Пронуклеозидные ингибиторы репликации ВИЧ и вируса герпеса: стабильность и превращения в культурах клеток и в животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат химических наук Карпенко, Инна Леонидовна

• Карпенко, Инна Леонидовна
• кандидат химических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат химических наук Карпенко, Инна Леонидовна

Список сокращений.

Введение.В

Обзор литературы

I. Депо-формы модифицированных нуклеозидов - ингибиторов репликации ВИЧ.

Производные цикло 5 '-О-карбоксикислот.

Производные бицикламкарбоксикислоты AZT.

Производные L-сминокислот.

5'-О-производные на основе алифатических жирных кислот.

5 '-О-(со-гидроксиалкил) производные AZT и ЗТС.

И. Модифицированные по фосфатному остатку аналоги нуклеотидов как депо формы аналогов нуклеозидов и соответствующих 5'-монофосфатов.

Депо-формы AZTMP с транспортерными заместителями.

Конъюгаты аналогов dNMP на основе эфиров э/сирных кислот.

Депо-формы на основе PFA-коныогатов.

Депо-формы на основе фосфодиамидов.

Депо-формы на основе фосфотриэфиров.

Депо-формы на основе фосфоамидатов.

5 '-Н-фосфонаты модифицированных нуклеозидов.

S'-F-фосфат AZT.

Депо-формы FLT.

Депо-формы нуклеотидов на основе bis-POM и сталогичныхмаскирующих групп.

Депо-формы hú основе тиазамещенных маскирующих групп.

Депо-формы на основе арилоксифосфоамидсипов (РРА).

Депо-формы на основе циклосалигениловых (cycloSal) производных.

III. Депо-формы фосфонатных аналогов ациклических нуклеозидов.

Депо-форма РМЕА на основе моно- и ди-(алкил- и арил-)эфиров.

Депо-формы ациклических нуклеотидов на основе bis(POM) и bis(POC) производных.

РРА депо-формы ациклических нуклеотидов.

IV. Депо-формы ациклических аналогов гуанозина, обладающие анти-HSV активностью.

Bis (SATE) депо-формы ациклических аналогов гуанозина.

CycloSal депо-формы ациклических аналогов гуанозина.

РРА- производные.

Депо-формы ACVua основе фосфолипидов.

Депо-формы GCV.

V. Пути метаболизма депо-форм модифицированных нуклеозидов и нуклеотидов.

Материалы и методы

Реактивы и препараты.

Клеточные культур.

Приборы и методы анализа.

Определения гидролитической стабильности.

Изучение метаболизма [б- HJ-HpAZT и [б- Щ-AZTua культуре клеток.

Изучение метаболизма [8-3H]-HpACVна культуре клеток.

Изучение превращений TEDU и его производных в культуре клеток.

Изучение накопления и превращения [б- H]-HpAZT и б-3 HJ-AZT на животных. р. Превращение производных TEDUв органах мыши.

Статистическая обработка результатов измерений.

Результаты и обсуждение

I. Стабильность и превращения HpAZT.

Стабильность [б-3И]-HpAZT в PBS, сыворотке крови человека, кулътуральной среде, лизате клеток и гомогенсипе печени мышей.

Метаболизм [б-3И]-HpAZT в культуре клеток HL-60.

Определение кинетических параметров реакции гидролиза

Ч> HpAZT и AZTMP катализируемого 5 '-нуклеотидазой.

Превращения [6-3Ii]-HpAZT в крови и органах мыши.

Преврагцеиия HpAZT в крови кролика.

И. Стабильность и метаболизм фосфонатных эфиров ACV.

Определение антивирусной активности, гидролитической стабильности и направления химического и ферментативного гидролиза.

Метаболизм [8-3Н]-НрАCV в культуре клеток Vero.

Определение кинетических параметров реакции гидролиза

ACVMP и HpACV, катализируемого 5'нуклеотидазой.

III. Метаболизм 5'-фосфатных производных 4'-тио-5-этил-2'-дезоксиуридина.

Антивирусная активность, стабильность и возможные пути метаболизма 4'-тио-5-этил-2'-дезоксиуридина и его эфиров.

Метаболизм 5 '-этоксикарбонилфосфоната TEDU в культуре клеток Vero, инфицированных HSV-1.

Превращения 5 '-этоксикарбонилфосфоната TEDU in vivo.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Пронуклеозидные ингибиторы репликации ВИЧ и вируса герпеса: стабильность и превращения в культурах клеток и в животных»

Дизайн антивирусных препаратов основывается на создании соединений, способных воздействовать на различные стадии развития вируса. Основными требованиями являются высокая эффективность, низкая токсичность соединений и медленное развитие резистентности к препарату. Успех в создании антивирусных препаратов зависит от накопления информации о строении, «жизненном цикле» вируса, стадий его репликации, а также от информации об эффективности проникновения препарата, механизме его действия, метаболизме и катаболизме [2].

