Прогностическое значение молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических нарушений в клетках по-верхностной уротелиальной карциномы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Башкатов, Сергей Валерьевич

• Башкатов, Сергей Валерьевич
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Башкатов, Сергей Валерьевич

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Клинические и морфологические факторы прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря

1.2. Клиническое применение молекулярно-цитогенетических нарушения в клетках поверхностной уротелиальной карциномы

1.3.Клиническое применение молекулярно-биологических нарушений в клетках поверхностной уротелиальной карциномы

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Общая характеристика больных

2.2. Методика флуоресцентной гибридизации

2.3. Определение молекулярно-биологических маркеров у пациентов с поверхностным раком мочевого пузыря

Глава 3. Результаты и их обсуждение

3.1. Взаимосвязь молекулярно-цитогенетических нарушений с клинико-морфологическими параметрами опухоли

3.2. Взаимосвязь молекулярно-биологических нарушений с клинико-морфологическими параметрами опухоли

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Прогностическое значение молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических нарушений в клетках по-верхностной уротелиальной карциномы»

Рак мочевого пузыря является распространенным заболеванием. На протяжении последних трех лет ежегодно в России диагностируется 12,5 тыс. новых случаев, что составляет 2,7 % всех злокачественных новообразований в Российской Федерации. На момент первичной установки диагноза доля больных с I-II стадией в 2005 году составила 55% [1]. Количество больных с впервые выявленным раком мочевого пузыря в 2006 году составило 12721 случая. Общий прирост заболевших с 1996 по 2006 год - 22,57%, среднегодовой прирост - 2,06%. В последнее время в России возрастает доля больных с поверхностным раком мочевого пузыря, что говорит об актуальности проблемы и необходимости разработки новых технологий ранней диагностики и лечения [4].

По данным зарубежных авторов наиболее распространенной клинической формой заболевания является поверхностный (Та, Т1, карцинома in situ -CIS) рак мочевого пузыря (70-80% больных) [56,55].

Стандартная лечебная тактика при поверхностном раке мочевого пузыря заключается в трансуретральной резекции опухоли и внутрипузырной химиоиммунопрофилактике. Однако 30-85% поверхностных раков рецидивируют после лечения, часто рецидивные опухоли возникают в другом месте слизистой мочевого пузыря, причем в 10-30% развиваются инвазивные и диссеминированные формы рака[56,55].

В связи с этим было предложено деление поверхностных переходно-клеточных карцином на три группы риска [5]. К первой группе относятся опухоли с низким риском рецндивирования, единичные, Та, G1, менее 3 см в диаметре. Ко второй группе можно отнести опухоли с высоким риском рецндивирования, Tl, G3, мультифокальные или часто рецидивирующие, имеющие сопутствующую CIS уротелия. Третью группу составляют опухоли с промежуточным риском: Та, Tl, G1-2, мультифокальные, более 3 см в диаметре.

Под прогрессированием поверхностного рака мочевого пузыря понимают развитие инвазивного рецидива опухоли (критерий Т), возрастание степени клеточной анаплазии (критерий G) или наличие метастатического процесса (критерий М) [22,34].

Формирование групп риска по прогрессированию заболевания также основано на морфологических параметрах опухоли [38].

1.Низкий риск: Ta-T1G1 без CIS. Прогрессирование не наблюдается.

2.Промежуточный риск: многоместный T1G1, TaG2, солитарная опухоль T1G2 без CIS. Прогрессирование - 1,8%.

3.Высокий риск: многоместный T1G2, Ta-T1G3, первичная CIS или другие опухоли совместно с CIS. Прогрессирование - 15%.

Группировка больных по морфологическим характеристикам не полностью отражает биологический потенциал уротелиальной карциномы, в связи с этим большое значение приобретает поиск дополнительных маркеров диагностики и прогноза у пациентов с поверхностным раком мочевого пузыря.

В результате развития фундаментальной биологии было показано, что в основе неопластической трансформации клеток лежат генетические и цитогенетические нарушения. Каждый тип опухоли имеет свой индивидуальный профиль геномных повреждений, что может влиять на клинический характер заболевания и определять его прогноз. Таким образом, в настоящее время, в связи с развитием молекулярной генетики, происходит активное изучение дополнительных маркеров, объединенных термином «молекулярно-биологпческие». К ним относятся количественные изменения хромосом, генные и структурные мутации, метилирование промоторных районов генов, определение экспрессии различных белковых продуктов в злокачественной клетке.

Однако, достижения фундаментальной биологии в изучении механизмов канцерогенеза должны иметь практическое применение в клинической онкологии. Основными направлениями использования этих данных в клинической практике являются: разработка систем ранней неинвазивной диагностики уротелиальной карциномы, применение в качестве дополнительных маркеров прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря и для разработки нового класса «таргетных» противоопухолевых препаратов.

Необходимость определения прогностического значения молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических маркеров послужила основанием для проведения данной работы.

