Ациклические аналоги пуриновых нуклеозидов - ингибиторы репликации вирусов, вызывающих социально-значимые заболевания тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Закирова Наталья Фанисовна

• Закирова Наталья Фанисовна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Закирова Наталья Фанисовна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность проблемы

1.2. Цели и задачи исследования

1.3. Научная новизна результатов исследования

1.4. Практическая значимость

1.5. Апробация работы

1.6. Структура и объем работы

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Депо-формы нуклеозидов и нуклеотидов как протвовирусные агенты

2.2. Применение «ProTide» - подхода к противовирусным нуклеозидным препаратам

2.3. Применение «ProTide» - подхода к ациклическим нуклеозидным соединениям

2.4. Фосфодиамидатные производные

2.5. Арилфосфорамидатные производные нуклеозидов как

антимикобактериальные агенты

2.6. Примеры создания фосфорамидатных соединений

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Методики к разделу

3.2. Методики к разделу

3.3. Методики к разделу

3.4. Методики к разделу

3.5. Методики к разделу

3.6. Методики к разделу

3.7. Методики к разделу

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Синтез нуклеозидных и нуклеотидных аналогов, содержащих дигидроксипропильный остаток

4.2. Фосфорамидатных производных ацикловира

4.3. Синтез фосфорамидатных производных ненасыщенных ациклических нуклеозидов

4.4. Химическая стабильность

4.5. Противовирусные свойства синтезированных соединений

4.5.1. Ациклические аналоги нуклеозидов и нуклеотидов, содержащие дигидроксипропионовый остаток

4.5.2. Фосфорамидатные производные ACV

4.5.2.1.Исследования анти-HSVактивности in vitro

4.5.2.2.Исследования анти-HIV активности in vitro и ex vivo

5. ВЫВОДЫ

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

7. БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

В настоящй работе используются сокращенные обозначения структурных компонентов нуклеиновых кислот, ряда органических соединений и радикалов, рекомендованные комиссией по номенклатуре Международного союза чистой и прикладной химии (IUPAC) и Международного союза биохимиков (ШВ).

HIV вирус иммунодефицита человека

HSV вирус простого герпеса

VZV вирус Варицелла-Зостер

HBV вирус гепатита В

HCV вирус гепатита С

СПИД синдром приобретенного иммунодефицита

CMV (HCMV) цитомегаловирус

SAH-гидролаза S-аденозил-Z-гомоцистеингидролаза

VV вирус осповакцины

CPV вирус оспы коров

MPV вирус оспы обезьян

HPV вирус папилломы человека

ACV 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]-гуанин, ацикловир

ACV-MP 9-[(2-гидроксиэтокси)метил]-гуанин монофосфат

AZT 3'-дезокси-3'азидотимидин (азидотимидин, Зидовидин)

AZT-MP 3'-дезокси-3'азидотимидин монофосфат

d4T 2',3'-дидегидро-2',3' -дидезокситимидин

3ТС ß-L-2',3'-дидезокси-3'-тиацитидин, ламивудин

BVdU (Е)-5-(2-бромвинил)-2'-дезоксиуридин

BVdU-MP (Е)-5-(2-бромвинил)-2'-дезоксиуридин монофосфат

(S)-HPMPC ^)-1-(3-щдрокси-2-фосфонилметоксипропил)цитзин, сидофовир, Vistide®

5FdU 5-фтор-2'-дезоксиуридин

НРМР 3 -гидрокси-2-фосфонометоксипропил

^)-или (R)-DHPA (S)- или (Я)-9-(2,3-дигидроксипропил)аденин

AHPA 3-(аденин-9ил)-2-гидроксипропионовая кислота

PMEA 9-(2-фосфонилметоксиэтил)-аденин

PMPA ^)-9-(фосфоилметоксипропил)-аденин

PMEG 9-(2-фосфонилметоксиэтил)-гуанин

CPrPMEDAP 9-(2-фосфонилметоксиэтил)-К6-циклопропил-2,6-диаминопурин

ddA 2',3'-дидезоксиаденозин

ABC (Ж^)-4-[2-амино-6-(циклопропиламино)-9Н-пурин-9-ил]-2-

циклопентен-1 -метанол

4'-AzC 4'-азидоцитидин

4'-AzU 4'-азидоуридин

«ProTide»-подход подход для получения депо-форм нуклеотидов на основе создания

арилфосфорамидатных производных нуклеозидов

PBMC мононуклеальные клетки переферической крови

HIV RT обратная транскриптаз вируса иммунодефицита человека

TS тимидилатсинтаза

TK тимидилаткиназа

IC50, EC50, ED50 концентрация, при которой репликация вируса ингибируется на 50% при проведении испытаний в клетках, на ферментах или в тканях, соответственно

CC50 концентрация при которой жизнеспособность вируса

уменьшается на 50 %

IS индекс селективности, CC50/IC50 или CC50/EC50

SE «slow elution», медленно элюирующийся изомер

FE «fast eiution», быстро элюирующийся изомер

DIPEA К,К-диизопропилэтиламин

t-BuMgCl реактив Гриньяра

DMF диметилформамид

Py пиридин

TsCl тозилхлорид

К-HMD S калиевая соль бис-триметилсилиламида (калиевая соль гексаметил- дисилазана)

DCC N,N' -дициклогексилкарбодиимид

TFAA ангидрид трифторуксусной кислоты

ТГФ тетрагидрофуран

^омн. комнатная температура

АНФА ациклические нуклеозидные фосфонатные аналоги

ВЭЖХ высокоэффективная жидкосная хроматография

ЯМР ядерный магнитный резонанс

ТСХ тонкослойная хроматография

t1/2 время гидролиза половины количества вещества

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ациклические аналоги пуриновых нуклеозидов - ингибиторы репликации вирусов, вызывающих социально-значимые заболевания»

1.1. Актуальность проблемы

Рост вирусных инфекций в последние годы остается на высоком уровне, и заметных тенденций к его снижению не отмечается. В течение последних 30 лет был достигнут значительный прогресс в создании новых противовирусных препаратов, но список последних все еще невелик. [1]

Для создания современного противовирусного препарата (в котором обычно принимают участие специалисты различных профилей) требуется всеобъемлющее исследование свойств потенциального лекарства, среди которых можно выделить такие, как оптимизация синтеза соединения, исследование его взаимодействия с физиологической мишенью и преклинические исследования in vitro и in vivo системах.

Однако существует несколько причин, вызывающих трудности в создании противовирусных препаратов. Во-первых, все вирусы являются непременными внутриклеточными паразитами, и каждый шаг жизненного цикла вируса включает и компоненты клетки-хозяина, так что невозможно влиять на развитие вируса без негативного воздействия на последнюю. Во-вторых, клинически важные вирусы зачастую очень опасны и не могут быть должным образом протестированы в связи с отсутствием или недостатками адекватных животных моделей вирусных заболеваний человека. Третий фактор, с которым часто приходится сталкиваться при создании противовирусных препаратов - степень подавления вируса. В идеале, противовирусный препарат должен быть эффективен на 100%, для него не приемлемо частичное ингибирование вируса, но часто, в процессе использования препарата, у вируса возникают различные мутации, которые приводят к потере эффективности действия противовирусного препарата и выработки к нему резистентности. Так, например, в случае HIV принятая терапия в конце 1980-ых начале 1900-ых базировалась на применении одного лекарства (преимущественно зидовудина) или на комбинации двух препаратов (обычно двух ингибиторов вирусной полимеразы). [2] Однако данные противовирусные препараты не эффективны в случае возникновения лекарственно-устойчивых форм вируса, образующихся в результате длительного лечения этими препаратами, что приводит к неконтролируемому развитию вирусной инфекции. [3] Эти обстоятельства делают актуальным поиск новых противовирусных препаратов.

Среди большого разнообразия классов противовирусных препаратов (производные адамантана, синтетические аминокислоты, аналоги пирофосфата, тиосемикарбазоны и другие классы препаратов) особый интерес вызывают нуклеозидные аналоги. Данный класс

препаратов играет важную роль в лечении таких заболеваний как синдром приобретенного иммунодеффицита человека (СПИД), простого герпеса человека (HSV) (как тип 1, так и тип 2), варицелла зостер (VZV) и цитомегаловирусные инфекции (CMV), а также в лечении различных гепатитов (HBV и HCV). Однако терапия препаратами данного класса может быть лимитированна внутриклеточными превращениями до их активной формы -нуклеозидтрифосфата (NTP). При этом часто на проявление противовирусных свойств препарата оказывает влияние именно первая стадия фосфорилирования, приводящая к образованию 5'-монофосфата, соответствующего нуклеозида. Использование 5'-монофосфатов нуклеозидов в клеточных культурах и исследованиях на животных моделях, а тем более в клинических испытаниях невозможно вследствие ограниченности их транспорта в клетки, быстрого гидролиза в межклеточном пространстве и на клеточных стенках различными нуклеазами, а также возможностью проявления ими токсичности. [4,5] Поэтому для улучшения терапевтических характеристик препаратов была разработанна стратегия создания депо-форм как нуклеозидов, так и нуклеотидов.

Депо-форма - это химически модифицированная форма фармакологически активного препарата, претерпевающая после проникновения в клетку химические и/или ферментативные трансформации с высвобождением активного препарата (Рисунок 1.).

Лекарство

; ¡Лекарство! - Модифицирующая

t * t t 4 группа

Y

Депо-форма лекарства

J

.......

; Лекарство;

^ ^ + ^ + ^ ^

+ Модифицирующая группа

Ферментативные и/или химические трансформации

; Лекарство !- Модифицирующая

Депо-форма лекарства

Клеточная мембрана

Рисунок 1. Схематичное изображение концепции создания депо-форм противовирусных препаратов.

Депо-формы аналогов нуклеозидных и нуклеотидных противовирусных препаратов должны иметь высокую антивирусную активность при низкой токсичности, улучшенные биодоступность и фармакинетические характеристики, а также обладать пролонгированным действием в сравнении с исходным противовирусным препаратом.

В обзоре литературы мы рассмотрим один из существующих подходов в создании нуклеозидных депо-форм потенциальных противовирусных препаратов, несущих в своем составе фосфатную или фосфонатную группу.