Соединения, проявляющие антивирусную активность, можно разделить на несколько групп в соответствии с механизмом действия. Первая группа состоит из аналогов нуклеозидов и нуклеотидов. После фосфорилирования вирусными нуклеозид- и нуклеотидкиназами до трифосфатов они становятся субстратами обратных транскриптаз или ДНК-полимераз вирусов и включаются в качестве терминаторных субстратов в вирусную ДНК, прерывая ее дальнейший синтез [3,4].

Вторая группа включает соединения ненуклеозидной природы, для которых характерно "несубстратное" связывание с вирусными ферментами, участвующими в репликации вирусов, и ингибирование фермента за счет изменения конформации егоактивного центра. К третьей группе соединений можно отнести ингибиторы рецепторов клеточной мембраны, обеспечивающие узнавание и проникновение вируса в клетку. Дизайн этой группы соединений основан на структурной гомологии препарата с соответствующими белками вируса. Четвертая группа включает ингибиторы вирусной протеазы, созданные на основе соединений пептидной природы [1,2].

Основной мишенью при создании анти-ВИЧ препаратов является обратная транскриптаза (ОТ) ВИЧ, ключевой фермент, участвующий в репликации вируса. [4,5]. На рисунке 1 представлены модифицированные нуклеозиды, ингибиторы ОТ ВИЧ, применяемые в клинике для лечения ВИЧ инфицированных людей: 3'-азидо2'3'-дидезокситимидин (AZT, зидовудин, Retrovir™); 2',3'-дидезоксицитидин (ddC, залцитабин, Hivid™); 2'3'-дегидро-3'-дезокситимидин (сЦТ, ставудин, Zerit™); 2',3'-дидезокси-З'-тиацитидин (ЗТС, ламивудин, Epivir'™); 2',3'-дидезоксиинозин (ddl, диданозин, Videx™); (И1,48)-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-циклопентен-1-метанол (ABC, абакавир, Ziagen™) [6].сн,.чоI 4NHлN ОНОNiAZTRH,г»**'110о' VddCи^ ЛY NHLan' -оно"КW4,ТNHjО'' "N"L<--------n"N' "Г-Oil HQ.О.

Г'>—ira1 I.H)NпоэтеddlABCРис. 1Несмотря на достаточно высокую эффективность препаратов (особенно при одновременном применении нескольких препаратов, "коктейлей"), все аналоги нуклеозидов имеют ряд существенных недостатков. В частности, это высокая токсичность и короткое время выведения препарата, требующее частого введения препарата. Кроме того, после долговременного применения препаратов развитие инфекции становится неконтролируемым изгза возникновения резистентных вариантов вируса [5,7].

Все препараты нуклеозидной природы после проникновения в клетки должны пройти каскад фосфорилирования до соответствующих 5'-трифосфатов, чтобы стать субстратами обратной транскриптазы вируса и включиться в З'-конец растущей вирусной ДНК. Эффективность препарата определяется эффективностью фосфорилирования клеточными^ киназами и взаимодействием с ОТ вируса. Скорость образования фосфорилированныхформ аналогов нуклеозидов зависит от структуры аналога [6]. Так, первая стадия фосфорилирования кТХ, первого утвержденного для клинического применения анти-ВИЧ препарата, проходит • со скоростью, равной скорости фосфорилирования природных нуклеозидов, в то время как скорость второй стадии составляет примерно 0,3% по сравнению с фосфорилированием природного сПЧМР. При фосфорилировании с14Т наблюдается обратная ситуация: наиболее медленной и малоэффективной стадией► ■является первая стадия образования сЦТМР, в то время как вторая стадия фосфорилирования до с14ТВР высоко эффективна. Накопление AZTMP в клетках является одной из причин токсичности препарата: АЕТМР ингибирует клеточные тимидин- и тимидилаткиназы, что приводит к дисбалансу в соотношениях сГЫТР, понижает активность некоторых клеточных ферментов, включая 3'—5' экзонуклеазу, играющую важную роль в репарации ДНК [8, 9]. Кроме того, токсичность К1Х связана с образованием одного из метаболитов AZT в печени, а именно З'-аминотимидина [10, 11, 12]. Короткое время жизни AZT в организме определяется быстрым образованием впечени его метаболита - 5'-глюкоронида азидотимидина, который выводится из организма с мочой [13].