Цель и задачи исследования

Цель данной работы заключается в выявлении дополнительных прогностических молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических маркеров у больных поверхностным раком мочевого пузыря. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Определить наиболее часто встречающиеся молекулярно-цитогенетические нарушения в клетках поверхностной уротелиальной карциномы.

2. Определить наиболее часто встречающиеся молекулярно-биологические аномалии в клетках поверхностной уротелиальной карциномы.

3. Определить прогностическое значение гиперплоидии 3,7,17 хромосом и делеции локуса 9р21.

4. Определить прогностическое значение мутации гена FGFR3, метилирования промоторного района гена р16, делеции локуса Зр- и гена р53.

5. Расширить панель прогностических критериев для поверхностного рака мочевого пузыря за счет новых молекулярно-генетических и молекулярпо-цитогенетических маркеров.

Научная новизна

Впервые для диагностики поверхностного рака мочевого пузыря, наряду с традиционными клин ико-морф о логическими методами, были применены современные молекулярно-цитогенетические и молекулярно-биологические методы исследования.

Были изучены наиболее часто встречающиеся молекулярно-цптогепетические аномалии в клетках поверхностной уротелиальной карциномы, полученных при исследовании цитогенетических препаратов мочи этих больных. Доказано, что гиперплоидия 3,7,17 хромосом и делеция локуса 9р21, определенные в опухолевых клетках пациентов, являются неблагоприятными факторами прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря.

Определена частота встречаемости молекулярно-генетических повреждений в клетках опухоли, полученных после оперативного лечения поверхностного рака мочевого пузыря, а так же выявлены ассоциации этих повреждений с клинико-морфологическими параметрами уротелиальной карциномы. Показано, что аномальное метилирование промоторного района гена р16, является маркером инвазивного роста опухоли. Делеция короткого плеча 3 хромосомы (Зр-) наиболее часто обнаруживается в низкоднфференцированных опухолях. Потеря , гетерозиготности гена р53 является маркером развития раннего рецидива. Мутация гена FGFR3 является маркером благоприятного течения поверхностного рака мочевого пузыря, т.к. эта мутация достоверно чаще определяется в высокодифференцированных опухолях с хорошим прогнозом.

Доказана возможность применения молекулярно-генетических и молекулярно-цитогенетических маркеров в качестве дополнительных факторов для определения прогноза клинического течения поверхностного рака мочевого пузыря.

Практическая значимость

Определение дополнительных молекулярно-генетических и молекулярно-цитогенетических маркеров в клетках поверхностной уротелиальной карциномы позволяет использовать их в качестве метода ранней неинвазивной диагностики поверхностного рака мочевого пузыря. Генетические маркеры имеют различное прогностическое значение, что позволяет дополнить и расширить систему клинико-морфологических факторов прогноза. Используя эти маркеры в клинической практике, можно с большей уверенностью прогнозировать риск рецидива и прогрессирования поверхностного рака мочевого пузыря. На основании полученных данных можно обосновать адекватную лечебную тактику — трансуретральная резекция опухоли, с последующей внутрипузырной терапией или радикальная цистэктомия. Изначальная оптимизация лечебной тактики приведет к повышению эффективности лечения больных. Разработанные методики могут быть рекомендованы для практического применения в онкологических клинических центрах и клиниках.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Башкатов, Сергей Валерьевич

Глава 5. ВЫВОДЫ

1. Наиболее часто встречающимися молекулярно-цитогенетическими нарушениями в клетках поверхностной уротелиальной карциномы, из исследуемых нами, являются гиперплоидия 3,7, 17 хромосом и делеция 9р21 локуса, которые наблюдались в 93% случаев.

2. Гиперплоидия 3,7, 17 хромосом и делеция 9р21 локуса являются неблагоприятными факторами прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря:

- обнаружение более 60% клеток с гиперплоидией 3,7 и 17 хромосом в цитогенетических препаратах больных поверхностным раком мочевого пузыря ассоциировано с низкодифференцированной (G3) уротелиальной карциномой (ВОЗ 1973г) (р<0,05).

- обнаружение более 40% клеток с гиперплоидией 3,7 и 17 хромосом в цитогенетических препаратах больных поверхностным раком мочевого пузыря ассоциировано с уротелиальной карциномой высокой степени злокачественности - high grade (ВОЗ 2004г) (р<0,05).

- делеция 9р21 локуса ассоциирована с развитием минимально инвазивной уротелиальной карциномой (р=0,07).

3. Наиболее часто встречающимися молекулярно-биологическими нарушениями в клетках поверхностной уротелиальной карциномы, из исследуемой нами панели, являются аномальное метилирование промоторных районов генов р!6 (15,3%), делеция Зр- (14,9%), мутация гена FGFR3 (25%).

4. Молекулярно-биологические нарушения в клетках поверхностной уротелиальной карциномы имеют различное прогностическое значение:

- аномальное метилирование гена р1б встречается в клетках минимально инвазивиых (Т1) уротелиальных карцином в 25% случаев, следовательно, может рассматриваться как маркер инвазивного роста опухоли (р=0,018).