1.2. Цели и задачи исследования

Цель данного исследования заключается в создании фосфонатов и фосфорамидатов ациклических производных пуриновых нуклеозидов, обладающих потенциальной антивирусной активностью против возбудителей социально-значимых заболеваний (СПИД, герпес и оспа).

В ходе настоящего исследования будут решаться следующие задачи: 1) разработка схемы синтеза оптически активных соединений с заведомо известной конфигурацией при С -2' атоме углерода ((Б)- и (Я)-рядов) и синтез ряда нуклеозидных и нуклеотидных производных на базе полученных соединений; 2) разработка удобного способа получения депо-форм ациклических пуриновых нуклеозидов; 3) исследование химической стабильности синтезированных ациклических нуклеотидных производных и 4) изучение противовирусных свойств и токсичности синтезированных соединений.

1.3. Научная новизна результатов исследования

Разработан подход, позволяющий получать оптически активные соединения (Б)- и (Я)-рядов нуклеозидной и нуклеотидной природы с высокими выходами из коммерчески доступных исходных веществ. Оптимизирована схема получения фосфорамидатных производных АСУ, позволяющая получать целевые соединения с удовлетворительными выходами. Разработаны методы синтеза ациклических ненасыщенных нуклеозидов у которых двойная связь сопряжена с нуклеиновым основанием (аденином или гуанином) и синтезированы их фосфорамидатные аналоги. В рамках выполнения работы было синтезировано и охарактеризовано 29 новых соединений, а также проведены испытания их противовирусной активности.

1.4. Практическая значимость

Полученные в данной работе результаты открывают возможности для создания в будущем новых лекарственных препаратов против социально-значимых заболеваний, в том

числе СПИДа, герпеса и оспы. Кроме этого полученные данные позволяют по-новому оценить применение широко известного противогерпетического препарата ACV.

1.5. Апробация работы

Отдельные части диссертационной работы были представлены на «XIX International Roundtable of Nucleosides, Nucleotides and Nucleic Acids» (France, Lyon, 2010), «XVth Symposium on Chemistry of Nucleic Acid Components» (Prague, Cesky Krumlov, 2011) и Первой Российской конференции по медицинской химии (MedChem Russia - 2013)» (Россия, Москва, 2013).

1.6. Структура и объем работы

Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов и обсуждений и выводов. Материал иллюстрирован 23 таблицами, 29 рисунками и 23 схемами. Список цитированной литературы включает 154 наименования.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Депо-формы нуклеозидов и нуклеотидов как протвовирусные агенты

Нуклеозидные аналоги применяются в противовирусной и противораковой терапии уже более 40 лет. Нуклеозидные аналоги, как правило, являются гидрофильными молекулами и поэтому их способность проходить через клеточную мембрану весьма ограничена. Для проникновения в клетку им требуется опосредованный эндоцитоз, который является активным транспортным механизмом и требует для своей реализации энергии, специфических рецепторов и белков-транспортеров на поверхности клетки. Попадая внутрь клетки, нуклеозидные аналоги должны пройти каскад последовательных реакций фосфорилирования, протекающих под действием как вирусных, так и клеточных киназ, чтобы трансформироваться в активную форму - нуклеозидтрифосфат, который может выступать как конкурентный ингибитор вирусных или клеточных ДНК- или РНК-полимераз, или напротив, в качестве субстрата встраиваться в растущую цепь нуклеиновой кислоты, вызывая ее терминацию. [6] Для большинства нуклеозидных аналогов скорость-лимитирующей стадией является первое фосфорилирование, катализируемое нуклеозидкиназами, приводящее к образованию нуклеозидмонофосфата. Однако многие нуклеозидные аналоги не могут эффективно фосфорилироваться in vivo, вследствие чего снижается их потенциальный терапевтический эффект. Обойти скорость-лимитирующую стадию первого фосфорилирования могло бы способствовать прямое введение нуклеотидов, модифицированных по фосфатному остатку, однако в физиологических условиях нуклеозидмонофосфаты являются заряженными молекулами, что еще более критично сказывается на их способности проникать через клеточные мембраны.

Чтобы обойти все эти недостатки и ограничения была разработана стратегия создания депо-форм. Депо-форма маскирует активное вещество таким образом, что позволяет активному веществу обойти физико-химические, фармакокинетические и фармакодинамические барьеры (такие как плохая растворимость в водных средах, химическая нестабильность, недостаточное проникновение в клетки, быстрый метаболизм и неадекватное распределение по тканям при высвобождении в клетки). Кроме этого депо-формы, как нуклеозидов, так и нуклеотидов должны обладать достаточной стабильностью в биологических жидкостях, но при этом после проникновения в клетки обязаны превращаться в соответствующую активную форму. Поэтому, с целью увеличения терапевтической эффективности, а также для предотвращения выработки резистентности был разработан ряд подходов в создании нейтральных и мембрано-

проницаемых депо-форм нуклеозидных и нуклеотидных аналогов, проявляющих антивирусную активность. [7-11]

Одним из подходов, реализованных при создании депо-форм антивирусных нуклеозидных аналогов, является введение в молекулу активного вещества остатка природной аминокислоты, что положительно влияет на доставку препарата в клетку за счет специфического транспорта L-аминокислот через клеточную мембрану. Данный подход был применен к такому широко известному антигерпетическому препарату как ацикловир (ACV, Zovirax®). Было получено большое количество производных ACV, этерифицированных природными аминокислотами, но наилучшую биодоступность показал валиновый эфир ACV — валацикловир (Valtrex®, Zelitrex®) (Рисунок 2.), который стал широко применяться в лечении HSV- и VZV- инфекций. [12] Позднее данная стратегия создания депо-форм была применена к ганцикловиру (GCV, Cymevene®, Cytovene®) нашедшему широкое применение в лечении гепрпесвирусных и цитомегаловирусных инфекций, но обладающему низкой оральной биодоступностью. [13] Его валиновый эфир - валганцикловир (Valcyte®) обладает лучшей биодоступностью, чем исходный GCV, что положительно сказывается на его использовании как противовирусного препарата (Рисунок 2.). [14] Данный подход был использован также и в отношении бициклического фуро[2,3^]пиримидинового аналога BVdU (Cf1743, BCNA) который является эффективным препаратом в лечении VZV- инфекций. [15] Полученный валиновый эфир Cf1743 - FV-100 является эффективным и селективным противовирусным соединением в лечении VZV-инфекций и в данный момент проходит II стадию клинических испытаний (Рисунок 2.). [16,17]

H,N N

но-

HoN N

HO-

HO

GCV

Cymevene®, Cytovene®

' NH~

HO-

СП 743, ВСЛА БУ-100

Рисунок 2. Примеры депо-форм противовирусных препаратов на основе валинового эфира.

Примером удачной реализации подхода в создании депо-форм лекарственных препаратов является введение в молекулу активного соединения фосфатной или фосфонатной группы, в которых отрицательные заряды «нейтрализованы» посредством введения модифицирующих групп, что позволяет создать достаточно большой набор ингибиторов репликации вирусных полимераз. Данный подход был применен к широко известному противовирусному препарату AZT (Zidovudine®, Retrovir®), который проявляет высокую токсичность вследствии накопления в клетке монофосфата AZT. [5] Так, созданный анти-HIV препарат «Никавир®» (Н-фосфонат AZT, Рисунок 3.) обладает рядом преимуществ перед своим предшественником AZT, а именно: меньшая токсичность, более продолжительное время выведения из организма и меньший спектр побочных действий. [18]

N3 n3

AZT Никавир®

Рисунок 3. Создание депо-форм противовирусных препаратов на примере введения фосфитной

группы.

Модификация фосфатной или фосфонатной группы в молекуле активного соединения различными эфирами (как простыми, так и сложными) позволяет повысить гидрофобность соединения, что положительно сказывается на доставке активного соединения в клетку. Введение в молекулу активного соединения сложных эфиров было удачно применено к таким препаратам как тенофовир ((R)-PMPA), проявляющего эффективность в лечении HIV-инфекции и адефовир (PMEA) - потенциального ингибитора репликации HBV. [19,20] Так, при реализации данного подхода создания депо-форм наилучшие результаты были получены для бис-пивалоилоксиметилового эфира адефовира (bis-(POM)-PMEA, Hepsera®), принятого для лечения гепатита В в 2002 году [21], а также для диизопропилокси-карбонилоксиметилового эфира тенофовира (bis-(POC)-(R)-PMPA fumarate, Viread®), разрешенного в 2001 году для лечения HIV-инфекции [22] и одобренного для лечения хронических HBV-инфекций с 2008 года [23] (Рисунок 4.).

соон

bis-(POM)-PMEA

bis-(POC)-(R)-PMPA Viread®

Hepsera®

Рисунок 4. Примеры депо-форм противовирусных препаратов

Группой Хостетлера была разработана стратегия введения в молекулу активного вещества остатка жирного спирта - алкоксиалкильный метод создания депо-форм нуклеозидных аналогов, применяемых в противовирусной терапии. [24] Данная стратегия была применена к (S)-HPMPC (сидофовир, Vistide®) - препарату, использующемуся в лечении цитомегаловирусной инфекции глаз у людей зараженных СПИДом. Из многочисленного ряда введенных жирных спиртов наиболее перспективными оказались октадециловый и гексадециловый спирты. Было показано, что гексадецилоксипропил-(S)-HPMPC (HDP-(S)-HPMPC) и октадецилоксиетил-(S)-HPMPC (ODE-(S)-HPMPC) проявили налучшие антивирусные свойства в in vitro испытаниях, причем их активность была выше, чем у исходного (S)-HPMPC (Рисунок 5.).

Рисунок 5. Примеры депо-форм противовирусных препаратов, модифицированных в соответствии с алкоксиалкильным подходом.

