Внутриклеточные протеиназы в патогенезе и прогнозе злокачественных новообразований тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, доктор медицинских наук Спирина, Людмила Викторовна

• Спирина, Людмила Викторовна
• доктор медицинских наук
• 2013

Оглавление диссертации доктор медицинских наук Спирина, Людмила Викторовна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Особенности патогенеза и прогноза злокачественных новообразований почки, мочевого пузыря, эндометрия, плоскоклеточных карцином головы и шеи

1.1.1. Рак почки, особенности патогенеза и прогноза

1.1.2. Рак мочевого пузыря, особенности патогенеза и прогноза

1.1.3. Рак эндометрия, особенности патогенеза и прогноза

1.1.4. Плоскоклеточные карциномы головы и шеи, особенности патогенеза и прогноза

1.2. Внутриклеточные протеасомная и кальпаиновая протеолитические системы, их взаимосвязь

1.2.1. Протеасомная система

1.2.2. Кальпаиновая система

1.2.3. Взаимосвязь систем деградации белков в клетке

1.2.4. Роль протеасомной системы в молекулярном патогенезе злокачественных новообразований

1.2.5. Роль кальпаинов в развитии злокачественных новообразований

1.3. Транскрипционные и ростовые факторы, их роль в развитии злокачественных новообразований

1.3.1. Транскрипционный фактор ОТ-кВ, его роль в онкогенезе

1.3.2. Транскрипционный фактор НП7, его связь с развитием онкологических заболеваний

1.3.3. Сосудистый эндотелиальный фактор роста (УЕОР), его роль в патогенезе онкологических заболеваний

1.3.4. Система инсулиноподобных факторов роста и металлопротеиназа РАРР-А, их роль в патогенезе онкологических заболеваний

1.4. Регуляция содержания транскрипционных и ростовых факторов внутриклеточными протеиназами при раке почки, мочевого пузыря, раке

эндометрия и плоскоклеточных карциномах головы и шеи

ЗАКЛЮЧЕНИЕ К ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. МАТЕРИАЛ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1.1. Клиническая характеристика больных раком почки

2.1.2. Клиническая характеристика больных раком мочевого пузыря

2.1.3. Клиническая характеристика больных раком эндометрия

2.1.4. Клиническая характеристика больных плоскоклеточными карциномами области головы и шеи

2.2. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.2.1. Определение тотальной активности протеасом и активности пулов протеасом

2.2.2. Определение активности кальпаинов

2.2.3. Определение субъединичного состава протеасом методом Вестерн-блоттинг

2.2.4. Определение содержания транскрипционных факторов ГШ7-1а и

кВ (р50 и р65 форм)

2.2.5. Определение содержания ростовых факторов УЕОБ, ИФР-1, ИФР-И, белков связывающих ИФР ГСРВР-З, ЮГВР-4 и металлопротеиназы РАРР-А

2.2.6. Определение содержания белка по методу Лоури

2.2.7. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии рака почки, в регуляции содержания транскрипционных факторов и ростового фактора УЕОР

3.1.2. Активность кальпаинов в ткани рака почки, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.1.3. Взаимосвязь между активностями внутриклеточных протеиназ в ткани рака почки

3.1.4. Экспрессия транскрипционного фактора №"-кВ в ткани рака почки, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.1.5. Экспрессия транскрипционного фактора НПМ и ростового фактора УЕОБ при раке почки, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.1.6. Взаимосвязь между экспрессией транскрипционных факторов

кВ р65, МБ-кВ р50, НПМ а и ростового фактора УЕвБ при раке почки

3.1.7. Протеолитическая регуляция содержания транскрипционных факторов и ростового фактора УЕОБ при раке почки

3.1.8. Прогностическая значимость определения показателей внутриклеточного протеолиза, экспрессии транскрипционных факторов и ростового фактора \rEGF при раке почки

3.1.9. Создание прогностической модели развития гематогенных

метастазов при раке почки

3.2. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии рака мочевого пузыря, в регуляции содержания транскрипционных факторов и ростового фактора УЕОБ

3.2.1. Активность протеасом и их субъединичный состав в ткани рака мочевого пузыря, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.2.2. Активность кальпаинов в ткани рака мочевого пузыря, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.2.3. Взаимосвязь между активностями внутриклеточных протеиназ в ткани рака мочевого пузыря

3.2.4. Экспрессия транскрипционного фактора ОТ-кВ в ткани переходноклеточного рака мочевого пузыря, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.2.5. Экспрессия транскрипционного фактора НІР-1а и ростового фактора УЕОБ при раке мочевого пузыря, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.2.6. Взаимосвязи между экспрессиями транскрипционных факторов

кВ р65, ОТ-кВ р50, ИР-1а и ростового фактора УЕОБ при раке мочевого пузыря

3.2.7. Протеолитическая регуляция содержания транскрипционных факторов и ростового фактора УЕОБ при раке мочевого пузыря

3.2.8. Прогностическая значимость определения показателей внутриклеточного протеолиза, экспрессии транскрипционных факторов и

ростового фактора УЕвР при раке мочевого пузыря

3.3. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии рака эндометрия, в регуляции содержания транскрипционных факторов, ростового фактора УЕвР и компонентов инсулиноподобных факторов роста

3.3.1. Активность протеасом, их субъединичный состав в ткани рака эндометрия, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания и рецепторным статусом опухоли

3.3.2. Активность кальпаинов при раке эндометрия, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.3.3. Взаимосвязь между активностями внутриклеточных протеиназ в ткани рака эндометрия

3.3.4. Экспрессия транскрипционного фактора М^кВ в ткани рака эндометрия, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания и рецепторным статусом опухоли

3.3.5. Экспрессия транскрипционного фактора НИМ и ростового фактора УЕОР в ткани рака эндометрия, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания и рецепторным статусом опухоли

3.3.6. Содержания инсулиноподобных факторов роста, их связывающих белков и металлопротеиназы РАРР-А в ткани рака эндометрия

3.3.8. Взаимосвязь между экспрессиями транскрипционных и ростовых факторов в ткани рака эндометрия

3.3.7. Протеолитическая регуляция содержания транскрипционных и ростовых факторов в ткани рака эндометрия

3.3.9. Прогностическая значимость определения показателей внутриклеточного протеолиза, экспрессии транскрипционных факторов и

ростового фактора VEGF при раке эндометрия

3.4. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии плоскоклеточных карцином головы и шеи, в регуляции содержания транскрипционных факторов и ростового фактора VEGF

3.4.1. Активность протеасом, их субъединичный состав в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.4.2. Активность кальпаинов в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.4.3. Взаимосвязь между активностями внутриклеточных протеиназ в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи

3.4.4. Экспрессия транскрипционного фактора NF-кВ в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.4.5. Экспрессия транскрипционного фактора HIF-1 и ростового фактора VEGF в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи, связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания

3.4.6. Взаимосвязь между экспрессиями транскрипционных факторов и ростового фактора VEGF в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи

3.4.7. Протеолитическая регуляция содержания транскрипционных факторов и ростового фактора VEGF в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи

3.4.8. Прогностическая значимость определения показателей внутриклеточного протеолиза, экспрессии транскрипционных факторов и ростового фактора VEGF в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи

3.4.9. Создание прогностической модели развития лимфогенных

метастазов при плоскоклеточных карциномах головы и шеи

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

4.1. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии и прогнозе рака почки

4.2. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии и прогнозе рака мочевого пузыря

4.3. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии и прогнозе рака эндометрия

4.4. Роль внутриклеточных протеиназ в развитии и прогнозе

плоскоклеточных карцином головы и шеи

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ИФР (insulin-like growth factor, IGF) - инсулиноподобный фактор роста; ОГШ - опухоли головы и шеи;

ПКГШ - плоскоклеточные карциномы головы и шеи; РМП - рак мочевого пузыря; РП - рак почки; РЭ - рак эндометрия;

bFGF (basic fibroblasts growth factor) - основной фактор роста фибробластов; EGFR (epithelial growth factor receptor) - рецептор эпидермального фактора роста;

ER -рецепторы эстрогенов;

HIF-1 (hypoxia inducible transcription factor family) - ядерный фактор, активируемый гипоксией;

IGFBP (insulin-like growth factor binding protein) - белки, связывающие инсулиноподобные факторы роста;

NF-кВ (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells) - ядерный фактор NF-кВ;

PAPP-A (pregnancy-associated plasma protein) - белок, ассоциированный с беременностью; PR -рецепторы прогестеронов;

TGF (transforming growth factor) - трансформирующий фактора роста; VEGF (vascular endothelial growth factor) - сосудистый эндотелиальный фактор роста;

VHL (von Hippel-Lindau) - белок фон Хиппель-Линдау;

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Внутриклеточные протеиназы в патогенезе и прогнозе злокачественных новообразований»

ВВЕДЕНИЕ

Онкологические заболевания являются важной медико-социальной проблемой современной России. В настоящее время отмечен неуклонный рост заболеваемости данной патологией среди лиц трудоспособного возраста, приводящий к ранней инвалидизации и увеличению уровня смертности среди больных. Достаточно высокий удельный вес в общей структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями населения России занимают: плоскоклеточные опухоли головы и шеи (4,4%), рак тела матки (3,8%), почки (3,6), мочевого пузыря (2,7%). У мужчин значительную группу составляют злокачественные опухоли органов мочеполовой системы, что составляет 19,9% от всех злокачественных новообразований, в которые входят злокачественные новообразования мочевого пузыря (4,5%) и почки (4,3). Злокачественные новообразования тела матки (7,1%) занимают второе место в структуре онкологической патологии репродуктивных органов у женщин, уступая лишь опухолям молочной железы [10].

Рост заболеваемости злокачественными новообразованиями, преобладание среди них распространенных форм ставит перед фундаментальной онкологией новые задачи по поиску оптимальных маркеров опухолевого роста, прогрессирования заболевания, а также значимых прогностических показателей, которые позволят своевременно скорректировать лечение и улучшить выживаемость больных. Одним из перспективных подходов является изучение систем внутриклеточного протеолиза [339, 341]. Существуют данные, которые показывают, что протеолиз обеспечивает такие важные процессы, определяющие опухолевый рост, как пролиферативная активность, апоптоз, регуляция неоангиогенеза, функционирование иммунной системы и индукция лекарственной резистентности [14, 63, 79, 188].

Основными компонентами внутриклеточного протеолиза являются протеасомная и кальпаиновая системы[14, 15, 33, 163]. Протеасомы

представлены 26S и 20S субпопуляциями, которые имеют разные функции в клетке. Полный специфический протеолиз происходит в 26S протеасоме, которая расщепляет белки, несущие специальные маркеры - убиквитины. В 20S протеасоме разрушаются аномальные и короткоживующие белки без присоединения убиквитинов [310]. Протеасомы представлены конститутивными и иммунными формами. Известно, что появление иммунных типов (LMP7, LMP2, РА28) субъединиц в составе протеасом связано с изменением их ферментативной активности [33, 163].

Нарушение в функционировании протеасомного комплекса имеет большое значение в развитии онкологических заболеваний различных локализаций, в частности, толстой кишки, легких, молочной железы и др. [96, 103, 126, 136, 282, 305]. Однако эти факты, в основном, носят экспериментальный характер и получены на культурах клеток. В экспериментальных условиях показана апоптотическая гибель раковых клеток эндометрия при применении ингибитора протеасом - бортезомиба [267]. Изучение тканей опухолей показало, что прогрессирование злокачественных новообразований почки и мочевого пузыря тесно связано с изменением состояния протеасом и уровня убиквитинированных белков [79]. Активность протеасом в ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи, ее связь с клинико-морфологическими параметрами заболевания не изучена.

Кальций зависимая кальпаиновая система деградации представлена семейством внутриклеточных нелизосомальных протеаз, состоящим из 14 изоформ ферментов. Два основных фермента (m и \i, т.е. кальпаин 1 и 2) широко изучены и представлены повсеместно. Они обладают сходным строением и различаются по различной чувствительности к кальцию [306].

В настоящее время имеется незначительное количество данных об участии кальпаинов в процессах канцерогенеза и опухолевой прогрессии. Кальпаины могут стимулировать рост опухолевых клеток, участвуя в деградации некоторых онкосупрессорных белков таких как р53, NF2, IkBa, р107 и др. [61, 175]. Изменение активности и экспрессии кальпаинов и их

и

ингибитора - кальпастатина было зарегистрировано в клеточных культурах колоректального рака [235], рака эндометрия [155, 161], почечноклеточной карциномы [60, 61, 101] по сравнению с клеточными культурами соответствующих нормальных тканей. В целом, роль кальпаинов в прогрессировании злокачественных новообразований почки, мочевого пузыря, эндометрия и плоскоклеточных карцином головы и шеи не исследована.

Деградация белков и полипептидов при участии внутриклеточных протеиназ имеет огромное значение в жизнедеятельности клетки. Их субстратами выступают многие регуляторные белки, транскрипционные и ростовые факторы и их рецепторы.

Одним из наиболее значимых транскрипционных факторов в развитии злокачественных опухолей является NF-кВ (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells), который представлен 5 регуляторными белками (р50, р65, р52, c-Rel, Rel-B). Эти белки формируют гомо- и гетеродимеры различного строения. Функционально активными и наиболее изученными считаются гетеродимер р65/р50 и гомодимер р65/р65 [49, 172]. Помимо того, что NF-кВ вовлечен в стресс-индуцированные, иммунные и воспалительные реакции, он ассоциирован также с апоптозом и контролем пролиферации клеток, что делает понятным роль этого транскрипционного фактора в канцерогенезе [42]. В отсутствии стимулирующих сигналов NF-кВ находится в цитоплазме в ассоциации с ингибитором (1кВ). Ключевым этапом активации NF-кВ является освобождение его из комплекса с ингибитором -IkB и протеасомная деградация последнего.

Ядерный фактор HIF-1 (hypoxia inducible transcription factor family) является гетеродимером, состоящим из а и Р субъединиц, активность фактора зависит от экспрессии и посттрансляционных модификаций а-субъединиц. Увеличение экспрессии транскрипционного фактора HIF-la сопровождается активацией ангиогенеза, усилением основного и энергетического обмена с повышением содержания сосудистого эндотелиального фактора роста [204].

Также показано, что снижение деградации НИ7-1а при использовании ингибиторов протеасом или при гипоксии приводит к значительному повышению экспрессии сосудистого эндотелиального фактора роста (УЕСТ) в опухолевых клетках [21, 220, 308]. Среди факторов роста, связанных с метастазированием, наиболее известен УЕвЕ. Однако протеолитическая регуляция экспрессии УЕОБ в опухолях различного происхождения исследована недостаточно.

К числу патогенетически значимых ростовых факторов, участвующих в развитии рака эндометрия, относят семейство инсулиноподобных факторов роста и белков, связывающих их. Выявлено участие протеасом в регуляции системы инсулиноподобных факторов роста на культурах клеток. Однако нет данных, свидетельствующих о протеолитической регуляции ростовых факторов в тканях злокачественных новообразований.

Таким образом, в настоящее время, несмотря на участие внутриклеточных систем протеолиза в развитии патологических состояний, данные об их особенностях при развитии злокачественных новообразований различного происхождения представлены недостаточно. Нет убедительных сведений о связи ростовых и транскрипционных факторов с внутриклеточным протеолизом [37, 56]. В целом, протеолитическая регуляция экспрессии ростовых и транскрипционных факторов, которые определяют возникновение и прогрессирование злокачественных опухолей, не исследована. Учитывая важную роль внутриклеточных протеолитических систем и регулируемых ими ростовых и транскрипционных факторов в патогенезе рака, важным практическим приложением работы может явиться разработка новых молекулярных маркеров прогноза течения онкологических заболеваний.

Цель исследования. Изучение роли внутриклеточных протеиназ в патогенезе злокачественных новообразований почки, мочевого пузыря, эндометрия, плоскоклеточных карцином головы и шеи с определением их прогностической значимости.

Задачи исследования:

1. Изучить химотрипсинподобную активность протеасом, их субъединичный состав и активность кальпаинов в опухолевой ткани больных раком почки, мочевого пузыря, эндометрия, плоскоклеточными карциномами головы и шеи, сопоставить изучаемые показатели с соответствующими значениями неизмененных тканей.

2. Изучить экспрессию транскрипционных факторов ОТ-кВ (р50 и р65), ЮТ-1а и содержания ростового фактора УЕОБ в тканях опухолей почки, мочевого пузыря, эндометрия и плоскоклеточных карцином головы и шеи.

3. Определить экспрессию инсулиноподобных факторов роста (ИФР-1, ИФР-П), их связывающих белков и металлопротеиназы РАРР-А в ткани рака эндометрия.

4. Изучить взаимосвязи активности внутриклеточных протеиназ с экспрессией ростовых и транскрипционных факторов в тканях злокачественных новообразований для выяснения патогенетических механизмов опухолевой прогрессии.

5. Оценить взаимосвязь изучаемых молекулярных показателей с клинико-морфологическими параметрами заболевания у больных злокачественными новообразованиями.

6. Оценить прогностическую значимость компонентов внутриклеточных протеолитических систем у изучаемого контингента больных.

7. Разработать математические модели прогноза риска развития гематогенных метастазов у больных раком почки и лимфогенных метастазов больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи.

л

Научная новизна

Впервые исследована химотрипсинподобная активность протеасом, их субъединичный состав, а также активность кальпаинов в опухолевой ткани больных раком почки, мочевого пузыря, эндометрия и плоскоклеточным раком головы и шеи. Выявлено тканеспецифичное изменение активности, субъединичного состава протеасом и активности кальпаинов в опухолях различных локализаций, а именно, повышение активности протеасом и кальпаинов, мочевого пузыря, головы и шеи по сравнению с окружающей условно нормальной тканью, повышение активности протеасом в тканях рака эндометрия и снижение этих показателей в ткани рака почки. Изменения активности протеасом связаны с изменением экспрессии субъединиц протеасом.

Получены принципиально новые сведения о зависимости изучаемых показателей от клинико-морфологических параметров заболевания. Показано, что развитие гематогенных метастазов у больных раком почки связано со снижением активности протеасом и возрастанием активности кальпаинов в первичной опухоли, что сопровождается увеличением содержания ядерных факторов М^кВ р65, НШ-1 и ростового фактора УЕОБ. У больных раком мочевого пузыря увеличение глубины инвазии опухоли приводит к повышению активности 268 протеасом, кальпаинов, а также к снижению экспрессии транскрипционного фактора ОТ-кВ р50. По мере увеличения стадии рака эндометрия наблюдалось повышение активности 208 протеасом и кальпаинов. Рецепторный статус опухоли эндометрия ассоциирован с активностью протеасом, а также с экспрессией транскрипционного фактора №-кВ р50. У больных ПКГШ с увеличением стадии заболевания наблюдается повышение активности протеасом и кальпаинов, которое сопровождается изменением содержания транскрипционного фактора №-кВ р50.

Теоретическая и практическая значимость

Полученные результаты расширяют представления о роли протеасомной и кальпаиновой систем в патогенезе злокачественных новообразований почки, мочевого пузыря, эндометрия и плоскоклеточных карцином головы и шеи. Показано, что в исследованных опухолевых тканях активность протеасом и кальпаинов коррелирует с экспрессией транскрипционных факторов М^кВ и ЮТ-1, что подтверждает возможность регуляции этих биологически важных молекул системами внутриклеточного протеолиза. В опухолях эндометрия другим важным протеолитическим регулятором содержания факторов роста ИФР-1, УЕвР и ядерного фактора ИЛМ является металлопротеиназа РАРР-А.

Выявлена прогностическая значимость определения активности протеасом для оценки безметастатической и общей выживаемости больных раком почки, а также общей выживаемости больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи. Безметастатическая выживаемость больных опухолями головы и шеи ассоциирована с экспрессией транскрипционных факторов ОТ-кВ р65, №-кВ р50 и НПМа. На основании полученных данных методом многомерной статистики построена модель прогнозирования развития гематогенных метастазов рака почки и лимфогенных метастазов плоскоклеточных карцином головы и шеи.

Положения, выносимые на защиту

1. Химотрипсинподобная активность протеасом и активность кальпаинов в опухолях мочевого пузыря и плоскоклеточных раков головы и шеи значительно превышает соответствующий показатель в условно нормальной нетрансформированной окружающей опухоль ткани, для пациенток с опухолями эндометрия характерно увеличение только активности протеасом. У больных раком почки активность внутриклеточных протеиназ снижена. Повышение активности протеасом

тесно связано с их субъединичным составом, а именно, с увеличением содержания иммунных и 20Б активированных форм.

2. Об участии протеасом и кальпаинов в регуляции транскрипционных и ростовых факторов свидетельствуют взаимосвязи между активностью протеасом, их пулов, активностью кальпаинов и экспрессией транскрипционных факторов КБ-кВ, ЮТ-1а и ростового фактора УЕОБ у больных раком почки, мочевого пузыря и с ростовым фактором ИФР-1 у пациенток с опухолями эндометрия. Кроме того, в опухолях эндометрия показана ассоциация между экспрессией металлопротеиназы РАРР-А и содержанием ЮТ-1а и ИФР-1.

3. Активность протеасом ассоциируется с безрецидивной выживаемостью больных раком мочевого пузыря, безметастатической выживаемостью больных раком почки, а также с общей выживаемостью пациентов с опухолями почки и плоскоклеточными карциномами головы и шеи. Возникновение локорегионарных рецидивов при раке эндометрия зависит от субъединичного состава протеасом. Экспрессия транскрипционных факторов МБ-кВ р65, ИР-кВ р50 и ЮТ-1а связана с прогнозом рецидивирования рака мочевого пузыря и безметастатической выживаемостью больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи.

Апробация работы

Основные результаты работы представлены в докладах и тезисах следующих конференций: Российских научно-практических конференциях с международным участием, г. Барнаул, 2007-2009; конференции молодых специалистов - онкологов Уральского федерального округа, г. Челябинск: 2008г.; Ш-УШ конференциях молодых ученых им. Академика РАМН Н.В. Васильева г. Томск, 2008-2013; III Конгрессе с международным участием «Опухоли головы и шеи», г. Сочи, 2009 г; Российской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 30-летию НИИ онкологии СО РАМН «Современная онкология: достижения и перспективы

ч I

развития», г. Томск, 2009г.; Всероссийской научно-практической конференции с международным участием, г. Казань 2009 г.; VI съезде онкологов и радиологов стран СНГ, г. Душанбе, 2010 г.; V Российском симпозиуме «Белки и пептиды», г. Петрозаводск, 2011 г.; 8-й конференции по фундаментальной онкологии, ФГБУ НИИ онкологии им. Н. Н. Петрова Минздравсоцразвития России, г. Санкт-Петербург, 2012 г.; 11 Всероссийской конференции молодых ученых, г. Москва, 2011 г.; 17th International meeting of the European society of gynaecological oncology (ESGO) Milan, Italy, 201 lr.; Седьмом съезде онкологов и радиологов стран СНГ, г. Астана, 2012г.;

Работа выполнялась в рамках гранта Российского фонда фундаментальных исследований № 08-04-00616, а также Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России на 2009-2013 годы» (Государственный контракт №П320). По итогам исследования оформлено 1 ноу-хау «Новая мишень таргетной терапии злокачественных новообразований различных локализаций» (ноу-хау №2 от 01.10.2012).

Публикации

Основные результаты диссертации опубликованы в 45 печатных работах, в том числе 22 статьи в отечественных и зарубежных рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК.

Внедрение результатов исследования

Результаты исследования используются в обучении студентов и клинических ординаторов при изучении вопросов, посвященных патогенетическим аспектам, диагностике и лечения онкологических заболеваний различных локализаций на кафедре онкологии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава РФ.

Личный вклад автора.