Для улучшения терапевтических характеристик препаратов нуклеозидной природы была выработана стратегия создания депо-форм нуклеозидов (пронуклеозиды) или нуклеотидов (пронуклеотиды) [2]. Депо-формы - это фармакологически неактивные соединения, претерпевающие после проникновения в клетки химическую или ферментативную трансформацию с образованием фармакологически активной формы, Депо-формы аналогов.нуклеозидов должны иметь высокую антивирусную активность при низкой токсичности, улучшенные биодоступность и фармакокинетические характеристики, а также пролонгированное действие по сравнению с соответствующими аналогами нуклеозидов. Дизайн депо-форм нуклеотидов (пронуклеотиды) направлен на создание таких форм аналогов (ШМР, которые должны быть стабильны в плазме крови, но после проникновения в клетки химически или ферментативно превращаться в аналоги ёКМРэ. Такой подход позволит сократить путь превращения аналога нуклеозида в соответствующий сНМТР и избежать первой, наиболее неэффективной стадии кинирования для большинства аналогов нуклеозидов. Применение 5'-монофосфатов аналогов нуклеозидов невозможно из-за их высокой лабильности в плазме крови и низкой способности заряженных соединений к проникновению в клетку. В разделах 1.1 и 2.1-2.10 будут рассмотрены подходы к созданию депо-форм аналогов нуклеозидов (пронуклеозидов), а в разделе 2.11-2.14 депо-форм аналогов нуклеотидов (пронуклеотидов). В разделах 3 и 4 рассматриваются возможные депо-формы ациклических аналогов нуклеотидов и нуклеозидов. В разделе 5 рассмотрены пути метаболизма некоторых существующих антивирусных препаратов и их депо-форм.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Карпенко, Инна Леонидовна

выводы.

1. С использованием радиоактивно меченого 5'-[6-3Н]-фосфоната З'-азидо 2',3'-дидезокситимидина (HpAZT) показано, что препарат является депо-формой З'-азидо-2',3'-дидезокситимидина (AZT) в культуре клеток и на животных моделях. a) Найдено, что скорость накопления 5'-монофосфата 3'-азидо-2',3'-дидезокситимидина (AZTMP) в клетках HL-60 при инкубации с HpAZT ниже, чем при инкубации с AZT, что может объяснять пониженую токсичность HpAZT in vitro по сравнению с AZT. Определены значения Кт и kCat для реакций гидролиза AZTMP и HpAZT 5'-нуклеотидазой из Crotcilus atrox venom. b) Скорость накопления AZT и AZTMP в крови и органах мыши при различных методах введения HpAZT ниже, чем при введении AZT, что может являться одной из причин понижения клинической токсичности препарата. c) Показано различие динамики накопления AZT в крови кролика при пероральном введении

6-H]-AZT или [6- H]-HpAZT. Десятикратное увеличение дозы [6- H]-AZT или [6-3H]-HpAZT не изменяет скорости накопления AZT в крови и не влияет на относительную долю образующегося AZT.

2. Определены стабильность и направления гидролиза серии фосфонатных эфиров ацикловира, проявляющих антигерпетическую активность in vitro. Показано, что эфиры фосфоната и фосфоноформиата 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанина (ACV) являются депо-формами ACV и найдена корреляция между стабильностью соединений в сыворотке крови и их антивирусной активностью. Определены значения К,„ и kcal реакций гидролиза монофосфата 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанина (ACVMP) и Н-фосфоната 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанина (HpACV), катализируемого 5'-нуклеотидазой из Crotalus atrox venom. С использованием радиоактивно меченого [8-3Н]-фосфонат 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]гуанина (HpACV) показано, что соединение не эффективно в качестве депо-формы ACV в культуре клеток Vero, что может объяснять значительное понижение его антигерпетической активности. Определены стабильность и направления гидролиза серии эфиров 4'-тио-5-этил-2'-дезоксиуридина (TEDU), проявляющих антигерпетическую активность. Изучение превращений 5'-этоксикарбонилфосфоната TEDU показало, что соединение является депо-формой TEDU и позволяет снизить токсичность препарата in vivo.

БЛАГОДАРНОСТИ

Я выражаю самую искреннею благодарность М.К Кухановой за руководство при выполнении работы и терпение при редактировании текста диссертации, Ю.С Скоблову за консультативную помощь при выполнении работы и участие в критическом обсуждении результатов, В.Л Андроновой за многолетнее участие в совместной работе. М.В. Ясько за критические замечания по ходу работы и при совместном написании статей. Я очень признательна А.Л. Хандажинской, Л.А. Александровой, А.Р. Хомутову и другим сотрудникам ЛХБА за доброе отношение и готовность помочь.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Карпенко, Инна Леонидовна, 2006 год

1. De Clercq Е. Antiviral drugs: current state of the art., J. Clin.Vir. 2001, 22, 73-89.

2. De Clercq E; Strategies in the design of antiviral drugs., Nature Reviews/Drug Discovery, 2002, 1,13-25.

3. Sommadossi J-P. Nucleoside analogs: Similarities and Differences., AIDS, 1993, 16 (Suppl 1), S7-15.

4. De Clercq E. HIV Inhibitors targed at the Reverse Transcriptase., AIDS Research and Human Retroviruses, 1992, 8(2), 119-34.