- делеция Зр- встречается в клетках низкодифференцированных опухолей (G3) в 45,5% случаев, следовательно, может рассматриваться как маркер неблагоприятного прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря (р=0,017).

- при сроке наблюдения 30 месяцев безрецидивная выживаемость больных с потерей гетерозиготности р53 составила 32%, следовательно, это генетическое нарушение может рассматриваться как маркер неблагоприятного прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря (р=0,028).

-мутация гена FGFR3 встречается в только клетках умеренно и высокодифференцироваиных опухолей в 27,7% и 30,2% случаев, следовательно, может рассматриваться как маркер благоприятного прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря (р=Ю,05).

- мутация гена FGFR3 встречается в клетках опухолей маленького размера в 50% случаев, следовательно, может рассматриваться как маркер благоприятного прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря (р=0,028).

5. Использование в клинической практике молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических маркеров позволяет расширить общепринятую систему клинико-морфологических маркеров прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря.

Глава 4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Рак мочевого пузыря является распространенным заболеванием. На протяжении последних трех лет ежегодно в России диагностируется 12,5 тыс. новых случаев, что составляет 2,7 % всех злокачественных новообразований в Российской Федерации. На момент первичной установки диагноза доля больных с 1-Й стадией в 2005 году составила 55% [1]. Количество больных с впервые выявленным раком мочевого пузыря в 2006 году составило-12721 случая. Общий прирост заболевших с 1996 по 2006 год - 22,57%, среднегодовой прирост - 2,06%. В последнее время в России возрастает доля больных с поверхностным раком мочевого пузыря, что говорит об актуальности проблемы и необходимости разработки новых технологий ранней диагностики и лечения [4].

По данным зарубежных авторов наиболее распространенной клинической формой заболевания является поверхностный (Та, Т1, карцинома in situ -CIS) рак мочевого пузыря (70-80% больных) [56,55].

Стандартная лечебная тактика при поверхностном раке мочевого пузыря заключается в трансуретральной резекции опухоли и внутрипузырной хнмпоиммунопрофилактике. Однако 30-85% поверхностных раков рецидивируют после лечения, часто рецидивные опухоли возникают в другом месте слизистой мочевого пузыря, причем в 10-30% развиваются пнвазивпые и диссеминированные формы рака [56,55].

В связи с этим было предложено деление поверхностных переходно-клеточных карцином на три группы риска [5]. К первой группе относятся опухоли с низким риском рецидивирования, единичные, Та, G1, менее 3 см в диаметре. Ко второй группе можно отнести опухоли с высоким риском рецидивирования, Tl, G3, мультифокальные или часто рецидивирующие, имеющие сопутствующую CIS уротелия. Третью группу составляют опухоли с промежуточным риском: Та, Tl, G1-2, мультифокальные, более 3 см в диаметре.

Под прогрессированием поверхностного рака мочевого пузыря понимают развитие инвазивного рецидива опухоли (критерий Т), возрастание степени клеточной анаплазии (критерий G) или наличие метастатического процесса (критерий М) [22,34].

Формирование групп риска по прогрессированию заболевания также основано на морфологических параметрах опухоли [38].

1.Низкий риск: Ta-T1G1 без CIS. Прогрессирование не наблюдается.

2.Промежуточный риск: многоместный T1G1, TaG2, солитарная опухоль T1G2 без CIS. Прогрессирование - 1,8%.

3.Высокий риск: многоместный T1G2, Ta-T1G3, первичная CIS или другие опухоли совместно с CIS. Прогрессирование - 15%.

Группировка больных по морфологическим характеристикам не полностью отражает биологический потенциал уротелиальной карциномы, в связи с этим большое значение приобретает поиск дополнительных маркеров диагностики и прогноза у пациентов с поверхностным раком мочевого пузыря.

В исследовании изучены молекулярно-цитогенетические, молекулярно-биологические нарушений в клетках поверхностной уротелиальной карциномы и проанализирована их взаимосвязь с классическими клинико-морфологическими факторами прогноза течения заболевания — стадия, степень дифференцировки, размер и количество опухолей, длительность безрецидивного периода.

В настоящее время фирмой «UroVysion» разработан многоцветный FISH -набора. Набор характеризуется наличием цептромерных ДНК-зондов к 3, 7, 17 паре хромосом и локус-специфическим ДНК-зондом к 9р21 хромосоме. ДНК-зонды окрашены в красный, зеленый, голубой и золотой цвет, соответственно. (Vysis, Downers Grove,Illinois).

Для нормальной клетки характерен диплоидный набор хромосом, что будет выражаться в наличии двух сигналов каждого цвета. Опухолевая клетка больше нормальной уротелиальной клетки по размерам, количество флуоресцентных сигналов в ней может отличаться от двух.