Было показано, что данные производные эффективно подавляли размножение вирусов семейства оспы при проведении испытаний на животных моделях, а соединение HDP-(S)-HPMPC (СМХ001) было предложено компанией Chimerix Inc. как пероральное средство для подавления HCMV и вирусов семейства оспы. [25]

Данная стратегия была применена также и к PMEA и (R)-PMPA. Было показано, что введение остатка жирного спирта приводит к увеличению анти-HIV активности у обоих

HDP-(S)-HPMPC СМХ001

ODE-(S)-HPMPC

HDP-(R)-PMPA СМХ157

препаратов. В настоящее время фирмой Chimerix Inc проводятся клинические испытания алкоксиалкильного эфира (R)-PMPA - HDP-(R)-PMPA (CMX157) в качестве кандидатного препарата для перорального применения при лечении HIV-инфекции (Рисунок 5.). [26]

Таким образом, многообразие методов, применяемых при создании депо-форм препаратов, позволяет улучшить их терапевтические характеристики и расширить возможности клинического применения.

2.2. Применение «ProTide» - подхода к противовирусным нуклеозидным препаратам

При дизайне антивирусныых препаратов учитывают их воздействие на различные стадии развития вируса. Так например, используя способность аспартатной протеазы HIV отщеплять некоторые олигопептиды от фосфатного остатка нуклеотида [27] был получен ряд простых алкилоксифосфорамидатных производных AZT, содержащих этерифицированный аминокислотный остаток (Рисунок 6.). Было показано, что данные соединения преодолевают клеточную мембрану и могут специфически гидролизоваться HIV-протеазой. [28] Длина алкилфосфонатной цепочки не оказывает существенного влияния на биологическую активность таких производных AZT. [29,30] Исследования строения аминокислотного остатка показали, что антивирусные свойства алкилоксифосфорамидатов зависят от его природы, так они зависят как от длины углеводородной цепочки (антивирусные свойства уменьшаются в ряду аланин > лейцин > изолейцин), так и от местоположения аминогруппы. (максимальная активность проявляется у соединений, у которых аминогруппа находится в а-положении по отношению к карбоксильной группе). [31]

о

о

R = H, Ме, ¡Рт, СН2гРг, CHMeEt, Вп

X

Rj = Ме, Et, Pr, Bu, Hex

X = Н, Ме, Et и другие заместители

Рисунок 6. Ряд производных AZT, показавших анти-HIV активность.

В 1992 году МакГьюган и сотрудники показали, что в ряде случаях арилфосфаты нуклеозидов обладают лучшими противовирусными свойствами, чем исходные нуклеозиды.

[32] Авторы также показали, что некоторые диарилфосфатные производные А2Т (Рисунок 6.) проявляли противовирусную активность на клеточной линии Т-лимфоцитов 1М, резистентной к А2Т, при этом сам А2Т, как и следовало ожидать, в этих экспериментах не показывал активности. Однако исследование противовирусных свойств диарильных производных А2Т на клетках, дефицитных по тимидинкиназе, не выявило анти-НГУ активности, что связано, по мнению авторов, с плохим высвобождением монофосфата А2Т в клетке. [33]

Основываясь на полученных результатах при изучении антивирусных свойств А2Т, в той же лаборатории было предложено одновременное введение в молекулу монофосфата нуклеозида аминокислотного остатка (Р-Ы-связь) и арильной группы (Р-О-связь). [29, 34] Позднее этот метод получил название «РгоТ1ёе»-подход (от ргопис1еойёе). Увеличение активности исходных нуклеозидов может происходить вследствие увеличения скорости образования соответствующего трифосфата нуклеозида, обусловленного лучшим внутриклеточным проникновением соединения и/или возможностью обойти первое фосфорилирование, которое, как указывалось выше, зачастую является скорость-лимитирующей стадией. [35]

В «РгоТ1ёе»-подходе проникновение депо-формы через клеточные мембраны происходит посредством пассивной диффузии. Оказавшись внутри клетки, фосфорамидатное производное «активируется» - сначала происходит ферментативный гидролиз эфирной группы аминокислоты, катализируемый клеточными эстеразами или карбоксипептидазами, затем спонтанная циклизация с одновременным выщеплением арильной группы и раскрытием образующегося нестабильного цикла под действием воды. После гидролиза Р-Ы-связи, который может проходить спонтанно в клеточных компонентах с кислотным значением рН, таких как лизосомы и эндосомы, или катализироваться фосфорамидазами, происходит высвобождение нуклеозидмонофосфата (Рисунок 7.).

II II II я™

-о—Р—О—Р—О—Р-Я

I | | Ч' ' ' ' '

КЛЕТОЧНАЯ МЕМБРАНА

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ

Рисунок 7. Механизм действия фосфорамидатных нуклеозидных аналогов («РгоТ1ёе»-подход).

Для получения такого рода соединений был разработана трехстадийная методика синтеза (Схема 1.). Первая стадия синтеза заключается в обработке арильного спирта оксохлоридом фосфора в диэтиловым эфире, что приводит к образованию арилфосфодихлоридата. Взаимодейстие арилфосфодихлоридата с эфиром аминокислоты в присутствии триэтиламина (в качестве основания) в дихлорэтане дает хлорид арилфосфорамидата. Ключевой стадией синтеза является конденсация хлорида арилфосфорамидата с нуклеозидами в присутствии избытка №метилимидазола в безводном ТГФ. [36]

Схема 1.

он

РОС1,

HN

N,

EtjO

Et,N

и

а/

3 >с

х

-р-ci СН2С12 Et3N

С1 эфир аминокислоты

О

О^ II

CI R

■OR' THF

N-метилимидазол

О NH

Р 0R'

I I

CI R

О CT N

и

a.J

HN

OR'

В соответствии со Схемой 1. МакГьюган и сотрудники синтезировали ряд фосфорамидатных производных AZT (Рисунок 8.). [37]

/Vo-S-o^

L

HN

Л.

R-СН

С=0 N3

J

СН3

Соединение R X Соединение R X

(1а) Ме- н- (lf) Me- Et-

(1Ь) iPrCH2- н- (lg) Me- n-Pr-

(1с) PhCH2- н- (lh) Me- n-Pentyl-

(14) Н- н- (Ii) Me- MeO-

(1е) Ме- Ме- (Ч) Me- F-

ОМе

Рисунок 8. Структуры «ProTide»-производных AZT.

Авторы изучили противовирусные свойства синтезированных соединений на обычных штаммах HIV. Все исследованные соединения эффективно ингибировали рост вируса (Таблица 1.) как на клетках MT-4, так и на клетках CEM. Авторы также отметили, что не наблюдалось

значительной разницы в эффективности протестированных соединений подавлять как вирус НГУ-1, так и вирус НГУ-2.

Таблица 1. Анти-НГУ активность арилфосфорамидатных производных А2Т в клеточных

рах. [37]

ЕС50, цМ

Соединение СЕМ МТ-4 СЕМ/ТК-

HIV-1 HIV-2 HIV-1 HIV-2

AZT 0.003 0.004 0.002 0.003 >100

(1a) 0.055 0.070 0.006 0.007 12

(1b) 0.140 0.210 0.099 0.087 13.0

(1c) 0.097 0.160 0.080 0.110 10

(1d) 0.097 0.230 0.160 0.200 >100

(1e) 0.065 0.056 0.051 0.053 7.0

(1f) 0.048 0.060 0.068 0.070 8.7

(1g) 0.041 0.051 0.043 0.045 3.0

(1h) 0.051 0.060 0.103 0.074 8.0

(1i) 0.057 0.065 0.071 0.069 9.0

(1j) 0.048 0.065 0.041 0.054 3.0

Для протестированных соединений (за исключением арил-фосфорамидатного производного (1a)) наблюдалось ухудшение активности до 20 раз. Модификация а-положения в аминокислотном остатке (соединения 1b-1d) также отрицательно сказывалась на противовирусных свойствах соединений - наблюдалось падение активности до 70 раз.

Авторы также протестировали синтезированные «РгоТ1ёе»-соединения на резистентном к AZT штамме вируса HIV-2 на клетках СЕМ/ТК-. В связи с пониженным уровнем тимидинкиназы данная линия клеток является удобным инструментом для исследования нуклеотидных аналогов, способных напрямую высвобождать нуклеозид 5'-монофосфат. Было показано, что AZT в данном эксперименте не проявлял противовирусной активности в концентрациях выше 100 цМ, в то время как все фосфорамидатные производные (кроме соединения (1d)) оказались явными ингибиторами вируса (ЕС50 варьировалась в концентрациях от 3 до 13 цМ). Среди производных AZT, модифицированных по аминокислотному остатку, эффективными противовирусными соединениями оказались валиновое (1b) и фенилаланиновое (1c) производные, в то время как глициновое (1d) производное не проявляло активности даже при концентрации более 100 цМ.

Синтезированные соединения оказались менее токсичными, чем сам AZT. В ряде случаев значения токсичности превосходили показатели для AZT в 30 раз. Таким образом, авторы показали, что соединения данного вида являются эффективными про-лекарствами AZT-МР и способны обходить первую стадию фосфорилирования в клетках.

Следующим нуклеозидом, к которому был применен «ProTide»-подход, был 2',3'-дидезокси-2',3'-дидегидротимидин (d4T). Данный нуклеозидный аналог является эффективным ингибитором HIV, его цитотоксичность в клеточных культурах ниже, чем у AZT. Низкая цитотоксичность d4T обусловлена тем, что, при образовании биоактивной (трифосфорилированной) формы d4T скорость-лимитирующей стадией является стадия первого фосфорилирования, в то время как для AZT критической является вторая стадия фосфорилирования: образование дифосфата нуклеозида из монофосфата AZT. [38] Для преодоления первого фосфорилирования (скорость-лимитирующей стадии образования d4T-трифосфата) группой МакГьюгена был синтезирован ряд фосфорамидатных производных d4T с различными аминокислотными остатками, такими как L-аланил- (2a), L-глицил- (2b), L-валил (2c), L-лейцил (2d), L-фенилаланил (2e) и L-метионил (2f) (Рисунок 9.). [39] Для синтеза данных соединений авторы использовали схему, предложенную ими ранее для получения «ProTide»-соединений AZT. [32]

Соединение R (Аминокислота) Ri Соединение R (Аминокислота) Ri

(2а) Mc- (L-аланин) Q- (2i) Me- (L-аланин) F-Ö- F F

(2Ь) Н- (глицин) ö- 04) Me- (L-аланин) CI

(2с) iPr- (L-валин) o- (2k) Me- (L-аланин) и-О-

(2d) iPrCH2-(L-лейцин) ö- (21) Me- (L-аланин) Me-

(2е) PhCH2- (L-фенилаланин) O- (2m) Me- (L-аланин) Et-

(2f) MeSCH2CH2-(L-метионин) (2n) Et(Me)CH-(L-изолейцин) Ch

(2g) Me- (L-аланин) BrH^ (2o) PH2- (L-триптофан) H o-

(2h) Me- (L-аланин) F3C (2p) MeSCH2-(L-цистин) o-

-V

8 Л-J

RiO—P—О

NH

I

R—CH MeO—C=0

Соединение R (Аминокислота) Ri

(2q) Me0C(0)CH2-(L-аспаргиновая кислота) o-

(2r) Me0C(0)CH2CH2-(L-глутаминовая кислота) o-

(2s) ^^^ (L-пролин) o-

(2t) H- (глицин)

Рисунок 9. Фосфорамидатные производные d4T.