5. Kukhanova M., Krayevsky A., Prussof W., Cheng Y-C., Design of Anti-Hiv Compounds: From Nucleoside to Nucleoside 5Triphosphate Analogsm., Problems and Perspectives Current Pharmaceutical Design, 2000, 6, 585-98.

6. Jones R.J., Bischofberger N., Minireview: nucleotide prodrugs, Antiviral Res., 1995, 27(1-2), 1-17.

7. Kukhanova M.K. and Shirokova E.A. 5'-0-Modified Nucleoside Analogues as Prodrugs of Anti-HIV Agents., Frontiers in Nucleosides and Nucleic Acids, Ed. Shinazi R. F. and Liotta D. C„ IHL Press, 2004, 341-63.

8. Zhou X.J., Sommadossi J.P., Comparative pharmacokinetics of zidovudine and its toxic catabolite 3'-amino-3'-deoxythymidme in HIV-infected patients., AIDS Res Hum Retroviruses. 1996,12(3), 229-33.

9. Eagling V.A., Howe J.L., Barry M.J., Back DJ.; The metabolism of zidovudine by human liver microsomes in vitro: formation of 3'-amino-3'-deoxythymidine., Biochem Pharmacol. 1994, 19,48(2), 267-76

10. Zimmerman T.P., Domin B.A., Mahony W.B., Inhibition of thymidine transport by 3'-azido-3'-deoxythymidine and its metabolites., Oncol Res., 1993, 5(12), 483-7

11. Cretonn E.M., Schinazi R.F., McClure M.F., Anderson D.C., Sommadossi J.-P., Pharmacokinetics of 3'-Azido-3'-Deoxythymidine and Its Catabolites and Interactions with Probenecid in Rhesus Monkeys., Antimicrob. Agents. Chemother., 1991, 35, 5, 801-807.

12. Parang K., Wiebe L.I., Knaus E.E., Novel approaches for design 5'-0-Ester Prodrugsof 3'-azido-2'3'-dideoxythymidine., Current Medicinal Chemistry, 2000,1, 995-1036.

13. Wiebe L.I., Knaus E.E., Concepts for the design of anti-HIV nucleoside prodrugs for treating cephalic HIV infection., Adv Drug Deliv Rev., 1999, 39(1-3), 63-80.

14. Sharma A.P., Ollapally A. P., Lee H., Synthesis and anti-HIV activity of prodrugs of azidothymidine., Antiviral Chem. Chemother., 1993, 4, 93-96

15. Balagopala M.L., Ollapally A.P., Lee H.J., Synthesis and anti-HIV activity of steroidal prodrugs of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT)., Cell Mol. Biol., 1995, 41, (Suppl 1), Sl-7.

16. Kozak SL, Heard JM, Kabat D. Segregation of CD4 and CXCR4 into distinct lipid microdomains in T lymphocytes suggests a mechanism for membrane destabilization by human immunodeficiency virus., J Virol. 2002, 76(4), 1802-15.

17. Markovic I, Clouse KA.Recent advances in understanding the molecular mechanisms of HIV-1 entry and fusion: revisiting current targets and considering new options for therapeutic intervention., Curr HIV Res., 2004,2(3), 223-34.

18. Dessolin J., Galea P., Vlieghe P., Chermann J.-C., and Kraus J.-L., New Bicyclam-AZT Conjugates: Design, Synthesis, Anti-HIV Evaluation, and Their Interaction with CXCR-4 Coreceptor., J. Med. Chem., 1999, 42,229-241

19. Lupia R.H., Ferencz N., Lertora J.J., Aggarwal S.K., George W.J., Agrawal K.C., Comparative pharmacokinetics of two prodrugs of zidovudine in rabbits: enhanced levels of zidovudine in brain tissue., Antimicrob. Agents Chemother. 1993, 37(4), 818 -24.

20. Aggarwal S.K., Gogu S.R., Rangan S.R.S., Agrawal K.C., Synthesis and biological evaluation of prodrugs of zidovudine., J.Med.Chem., 1990, 33, 1505-10.

21. Turk G., Moroni G., Pampuro S., Brinon M.C., Salomon H., Ahtiretroviral activity and cytotoxicity of novel zidovudine (AZT) derivatives and the relation to their chemical structure., International Journal of Antimicrobial Agents, 2002, 20, 282-288.