В результате проведенной работы показано, что гипоплоидия 3,7 и 17 пар хромосом встречается редко и варьирует от 0 до 10%. Гипреплоидия локуса 9р21 так же варьирует 0-10%), лишь в трех случаях была обнаружена - 60100% клеток. В то же время гиперплоидия 3, 7 и 17 хромосом (4%-100%) и потеря локуса 9р21 (0-85%) встречались у всех больных.

В работе проанализирована частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в зависимости от степени дифференцировки опухоли, согласно классификации ВОЗ 1973 года. У 11 больных установлена высокодифференцированная уротелиальная карцинома. Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3 хромосомы в цитогенетических образцах этих больных составила 13,5±6,9%. Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 7 и 17 хромосомы - 8,7±4,9% и 6,3±4,0%, соответственно.

Больные с умеренно дифференцированной уротелиальной карциномой в исследовании наблюдались наиболее часто и составили группу из двадцати человек. Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3 хромосомы в цитогенетических образцах этих больных составила 24,2±15,8%. Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 7 и 17 хромосомы - 20,1±13,4% и 15,8±9,1%, соответственно.

В работе показано, что клетки с гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетических препаратах встречались во всех случаях, частота гиперплоидных клеток не превышала 25%. Статистически значимых различий в частоте встречаемости клеток с гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетических образцах больных с высоко и умеренно дифференцированной уротелиальной карциномой обнаружено не было.

У восьми больных при стандартном морфологическом исследовании установлена низкодифференцированная уротелиальная карцинома. Цитогенетический анализ с помощью FISH-метода позволил обнаружить клетки с большим количеством хромосомных нарушений у каждого пациента. Частота таких клеток варьировала от 26% до 100%, составляя в среднем 75%. Только у одного пациента частота клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосомы была сходной с пациентами из групп G1-G2.

Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3 хромосомы в цитогенетических образцах этих больных составила 65±18,6%, частота встречаемости клеток с гиперплоидией 7 и 17 хромосомы - 62,6±20,1% и 58,6±20,4%, соответственно.

В группе больных с G3 степенью дифференцировки опухолевых клеток все результаты FISH-анализа были положительны, но частота клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в цитогенетических препаратах значительно выше и составляет около 65%.

Различия в частоте встречаемости клеток с гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетических препаратах больных в группах G1-G2 и G3 статистически значимые (р<0,05), то есть частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в образцах мочи зависит от степени дифференцировки опухоли (ВОЗ 1973 год) и она выше в случае низкодифференцированной опухоли.

При использовании классификации ВОЗ 2004 года высокодифференцированная опухоль (low grade) обнаружена в нашем случае у 21 больного. Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3 хромосомы в среднем составила 14,4±6,9%, с гиперплоидией 7 хромосомы - 9,3±5,7%, а с гиперплоидией 17 хромосомы составила 7,1 ±5,8%.

Таким образом, частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в образцах мочи больных с высокодифференцированной (low grade) уротелиальной карциномой не превышает 15%.

Низкодифференцированная (high grade) уротелиальная карцинома была обнаружена в восемнадцати случаях. Частота клеток с гиперплоидией 3 хромосомы составила 47,2±27,9%, с гиперплоидией 7 хромосомы -44,7±17,8%, а с гиперплоидией 17 хромосомы - 39,2±17,1%.

Частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в образцах мочи больных с низкодифференцированной (high grade) уротелиальной карциной значительно выше, чем в случае высокодифференцированной (low grade) и составляет около 40% ((р<0,05).

Таким образом, показано, что частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3, 7 и 17 хромосом в цитогенетических препаратах больных поверхностным раком мочевого пузыря увеличивается в случае низкодифференцированной (high grade) уротелиальной карциномы, следовательно, высокое содержание (более 40%) таких клеток в цитогенетическом препарате является неблагоприятным фактором прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря.

Делеция 21 локуса короткого плеча 9 хромосомы (9р21) в исследовании встречалась с частотой от 0 до 85%. В работе проанализированы различия частоты встречаемости клеток с делецией 9р21 в цитогенетическом препарате больных в зависимости от степени инвазии (Та/Т 1) опухоли. В исследование включены 14 больных со стадией заболевания Та. Среднее значение частоты встречаемости клеток с делецией 9р21 хромосомы в цитогенетических образцах больных неинвазивной папиллярной уротелиальной карциномой (Та) составило 18,2%. У двадцати пяти больных установлена стадия Т1. Среднее значение частоты встречаемости клеток с делецией 9р21 хромосомы в образцах мочи у этих больных было 32,8% .

Сравнение средних значений частоты встречаемости клеток с делецией 9р21 хромосомы в цитогенетических образцах больных с различными стадиями рака мочевого пузыря показало, что в группе минимально инвазивной карциномы этот признак встречается чаще. Различия имеют тенденцию к достижению статистической значимости (р=0,07).

Молекулярно-биологические нарушения в клетках уротелиальной карциномы проанализированы у 72 больных поверхностным раком мочевого пузыря.