Полученные фосфорамидатные производные (2а-т) были изучены в качестве ингибиторов репликации вирусов HIV-1 и HIV-2 на культурах клеток СЕМ и МТ-4. Авторы показали, что исследованные фосфорамидатные производные d4T и сам d4T проявляют антивирусные свойства в схожих концентрациях (Таблица 2.). Авторы особо отметили

противовирусные свойства фосфорамидата (2а), содержащего аланиновый аминокислотный остаток, которое оказалось в 4- 10 раз активнее исходного ё4Т.

Позднее, в 2007 году, группой МакГьюгена был дополнительно получен ряд фосфорамидатных производных ё4Т (2a-f и 2п^) и исследовано влияние аминокислотного остатка на проявление их антивирусных свойств фосфорамидатных производных ё4Т (Рисунок 9. и Таблица 2.). [40]

Таблица 2. Анти-НГУ активность фосфорамидатных производных ё4Т. [39, 40]

Соединение ЕС50, цМ

МТ-4 СЕМ/0 СЕМ/ТК-

НГУ-1 НГУ-2 НГУ-1 НГУ-2 НГУ-1

ё4Т 0.651 0.770 0.800 0.775 33.3

2а 0.066 0.067 0.182 0.200 0.075

2Ь 1.34 6.71 6 6 7

2с 3.58 11.2 12.5 12.5 4

2а 0.2 0.47 1.1 2.23 0.4

2е 0.19 0.38 0.8 1.35 0.33

2f 0.23 0.38 0.6 0.8 0.34

2ё N0 N0 0.04 0.055 0.025

2И 0.046 0.11 0.15 0.15 0.11

21 1.72 4.07 2.5 3.7 8.5

2] 0.037 0.12 0.11 0.15 0.11

2к 0.057 0.0063 0.07 0.16 0.06

21 25.4 50.9 20 50 >250

2т 28.5 62.5 48 240 48

2п N0 N0 5.0 12.5 2.5

2о N0 N0 4 4 1.3

2р N0 N0 0.95 2.0 0.33

2Я N0 N0 0.55 0.65 0.33

2г N0 N0 8 5.33 1.6

28 N0 N0 >10 >10 >10

2t N0 N0 0.29 0.5 0.06

N0 - значение не определялось.

Среди исследованных соединений наилучшая противовирусная активность наблюдалась у аланинового производного d4T (2а). В то же время, увеличение гидрофобности в боковой цепи аминокислотного остатка приводит к снижению активности. Кроме этого было показано, что введение в качестве аминокислотного остатка L-пролина (единственная природная аминокислота с «защищенной» аминогруппой) приводит к потере противовирусной активности с одновременным ростом токсичности (соединение (2s)).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Закирова Наталья Фанисовна, 2016 год

6. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. De Clercq E. // Antivirals and antiviral strategies. // Nat.Rev.Microbiol. 2004, V. 2, pp. 704-720.

2. De Clercq E. // Anti-HIV drugs: 25 compounds approved within 25 years after the discovery of HIV. // Int.J.Antimicrob. Agents, 2009, V. 33, pp. 307-320.

3. R.J. Jones, N. Bischofberger // Minireview: nucleotide prodrugs. // Antiviral Res. 1995, V. 27, pp. 1-17.

4. Li F., Maag H., Alfredson T. // Prodrugs of nucleoside analogues for improved oral absorption and tissue targeting.// J.Pharm.Sci. 2007, V. 97, pp. 1109-1134.

5. Tornevik Y., Ullman B., Balzarini J., Wahren B., Eriksson S. // Cytotoxicity of 3'-azido-3'-deoxythymidine correlates with 3'-azidothymidine-5'-monophosphate (AZTMP) levels, whereas anti-human immunodeficiency virus (HIV) activity correlates with 3'-azidothymidine-5'-triphosphate (AZTTP) levels in cultured CEM T-lymphoblastoid cells. // Biochem. Pharmacol. 1995, V. 49, pp. 829-837.

6. DeClercq E.and Neyts J. // Antiviral agents acting as DNA or RNA chain terminators. // Handb.Exp.Pharmacol. 2009, V. 189, pp. 53-84.

7. Drontle D.P., Wagner C.R. // Designing a pronucleotide stratagenic lessons from amino acid phosphoramidates of anticancer and antiviral pyrimidines. // Mini-Rev.MedChem. 2004, V. 4, pp. 409-419.

8. McKenna C.E., Kashemirov B.A., Eriksson U., Amidon G.L., Kish P.E., Mitchell S., Kim J.-S., Hilfinger J.M. // Cidofovir peptide conjugates as prodrugs. // J.Organomet.Chem. 2005, V. 690, pp. 2673-2678.

9. Hosteller K.Y., Stuhmiller L.M., Lenting H.B.M., Van den Bosch H., Richman D.D. // Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides. // J.Biol.Chem. 1990, V. 265, pp. 6112-6117.

10. Perigaud C., Aubertin A.-M., Benzaria S., Pelicano H., Giradet J.-L., Maury G., Gosselin G., Kirn A., Imbach I.-L. // Equal inhibition of the replication of human immunodeficiency virus in human T-cell culture by ddA bis(SATE) phosphotriester and 3'-azido-2',3'-dideoxythymidine. // Biochem.Pharmacol. 1994, V. 48, pp. 11-14.

11. Meier C. // 2-Nucleos-5'-O-yl-4H-1,2,3-benzodioxaphosphinin-2-oxides a new concept for lipophilic, potential prodrugs of biologically active nucleoside monophosphates. // Angew.Chem., Int., Ed. Engl. 1996, V. 35, pp. 70-72.

12. Field H.J., De Clercq E. // Antiviral drugs - a shot history of their discovery and development. // Microbiology Today, 2004, V. 31, pp. 58-61.

13. Crumpacker C.S. // Ganciclovir. // N.EnglJ.Med. 1996, V. 335, pp. 721-729.

14. De Clercq E., Field H.J. // Antiviral prodrugs—the development of successful prodrug strategies for antiviral chemotherapy. // British Journal of Pharmacology 2006, V. 147, pp. 1-11.

15. McGuigan C., Barucki H., Blewett S., Carangio A., Erichsen J.T., Andrei G., et al. // Highly potent and selective inhibition of varicella-zoster virus by bicyclic furopyrimidine nucleosides bearing an aryl side chain. // J.Med.Chem. 2000, V. 43, pp. 4993-4997.

16. Migliore M. // FV-100: the most potent and selective anti-varicella zoster virus agent reported to date. // Antiviral Chemistry and Chemotherapy, 2010, V. 20, pp. 107-115.

17. Pentikis H.S., Matson M., Atiee G., Boehlecke B., Hutchins J.T., Patti J.M., // Pharmacokinetics and safety of FV-100, a novel oral anti-herpes zoster nucleoside analogue, administered in single and multiple doses to healthy young adult and elderly adult volunteers. // Antimicrobial Agents and Chemotherapy, 2011, V. 55, pp. 2847-2854.

18. Сизова Н.В., Губа З.В., Торопов С.Э., Захарова Н.Г., Рахманова А.Г. // Фосфазид — отечественный препарат для лечения ВИЧ_инфекции. Второе рождение. // ВИЧИнфекция и Иммуносупрессии, 2012, Т. 4, стр. 45-54.

19. Silvera P., Racz P., Racz K., Bischofberger N., Crabbs C., Yalley-Ogunro J., Greenhouse J., Jiang J.B., Lewis M.G. // Effect of PMPA and PMEA on the Kinetics of Viral Load in Simian Immunodeficiency Virus-Infected Macaques.// Aids Research And Human Retroviruses, 2000, V. 16, pp. 791-800.

20. Ying C., De Clercq E., Neyts J. // Lamivudine, adefovir and tenofovir exhibit long-lasting antihepatitis B virus activity in cell culture. // J.ViralHepat. 2000, V. 7, pp. 79-83.

21. Buti M., Esteban R. // Adefovir dipivoxil. // Drugs Today, 2003, V. 39, pp. 127-135.

22. Gallant J.E., Pham P.A. // Tenofovir disoproxil fumarate (Viread) for the treatment of HIV infection. // ExpertRev.AntiInfect.Ther. 2003, V. 1, pp. 415-422.

23. Marcellin P., Heathcote E.J., Buti M., Gane E., de Man R.A., Krastev Z., Germanidis G., Lee S.S., Flisiak R., Kaita K., Manns M., Kotzev I., Tchernev K., Buggisch P., Wailert F., Kurdas O.Q., Shiffman M.L., Trinh H., Washington M.K., Sorbel J., Anderson J., Snow-Lampart A., Mondou E., Quinn J., Rousseau F. // Tenofovir disoproxil fumarate versus adefovir dipivoxil for chronic hepatitis B. // Engl.J.Med. 2008, V. 359, pp. 2442-2455.

24. Hostetler K.Y. // Alkoxyalkyl prodrugs of acyclic nucleoside phosphonates enhance oral antiviral activity and reduce toxicity: Current state of the art. // Antiviral.Res. 2009, V. 82, pp. 84-98.

25. Trost L.C., Lampert B.M., Robertson A. // Interspecies comparison of the pharmacokinetics of CMX001, a lipid conjugated nucleotide analog with broad dsDNA antiviral activity. // 23th ICAR Annual Meeting, 2010, April 25-28, San Francisco, CA.

