Получение и характеристика субкультур криобанка первично-трипсинизированных клеток, используемых в вирусологических целях тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Чадаева Анна Александровна

• Чадаева Анна Александровна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Чадаева Анна Александровна

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Культуры клеток как лабораторная модель

2.2 Культуры клеток в вирусологии

2.2.1 Первичные культуры клеток

2.2.2 Субкультуры первичных клеток и штаммы диплоидных клеток

2.2.3 Перевиваемые линии клеток

2.3 Методология получения и выращивания клеточных культур

2.4 Проблемы контаминации культур клеток

2.5 Коллекции клеточных культур

2.6 Заключение по обзору литературы

3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1 Материалы и методы

3.1.1 Животные

3.1.2 Культуры клеток

3.1.3 Питательные среды, растворы, сыворотки и реактивы

3.1.4 Вирусы

3.1.5 Оборудование

3.1.6 Методика получения первично-трипсинизированных культур клеток

из тканей и органов млекопитающих

3.1.7 Методы поддержания культур клеток

3.1.8 Криоконсервация

3.1.9 Кариологические методы исследований

3.1.10 Вирусологические методы

3.1.11 Молекулярно-генетические методы исследований

3.1.12 Бактериологические методы

3.1.13 Статистическая обработка результатов исследований

3.2 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.2.1 Получение первичных культур и субкультур клеток

3.2.1.1 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток тестикулярной ткани козлёнка

3.2.1.2 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток почки и тестикулярной ткани ягнёнка

3.2.1.3 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток из тканей и органов плода кролика

3.2.1.4 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток из тканей и органов новорожденного крольчонка

3.2.1.5 Получение первично-трипсинизированной культуры и субкультуры клеток селезёнки свиньи

3.2.2 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток из тканей и органов домашних и факультативных синантропных животных

3.2.2.1 Получение первично-трипсинизированных культур и субкультур клеток яичников кошки

3.2.2.2 Получение первичной культуры клеток тестикулярной ткани кота

3.2.2.3 Получение первичных культур клеток из тканей плодов собаки

3.2.2.4 Получение первичной культуры клеток из тканей европейского ежа

3.2.2.5 Получение первичной культуры клеток яичников фретки

3.2.2.6 Получение первичной культуры клеток из тестикулярной ткани суриката

3.2.3 Оценка и паспортизация субкультур клеток из тканей млекопитающих, длительное время хранящихся в музее клеточных культур ФГБНУ ФИЦВиМ

3.2.3.1 Субкультура клеток почки телёнка

3.2.3.2 Субкультура клеток почки кролика

3.2.3.3 Субкультура клеток почки собаки

3.2.4 Оценка субкультур первично-трипсинизированных клеток как субстратов вирусной репродукции

3.2.4.1 Изучение пермиссивности субкультур первично-трипсинизированных клеток к ДНК-содержащим вирусам

3.2.4.1.1 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу болезни Ауески

3.2.4.1.2 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу заразного узелкового дерматита КРС

3.2.4.1.3 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу оспы овец

3.2.4.1.4 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу миксомы кроликов

3.2.4.1.5 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу фибромы Шоупа

3.2.4.1.6 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу инфекционного ринотрахеита КРС

3.2.4.1.7 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу ринотрахеита кошек

3.2.4.1.8 Изучение пермиссивности субкультуры клеток селезёнки свиньи к вирусу африканской чумы свиней

3.2.4.2 Изучение пермиссивности субкультур первично-трипсинизированных клеток к РНК-содержащим вирусам

3.2.4.2.1 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу везикулярного стоматита

3.2.4.2.2 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу чумы мелких жвачных животных

3.2.4.2.3 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу чумы плотоядных

3.2.4.2.4 Изучение пермиссивности субкультур клеток к возбудителю вирусной диареи КРС

3.2.4.2.5 Изучение пермиссивности субкультур клеток к коронавирусам свиней

3.2.4.2.6 Изучение пермиссивности субкультур клеток к вирусу классической чумы свиней (КЧС)