22. Han H.K., Oh D.M., Amidon G.L,. Cellular uptake mechanism of amino acid ester prodrugs in Caco-2/hPEPTl cells overexpressing a human peptide transporter., Pharm Res., 1998,15(9), 1382-6.

23. Torrence P.F., Kinjo J., Khamnei S., Greig N.H., Synthesis and pharmacokinetics of a dihydropyridine chemical delivery system for the antiimmunodeficiency virus agent dideoxycytidine., J. Med. Chem., 1993, 36(5), 529-37.

24. Gogu S.R., Aggarwal S.K., Rangan S.R., Agrawal KC., A pro-drug of zidovudine with enhanced efficacy against human immunodeficiency virus., Biochem Biophys Res Commun., 1989, 160(2), 656-61. Erratum in: Biochem Biophys Res Commun., 1989, 162(3), 1591.

25. Kawaguchi T., Ishikawa K., Seki T., Juni K., Ester prodrugs of zidovudine., J. Pharm. Sci., 1990, 79(6), 531-33.

26. Kawaguchi T., Endoh T., Seki T., Juni K., Plasma concentrations of zidovudine in rats via oral administration of its ester prodrugs., J. Pharm. Sci., 1991, 80(4), 404-05.

27. Parang K., Wiebe L.I., Knaus E.E., Pharmacokinetics and tissue distribution of (+/-)-3-azido-2',3'-dideoxy-5'-0-(2-bromomyristoyl)thymidine, a prodrug of 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine (AZT) in mice., J Pharm Pharmacol., 1998, 50(9), 989-96.

28. Price H. P., Menon M.R., Panethymitaki C., Goulding D., McKean P.G., Smith D.F., Myristoyl-CoA:protein A^-myristoyltransferase, an essential enzyme and potential drug target in kinetoplastid parasites., J.B.C., 2003,278,9,7206-14

29. Hornych A., Oravec S., Girault F., Forette B., Horrobin D.F., The effect of gamma-linolenic acid on plasma and membrane lipids and renal prostaglandin synthesis in older subjects., Bratisl. Lek. Listy., 2002, 103(3), 101-07.

30. Gosselin G., Girardet J.L., Perigaud C„ Benzaria S„ Lefebvre I„ Schlienger N„ Pompon A„ Imbach J.-L., New insights regarding the potential of the pronucleotide approach in antiviral chemotherapy., Acta Biochim. Pol., 1996,43(1), 196-208.

31. Egron D., Lefebvre I., Perigaud C., Beltran T., Pompon A., Gosselin G., Aubertin A.M., Imbach J.-L., Anti-HIV pronucleotides: decomposition pathways and correlation with biological activities., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1998, 8(9), 1045-50.

32. Wagner C.R., Iyer V.V., Mclntee E.J., Pronucleotides: toward the in vivo delivery of antiviral and anticancer nucleotides., Med. Res. Rev., 2000, 20(6), 417-51.

33. Namane A., Gouytte C., Fillion M.-P., Fillion G., Huynh-Dinh T., Improved brain delivery of AZT using a glycosyl phosphotreister prodrug., J.Med. Chem., 1992, 35, 30393044.

34. Hong C.I., Nechaev A., Kirisits A.J., Vig R„ West C.R., Manouilov K.K., Chu C.K., Nucleoside conjugates. 15. Synthesis and biological activity of anti-HIV nucleoside conjugates of ether and thioether phospholipids., J. Med. Chem., 1996, 39(9), 1771-7.

35. Meyer K.L., Marasco CJ.Jr., Morris-Natschke S.L., Ishaq K.S., Piantadosi C., In vitro evaluation of phosphocholine and quaternary ammonium containing lipids as novel anti-HIV agents., J. Med. Chem, 1991,34(4), 1377-83.

36. Hostler K.Y., Stuhmiller L.M., Lenting H.B.M., van den Bosch H., Richman D.D., Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral Nucleosides., J. Biol. Chem., 1990, 265,6112-17.

37. Rosowsky A., Saha J., Fazely F., Koch J., Ruprecht R.M., Inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication by phosphonoformate esters of 3'-azido-3'-deoxythymidine., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1990, 172(1), 288-94.

38. Meier C, Aubertin A.M, de Monte M., Faraj A, Sommadossi J.P., Perigaud C., Imbach J.L.,Gosselin G., Synthesis and antiviral evaluation of SATE-foscarnet prodrugs and new foscarnet-AZT conjugates., Antivir. Chem. Chemother., 1998, 9(1), 41-52.

39. Phelps M.E., Woodmann P.W., Danenberg P.V.,Synthesis and biological activity of 5-fluoro-2'-deoxyuridine -5'-phosphorodiamidates., J. Med. Chem., 1980,23, 1229-32.

