл / К.И. Цветков // Ветеринария. - 1941.

- № 6.-С. 4-6.

123. Чинашвили Т.Г. К механизму образования фагоустойчивых форм микроорганизмов / Т.Г. Чанишвили //В кн.: Вопросы молекулярной генетики микроорганизмов. - М.,1968. - 225 с.

124. Чиракадзе Л.Г. Типирование Salmonella typhimurium при помощи селекционированных фагов / Л.Г. Чиракадзе, Т.Г. Чанишвили // ЖМЭИ. - 1974. -№3.-С. 72-78.

125. Шантаренко И.В. Изучение РНФ как метода индикации бактерий дизентерии во внешней среде / И.В. Шантаренко // Тез. докл. и выступл. на 5 Всес. научн. конф. по санитарн. микробиол. - М.,1962. - С. 89-93.

126. Шляхов Э.Н. Сибирская язва (очерки эпидемиологии, лабораторной диагностики и профилактики) / Э.Н. Шляхов, Е.В. Груз, В.И. Прискарь // Кишинев, 1975. - 162 с.

127. Щеглова М.К. Некоторые свойства листериозного бактериофага / М.К. Щеглова//ЖМЭИ.- 1962.-№ 1.-С. 99-102.

128. Ahmed R. Bacillus cereus Phage Typing as an Epidemiological Tool in Outbreaks of Food Poisoning / R. Ahmed, P. Sankar-mistry, S. Jackson, H. Ackermann and S. Kasatiya // Journal of clinical microbiology, Mar. 1995. -

P. 636-640.

129. Baijac H. Mise au point sur la classification des Bacillus thuringiensis / H. Baijac // - Entomophaga, 1973. - V. 18. - N 1. - P.5-17.

130. Baijac H. Interet de certains criteres biochemiques supplémentaires pour la classification des souches de Bacillus / H. Baijac // - Ann. Microbiol., 1975. - V. 126. -N 1.-P.83-95.

131. Bergey's manual of determinative bacteriology. - 8 ed. - Baltimore: Williams and Wilkins Co. 1974. - P.1258.

132. Boeye A. Numerical taxonomy of Bacillus isolates from North Sea sediments / A. Boeya // Int. J. Syst. Bacteriol., 1976. - 26. -N 4. - P.427-441.

133. Bonde G. The genus Bacillus. An experiment with cluster analysis / G. Bonde//Dan. Med. Bull., 1975.-V.22.-N2.-P.41-61.

134. Brison F. Les queiques Bacillus isoles en nur Mediterranee / F. Brison // Rev. cytol. ei. biol.veg. Bol. 1978,1, N 4. -P.405-412.

135. Brown E. Specific identification of Bacillus anthracis by mean of a variant bacteriophage / E. Brown // J. infect. Dis. - 1955. - V.96. - № 1. -

P.34-39.

136. Brown E. Specific identification of Bacillus / E. Brown // J.Bact. - 1955. -V.69. - № 5. -P.590-602.

137. Candel A. Sensitivity to lytic agents and DNA base composition of several aerobic spore-bearing bacilli / A. Candel // Zbl. Bacteriol. Parasitenk., Infektionskrankh. undHyg, Abt. 2,1978. - V.133. -N 3. -P.250-260.

138. Clark R Speculations on the incidence of anthrax in bovines / R. Clark // J.S. Afr. vet. med. Assoc. -1938. - V.9. - P.5-12.

139. Costlow R. Studies on the lysis and formation of protoplasts / R. Costlow // Bact.proc.-1961.-P.83.

140. Cotter P. A. Bordetella / P. A. Cotter, J. F. Miller // Principles of Bacterial Pathogenesis. Academic Press, San Diego. - 2001. - P. 619-674.

141. Delia S. Yersinia enterocolitica in carni fresche ed insaccate / S. Delia // Ann. ig.: Med prev comunita. - 1989. - №6. - P.1459-1464.

142. Dominici S. Identificazion rapida del B. cereus mediante immunofluoreszenza / S. Dominici // Atti. Soc. ital. sei. vet., 1972. - V.25. - P.418-421.

143. Durand M. Nutrition carbonee et etude taxonomique de Bacillus subtilis et. B. licheniformis / M. Durand // Can. J. Microbiol., 1979. - V.24. - N 4. - P.491-498.

144. Dorset M. Remarks on "hog flu." / M. Dorset, C. N. McBiyde, W. B. Niles // J. Am. Vet. Med. Assoc, 1922. - N62.-P. 162-171.

145. Gibson T. Genus Basilius «Bergeyis manual of determinative bacteriology» / T. Gibson // Baltimore, 1974. - P.529-550.

146. Gordon R. The genus Bacillus / R. Gordon // In: Handb. Microbiol. Cleveland (Ohio), 1973. - V.l. - P.71-88.

147. Hooper P.T. Mycoplasma polyarthritis in a cat with probable severe immune deficiency / P.T. Hooper, L.A. Ireland, A.H. Carter // Vet. J. -1985. - N 62. - P.352.

148. Isenberg H. D. Clinical microbiology procedures handbook / H. D. Isenberg // American Society for Microbiology, Washington, D.C, - 1992.

149. Katsaras K. Untersuchungen über saurelosliche Antigene an verschiedenen Stammen der Gattung Bacillus / K. Katsaras II Berlin und München, tierartzl. Wochenschr., 1979. - V.92. - N 12. - P.243-247.

150. Katzheson H. Rapid phage plague count method for the detection of bacteria

as applied to the demonsration of internalug borne bacterial infections of seed / KatzhesonH. //J. Bact. - 1951. - №1. - P.689.

151. Kundrat W. Zur Differenzierung aerober Sporenbildner (Genus Bacillus Cohn) / W. Kundrat IIZbl. Veterinarmed, 1963. -B.10. -N 5. -P.418-426.

152. Levintal C. Structural developmet of a bacteriae virus II Biochim. Biophys. Acta / C. Levintal //1952. - №4. - V.9. - P.419.

153. Lemille F. Essai sur la classification biochimique de 97 Bacillus du groupe I / F. Lemille II Ann. Inst. Past, 1969. - V.l 16. -N 6. - P.808-819.

154. Mattoo S.N. Molecular pathogenesis, epidemiology, and clinical manifestations of respiratory infections due to Bordetella pertussis and other Bordetella subspecies / S.N. Mattoo, J. D. Cherry // Clinical Microbiology Reviews. -2005. -N 18(2). - P. 326-382.

155. Mercier P. Bactériologie du sperme frais de larin: Etude préliminaire / Mercier P. // Prod. anim. - 1990. - №3. - P. 215-221.

156. Mastroeni P. Immunoelectrophoretic analysis of surface antigens in vegetative cells and spores of Bacillus cereus / P. Mastroeni // G. bacterid, virol. et immunol, 1974. - V.67. - N 7-12. - P. 180-184.

157. Sechter I. Metodika de cercetare a prezentei bacilului tifis in materufacale ajutorole bacterofagului / I. Sechter // V. Academje RPSH Filialr Vasi Studii si cercetari Stintifie. Ann. - 1962. - №3 - 4. - V.4. - P.99.