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

5 ЗАКЛЮЧЕНИЕ

5.1 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

5.2 ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

6 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

8 ПРИЛОЖЕНИЯ

Приложение 1. Методические положения по поддержанию и хранению

субкультур первичных клеток

Приложение 2. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

тестикулярной ткани козленка (ТК)

Приложение 3. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

тестикулярной ткани ягненка (ТЯ)

Приложение 4. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

почки ягненка (ПЯ)

Приложение 5. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

почки плода кролика (ППКр)

Приложение 6. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

кожи плода кролика (КПКр)

Приложение 7. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

легкого крольчонка (ЛКр)

Приложение 8. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

печени крольчонка (ПеКр)

Приложение 9. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных клеток

селезенки крольчонка (СКр)

Приложение 10. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных

клеток хрящевой ткани ребер крольчонка (ХТКр)

Приложение 11. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных

клеток яичников кошки (КЯ)

Приложение 12. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных

клеток почки крольчонка (ПКр)

Приложение 13. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных

клеток почки теленка (ПТ)

Приложение 14. Паспорт на субкультуру первично-трипсинизированных

клеток селезенки свиньи (СС)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и характеристика субкультур криобанка первично-трипсинизированных клеток, используемых в вирусологических целях»

1 ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Появление и циркуляция эпидемически значимых вирусных патогенов с вовлечением в эпизоотологический процесс популяций диких и домашних животных выдвигает задачу постоянного мониторинга эпизоотической ситуации, выделения и изучения вирусов, разработки средств диагностики и специфической профилактики болезней [61, 147]. Для выделения полевых изолятов вирусов наиболее пермиссивными являются первичные культуры клеток [89, 170]. Первичные культуры клеток сохраняют гетерогенность клеточного популяционного состава, близкого к исходной ткани доноров по морфо-функциональным характеристикам, уровням дифференцировки, рецепторам, включая клетки-мишени восприимчивых животных [18, 141]. Высокая чувствительность к вирусам различных таксономических групп определяет использование таких культур в экспериментальной и практической вирусологии [179].

Недостатком первичных культур является их короткий период использования, нестандартность, обусловленная генетическими, физиологическими, иммунобиологическими отличиями каждого нового донора ткани, ограничениями, связанными с сезонностью получения эмбриональной ткани и репродуктивных органов ряда животных, значительным риском эндогенной вирусной контаминации [14]. В тоже время показано, что субкультуры первичных клеток по чувствительности к вирусам, как правило, не уступают первичным культурам клеток, более экономичны, и существует возможность в предварительной оценке контаминации клеток биологическими агентами [250].

Субкультуры первичных клеток перед криоконсервацией при низких температурах, обеспечивающих их длительное хранение и использование, могут быть изучены не только по цитоморфологическим и ростовым характеристикам, как первичные культуры клеток, но и по сохранению пермиссивности к вирусам на разных пассажных уровнях.

Таким образом, получение субкультур первичных клеток из различных тканей и органов млекопитающих, как основной лабораторной модели для изоляции и изучения биологических свойств патогенов, формирование криобанков паспортизированных субкультур, которые также рассматриваются как исходная платформа для создания диплоидных штаммов и перевиваемых линий клеток, является актуальной задачей клеточной биотехнологии.

Степень разработанности темы исследований. Получение первичных культур клеток - фундаментальная основа метода культур клеток [141]. В настоящее время разработаны многочисленные протоколы проведения дезагрегации тканей млекопитающих с использованием различных ферментов, а использование селективных сред обеспечивает получение различных типов клеток [25, 53, 141]. В коллекциях научных учреждений созданы криобанки субкультур клеток, исходным субстратом которых явились ткани опухолей и ткани больных, страдающих наследственными заболеваниями, которые обеспечивают проведение целенаправленных исследований в ряде областей медицины [57].

Специализированные коллекции клеточных культур (АТСС, ЕССС, РККК), сформированные в основном из перевиваемых линий клеток, обеспечивают возможность экспериментальной работы в различных областях биологии, медицины и ветеринарии [21]. В то же время ПЛК и, в меньшей степени, диплоидные штаммы клеток не являются репрезентативными для изоляции вирусных патогенов. Таким образом, создание криобанков стандартизированных по многим параметрам, паспортизированных субкультур первичных клеток животных, пермиссивных к вирусам различных таксономических групп, является необходимым условием их успешного применения в вирусологической практике.