40. Shipitsyn A.V., Zakirova N.F., Belanov E.F., Pronyaeva T.R., Fedyuk N.V., Kukhanova M.K., Pokrovsky A.G. Phosphorodiamides as Prodrugs for Antiviral Nucleosides., Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2003, 22(5-8), 963-66.

41. Bodor,N. PCT INT. Appl. October 15, 1992, WO 92/17185, Chem. Abstr., 119, 80205j.

42. McGuigan C, Pathirana RN, Mahmood N, Devine KG, Hay AJ. Aryl phosphate derivatives of AZT retain activity against HIV1 in cell lines which are resistant to the action of AZT. Antiviral Res. 1992, 17(4), 311-21.

43. McGuigan C., Pathirana R.N., Balzarini J., De Clercq E., Intracellular delivery of bioactive AZT nucleotides by aryl phosphate derivatives of AZT., J Med Chem., 1993, 36(8), 1048-52.

44. McGuigan C., Davies M., Pathirana R., Mahmood N., Hay A.J., Synthesis and anti-HIV activity of some novel diaryl phosphate derivatives of AZT., Antiviral Res., 1994, 24(1), 69-77.

45. Devine K.G., McGuigan C., O'Connor T.J., Nicholls S.R., Kinchington D., Novel phosphate derivatives of zidovudine as anti-HIV compounds., AIDS. 1990, 4(4), 371-3.

46. Beltran T., Egron D., Lefebvre I., Perigaud C., Pompon A., Gosselin G., Aubertin A.M., Imbach J.-L., Anti-HIV pronucleotides: SATE versus phenyl as a protecting group of AZT phosphoramidate derivatives., Nucleosides Nucleotides, 1999,18(4-5), 973-5.

47. McGuigan C.,Cahard D., Salgado A., Balzarini J., De Clercq E., J Phosphoramidates as potent prodrugs of anti-HIV nucleotides studies in amino region., Antivir Chem Chemother., 1996, 7,31-36.

48. Mclntee E.J., Remmel R.P., Schinazi R.F., Abraham T.W., Wagner C.R., Probing the mechanism of action and decomposition of amino acid phosphomonoester amidates of antiviral nucleoside prodrugs., J Med Chem., 1997, 40(21), 3323-31.

49. Chang S., Griesgraber G.W., Southern P.J., Wagner C.R., Amino acid phosphoramidate monoesters of 3'-azido-3'-deoxythymidine: relationship between antiviral potency and intracellular metabolism., J. Med. Chem., 2001, 44, 223-31.

50. Song H., Griesgraber G.W., Wagner C.R., Zimmerman C.L., Pharmacokinetics of amino acid phosphoramidate monoesters of zidovudine in rats., Antimicrob Agents Chemother., 2002, 46(5), 1357-63.

51. Song H., Johns R., Griesgraber G.W., Wagner C.R., Zimmerman C.L., Disposition and oral bioavailability in rats of an antiviral and antitumor aminoacid phosphoramidate prodrug of AZT-monophosphate., Pharm Res. 2003,20(3), 448-51.

52. Tarusova N.B., Khorlin A.A., Krayevsky A.A., Korneeva M.N., Nosik D.N., Kxuglov I.V., Galegov G.A., Bibilashvili R.S., Inhibition of HIV reproduction in cell culture by 5'-phosphonates of 3'-azido-2'3'-dideoxynuleoside., Mol.Biol., 1989, 23, 1716-24.

53. Krayevsky A. A., Tarusova N.B., Zhu Q.Y., Vidal P., Chou T.C., Baron P., Polsky B.,

54. Jiang X.J., 5'-Hydrogenphosphonates and 5'-methylhydrogenphosphonates of sugar modified pyrimidine nucleoside'as potential anti-HIV agents., Nucleosides Nucleotides, 1992, 11, 17796.

55. Gosselin G., Perigaud C., Lefebvre I., Pompon A., Aubertin A.M., Kirn A., Szabo T., Stawinski J., Imbach J.-L., 5'-Hydrogenphosphonates nucleoside anti-HIV analoges revisited: controversial mode of action., Antiviral Res., 1993, 22, 143-53.

56. McGuigan C., Bellevergue P., Jones B.C.N.M., Mahmood N., Hay A.J., Petrik J., Karpas A., Alkyl hydrogen phosphonate derivatives of anti-HIV agent AZT may be less toxic than the parent nucleoside analogue., Antivir. Chem. Chemother., 1994, 5(4), 271-77.

57. Boal J.H., Radhakrishnan I.P., Egan W. The 5'-Hydrogen phosphonate analog as a potensial prodrug of 3'-azido-2'3'-dideoxythymidine (AZT)., Nucleosides & Nucleotides, 1993, 12(10), 1075-84.