Аномальное метилирование гена р16 в группе больных с папиллярной неинвазивной карциномой обнаружено у одного 1 из 32 (3,125%), а в группе минимально инвазивной карциномы у 10 из 40, что составило 25%. Двухсторонний точный критерий Фишера составил р=0,018.

Таким образом, метилирование гена р16 достоверно чаще выявлено у пациентов с минимально инвазивной уротелиальной карциномой, что позволяет использовать это молекулярно-генетическое повреждение генома в качестве одного из показателей инвазивного роста опухоли.

Используя в работе классификацию ВОЗ 1973 года, было установлено, что степень дифференцировки опухоли G1 обнаружена у 18, G2 - у 43 и G3 - у 11 пациентов.

При исследовании панели молекулярно-биологических маркеров в зависимости от степени дифференцировки опухоли были получены следующие результаты.

Делеция короткого плеча 3 хромосомы (Зр-) в группе G1 не встречалась, в группе G2 обнаружена у 4 (10,3%) больных, а группе низкодифференцированного рака (G3) была найдена у 5 (45,5%).

При статистическом анализе получены статистически значимые различия по частоте встречаемости делеции Зр- в группах G2 - G3. Двухсторонний точный критерий Фишера составил р=0,017.

При сравнении групп Gl - G3 так же получены статистически значимые различия (р=0,0039). Частота встречаемости делеции Зр- увеличивается при нарастании степени клеточной анаплазии и наиболее часто встречается в низкодифференцированных (G3) опухолях, что позволят использовать данное молеклярно-биологическое нарушение в качестве маркера неблагоприятного течения рака мочевого пузыря.

Частота встречаемости мутации гена FGFR3 в группе G1 и G2 составили 27,7% (5/18) и 30,2%) (13/43), соответственно. Различий между группами по этому признаку нет, позволило нам сравнить объединенную группу (Gl- G2) с низкодифференцированной (G3) карциномой. В группе низкодифференцированных опухолей (G3) мутаций гена FGFR3 не было обнаружено. Получены статистически значимые различия по частоте встречаемости этого генетического нарушения (р=0,05).

Таким образом, мутация гена FGFR3 является благоприятным фактором прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря, а делеция короткого плеча 3 хромосомы (Зр-) - неблагоприятным.

Размер опухоли является важным фактором прогноза течения заболевания. В нашей работе опухоли менее одного сантиметра в диаметре встречались в восьми случаях (11,1%), более трех сантиметров в семнадцати случаях (23,6%). Самую многочисленную группу составили опухоли размером от одного до трех см - 47 (65,5%) случаев. Среди опухолей малого размера мутация гена FGFR3 встречалась в 50% случаев, а среди опухолей промежуточного размера только у 6 больных из 47, что составило 12,8%. Рассчитанный двухсторонний точный критерий Фишера составил р=0,028. Таким образом, мутацию гена FGFR3 можно рассматривать как благоприятный фактор прогноза течения поверхностного рака мочевого пузыря.

Развитие рецидивной опухоли в первый год после установления диагноза поверхностного рака мочевого пузыря является важным неблагоприятным прогностическим признаком. В нашей работе рецидивы развились у 13 больных (18,1%). У 59 (81,9%) больных за время наблюдения рецидивов не было. Количество рецидивов варьировало от одного до трех. У одной пациентки (7,7%) развился мышечноинвазивный рак. Рецидивы развивались в срок от трех до тридцати месяцев. Локализация рецидивных опухолей мочевого пузыря отличалась от месторасположения первичной опухоли. При сроке наблюдения 30 месяцев в группе больных с нормальным р53 безрецидивная выживаемость составила 71%, а в группе больных с потерей гетерозиготности р53 - 32% (р=0,028). Различия в группах статистически значимы.

Исходя из вышеизложенных данных, мы считаем, что молекулярно-цитогенетические и молекулярно-биологические изменения в клетках уротелиальной карциномы имеют важное клиническое значение. Нам представляется обоснованным их использование в качестве дополнительных прогностических факторов. Дополнение к классическим клинико-морфологическим факторам прогноза риска рецидивирования и прогрессирования можно представить следующим образом.

Риск рецидива:

1. Низкий риск - единичные, Та, G1, менее 3 см в диаметре, мутация гена FGFR3(S249С).

2. Высокий риск - Tl, G3, мультифокальные или часто рецидивирующие, имеющие сопутствующую CIS уротелия, делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р!6 , высокая частота встречаемости клеток гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетическом препарате, высокая частота встречаемости клеток с гипоплоидией 9р21 в цитогенетическом препарате.

3. Промежуточным риск - Та, Tl, G1-2, мультифокальные, более 3 см в диаметре, мутация гена FGFR3{ S249C), делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р16, высокая частота встречаемости клеток гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетическом препарате, высокая частота встречаемости клеток с гипоплоидией 9р21 в цитогенетическом препарате.