Цель и задачи исследований. Целью работы являлось получение субкультур первично-трипсинизированных клеток из тканей и органов различных видов животных, изучение их биологических свойств и создание на их основе паспортизированных криобанков клеток для вирусологических исследований.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи: 1. Получить методом стандартной трипсинизации из тканей и органов

различных видов животных первичные культуры клеток и их субкультуры.

2. Изучить цитоморфологические и ростовые характеристики и оптимизировать условия культивирования полученных субкультур клеток.

3. Паспортизировать и создать криобанки субкультур первичных клеток в жидком азоте на ранних пассажных уровнях.

4. Изучить полученные клеточные субкультуры на предмет контаминации микоплазмами, эндогенными и экзогенными вирусами.

5. Провести оценку пермиссивности полученных субкультур клеток к

вирусам различных таксономических групп.

6. Изучить биологические свойства субкультур первичных клеток после длительного хранения в жидком азоте.

Научная новизна. Научно обоснована и экспериментально подтверждена значимость концепции формирования криобанков субкультур первичных клеток для использования в ветеринарной вирусологии для изоляции и изучения биологических свойств вирусов. В результате выполнения диссертационных исследований получены и паспортизированы субкультуры первично-трипсинизированных клеток из тканей и органов животных: тестикулярной ткани козлёнка (ТК) и ягнёнка (ТЯ), почки ягнёнка (ПЯ), селезёнки свиньи (СС), почки плода кролика (ППКр), кожи плода кролика (КПКр), легкого крольчонка (ЛКр), печени крольчонка (ПеКр), селезёнки крольчонка (СКр), почки крольчонка (ПКр), хрящевой ткани рёбер крольчонка (ХТКр) и яичников кошки (КЯ).

Оптимизированы условия культивирования и изучена пермиссивность полученных субкультур клеток к вирусам различных таксономических групп -возбудителям инфекционных болезней животных. Созданы криобанки, полученных субкультур первичных клеток на ранних пассажных уровнях, которые свободны от контаминации микоплазмами, эндогенными и экзогенными вирусами.

Экспериментально подтверждена возможность длительного хранения в условиях жидкого азота и использования реконсервированных субкультур первично-трипсинизированных клеток для изоляции вирусов из патологического

материала и биоптата инфицированных животных.

Теоретическая и практическая значимость работы. Теоретически обоснована и практически доказана целесообразность создания криобанков субкультур первично-трипсинизированных клеток из тканей и органов различных видов животных, обеспечивающих возможность их долговременного использования в вирусологии. Отработанные параметры культивирования поддерживают стабильные цитоморфологические и ростовые характеристики субкультур первичных клеток. Сформированные в коллекции клеточных культур ФГБНУ ФИЦВиМ крупные криобанки паспортизированных субкультур первичных клеток из тканей сельскохозяйственных и домашних животных с изученной чувствительностью к вирусам различных таксономических групп предложены для использования в вирусологических исследованиях.

Разработаны и утверждены методические положения по поддержанию и хранению субкультур первичных клеток и паспорта на 13 субкультур клеток.

Методология и методы исследования. В работе использованы методы культуры клеток, кариологические, вирусологические, молекулярно-генетические методы исследований.

Основные положения работы, выносимые на защиту:

1. Биологические свойства и характеристики 13 субкультур первично-трипсинизированных клеток, полученных от различных видов животных.

2. Результаты изучения пермиссивности полученных субкультур первичных клеток к вирусам различных таксономических групп.

3. Паспортизированный криобанк субкультур клеток в жидком азоте, обеспечивающий проведение долговременных вирусологических исследований.

4. Сохранение биологических свойств субкультурами первичных клеток, включая пермиссивность к вирусам, после длительной криоконсервации в жидком азоте (15 лет и более).

Степень достоверности и апробация результатов исследований.