26. Lanier E.R., Ptak R.G., Lampert B.M., Keilholz L., Hartman T., Buckheit R.W., Mankowski M.K., Osterling M.C., Almond M.R. and Painter G.R. // Development of hexadecyloxypropyl

tenofovir (CMX157) for treatment of infection caused by wild-type and nucleoside/nucleotide-resistant HIV. // Antimicrobal Agents and Chemotherapy, 2010, V. 54, pp. 2901-2909.

27. Navia M.A., Fitzgerald P.M., McKeever B.M., Leu C.T., Heimbach J.C., Herber W.K., Sigal I.S., Darke P.L., Springer S.P. // Three-dimensional structure of aspartyl protease from human immunodeficiency virus HIV-1. // Nature, 1989, V. 337, pp. 615-620.

28. Dunn B.M. and Kay J. // Targets for antiviral chemotherapy. 1. HIV-proteinase. // Antiviral Chem.Chemother. 1990, V. 1, pp. 3-8.

29. Devine K.G., McGuigan C., O'Connor T.J., Nicholls S.R., Kinchington D. // Novel phosphate derivatives of zidovudine as anti-HIV compounds. // AIDS, 1990, V. 4, pp. 371-373.

30. McGuigan C., Devine K.G., O'Connor T.J., Galpin S.A., Jeffries D.J., Kinchington D. // Synthesis and evaluation of some novel phosphoramidate derivatives of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) as anti-HIV compounds. // Antiviral Chem. Chemother. 1990, V. 1, pp. 107-113.

31. Curley D., McGuigan C., Devine K.G., O'Connor T.J., Jeffries D.J., Kinchington D. // Synthesis and anti-HIV evaluation of some phosphoramidate derivatives of AZT: studies on the effect of chain elongation on biological activity. // Antiviral Res. 1990, V. 14, pp. 345-356.

32. McGuigan C., Pathirana R.N., Mahmood N., Devine K.G., Hay A.J. // Aryl phosphate derivatives of AZT retain activity against HIV1 in cell lines which are resistant to the action of AZT. // Antiviral Res. 1992, V. 17, pp. 311-321.

33. McGuigan C., Pathirana R.N., Davies M.P.H., Balzarini J., De Clercq E. // Diaryl phosphate derivatives act as pro-drugs of AZT with reduced cytotoxicity compared to the parent nucleoside. // Bioorg.Med.Chem.Lett. 1994, V. 4, pp. 427-430.

34. Cahard D., McGuigan C., Balzarini J. // Aryloxy phosphoramidate triesters as pro-tides. // MiniRev.Med.Chem. 2004, V. 4, pp. 371-381.

35. Mehellou Y., Balzarini J., McGuigan C. // Aryloxy Phosphoramidate Triesters: a Technology for Delivering Monophosphorylated Nucleosides and Sugars into Cells. // Chem.Med.Chem. 2009, V. 4, pp. 1779-1791.

36. Van Boom J.H., Burgers P.M.J., Crea R., Luyten W.C.M.M., Vink A.B.J. // Phosphorylation Of Nucleoside Derivatives With Aryl Phosphoramidochloridates. // Tetrahedron, 1975, V. 31, pp. 2953 2959.

37. McGuigan C., Pathirana R.N., Balzarini J. and De Clercq E. // Intracellular Delivery of Bioactive AZT Nucleotides by Aryl Phosphate Derivatives of AZT. // J.Med.Chem. 1993, V. 36, pp. 10481052.

38. Tan X., Chu C.K., Boudinot D.F. // Development and optimization of anti-HIV nucleoside analogs and prodrugs: A review of their cellular pharmacology, structure-activity relationships and pharmacokinetics. // Advanced Drug Delivery Rewievs, 1999, V. 39, pp. 117-151.

39. McGuigan C., Cahard D., Sheeka H.M., De Clercq E. and Balzarini J. // Aryl Phosphoramidate Derivatives of d4T Have Improved Anti-HIV Efficacy in Tissue Culture and May Act by the Generation of a Novel Intracellular Metabolite. // J.Med.Chem. 1996, V. 39, pp. 1748-1753.

40. McGuigan C., Tsang H.-W., Cahard D., Turner K., Velazquez S., Salgado A., Bidois L., Naesens L., De Clercq E., Balzarini J. // Phosphoramidate derivatives of d4T as inhibitors of HIV: The effect of amino acid variation. // AntiviralRes. 1997, V. 35, pp. 195-204.

41. Uckun F.M., Samuel P., Qazi S., Chen C., Pendergrass S. and Venkatachalam T.K. // Effects of aryl substituents on the anti-HIV activity of the arylphosphoramidate derivatives of stavudine. // Antivir.Chem.Chemother. 2002, V. 13, pp. 197-203.

42. Siccardi D., Gumbleton M., Omidi Y., McGuican C. // Stereospecific chemical and enzymatic stability of phosphoramidate triester prodrugs of d4T in vitro. // Eur.J.Pharm.Sci. 2004, V. 22, pp. 25-31.

43. Harris S.A., McGuigan C., Andrei G., Snoeck R., De Clercq E., Balzarini J. // Synthesis and antiviral evaluation of phosphoramidate derivatives of (E)-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridine. // Antivir.Chem.Chemother. 2001, V. 12, pp. 293-300.

44. Barr P.J., Oppenheimer N.J. and Santi D.V. // Thymidylate synthetase-catalyzed conversions of E-5-(2-bromovinyl)-2'-deoxyuridylate. // J.Biol.Chem. 1983, V. 258, pp. 13627-13631.

45. Lackeya D.B., Groziak M.P., Sergeeva M., Beryt M., Boyer C., Stroud R.M., Sayr P., Park J.W., Johnston P., Slamon D., Shepard H.M., Pegram M. // Enzyme-catalyzed therapeutic agent (ECTA) design: activation of the antitumor ECTA compound NB1011 by thymidylate synthase. // Biochem.Pharmacol. 2001, V. 61, pp. 179-189.

46. Dubowchik G.M. and Walker M.A. // Receptor-mediated and enzyme-dependent targeting of cytotoxic anticancer drugs. // Pharmacol.Ther. 1999, V. 83, pp. 67-123.

47. Gorlick R. and Bertino J.R. // Drug resistance in colon cancer. // Semin.Oncol. 1999, V. 26, pp. 606-611.

48. Zalcberg J.R., Cunningham D., Van Custem E., Francois E., Schornagel Adenis A., Green M., Iveson A., Azab M., and Seymour L. // ZD1694: a novel thymidylate synthase inhibitor with substantial activity in the treatment of patients with advanced colorectal cancer. // J.Clin.Oncol. 1996, V. 14, pp 716-721.

49. McGuigan C., Thiery J.-C., Daverio F., Jiang W.G., Daviesb G., Masonb M. // Anti-cancer ProTides: tuning the activity of BVDU phosphoramidates related to thymectacin. // Bioorgan.Med.Chem. 2005, V. 13, pp. 3219-3227.

50. Congiatu C., Brancale A., Mason M.D., Jiang W.G. and McGuigan C. // Novel potential anticancer naphthyl phosphoramidates of BVdU: separation of diastereoisomers and assignment of the absolute configuration of the phosphorus center. // J.Med.Chem. 2006, V. 49, pp. 452-455.

51. Venkatachalam T.K., Qazi S.and Uckun F.M. // Synthesis and metabolism of naphthyl substituted phosphoramidate derivatives of stavudine. // Bioorg.Med.Chem. 2006, V. 14, pp. 5161-5177.

52. Roman C., Balzarini J. and Meier C. // Diastereoselective Synthesis of Aryloxy Phosphoramidate Prodrugs of 3'-Deoxy-2',3'-didehydrothymidine Monophosphate. // J.Med.Chem. 2010, V. 53, pp. 7675-7681.

53. Delaunay D., Toupet L., Le Corre M. // Reactivity of ß-amino alcohols with carbon disulfide. Study on the synthesis of 2-oxazolidinethiones and 2-thiazolidinethiones. // J.Org.Chem. 1995, V. 60, pp. 6604-6607.

54. Uchiyama M., Aso Y., Noyori R., Hayakawa Y. // O-Selective phosphorylation of nucleosides without N-protection. // J.Org.Chem. 1993, 58, 373-379.

55. Eldrup A. B., Prhavc M., Brooks J., Bhat B., Prakash T.P., Song Q., Bera S., Bhat N., Dande P., Cook P.D., Bennett C.F., Carroll S.S., Ball R.G., Bosserman M., Burlein C., Colwell L.F., Fay, J.F., Flores O.A., Getty K., LaFemina R.L., Leone J., MacCoss M., McMasters DR., Tomassini J.E., Langen D.V., Wolanski B., Olsen D.B. // Structure-Activity Relationship of heterobase modified 2'-C-methyl ribonucleosides as inhibitors of hepatitis C virus RNA replicaton. // J.Med.Chem. 2004, V. 47, pp. 5284-5297.

56. McGuigan C., Perrone P., Madela K., Neyts J. // The phosphoramidate ProTide approach greatly enhances the activity of ß-2'-C-methylguanosine against hepatitis C virus. // Bioorgan.Med.Chem.Lett. 2009, V. 19, pp. 4316-4320.

57. McGuigan C., Madela K., Aljarah M., Gilles A., Brancale A., Zonta N., Chamberlain S., Vernachio J., Hutchins J., Hall A., Ames B., Gorovits E., Ganguly B., Kolykhalov A., Wang J., Muhammad J., Patti J.M., Henson G. // Design, synthesis and evaluation of a novel double prodrug: INX-08189. A new clinical candidate for hepatitis C virus. // Bioorgan.Med.Chem.Lett. 2010, V. 20, pp. 4850-4854.

58. McGuigan C., Madela K., Aljarah M., Gilles A., Battina S.K., Ramamurty C.V.S., Rao C.S., Vernachio J., Hutchins J., Hall A., Kolykhalov A., Henson G., Chamberlain S. // Dual pro-drugs of 2'-C-methyl guanosine monophosphate as potent and selective inhibitors of hepatitis C virus. // Bioorgan.Med.Chem.Lett. 2011, V. 21, pp. 6007-6012.