Промежуточный риск рецидивирования:

Та, Tl,Gl-2, мультифокальные, более 3 см мутация гена FGFR3{S249C) делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р16, высокая частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3,7,17 хромосом и с гипоплоидией \9р21 в цитогенетическом препарате

Низкий риск: единичные, Та, G1, менее 3 см.

Высокий риск:

Tl, G3, мультифокальные, сопутствующая CIS.

Рис. № 14. Клиническое применение молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических маркеров прогноза в формировании групп риска рецидивирования поверхностного рака мочевого пузыря.

Риск ирогрессироваиия:

1.Низкий риск - Ta-T1G1 без CIS, мутация гена FGFR3{S249C).

2.Высокий риск - многоместный T1G2, Ta-T1G3, первичная CIS или другие опухоли совместно с CIS, делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р16 , высокая частота встречаемости клеток гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетическом препарате, высокая частота встречаемости клеток с гипоплоидией 9р21 в цитогенетическом препарате.

3.Промежуточный риск - многоместный T1G1, TaG2, солитарная опухоль T1G2 без CIS, мутация гена FGFR3{S249C), делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р16 , высокая частота встречаемости клеток гиперплоидией 3,7,17 хромосом в цитогенетическом препарате, высокая частота встречаемости клеток с гипоплоидией 9р21 в цитогенетическом препарате.

Промежуточный риск прогрессирования: многоместный Т1G1, TaG2, солитарная опухоль T1G2 без CIS мутация гена FGFR3(S249C) делеция Зр-, потеря гетерозиготности р53, аномальное метилирование промоторного района гена р16, высокая частота встречаемости клеток с гиперплоидией 3,7,17 хромосом и с гипоплоидией \,9р21 в цитогенетическом препарате

Низкий риск:

Ta-T1G1 без CIS

Высокий риск: многоместный T1G2, Ta-T1G3, первичная

CIS или другие опухоли совместно с CIS

Рис. № 15. Клиническое применение молекулярно-цитогенетических и молекулярно-биологических маркеров прогноза в формировании групп риска прогрессирования поверхностного рака мочевого пузыря.

Использование панели молекулярных и цитогенетических маркеров дает дополнительную информацию о злокачественном потенциале опухоли и позволяет разделить группу промежуточного риска рецидивирования и прогрессирования. Уротелиальные карциномы этих групп можно с большей уверенностью отнести к группам низкого или высокого риска на основании преобладающих генетических нарушений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Башкатов, Сергей Валерьевич, 2008 год

1. Давыдов М.И., Аксель Е.М. Статистика злокачественных новообразования в России и странах СНГ в 2005году. Вестник российского онкологического научного центра имени Н.Н.Блохина РАМН №2, 2007 г, том 18, приложение 1.

2. Лопаткин Н.А., Мартов Б.М. и др. Современные подходы в лечении поверхностного рака мочевого пузыря. В кн.: Рак мочевого пузыря: Материалы 4-й Всероссийской научной конференции с участием стран СНГ. М., 2002г. стр. 50-51.

3. Строганова A.M., Хачатурян А.В. Возможности применения флуоресцентной in situ гибридизации в диагностике рака мочевого пузыря. Архив патологии №5, 2006 год, стр.43-46.

4. Чиссов В.И., Старинский В.В., Петрова Г.В. Злокачественные новообразования в Росси в 2006 году (Заболеваемость и смертность). Москва 2008 год.

5. Allard P., Bernard P., Fradet Y. et al. The early clinical course of primary Та and T1 bladder cancer. Europ.Urol.l998;Vol.8.1:P692-698.

6. Awata S., Sakagami H., Tozawa K. et al. Aberration chromosome 8 and 11 in bladder cancer detected by fluorescence in situ hybridization. Urol. Res. 2000; 28:185-90.

7. Bakkar A. A., Wallerand H., Radvanyi F. et al. FGFR3 and TP53 gene mutation two distinct pathways in urothelial cell carcinoma of the bladder. Cancer Research 63, 8108-8112, December 1, 2003.

8. Bas W.G., van Rhijn., Lurkin I. et al. The fibroblast growth factor receptor 3 (FGFR3) mutation is a strong indicator of superficial bladder cancer with low recurrence rate. Cancer Research 61, 1265-1268, February 15,2001.

9. Bas W.G. van Rhijn. Urine markers for bladder cancer surveillance: a systematic review. European Urology 47(2005)736-748.

10. Belinsky S.A., Nikula K.J., Palmisano W.A. et al. Aberrant methylationof pi6 (INK4a) is an early event in lung cancer and potential biomarker for early diagnosis. Proc Natl Acad Sci USA 1998,95:11891-11896.

11. Billerey C., Chopin D., Aubriot-Lorton M.H. et al. Frequent FGFR3 mutation in papillaiy non-invasive bladder (pTa) tumors. American Journal of Pathology. 2001; 158:1955-1959.

12. Bubendorf L., Grilli В., Sauter G. et al. Multiprobe FISH for enhanced detection of bladder cancer in voided urine specimens and bladder washings. Am. J Clin Pathol 116:79-86, 2001.