Полученные результаты подтверждали методом статистического анализа. Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на

заседаниях ученого совета ФГБНУ ФИЦВиМ (2017-2021 гг.), Всероссийской конференции с международным участием «Актуальные проблемы клеточной биологии и клеточных технологий» (С.-Пб., 2019 г.), научно-практической конференции и школе молодых ученых «НАУКА XXI ВЕКА (Самара 2019 г.), ХХУШ Международной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Ломоносов -2021» (М., 2021 г.).

Публикации результатов исследований. По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 4 статьи в рецензируемых научных изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки.

Личный вклад соискателя. Диссертационная работа выполнена автором самостоятельно. Автор выражает искреннюю благодарность за оказание консультативной и научно-методической помощи при выполнении отдельных этапов исследований к.в.н. О.Г. Лаптевой., к.в.н. А.В. Луницину, к.б.н. О.Л. Колбасовой, к.б.н. В.М. Лыска, к.б.н. И.П. Синдряковой, к.б.н. Г.С. Кольцовой.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 179 страницах текста и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, собственные исследования и их обсуждение, заключение, приложения: иллюстрирована 12 таблицами и 48 рисунками. Список использованной литературы включает 258 источников, из них 184 иностранных.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Развитие эпидемической ситуации на современном этапе характеризуется появлением новых вирусных инфекций, а также генетической и эпигенетичсекой изменчивостью циркулирующих вирусов. Отмечено преодоление межвидовых барьеров вирусами - возбудителями болезней, формирование (обнаружение) новых природных очагов патогенов с вовлечением в эпидемический процесс различных видов млекопитающих [110, 111].

Так, результаты недавних исследований показали, что кошки, хомяки, хорьки восприимчивы к инфекции SARS-CoV-2 с проявлением клинических и патологических признаков болезни, формированием иммунного ответа и передачей вируса другим животным [166, 200, 220, 221, 226, 234, 246].

В настоящие время молекулярно-генетические исследования рассматриваются как основной методический подход в идентификации возбудителей вирусных инфекций [192].

В то же время для оценки биологических свойств патогенов необходима их изоляция, определение инфекционной активности, наработка достаточного количества биологического материала для дальнейшего изучения, что обеспечивается использованием методов культуры клеток.

2.1 Культуры клеток как лабораторная модель

Метод культуры клеток - сложный многофакторный процесс, обеспечивающий жизнеспособность и реализацию ряда биологических функций эукариотическими клетками in vitro [102].

В настоящее время метод культуры клеток позволяет решать многие проблемы в области биологии, цитологии, генетики, иммунологии, токсикологии, онкологии, биотехнологии диагностических, профилактических и лечебных препаратов [1, 14, 189].

Среди естественных наук, изучающих биологию клетки, культивирование клеток в наибольшей степени имеет отношение к вирусологии.

Исключительно внутриклеточное размножение вирусов позволило использовать метод выращивания клеток in vitro в качестве модели для исследования фундаментальных основ и механизмов взаимодействия вирусов и клеток, определить их тропизм к различным тканям и органам [168, 184].

Совершенствование метода культивирования клеток во многом предопределило развитие научной и практической вирусологии на современном этапе, причем именно запросы вирусологии стали инициирующим фактором разработки новых способов получения и выращивания клеток для их использования в различных направлениях [117].

Клеточные культуры используют в диагностических целях (выделение вирусов от больных, носителей и патматериалов), при экспериментальной работе (изучении вирусов) и для производства вирусных вакцин и диагностикумов, что во многом обеспечивает успехи в борьбе с особо опасными болезнями человека и животных [18, 21, 34, 59].

Основные исторические шаги развития и изучения биологии клеток в культуре, техники получения клеточных культур, а также методов культивирования клеток достаточно полно изложены в ряде монографий и в публикациях обзорного характера [140, 173].

Применение метода культуры тканей в научных исследованиях, по общему мнению, связывают с именем Harrison R.G., который в 1907 году предложил воспроизводимую технику продления функций нормальной ткани in vitro [198].

А. Каррель в 1924 году впервые использовал эти методы для изучения патологических процессов, поддерживая жизнеспособность и пролиферацию клеток сердца куриного эмбриона [92], а линия клеток соединительной ткани поддерживалась коллегами исследователя в течение 24 лет, пережив самого ученого [256]. Начиная с 1940-х годов, с введением в практику культивирования антибиотиков, исследования в области биологии клеток в культуре получили более широкое распространение [149].