Анализ данных литературы по теме диссертации, планирование исследования, определение цели, задач, выбор методов исследования, его

проведение, статистический анализ результатов и написание диссертации выполнены лично автором.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 287 страницах и иллюстрирована 24 рисунками и 93 таблицами. Библиография включает 344 литературных источника, из которых 23 отечественных и 321 иностранный.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Особенности патогенеза и прогноза злокачественных новообразований почки, мочевого пузыря, эндометрия, плоскоклеточных карцином головы и шеи

В число основных локализаций в общей структуре заболеваемости злокачественными новообразованиями населения России входят: плоскоклеточные опухоли головы и шеи (4,4%), рак тела матки (3,8%), рак почки (3,6), рак мочевого пузыря (2,7%). Существуют характерные особенности и различия в заболеваемости онкологической патологией, связанные с полом. Значимую по удельному весу группу у мужчин формируют злокачественные опухоли органов мочеполовой системы, составляя 19,9% всех злокачественных новообразований. Значителен удельный вес злокачественных новообразований мочевого пузыря (4,5%), почки (4,3), гортани (2,6%) в структуре опухолей мужского населения. Наибольший удельный вес в структуре онкологической заболеваемости женщин имеют злокачественные новообразования органов репродуктивной системы (37,6%). Опухоли тела матки (7,1%) занимают второе место в структуре злокачественной патологии, уступая новообразованиям молочной железы [10].

Прогрессия злокачественных новообразований включает инвазивный рост, рецидивирование и метастазирование, которые являются мультистадийными процессами, заключительная фаза которых приводит к летальному исходу. Молекулярные механизмы, определяющие способность опухолевых клеток к реализации этих процессов, недостаточно выяснены, что является одним из приоритетных направлений фундаментальной онкологии. Феномен малигнизации в настоящее время рассматривается как длительный многостадийный процесс накопления генетических повреждений, приводящих к продукции белков и пептидов, необходимых для опухолевого роста, инвазии и метастазирования. Непрерывно прогрессируя,

х

1' ,11

опухоль претерпевает качественные изменения в направлении увеличения злокачественности, что отражается на прогнозе заболевания.

Опухоли различных локализаций имеют свойственные только им маркеры развития и прогноза, которые определяются специфичностью патологических процессов, участвующих в онкогенезе. Известно, что для рака почки большое значение имеет гематогенное распространение опухоли, которое определяет выживаемость больных. Рак мочевого пузыря представлен довольно разнородной группой больных, выделение из их числа лиц с повышенным риском повторного рецидивирования является одной из актуальных задач современной онкологии. Для рака эндометрия характерна выраженная зависимость от гормонального фона, развитие опухоли связано с наличием у больных сопутствующей патологии, а именно, метаболического синдрома. Плоскоклеточные карциномы головы и шеи относят к ракам, которые имеют выраженные анатомо-топографические особенности, часто выявляются в запущенном состоянии, с распространением на регионарные лимфоузлы, что определяет не только тяжесть заболевания, но и довольно агрессивную тактику комбинированного лечения.

Увеличение частоты встречаемости, запущенности онкологических заболеваний почки, мочевого пузыря, эндометрия и плоскоклеточного рака области головы и шеи является важной медико-социальной проблемой. Существующие в настоящее время маркеры роста и прогрессирования заболевания обладают низкой чувствительностью и специфичностью, что ограничивает возможности их широкого применения. Поэтому обоснование новых патогенетических механизмов развития рака и разработка на их основе современных прогностических маркеров остается актуальной задачей в онкологии.

1.1.1. Рак почки, особенности патогенеза и прогноза

Заболеваемость раком почки в настоящее время неуклонно растет, что связано как с улучшением диагностики новообразований данного органа, так

4

V

и с ростом истинной заболеваемости [176]. Ежегодно в мире регистрируется около 230 тыс. новых случаев рака почки (РП) и более 100 тыс. летальных исходов. В России показатели заболеваемости данным видом опухоли возросли с 1998 по 2008 г. с 9,0 до 12,2 на 100 тыс. населения. Среднегодовой темп прироста РП составляет 1,62% и занимает третье место по данному критерию среди всех новообразований после опухолей головного мозга и меланомы кожи [10]. Заболевание характеризуется отсутствием ранних симптомов, поздней клинической манифестацией и резистентностью к лучевой и химиотерапии. Основной причиной летальности при опухолях почки являются отдаленные метастазы, механизм развития которых исследован недостаточно.

Большинство опухолей почки представлено светлоклеточным почечноклеточным раком. В канцерогенезе светлоклеточных карцином наиболее характерным событием является инактивация гена VHL (von Hippel-Lindau syndrome). Ген VHL (von Hippel-Lindau) кодирует белок VHL -один из компонентов ЕЗ лигазы [133, 320], которая в условиях нормы присоединяет убиквитины к транскрипционному фактору HIF-la и способствует его дальнейшей деградации в протеасомах [331]. Дефектная убиквитин ЕЗ лигаза не связывается с транскрипционным фактором, который, в свою очередь, не подвергается расщеплению и накапливается в клетках, результатом чего является рост продукции ангиогенных факторов, среди которых основное значение имеет ростовой фактор VEGF [150, 177, 328, 196].

Для почечноклеточного рака в настоящее время определены следующие прогностические факторы как TNM стадия, ECOG статус (Estern Cooperative Oncology Group), градация по Фурману, гистологический тип опухоли, уровень гемоглобина и активность лактатдегидрогеназы [257]. Однако на данный момент времени с развитием таргетной терапии рака почки существует ряд дополнительных показателей, эффективность которых еще не определена. К ним относятся HIF-зависимые факторы (HIF-1 - nuclear

hypoxia inducible factor, CAIX - carbonic Anhydrase IX,

VEGF/VEGFR), факторы клеточной адгезии (кадхерин Е), маркеры пролиферации (Ki-67, МСМ-2; р27, циклины), сигнальные молекулы m-TOR пути (PTEN, Akt), белки, связанные с апоптозом (р53, bcl-2) [224].

В оценке прогноза для рака почки характерно комплексное применение молекулярных и клинико-морфологических показателей. Kim et al. (2004) применял молекулярные показатели в комбинации с существующими прогностическими факторами [332]. В результате проведенного исследования была сформирована прогностическая модель, включающая следующие молекулярные и клинические показатели как CAIX, р53, TNM, статус ECOG. Однако эффективность ее применения до сих пор не оценена.

Активация ангиогенеза имеет большое значение для светлоклеточного почечноклеточного рака. К значимым факторам ангиогенеза для данной патологии относят плотность микрососудов в опухоли. Известно, что его « выраженность отражает интенсивность процесса метастазирования и связана с экспрессией транскрипционного фактора, активируемого гипоксией (HIF-1) и ростового фактора VEGF [139]. Ряд исследователей показывают, что увеличение экспрессии ядерного фактора HIF-1 сочетается с ростом уровня VEGF в ткани рака почки, коррелирует с размером опухоли, TNM стадией и ' прогнозом заболевания [111, 309].

Способность опухолевых клеток к росту и распространению в организме связана с разрушением экстраклеточного матрикса матриксными металлопротеиназами. В исследованиях Miyta Y. показано, что совместное исследование количества микрососудов в ткани рака и уровня экспрессии матриксной металлопротеиназы-2 позволяет оценить размеры опухоли [105]. Данный факт указывает на сложный характер процессов роста и развития опухоли, несомненными участниками которых являются белки внеклеточного матрикса.

Накопление ядерного фактора HIF-1 в опухоли является мощным

стимулом для активации неоангигенеза. Кроме ростового

фактора УЕвР к ним относят трансформирующий фактор роста (ТОР-а), основной фактор роста фибробластов (ЬРОР), а также рецепторы эпидермального фактора роста (БОРЯ) и др [47]. Известно, что содержание ЕРОЯ и ТОР-а в почечноклеточных опухолях повышено, отмечена их связь с размером опухоли [240]. Экспрессия ЬРОР и его рецептора также связана со стадией заболевания и развитием метастазирования [159]. Кроме того, известна роль других белковых маркеров в развитии данной патологии. Так плацентарный фактор роста и тромбоспондин, по данным Ма18ито1:о К., являются независимыми прогностическими факторами при развитии светлоклеточных почечноклеточных карцином [256].

Среди маркеров клеточного цикла значение для развития рака почки имеют белки р27 и циклин Дефицит белка р27 найден в большинстве опухолей почки и может быть использован в качестве независимого фактора прогноза выживаемости больных [202].

В последние годы наблюдается накопление знаний и представлений о патогенезе рака почки. Развитие таргетной терапии и попытка ее широкого применения в современной онкологии позволяет выделить новые факторы развития заболевания [114]. Высокая частота выявления метастатического рака почки предрасполагает к поиску новых дополнительных маркеров прогноза заболевания, выживаемости больных, что в конечном итоге имеет своей целью применение индивидуального подхода в лечении данной категории больных.

1.1.2. Рак мочевого пузыря, особенности патогенеза и прогноза

Рак мочевого пузыря (РМП) представляет собой разнородную по своему гистологическому строению группу новообразований. Более 90% опухолей мочевого пузыря представлено переходноклеточным раком, меньший процент приходится на плоскоклеточные раки и аденокарциномы. Известно,

что РМП не входит в состав основных раковых синдромов, поэтому семейная наследственность опухолей мочевого пузыря наблюдается редко.

У большинства пациентов, имеющих неинвазивный рак мочевого пузыря, наблюдается рецидивирование, а у 10% происходит формирование мышечно-инвазивной формы заболевания [182]. Поиск параметров, связанных с ранней диагностикой рецидивов заболевания и формированием групп повышенного риска является важной задачей современной онкологии. [180].

Однако наряду с известными факторами риска развития рака мочевого пузыря все большее значение приобретают генетические показатели. Риск развития РМП повышен у носителей мутаций, инактивирующих гены так называемой «mismatch" репарации ДНК [267]. Среди специфичных для РМП мутаций выделяют активацию онкогена c-H-ras, c-erb-B2 [102, 268], c-myc и mdm-2 [68, 236], наличие которых ассоциировано с размером опухоли. Известно, что эти показатели являются независимыми маркерами рецидивирования поверхностного рака мочевого пузыря [99].

Развитие опухоли зависит от состояния регуляторов клеточного цикла (Rb - retinoblastoma gene, р53, р21, р27), которые осуществляют контроль пролиферативной активности клетки [206]. Для рака мочевого пузыря характерно снижение экспрессии и функции протеина гена Rb [35], что сочетается с формированием агрессивных форм опухоли. Отмечается, что появление мутантных и измененных форм белка р53 в опухоли мочевого пузыря [26] на фоне недостаточности белка р21 ассоциировано с плохим прогнозом заболевания [90]. Pizzo J.J. (1999) показал, что снижение содержания р27, циклинов D и Е наблюдается при увеличении размеров опухоли мочевого пузыря и коррелирует с прогнозом заболевания [199]. В связи с этим антигены, ассоциированные с пролиферативной активностью, к которым относят Ki-67, PCNA (Proliferating Cell Nuclear Antigen), MCM, имеют большое значение в качестве маркеров опухолевого роста и

независимых показателей рецидивирования патологического

процесса [249].

Рост и прогрессировать переходноклеточных опухолей мочевого пузыря тесно связан с процессом роста и формирования новых сосудов. Выявлена роль ангиогенных маркеров в развитии рака мочевого пузыря. Увеличение плотности микрососудов [38], рост содержания ростовых факторов ЕвР (эпидермальный фактор роста), ТвБ-Р (трансформирующий фактор роста - (3), УЕвР (сосудистый эндотелиальный фактор роста), РОР (фактор роста фибробластов) и их рецепторов [156] наблюдаются в ткани опухоли, что приводит к прогрессированию заболевания.

Важным процессом, связанным с опухолевым ростом, является эпителиально-мезенхимальный переход, который сопровождается потерей межклеточных связей и изменением экспрессии СВ44, кадхеринов и интегринов. Выявлено увеличение экспрессии СБ44 в ткани поверхностного рака мочевого пузыря. Также отмечается, что резкое снижение его содержания происходит при инвазии опухолевых клеток в мышечный слой [232]. Недостаточность кадхерина Е, обеспечивающего межклеточные взаимодействия, выявлена в ткани переходноклеточного рака мочевого пузыря, что сочетается с инвазией опухоли в мышечный слой [201]. Снижение экспрессии интегринов а2(31 и появление а6(34 выявлено в большинстве опухолей данной локализации [109]. Значима роль протеиназ межклеточного матрикса в прогрессировании переходноклеточного рака мочевого пузыря. Экспрессия матриксных металопротеиназ 2 и 9 повышается в сыворотке и моче больных с опухолями мочевого пузыря [154] и, вероятно, способствует активации локомоторных свойств опухолевых клеток.

Распространенные в настоящее время молекулярные и генетические показатели прогрессии РМП не позволяют диагностировать полный спектр опухолевых заболеваний данного органа [219]. Развитие новых подходов, поиск дополнительных маркеров опухолевого роста является одной из задач современной медицины, что связано с возможностью своевременного

выявления больных с повышенным риском в отношении развития рецидивов и прогрессирования заболевания, а также с индивидуализацией их лечения.

1.1.3. Рак эндометрия, особенности патогенеза и прогноза

Частота заболеваемости раком тела матки, продолжающая возрастать в России, может рассматриваться как показатель роли социально-экономических, этнических, генетических и ассоциированных с ними или независимых гормонально-метаболических факторов в патогенезе заболевания. Известно, что в течение последних десятилетий лидирует представление о значении гиперэстрогении в создании условий для развития опухоли эндометрия. Однако необходимо отметить влияние гиперинсулинемии/инсулинорезистентности, избыточной продукции андрогенов и прегенотоксического сдвига, связанного с нарушением толерантности к глюкозе [3].

В соответствии с этим выделяют два патогенетических варианта рака эндометрия. Первый вариант определяют у 60-70 % больных раком эндометрия, у которых наблюдают гиперэстрогению и метаболические нарушения. Второй патогенетический вариант отмечен у 30-40 % больных и характеризуется отсутствием вышеописанных эндокринных и метаболических нарушений. При первом варианте рак эндометрия развивается на фоне гиперпластических процессов эндометрия. Эти опухоли протекают клинически более благоприятно и, как правило, чувствительны к гормонотерапии. Второй путь развития рака эндометрия связывают с мутацией генов - онкосупрессоров, фоном для развития которого является нормальный эндометрий или его атрофия. В этом случае рак эндометрия протекает более агрессивно и связан с отсутствием ответа на гормонотерапию [3, 5, 6, 23].

Также в настоящее время большое значение придается молекулярно-генетическим параметрам риска и развития эндометриального рака [41, 216].

4 *

Маркерами эндометриоидных карцином гормонозависимого типа

являются активация онкогена гена-супрессора РТЕЫ [287] и делеция и/или мутация р53 [44, 92]. Протеин РТЕЫ задерживает клеточное деление и является проапоптотическим фактором. Мутация РТЕЫ может быть частично модулирована гормональным воздействием, так как PTEN экспрессируется только в эстроген-активируемой пролиферативной фазе менструального цикла [215]. Использование РТЕЫ для диагностики явных эндометриальных карцином ограничено, так как половина эндометриоидных раков не экспрессирует протеин РТЕЫ [215]. Р53 является супрессорным геном, способным индуцировать остановку роста и запускает программируемую клеточную смерть. Мутантный белок накапливается в ядрах и может быть легко выявлен в большинстве серозных аденокарцином эндометрия [44].

Большое значение в развитии гормонозависимых опухолей придается ферментам стероидогенеза. Полиморфизм ряда ферментов стероидогенеза, к которым относят СУР 19 (ароматазу), СУР 17 (17-гидроксилазу), 17,20-лиазы, СУР1В1 (4-гидроксилазы эстрогенов), а также рецепторов эстрогенов ЕЯ имеет большое значение в патогенезе опухолей слизистой матки и в прогнозе заболевания [1, 6, 9].

Молекулярные исследования позволяют утверждать, что эндометриоидные карциномы начинаются как моноклональные разрастания генетически измененных предраковых клеток с признаками микросателлитной нестабильности. Самые ранние молекулярные изменения, включая РТЕЫ, можно определить на стадии, когда эндометриальные железы еще не подверглись морфологическим изменениям [215]. Накопление генетических повреждений приводит к появлению гистологически очевидных моноклональных поражений [22].

Несмотря на явные успехи в изучении патогенеза рака эндометрия, прогноз заболевания в клинической онкологии определяется рядом клинико-морфологических параметров. Известно, что рецидивирование заболевания находится в тесной связи с возрастом больных, общая выживаемость

коррелирует со стадией заболевания, глубинной инвазии в миометрий и степенью дифференцировки опухоли [254].

Таким образом, патогенез опухолей эндометрия является мультистадийным процессом, его регуляция осуществляет на разных уровнях, что определяет разные подходы к изучению его развития, а также лежит в основе выбора лекарственной терапии заболевания.

1.1.4. Плоскоклеточные карциномы головы и шеи, особенности

патогенеза и прогноза

Патогенез плоскоклеточных карцином головы и шеи включает генетическую предрасположенность совместно с факторами окружающей среды, среди которых наибольшее значение имеют табакокурение [336], злоупотребление алкоголем [277], хроническое воспаление, а также вирусная инфекция [71]. Возникновение плоскоклеточных карцином головы и шеи связано с активацией проонкогенов и инактивацией белков-онкосупрессоров. К таким важным молекулярно-генетическим факторам относят онкогены туе, егЬВ-2, рецептор эпидермального фактора роста, cyclin Dl и мутации, связанные с инактивацией онкосупрессоров р16 and р53 [11, 207]. Онкогены можно разделить на несколько групп: ростовые факторы и их рецепторы, внутриклеточные сигнальные метаболиты, транскрипционные факторы, регуляторы клеточного цикла и факторы связанные с инактивацией апоптоза [122, 218].

В развитии и прогрессировании онкологической патологии принимают участие несколько групп факторов, среди которых большое значение имеют белки клеточной адгезии (кадхерины, интегрины), компоненты межклеточного матрикса, белки и регуляторные пептиды, участвующие в регуляции ангиогенеза. Кадхерины и интегрины относятся к числу важных маркеров опухолевого роста при ПКГШ, которые способствуют формированию межклеточных связей и опосредуют влияние

экстраклеточного матрикса на клетки. Выявлено, что содержание Е-кадхерина резко снижается в опухолевых клетках ПКГШ [89], что связано с размером опухоли и степенью ее гистологической дифференцировки. Изменение экспрессии интегринов (а2, аЗ, аб, ßln ß4) и белков экстраклеточного матрикса было выявлено в опухолях гортани и гортаноглотки. Данные изменения имеют связь с прогнозом заболевания и наиболее выражены в опухолях с плохим прогнозом [34, 289].

Высока роль микроокружения в патогенезе опухолей головы и шеи, в частности, известна роль матриксных металлопротеиназ и их ингибиторов в прогрессировании заболевания [12, 203]. Катепсин-D - лизосомальная эндопептидаза связана с деградацией компонентов экстраклеточного матрикса, ее содержание коррелирует с поражением регионарных лимфоузлов при ПКГШ [333].

Процесс неоангиогенеза играет важную роль в развитии плоскоклеточных раков. Наряду с плотностью микрососудов в опухоли, которая является морфологическим показателем метастазирования [326], в настоящее время уделяется большое внимание другим маркерам, связанным с ангиогенезом. Выраженный рост экспрессии транскрипционного фактора HIF-1 наблюдается у больных с плохим прогнозом выживаемости [73, 105, 315,]. Однако по данным Eckert A.W. увеличение эффективности прогноза больных с плоскоклеточными опухолями головы и шеи связано с включением в перечень прогностических факторов наряду с самим HIF-1 некоторых продуктов его активации, к которым относят переносчик глюкозы GLUT-1, ростовой фактор VEGF, карбонангидразу IX [69, 73].

Также имеются сведения о плохой выживаемости больных ПКГШ с VEGF-позитивными опухолями по данным иммуногистохимического исследования [137]. При этом выраженность экспрессии данного фактора роста не зависит от степени гистологической дифференцировки опухоли и наличия регионарных метастазов.

В механизмах метастазирования опухоли также выявлена роль хемокиновых рецепторов (ССЫ). Высокий уровень экспрессии ССЯ7 при снижении содержания ССЯ6 характерен для метастатических клеточных линий плоскоклеточного рака [111].

В целом, несмотря на успехи в хирургическом и комбинированном лечении ПКГШ, прогноз заболевания остается неблагоприятным. В настоящее время показаны определенные комбинации молекулярных показателей, которые являются наиболее информативными для диагностики и в оценке прогноза течения опухоли [12, 217, 299], что позволят не только индивидуализировать лечение, но и улучшить прогноз заболевания. Однако чувствительность и эффективность их применения до сих пор не определена.

Следовательно, несмотря на то, что в опухолях головы и шеи исследовано большое количество молекулярных и генетических маркеров, их прогностическая значимость и клиническая эффективность являются до сих пор сомнительными. Вследствие этого размер опухоли, наличие регионарных метастазов, возраст пациента при манифестации заболевания до сих пор остаются главными критериями при принятии терапевтического решения.

Данное состояние проблемы в онкологии ставит перед собой задачу дальнейшего изучения дополнительных клинических и биологических факторов, что, вероятно, будет способствовать развитию подходов ранней диагностики рецидивов заболевания, прогнозирования результатов лечения для каждого конкретного больного.

1.2. Внутриклеточные протеасомная и кальпаиновая протеолитические системы, их взаимосвязь

Системы внутриклеточного протеолиза, осуществляющие деградацию белков в клетке, представлены двумя основными путями: лизосомальным и нелизосомальным. Лизосомальная система разрушает белки, связанные с мембранами, а также чужеродные, захваченные во время эндоцитоза, что

является неспецифическим процессом. Нелизосомальные

внутриклеточные протеолитические системы представлены, главным образом, убиквитинзависимой протеасомной и кальпаиновой системами. Известно, что комплекс протеаз, осуществляющих регуляцию жизнедеятельности опухолевой клетки, получил название раковый деградом [188].

1.2.1. Протеасомная система

Убиквитин-зависимая протеасомная деградация белков является конечным этапом внутриклеточного протеолиза в клетке [19, 20]. Известно, что она играет важную роль в процессах регуляции жизнедеятельности клетки: в ней подвергаются расщеплению аномальные или коротко-живущие регуляторные белки (в том числе белки, контролирующие прогрессию клеточного цикла, такие как циклины, регулятор репарации ДНК, белок р53 и др.). Протеасомная система представлена убиквитинлигазами, осуществляющими присоединение олигопептида убиквитина к белкам-мишеням, подлежащих расщеплению, и протеасомой - полиферментным комплексом, который обладает трипсинподобной, химотрипсинподобной, каспазаподобной, а также АТФ-азной активностями [19, 231].

Клетки млекопитающих и человека содержат несколько форм протеасом, наиболее изученными являются 26S и 20S протеасомы (К.Ф. 3.4.25.1). 268-протеасомы состоят из 208-субчастицы - протеолитического «ядра» (700 кДа) и фланкирующих ее 198-субчастиц [19, 20] (рисунок 1). 20S протеасома прокариот и эукариот состоит из 28 субъединиц. Протеасома эукариот содержит по 2 копии 7 разных а-субъединиц и по 2 копии 7 разных р-субъединиц. Входящие в состав ядра протеасом а- и [3-субъединицы образуют по 2 гептамерных кольца, сложенных в виде стопки. Внешние кольца содержат только а-субъединицы, a внутренние два кольца - только субъединицы [20, 194, 310].

Протеолитической активностью обладают (3-субъединицы ферментативного комплекса, тогда как а-субъединицы формирует пору,

через которую происходит проталкивание субстрата в протеолитическую полость. Известно, что субъединица (31 обладает каспазаподобной активностью, субъединица (32 - трипсиноподобной активностью, [35 - химотрипсиноподобной активностью. Все протеиназные центры обращены во внутреннюю протеолитическую полость, образованную (3-субъединицами [19, 20].