59. Bourdin C., McGuigan C., Brancale A., Chamberlain S., Vernachio J., Hutchins J., Gorovits E., Kolykhalov A., Muhammad J., Patti J., Henson G., Bleiman B., Bryant K.D., Ganguly B., Hunley D., Obikhod A., Walters C.R., Wang J., Ramamurty C.V.S., Battina S.K., Rao C.S. //

Synthesis and evaluation against hepatitis C virus of 7-deaza analogues of 2'-C-methyl-6-O-methyl guanosine nucleoside and L-Alanine ester phosphoramidates. // Bioorgan.Med.Chem.Lett. 2013, V. 23, pp. 2260-2264.

60. Murakami E., Bao H., Mosley R.T., Du J., Sofia M.J., Furman P.A. // Adenosine deaminase-like protein 1 (ADAL1): characterization and substrate specificity in the hydrolysis of N(6)- or O(6)-substituted purine or 2-aminopurine nucleoside monophosphates. // J.Med.Chem. 2011, V. 54, pp. 5902-5914.

61. De Clercq E. // Strategies In The Design Of Antiviral Drugs. // Nature Reviews Drug Discovery,

2002, V.1, pp.13-25.

62. Morfin F., Thouvenot D. // Herpes simplex virus resistance to antiviral drugs. // J.Clin.Virol.

2003, V. 26, pp. 29-37.

63. Hill E.L., Hunter G.A., Ellis M.N. // In vitro and in vivo characterization of herpes simplex virus clinical isolates recovered from patients infected with human immunodeficiency virus. // Antimicrob.AgentsChemother. 1991, V. 35, pp. 2322-2328.

64. McGuigan C., Slater M.J., Parry N.R., Perry A., Harris S. // Synthesis and antiviral activity of acyclovir-5'-(phenylmethoxyalaninyl) phosphate as a possible membrane-soluble nucleotide prodrug. // Bioorg.Med.Chem.Lett. 2000, V. 10, pp. 645-647.

65. Congiatu C., McGuigan C., Jiang W.G., Davies G., Mason M.D. // Naphthyl phosphoramidate derivatives of BVdU as potential anticancer agents: design, synthesis and biological evaluation. // Nucleosides Nucleotides Nucleic Acids, 2005, V. 24, pp. 485-489.

66. McGuigan C., Derudas M., Bugert J.J., Andrei G., Snoeck R. and Balzarini J. // Successful kinase bypass with new acyclovir phosphoramidate prodrugs. // Bioorgan.Med.Chem.Lett. 2008, V. 18, pp. 4364-4367.

67. Lisco A., Vanpouille C., Tchesnokov E.P., Grivel J.-C., Biancotto A., Brichacek B., Elliott J., Fromentin E., Shattock R., Anton P., Gorelick R., Balzarini J., McGuigan C., Derudas M., Gotte M., Schinazi R.F., Margolis L. // Acyclovir is activated into a HIV-1 reverse transcriptase inhibitor in herpesvirus-infected human tissues. // Cell Host Microbe, 2008, V. 4, pp. 260-270.

68. Miller W.H., Miller R.L. // Phosphorylation of acyclovir monophosphate by GMP kinase. // J.Biol.Chem. 1980, V. 255, pp. 7204-7207.

69. Miller W.H., Miller R.L. // Phosphorylation of acyclovir diphosphate by cellular enzyme. // Biochem.Phamacol. 1982, V. 31, pp. 3879-3884.

70. Derudas M., Carta D., Brancale A., Vanpouille C., Lisco A., Margolis L., Balzarini J. and McGuigan C.// The application of phosphoramidate protide technology to acyclovir confers anti-HIV inhibition. // J.Med.Chem. 2009, V. 52, pp. 5520-5530.

71. De Clercq E. // The clinical potential of the acyclic (and cyclic) nucleosides phosphonates. The magic of the phosphonate bond. // Biochem.Pharmocol. 2011, 82, pp. 99-109.

72. De Clercq E., Holy A. // Acyclic nucleosides phosphonates: a key class of antiviral drugs. // Nat.Rev.Drug.Discov. 2005, V. 4, pp. 928-940.

73. Holy A. // Phosphonomethoxyalkyl analogs of nucleotides. // Curr.Pharm.Des. 2003, V. 9, pp. 2567-2592.

74. Malachowski W.P., Coward J.K. // The Chemistry of Phosphapeptides: Investigations on the Synthesis of Phosphonamidate, Phosphonate, and Phosphinate Analogs of Glutamyl-y-glutamate // J.Org.Chem. 1994, V. 59, pp. 7625-7634.

75. Ballatore C., McGuigan C., De Clercq E., Balzarini J. // Synthesis and evaluation of novel amidate prodrugs of PMEA and PMPA. // Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2001 , V. 11, pp. 1053-1056.

76. Lee W.A., He G.-X., Eisenberg E., Cihlar T., Swaminathan S., Mulato A. and Cundy K.C. // Selective Intracellular Activation of a Novel Prodrug of the Human Immunodeficiency Virus Reverse Transcriptase Inhibitor Tenofovir Leads to Preferential Distribution and Accumulation in Lymphatic Tissue. // Antimicrob.AgentsChemoter. 2005, V.49, pp. 1898-1906.

77. Chapman H., Kernan M., Prisbe E., Rohloff J., Sparacino M., Terhorst T. and Yu R. // Practical Synthesis, Separation, And Stereochemical Assignment Of The PMPA Pro-Drug GS-7340. // Nucleosides, Nucleotides & Nucleic Acids, 2001, V. 20, 621-628.

78. Sofia M.J., Bao D., Chang W., Du J., Nagarathnam D., Rachakonda S., Reddy P.G., Ross B.S., Wang P., Zhang H.-R., Bansal S., Espiritu C., Keilman M., Lam A.M., Micolochick Steuer H.M., Niu C., Otto M.J., Furman P.A. // Discovery of a ß-D-2'-deoxy-2'-a-fluoro-2'-ß-C-methyluridine nucleotide prodrug (PSI-7977) for the treatment of hepatitis C virus. // J.Med.Chem. 2010, V. 53, pp. 7202-7218.

79. McGuigan C., Madela K., Aljarah M., Bourdin C., Arrica M., Barrett E., Jones S., Kolykhalov A., Bleiman B., Bryant K.D., Ganguly B., Gorovits E., Henson G., Hunley D., Hutchins J., Muhammad J., Obikhod A., Patti J., Walters C.R., Wang J., Vernachio J., Ramamurty C.V.S., Battina S.K., Chamberlain S. // Phosphorodiamidates as a promising new phosphate prodrug motif for antiviral drug discovery: application to anti-HCV agents. // J.Med.Chem. 2011, V. 54, pp. 8632-8645.

80. Hashimoto M., Ueki M., Mukaiyama T. // S,S-Di-pyridyl dithiolophosphate as a key intermediate in the phosphorylation by oxidation-reduction condensation. // Chem.Lett. 1976, pp. 157-160.

81. Mackman R.L., Ray A.S., Hui H.C., Zhang L., Birkus G., Boojamra C.G., Desai M.C., Douglas J.L., Gao Y., Grant D., Laflamme G., Lin K.Y., Markevitch D.Y., Mishra R., McDermott M.,

Pakdaman R., Petrakovsky O.V., Vela J.E., Cihlar T. // Discovery of GS-9131: Design, synthesis and optimization of amidate prodrugs of the novel nucleoside phosphonate HIV reverse transcriptase (RT) inhibitor GS-9148. // Bioorg.Med.Chem. 2010, V. 18, pp. 3606-3617.

82. Boyer S.H., Jiang H., Jacintho J.D., Reddy M.V., Li H., Li W., Godwin J.L., Schulz W.G., Cable E.E., Hou J., Wu R., Fujitaki J.M., Hecker S.J., Erion M.D. // Synthesis and biological evaluation of a series of liver-selective phosphonic acid thyroid hormone receptor agonists and their prodrugs. // J.Med.Chem. 2008, V. 51, pp. 7075-93.

83. Hatse S., Naesens L., De Clercq E., Balzarini J. // Potent differentiation-inducing properties of the antiretroviral agent 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine (PMEA) in the rat choriocarcinoma (RCHO) tumor cell model. // Biochem. Pharmacology, 1998, V. 56, pp. 851859.

84. Hatse S., Naesens L., Degreve B., Segers C., Vandeputte M., Waer M., De Clercq E. and Balzarini J. // Potent antitumor activity of the acyclic nucleoside phosphonate 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)adenine in choriocarcinoma-bearing rats. // International Journal of Cancer, 1998, V. 76, pp. 595-600.

85. Pertusati F., Hinsinger K., Flynn A.S., Powell N., Tristram A., Balzarini J., McGuigan C. // PMPA and PMEA prodrugs for the treatment of HIV infections and human papillomavirus (HPV) associated neoplasia and cancer. // Europ.J.Med.Chem. 2014, V.78, pp. 259-268.

86. Jansa P., Baszczynski O., Dracinsky M., Votruba I., Zidek Z., Bahador G., Stepan G., Cihlar T., Mackman R., Holy A., Janeba Z. // A novel and efficient one-pot synthesis of symmetrical diamide (bis-amidate) prodrugs of acyclic nucleoside phosphonates and evaluation of their biological activities. // Europ.J.Med.Chem. 2011, V. 46, pp. 3748-3754.

87. Rose W.C., Crosswell A.R., Bronson J.J., Martin J.C. // In vivo tumor activity of 9-[(2-phosphonylmethoxy)ethyl]-guanine (PMEG) and related phosphonate nucleotide analogs. // J. Natl. Cancer Inst. 1990, V. 82, pp. 510-512.

88. Kreider J.W., Balogh K., Olson R.O., Martin J.C. // Treatment of latent rabbit and human papillomavirus infections with 9-(2-phosphonylmethoxy)ethylguanine (PMEG). // Antivir. Res. 1990, V. 14, pp. 51-58.

89. Compton M.L., Toole J.J., Paborsky L.R. // 9-(2-Phosphonylmethoxyethyl)-N6-cyclopropyl-2-6-diaminopurine (cpr-PMEDAP) as a prodrug of 9-(2-phosphonylmethoxyethyl) guanine (PMEG). // Biochem. Pharmacol. 1999, V. 58, pp. 709-714.