13. Cairns P., Polascik T.J., Eby Y. et al. Frequence of homozygous deletions at pl6/CDKN2 in primary human tumors. 1995 Nat Genet, 11(2):210

14. Cordon-Cardo C., Dalbagni G., Saez G.T. et al. P53 mutation in human bladder cancer: Genotypic vs phenotypic patterns. Int.J. Cancer 56:347353,1994.

15. Dalbagni G., Presti J.C., Reuter V.E. et al. Genetic alterations in bladder cancer. 1994 Lancet 342:469

16. Degtyar P., Neulander E., Zirkin H. et al. Fluorescence in situ hybridization performed on exfoliated urothelial cell in patients with transitional cell carcinomas of the bladder. Urology 63:398-401, 2004.

17. Dominguez G., Carballido J., Silva J. et al. pl4ARF promoter hypermethylation in plasma DNA as indicator of disease reccurence in bladder cancer patients. Clin.Canc.Res.2002 Apr; 8:980-985.

18. Erbersdobler A., Ftiedrich M.G., Schaibold H. et al . Microsatellite alterations at chromosomes 9p, 13q and 17p in nonmuscle-invasive transitional cell carcinomas of the urinary bladder. Oncol. Res. 1998; 108.:415-20.

19. Esrig D., Elmajian D., Groshen S. et al. Accumulation of nuclear p53 and tumor progression in bladder cancer. N. Engl. J Med 331:1259-1264, 1994.

20. Esrig D., Spruk C.H. 3 rd, Nichols P. W. et al. P53 nuclear protein accumulation correlates with mutation in the p53 gene, tumor grade, and stage in bladder cancer. Am. J. Pathol. 143:1389-1397,1993.

21. Fleming F., Huang A., Pu Y. et. al. Urinary bladder. In: Cancer staging manual. Philadelphia:Lippincot-Raven; 1997.241-24).

22. Friedrich M.G., Toma M.I., Helltsern A. et al. Comparison of multitarget fluorescence in situ hybridization in urine with other noninvasive teat for detecting bladder cancer. BJU Int. 92: 811-914, 2003.

23. Hailing K., King W., Sokolova I.A. et al. A comparison of BTA stat , hemoglobin dipstick, telomerase and Vysis «UroVysion» assays for the detection of urothelial carcinoma in the urine. J Urol. 167:2001-2006, 2002.

24. Hailing K., King W., Sokolova I.A. et al. A comparison of cytology and fluorescence in situ hybridization for the detection of urothelial carcinoma. J Urol. 164:1768-1775, 2000.

25. Hartmann A., Schlake G., Zaak D., et al. Occurrence of chromosome 9 and p53 alteration in multifocal displasia and carcinoma in situ of human urinary bladder. 2002. Can.Res. 62 p. 809-818.

26. Inoue Т., Nasu Y., Tsusima T. et al. Chromosomal numerical aberrations of exfoliated cells in the urine detected by fluorescence in situ hybridization: clinical implication for the detection of bladder cancer.1. Urol.Res.2000;28: 57-61.

27. Ishiwata S., Takahashi S., Homma Y. et al. Noninvasive detection and prediction of bladder cancer by fluorescence in situ hybridization analysis of exfoliated urothelial cells in voided urine. Urology 2001; 57:811-5.

28. J. Stephen Jones. DNA-based molecular cytology for bladder cancer surveillance. Urology 67 (Supplement ЗА), March 2006.

29. Jiang F., Caraway N.P., Sabichi A.L. et al. Centrosomal abnormality is common in and a potential biomarker for bladder cancer. Int. Journal Cancer 2003Sep 20; 106(5):661-5.

30. Kurt К. H. The nature history and prognosis of tread superficial bladder cancer. EORTC GU Group. Prog.Clin.Biol.Res.-1992.Vol.378.-Pl.

31. Li M., Zhang Z.F., Reuter V.E. et al. Chromosome 3 allelic losses and microsatellite alterations in transitional cell carcinoma of the urinary bladder. American Journal of Pathology. Vol. 149. № 1. July 1996.

32. Malmstrom P., Busch C., Norlen B.J. et al. Recurrences, progression and survial in bladder cancer. Scand.J.Urol.Nephrol.1987; 21(2): 185.

33. Marano A., Pan Y., Li C. et al. Chromosomal numerical aberration detected by fluorescence in situ hybridization on bladder washing from patients with bladder cancer. European Urology 2000; 37:358-65.

34. Mian C., Lodde M., Comploj E. et al. Multiprobe-FISH: prognostic perspectives in superficial bladder cancer. JPC 2006;59:984-7.

35. Michael W.Y. Hypermethylation of multiple genes in tumor tissues and voided urine in urinary bladder cancer patients. Clinical Cancer Research Vol.8, 464-470, February 2002.

36. Millan-Rodrigez F., Chechile-Toniolo R., Salvador-Bayarri J. Multivariate analysis of the prognostic factors of primary superficial bladder cancer. J. Urol. (Baltimore) 2000; 163:68-7.