20S proteasome

2QS*Core" 19S regulator 19S regulator

proteasome (*700 kDa) (PA 700} 20Sncore"

, proteasome , --

26S proteasome (M 2 МОз)

Рисунок 1 - Строение протеасомы

Примечание:

20S proteasome - 20S протеасома;

26S proteasome - 26S протеасома;

20S "core"- протеолитическое ядро протеасомы;

19S - 19S регуляторный комплекс;

(рисунок с сайта http://moikompas.ru/compas/proteasome)

Регуляторный 19S комплекс представлен в виде комплексов активаторов РА700 (proteasome activator complex). Помимо регуляторной частицы РА700 в клетках содержат множество белков, которые могут взаимодействовать с а-кольцами 20S протеасомы, формируя альтернативные формы протеасомы. В

отличие от 19S регуляторной частицы, эти альтернативные регуляторы не являются АТФазами и не связываются с цепочкой убиквитинов, то есть регулируют убиквитин и АТФ-независимую деградацию субстратов. К ним относят семейство альтернативных регуляторов РА28, состоящее из двух родственных комплексов - PA28a/ß (или IIS REG) и РА28у (или REGy) и формирующие 20S активированные протеасомы. Первый из них активирует пептидазную активность коровой 20S протеасомы, увеличивая эффективность гидролиза некоторых пептидов в 100 раз, но не оказывает никакого влияния на деградацию свернутых белков [16, 20].

Каждая из этих форм протеасом образована четырьмя субтипами, различающимися сочетанием конститутивных и иммунных протеолитических субъединиц. В соответствии с этим различают также конститутивные и иммунные формы протеасом, образующиеся при сочетании конститутивных (ala2a3a5a6a7) или иммунных протеолитических субъединиц (LMP2, LMP7, MECL1). Замена конститутивных субъединиц протеасом на иммунные сопровождается формированием модифицированных форм протеасом и приводит к изменению их ферментативной активности [33, 163]. Существуют характерные особенности включения иммунных субъединиц в ядро протеасом. Субъединицы LMP2 и MECL1 встраиваются во вновь образующиеся протеасомы совместно, но независимо от LMP7. В свою очередь включение субъединицы LMP7, хотя и облегчается наличием LMP2 и MECL1, но может осуществляться и без них [16, 20, 329].

Различные формы протеасом имеют свойственные только им функции в клетке. Конститутивные протеасомы, состоящие из конститутивных субъединиц, участвуют в регуляции клеточных процессов, таких как репликация и репарация ДНК, транскрипция, передача сигналов, клеточный цикл, апоптоз, поскольку гидролизуют белки, осуществляющие эти процессы. Иммунные 26S протеасомы необходимы для развития иммунного ответа и формирования комплексов гистосовместимости 1 класса [19, 231,

278]. Кроме того, иммунные протеасомы участвуют в регуляции клеточной дифференцировки [290], пролиферации [298] и выполняют антиоксидативную функцию [330].

Процесс расщепления белков начинается с энергозависимой активации убиквитина, переноса цепочки убиквитинов на белок, подлежащий расщеплению, и присоединению этого комплекса к 268 протеасоме. Результатом данного процесса является убиквитин- и АТФ-зависимый протеолиз специфических субстратов, в ходе которого распознаются убиквитинированные белки, происходит их разворачивание и проталкивание в протеолитическую камеру [79, 231]. 20Э протеасомы гидролизуют белки, главным образом, с поврежденной третичной структурой без убиквитинирования [194, 310]. Основными субстратами данных ферментов являются предшественник фактора транскрипции ОТ-кВ и его непосредственный ингибитор (1кВ), регуляторы клеточного цикла (СусНп Е, р27 и др.), онкобелки и белки-онкосупрессоры (р53) и т.д. [19, 330].

В целом, протеолиз белков при помощи протеасомной системы обеспечивает жизнедеятельность клетки. Многофункциональность протеасом, участие их во всех патологических процессах указывает на неспецифический характер изменений их активности и субстратной специфичности.

1.2.2. Кальпаиновая система

Кальпаины входят в семейство цистеиновых нелизосомальных протеаз (К.Ф. 3.4.22.17), которое представлено 14 изоформами ферментов и специфическим ингибитором кальпастатином [307]. Как минимум два основных фермента (ш и ц, т.е. кальпаин 1 и 2) широко изучены и представлены повсеместно. Они обладают сходным строением и различаются по различной чувствительности к кальцию. Известно, что кальпаины представлены так называемыми типичными изоформами (кальпаины 1, 2, 5, 7, 10, 13, 15) и нетипичными (кальпаины 3, 6, 8, 9, 11, 12) [296]. Кальпаин-9

встречается преимущественно в желудочно-кишечном тракте,

кальпаин-3 - в скелетных мышцах, сердце и печени [54, 142].

В активном состоянии кальпаины представлены гетеродимерами, состоящими из малой регуляторной субъединицы (28-30кДа) и большой каталитической субъединицы (80кДа). Их активация происходит при увеличении концентрации внутриклеточного кальция. Кальпаины являются цитоплазматическими ферментами, однако их активные формы найдены во фракции плазматической мембраны, что предполагает связь их активации с нахождением на мембране [15, 130].

Выявлено, что основными субстратами данных калиций зависимых ферментов являются некоторые белки цитоскелета, такие как виментин, актин, фодрины [127], а также белки, связанные с апоптозом и пролиферацией клеток: Вах, В1ё, Вс1-ХЬ, с-Боб, р53 [127, 307].

Кальпаины необходимы для нормального развития организма. В их отсутствии нарушается процесс эмбриогенеза, что приводит к развитию пороков, связанных с формированием сердечно-сосудистой недостаточности, обычно несовместимой с жизнедеятельностью [52].

Большое значение в регуляции активности и субстратной специфичности ферментов имеет их эндогенный ингибитор - кальпастатин [221, 246]. Однако механизм его влияния на активность кальпаинов до сих пор непонятен [343]. В экспериментальных исследования, проведенных с использованием кальпастатина, выявлена роль данных внутриклеточных протеаз в регуляции пролиферации клеток, апоптоза, клеточной подвижности [307].

Отмечается, что протеолиз, осуществляемый кальпаинами является лимитированным, результат которого заключается в активации белков и пептидов, модификации их структуры и субстратной специфичности [293]. В целом, широкая субстратная специфичность определяет значение кальпаиновой системы в жизнедеятельности клетки. Ее роль тесным образом связана с протеасомами, что является свидетельством тесных ассоциаций

между системами внутриклеточного протеолиза, как в норме, так и при патологии.

1.2.3. Взаимосвязь систем деградации белков в клетке

В настоящее время внимание исследователей сосредоточено на связи внутриклеточных протеолитических систем, обосновании их влияния друг на друга в нормальных условиях и при применении ингибиторов. Предполагается существование взаимного влияния систем протеолиза в клетке, что опосредовано наличием общих функций.

Основное значение в деградации внутриклеточных белков отводится протеасомам. Кальпаины же способствуют изменению структуры белков, что делает их восприимчивыми для дальнейшего протеасомного расщепления. В экспериментах выявлено, что активация кальпаинов приводит к увеличению активности протеасом и усилению деградации протеинов в клетках диафрагмы крыс [291]. Под влиянием кальпаина и при активации убиквитин-протеасомного пути происходит разрушение протеина р107 при ретинобластоме [175].

Выявлена сниженная активность кальпаина-3 при мышечной дистрофии типа 2А, что сопровождается активацией деградации белков через убиквитин-протеасомный путь [54, 57]. Подобные изменения выявлены при мышечной кахексии различного происхождения (при сепсисе, почечной недостаточности и др.), что подтверждает вторичный характер изменений [128].

Активация протеолитических систем сочетается с активацией внеклеточных протеаз. В клетках лимфомы человека линии ТНР-1 ингибирование кальпаиновой системы ее специфическим ингибитором СР1В снижает экспрессию металлопротеиназ - 2 и 9 [245].

Исследованиями последних лет выявлена заместительная роль кальпаинов в процессах деградации белков в клетке, что наблюдается в отсутствии необходимого количества протеасом, а также при угнетении их

ферментативной активности [291, 293]. Возрастающая активность внутриклеточного протеолиза в этих условиях обеспечивается кальпаинами. Данный факт свидетельствует о наличии сложной системы взаимной регуляции внутриклеточных протеаз. При этом протеолиз белков кальпаинами осуществляется частично [293], что является основой прогрессирования патологических изменений при развитии различных заболеваний.

Таким образом, важная роль компонентов внутриклеточных протеолитических систем в патогенезе злокачественных образований основана на том, что большинство их субстратов участвуют в развитии опухоли. Кальпаины тесно связаны с функционированием протеасомной системы деградации белков. Исследование внутриклеточных протеолитических систем при злокачественных новообразованиях позволит обнаружить новые биологические маркеры развития и прогрессирования заболевания, а также будет способствовать поиску молекулярных мишеней для химиотерапии рака.

1.2.4. Роль протеасомной системы в патогенезе злокачественных

новообразований

В настоящее время большое значение отводится изучению роли протеасом в развитии злокачественных новообразований. Разнообразие функций данных ферментативных комплексов связано с их участием на всех этапах онкогенеза, в том числе показано их значение в регуляции апоптоза, пролиферативной активности клеток, ангиогенеза, метастазирования и др. В экспериментальных работах на культурах разных опухолей показано значение протеасомной системы в механизмах развития рака простаты, почки, колоректального рака, молочной железы и др [79].

Так, в клетках асцитной карциномы Krebs содержание иммунных пулов протеасом снижено по сравнению с нормальными тканями [2]. Изменение активности протеасом, их пулов показано при многих злокачественных

новообразованиях: при раке поджелудочной желез, раке простаты, кишечника, пищевода и др. [31, 32]. При колоректальном раке наблюдается увеличение количества 20 S протеасом и высокая активность ферментативного комплекса в опухоли по сравнению с прилежащей нормальной тканью [282]. Известно, что активность протеасом в мышечной ткани при раке желудка увеличена, что является следствием развивающейся кахексии [162]. Существуют также другие данные об изменениях активности протеасом в опухоли. На культуре раковых клеток легких выявлено снижение активности 26S протеасом по сравнению с нормальным альвеолярным эпителием [305].

Субъединичный состав протеасом тесно связан с активностью протеасом и состоянием процессов внутриклеточного протеолиза в клетке. Как правило, замена конститутивных р-субъединиц протеасом на иммунные сопровождается изменением активности ферментов [33, 160]. Наличие у иммунных протеасом функций, связанных с регуляцией основных процессов жизнедеятельности клетки, определяет их значимую роль в развитии онкологических заболеваний. При раке кишечника повышение активности протеасом сочетается с изменением субъединичного состава ядра протеасом, которое заключается в возрастании количества иммунных форм ферментативного комплекса [163]. Подобные изменения с увеличением содержания LMP2, LMP7, MECL-1 субъединиц протеасом наблюдается в опухолях щитовидной железы [158], в клетках лимфомы Беркита [33, 160], в глиобластомах [65]. Показана также связь субъединичного состава протеасом с особенностями течения и прогноза заболевания. Уровень продукции АТФ-независимой субъединица 19S регуляторного комплекса протеасом связан с метастазированием и плохим прогнозом при раке легких [260].

При раке простаты с высокой экспрессией антиапоптотического белка Вс1-2 наблюдается увеличение содержания убиквитинированных форм белка Вах, что приводит к снижению его содержания в клетке, ингибирует апоптоз злокачественных клеток и увеличивает риск летального исхода [194].

Ингибирование убиквитин- протеасомного пути расщепления

белков ингибитором протеасом PSI способствует индукции апоптоза в клетках человеческой мезотелиомы [264].

Участие протеасомной системы в процессах клеточного цикла связано с регуляцией содержания белка р27 и циклина Е. Снижение уровня белка р27 способствует развитию рака толстой кишки, молочной железы, яичников и мозга [83]. Увеличение содержания циклина Е является плохим прогностическим фактором при раке молочной железы, толстого кишечника, лимфомах, аденокарциномах легких и др. [96, 103, 136].

Нарушение работы протеасомной системы является причиной развития светлоклеточной почечноклеточной карциномы почки [166]. Мутации гена VHL (von Hippel-Lindau), который кодирует один из компонентов ЕЗ лигазы [79, 320] при синдроме фон Хиппель-Линдау приводят к снижению убиквитинирования белков, подлежащих расщеплению. Известно, что ЕЗ лигаза участвует в деградации семейства транскрипционных факторов HIF (hypoxia inducible transcription factor family), которые в условиях гипоксии повышают экспрессию ангиогенных факторов, в частности VEGF (vascular endothelial growth factor). При мутациях ЕЗ лигазы происходит нарушение убиквитин-протеасомного разрушения белков семейства HIF, наблюдается повышение экспрессии ангиогенных факторов и прогрессирование рака почки. Подобные генетические абберации ЕЗ лигазы выявлены также при раке молочной железы [66].

Процессы прогрессирования и метастазирования злокачественных новообразований связаны с активностью рецепторов эпидермального фактора роста (EGFR - endothelial growth factor receptor), разрушение которого регулируется протеасомной протеолитической системой [47]. Развитие глиобластом сопровождается нарушением деградации EGFR [94]. На культуре раковых клеток молочной железы показана роль 26S протеасом, их субъединичного состава в регуляции экспрессии ростовых факторов [126]. Развитие устойчивости к лекарственной терапии некоторых видов опухолей

также связано с состоянием протеасомной системы. Активация EGFR на фоне применения ингибиторов протеасом в клетках гепатоцеллюлярной карциномы сопряжено с развитием химиорезистентности [28].

Известно, что ингибирование химитропсинподобного центра мультикаталитического комплекса связано с развитием противоопухолевого эффекта при применении ингибиторов протеасом [59].

Активность и субъединичный состав протесом определяют чувствительность опухоли к ингибиторам протеасом [335]. В раковых клетках крови резистентные к действию специфических ингибиторов протеасомные комплексы имеют в своем составе низкое содержание (3-субъединиц, сопряженное с увеличением экспрессии LMP2 субъединицы [284]. В солидных опухолях развитие химиорезистентности к ингибиторам данных протеиназ сочетается со снижением в составе мультиферментативного комплекса содержания таких иммунных субъединиц как LMP2, LMP7 и MECL-1 [335].

Таким образом, протеолиз, осуществляемый протеасомной системой, играет решающую роль онкогенезе, что связано с регуляцией пролиферации опухолевых клеток, апоптоза, а также активацией процессов распространения трансформированных клеток в организме. Активность протеасом, особенности их субъединичного состава различаются в опухолях различного происхождения. Существуют противоположные данные об изменении активности внутриклеточных протеиназ в раках, общим для которых является обоснование изменений активности ферментативного комплекса за счет модификации его субъединичного состава. Содержание иммунных LMP2 субъединиц протеасом связано с развитием иммунного ответа в опухоли, а также с формированием чувствительности раковых клеток к химиотерапии.

1.2.6. Роль кальпаинов в развитии злокачественных новообразований

В настоящее время существуют немногочисленные данные об участии кальпаинов в процессах малигнизации и опухолевой прогрессии. Показано, что концентрация внутриклеточного кальция влияет на активность кальпаиновой системы в раковых клетках [285]. Кальпаины могут стимулировать рост опухолевых клеток, участвуя в деградации некоторых онкосупрессорных белков таких как р53, NF2,1кВа, р107 и др. [175]. Так, в эксперименте in vitro выявлено, что они стимулируют развитие меланомы мышей линии В16 за счет изменения экспрессии тирозиназы [230]. С другой стороны, они способны разрушать некоторые онкогенные продукты, такие как тромбоцитарный фактор роста, рецептор эпидермального фактора роста и др. [278]. Кальпаинзависимое разрушение характерно для протеинкиназы С, что сопровождается снижением опухолевой прогрессии [274].

В литературе имеются данные о роли различных изоформ кальпаинов в развитии опухолевой патологии. Противораковая активность кальпаина-9 показана на культуре клеток рака желудка [203]. Кальпаин-2 играет роль в процессах роста и формирования новых сосудов. Выявлено, что повышение экспрессии кальпаина-2 сочетается с увеличением содержания VEGF, основного фактора неоангигенеза [56]. Другим значимым механизмом в регуляции опухолевого роста является процесс пролиферации и дифференцировки клеток. Показано, что кальпаины участвуют в регуляции клеточного цикла [186, 337].

Важной характеристикой опухоли является ее способность к метастазированию. Известно, что кальпаины представляют собой факторы, обеспечивающие регуляцию подвижности клетки при участии эпидермального фактора роста, рецепторов адгезии, соответственно,

несомненна их роль в метастазировании опухолей [60, 61, 297]. Интегрины активируют кальпаин -1 (ц-кальпаин), а активация рецепторов ростовых факторов связана с кальпаином - 2 (ш-кальпаин) [119]. При ингибировании активности кальпаинов в условиях in vitro снижается миграционная способность фибробластов [119], кератиноцитов [281] и клеток карциномы мочевого пузыря [179]. В экспериментах in vitro и in vivo ингибирование активности кальпаина-2 лейопептином (ингибитор цистеин-сериновых протеаз с широким спектром действия) и специфическим ингибитором CI-I (ALLN) снижает инвазивность опухолевых клеток простаты [55]. Повышенная способность к миграции и инвазии характерна также для клеток рака легкого человека, трансформация которых вызвана действием производных никотина [60, 61, 178]. Угнетение миграции раковых клеток и их инвазивных свойств получено на культуре клеток рака легкого при дефосфорилировании протеинфосфатазой 2А кальпаинов 1 и 2 [178]. Также известно, что кальпаин - 2 связан с прогрессированием рака молочной железы, что определяется развитием регионарных метастазов заболевания [60, 61; 78].

Исследование кальпаинов актуально при ряде предопухолевых заболеваний. Исследование полиморфизма гена кальпаина-5 при синдроме поликистозных ячников показало, что этот ген может быть кандидатным для диагностики этого заболевания [123]. Показано, что при полипозе толстого кишечника увеличивается активность и экспрессия кальпаина-2 (ш-кальпаина). Дальнейшее развитие аденокарциномы кишечника сопровождается еще более выраженными изменениями. При этом активность и экспрессия кальпастатина, специфического ингибитора кальпаина, снижена при полипозе и аденокарциноме [235]. Экспрессия специфического для ткани желудка кальпаина-9 снижена в опухоли [174, 203], но до сих пор неизвестно можно ли это отнести к опухолевым изменениям или это является специфичным для ткани ЖКТ.

Известно, что уровень м-РНК кальпаина-1 в клетках метастазирующей

почечной карциномы существенно увеличивается по сравнению с неметастазирующими [60, 61, 101]. Повышенная активность кальпаина сочетается с высокой экспрессией циклина Е в ткани рака молочной железы [78]. Активность и экспрессия ji-кальпаина (кальпаина-1) значительно повышена в клетках лимфоидной ткани при хроническом лимфолейкозе [213]. Выявлено также, что кальпаин играет важную роль при развитии некоторых видов шванном и менингиом [184]. На основании данных литературы выявлена роль естественного ингибитора кальпаинов -кальпастатин и кальпаина-6 в развитии рака эндометрия [155, 161]. Экспрессия кальпаина-1 и кальпаина-10 связана с развитием плоскоклеточного рака [53, 84].

Таким образом, литературные данные показывают важную роль кальпаинов в развитии злокачественных новообразований, однако направленность действия этих протеаз неоднозначна. В связи с этим исследование роли кальций зависимой кальпаиновой системы имеет перспективы для изучения механизма опухолевой трансформации и метастазирования, что имеет большое значения для диагностики и прогнозирования развития онкологических заболеваний.

Влияние внутриклеточных протеиназ на молекулярные механизмы онкогенеза связано с регуляцией ими экспрессии транскрипционных и ростовых факторов, определяющих состояние трансформированных клеток, в том числе их пролиферативную активность, апоптоз и распространение в организме.

1.3. Транскрипционные и ростовые факторы, их роль в развитии злокачественных новообразований

Важнейшими субстратами внутриклеточных протеиназ, контролирующих рост и развитие опухолей различного происхождения, являются транскрипционные факторы, связанные с ними факторы роста и их рецепторы. К наиболее изученным ядерным факторам относят NF-кВ и HIF-

1. Большое значение в механизмах онкогенеза отводят также фактору роста эндотелия сосудов (VEGF) и системе инсулиноподобных факторов роста.

1.3.1. Транскрипционный фактор NF-кВ, его роль в онкогенезе

Семейство транскрипционных факторов NF-кВ (nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated В cells, NF-кВ) является важным звеном в развитии иммунного и воспалительного ответа. Оно состоит из 5 белков: NF-кВ1 (или р50), NF-kB2 (или р52), RelA (или р65), RelB и c-Rel, образующих 15 комбинаций димеров. Все белки семейства объединяет наличие домена гомологии Reí, который обеспечивает образование белковых димеров, связывание NF-кВ с ДНК и с цитозольным ингибиторным белком 1кВ. Фактор NF-кВ проявляет активность только в димерной форме, причём наиболее распространены следующие формы — димер субъединиц р50 или р52 с субъединицей р65 [49, 141, 172].

Большинство онкопротеинов способствуют активации NF-кВ, например, Ras, Her-2/Neu (ErbB2) [42, 226]. В фибробластах мышей транскрипционные факторы p65/RelA и c-Rel необходимы для клеточной трансформации, происходящей при действии онкогена Ras [227]. В некоторых исследования выявлена PDK/Akt-зависимая активация транскрипционной активности NF-кВ [63]. Grandage V.L. (2005) выявил, что активация Akt-сигнального пути при миеломной болезни происходит при пролиферации опухолевых клеток и на фоне высокой транскрипционной активности данного фактора [241]. Также связь возникновения опухоли с содержанием NF-кВ обнаружена в экспериментальных условиях на культуре клеток меланомы человека [72].

Важнейшей ролью ядерного фактора NF-кВ является регуляция апоптоза. Последние данные свидетельствует о существовании антиапоптотического эффекта при активации ядерного фактора NF-kB. Выявлено, что апоптоз, вызванный применением ряда химических препаратов, таких как ретиноид 3-С1-АНРС, аспирин, доксорубин, и

физических факторов, например, ультрафиолетовое излучение,

сопровождается активацией транскрипционного фактора №-кВ [113, 140, 294]. Однако замечено, что образующийся ядерный фактор имеет сниженный уровень фосфолилирования и ацетилирования. Подобные изменения являются признаком неспособности его связываться с соответствующими ЫР-кВ-зависимыми генами, что свидетельствует о его функциональной неполноценности. Следовательно, антиапоптотический эффект связан как со снижением уровня продукции транскрипционного фактора №-кВ, так и с формированием функционально неактивных пептидов на фоне повышения его содержания в клетке. Стоит отметить, что выбор того или иного пути опухолевыми клетками зависит от множества факторов, среди которых наиболее важен фенотип опухоли.

Влияние ядерного фактора ОТ-кВ на множество процессов жизнедеятельности клетки отражает его значимую роль в патогенезе раков различных локализаций и может определять особенности прогрессирования и прогноза заболевания. Обнаружена связь данного фактора с изменением экспрессии ряда транскрипционных, ростовых факторов и их рецепторов. Выявлено, что транскрипционный фактор ЫР-кВ оказывает влияние на экспрессию ядерного фактора НИМ, а именно на процесс его транскрипции [67, 131, 133]. Ядерный фактор, активируемый гипоксией, способствует изменению содержания сосудистого эндотелиального фактора роста и регулирует процесс образования кровеносных сосудов [36]. Другим ростовым фактором, действие которого опосредовано влиянием МмсВ, является эпидермальный фактор роста. В экспериментальных работах показано, что блокирование его рецептора при применении ингибитора протеасом (бортезомиба) потенцирует цитотоксический эффект ингибитора, что связано со снижением уровня активации транскрипционного фактора М7-кВ [37].