Возможность выращивания больших количеств вируса в контролируемых условиях в клетках in vitro впервые продемонстрирована в 1949 году [124].

Создание адекватных условий культивирования клеток стало основой становления клеточной биотехнологии как науки. Развитие крупномасштабного культивирования клеток млекопитающих, начиная с 1950-х гг., сыграли важную роль в обеспечении биотехнологических процессов реализации промышленного производства и обеспечения вакцинными препаратами для человека (особенно полиомиелита) [177].

В первую очередь клеточные культуры были использованы для получения вакцин, и именно вирусологи принимали самое непосредственное участие в получении стабильных клеточных линий и в создании методов крупномасштабного культивирования [33].

Наработка больших объемов вирусного сырья в культивируемых клетках лежит в основе создания продуктов биотехнологии и позволяет производить культуральные вакцины и создавать уникальные технологии производства рекомбинантных вакцин и других иммунобиологических препаратов [19].

Выращивание клеток разных тканей и органов делает перспективным применение их в регенеративной медицине для реконструкции органов и/или поддержания их функции [22].

Новым направлением в создании лабораторных моделей культивирования клеток in vitro является разработка трехмерных (3D) культур, имитирующих естественное тканевое микроокружение, например в сфероидах (висячие капли, каркасы и гидрогели). Данные культуры находят свое применение в тестировании лекарств и наночастиц, а также в моделировании заболеваний [39, 49, 107, 228].

Клеточные культуры являются эффективной моделью для изучения ряда клеточных механизмов и сыграли важную роль в разработке и скрининге низкомолекулярных терапевтических средств [172].

Выявлен более высокий потенциал 3Э-культур для скрининга лекарств и способности выявлять токсический эффект на более ранней стадии [199].

Отмечен значительный прогресс в разработке биофармацевтических препаратов, производимых с помощью процессов культивирования клеток животных. Генные векторные системы в рекомбинантных клетках-продуцентах

обеспечивают высокую специфическую экспрессию белка, а изучение клеточного метаболизма и физиологии позволило разработать процессы периодического и перфузионного культивирования в биореакторах с подпиткой, что привело к значительному повышению выхода целевого продукта [52, 56].

Клетки, выращиваемые in vitro, свободные от влияний макроорганизма являются уникальной моделью для изучения поведения животной клетки в норме, а также в ответ на внешние или внутренние факторы. Так, известная 70 лет линия клеток HeLа остается ценной моделью для изучения рака, различных аспектов репликации вирусов. Использование культуры клеток карциномы шейки матки HeLа позволило получить фундаментальные данные о репродукции вирусов, синтезе вирусных белков, их структуре и внутриклеточной локализации [104].

Одной из достаточно новых областей применения клеточных культур в качестве лабораторной модели является их использование для обеспечения воспроизводимости и надежности методов тестирования токсичности и для токсикологии in vitro [148].

Эмбриональные стволовые клетки и стволовые клетки постнатального млекопитающего рассматриваются как один из наиболее перспективных источников клеточного материала [160].

Получение в конце 20-го столетия первых линий эмбриональных стволовых клеток, способных к самовоспроизведению и направленной дифференцировке в клетки различных типов, инициировало интенсивное развитие нового направления клеточной биотехнологии - создания клеточных систем восстановления поврежденных тканей и органов человека [116].

2.2 Культуры клеток в вирусологии

Вирусные болезни животных, угрожающие животноводству, приводят к значительным экономическим потерям [195] и являются причиной сокращения биоразнообразия [216], представляют риск здоровью человека из-за зоонозного потенциала многих возбудителей болезней [240].

Отмечают, что изоляция вирусных патогенов является необходимым условием и «золотым стандартом» в исследовании патогенетических

особенностей инфекционного процесса, включая вопросы оценки инфекционной активности, антигенных особенностей возбудителей, иммунологического соответствия и эффективности используемых вакцин [16, 227].