90. Hatse S., Naesens L., De Clercq E., Balzarini J. // N6-cyclopropyl-PMEDAP: a novel derivative of 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)-2,6-diaminopurine (PMEDAP) with distinct metabolic, antiproliferative, and differentiation-inducing properties. // Biochem.Pharmacol. 1999, V. 58, pp. 311-323.

91. Kramata P., Downey K.M. and Paborsky L.R. // Incorporation and excision of 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)guanine (PMEG) by DNA polymerase delta and epsilon in vitro. // J. Biol. Chem. 1998, V. 273, pp. 21966-21971.

92. Pisarev V.M., Lee S.-H., Connelly M.C. and Fridland A. // Intracellular metabolism and action of acyclic nucleoside phosphonates on DNA replication. //Mol. Pharmacol. 1997, V. 52, pp. 63-68.

93. Holy A., Votruba I., Merta A., Cerny J., Vesely J., Vlach J., Sediva K., Rosenberg I., Otmar M., Hrebabecky H., Travnicek M., Vonka V., Snoeck R. and De Clercq E. // Acyclic nucleotide analogues: synthesis, antiviral activity and inhibitory effects on some cellular and virus-encoded enzymes in vitro. // Antivir. Res. 1990, V 13, pp. 295-311.

94. Wolfgang G.H.I., Shibata R., Wang J., Ray A.S., Wu S., Doerrfler E., Reiser H., Lee W.A., Birkus G., Christensen N.D., Andrei G. and Snoeck R. // GS-9191 Is a novel topical Prodrug of the nucleotide analog 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)guanine with antiproliferative activity and possible utility in the treatment of human papillomavirus lesions. // Antimicrob.AgentsChemoter. 2009, V. 53, pp. 2777-2784.

95. Tsai. C.-Y., Ray A., Tumas D., Keating M., Reiser H. and Plunkett W. // Targeting DNA repar in chronic lymphocytic leukemia cells with the DNA chain terminator, GS-9219. // American Associathion for Cancer Research Annual Meeting 2007, abstract 3290.

96. Reiser H., Ray A., Shibata R., Fridland A., Plunkett W., Thamm D., Vail D., Lee W., Rhodes G., Desai M. and Tumas D. // GS-9219: a novel prodrug of 9-(2-phosphonylmethoxyethyl)guanine (PMEG) with potent activity in hematologic malignancies. // American Associathion for Cancer Research Annual Meeting 2007, abstract 3188.

97. Tsai T.-Y., Ray A., Tumas D., Shibata R., Reiser H. and Plunkett W. // Intercellular metabolism of GS-9219, a membrane permeable prodrug of 9-(2-phosphonylmetoxyethyl)guanine. // American Associathion for Cancer Research Annual Meeting 2007, abstract 3186.

98. Reiser H., Wang J., Chong L., Watkins W.J., Ray A.S., Shibata R., Birkus G., Cihlar T., Wu S., Li B., Liu X., Henne I.N., Wolfgang G.H., Desai M.,Rhodes G.R., Fridland A., Lee W.A., Plunkett W., Vail D., Thamm D.H., Jeraj R., Tumas D.B. // GS-9219 - a novel acyclic nucleotide analogue with potent antineoplastic activity in dogs with spontaneous Non-Hodgkin's lymphoma. // Clin.CancerRes. 2008, V. 14, pp. 2824-2832.

99. Schinkmanova M., Votruba I., Holy A. // N6-methyl-AMP aminohydrolase activates N6-substituted purine acyclic nucleoside phosphonates. // Biochem. Pharmacol. 2006, V. 71, pp. 1370-1376.

100. De Clercq E. // Vaccinia virus inhibitors as a paradigm for the chemotherapy of poxvirus infections. // Clin.Microbiol.Rev. 2001, V. 14, pp. 382-397.

101. Keith K.A., Hitchcock M.J.M., Lee W.A., Holy A. and Kern E.R. // Evaluation of nucleoside phosphonates and their analogs and prodrugs for Inhibition of orthopoxvirus replication. // Antimicrob.AgentChemother. 2003, V. 47, pp. 2193-2198.

102. Serpi M., Madela K, Pertusati F, Slusarczyk M. // Synthesis of phosphoramidate prodrugs: ProTide approach. // Curr.Protoc.Nucleic.Acid.Chem. 2013, Chapter 15, Unit 15.5.1-15.5.15.

103. Yoshikawa M., Kato T., Takenishi T. // Studies of phosphorylation. III. Selective phosphorylation of unprotected nucleosides. // Bull.Chem.Soc.Jpn. 1969, V. 42, pp. 3505-3508.

104. Jones B.C.N.M., McGuigan C., O'Connor T.J., Jeffries D.J., Kinchington D. // Synthesis and anti-HIV activity of some novel phosphorodiamidate derivatives of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT). // Antivir.Chem.Chemother. 1991, V. 2, pp. 35-39.

105. McGuigan C., Bourdin C., Derudas M., Hamon N., Hinsinger K., Kandil S., Madela K., Meneghesso S., Pertusati F., Serpi M., Slusarczyk M., Chamberlain S., Kolykhalov A., Vernachio J., Vanpouille C., Introini A., Margolis L., Balzarini J. // Design, synthesis and biological evaluation of phosphorodiamidate prodrugs of antiviral and anticancer nucleosides. // EurJ.Med.Chem. 2013, V. 70, pp. 326-340.

106. Myllykallio H., Lipowski G., Leduc D., Filee J., Forterre P., Liebl U. et al. // An alternative flavin-dependent mechanism for thymidylate synthesis. // Science, 2002, V. 297, pp. 105-107.

107. Koehn EM., Fleischmann T., Conrad J.A., Palfey B.A., Lesley S.A., Mathews I.I., Kohen A. // An unusual mechanism of thymidylate biosynthesis in organisms containing the thyX gene. // Nature, 2009, V. 458, pp 919-923.

108. Kögler M., Vanderhoydonck B., De Jonghe S., Rozenski J., Van Belle K., Herman J., Louat T., Parchina A., Sibley C., Lescrinier E., Herdewijn P. // Synthesis and Evaluation of 5-Substituted 2'-deoxyuridine Monophosphate Analogues As Inhibitors of Flavin-Dependent Thymidylate Synthase in Mycobacterium tuberculosis. // J.Med.Chem. 2011, V. 54, pp. 4847-4862.

109. McGuigan C., Derudas M., Gonczy B., Hinsinger K., Kandil S., Pertusati F., Serpi M., Snoeck R., Andrei G., Balzarini J., McHugh T.D., Maitra A., Akorli E., Evangelopoulos D., Bhakta S. // ProTides of N -(3-(5-(2'-deoxyuridine))prop-2- ynyl)octanamide as potential anti-tubercular and anti-viral agents. // Bioorgan.Med.Chem. 2014, V. 22, pp. 2816-2824.

110. Bremer R.E., Szewczyk J.W., Baird E.E., Dervan P.B. // Recognition of the DNA minor groove by pyrrole-imidazole polyamides: comparison of desmethyl- and N-methylpyrrole. // Bioorg.Med.Chem. 2000, V. 8, pp. 1947-1955.

111. Grehn L., Ragnarsson U., Eriksson B., Oeberg B. // Synthesis and antiviral activity of distamycin A analogs: substitution on the different pyrrole nitrogens and in the amidine function. // J.Med.Chem. 1983, V. 26, pp. 1042-1049.

112. Pang Y.P. // Nonbonded bivalence approach to cell-permeable molecules that target DNA sequences. // Bioorg.Med.Chem. 2004, V. 12, pp. 3063-3068.

113. Li C., Ma C., Zhang J., Qian N., Ding J., Qiao R., Zhao Y. // Desingand synthesis of novel distamycin-modified nucleoside analogues as HIV-1 reverse transcriptase inhibitors. // Antiviral.Res. 2014, V.102, pp. 54-60.

114. Giraut A., Song X.-P., Froeyen M., Marliere Ph. and Herdewijn P. // Iminodiacetic-phosphoramidates as metabolic prototypes for diversifying nucleic acid polymerization in vivo. // Nucleic Acids Research, 2010, Vol. 38, pp. 2541-2550.

115. Yang S., Pannecouque C., Lescrinier E., Giraut A. and Herdewijn P. // Synthesis and in vitro enzymatic and antiviral evaluation of phosphoramidate d4T derivatives as chain terminators. // Organ.Biomol.Chem. 2012, V.10, pp. 146-153.

116. Maiti M., Persoons L., Andrei G., Snoeck R., Balzarini J. and Herdewijn P. // Synthesis and Anti-herpetic Activity of Phosphoramidate ProTides. // Chem.Med.Chem. 2013, V. 8, pp. 985 -993.

117. Lehsten D.M., Baehr D.N., Lobl T.J. and Vaino A.R. // An Improved Procedure for the Synthesis of Nucleoside Phosphoramidates. // Organic Process Research Development, 2002, V. 6, pp. 819-822.

118. Farquhar D., Srivastva D.N., Kattesch N.J., Saunders P.P. // Biologically reversible phosphate-protective groups. // J.Pharm.Sci. 1983, V. 72, pp. 324- 325.

119. Brenner C. // Hint, Fhit, and GalT: function, structure, evolution, and mechanism of three branches of the histidine triad superfamily of nucleotide hydrolases and transferases. // Biochemistry, 2002, V. 41, pp. 9003-9014.

120. Fong L.Y., Fidanza V., Zanesi N., Lock L.F., Siracusa L.D., Mancini R., Siprashvili Z., Ottey M., Martin S.E., Druck T., McCue P.A., Croce CM. and Huebner K. // Muir-Torre-like syndrome in Fhit-deficient mice. // Proc.Natl.Acad.Sci. USA, 2000, V. 97, pp. 4742-4747.

121. Peyrottes S., Egron D., Lefebvre I., Gosselin G., Imbach J.L., Perigaud C. // SATE pronucleotide approaches: an overview. //Mini.Rev.Med.Chem. 2004, V. 4, pp. 395-408.

122. Gouy M.H., Jordheim L.P., Lefebvre I., Cros E., Dumontet C., Peyrottes S., Perigaud C. // Special feature of mixed phosphotriester derivatives of cytarabine. // Bioorg.Med.Chem. 2009, V. 17, pp. 6340-6347.