Показано, что экспрессия ОТ-кВ и продуктов его регуляции высока в

случае переходноклеточного рака мочевого пузыря. При этом содержание фактора связано с лимфогенным метастазированием опухоли [228, 229]. Экспрессия NF-кВ связана с общей выживаемостью больных при раке желудка [228] и с 5-летней общей выживаемостью при колоректальном раке [67], ПКГШ [74].

Таким образом, роль транскрипционного фактора NF-кВ в онкогенезе связана, с одной стороны, с повышением пролиферативного потенциала раковых клеток и их распространением в организме, с другой стороны, важна его связь с активацией апоптоза. До сих пор в литературе имеются противоречивые данные об активности и содержании ядерного фактора при развитии и прогрессировании опухолей различного происхождения. Стоит отметить сложную систему регуляции активности транскрипционного фактора NF-кВ, изучению которой в настоящее время отводится большое значение, что определяет выбор тактики лечения онкологических заболеваний.

1.3.2. Транскрипционный фактор HIF, его связь с развитием онкологических заболеваний

Фактор HIF (hypoxia inducible transcription factor) представляет собой фактор транскрипции, активирующийся в условиях гипоксии. Семейство гипоксических факторов представлено HIF-1, HIF-2 и HIF-3. В большинстве случаев он представлен HIF-1, который является гетеродимером, состоящим из а и ß субъединиц [148]. ß-Субъединицы факторы являются конститутивными, активность фактора в условиях гипоксии зависит от экспрессии и посттрансляционных модификаций а-субъединиц. При активации ядерного фактора, активируемого гипоксией, происходит увеличение экспрессии сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF -vascular endothelial growth factor), рецепторов эпидермального фактора роста 1 типа, тромбоцитарного фактора роста ß, трансформирующего фактор роста а и трех транскрипционных репрессоров Е-кадгерина - основного белка

межклеточных адгезивных контактов [205, 302].

Помимо гипоксии регуляция экспрессии транскрипционного фактора НИМ возможна при участии основных сигнальных путей в клетке. Выявлена роль jR.as-MA.PK [46], Бгс [27] и Р13К-АКТ(РКВ)-тТ(Ж [24] сигнальных каскадов при развитии онкологических заболеваний, что способствует повышению экспрессии ядерного фактора НИМ в опухоли. Также активация данного фактора транскрипции возможна за счет влияния транскрипционного фактора ИР-кВ на процесс транскрипции ядерного фактора НИМ [327].

Высокое содержание транскрипционного фактора ШР-1 выявлено в ткани большинства солидных опухолей [193, 232]. Значение фактора, активируемого гипоксией, при развитии злокачественных новообразований, в первую очередь, связано с усилением процесса неоангиогенеза в опухоли [269, 327]. Так, при ряде опухолевых синдромов, связанных с дефектом белка фон Хиппель-Линдау (рУНЬ), например, в случае светлоклеточного рака почки накопление фактора ШР-1 и, как следствие, увеличение экспрессии УЕвР происходит при нарушении его деградации [220, 320]. Существуют дополнительные патогенетические механизмы, потенцирующие ангиогенный эффект в опухоли. Известно, что активация фактора НПМ происходит под влиянием т-Т(Ж и р53 сигнальных путей [145, 308]. Дополнительным механизмом интенсивного ангиогенеза с накоплением ядерного фактора ЮТ является потеря функциональной активности белками-онкосупрессорами РТЕЫ, р53 [43, 200]. Еще один механизм накопления ШР-1 и УЕвР при параганглиомах, лейомиомах связан с мутационными изменениями сукцинатдегидрогеназы и фумаратгидратазы, которые отражаются в формировании функционально неактивных ферментов. Механизм онкогенеза в этих условиях связан с развитием окислительного стресса и активацией апоптоза в клетках. Стабилизация ядерного фактора, активируемого гипоксией, при наличии мутаций сукцинатдегидрогеназы и

фумаратгидратазы препятствует его деградации при участии

внутриклеточных протеиназ [324].

Известно также, что НШ-1 вовлечен в регуляцию разнонаправленных процессов, таких как пролиферация опухолевых клеток, апоптоз, что возможно за счет увеличения продукции проапоптотических протеинов, таких как ВШРЗ, а также при стабилизации онкопротеина р53 [86]. Кроме того, в этих же условиях может происходить усиление экспрессии антиапоптотичекого протеина 1АР-2 и резкое снижение содержания проапоптического белка Вах [116, 124]. Отмечается наличие баланса между про- и антиапоптотическими протеинами, индукция которых происходит при участии ядерного фактора НИМ, что играет решающую роль в механизмах опухолевого роста. При этом поведение раковых клеток в сторону активации пролиферативной активности или инициации апоптоза зависит от гистотипа опухоли и стадии патологического процесса [124, 193].

Транскрипционный фактор НИМ играет важную роль в развитии гормонозависимых опухолей. Существует зависимость между уровнем рецепторов гормонов, в частности ЕЯ, с экспрессий ядерного фактора НПМ. Выявлено, что в условиях гипоксии транскрипционный фактор способствует снижению транскрипционной активности гена рецептора эстрогена (ЕЯ) в клетках рака молочной железы [279]. Выявленная особенность патогенеза гормонозависимых опухолей в условиях гипоксии объясняется влиянием микроокружения опухоли, для которого характерно отсутствие чувствительности к гормонам. Замечено также отсутствие подобного эффекта на культуре клеток рака эндометрия.

Значение транскрипционного фактора НИМ в развитии и прогрессировании онкологических заболевания показано для многих опухолей, в частности светлоклеточного рака почки [146], рака толстой кишки [300], поджелудочной железы [107, 255], при опухолях головы и шеи [318], молочной железы [147], при раке яичников [106], мочевого пузыря

[100], раке эндометрия [138]. Прогностическое значение ядерного фактора в опухолях различных локализаций варьирует и зависит от стадии заболевания. Низкая экспрессия ядерного фактора HIF-1 связана с лучшей выживаемостью больных с распространенными формами заболевания, рост экспрессии транскрипционного фактора HIF-1 наблюдается у больных с высоким риском лимфогенного метастазирования [Fillies, Т. 2005; 69, 73, 107; 105, 146, 315, 318]. Известно, что на ранних этапах заболевания высокий уровень HIF-1 является признаком хорошего прогноза [193, Fillies, Т. 2005].

Таким образом, развитие гипоксии в опухоли и, как следствие, высокий уровень транскрипционного фактора HIF-1 является отражением агрессивности опухоли, что приводит к активации ангиогенеза и распространению раковых клеток. Однако роль HIF в онкогенезе неоднозначна. С одной стороны, транскрипционный фактор способствует прогрессированию заболевания. С другой - при активации фактора HIF запускаются процессы, способствующие апоптотической гибели клетки. В целом, роль HIF в патогенезе рака зависит от типа опухоли и стадии заболевания.

1.3.3. Сосудистый эндотелиальный фактор роста (VEGF), его роль в патогенезе онкологических заболеваний

Образование новых сосудов является основным процессом опухолевого роста и распространения раковых клеток в организме. VEGF -HIF-зависимый ростовой фактор, является важным регулятором этого процесса [132]. Семейство сосудистых эндотелиальных факторов роста представлено пятью членами: VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D и плацентарным ростовым фактором. Процесс неоангиогенеза обеспечивает фактор VEGF-A, который называют VEGF.

При связывании с ростовым фактором происходит активация рецепторов VEGFR. Известно 3 типа рецепторов к сосудистому фактору:VEGFR1, VEGFR2, VEGFR3. VEGFR1 представляет собой мембранный неактивный

компонент рецептора, который оказывает модулирующее влияние на трансмембранную его часть. УЕОБЮ связан с процессом лимфоангиогенеза. Активация УЕОРЯ2 способствует усилению миграции эндотелиальных клеток, увеличивает проницаемость сосудов и непосредственно участвует в ангиогенезе [62].

Увеличение содержания ростового фактора УЕОБ показано при многих онкологических заболеваниях, таких как рак молочной железы [301], гепатоцеллюлярный рак [129], опухоли мочевого пузыря [212], рак почки [21, 146] и др. Известно, что прогрессирование светлоклеточного рака почки тесно связано с активацией процессов неоангиогенеза, что влечет за собой развитие гематогенных метастазов [21]. Известно, что УЕОБ не обнаружен в здоровой ткани почки, однако увеличенная экспрессия белка выявлена при всех разновидностях опухолей почек [197, 325]. Уровень продукции УЕОБ является независимым маркером рецидивирования рака мочевого пузыря [313, 314]. Увеличение экспрессии ростового фактора сочетается с ростом плотности микрососудов в опухоли, коррелирует с риском рецидивирования и метастазирования опухоли [212]. Выявлены ассоциации между полиморфными вариантами гена УЕОБ и риском развития рака мочевого пузыря [189]. Известно, что определение данного показателя в моче имеется диагностическое значение для онкопатологии мочевого пузыря [334]. Также прогрессирование плоскоклеточного рака языка и риск развития рецидивов заболевания связаны с уровнем продукции ростового фактора УЕОБ [157].

Оценка эффективности применения химиопрепаратов, выбора адекватной тактики лечения связана с уровнем экспрессии ростового фактора УЕвР, что характерно для лечения рака мочевого пузыря, опухолей молочной железы [173, 301]. Значение данного ростового фактора в развитии онкологической патологии создает предпосылки для использования его моноклонального антитела в качестве таргетного препарата (авастин), эффективность которого в настоящее время только определяется [197, 325].

Значение ангиогенеза в процессах роста и метастазирования опухолей,

изучение экспрессии его основных маркеров актуально для целого ряда опухолей. Активность процесса неодинакова в раках различного происхождения и его выраженность оценивается по уровню продукции ростового фактора УЕОБ, что способствует развитию подходов применения данного показателя в диагностике опухолей, прогноза течения и исхода заболевания.

1.3.4. Система инсулиноподобных факторов роста и металлопротеиназа РАРР-А, их роль в патогенезе онкологических заболеваний

Система инсулиноподобных факторов роста представлена двумя ростовыми факторами: ИФР-1 (инсулиноподобный фактор роста - I), ИФР-И и 5 связывающими их протеинами (ЮРВРб), среди которых основным является ЮРВР-З [115, 311]. Роль ростовых факторов связана с их участием в процессах клеточной пролиферации, дифференцировки, что имеет особое значение в механизмах опухолевого роста. По данных некоторых авторов содержание факторов увеличивается при развитии большинства опухолей: менингиомы, глиобластомы [210], опухоли молочной железы [239], предстательной железы [243], эндометрия [6, 93], мочевого пузыря [244], опухолей желудочно-кишечного тракта [242] др. Отмечено, что при раке мочевого пузыря с поражением регионарных лимфоузлов содержание факторов может снижаться [244].

Экспрессия инсулиноподобных факторов роста имеет большое значение в механизмах прогрессии опухолей эндометрия. Выявлено, что уровень ИФР -I, ИФР - II повышен в клеточных линиях опухолей эндометрия ЕСС-1 [344]. Однако в опухолевой ткани человека содержание обоих ростовых факторов и белка ЮРВР4 ниже по сравнению с гиперплазированной тканью [8, 23], что связано с активными пролиферативными процессами при гиперплазии. Действие ИФР опосредуется через рецептор ЮБ-Ж, именно степень его активации имеет значение в механизмах развития злокачественных

новообразований [280, 319]. Косвенным признаком участия системы ИФР в опухолевом росте является активация Akt сигнального пути и высокая экспрессия IGF-1R, которая наблюдается в ткани атипичной гиперплазии эндометрия и эндометриоидной карциноме [237]. При этом в клеточной линии ЕСС-1 отмечается высокое содержание IGFBP-4 [271]. Следовательно, компоненты ИФР системы являются важными митогенными факторами в патогенезе опухолей эндометрия, что связано с ингибированием апоптоза и увеличением подвижности опухолевых клеток [117].

ИФР участвуют на всех этапах опухолевого роста. Так ИФР-I и ИФР-П способны индуцировать экспрессию транскрипционного фактора HIF-la [270], что приводит к увеличению синтеза ростового фактора VEGF, результатом которого является активация ангиогенеза [168]. В отличие от гипоксии, где увеличение экспрессии HIF происходит за счет блокады его убиквитинации и ингибирования его расщепления протеасомами, ИФР активируют синтез HIF-la [169]. Также показана роль ИФР в подвижности и дифференцировки эндотелиальных клеток [168, 270, 342]. Активация рецептора ИФР способна также стимулировать EGFR (рецептор эпидермального фактора роста), что в конечном итоге способствует увеличению экспрессии VEGF и запускает каскад реакций, связанных с ангиогенезом [222].

Большое влияние на содержание ИФР оказывают IGFBPs, в частности IGFBP-3. На клеточных линиях рака молочной железы MCF-7 выявлено влияние IGFBP-3 на процесс фосфорилирования рецептора IGF-IR, что приводит к снижению его функции [275]. Известно, что IGFBP-3 способен индуцировать апоптоз, Снижение уровня данного связывающего протеина приводит к увеличению экспрессии ИФР и, как следствие, усиление роста и пролиферации опухолевых клеток. Снижение уровня экспрессии IGFBP-3 показано при многих онкологических заболеваниях [342].

Кроме того, функционально связаны с этой системой протеиназы, расщепляющие IGFBPs, среди которых важное значение отводят белку,

ассоциированному с беременностью - РАРР-А (pregnancy-associated plasma protein). Металлопротеиназа РАРР-А относится к подсемейству паппализинов и ее основной функцией является ИФР-зависимый протеолиз главным образом IGFBP-4, но также IGFBP-5 и IGFBP-2 [149], что определяет участие РАРР-А в регуляции биодоступности ИФР. Все компоненты ИФР-системы и РАРР-А продуцируются стромальными клетками нормального, гиперплазированного и малигнизированного эндометрия, а также рядом опухолей эпителиального происхождения [8, 18, 149, 237].

Таким образом, система ИФР играет важную роль в патогенезе злокачественных новообразований. Регуляция экспрессии, уровня биодоступности ростовых факторов, их связывающих белков тесно связана с развитием онкологических заболеваний и их прогнозом.

1.4. Регуляция содержания транскрипционных и ростовых факторов внутриклеточными протеиназами в злокачественных новообразованиях

Участие внутриклеточных протеолитических ферментов на всех этапах жизнедеятельности клетки, в том числе и опухолевой, определяет их значение в развитии злокачественных новообразований. Их субстратами является широкий спектр протеинов, среди которых находятся белки и пептиды, сопряженные с контролем пролиферации, дифференцировки, апоптоза, такие как, транскрипционные (NF-кВ и HIF-1) и ростовые факторы (VEGF, ИФР) .

Перевод ядерного фактора NF-кВ в активное состояние в клетке осуществляется преимущественно с помощью протеасомной системой. Так, 26 протеасомы способны активировать NF-кВ за счет быстрой деградации его собственного ингибитора 1кВ [122, 306, 321]. Посттрансляционная модификация р105 - предшественника NF-кВ р50 осуществляется с помощью 20S протеасом без процесса убиквитинования [303]. Активация транскрипционного фактора NF-кВ выявлена в большинстве опухолей, таких

как рак простаты, меланома, панкреатический рак, рак легких и др. [42, 226, 340]. Также в настоящее время показано, что в отсутствии протеасом активация NF-кВ возможна участии других протеолитических ферментов, в частности кальпаинов [263] и при фосфорилировании ДНК-связывающих субъединиц этого фактора [94]. Однако эти регуляторные пути в клетке носят вспомогательный характер и возможны в отсутствии протеасом.

Регуляция экспрессии ядерного фактора HIF-1 также осуществляется внутриклеточными протеолитическими системами. При гидроксилировании остатков пролина и аспаргина наблюдается связывание HIF-1 с убиквитинлигазой Е (белком фон Хиппель-Линдау (pVHL)), прикрепление цепочки убиквитина к белку и его последующая деградация в протеасоме [269]. Также в исследованиях Zhou и соавторов [58] выявлено, что разрушение HIF-1 может протекать по VHL-независимому механизму и при участии других внутриклеточных протеиназ - кальпаинов. Помимо связи внутриклеточного протеолиза с процессом деградации ядерного фактора HIF-1 в настоящее время широко обсуждается влияние протеасом на процесс его активации, который осуществляется за счет PI3K-AKT(PKB)-m-TOR сигнального пути и связан с ролью протеасом в процессах фосфорилирования phospho-Akt, phospho-p70S6K, and phospho-S6RP [50].

Применение ингибиторов протеасом на культуре переходноклеточного рака мочевого пузыря, рака эндометрия и ГЖГШ приводит к активации апоптоза в опухолевых клетках [48, 85, 265, 317]. Данный эффект связан со снижением содержания активных форм транскрипционного фактора NF-кВ в ткани опухоли, определяющего течение заболевания [29, 40, 190, 316]. Известно также, что применение ингибитора протеасом - бортезомиба в культуре раковых клеток мочевого пузыря 253JB-V приводит к снижению экспрессии VEGF [316]. При этом комбинация ингибитора протеасом с фактором некроза опухоли позволяет также снижать уровень

проангиогенных белков и пептидов [70].

Дополнительным фактором, способствующим увеличению антипролиферативного эффекта ингибитора протеасом, является окислительный стресс. Протеасомы выполняют антиоксидативную функцию, поэтому применения ингибиторов протеасом приводит к накоплению окисленных белков и пептидов, что потенцирует апоптотический эффект. При этом антиоксиданты снижают вызванную применением ингибиторов протеасом гибель раковых клеток и блокируют механизмы действия ингибиторов [39].

В этих условиях парадоксальным является цитостатический эффект на раковые клетки почки, вызванный применением ингибитора протеасом, бортезомиба, в условиях in vitro [165]. В исследованиях Li С. (2008) и Brooks A.D. (2010) доказано, что выраженный антипролиферативный эффект бортезомиба связан с накоплением проапоптотических белков, деградация которых также происходит в протеасомах [48, 51]. Кроме того, в экспериментальных условиях выявлено потенцирование эффекта применения бортезомиба в клетках рака почки при блокаде рецептора эпидермального фактора роста [37]. Этот механизм связан со снижением активации транскрипционного фактора NF-kB.

Большое значение в патогенезе светлоклеточного почечноклеточного рака уделяется инактивации гена VHL (von Hippel-Lindau) в результате чего происходит накопление транскрипционного фактора HIF-1 и аномальная продукция ангиогенных факторов [82, 177, 328]. Белок VHL входит в состав ЕЗ убиквитин лигазы, которая в условиях нормальной оксигенации присоединяет убиквитины к транскрипционному фактору HIF-la и способствует их дальнейшей деградации в протеасомах [77, 191, 238, 331]. В условиях гипоксии дефектный VHL комплекс в составе ЕЗ убиквитин лигазы не связывается с транскрипционным фактором, который не подвергается

расщеплению и накапливается в клетках. В экспериментальных условиях показано, что в клетках почечноклеточной карциномы с дефектным белком VHL накопление ядерных факторов HIF происходит даже в условиях нормоксии [183, 331, 332].

Большое значение в развитии онкологических заболеваний матки уделяется нарушениям гормонального обмена. Высокий уровень эстрогенов является предрасполагающим фактором для развития опухолевых процессов эндометрия [6, 8, 23] и сочетается с ростом содержания в опухоли их рецепторов [Ikeda К., 2004;Tu В.В. et al., 2011; Lin S.L. et al 2010]. Известно двоякое действие протеолитических ферментов в регуляции уровня рецепторов эстрогенов (ER), они участвуют как в их активации [112], так и способствуют их разрушению [195]. Деградация рецепторов прогестерона (PR) также опосредована протеасомами за счет их фосфорилирования и последующего разрушения в 26S протеасомах [76]. Однако действие ингибиторов протеасом вызывает неоднозначные эффекты. С одной стороны, лактацистин блокирует деградацию PR, с другой стороны, бортезомиб подавляет транскрипцию PR-зависимых таргетных генов [166, 252, 253]. Выявлена роль внутриклеточного протеолиза в регуляции ферментов метаболизма эстрогенов, в частности ароматазы. [258, 262].

Система ИФР оказывает значительное влияние на развитие опухолей эндометрия, ее регуляция также осуществляется внутриклеточными протеолитическими системами. Разрушение рецептора ИФР (IRS-2) происходит в протеасомах [118]. Известно, что уровень протеасомной деградации IRS-2 связан со степенью активации ИФР-зависимого сигнального пути [259]. Большое значение данные ростовые факторы имеют в развитии светлоклеточного рака почки. Выявлена связь дефекта VHL с активацией инсулиноподобных факторов роста и степенью убиквитинирования рецепторов TGF [272, 273].

Отмечено существование непрямых субстратов протеасом,

которые оказывают значительное влияние на процессы онкогенеза, к которым относят рецептор эпидермального фактора роста, связанный с ростом опухоли и прогрессированием заболевания [88]. Значение протеасом в процессах деградации данного рецептора показано в исследованиях Melnikova M.S. (2006) с применением специфического ингибитора ферментов - MG132 [208].

Значение кальций зависимого протеолиза связано с процессами метастазирования, их значение в регуляции транскрипционных и ростовых факторов отмечается в единичных работах. В работе Leloup L. показано, что повышение содержания ИФР-I сочетается с высокой активностью кальпаинов на фоне усилении миграции клеток [171]. Роль кальций зависимых ферментов в регуляции ИФР системы также связана с протеолизом белков IGFBP-2 и -3 [45]. Выявлено, что повышение содержания IGFBP-3 приводит к снижению содержания VEGF в крови [152].

Таким образом, регуляция пролиферации опухолевых клеток, их апоптоза, а также процесса неоангиогенеза в опухолях почки, мочевого пузыря, эндометрия и ПКГШ осуществляется при помощи внутриклеточных протеолитических систем. Изучение их особенностей в связи с клинико-морфологическими особенностями и прогнозом заболевания является перспективным в настоящее время и связано поиском маркеров прогноза заболевания и адекватных мишеней таргетной терапии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Таким образом, в настоящее время исследованию протеолитической деградации белков в опухолях различных локализаций уделяется большое внимание. До сих пор в литературе отсутствуют комплексные работы, связанные с изучением активности внутриклеточных протеиназ, их составом, а также с оценкой их влияния на регуляцию транскрипционных и ростовых факторов.

Жесткая патогенетическая обусловленность почечноклеточного рака с синдромом фон Хиппель-Линдау обосновывает особенности применения таргетной терапии при данной патологии. При этом роль внутриклеточного протеолиза, контролирующего содержание транскрипционного фактора ЮТ-1, связана в основном с протеасомами. Значение кальпаинов в патогенезе рака почки показано в единичных работах, где обозначена их корреляция с метастазированием и распространением заболевания. Отсутствуют работы, оценивающие состояние систем протеолиза в клетке в комплексе, не изучено их взаимное влияние, а также связь с важными для развития рака почки транскрипционными и ростовыми факторами.

Развитие рака мочевого пузыря, связанного с инвазией клеток опухоли в мышечный слой органа, является многостадийным и многофакторным процессом. Участие систем деградации белков выявлено на всех его этапах. В настоящее время данные литературы, характеризующие роль внутриклеточных протеиназ, подконтрольных им транскрипционных и ростовых факторов, являются разрозненными, что не позволяет их обобщить и обозначить вытекающие из этого выводы.