Решение этих задач во многом базируется на использовании адекватных лабораторных клеточных моделей, которые также являются основой дальнейших биотехнологических разработок в области создания и совершенствования средств диагностики и специфической профилактики вирусных инфекций [179].

Традиционная классификация выделяет три основных типа культивируемых in vitro клеточных культур: первичные, диплоидные и перевиваемые [140].

Области применения этих культур клеток определяются биологическими свойствами и биотехнологическими характеристиками, причем каждый тип клеточных культур обладает своими преимуществами и, в то же время, имеет ряд недостатков.

2.2.1 Первичные культуры клеток

Первичная культура клеток млекопитающих — это культура, полученная непосредственно из тканей и органов животного или человека, поддерживаемая in vitro вплоть до субкультивирования (до первого пересева) [18, 134, 140].

Культуру клеток рассматривают как первичную, пока она не подверглась хотя бы однократному пассированию, так как считают, что вероятность спонтанной клеточной трансформации резко возрастает с удлинением жизни популяции [179].

Первичные культуры клеток, полученные непосредственно из немалигнизированных эмбриональных или постнатальных тканей человека и животных, являются более репрезентативными для основного функционального компонента ткани, чем диплоидные и перевиваемые линии клеток.

В цитоморфологическом отношении первичные культуры клеток неоднородны и представляют собой смесь типов клеток, присутствующих в ткани, которые можно разделить по видам или типу ткани [160].

В настоящее время культуру клеток потенциально можно получить практически из любого органа или ткани человека или животного, однако чаще

всего для этих целей используют почки, лёгкие, кожу, тимус, гонады эмбрионов или молодых животных, эмбриональный или фетальный материал, плаценту, ткани пуповины и пуповинную кровь [50, 231].

Для выделения полевых изолятов вирусов наиболее пермиссивными являются первично-трипсинизированные культуры клеток или первичные культуры, полученные методом тканевых эксплантатов [235].

Эти клеточные системы по морфо-функциональным характеристикам наиболее близки к исходной ткани восприимчивых животных, частично сохраняют популяционную гетерогенность клеток монослоя, включая рецепторы и биосинтетический потенциал, и представлены клетками различных уровней дифференцировки. Отмечено, что чем выше дифференцировка клеток, т.е. чем уже направленность их биосинтеза, тем меньше шансов субкультивировать клеточные популяции. По этой же причине эмбриональные ткани предпочтительнее при получении первичных культур клеток.

Особый интерес представляет исследование стволовых полипотентных клеток in vitro [219] и поддержание в культуре высокодифференцированных клеток с сохранением их основных биологических характеристик [244].

Считают, что первичная культура клеток обеспечивает более биологически релевантные результаты, чем данные таких же экспериментов, полученные с использованием клеточных линий. Обеспокоенность по поводу использования клеточных линий привела к растущей потребности в первичных клетках в самых разных областях, от фундаментальных исследований до скрининга лекарств. Часто первичные клетки комбинируют с более новыми технологиями, такими как 3D-культуры клеток, что стало возможным при использовании новых реагентов.

Первичные культуры клеток, изолированные из тканевых эксплантатов, состоят из различных типов клеток, которые оказываются полезными для мониторинга разнообразных клеточных явлений и регулярно используются в качестве заместителя клеточных структур in vivo [125].

В отличие от иммортализованных монотипических клеточных линий, которые были отобраны или генетически модифицированы для неограниченной

пролиферации, первичные клеточные культуры обычно имеют ограниченную продолжительность жизни [125].

В исследованиях в области онкологии отмечена важность использования первичных клеток, частично воссоздающих клеточное микроокружение, а не линий раковых клеток [187].

Первичные клетки предпочтительны в исследованиях контроля клеточного цикла, апоптоза и репарации ДНК, а также физиологии и биохимии клеток, поскольку раковые клетки несут мутации в генах, участвующих в этих процессах. В то же время следует признать, что одной из проблем в таких исследованиях является необходимость регулярно создавать новые культуры. Сообщается о разработке усовершенствованного протокола для выделения и культивирования фибробластов из кожи и лёгких взрослых грызунов. Авторы успешно использовали эту процедуру для выделения фибробластов более чем двадцати видов грызунов, от лабораторных мышей и крыс до диких грызунов, таких как бобр, дикобраз и белка [222].