58. Machado J., Salomon H., Oliveira M., Tsoukas Ch., Krayevsky A.A., Wainberg A.M., Antiviral activity and resistance profile of phosphazid a novel prodrug of AZT., Nucleosides Nucleotides, 1999,18(4-5), 1025-26.

59. Cardona V.M.F., Ayi A.I., Aubertin A.M. and Guegj R., Synthesis and anti-HIV activity of some novel arylphosphate and H-phosphonate derivatives of 3'-azido-2'3'-dideoxythymidine and 2'3'-didehydro-2'3'-dideoxythymidine., Antiviral Res., 1999, 42,18998.

60. Dyatkina N.B., Arzumanov A.A., Kraevsky A.A., O'Hara B., Gluzman Y., Baron P., MacLow C., Polsky B., Synthesis and antiviral activity of some fluorinadate nucleoside derivatives., Nucleoside and Nucleotides, 1994,13, 325-37.

61. Egron D., Arzumanov A.A., Dyatkina N.B., Aubertin A.M., Imbach J.-L., Gosselin G., Kraevsky A.A., Perigaud C., Synthesis, anti-HIV activity, and stability of 5'-phosphorofluoridate derivatives of AZT., Bioorg.Chem., 2001, 29, 333-44.

62. Balzarini J., Baba M., Pouwels R., Herdewijn P., De Clerq E., Anti-retrovirus activity of 3'-fluoro- and 3'-azido-sustituted pyrimidins 2'3'-dideoxynucleotide ahaloges., Biochem. Pharmacol., 1988, 37, 2847-56.

63. McGuigan C., Colin N.M.J., Devine K.G., Nicholls S.R., O'Conner T.J., Kinchington D., Attepts to introduce chemotherapeutic nucleotides into cells: studies on the anti-HIV agent FdT., Bioorg. and Med. Chem. Lett., 1991, 1(12), 729-32.

64. Routledge A., Walker I., Freeman S., Hay A., Mahmood N., Synthesis, bioactivation and anti-HIV activity of 4-acyloxybenzyl bis(nucleosid-5'-yl) phosphates, Nucleosides Nucleotides, 1995, 14, 1545-58.

65. Puech F., Gosselin G, Lefebvre I, Pompon A, Aubertin AM, Kirn A, Imbach JL. Intracellular delivery of nucleoside monophosphates through a reductase-mediated activation process., Antiviral Res., 1993, 22(2-3), 155-74.

66. Schlienger N., Peyrottes S., Aubertin A.M., Gosselin G., Imbach J.-L., Perigaud C,, New series of mixed pronucleotides. Synthesis and anti-HIV activities of mononucleoside phenyl SATE phosphotriesters., Nucleosides Nucleotides, 1999, 18(4-5), 1025-26.

67. Peyrottes S., Gosselin G., Aubertin A.M, Perigaud C., SATE (aryl) phosphotriester series. I. Synthesis and biological evaluation., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids., 2003, 22(5-8), 903-05.

68. Zemlicka, J., Lipophilic phosphoramidates as antivaral pronucleotides, BBA Review, 2002, 1587(2-3), 276-86.

69. Egron D., Perigaud C., Gosselin G., Aubertin A.M., Imbach J.-L., Synthesis and study of a new series of phosphoramidate derivatives as mononucleotide prodrugs., Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 2001,20(4-7), 751-54.

70. Beltran T, Egron D, Pompon A, Lefebvre I, Perigaud C, Gosselin G, Aubertin A, Imbach J. Rational design of a new series of pronucleotide., Bioorg Med Chem Lett. 2001, 11(13), 1775-77.

71. Tobias SC, Borch RF., Synthesis and biological studies of novel nucleoside phosphoramidate prodrugs., J. Med, Chem., 2001, 44(25), 4475-80.

72. Ballatore C., McGuigan C., De Clerq E., Balzarini J. An in situ pig liver esterase assay as a useful predictive tool for the likely in vitro antiviral activity of phosphoramidate pro-drug. Nucleosides Nucleotides, 1999,18(4-5), 971-72.

73. Siddiqui A., McGuigan C., Ballatore C., Srinivasan S., De Clercq E., Balzarini J., Enhancing the aqueous solubility of d4T-based phosphoramidate prodrugs., Bioorg. Med. Chem. Lett., 2000, 10(4), 381-84

74. Egron D, Imbach J.L, Gosselin G, Aubertin A.M., Perigaud C, S-acyl-2-thioethyI phosphoramidate diester derivatives as mononucleotide prodrugs, J Med Chem, 2003, 46(21), 4564-71.

75. Meier C, Lomp A, Meerbach A, Wutzler P, Synthesis, hydrolysis and anti-EBV activity of a series of 3'-modified cycloSal-BVDUMP pronucleotides. Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 2001, 20(4-7), 307-14.