Гормонозависимые опухоли обладают характерными особенностями роста и развития, что определяет исход заболевания и выживаемость больных. В проведенном обзоре литературы значение внутриклеточных протеиназ в патогенезе рака эндометрия показано в экспериментальных работах. Известно также участие протеасомной системы в регуляции

экспрессии рецепторов эстрогенов и прогестеронов. Однако в подобных исследованиях нет данных о связи рецепторного статуса опухоли с активностью протеасом и их субъединичным составом. В связи с существующей в настоящее время концепцией гиперэстрогении и гормонального патогенеза опухолей эндометрия в литературе имеются единичные данные о протеолитической регуляции транскрипционных и ростовых факторов. Данный аспект имеет большое значение в связи с развитием таргетной терапии и поиском ее патогенетически обоснованного применения в лечении гормонозависимых опухолей.

Изучению патогенеза и особенностей лимфогенного метастазирования при плоскоклеточном раке области головы и шеи уделяется большое значение в современной онкологии. Имеются экспериментальные работы, характеризующие состояние систем внутриклеточного протеолиза, что связано с экспрессией апоптотических белков и белков-онкосупрессоров в плоскоклеточных опухолях. Стоит выделить существование отдельных разрозненных работ, где представлено иммуногистохимическое исследование содержания транскрипционных, ростовых факторов, а также маркеров ангиогенеза в опухолях данной локализации, их связь с прогнозом заболевания. При этом отсутствуют данные об особенностях протеолитической регуляции транскрипционных и ростовых факторов, их зависимость от клинико-морфологических параметров заболевания.

В соответствии с анализом существующей на данный момент времени литературы можно прийти к заключению о существовании недостаточных, разрозненных и противоречивых данных о роли внутриклеточных протеиназ в патогенезе опухолей различного происхождения. Проведение исследования данных ферментативных систем с обозначением их роли в патогенезе опухолей различных локализаций составляет ее актуальность и позволяет расширить фундаментальные представления о развитии рака. Стоит отметить, что существующие на данный момент времени молекулярные маркеры развития, прогноза онкологических заболеваний, связанные с

механизмами возникновения и прогрессирования опухолей, не получают широкого применения в практической онкологии. Подобные факты имеют место для большинства опухолей, основной причиной чего является отсутствие достаточного уровня значимости связи клинико-морфологических параметров заболевания с данными факторами. Изучение прогностической значимости активности и состояния систем внутриклеточного протеолиза с расчетом их чувствительности и специфичности, предложение их в качестве маркеров прогноза развития опухолей является одной из важных задач практической онкологии.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Спирина, Людмила Викторовна

ВЫВОДЫ

1. У больных злокачественными новообразованиями отмечаются разнонаправленные сдвиги в химотрипсинподобной активности протеасом, связанные с их субъединичным составом. Выявлено повышение активности протеасом у больных раком эндометрия и плоскоклеточными карциномами головы и шеи, тогда как у больных раком почки отмечается снижение их активности. В то же время у больных раком мочевого пузыря наблюдается увеличение активности 268 пула протеасом по сравнению с условно нормальной окружающей тканью.

2. Выявлены органоспецифические изменения активности кальпаинов в опухолевой ткани больных злокачественными новообразованиями по сравнению с условно нормальной окружающей тканью. У больных раком мочевого пузыря и плоскоклеточными карциномами головы и шеи наблюдается повышение активности кальпаинов, в то время как у больных раком почки активность кальпаинов снижена.

3. Развитие гематогенных метастазов рака почки сопровождается снижением активности протеасом в ткани первичной опухоли, увеличением активности кальпаинов и содержания транскрипционных факторов ОТ-кВ р65, НИМ а и ростового фактора УЕОК В ткани рака почки активность 268 пула протеасом коррелирует с содержанием транскрипционного фактора ЮТ-1а (р=0,04), а активность 208 пула с экспрессией №"-кВ р50 (р=0,02).

4. Увеличение глубины инвазии опухоли мочевого пузыря происходит на фоне снижения экспрессии ЫБ-кВ р50 и повышения экспрессии транскрипционного фактора НГР-1 и ростового фактора УЕвР. В опухолевой ткани больных раком мочевого пузыря выявлена прямая зависимость между экспрессией транскрипционного фактора ЫБ-кВр50 и активностью кальпаинов (р=0,04).

5. По мере увеличения стадии рака эндометрия наблюдается повышение активности кальпаинов, 20S протеасом, содержания LMP2 и РА28(3 субъединиц протеасом, снижение экспрессии транскрипционного фактора NF-кВ р50, а также повышение содержания транскрипционного фактора HIF-la и ростового фактора VEGF. Наблюдается связь активности 26S протеасом, содержания ядерного фактора NF-кВ р50 и ростового фактора VEGF с ER статусом и экспрессии транскрипционного фактора NF-кВ р50 с PR статусом рака эндометрия.

6. У больных раком эндометрия выявлены регрессионные зависимости экспрессии ядерных факторов NF-кВ р50 и NF-кВ р65 от активности 20S пула протеасом (р=0,0019; р=0,043); экспрессии транскрипционного фактора HIF-la от тотальной активности протеасом (р=0,0019) и экспрессии металлопротеиназы РАРР-А (р=0,01); установлена ассоциация между содержанием ростового фактора ИФР-І и активностью 26S (р=0,01) и 20S (р=0,01) пулов протеасом.

7. В опухолевой ткани больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи с увеличением стадии опухоли происходит повышение тотальной активности протеасом, снижение экспрессии LMP2 субъединицы протеасом и изменение экспрессии транскрипционного фактора NF-KBp50. В ткани плоскоклеточных карцином головы и шеи выявлены регрессионные зависимости экспрессии ядерного фактора NF-кВ р65 от тотальной активности протеасом (р=0,0009) и активности 20S пула протеасом (р=0,037) и экспрессии NF-кВ р50 от активности 20S пула протеасом (р=0,047).

8. Безметастатическая выживаемость больных раком почки выше при

3 3 активности 26S и 20S пулов протеасом в опухоли менее 12,2-10 и 29,8-10 Ед/мг белка, соответственно. Безрецидивная выживаемость лучше у больных раком мочевого пузыря при активности 26S пула протеасом в опухоли более 18-103 Ед/мг белка, а у больных раком эндометрия она связана со снижением экспрессии РА28Р субъединицы протеасом менее 118,5%. Общая выживаемость больных раком почки выше при регистрации тотальной активности протеасом и активности 20Б пула протеасом в опухоли ниже 36,9-103 и 29,8-103 Ед/мг белка, соответственно, в то время как у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи общая выживаемость выше при значениях тотальной активности протеасом и активности 26Б пула л л протеасом более 59,9-10 и 20-10 Ед/мг белка, соответственно.

9. Содержание ростовых и транскрипционных факторов в тканях злокачественных новообразований влияет на выживаемость больных: безрецидивная выживаемость больных РМП увеличивается при коэффициенте №-кВр65/р50 в опухоли более 1,0; безметастатическая выживаемость у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи улучшается при уровнях экспрессии в опухоли транскрипционных факторов ЫР-кВ р65, №мсВ р50, НПМа менее 9,6; 7,8 и 9 УЕ/мг белка в лунке, соответственно.

10.Создана модель прогнозирования развития гематогенных метастазов у больных раком почки, чувствительность и специфичность которой составляет 96% и 70%, соответственно. Для плоскоклеточных карцином головы и шеи рассчитана модель прогнозирования развития лимфогенных метастазов. Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели составила, соответственно, 96% и 90%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Применение модели прогнозирования развития гематогенных метастазов при раке почки позволит отработать оптимальную тактику ведения больных с данной онкопатологией. Дискриминантные функции имеют следующий вид: У1 характеризует низкую вероятность в отношении развития гематогенных метастазов; У2 — высокую вероятность в отношении развития гематогенных метастазов.

У1 = -3,2+0,026-Х1+0,03-Х2-0,02-ХЗ+0,34-Х4+0,3-Х5; У2= -33,3-0,01-Х1+0,11-Х2-1,2-ХЗ+1,57-Х4+1,8 -Х5; л где XI - тотальная активность протеасом -10' Ед/мг белка; Х2 - содержание УЕвР, пг/мг белка; ХЗ - экспрессия НИМ, УЕ/мг белка в лунке; Х4 -экспрессия №"-кВ р50, УЕ/мг белка в лунке; Х5 - коэффициент ЫР-кВ р65/50; Если У1>У2, то прогнозируют высокую вероятность развития гематогенных метастазов у больных раком почки.

Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели составляет, соответственно, 96% и 70%, диагностическая точность - 88,9%.

2. Рассчитана модель прогнозирования развития лимфогенных метастазов для ПКГШ, что в свою очередь влияет на объем и дальнейшую тактику лечения. В результате дискриминантные функции имеют следующий вид: У1 характеризует низкую вероятность в отношении развития лимфогенных метастазов; У2 - высокую вероятность в отношении развития лимфогенных метастазов

У1 У2: -39,5+28,6-Х1-0,05'Х2+0,09-ХЗ+1,4-Х4-0,87-Х5; ,= -23,6+20,1 -XI-0,0003-Х2+0,04-ХЗ+0,84-Х4-0,38 Х5; где XI - степень дифференцировки (1-низкодифференцированная опухоль, 2 - умереннодифференцированная, 3- высокодифференцированная); Х2 - тотальная активность протеасом • 10" Ед/мг белка; ХЗ - активность 208 протеасом -10"3 Ед/мг белка; Х4 - экспрессия НПМ, УЕ/мг белка в лунке; Х5 -экспрессия ОТ-кВ р50, УЕ/мг белка в лунке; Если У1>У2, то прогнозируют высокую вероятность развития лимфогенных метастазов у больных плоскоклеточными карциномами головы и шеи;

Чувствительность и специфичность полученной дискриминантной модели составила, соответственно, 96% и 90%, диагностическая точность - 93%.

Список литературы диссертационного исследования доктор медицинских наук Спирина, Людмила Викторовна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анализ полиморфизма генов CYP1B1 и СОМТ у больных раком молочной железы и тела матки [текст] / Т.С. Зимарина, В.Н. Кристенсен, E.H. Имянитов, Л.М. Берштейн // Мол. биол. - 2004. - Т.38 (З).-С. 301-307.

2. Астахова, Т.М. Исключение иммунных протеасом из клеток асцитной карциномы Krebs-II [текст] / Т.М.Астахова, Н.П. Шарова. // Известия РАН. Серия биологическая. 2006. -№ 3. -С. 275-283.

3. Берштейн, Л.М. Эпидемиология, патогенез и пути профилактики рака эндометрия : стабильность или эволюция? [текст] / Л. М. Берштейн // Практ. онкология. — 2004. — Т. 5, № 1. — С. 1-8.

4. Боровиков, В. П. STATISTICA - статистический анализ и обработка данных в среде Windows [текст] / В. П. Боровиков, П. П. Боровиков. -М.: Филин, 1998.-608 с.

5. Бохман, Я.В. Полинеоплазии органов репродуктивной системы [текст] / Я.В. Бохман, Е.П. Рыбин- СПб: НИИО им. проф. Н.Н.Петрова, 2001. -221 с. •

6. Бочкарева, Н.В. Особенности метаболизма и рецепции эстрогенов при гиперпластических процессах и раке эндометрия: автореф. дис. ... д-ра мед. наук [текст] / Н.В. Бочкарева. - Томск, 2007. - 25 с.

7. Велиев, Е.И. Особенности метастазирования рака почки, хирургическое лечения рецидивов и метастазов [текст] / Е.И. Велиев, А.Б. Богданов // Практическая онкология. - № 3 - 2005. - С. 167-171.

8. Гормонально-метаболические особенности у больных с гиперпластическими процессами и раком эндометрия [текст] / А.Л. Чернышова, Л.А Коломиец, Н.В. Бочкарева и др. // Сибирский онкологический журнал. -2009. -№3. -С. 24-29.

9. Гуляева, Л.Ф. Молекулярно- генетические аспекты

патогенеза рака эндометрия [текст] / Л.Ф. Гуляева, С.Э. Красильников // Сибирский онкологический журнал. - 2007. -Приложение. -С. 26-31.

Ю.Злокачественные новообразования в России в 2010 году (заболеваемость и смертность) [текст] / под ред. В.И. Чиссова, В.В. Старинского, Г.В. Петровой. - М.: ФГБУ «МНИОИ им. П.А. Герцена» Минздравсоцразвития России., 2012. - 260 с.

П.Какурина, Г.В. Прогнозирование метастазирования плоскоклеточных карцином головы и шеи [текст] / И.В. Кондакова, Е.Л. Чойнзонов // Вопросы онкологи. - 2012.-N 1.-С.26-32.

12.Клишо, Е.В. Матриксные металлопротеиназы и их тканевые ингибиторы при плоскоклеточном раке головы и шеи: автореф. дис. ... д-ра мед. наук [текст] / Е.В. Клишо. - Томск, 2011. - 44 с.

13.Множественность форм протеасомы и некоторые подходы к их разделению [текст] / Е.Б. Абрамова, Т.М. Астахова, П.А. Ерохов и др. // Известия РАН. Серия биологическая. - 2004. -№ 2. -С. 150-156.

14.Множественные формы протеасом как объекты для разработки новых противоопухолевых лекарств [текст] / Н.П. Шарова, Т.М. Астахова, Я.Д. Карпова и др. // Онкохирургия. - 2011. - Т. 3. - С. 37-42.

15.Немова, H.H. Протеиназы семейства кальпаинов. Структура и функции [текст] / H.H. Немова, Л.А. Лысенко, Н.П. Канцерова // Онтогенез. -2010. - Т. 41.-№ 5. -С. 381 -389.

16.Особенности формирования пулов протеасом в селезенке и печени крысы в постнатальном развитии [текст] / Н.П. Шарова, Т. М. Астахова, Л. А. Бондарева и др. // Биохимия. - 2006. - Т. 71, № 9. - С. 1278-1286.

17.Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA [текст] / О.Ю. Реброва. - М., Медиасфера, 2002. - 312 с.

18.Роль инсулиноподобных факторов роста и связывающих их белков в патогенезе и прогнозе рака эндометрия [текст] / Н.В. Бочкарева, JI.A. Коломиец, И.В. Кондакова, A.JI. Чернышова // Российский онкологический журнал.- 2009 - N З.-С. 4650.

19.Ротанова, Т.В. АТР-зависимые протеиназы и протеолитические комплексы внутриклеточной деградации белков [текст] / Т. В. Ротанова, Э. Э. Мельников // Биомедицинская химия. - 2008. - Т. 54. -Вып. 5.-С. 512-530.

20.Сорокин, А.В. Протеасомная система деградации и процессинга белков [текст] / А.В. Сорокин, Е. Р. Ким, Л.П. Овчинников // Успехи биологической химии. - 2009. - № 49. - С. 3-76.

21. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецептор 2-го типа в опухолях и сыворотке крови больных раком почки [текст] / Н.Е. Кушлинский, М.Ф. Трапезникова, Е.С. Герштейн и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. - 2008. - № 6. - С. 691 - 694.

22.Чепик, О.Ф. Морфогенез гиперпластических процессов эндометрия [текст] / О.Ф. Чепик // Практическая онкология. - 2004. - №1. - С. 9-15.

23.Чернышова, А.Л. Прогноз и особенности клинического течения рака эндометрия на фоне метаболического синдрома: автореф. дис. ... д-ра мед. наук [текст] / А.Л. Чернышова. - Томск, 2009. - 43 с.

24. A hypoxia-independent upregulation of hypoxia-inducible factor-1 by АКТ contributes to angiogenesis in human gastric cancer / B.L. Lee, W.H. Kim, J. Jung et al. // Carcinogenesis. - 2008.- Vol. 29. - P. 44-51.

25.Abnormalities in the NF-kappaB family and related proteins in endometrial carcinoma / J. Pallares, J.L. Martinez-Guitarte, X. Dolcet et al. // J. Pathol. 2004. - V. 204(5). - P. 569-577.

26. Accumulation of nuclear p53 and tumor progression in bladder cancer / D. Esrig, D. Elmajian, S. Groshen et al. // N. Engl. J Med. - 1994. - Vol. 331. -P. 1259-1264.

27.Activated pp60c-Src leads to elevated hypoxia-inducible factor (HIF)-l alpha expression under normoxia / R. Kami, Y. Dor, E. Keshet et al. // Journal of Biological Chemistry. - 2002. Vol. 277.- P. 42919-42925.

28.Activation of EGFR by proteasome inhibition requires HB-EGF in pancreatic cancer cells / C.M. Sloss, F. Wang, M.A. Palladino et al. // Oncogene. -2010. - Vol. 29(21). - P. 3146-3152.

29.Activation of NF-kB is a novel target of KRAS-induced endometrial carcinogenesis human cancer / Y. Mizumoto, S. Kyo, T. Kiyono et al. // Clin. Cancer Res.-2011.-Vol. 17(6).-P. 1341-1350.

30.Activity profile of calpains I and II in chronically infarcted rat myocardium-influence of the calpain inhibitor CAL 9961 / S. Sandmann, F. Prenzel, L. Shaw et al.//Br. J Pharmacol. - 2002. - Vol. 135(8).-P. 1951 - 1958.

31.Adams, J. Development of the Proteasome Inhibitor PS-341 / J. Adams // The oncologist. - 2002. - Vol. 7. - P. 9-16.

32.Adams, J. Proteasome inhibition: a novel approach to cancer therapy / J. Adams // Trends Mol. Med.. - 2002. - Vol. 8(4). -P. 49-54.

33.Almond, J.B. The proteasome; a novel target for cancer chemotherapy / J.B. Almond, G.M. Cohen // Leukemia. -2002. - Vol. 16. - P.433- 443.

34.Alphavbeta6-Fyn signaling promotes oral cancer progression / X Li, Y. Yang, D. Dang et al. // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 278. - P. 41646-41653.

35. Altered mRNA expression of the Rb and pi 6 tumor suppressor genes and of CDK4 in transitional cell carcinomas of the urinary bladder associated with tumor progression / T. Quentin, C. Hencke, M. Korabiwska et al. // Anticancer Res-2004.-Vol. 24.-P. 1011-1123.

36.An, J. Mechanism of von Hippel-Lindau Protein-Mediated Suppression of Nuclear Factor kappa B Activity / J. An, M.B. Rettig // Molecular and Cellular Biology, September. - 2005. -Vol. 25. - P. 7546-7556.

37.An, J. Epidermal growth factor receptor inhibition sensitizes renal cell carcinoma cells to the cytotoxic effects of bortezomib / J. An, M.B. Rettig // Mol. Cancer Ther. - 2007. - Vol. 6(1). P. 61-69.

38.Angiogenesis in bladder cancer. relationship between microvessel density and tumor prognosis / B.H. Bochner, R.J. Cote, N. Weidner et al. // J. Natl. Cancer Inst. - 1995. - Vol. 87. P. 1603-1612.

39.Antioxidants block proteasome inhibitor function in endometrial carcinoma cells / D. llobet, N. Eritja, M. Encinas et al. // Anticancer. - 2008. - Vol. 19(2).-P. 115-124.

40.Antiproliferative activity of bortezomib alone and in combination with cisplatin or docetaxel in head and neck squamous cell carcinoma cell lines // J. Wagenblast, M. Hambek, M. Baghi et al. // Journal of Cancer Research and Clinical Oncology. - 2008. - Vol. 134. - P. 323-330.

41.Apoptosis-related proteins and steroid hormone receptors in normal, hyperplastic and neoplastic endometrium / O. Bozdogan, P. Atasoy, S. Frekul et al. // Int. J. Gynecol. Pathol. - 2002. - Vol.21. - P.375-382

42.Baldwin, A.S. Control of oncogenesis and cancer therapy resistance by the transcription factor NF-kB / A.S. Baldwin // J. Clin. Invest. - 2001. -Vol.107. P. 241-246.

43. Bardos, J.I. Hypoxiainducible factor-1 and oncogenic signalling. / J.I. Bardos, M. Ashcroft // Bioessays. - 2004. - Vol. 26. P. 262-269.

44.Berchuck, A. Molecular bases of endometrial canser / A. Berchuck, J. Boyd // Cancer. - 1995. - Vol. 76. - P. 2034-2040.

45.Berg, U. Calpain proteolysis of insulin-like growth factor binding protein (IGFBP) -2 and -3, but not of IGFBP-1 / U. Berg, P. bang, C. Caarlsson-Skwirut // Biol. Chem. - 2007. - Vol. 388(8). P. 859-863.

46.Berra, E. MAP kinases and hypoxia in the control of VEGF expression / E. Berra, G. Pages, J. Pouyssegur // Cancer and Metastasis Reviews. -2000. -Vol. 19.-P. 139-145.

47. Blume-Jensen, P. Oncogenic kinase signalling / P. Blume-jensen, T. Hunter //Nature. - 2001.- Vol. 411(6835).- P. 355-420.

48.Bortezomib induces apoptosis via Bim and Bik up-regulation and synergizes with cisplatin in the killing of head and neck squamous cell carcinoma cells /

C. Li, R. Li, J.R. Grandis, D.E. Johnson // Мої. Cancer Ther. -

2008. - Vol. 7(6). - P. 1647-1655.

49.Bortezomib induces nuclear translocation of ІкВа resulting in gene-specific suppression of NF-KB~dependent transcription and induction of apoptosis in CTCL / A. Juvekar, S. Manna, S. Ramaswami et al. // Мої. Cancer Res. -2011.-Vol. 9(2).-P. 183-194.

50.Bortezomib represses HIF-Іа protein expression and nuclear accumulation by inhibiting both РІЗК/Akt/TOR and MAPK pathways in prostate cancer cells / C.D. Befani, P.J. Vlachostergios, E. Hatzidaki et al. // J. Мої. Med. (Berl) - 2012. - Vol. 90(1). - P.45-54.

51 .Bortezomib sensitizes human renal cell carcinomas to TRAIL apoptosis through increased activation of caspase-8 in the death-inducing signaling complex / A.D. Brooks, K.M. Jacobsen, W. Li et al. // Мої. Cancer Res. -2010. - Vol. 8(5). - P. 729-738.

52.Calp4: calpain is essential for embryonic development but not for cell growth and division / J.S. Arthur, J.S. Elce, C. Hegadorn et al. // Мої. Cell Biol. - 2000. - V.20. - P.4474-4481.

53.Calpain 10 gene and laryngeal cancer: a survival analysis / R. Moreno-Luna, A. Abrante, F. Esteban et al. // Head Neck. - 2011. - Vol. 33(1). - P. 72-76.

54.Calpain 3 participates in sarcomere remodeling by acting upstream of the ubiquitin-proteasome pathway / I. Kramerova, E. Kudryashova, G. Venkatraman, M.J. Spencer // Hum. Мої. Genet.- 2005.- Vol. 14.- P. 21252134.

55.Calpain-2 as a target for limiting prostate cancer invasion / A. Mamoune, J.H. Luo, D.A. Lauffenburger, A. Wells // Cancer Research. - 2003.- Vol . l.-P. 4632-4640.

56.Calpain-2 regulation of VEGF-mediated angiogenesis / Y. Su, Z. Cui, Z. Li, E.R. Block// The FASEB Journal. - 2006. - Vol. 20. - P. 1443 - 1451.

57.Calpain-3 gene expression is decreased during experimental cancer cachexia / S. Busquets, C. Garcia-Martinez, B. Alvarez et al. // Biochem. Biophys. Acta.- 2000.- Vol.1475.- P. 5-9

58.Calpains mediate a von Hippel-Lindau protein-independent destruction of hypoxia-inducible factor-la / J. Zhou, R. Koel, B. Herr et al. // Mol. Biol. Of cell. - 2006. - Vol. 17. - P. 1549 - 1558.

59.Carfilzomib-Dependent Selective Inhibition of the Chymotrypsin-like Activity of the Proteasome Leads to Antitumor Activity in Waldenstrom's Macroglobulinemia / A. Sacco, M. Aujay, B. Morgan et al. // Clin. Cancer Res.-2011.-Vol. 17(7).-P. 1753-1764.