123. Migliaccio G. // Characterization of resistance to non-obligate chain-terminating ribonucleoside analogs that inhibit hepatitis C virus replicathion in vitro. // J.Biol.Chem. 2003, V. 278, pp. 49164-49170.

124. Cretton-Scott E., Perigaud C., Peyrottes S., Licklider L., Camire M., Larsson M., La Colla M., Hildebrand E., Lallos L., Bilello J., McCarville J., Seifer M., Liuzzi M., Pierra C., Badaroux E.,

Gosslin G., Surleraux D. and Standring D.N. // In vitro antiviral activity and pharmacology of IDX184, a novel and potent inhibitor of HCV replication. // J.Hepatol. 2008, 48(Suppl.2), S220.

125. Zhou X.J., Pietropaolo K., Chen J., Khan S., Sullivan-Bolyai J. and Mayers D. // Safety and pharmacokinetics of IDX184, aliver-tardeted nucleotide polymerase inhibitor of hepatitis C virus, in healthy subjects. //Antimicrob.Agents.Chemother. 2011, V. 55, pp. 76-81.

126. Terry B.J., Mazina K.E., Tuomari A.V., Haffey M.L., Hagen M., Feldman A., Slusarchyk W.A., Young M.G., Zahler R., Field A.K. // Broad-spectrum antiviral activity of the acyclic guanosine phosphonate (R,S)-HPMPG. // Antiviral.Res. 1988, V.10, pp. 235-251.

127. Balzarini J., Holy A., Jindrich J., Naesens L., Snoeck R., Shcols D., De Clercq E. // Differential antiherpesvirus and antiretrovirus effects of the (S) and (R) enantiomers of acyclic nucleoside phosphonates: potent and selective in vitro and in vivo antiretrovirus activities of (R)-9-(2-phosphonomethoxypropyl)-2,6-diaminopurine. // Antimicrob.AgentsChemother. 1993, V.37, pp. 332-338.

128. De Clercq E. // Towards an Effective Chemotherapy of Virus Infections: Therapeutic Potential of Cidofovir [(S)-1-[3-Hydroxy-2-(phosphonomethoxy)propyl]cytosine, HPMPC] for the Treatment of DNA Virus Infections. // Collect.Czech.Chem.Commun. 1998, V.63, pp. 480-506.

129. Wolfe M.S., Borchardt R.T. // S-adenosyl-L-homocysteine hydrolase as a target for antiviral chemotherapy. // J.Med.Chem. 1991, V. 34, pp. 1521-1530.

130. Покровский А.Г., Проняева Т.Р., Федюк Н.В., Шипицын А.В., Широкова Е.А., Закирова Н.Ф. // Фосфорамидаты нуклеозидных аналогов - ингибиторы репродукции ВИЧ. // RU 2 243 972 C1, 2005.

131. Tedder J.M. // The Use Of Trifluoroacetic Anhydride And Related Compounds In Organic Syntheses. // Chem.Rev. 1955, V. 55. pp. 787-827.

132. Богачев В.С. // Исследование реакции трифторуксусного ангидрида с тимидин-5'-фосфатом. // Биоорган.Хим. 1995, Т. 21. стр. 212-217.

133. Shipitsyn A.V., Zakirova N.F., Belanov E.F., Pronyaeva T.R., Fedyuk N.V., Kukhanova M.K., Pokrovsky A.G. // Phosphorodiamides as prodrugs for antiviral nucleosides. // Nucleosides Nucleotides & Nucleic Acids, 2003, V. 22, pp. 963-966.

134. Варламова Т.Б., Колодкина И.И., Юркевич А.М. // Простой синтез цитидиндифосфатхолина //Хим.-Фарм. Жур. 1989. Т. 23. С. 1371-1374.

135. Carpino L.A., El-Faham A. // Effect of Tertiary Bases on O-Benzotriazolyluronium Salt-Induced Peptide Segment Coupling. // J.Org.Chem. 1994, V. 59, pp. 695-698.

136. Shirokova E.A., Tarussova N.B., Shipitsin A.V., Semizarov D.G., Krayevsky A.A. // Novel acyclic nucleotides and nucleoside 5'-triphosphates imitating 2',3'-dideoxy-2',3'-

didehydronucleotides: synthesis and biological properties. // J.Med.Chem. 1994, V. 37, pp. 37393748.

137. Hakimelahi G.H. // Antiviral Compounds. // Patent US 6825348 B2, 2004.

138. Bravo F., Viso A., Castillon S. // An expeditious and efficient procedure for the synthesis of unsaturated acyclonucleosides of Z configuration related to D4T. // J.Org.Chem. 2003, V. 68, pp. 1172-1175.

139. Phadtare S., Zemlicka J. // Synthesis of (Z)- and (E)-N9-(4-hydroxy-1-buten-1-yl)adenine - new unsaturated analogues of adenosine. // Tetrahedron Lett. 1990, V. 31, pp. 43-46.

140. Phelps M.E., Woodman P.W., Danenberg P.V. // Synthesis and biological activity of 5-fluoro-2'-deoxyuridine 5'-phosphorodiamidates. // J.Med.Chem. 1980, V. 23, pp. 1229-1232.

141. Simoncsits A., Tomasz J. // Nucleoside 5'-phosphordiamidates, synthesis and some properties. // NucleicAcidsRes. 1975, V. 2, pp. 1223-1233.

142. Baker R.O., Bray M, Huggins J.W. // Potential antiviral therapeutics for smallpox, monkeypox and other orthopoxvirus infections. // Antiviral Res. 2003, V. 57, pp. 13-23.

143. Skoblov Y.S., Karpenko I.L., Jasko M.V., Kukhanova M.K., Andronova V.L., Galegov G.A., Sidorov G.V., Myasoedov N.F. // Cell metabolism of acyclovir phosphonate derivatives and antiherpesvirus activity of their combinations with alpha2-interferon. // Chem.Biol.Drug.Des. 2007, V. 69, pp. 429-434.

144. Прокофьева М.М., Спирин П.В., Январев Д.В., Иванов А.В., Новиков М.С., Степанов О.А., Готтих М.Б., Кочетков С.Н., Fehse B., Stocking C., Прасолов В.С. // Скрининг потенциальных ингибиторов/блокаторов репликации ВИЧ-1 с помощью безопасной лентивирусной системы in vitro. // Acta Naturae, 2011, Т. 3, стр. 61-71.

145. Biancotto A., Brichacek B., Chen S.S., Fitzgerald W., Lisco A., Vanpouille C., Margolis L., Grivel J.-C. // A highly sensitive and dynamic immunofluorescent cytometric bead assay for the detection of HIV-1 p24. // J.Virolog.Methods. 2009, V. 157, pp. 98-101.

146. Khan A.S., Sears J.F., Muller J., Galvin T.A. and Shahabuddin M. // Sensitive Assays for Isolation and Detection of Simian Foamy Retroviruses. // J.Clin.Microbiol. 1999, V. 37, pp. 2678-2686.

147. Галегов Г.А., Шобухов В.М., Леонтьева Н.А., Ясько М.В. // Синтез и антигерпетическая активность фосфорных эфиров ацикловира. // Биоорган.Химия, 1997, Т. 23, стр. 906-909.

148. Gus'kova A.A., Skoblov M.Yu., Korovina A.N. Yasko M.V., Karpenko I.L., Kukhanova M.K., Andronova V.L., Galegov G.A., Skoblov Yu.S. // Antiherpetic properties of acyclovir 5'-hydrogenphosphonate and the mutation analysis of herpes virus resistant strains. // Chem.Biol.Drug.Des. 2009, V. 74, pp. 382-389.

149. Гуськова А.А., Загурный А.В., Скоблов М.Ю., Баранова А.В., Андронова В.Л., Янковский Н.К., Галегов Г.А., Скоблов Ю.С. // Молекулярно-генетический анализ тимидинкиназы вируса герпеса простого типа 1. //Мол.Биол. 2005, Т. 39, стр. 155-158.

150. De Clercq E., Descamps J., Verhelst A., Walker R.T., Jones A.S., Torrence P.F., Shugar D. // Comparative efficacy of antiherpes drugs against different strains of herpes simplex virus. // J.Infect.Dis. 1980, V. 141, pp. 563-574.

151. Holy A., De Clercq E., Votruba I. in Phosphonylmethyl Esters of Nucleosides and their Acyclic Analogues. Martin J.C., Ed.; Washington, 1989, pp 50.

152. Спирин П.В., Баскаран Д., Орлова Н.Н., Рулина А.В., Никитенко Н.А., Черноловская Е.Л., Зенкова М.А., Власов В.В., Рубцов П.М., Чумаков П.М., Стокинг К., Прасолов В.С. // Подавление экспрессии лейкозных онкогенов AML1-ETO и RUNX1(K83N) с помощью РНК-интерференции //Мол.Биол. 2010, V. 44, pp. 876-888.

153. Vanpouille C., Lisco A., Margolis L. // Acyclovir: a new use for an old drug. // Curr.Opin.Infect.Dis. 2009, V. 22, pp. 583-587.

154. Merbah M., Introini A., Fitzgerald W., Grivel J.-C., Lisco A., Vanpouille C., Margolis L. // Cervico-vaginal tissue ex vivo as a model to study early events in HIV-1 infection. // Am.J.Reprod.Immunol. 2011, V. 65, pp. 268-278.

7. БЛАГОДАРНОСТИ

Благодарю своего научного руководителя Кочеткова Сергея Николаевича за руководство при выполнении и терпение при редактировании текста диссертации.

Хотелось бы поблагодарить всех сотрудников лаборатории молекулярных основ действия биологически активных соединений за неоценимую помощь при выполнении работы.

Выражаю благодарность Прасолову Владимиру Сергеевичу и Прокофьевевой Марии Михайловне (Лаборатория клеточных основ развития злокачественных заболеваний), Андрновой Валерии Львовне (ФГБУ «Институт вирусологии им. Д.И. Ивановского» Минздрава России), Christophe Vanpouille (National Institutes of Health / National Institute of Child Health and Human Development, Bethesda, Maryland, United States of America) и Беланова Евгения Федоровича (ФГУН ГНЦ ВБ «Вектор») за проведение биологических исследований.