В ветеринарной вирусологии для диагностики и изоляции полевых вирусов до настоящего времени распространены однослойные первичные культуры клеток почек свиней (ПС), телят (ПТ), ягнят (ПЯ) и тестикулярной ткани ягнят (ТЯ) и козлят (ТК), что связано с их высокой чувствительностью к вирусам различных таксономических групп - возбудителям болезней животных [26, 60].

Полученные из нормальных тканей животных и человека первичные культуры клеток явились основой развития биотехнологии вирусных препаратов [26, 35, 60].

Первичные культуры клеток, полученные при трипсинизации почечной ткани обезьян, широко использовали в биотехнологии медицинских биопрепаратов, особенно при решении проблемы борьбы с полиомиелитом [34]. На основе первичных клеточных культур готовили вакцины против бешенства, ветряной оспы, кори и гепатита В [231].

В настоящее время первичные культуры клеток широко применяют в диагностической и исследовательской работе, а также при производстве вакцин

против некоторых вирусных заболеваний сельскохозяйственных животных. Так, например, первичные культуры клеток тестикул, кожи, лёгких, почки поросенка, щитовидной железы использовали для культивирования вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) [6, 9, 37].

Первичная культура клеток из тканей лёгкого плода козы явилась единственной клеточной системой, с использованием которой удалось изолировать и идентифицировать вирус оспы коз из патологического материала от животных при эпизоотии в Таджикистане [8,17].

Изоляция и изучение культуральных свойств вируса контагиозной эктимы овец, выделенного на территории Республики Тыва, проведено с использованием первичной культуры клеток тестикул козлёнка (ТК) [24].

Эта же культура клеток (ТК) явилась клеточным субстратом для изоляции в патматериале из Северной Осетии вируса заразного узелкового дерматита КРС [161].

Первичные культуры клеток почки собак, почки зеленой мартышки, фибробластов перепелиных эмбрионов являлись клеточным субстратом в производстве вакцин против чумы плотоядных [55].

Вирус КЧС (штамм ЛК), длительно пассированный в первичной культуре клеток ТЯ, лёг в основу разработки средств специфической профилактики болезни - сухой культуральной вакцины ЛК-ВНИИВВиМ против КЧС [45, 54].

Вирус псевдобешенства выделен в первичной культуре клеток коры мозга свиньи [113].

Аутологичная первичная культура клеток лимфоидной ткани КРС использована для изоляции вируса эфемерной лихорадки [207].

Репликацию вируса гриппа А изучали в первичной культуре клеток эпителия верхних дыхательных путей поросенка [84].

Первичные культуры миоцитов и фибробластов ткани сердца мыши использовали при изучении вируса миокардита мышей [224].

Первичные культуры клеток фибробластов эмбрионов кур широко применяют для культивирования вирусов млекопитающих. С использованием

этого клеточного субстрата разработана очищенная вакцина против бешенства, которая была более экономична, чем аналогичная вакцина, полученная в культуре диплоидных клеток [215].

Одним из недостатков использования первичных культур клеток при крупномасштабном их производстве является необходимость объединения суспензий клеток, полученных от различных доноров, что значительно повышает риск как инфицирования клеточного материала посторонней микрофлорой (бактерии, грибы, микоплазмы), так и контаминации агентами эндогенного происхождения (вирусы, прионы) [42, 69].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Чадаева Анна Александровна, 2022 год

7 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адамс, Р. Методы культуры клеток для биохимиков. / Р. Адамс - Москва: Мир, 1983. - 263 с.

2. Барышникова, Е. И. Дифференциация возбудителей висна-маеди и артрита-энцефалита коз на основе анализа генома: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.02.02/ Барышникова Елена Ивановна. - Покров, 2011. - 26 с.

3. Биологическая характеристика и пермиссивность к вирусам штамма диплоидных клеток почки летучей мыши нетопыря Натузиуса (Pipistrellus nathusii Keyserling & Blasius, 1839; (Chiroptera: Microchiroptera: Vespertilionidae) / О.С. Поволяева, С.Г. Юрков, О.Г. Лаптева [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2021. - Т. 66, № 1. - С. 29-39.