60.Carragher, N.O. Calpain: a role in cell transformation and migration / N.O. Carragher, M.C. Frame // Int. J. Biochem. Cell Biol. - 2000.- Vol. 34.- P. 1539-1543.

61.Carragher, N.O. A novel role for FAK as a protease-targeting adaptor protein: regulation by p42 ERK / N.O. Carragher, M.A. Westhoff, V.J. Fincham // Src. Curr. Biol.- 2003.- Vol. 13.- P. 1442-1450.

62.Carraway, R.E. Enhanced vascular permeability is hypothesized to promote inflammation-induced carcinogenesis and tumor development via extravasation of large molecular proteins into the tissue / R.E. Carraway , D.e. Cochrane // Med Hypotheses. - 2012. - Vol. 78(6). - P.738-743.

63.Cell type specific expression of the IkB kinases determines the significance of PI3K/Akt signaling to NF-kB activation / J.A. Gustin, O.N. Ozes, H. Akca et al. // J. Biol. Chem. - 2003. - Vol. 279. - P. 1615-1620.

64.Changes in proteasome pool in human papillary thyroid carcinoma development / N.P. Sharova, T.M. Astakhova, Y.D. Karpova et al. // Central European Journal of Biology. - 2011.- Vol. 6. - P. 486-496.

65.Characterization of the 20S proteasome in human glioblastomas / M. Piccinini, M.T. Rinaudo, A. Anselmino et al. // Anticancer Res. - 2005. -Vol. 25(5).-P. 3203-3210.

66.Chen, C. Genetic and expression aberrations of E3 ubiquitin ligases in human breast cancer / C. Chen, A.K. Seth, A.E. Aplin // Molecular Cancer Research.- 2006.- Vol.4.- P. 695-707.

67.Clinicopathological significance of nuclear factor-kappa B, FHF-1 alpha, and vascular endothelial growth factor expression in stage III colorectal cancer / H.-C. Kwon, S.H. Kim, S.Y. Oh et al. // Cancer Sci. - 2010. -Vol. 101(6).-P. 1557-1561.

68.C-myc copy number gains in bladder cancer detected by fluorescence in situ hybridization / G. Sauter, P. Caroll, H. Moch et al. // Am. J. Pathol. -1995. -Vol. 146(5).-P. 1131-1139.

69.Co-expression of HIF-la and CAIX is associated with poor prognosis in oral squamous cell carcinoma patients / A.W. Eckert, M.H.W. Lautner, H. Taubert, et al. // J. Oral Pathol. Med. - 2009. - Vol. 39. - P. 313-317.

70.Combination therapy with IFN-alpha plus bortezomib induces apoptosis and inhibits angiogenesis in human bladder cancer cells / A. Papageorgiou, A. Kamat, W.F. Bebedict et al. // Mol. Cancer Ther. - 2006. - Vol. 5(12). - P. 3032-3041.

71.Comparison of cancers of the oral cavity and pharynx world wide: etiological clues / S. Franceschi, P. Bidoli, R. Herrero, N. Munoz // Oral Oncol. - 2000. - Vol. 36. P. 106-115.

72.Constitutive activation of Akt/ protein kinase B in melanoma leads to upregulation of NF-kB and tumor progression / P. Dhawan, A. Singh, D. Ellis, A. Richmond // Cancer Res. - 2002. - Vol. 72. - P. 7335-7442.

73.Correlation of expression of hypoxia-related proteins with prognosis in oral squamous cell carcinoma patients / A.W. Eckert, M. Kappler, J. Schubert, H. Taubert // Oral and Maxillofacial Surgery. - 2012 . - Vol. 16. - P. 189-196.

74.Correlation of NF-kappaB signal pathway with tumor metastasis of human head and neck squamous cell carcinoma / M. Yan , Q. Xu, P. Zhang et al. // BMC Cancer. - 2010. - Vol. 10. - P. 437.

75.Cortesina, G. Molecular metastases markers in head and neck squamous cell

carcinoma: reviw of the literature / G. Cortesina, T. Martone //

Acta otorinolaryngol Ital. - 2006. - Vol. 26. - P. 317-325.

76.CUE domain containing 2 regulates degradation of progesterone receptor by ubiquitin-proteasome / P.-J. Zhang, J. Zhao, H.-Y. Li et al. // EMBO J. -2007.-Vol. 26.-P. 1831-42.

77.Cusack, J.C. Rationale for the treatment of solid tumors with the proteasome inhibitor bortezomib / J.C. Cusack // Cancer Treat Rev. - 2003. - Vol. 29.-P. 21-31.

78.Cyclin E in breast tumors is cleaved into its low molecular weight forms by calpain / X.D. Wang, J.L. Rosales, A. Magliocco et al. // Oncogene.- 2003.-Vol. 22.- P. 769-774.

79.Dahlmann, B. Role of proteasomes in disease / B. Dahlmann // BMC Biochem. - 2007. - Vol. 8. - P. 1- 3.

80.Decreased level of the cell cycle regulator p27 and increased level of its ubiquitin ligase Skp2 in endometrial carcinoma but not in normal secretory or in hyperstimulated endometrium / S. Lahav-Baratz, O. Ben-Izhak, E. Sabo et al. // Mol. Hum. Reprod. - 2004. - Vol. 10(8). - P. 567-572.

81.Degradation of albumin by renal proximal tubule cells and the subsequent fate of its fragments / K.P. Gidehithlu, A.A. Pegoraro, G. Dunea et al. // Kidney International. - 2004. - Vol.65. - P. 2113-2122.

82.Deregulation of E2-EPF ubiquitin carrier protein in papillary renal cell carcinoma / F.C. Roos, A.J. Evans, W. Bremmer et al. // Am. J. Pathol. -2011. - Vol. 178(2). - P. 853-860.

83.Desdouets, C. P27: A pleiotropic regulator of cellular phenotype and a target for cell cycle dysregulation in cancer / C. Desdouets, C. Brechot // Pathol. Biol. (Paris).- 2000.- Vol.48.- P.203-210.

84.Different expression patterns of calpain isozymes 1 and 2 (CAPN1 and 2) in squamous cell carcinomas (SCC) and basal cell carcinomas (BCC) of human skin / J. Reicharth, C. Welter, T. Mitschele et al. // J. Pathol. - 2003. - Vol. 199(4).-P. 509-516.

85.Differential bortezomib sensitivity in head and neck cancer lines corresponds to proteasome, nuclear factor-kappaB and activator protein-1 related mechanisms / Z. Chen, J.L. Ricker, P.S. Malhotra et al. // Mol. Cancer Res. - 2008. - Vol. 7(7). - P. 1949-1960.

86.Direct interactions between HIF-1 alpha and Mdm2 modulate p53 function / D. Chen , M. Li, J. Luo, et al. // J. Bio.l Chem. - 2003. - Vol. 278. -Vol.13595-1398.

87.Dovhey, S.E. Loss of interferon-gamma inducibility of TAP 1 and LMP2 in renal cell carcinoma cell line / S.E. Dovhey, N.S. Ghosh, K.L. Wright // Cancer Res. - 2000 - Vol. 60. - P. 5789-5796.

88.Early Tumor Progression Associated with Enhanced EGFR Signaling with Bortezomib, Cetuximab, and Radiotherapy for Head and Neck Cancer / A. Argiris, A.G. Duffy, S. Kummar et al. // Clin. Cancer Res. - 2011. - Vol. 17(17). P. :5755-5764.

89.E-cadherin is a selective and strongly dominant prognostic factor in squamous cell carcinoma: a comparison of E-cadherin with desmosomal components / F.X. Bosch, C. Andl, U. Abel, J. Kartenbeck // Int. J. Cancer. - 2005. - Vol. 114. - P.779-790.

90.Effect of p21WAFl/CIPl expression on tumor progression in bladder cancer / J.P. Stein, D.A. Ginsberg, G.D. Grossfeld et al. // J. Natl. Cancer Inst. -1998.-Vol. 90.-P. 1072-1079.

91.EGF-receptor-mediated mammary epithelial cell migration is drive signaling from autocrine stimulation / E.J. Joslin, L.K. Opresko, A. Wells et al. // J. Cell Sci. - 2007. - Vol. 120. - P. 3688 - 3699.

92.Elevated expression of p53 gain-of-function mutation R175H in endometrial cancer cells can increase the invasive phenotypes by activation of the EGFR/PI3K/AKT pathway / P. Dong, Z. Xu, N. Jia et al. // Molecular Cancer. - 2009. - Vol. 8. - P. 103.

93.Endometrial cancer and the IGF system: a case-control study in Greece / E. Petridou, P. Koukoulomatis, D.M. Alexe et al. // Oncology. - 2003. - Vol.

64.-P. 341-345.

94.Epidermal growth factor receptor signalling intensity determines intracellular protein interaction, ubiquitination, and internalization / M.H. Schmidt, F.B. Furnari, W.K. Cavenee et al. // Proc. Nat. Acad. Sci USA.-2003.-Vol. 100.-P. 6505-6510.

95.ER-alpha36, a variant of ER-alpha, promotes tamoxifen agonist action in endometrial cancer cells via the MAPK/ERK and PI3K/Akt pathways / S.L. Lin, L.Y. Yan, X.T. Zhang et al. // PloS One. - 2010. - Vol. 5(2). - P. 9013.

96.Erlanson, M. Landberg G. Prognostic implications of p27 and cyclin E protein contents in malignant lymphomas / M. Erlanson, G. Landberg // Leyk. Lymphoma.- 2001.- Vol.40.- P. 461-470.

97.ER-a36, a novel variant of estrogen receptor a, is involved in EGFR-related carcinogenesis in endometrial cancer / B.B. Tu, S.L. Lin, L.Y. Yan et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. - 2011. - Vol. 205(3). - P. 227.

98.Estrogen improved metabolic syndrome through down-regulation of VEGF and HIF-la to inhibit hypoxia of periaortic and intra-abdominal fat in ovariectomized female rats / J. Xu, Q. Xiang, G. Lin et al. // Mol. Biol. Rep. - 2012. - Vol. 39(8). - P. 8177-8185.

99.Evaluation of c-ras oncogene product (p21) in superficial bladder cancer / D. Fontana, M. Bellina, C. Scoffone et al // Eur. Urol. - 1996. - Vol. 29. - P. 470-476.

100. Evaluation of hypoxia-inducible factor 1 alpha overexpression as a predictor of tumor recurrence and progression in superficial urothelial bladder cancer / V.E. Theodoropoulos, A.C. Lazaris, F. Sofras et al. // BJU. Int. - 2005. - Vol. 95. - P.425 - 431.

101. Expression of calpain I messenger RNA in human renal cell carcinoma: correlation with lymph node metastasis and histological type / C. Braun, M. Engel, M. Seifert et al. // Int. J Cancer. - 1999. - Vol. 84(1). P. 69.

102. Expression of c-H-ras, c-erb B1 and c-erb B2 gene products in human

bladder cancer / K. Nigawara, T. Funyu, T. Kogawa et al. // Nihon ?

Hinyokaki Gakkai Zasshi. - 1992. - Vol. 83(8). - P. 1212-1219.

103. Expression of cyclin E and cyclin-dependent kinase 2 correlates with methastasis and prognosis in colorectal carcinoma / J.Q. Li, H. Miki, M. Ohmori et al. // Hum. Pathol.- 2001.- Vol .32.- P. 945-953.

104. Expression of cyclooxogenase-2 in renal cell carcinoma: correlation with tumor cell proliferation, apoptosis, angiogenesis, expression of matrix metalloproteinase-2, and survival / Y. Miyta, S. Koga, S. Kanda et al. // Clin. Cancer Res. - 2003. - Vol. 9. - P. 1741 - 1749.

105. Expression of Glut-1 is a prognostic marker for oral squamous cell carcinoma patients / A.W. Eckert, M.H. Lautner, H. Taubert et al. // Oncol. Rep. - 2008. - Vol. 20. - P. 1381-1385.

106. Expression of hypoxiainducible factor 1 alpha, hypoxia-inducible factor 2alpha, and von Hippel-Lindau protein in epithelial ovarian neoplasms and allelic loss of von Hippel-Lindau gene: nuclear expression of hypoxia-inducible factor 1 alpha is an independent prognostic factor in ovarian carcinoma / R. Osada, A. Horiuchi, N. Kikuchi et al. // Human Pathology.-2007.-Vol. 38.-P. 1310-1320.

107. Expression of hypoxiainducible factor-1 alpha, histone deacetylase 1, and metastasis-associated protein 1 in pancreatic carcinoma: correlation with poor prognosis with possible regulation / K. Miyake, T. Yoshizumi, S. Imura et al. // Pancreas. - 2008. - Vol. 36. - P. 1-9.

108. Expression of p28GANK and its correlation with RB in human hepatocellular carcinoma / Tan L., Fu X.Y., Li H.H. et al. // Liver Int. -2005. - Vol. 25(3). - P. 667 - 676.

109. Expression of the alpha5 beta4 integrin provides prognostic information in bladder cancer / H.B. Grossman, C. Lee, J. Bromberg, M. Liebert // Oncol. Rep. -2000. - Vol. 7. - P. 13-16.

110. Expression of vascular endothelial growth factor protein in human renal cell carcinoma / J. Jacobsen, K. Grankvist, T. Rasmuson et al. // BJU

Int. - 2004. - Vol. 93(3). - P. 297-302.

111. Expression pattern of chemokine receptor 6 (CCR6) and CCR7 in squamous cell carcinoma of the head and neck identifies a novel metastatic phenotype / J. Wang, L. Xi, J.L. Hunt et al. // Cancer Res. - 2004. - Vol. 64. -P. 1861-1866.

112. Fan, M. Inhibiting proteasomal proteolysis sustains estrogen receptor-alpha activation / M. Fan, H. Nakshatri, K.P. Nephew // Mol. Endocrinol. -2004. - Vol. 18(11). - P. 2603-2615.

113. Farhana, L. Apoptosis induction by a novel retinoid-related molecule requires NF-kB activation / L. Farhana, M. Dawson, J.A. Fontana // Cancer Res. -2005. - Vol. 65. - P. 4909- 4917.

114. Finley, D.S. Tumor biology and prognostic factors in renal cell carcinoma / D.S. Finley, A.J. Pantuck, A.S. Belldegrun // Oncologist. -2011.-Vol. 16(2). -P. 2-14.

115. Firth, S.M. Cellular action of the insuline-like growth factor binding proteins / S.M. Firth, R.C. Baxter // Endocrine. Rev. - 2002. - Vol. 23. - P. 824-854.

116. Gene promoter of apoptosis inhibitory protein IAP2: identification of enhancer elements and activation by severe hypoxia / Z. Dong, J. Nishiyama, X.L. Yi et al. // Biochem. J. - 2002. - Vol. 364. - P. 413-421.

117. Gielen, S.C. Steroid-modulated proliferation of human endometrial carcinoma cell lines: any role for insuline-like growth factor signaling? / S.C. Gielen // J Soc. Gynecol. Investing. - 2005. - Vol. 12. - P. 58-64.

118. Girnita, L. Mdm2-dependent ubiguination and degradation of the insulin-like growth factor 1 receptor / L. Girnita, A. Girnita, O. Larsson // Proc. Natl .Acad. Sci. Sci. USA. - 2003.- Vol. 100.- P. 8247-8252.

119. Glading, A. Epidermal growth factor activates m-calpain (calpain II), at least in part, by extracellular signal-regulated kinase-mediated phosphorylation / A. Glading, I.J. Reynolds, H. Shiraha // Mol. Cell Biol. -2004.- Vol. 24(6).- P.2499-2512.

120. Goerlach, A. The cross- talk between NF-kappaB and HIF-1: further evidence for a significant liaison / A. Goerlach, S. Bonello // Biochem. - 2008. - Vol. 412(3). - P. 17-19.

121. Gold, K.A. Role of molecular markers and gene profiling in head and neck cancers / K.A. Gold, E.S. Kim. // Curr. Opin. Oncol. - 2009. - Vol. 21(3).-P. 206-211.

122. Goldberg, A.L. Functions of the proteasome: from protein degradation and immune surveillance to cancer therapy / A.L. Goldberg // Biochemical Society Transactions. - 2007. - Vol. 35. - P. 12-17.

123. Gonzalez, A. Specific haplotypes of the CALPAIN-5 gene are associated with polycystic ovary syndrome / A. Gonzalez, M.E. Saez, M.J. Aragon // Hum. Reprod. - 2006.- Vol. 21(4).- P. 943-951.

124. Greijer, A.E. The role of hypoxia inducible factor 1 (HIF-1) in hypoxia induced apoptosis / A.E. Greijer, E. van der Wall // J. Clin. Pathol. - 2004. - Vol. 57. -P. 1009-1014.

125. Griffin, N. Imaging in metastatic renal cell carcinoma / N. Griffin, M.E. Gore, S.A. Sohaib // AJR. -2007. - Vol. 189.- P.360-370.

126. Growth Factor Regulation of a 26SProteasomal Subunit in Breast Cancer / C.J. Barnes, F. Li, A.H. Talukder, R. Kumar // Clin. Cancer Res. -2005. -Vol. 11(8). - P. 2868 - 2874.

127. Guicciardi, M.E. Calpains can do it alone. Implication for cancer therapy / M.E. Guicciardi, G.J. Gores // Cancer biology and Therapy. -2003.-Vol. 2.-P. 153-154.

128. Hasselgren, P.O., Fischer J.E. Muscle cachexia: Current Concepts of intracellular mechanisms and molecular regulation / P.O. Hasselgren, J.E. Fischer // Annals of surgery.- 2001.- Vol. 233.- No. 1.- P.9-17.

129. Hepatitis B Virus X Protein Upregulates mTOR Signaling through IKKp to Increase Cell Proliferation and VEGF Production in Hepatocellular Carcinoma / C.J. Yen, Y.J. Lin, C.S. Yen et al. // Plos One. - 2012. - Vol. 7(7).-P. 41931.

130. Hepatocellular carcinoma cells resist necrosis during anoxia by preventing phospholipase-mediated calpain activation / A.S. Arora, P.C. de Groen, D.E. Croall et al. // J Cell Physiol. - 1996. - Vol. 167. _ P434-442.

131. Hepatocyte growth factor-activated NF-kB regulates HIF-1 activity and ODC expression, implicated in survival, differently in different carcinoma cell lines / L. Tacchini, C. De Ponti, E. Matteucci et al. // Carcinogenesis. - 2004. - Vol. 25 (11). - P. 2089-2100.

132. Hicklin, D.J. Role of the Vascular Endothelial Growth Factor Pathway in Tumor Growth and Angiogenesis / D.J. Hicklin, LM. Ellis // J. Clin. Oncol. - 2005. - Vol. 23(5). - P. 1011-1027.

133. HIF-1 and NF- B-mediated upregulation of CXCR1 and CXCR2 expression promotes cell survival in hypoxic prostate cancer cells / P.J. Maxwell, R. Gallagher, A. Seaton et al. // Oncogene. - 2007. - Vol. 26. - P. 7333-7345.

134. HIF-1 alpha is a prognostic marker in oral squamous cell carcinomas / A.W. Eckert, A. Schütze, M.H.W. Lautner et al. // Int. J. Biomark. - 2010. -Vol. 25.-P. 87-92.

135. HIFI-alpha overexpression indicates a good prognosis in early stage squamous cell carcinomas of the oral floor / T. Fillies, R. Werkmeister, P.J. Diest et al. // BMC Cancer. - 2005. - Vol. 5. P. 84.

136. High cyclin E and low p27/kipl expressions are potentially poor prognostic factors in lung adenocarcinoma patients / H. Hayashi, N. Ogawa, N. Ishiwa et al. // Lung Cancer.- 2001.- Vol. 34.- P. 59-65.

137. High expressions of CD 105 and VEGF in early oral cancer predict potential cervical metastasis / S.Y. Chien, C.Y. Su, C.F. Hwang et al. // J. Surg. Oncol. - 2006. - Vol. 94. - P.413-417.

138. Hypoxia-inducible factor-1 as a therapeutic target in endometrial cancer management / L.M. Seeber, R.P. Zweemer, R.H. Verheijen et al. // Obstet. Gynecol. Int. -2010. - Vol. 2010. - P. 580971-580979.

139. Histopathological analysis of angiogenic factors in renal cell carcinoma / H. Yagasaki, N. Kawata, Y. Takimoto, N. Nemoto // Int. J. Urol. - 2003. - Vol. 10. - P.220 -227.

140. Ho, W.C. NF-kB induced by doxorubicin is deficient in phosphorylation and acetylation and represses NF-kB-dependent transcription in cancer cells / W.C. Ho, K.M. Dickson, P. Barker // Cancer Res. - 2005. - Vol. 65. - P. 4273-4281.

141. Hoffmann, A. Circuitry of nuclear factor kappaB signaling / A. Hoffmann, D. Baltimore // Immunol. Rev. - 2006. - Vol. 210. - P. 171-186.

142. Huang, Y. The calpain family and human disease / Y. Huang, K.K. Wang // Trends Mol. Med. - 2001.- Vol. 7. - P. 355-362.

143. Human mesenchymal stem cells stimulated by TNF-alpha, LPS, or hypoxia produce growth factors by NF kappa B- but not JNK-dependent mechanism / P.R. Crisostomo, Y. Wang, T. Markel et al. // Am. Physiol. Cell. Physiol. -2008. - V. 294(3). - P. 675-682.

144. Hypoxia Inducible Factor-1 alpha Expression Correlates with Vascular Endothelial Growth Factor-C Expression and Lymphangiogenesis/Angiogenesis in Oral Squamous Cell Carcinoma / X. Liang, D. Yang, J. Hu et al. // Anticancer research. - 2008. - Vol. 28. - P. 1659-1666.

145. Hypoxia reduces hormone responsiveness of human breast cancer cells / J., Kurebayashi, T.,Otsuki, T. Moriya, H. Sonoo //Jpn. J. Cancer Res. -2001.-Vol. 92(10).-P. 1093-1101.

146. Hypoxia-inducible factor 1 alpha in clear cell renal cell carcinoma / T. Klatte, D.B. Seligson, S.B. Riggs et al. // Clinical Cancer Research. - 2007. -Vol. 13.-P. 7388-7393.

147. Hypoxia-inducible factor 1 alpha in high-risk breast cancer: an independent prognostic parameter? / G. Gruber, .H. Greiner, R. Hlushchuk et al. // Breast Cancer Research. - 2004. - Vol. 6. - P. 191-198.

148. Hypoxia-inducible factor 1 is a basic-helix-loop-helix-PAS heterodimer regulated by cellular 02 tension / G.L. Wang, B.H. Jiang, E.A. Rue, G.L. Semenza // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. - 1995. - Vol. 92 (12). -P. 5510-5514.

149. Identification and regulation of the IGFBP-4 protease and its physiological inhibitor in human trophoblasts and endometrial stroma: evidence for paracrine regulation of IGF-II bioavailability in the placental bed during human implantation / L.C. Gudice, C.A. Conover, L. Bale et al. // J. of Clinical Endocrinology and Metabolism. - 2002. - V. 87. - P. 23592366.

150. Identification and regulation of the IGFBP-4 protease and its physiological inhibitor in human trophoblast and endometrial stroma: evidence for paracrine regulation of IGF-II bioavailability in the placental bed during human implantation / L.C. Gudice, C.A. Conover, L. Bale et al. // J. of Clinical Endocrinology and Metabolism. -2002. -Vol. 87. - P. 23592366.

151. Identification of the genes for kidney: opportunity for disease-specific targeted therapeutics / W.M. Lineban, P.A. Pinto, R. Srinivasan et al. // Clin. Cancer Res. - 2007. - Vol. 15. - P. 671 - 679.