37. Obermann E.C., Meyer S., Hellge D. et al Fluorescence in situ hybridization detects frequent chromosome 9 deletions and aneuploidy inhistologically normal urothelium of bladder cancer patients. Oncol. Rep. 2004 Apr; 11(4): 745-51.

38. Perl A.K., Wilgenbus P., Dahl U. et al. A casual role for E-cadherin in the transition from adenoma to carcinoma. Nature 1998; 392:190-3.

39. Placer J., Espinet В., Salido M. et al. Clinical utility of a multiprobe FISH assay in voided urine specimens for detection of bladder cancer and its recurrences, compared with urinary cytology. European Urology 42(2002) 547-552.

40. Prat E., Bernues M., Caballin M.R. et al. Detection of chromosomal imbalances in papillary bladder tumors by comparative genomic hybridization. Urology 2001; 57:986-92.

41. Pycha A., Lodde M., Comploj E. et al. Intermediate-risk urothelial carcinoma: an unresolved problem? Urology 63(3), 2004;472-75.

42. Pycha A., Mian C., Haitel A. et al. Fluorescence in situ hybridization identifies more aggressive types of primarily noninvasive (stage Та) bladder cancer. J. Urology 1997; 157:2116-9.

43. Reeder J., Connel M.J., Yang Z. et al. DNA cytometry and chromosome 9 abberations by fluorescence in situ hybridization of irrigation speciment from bladder cancer patients. Urology 1998; 51 (Suppl 5A) 58-61.

44. Ribal M.J., Alcaraz A., Mengual L. et al. Chromosomal high-polysomies predict tumor progression in T1 transitional cell carcinoma of the bladder. European Urology, 2004 May;45(5):593-9.

45. Sarkis A.S., Dalbagni G., Cordon-Cardo C. et al. Nuclear overexpression of p53 protein in transitional cell bladder carcinoma: A marker for disease progression. J. Natl. Cancer Inst 85:53-59,1993.

46. Sarosdy M.F., Schellhammer P, Bokinsky G. et al. Clinical evaluation of a multi-target fluorescence in situ hybridization assay for detection of bladder cancer. J Urol 168:1950-1954, 2002.

47. Sauter G., Mihatstch M.J. et al. Pussycats and baby tigers: non-invasiveрТа) and minimally invasive (pTl) bladder carcinomas are not the same! J. Pathology 1998; 185:339-41.

48. Shariat S.F., Matsumoto K., Casella R. et al. Urinary levels of soluble E-cadherin in the detection of transitional cell carcinoma of the urinary bladder. European Urology 48(2005)69-76.

49. Sokolova I.A., Hailing K., Jenkins R. et al. The development of a multitarget, multicolor fluorescence in situ hybridization assay for the detection of urothelial carcinoma in urine. Journal of Molecular Diagnostics, Vol.2 № 3.August 2000.

50. Spruk C.H. 3 rd, Ohneseit P.F., Gonzalez-Zulueta M. et al. Two molecular pathways to transitional cell carcinoma of the bladder. Cancer Res. 1994; 54:784-88.

51. Stamouli M.I., Panani A.D., Ferti A.D. et al. Detection of genetic alterations in primary bladder carcinoma with dual-control and multiplex fluorescence in situ hybridization. Cancer Genet. Cytogenet. 2004 Mar; 149 (2):107-13.

52. Sylvester R., Kurth K., Denis L. et al. Predicting the short-term and long-term prognosis of patients with Та, Tl bladder cancer: Result of EORTC/MRC randomized clinical trials.Europ.Urol.2001; 39:471-480.

53. Takahashi T. Predicting urothelial carcinoma recurrences with fluorescence in situ hybridization analysis of urine. J. Urology, suppl., 167: 162, abstract 651,2002.

54. Varella-Garcia M., Akduman В., Sunpaweravong P. et al. The UroVysion fluorescence in situ hybridization assay is an effective tool for recurrence of bladder cancer. Urol Oncol 22:16-19, 2004.

55. Veeranachaneni R., Nordberg M.L., Shi R. et al. Evaluation of fluorescence in situ hybridization as an ancillary tool urine cytology in diagnosing urothelial carcinoma. Diagn. Cytopathol. 2003. Jun; 28 (6):301-7.

56. Vet J.A., Bringuer P.P., Schaafsma H.E. et al. Comparison of P53 protein overexpression with P53 mutation in bladder cancer: Clinical and biologic aspects. Lab. Invest. 73:837-843,1995.

57. Vogelstein В., Kinzler K.W. Cancer genes and the pathways they control. Nature Medicine. -2004. v. 10. - P. 789-799.

58. Wang H.R., Huang H.C., ITsieh L.M. et al. Nonrandom changes of chromosome 10 in bladder cancer. Detection by FISH to interphase nuclei. Cancer Genet. Cytogenet.1994 Mar; 73 (1);8-10.