76. Balzarini J, Aquaro S, Rampazzo C, Bianchi V, Perno C.-F, De Clercq E, and Meier Ch. Cyclosaligenyl-2',3'-didehydro-2',3'-dideoxythymidine monophosphate: efficient intracellular delivery of d4TMP, Mol. Pharmacol, 2000, 58(5), 928-35.

77. Lorey M, Meier C, A new cyclyc phosphoramidate d4T prodrug approach cycloAmb-d4T- phosphoramidates, Nucleosides Nucleotides, 1999, 18(4-5), 947-48

78. De Clercq E, Descamps J, De Somer P, Holy A, (S)-9-(2,3-Dihydroxypropyl)adenine: an aliphatic nucleoside analog with broad-spectrum antiviral activity. Science, 1978,200, 5, 4341-49.

79. De Clercq, E., Broad-spectrum anti-DNA virus and anti-retrovirus activity of phosphonylmetoxyalkylpurines and pyrimidenes, Biochemical Pharmacology., 1991, 42(5), 963-72.

80. Oliyai R., Shaw J.-P., Sueko-Lennen C.M., Cundy K.C., Arimilli M.N., Jones R.J., Lee W.A., Aryl ester prodrug of cyclic HPMPC. Physicochemical characterization and in vitro biological stability. Pharmaceutical Research, 1999, 16, 11, 1687-93.

81. Robbins B.L., Greenhaw J., Connelly M.C., Fridland A., Metabolic pathways for activation of th antivaral agent 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine in human lymphoid cells, Antivir. Chem. Chemother., 1995,39(10), 2304-08.

82. Naesens L., Neyts J., Balzarini J., Holy A., Rosenberg I., De Clercq E., Efficacy of oral 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)-2,6-diaminopurine (PMEDAP) in the treatment of retrovirus and cytomegalovirus infections in mice, J Med Virol., 1993, 39(2), 167-72.

83. Ballatore C., McGuigan C., De Clercq E., Balzarini J., Synthesis and evaluation of novel amidate prodrugs of PMEA and PMPA. Bioorg Med Chem Lett., 2001,11(8), 1053-56.

84. Balzarini J, Haller-Meier F, De Clercq E, Meier C. Antiviral activity of cyclosaligenyl prodrugs of acyclovir, carbovir and abacavir, Antivir. Chem. Chemother., 2001, 12(5), 301-06

85. Welch C.J., Larsson A., Ericson A.C., Oberg B., Datema R., Chattopadhyaya J., The chemical synthesis and antiviral properties of an acyclovir-phospholipid conjugate. Acta Chem ScandB. 1985, 39(1), 47-54.

86. Andrei G., Snoek R., Neyts J., Sandvold M.L., Myhren F., De Clercq E., Antiviral activity of ganciclovir eladic acid ester against herpesviruses., Antviral Res., 2000, 45, 157-67.

87. Gao W.Y., Shirasaka T., Johns D.G., Broder S., Mitsuya H., Differential phosphorylation of azidothymidine, dideoxycytidine, and dideoxyinosine in resting and activated peripheral blood mononuclear cells., J Clin. Invest. 1993 May, 91(5), 2326-33.

88. Sidorov G.V., Zverkov Yu. В., Myasoedov N. F., Jasko M. V., Skoblov Yu. S., The synthesis of tritum-labelled 3'-azido~3Teoxythymidine, J. Labelled Comp. Rad., 2003, 46, 1-8.

89. Sidorov G.V., Myasoedov N.F., Yasko M.V., The synthesis of some tritium-labelled terminators of DNA synthesis, J. Labelled Comp. Rad., 1994, 34, 339-51.

90. Галегов Г.А., Шобухов В. М., Леонтьева Н. А., Ясько М.В., Синтез и антигерпетическая активность фосфорных эфиров ацикловира. Биорган. химия, 1997, 23, 906-09.

91. Walker R.T., Whale R.F.,Dyson,M.R., Coe P.L., Alderton W., Collins P., Ertil P., Lowe D., Rahim G.S., Snowden W., Littler E., Antiviral properties of 4'-S-ETDU, Nulceic Acid Res., 1994, 31 (Symp. Ser), 9-10.

92. Dyson M.R., Coe P.L., Walker R.T., The synthesis and antiviral activity of some 4'-thio-2'-deoxynucleoside analogues, J. Med. Chem., 1991, 34,2782-86.

93. Littler E., 2'-Deoxy-5-ethyl-4'thiouridine (4'-S-EtdU). A nucleoside analog with improved antiherpesvirus activity. Abstracts of the 34th ICAAC Meeting, 1994, H53, 205.