152. IGFBP-3 suppresses VEGF expression and tumor angiogenesis in head and neck squamous cell carcinoma / Oh S.H., W.Y. Kim, O.H. Lee et al. // Cancer Sci. [Электронный ресурс] - 2012. - режим доступак журн. http://informahealthcare.eom/doi/abs/l 0.3109/00016489.2011.652308

153. Ikeda, К. Estrogen receptors and their downstream targets in cancer / K. Ikeda, S. Inoue // Arch. Histol. Cytol. - 2004. - Vol. 67(5). - P. 435-442.

154. Imbalance between serum matrix metalloproteinase-2 and its inhibitor as a predictor of recurrence of urothelial cancer / K. Gohji, N. Fujimoto, J. Ohkawa et al. // Br. J. Cancer. - 1998. - Vol. 77.- P. 650-655.

155. Immunhistochemical analysis for expression of calpain 1, calpain 2 and calpastatin in endometrial cancer / D. Salenhin, I. Fromberg, C. Haugk

et al. // Anticancer Res. - 2010. - Vol. 30(7). - P. 2837-2843.

156. Immunohistochemical analysis of expression of angiogenic factirs and tumor angiogenesis in superficial badder cancer / Y. Ogura, K. Sato, T. Kato et al. // Nippon Hinyokika Gakkai Zasshi. - 1998. - Vol. 89. - P.529-537.

157. Immunohistochemical expression of MMP-9 and VEGF in squamous cell carcinoma of the tongue / A.C. Henriques, F.R. de Matos, H.C. Calvao, A. Freitas Rde // J. Oral Sci. - 2012. - Vol. 54(1). - P. 105-111.

158. Immunoproteasome overexpression underlies the pathogenesis of thyroid oncocytes and primary hypothyroidism: studies in humans and mice / H.J. Kimura, C.Y. Chen, S.C. Tzou et al. // PloS One. - 2009. - Vol. 4(11). -P. 7857.

159. Impact of serum basic fibroblast growth factor on prognosis in human renal cell carcinoma / T. Rasmuson, K. Grankvist, J. Jacobsen et al. // Eur. J. Cancer. - 2001. - Vol. 37. - P. 2199 - 2203.

160. Increased expression and altered subunit composition of proteasomes induced by continuous proteasome inhibition establish apoptosis resistance and hyperproliferation of Burkitt lymphoma cells / D. Fuchs, C. Berges, G. Opelz, et al. // J. Cell Biochem. - 2008. - Vol. 103 (1). - P. 270 - 283.

161. Increased expression of calpain 6 in uterine sarcomas and carcinosarcomas: an immunohistochemical analysis / S.J. Lee, Y.L. Choi, E.J. Lee, B.G. Kim // Int. J. Cynecol Cancer.- 2007.- Vol. 17(1).- P. 248253.

162. Increased muscle proteasome activity correlates with disease severity in gastric cancer patients / M. Bossola, M. Muscaritoli, P. Costelli et al // Annals of surgery. - Vol. 237. - P. 384-389.

163. Increased proteasome subunit protein expression and proteasome activity in colon cancer relate to an enhanced activation of nuclear factor E2-related factor 2 (Nrf2) / A. Arlt, I. Bauer, C. Schafmayer et al. // Oncogene. - 2009. - Vol. 28. - P. 3983-3996.

164. Inhibition of NF-kappaB activity decreases the VEGF mRNA

expression in MDA-MB-231 breast cancer cells / A. Shibata,

T. Nagaya, T. Imai et al. // Breast Cancer Res. Treat. - 2002. - Vol. 73(3). -P. 237-243.

165. Inhibition of Proteasome Activity by Bortezomib in Renal Cancer Cells Is p53 Dependent and VHL Independent / S A.J. Vaziri, D.R. Grabowski, J. Hill et al. // Anticancer Research. - 2009. - Vol. 29. - P. 2961-2969.

166. Inhibition of the 26S proteasome blocks progesterone receptor-dependent transcription through failed recruitment of RNA polymerase II / A.P. Dennis, D.M. Lonard, Z. Nawaz et al. // The Journal of Steroid Biochemistry and Molecular Biology. - 2005. - Vol. 94. - P. 337-346.

167. Inhibition of transcription elongation by the VHL tumor suppressor protein / D.R. Duan, A. Pause, W.H. Burgess et al. // Science.- 1995.- Vol. 269.- P. 1402-1406.

168. Insulin induces transcription of target genes through the hypoxia-inducible factor HIF-1 / E. Zelzer, Y. Levy, C. Kahana et al. // ARNT. EMBO J. - 1998. - Vol. 17. - P. 5085-5094.

169. Insulin-like growth factor 1 induces hypoxia-inducible factor 1-mediated vascular endothelial growth factor expression, which is dependent on MAP kinase and phosphatidylinositol 3-kinase signaling in colon cancer cells / R. Fukuda, K. Hirota, F. Fan et al. // J Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277. -P. 38205-38211.

170. Insulin-like growth factor binding protein-4 is a novel anti-angiogenic and anti-tumorigenic mediator secreted by dB-cAMP-differentiated glioblastoma cells / M.J. Moreno, M. Ball, M.F. Andrade et al. // Glia. -2006.-V. 53.-P. 845-857.

171. Involvement of calpains in growth factor-mediated migration / L. Leloup, G. Mazeres, L. Daury et al. // Int. J. Biochem. Cell. -2006. - Vol. 38(12).-P. 2049-2063.

172. IRAK1BP1 inhibits inflammation by promoting nuclear translocation

of NF-kappaB p50 / J.R. Conner, I.I. Smirnova, A.P. Moseman, A.

Poltorak // Proc. Natl. Acad. Sci USA. - 2010. - Vol. 107(25). - P. 1147711482.

173. Is vascular endothelial growth factor modulation a predictor of the therapeutic efficacy of gefitinib for bladder cancer? / W. Kassouf, G.A. Brown, P.C. Black et al. // J. Urol. Vol. 18. - P. 1146-1153.

174. Isolation of two novel genes, down-regulated in gastric cancer / Y. Yoshikawa, H. Mukai, F. Hino, K. Asada // Jpn. J. Cancer Res.- 2000.-Vol. 91.-P. 459-463.

175. Jang, J.S. Proteolytic degradation of the retinoblastoma family protein pi07: A putative cooperative role of calpain and proteasome / J.S. Jang, Y.H. Choi // Int. J. Mol. Med. - 1999.- Vol. 4(5).- P. 487-492.

176. Jonasch, E. Presurgical therapy in metastatic renal cell carcinoma / E. Jonasch // Expert. Rev. Anticancer Ther. - 2007. - Vol. 7 (1). - P.73-78.

177. Kaelin, W.G. Jr. The von Hippel-Lindau tummor supressor gene and kidney cancer / W.G. Jr. Kaelin // Clin. Cancer Res. -2004. - Vol. 10(18 Pt 2).-P. 6290-6295.

178. Karashima, T. Protein kinase Ci promotes nicotine-induced migration and invasion of cancer cells via phosphorylation of mu- and m-calpains / T. Karashima, L. Xu, X. Deng // Ibid. - 2006. - Vol. 281.- P.4457-4466.

179. Kassis, J. Motility is rate-limiting for invasion of bladder carcinoma cell lines / J. Kassis, R. Radinsky, A. Wells // Int. J. Biochem. Cell. Biol. -2002.- Vol. 34(7).- P. 762-775.

180. Kausch, I. Molecular aspects of bladder cancer. Ill Prognostic markers of bladder cancer / I. Kausch, A. Boehle // Urology. - 2002. - Vol. 41. -P.15-29.

181. Kim, H.J. NF-kB and IKK as therapeutic targets in cancer / H.J. Kim, N. Hawke, A.S. Baldwin // Cell Death and Differentiation. - 2006. - Vol. 13. -P. 738-747.

182. Kim, W.J. Molecular biomarkers in urothelial bladder cancer / W.-J.

Kim, S.-Ch. Bae // Cancer Sci. - 2008. - Vol. 99. - P. 646-652.

183. Kim, W.Y. Role of VHL gene mutation in human cancer / W.Y. Kim, W.G. Kaelin // J. Clin. Oncol. - 2004. - Vol. 22. - P. 4991-5004.

184. Kimura, Y. Calpain-dependent proteolysis of NF2 protein: involvement in schwannomas and meningiomas / Y. Kimura, H. Saya, M. Nakao // Neuropathology.- 2000.- Vol. 20.- P. 153-160.

185. Koduri, S. Activation of vascular endothelial growth factor (VEGF) by the ER-alpha variant, ERDelta3 / S. Koduri, A.S. Goldhar, B.K. Vonderhaar et al. // Breasr Cancer Res. Treat. - 2006. - Vol. 95(1). - P. :37-43.

186. Koepp, D.M. How the cyclin became a cyclin: Regulated proteolysis in the cell cycle / D.M. Koepp, J.W. Harper, S.J. Elledge // Cell. - 1999. -Vol. 97.-P.431-434.

187. Laemmi, U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. / U.K. Laemmi // Nature. - 1970. - Vol. 227. -P. 680-685.

188. Lah, T.T. Antiprotease therapy in cancer: hot or not / T.T. Lah, M.B. Duran Alonso, C.J. Van Noorden // Expert. Opin. Biol. Ther. - 2006.-Vol.6(3). - P. 257-336.

189. Large-scale evaluation of candidate genes identifies association between VEGF polymorphism and bladder cancer risk / M. Garcia-Closas, N. Malats, F.X. Real et al. // PloS. Genet. - 2007. - Vol. 3. - P. 287 - 293.

190. Le Tourneau, C. Molecularly targeted agents in the treatment of recurrent or metastatic squamous cell carcinomas of the head and neck / Le C. Tourneau, E.X. Chen // Hematol. Oncol. Clin. North. Am. - 2008. - Vol. 22(6).-P. 1209-1220.

191. Lenz, H.J. Clinical update: proteasome inhibitors in solid tumors /H.J. Lenz // Cancer Traet. Rev. - 2003. - Vol. 29. - P. 41-48.

192. Leptin upregulates VEGF in breast cancer via canonic and non-canonical signalling pathways and NFkappaB/HIF-1 alpha activation / R.R.

Gonzalez-Perez, Y. Xu, S. Guo et al. // Cell Signal. - 2010. -

Vol. 22.-P. 1350-1362.

193. Levels of hypoxia-inducible factor-1 alpha during breast carcinogenesis. / R. Bos, H. Zhong, C.F. Hanrahan et al. //J. Natl. Cancer. Inst. - 2001. - Vol. 93. - P. 309-314.

194. Li, B. Bax degradation by the ubiquitin/proteasome-dependent pathway: Involvement in tumor survival and progression / B. Li, Q.P. Dou // Biochemistry. - 2000.- Vol. 97.- N. 8.- P. 3850-3855.

195. Ligand-dependent switching of ubiquitin-proteasome pathways for estrogen receptor / Y.Tateishi, Y. Kawabe, T. Chiba et al. // EMBO J. -2004. - Vol. 23(24). - P. 4813-4823.

196. Lineban, W.M. Focus on kidney cancer / W.M. Lineban, B. Zbar // Cancer Cell. - 2004. - Vol. 6. - P. 223 -228.

197. Lionello, M. Potential prognostic and therapeutic role for angiogenesis markers in laryngeal carcinoma / M. Lionello, A. Staffieri, G. Marioni // Acta Otolaryngol. - 2012. - Vol. 132(6). - P. 574-582.

198. Lorch, J.H. Bortezomib inhibits cell-cell adhesion and cell migration and enhances epidermal growth factor receptor inhibitor-induced cell death in squamous cell cancer / J.H. Lorch, T.O. Thomas, H.J. Schmoll // Cancer Res. - 2007. - Vol 67(2). - P. 727 -734.

199. Loss of cell cycle regulators p27 (Kipl) and cyclin E in transitional cell carcinoma of the bladder correlates with tumor grade and patient survival / J.J. Pizzo, A. Borkowski, S.C. Jacobs, N. Kyprianou // Am. J. Pathol.-1999.-Vol. 155. P. 1129-1136.

200. Loss of PTEN facilitates HIF-1-mediated gene expression / W. Zundel, C. Schindler, D. Haas-Kogan et al. // Genes and Development. -2000.-Vol. 14.-P. 391-396.

201. Low E-cadherin expression in bladder cancer at the transcriptional and protein level provides prognostic information / Z. Popov, S. de Medina, M.-A. Lefrere-Belda et al. // British Journal of Cancer. - 2000. - Vol. 83. - P.

209-214.

202. Low expression of p27(Kipl) is associated with tumor size and poor prognosis in patients with renal cell carcinoma / T. Migita, Y. Oda, S. Naito, M. Tsuneyoshi // Cancer. - 2002. - Vol. 94(4). - P.973-979.

203. Lui, K. Antisense RNA-mediated deficiency of the calpain protease, nCL-4, in NIH3T3 cells is associated with neoplastic transformation and tumorogenesis / K. Lui, L. Li., S.N. Cohen // J. Biol. Chem.- 2000.- Vol. 275.-P. 31093-31098.

204. Lukits, J.The effect of the microenvironment of head and neck cancers on tumor progression / J. Lukits // Magy Oncol. - 2009. - Vol. 53(1). - P. 51-59.

205. mAKAP compartmentalizes oxygen-dependent control of HIF-1 alpha / W. Wong, A.S. Goehring, M.S. Kapiloff et al. // Sci. Signal.- 2008. - Vol. 1 (51).-P. 18.

206. Mark, I. Molecular biology of bladder cancer / I. Mark, C.E. Salem, P.A. Jones // Comprehensive Textbook of Genitourinary Oncology / edited by N. Vogelzang et al.; Philadelphia: Lippincott Williams and Wilkins. -USA, 2000. - 298-309.

207. Mehrotra, R. Recent advances in understanding carcinogenicity of oral squamous cell carcinoma: From basic molecular biology to latest genomic and proteomic findings / R. Mehrotra, E.N. Vasstrand, S.O. Ibrahim // Cancer Gen. Proteom. - 2004. - Vol. 1. - P. 283-294.

208. Melnikova, M.S. Two different stages of epidermal growth factor (EGF) receptor endocytosis are sensitive to free ubiquitin depletion produced by proteasome inhibitor MG132 / M.S. Melnikova, K.A. Kondratov, E.S. Kornilova // Cell. Biol. Int. - 2006. - Vol. 30(1). - P. 31-43.

209. Metastasis to regional lymph nodes in patients with esophageal squamous cell carcinoma: CT versus FDG PET for presurgical detection -prospective study / Y.C. Yoon, K.S.L. Lee, B.-T. Shim et al. // Nuclear medicine. - 2003. - Vol. 227. - P. 764-770.

210. Microarray-based gene expression profiling of benign, atypical and anaplastic meningiomas identifies novel genes associated with meningioma progression / G. Wrobel, P. Roerig, F. Kokocinski et al. // Int. J. Cancer. -2005. - Vol. 114. - P. 249-256.

211. MicroRNA-520/373 family functions as a tumor suppressor in estrogen receptor negative breast cancer by targeting NF-kB and TGF-p signaling pathways / I. Keklikoglou, C. Koemer, C. Schmidt et al. // Oncogene.-2012.-Vol. 31(37).-P. 4150-4163.

212. Microvessel density at presentation predicts subsequent muscle invasion in superficial bladder cancer / J.C. Goddard, C.D. Sutton, P.N. Furness et al. // Clin Cancer Res. - 2003. - Vol. 9. - P. 2583 - 2586.

213. Modulation of the activity of calcium-activated neutral proteases (calpains) in chronic lymphocytic leukemia (B-CLL) cells / J.M. Witkowski, E. Zmuda-Trzebiatowska, J.M. Swiercz et al. // Blood. - 2002.- Vol. 100(5).-P. 1802-1810.

214. Molecular characterization of kidney cancer: association of hyaluronic acid family with histological subtypes and metastasis / A. Chi, S.P. Shirodkar, D.O. Escudero et al. // Cancer. - 2012. - Vol. 118(9). - P. 2394402.

215. Molecular identification of latent precancers in histologically normal endometrium / G.L. Mutter, T.A. Ince, J.P. Baak, G.A. Kust // Cancer Res. -2001.-Vol. 61.-P. 4311 -4314.

216. Molecular markers of endometrial carcinoma detected in uterine aspirates / E. Colas, C. Perez, S. Cabrera et al. // Int. J. Cancer. - 2011. Vol. 129 (10). - P.2435-2444.

217. Molecular markers of head and neck squamous cell carcinoma: promising signs in need of prospective evaluation / P. Lothaire, E. Aazmbuja, D. Dequanter et al. // Head Neck. - 2006. - Vol. 28(3). - P. 256269.

218. Molecular profiling of head and neck tumors / C. Sotiriou, P. Lothaire,

D. Dequanter et al. // Curr. Opin. Oncol. - 2004. - Vol. 16(3). - P.

211-214.

219. Molecular prognostic factors in bladder / M. Buscarini, M.L. Quek, P. Gill et al. // B J U International. - 2005. - Vol. 95. - P. 739-742.

220. Molitoris, K.H. Inhibition of oxygen-induced hypoxia-inducible factor-1 alpha degradation unmasks estradiol induction of vascular endothelial growth factor expression in ECC-1 cancer cells in vitro / K.H. Molitoris, A.A. Kazi, R.D. Koos // Endocrinology. - 2009. -Vol. 150(12). -P. 5405-5414.

221. Muscle-specific calpain, p94, responsible for limb girdle muscular dystrophy type 2A, associates with connectin through IS2, a p94-specific sequence / H. Sorimachi, K. Kinbara, S. Kimura et al. // J. Biol. Chem. -1995. - Vol. 270. - P. 31158-31162.

222. Mutant epidermal growth factor receptor enhances induction of vascular endothelial growth factor by hypoxia and insulin-like growth factor-1 via a PI3 kinase dependent pathway / K. Clarke, K. Smith, W.J. Gullick, A.L. Harris // Br. J. Cancer. - 2001. - Vol. 84. - P. 1322-1329.

223. Mutter, G.L. PTEN, a protein tumor supressor / G.L. Mutter // Amer. J. Pathol.-2001.-Vol. 158.-P. 1895-1898.

224. Netto, G.J. Molecular Diagnostics in Urologic Malignancies A Work in Progress / G.J. Netto // Arch. Pathol. Lab. Med.- 2011. - Vol 135. - P. 610-621.

225. NF-kappaB and estrogen receptor alpha interactions: Differential function in estrogen receptor-negative and -positive hormone-independent breast cancer cells / N.Gionet, D. Jansson, S. Mader, M.A. Pratt // J. Cell Biochem. - 2009. - Vol. 107(3). - P. 448-459.

226. NF-kB in cancer: from innocent bystander to major culprit / M. Karin, Y. Cao, F.R. Greten, Z.W. Li // Nat. Rev. Cancer. - 2002. - Vol. 2. - P. 301310.

227. NF-kB subunits RelA/p65 and c-Rel potentiate but are not required for

Ras-induced cellular transformation / J.L. Hanson, N.

Hawke, D. Kashatus et al. // Cancer Res. - 2004. - Vol. 64. - P. 7248-7255.

228. Nuclear factor kappa B: a marker of chemotherapy for human stage IV gastric carcinoma / Y.M. Long, S. Ye, J. Rong, W.R. Xie // World J. Gastroenterol. - 2008. - Vol. 14(30). - P. 4739-4744.

229. Nuclear factor-kappaB mediates angiogenesis and metastasis of human bladder cancer through the regulation of interleukin-8 / T. Karashima, P. Sweeney, A. Kamat et al. // Clin. Cancer. Res. - 2003. - Vol. 9(7).-P. 2786-2797.

230. Ohguchi, K. Involvement of calpain in melanogenesis of mouse В16 melanoma cells / K. Ohguchi // Мої. Cell Biochem. - 2005.- Vol. 275(1-2).-P. 103-107.

231. Orlowski, M. Ubiquitin-independent proteolytic functions of the proteasome / M. Orlowski, S. Wilk // Arch. Biochem. Biophys. - 2003. -Vol. 415(1).-P. 1-5.

232. Overexpression of CD44V8-10 in urinary exfoliated cells as an independent prognostic predictor in patients with urothelial cancer / H. Miyake, H. Eto, S. Arakawa et al. // J. Urol. - 2002. - Vol. 167: 1282-1287.

233. Overexpression of hypoxia-inducible factor 1 alpha in common human cancers and their metastase. / H Zhong, A.M. De Marzo, E.Laughner et al. // Cancer Res. - 1999.-Vol. 59.-P. 5830-5835.

234. Overexpression of hypoxiainducible factor-1 alpha predicts an unfavorable outcome in urothelial carcinoma of the upper urinary tract / H.L. Ke, Y.C. Wei, S.F. Yang et al. // International Journal of Urology -2008.-Vol. 15.-P. 200-205.

235. Overexpression of m-calpain in human colorectal adenocarcinomas / A. Lakshmikuttyamma, P. Selvakumar, R. Kanthan et al. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. - 2004. - Vol. 13(10). - P. 1604-1609.

236. Overexpression of MDM-2 mRNA and mutation of the p53 tumor suppressor gene in bladder carcinoma cell lines / Y-T. Cheng, Y-L. Li, J. D. Wu et al. // Molecular Carcinogenesis - 1995. - Vol. 13. - P. 173181.

237. Overexpression of the insuline-like growth factor I receptor and activation of the AKT pathway in hyperplastic endometrium / A.S. McCampbell, R.R. Broaddus, D.S. Loose, P.J.A. Davis // Clin. Cancer Res. - 2006.- Vol. 12.- P. 6373-6378.

238. Park, D.J. The role of proteasome inhibitors in solid tumors D.J. Park, H.J. Lenz // Ann Med. - 2004. - Vol. 36(4). - P. 296-303.

239. Perks, C.M. The insulin-like growth factor (IGF) family and breast cancer / C.M. Perks, J.M. Holly // Breast Dis. - 2003. -Vol. 18. - P. 45-60.

240. Phase II trial of antiepifermal growth factor receptor antibody C225 in patients with advanced renal cell carcinoma / R.J. Motzer, R. Amato, M. Todd et al. // Invest. New Drugs. - 2003. - Vol. 21. - P. 99 - 101.

241. PI3-kinase/Akt is constitutively active in primary acute myeloid leukemia cells and regulates survival and chemoresistance via NF-kB, map kinase, and p53 pathways / V.L. Grandage, R.E. Gale, D.C. Linch, A. Khwaja // Leukemia. - 2005. - Vol. 19. - P. 586-594.

242. Plasma insulin-like growth factor 1, insulin-like growth factor binding protein 3, and risk of colorectal cancer: a prospective study in northern Sweden / R. Palmqvist, G. Hallmans, S. Rinaldi et al. // Gut. - 2002. Vol. 50. -P. 642-646.

243. Plasma insulin-like growth factor-I, insulin-like growth factor-binding proteins, and prostate cancer risk: a prospective study / P. Stattin, A. Bylund, S. Rinaldi et al. // J Natl. Cancer Inst. - 2000. - Vol. 92. - P. 1910-1917.

244. Plasma levels of insulin-like growth factor-1 and binding protein-3, and their association with bladder cancer risk / H. Zhao, H.B. Grossman, M.R. Spitz et al. // J. Urol. - 2003. - Vol. 169. - P. 714-717.

245. Popp, O. The calpastatin-derived calpain inhibitor CP IB reduces

mRNA expression of matrix metalloproteinase-2 and -9 and

invasion by leukemic THP-1 cells / O. Popp, M. Heidunger, L. Ruiz-Heinrich // Biol. Chem. - 2003.- Vol. 384(6).- P. 951-958.

246. Possible regulation of the conventional calpain system by skeletal muscle-specific calpain, p94/calpain 3 / Y. Ono, K. Kakiyuma, F. Torii, et al. // J. Biol. Chem. - 2004. - Vol. 279. - P. 2761 -2771.

247. Posttranslational regulation of the retinoblastoma gene family member pi07 by calpain protease / J.S. Jang, S.J. Lee, Y.H. Choi et al. // Oncogene.-1999.- Vol. 18.-P. 1789-1796.

248. Potential role of LMP2 as an anti-oncogenic factor in human uterine leiomyosarcoma: morphological significance of calponin hi / T. Hayashi, A, K. Sano et al.//FEBS. - 2012.-Vol. 586(13).-P. 1824-1831.

249. Predictive value of cell cycle markers p53, MDM2, p21 and Ki-67 in superficial bladder tumor recurrence / C. Pfister, L. Moore, P. Allard et al. // Clin. Cancer Res. - 1999. - Vol. 5. - P.4079-4084.

250. Pregnancy-associated plasma protein-A involved in matrix mineralization of human adult mesenchymal stem cells and angiogenesis in the chick chorioallontoic membrane / J. Jadlowiec, D. Dongell, J. Smith et al.. //Endocrinology. - 2006. - V. 146(9). - P. 3765-3772.

251. Preoperative and postoperative correlation of histopathological findings in cases of endometrial hyperplasia / G. Gundem, F. Sendag, M. Kazandi et al. // Eur. J. Gynaecol. Oncol. - 2003. - Vol. 24 (3^). - P. 330333.

252. Progesterone inhibits human endometrial cancer cell growth and invasiveness: down-regulation of cellular adhesion molecules through progesterone B receptors / D. Dai, D.M. Wolf, E.S. Litman et al. // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62(3). - P. 881-886.

253. Progesterone receptor isoform identification and subcellular localization in endometrial cancer / K.K. Leslie, M.-P. Stein, N.S. Kumar et. al // Gynecol Oncol. -2005.-Vol. 96(1).- P. 32-41.

254. Prognostic factors and treatment outcomes in patients with operated endometrial cancer: analysis of 674 patients at a single institution / A. Yoney, C. Yildrim, L. Isikli, M. Unsal / J. BUON. - 2011. -Vol. 16(1).- P. 64-73.

255. Prognostic significance of HIF-1 alpha overexpression in human pancreatic cancer / T. Shibaji, M. Nagao, N. Ikeda et al. // Anticancer Res. -2003. - Vol. 23(6C). - P. 4721-4727.

256. Prognostic significance of plasma placental growth factor levels in renal cell cancer: an association with clinical characteristics and vascular endothelial growth factor levels / K. Matsumoto, K. Suzuki, H. Koeke et al. // Anticancer Res. - 2003. - Vol. 23. - P. 4953 - 4958.

257. Prognostic value of histologic subtypes in renal cell carcinoma: a multicenter experience / J.J. Patard, E. Leray, N. Rioux-Leclercq, et al. // J. Clin. Oncol. -2005. - Vol. 23(12). - P. 2763-2771.

258. Proteasomal degradation of human CYP1B1: effect of the Asn453Ser polymorphism on the post-translational regulation of CYP1B1 expression / S. Bandiera, S. Weidlich, V. Harth et al. // Mol. Pharmacol. - 2005. - Vol. 67(2). P. 435-443.

259. Proteasomal degradation of IRS-2, but not IRS-1 by calcineurin inhibition: attenuation of insulin-like growth factor-I-induced GSK-3beta and ERK pathways in adrenal chromaffin cells / S. Satoh, T. Yanagita, T. Maruta et al. // Neuropharmacology. - 2008.- Vol. 55(1). - P. 71-79.

260. Proteasomal non-catalytic subunit PSMD2 as a potential therapeutic target in association with various clinicopathologic features in lung adenocarcinomas / Y. Matsuyama, M, Suzuki, C. Atima et al. // Mol. Carcinog. - 2011. - Vol. 50(4). - P. 301-309.

261. Proteasomal processing of albumin by renal dendritic cells generates antigenic peptides / D. Macconi, C. Chiabrando, S. Schiarea et al. // J. Am. Sco. Nephrol. - 2009. - Vol. 20(1). - P. 123-130.

262. Proteasome affects the expression of aryl hydrocarbon receptor-

regulated proteins / T. Ishida, M. Kawakami, H. Baba et al. //

Envorn. Toxicol. Pharmacol. -2008. - Vol. 26(3). - P. 348-354.

263. Proteasome inhibitor PS-341 (bortezomib) induces calpain-dependent IkappaB(alpha) degradation / C. Li, S. Chen, P. Yue et al. // J. Biol. Chem. -2010. - Vol. 285 (21). - P. 16096-16104.

264. Proteasome inhibitor PSI induces apoptosis in human mesothelioma cells / X. Sun, M. Gulyas, A. Hjerpe et al. // Cancer Lett. - 2006.- Vol. 232(2).- P. 161-170.

265. Proteasome inhibitors induce death but activate NF-kB on endometrial carcinoma cell lines and primary culture explants / X. Dolcet, D. Llobet, M. Encinas et al. // The Journal of biological chemistry. - 2006. - Vol. 281. - P. 22118-22130.

266. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O.H. Lowry, N.J. Rosebrough, A.L. Farr, R.J. Randall // J. Biol. Chem. - 1951. Vol. 193. -P.265-275.

267. Raghavan, D. Molecular targeting and pharmacogenomics in the management of advanced bladder cancer / D. Raghavan // Cancer. - 2003. -Vol. 97.-P. 2083-2089.

268. Ras oncogene mutations in urine sediments of patients with bladder cancer / N. Buyuro, H. Tigli, F. Ozcan, N. Dalay // J. Biochem. Mol. Biol. -2003.-Vol. 36. P. 399-402.

269. Ratcliffe, P.J. HIF and cancer / P.J. Ratcliffe // Endocrine Abstracts. -2003.-Vol. 6.-P. 10.

270. Reciprocal positive regulation of hypoxia-inducible factor 1_ and nsulin-like growth factor 2 / D. Feldser, F. Agani, N.V. Iyer et al. //Cancer Res. - 1999. - Vol. 59. - P. 3915-3918.

271. Reduced expression of insulin-like growth factor I receptors in MCF-7 breast cancer cells leads to a more metastatic phenotype / P.A. Pennisi, V. Barr, N.P. Nunez, et al. // Cancer Res. - 2002. - Vol. 62(22). - P. 65296537.

272. Reduction of transforming growth factor-beta type II receptor is caused by the enhanced ubiquitin-dependent degradation in human renal cell carcinoma / H. Fukasawa, T. Yamamoto, Y. Fujigaki et al. //Int. J. Cancer.-2010.-Vol. 127(7).-P. 1517-1525.

273. Regulation of receptor for activated C kinase 1 protein by the von Hippel-Lindau tumor suppressor in IGF-I-induced renal carcinoma cell invasiveness / X. He, J. Wang, E.M. Messing, G. Wu // Oncogene. — 2011. — Vol. 30(5).-P. 535-547.

274. Regulation of transformed state by calpastatin via PKCepsilon in NIH3T3 mouse fibroblasts / T. Hiwasa, M. Nakata, S. Ohno et al. // Biochem. Biophys. Commun. - 2002. - Vol 290.- P. 510-517.

275. Ricort J.M. Insulin-like growth factor-binding protein-3 activates a phosphotyrosine phosphatase. Effects on the insulin-like growth factor signaling pathway / J.M. Ricort, M. Binoux // J. Biol. Chem. - 2002. - Vol. 277.-P. 19448-19454.

276. Risk and predictors of malignancy in women with endometrial polyps / S.L. Wethington, T.J. Herzog, W.M. Burke et al. // Ann. Surg. Oncol. -2011.-Vol. 18(13).-P.3819-3823.

277. Risk factors and risk markers for oral cancer in high incidence areas of the world / D.K. Daftary, P.R. Murti, R.B. Bhonsle et al. // Oral Cancer / editor: N.W. Johnson; Cambridge University Press. - Cambridge, 1991. - P. 29-63.

278. Rock, K.L. Degradation of cell proteins and the generation of MHC class I-presented peptides / K.L. Rock, A.L. Goldberg // Ann. Rev. Immunol. - 1999.- Vol .17.- P. 739-779.

279. Ryu, K. Hypoxia-inducible factor 1 alpha represses the transcription of the estrogen receptor alpha gene in human breast cancer cells / K. Ryu, C. Park, Y. Lee // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 2011. - Vol. 407(4). -P. 831-836.

280. Samani, A.A. The receptor for the type I insulin-like growth factor

and its ligands regulate multiple cellular functions that impact on

metastasis / A.A. Samani, P. Brodt // Surg. Oncol. Clin. N. Am. - 2001. -Vol. 10.-P. 289-312.

281. Satish, L. Interferon-inducible protein 9 (CXCLll)-induced cell motility in keratinocytes requires calcium flux-dependent activation of mu-calpain / L. Satish, H.C. Blair, A. Glading // Mol. Cell Biol. - 2005.- Vol. 25.-P. 1922-1941.

282. Scaled-down purification protocol to access proteomic analysis of 20S proteasome from human tissue samples: comparison of normal and tumor colorectal cells / M. Ducoux-Petit, S. Uttenweiler, F. Brichory et al. // J. Proteome Res. - 2008. - Vol. 7(7). - P. 2852-2859.

283. Schmitz, M.L. I kappa B-independent control of NF-kappa B activity by modulatory phos-phorylations / M.L. Schmitz, S. Bacher, M. Kracht // Trends Biochem. Sci. - 2001. - Vol. 26. - P. 186-190.

284. Sensitivity of tumor cells to proteasome inhibitors is associated with expression levels and composition of proteasome subunits / A. Busse, M. Kraus, I.K. Na et al. // Cancer. - 2008. - Vol. 112(3). P. 659-670.

285. Sergeev, I.N. Calcium signaling in cancer and vitamin D / I.N. Sergeev // J. Steroid. Biochem. Mol. Biol. - 2005. - Vol. 97(1-2). - P. 145151.

286. Shapochka, D.O. Relationship between NF-kB, ER, PR, Her2/neu, Ki67, p53 expression in human breast cancer / D.O.Shapochka, S.P. Zaletok, M.I. Gridyuk // Exp. Oncol. - 2012. - Vol. 34(4). - P. 358-363.

287. Sherman, M.E. Theories of endometrial carcinogenesis: a multidisciplinary approach / M.E. Sherman // Mod. Pathol. - 2000. - Vol. 13.-P. 295-308.

288. Sidransky, D. Molecular genetics of head and neck cancer / D. Sidransky //Curr. Opin. Oncol. - 1995. - Vol. 7. - P. 229-233.

289. Significance of adhesion molecules as biological prognostic factor in locally advanced laryngeal squamous cell carcinoma / G. Cortesina, M.

Bussi, M.T. Carlevato et al. // Acta Otalaryngol. - 1996. - Vol.

116(2).-p. 350-352.

290. Singh, S. Immunoproteasome expression in a non-immune tissue, the ocular lens / S. Singh, N. Awasthi, C. Egwuagu // Arch. Biochem. Biophys. -2002. -V. 405. - P. 147-153.

291. Smith, I.J. Calpain activation causes a proteasome dependent increase in protein degradation and inhibits the Akt signaling pathway in rat diaphragm muscle / I.J. Smith, S.L. Dodd // Exp. Physiol. - 2007.- Vol. 92(3).- P. 561-573.

292. Soluble VEGF receptor-2 is increased in sera of subjects with metabolic syndrome in association with insulin resistance / H. Wada, n. Satoh, S. Kitaoka et al. // Atherosclerosis. - 2010. - Vol. 208(2). - P. 512517.

293. Sorimachi, H. Calpain chronicle—an enzyme family under multidisciplinary characterization / H.Sorimachi, S. Hata, Y. Ono // Proc. Jpn. Acas. Ser. B Phys. Biol. Sci. - 2011. - Vol. 87 (6). - P. 287-327.

294. Stark, L.A. Nucleolar sequestration of RelA (p65) regulates NF-kB-driven transcription and apoptosis / L.A. Stark, M.G. Dunlop // Mol. Cell. Biol. - 2005. - Vol. 25. - P. 5985-6004.

295. Stress-activated signaling pathways mediate the stimulation of pregnancy-associated plasma protein-A expression in cultured human fibroblasts / Z.T. Resch, C. Oxvig, L.K. Bale et al. // Endocrinology. - 2006. - V. 147(2). - P. 885-890.

296. Structure, activation, and biology of calpain / Suzuki K., Hata S., Kawabata Y. et al. // Diabetes.- 2004. - Vol. 53.- P. 12-18.

297. Stupack, D.G. Get ligand, get a life: integrins, signalling and cell survival / D.G. Stupack, D.A. Cheresh // J. Cell Sci. - 2002.- Vol. 115.- P. 3729-3738.

298. T cells lacking immunoproteasome subunits MECL-1 and LMP7 hyperproliferate in response to polyclonal mitogens / C.M. Caudill, K. Jayarapu, L. Elenich et al. // J. Immunol. - 2006. - V. 176.-P. 4075-4082.

299. Tannapfel, A. Tumor markers in squamous cell carcinoma of the head and neck: clinical effectiveness and prognostic value / A.Tannapfel, A. Weber. - 2001. - Vol. 258(2). - P. 83-88.

300. Targeting both HIF-1 and HIF-2 in human colon cancer cells improves tumor response to sunitinib treatment / K. Burkitt, S.Y. Chun, D.T. Dang, L.H. Dang // Мої. Cancer Ther. - 2009. - Vol. 8(5). P. 1-9.

301. Targeting the IKKp/mTOR/VEGF signaling pathway as a potential therapeutic strategy for obesity-related breast cancer / C.T. Chen, Y. Du, H. Yamaguchi et al. // Мої. Cancer Ther. - 2012. - Vol. 11(10). - P. 22122221.

302. Targeting von Hippel-Lindau pathway in renal cell carcinoma / P.H. Patel, R.S.V. Chadalavada, R.S.K. Chaganti et al. // Clin. Cancer Res. -2006.- Vol. 12 (24), P. 7215 - 7220.

303. The 20S proteasome processes NF-kappaBl pl05 into p50 in a translation-independent manner / A.K. Moorthy, O.V. Savinova, J.Q. Ho et al. // EMBO J. - 2006. - Vol. 25(9). - P. 1945-1956.

304. The 26 S proteasome-mediated production of an authentic major histocompatibility class I-restricted epitope from an intact protein substrate / S. Ben-Shahar, A. Kolmosh, E. Nadav et al. // J. Biol. Chem. - 1999. - Vol. 274.-P. 21963-21972.

305. The 26S proteasome activity is down-regulated in lung cancer stemlike cells propagated in vitro / J. Pan, Q. Zhang, Y. Wang, M. You // PLoS ONE.-2010.-Vol. 5. -P.13298.

306. The 26S proteasome inhibition induces apoptosis and limits growth of human pancreatic cancer / S.A. Shah, M.W. Potter, T.P. McDade et al. // J. Cell Biochem.-2001.-Vol. 82(1).-P. 110-122.

307. The calpain system / D.E. Goll, V.F. Thompson, H. Li et al. // Physiol. Rev.- 2003.- Vol. 83.- P. 731-801.

308. The effect of RhoA and proteasome inhibitor MG132 on angiogenesis in tumors / C.X. Yue, J.Ma, H.J. Zhou et al. // Sichuan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban. - 2011. - Vol 42(4). - P.445-451.

309. The expression of hypoxia-inducible factor 1 alpha is a favorable independent prognostic factor in renal cell carcinoma / A. Lidgren, Y. Hedberg, K. Grankvist et al. // Clin. Cancer Res. - 2005. - Vol. 11. - P. 1129- 1135.

310. The human 26S and 20S proteasomes generate overlapping but different sets of peptide fragments from a model protein substrate / N.P.N. Emmerich, A.K. Nussbaum, S. Stevanovic et al. // J. Biol. Chem.. - 2000. -Vol. 275.-P. 21140-21148.

311. The insulin-like growth factor binding protein superfamily: new perspectives / R.G. Rosenfeld, V. Hwa, L. Wilson et al. // Pediatrics. - 1999. - 104(4 Pt 2). - P. 1018-1021.

312. The LMP7-K allele of the immunoproteasome exhibits reduced transcript stability and predicts high risk of colon cancer / B. Fellerhoff, S. Gu, B. Laumbacher et al. // Cancer res. - 2011. - Vol. 71(23). P. 71457154.

313. The prognostic value of angiogenesis and metastasis-related genes for progression of tarnsitional cell carcinoma of the renal pelvis and ureter / Inoue K., Kamada M., Slaton J.W. et al. // Clin. Cancer. Res. - 2002. - Vol. 8.-P. 1863- 1870.

314. The prognostic value of angiogenesis factor expression for predicting recurrence and metastasis of bladder cancer after neoadjuvant chemotherapy and radical cystectomy / K. Inoue, J.W. Slaton, T. Karashima et al. // Clin. Cancer. Res. - 2000. - Vol. 6. - P. 4866 - 4873.

315. The prognostic value of hypoxia markers in t2-staged oral tongue cancer / J.I. Roh, K.-J. Cho, G.Y. Kwon et al. // Oral. Oncol. - 2009. - Vol.

45. P. 63-68.

316. The proteasome inhibitor bortezomib synergizes with gemcitabine to block the growth of human 253JB-V bladder tumors in vivo / A.M. Kamat, T. Karashima, D.W. Davis et al. // Mol. Cancer. Ther. - 2004. - Vol. 3(3). -P. 279-290.

317. The proteasome inhibitor PS-341 overcomes TRAIL resistance in Bax and caspase 9-negative or Bcl-xL overexpressing cells / T.R. Johnson, K. Stone, M. Nikrad et al. // Oncogene. - 2003. - Vol. 22. - P. 4953-4963.

318. The relation between hypoxia-inducible factor (HIF)-lalpha and HIF-2alpha expression with anemia and outcome in surgically treated head and neck cancer / S.C. Winter, K.A. Shah, C. Han et al. // Cancer. - 2006. - Vol. 107.-P. 757-766.

319. The role of the IGF system in cancer growth and metastasis: overview and recent insights / A.A. Samani, S. Yakar, D. LeRoith, P. Brodt // Endocrine Reviews. - - 2007. - Vol. 28(1). - P. 20-47.

320. The tumour suppressor protein VHL targets hypoxia-inducible factors for oxygen-dependent proteolysis / P.H. Maxwell, M.S. Wiesener, G.W. Chang et al. // Nature. - 1999. - Vol. 399. - P. 271-275

321. The ubiquitin-proteasome pathway and enhanced activity of NF-kappaB in gastric carcinoma / L. Wu, Z. Pu, J. Feng et al. // J. Surg. Oncol. -2008,- Vol. 97(5). - P. 439-444.

322. Tranforming growth factor -beta regulation of the insulin-like growth factor binding protein-4 protease system in cultured human osteoblasts / C.O. Ortiz, B.K. Chen, L.K. Bale et al. // J. Bone Miner. Res. -2003. - V. 18(6).-P. 1066-1072.

323. Transport of insulin-like growth factor-I across endothelial cell monolayers and its binding to the subendothelial matrix / J. Ritter, S. Mesewinkel, U. Heinrich et al. // Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. - 2002. -Vol. 110.-P. 67-73.

324. Tricarboxylic acid cycle dysfunction as a cause of human diseases and

tumor formation / J.J. Briere, J. Favier, A.P. Gimenez-Roqueplo,

P. Rustin // Am. J. of Physiol. Cell Physiol. -2006. - Vol. 291. - P. 11141120.

325. Tumor angiogenesis and endometrial cancer / A. Mandic, T. Vujkov, D. Nincic, S. Komazec // Archive of Oncology. - 2002. - Vol. 20(2). - P. 79-81.

326. Tumor angiogenesis as a prognostic factor in earlyoral tongue cancer / T. Shpitzer, M. Chaimoff, R. Gal et al. // Arch. Otolaryngol. Head Neck Surg. - 1996. - Vol. 122. -P. 865-868.

327. Uden, P. Regulation of hypoxia-inducible factor-1 alpha by NF-kappaB / P. Uden, N.S. Kenneth, S.Rocha // Biochem. J. - 2008. - Vol. 412(3).-P. 477-484.

328. Understanding familial and non-familial renal cell cancer / D. Bodmer, W. van den Hirk, J.J. van Groningen et al. // Hum. Mol. Genet. -2002. - Vol. 11. - P. 2489-2498.

329. Unexpected role for the immunoproteasome subunit LMP2 in antiviral humoral and innate immune responses / S.E. Hensley, D. Zanker, B.P. Dolan et al. // J. Immunol. - 2010. -Vol. 184(8). - P. 4115-4122.

330. Upregulation of immunoproteasomes by nitric oxide: potential antioxidative mechanism in endothelial cells / S. Kotamraju, S. Matalon, T. Matsunaga et al. // Free Rad. Biol. Med. - 2006. - V. 40. P. -1034-1044.

331. Using protein expressions to predict survival in clear cell renal carcinoma / H.L. Kim, D. Seligson, X. Liu et al. // Clin Cancer Res. 2004. -Vol. 10(16).-P. 5464-5471.

332. Using tumor markers to predict the survival of patients with metastatic renal cell carcinoma / H.L. Kim, D. Seligson, X. Liu et al. // J. Urol. - 2005. -Vol. 173.-P. 1496-1501.

333. Variable expression of cathepsin B and D correlates with highly invasive and metastatic phenotype of oral cancer / N. Vigneswaran, W. Zhao, A. Dassanayake et al. // Hum. Pathol. - 2000. - Vol. 31. - P. 931-937.

334. Vascular endothelial growth factor, carbonic anhydrase 9, and angiogenin as urinary biomarkers for bladder cancer detection / V. Urquidi, S. Goodison, J. Kim et al. // Urology. - 2012. - Vol. 79(5).-P. 1185.

335. Voortman, J. The proteasomal and apoptotic phenotype determine bortezomib sensitivity of non-small cell lung cancer cells / J. Voortman, A. Ch^cinska, G. Giaccone // Molecular Cancer. - 2007. - Vol. 6. - P. 73.

336. Walker, D.M. The pathology of oral cancer / D.M. Walker, G. Boey, L.A. McDonald // Pathology. - 2003. - Vol. 35. - P. 376-383.

337. Wang, K.K. Calpain and caspase: can you tell the difference? / K.K. Wang // Trends Neurosci.- 2000.- Vol. 23.- P.20-26.

338. Xie, Y. Structure, Assembly and Homeostatic Regulation of the 26S Proteasome / Y. Xie // Journal of Molecular Cell Biology. - 2010.-Vol. 2.-P. 308-317.

339. Xu, H. Diminished feedback regulation of proteasome expression and resistance to proteasome inhibitors in breast cancer cells / H. Xu, D. Ju, T. Jarois, Xie Y. // Breast Cancer Res. Treat. - 2008. - Vol. 107(2). - P. 267274.

340. Yamamoto, Y. Therapeutic potential of inhibition of the NF-KB pathway in treatment of inflammation and cancer / Y. Yamamoto, R.B. Gaynor. // J. Clin. Invest. - 2001. - Vol. 107. - P. 134-142.

341. Yamasaki, L. Cell cycle, proteolysis and cancer / L.Yamasaki, M. Pagano // Curr. Opin. Cell Biol. - 2004. - Vol. 16(6). - P. 6232-628.

342. Yu, H. Role of the insulin-like growth factor family in cancer development and progression / Y. Yamamoto, R.B. Gaynor // J. Natl. Cancer Inst. - 2001. - Vol. 92. - P. 1472-1489.

343. Zatz, M. Calpains and Disease / M. Zatz, A. Starling // Engl. J. Med. -2005. - Vol. 352. - P. 2413-2423.

344. Zhang, H. Is the type I insulin-like growth factor receptor a therapeutic target in endometrial cancer? / H. Zhang, D. Yee // Clin. Cancer

Res. - 2006. - Vol. 12. -