4. Биотехнология клеток животных / под ред. Р. Е. Спиер, Д. Б. Гриффитс. -Москва: Агропромиздат, 1989. - 365 с.

5. Валидация модифицированного алгоритма прогнозирования восприимчивости хозяина к вирусам с учетом параметров восприимчивости первичных культур клеток-мишеней и факторов врожденного иммунитета / В. А. Жуков, Л. H. Шишкина, A. C. Сафатов [и др.] // Вестник Российской Академии медицинских наук. - 2010. -№ 5. -С. 24-29.

6. Вирусные болезни животных. / В. Н. Сюрин, А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьёв, Н. В. [и др.]. - Москва: ВНИТИБП, 2001. - 928 с.

7. Влияние изменений аминокислотного состава гидролизата белков крови на продуктивность клеточной линии ВНК-21/2-17 и количество иммуногенных компонентов вируса ящура / М. А. Шевченко, М. Н. Гусева, Д. А. Лозовой [и др.] // Ветеринария сегодня. -2018. -Т. 1, № 24. - С. 55-59.

8. Выделение и адаптация к перевиваемой культуре клеток изолята "Дангарский" вируса оспы коз / О. М. Стрижакова, В. В. Куриннов, И. Ю. Хухоров [и др.] // Ветеринарные и медицинские аспекты зооантропонозов: . Междунар. науч.-практ. конф., посвященная 45-летию института. - Покров, 2003. - C. 529-534.

9. Гальнбек, Т. В. Культуры клеток щитовидной железы и кишечника свиньи и их использование в вирусологии и биотехнологии: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.06/ Гальнбек Татьяна Валерьевна. - Москва, 1991. - 25 с.

10. Глаголева, И. С. Репродукция производственных штаммов вирусов на культуре клеток новорожденных крольчат: дис. ... канд. биол. наук: 06.02.02; 03.01.06/ Глаголева Ирина Сергеевна. - Казань, 2013. - 131 с.

11. Глинских, Н. П. Клеточные культуры в вирусологии и биотехнологии / Н.П. Глинских, Т.Г. Колесникова. // Вопросы эпидемиологии, иммунологии, диагностики вирусных инфекций. Ч. 1 / под ред. Н. П Глинских. -Свердловск: Полиграфист, 1991. - С. 157-162.

12. Голубев, Д. Б. Руководство по применению клеточных культур в вирусологии. / Д. Б. Голубев, А. А. Соминина, М. Н. Медведева. -Ленинград: Медицина, 1976. - 223 с.

13. Доссер, Е. М. Методы культуры тканей применительно к вирусологии / Е. М. Доссер. // Вирусология и микробиология 1967-1968 / под ред. В. В Алпатов. - Москва: ВИНИТИ, 1970. - С. 62-107.

14. Животная клетка в культуре (Методы и применение в биотехнологии) / Л. П Дьяконов, В. И. Ситьков, Т.В. Гальнбек [и др.]; под ред. Л.П. Ситькова, В.И. Дьяконова. - Москва: Компания Спутник, 2000. - 398 с.

15. Зуев В.В. Получение перевиваемой клеточной линии из почки зайца / В.В Зуев // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. Материалы науч. конф. / ВНИИВВиМ. - Покров 1992. - С. 295.

16. Изучение распространения вируса респираторно-синцитиальной инфекции крупного рогатого скота у жвачных животных / В. А. Мищенко, В. В. Думова, М. Ю. Киселев, А.В. Мищенко // Ветеринарна медицина. - 2011.- Т. 95. -С. 169-170.

17. Иммунобиологические свойства вируса оспы коз, выделенного в Таджикистане / В. М. Балышев, И. Ю. Хухоров, Д. В. Грачев [и др.] //

Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2005. -№ 1.- С. 54-56.

18. Инфекционная патология животных / под ред. А. Я. Самуйленко, Б. В. Соловьев, Е. А. Непоклонов, Е. С. Воронин. - Москва: Академкнига, 2006. -807 с.

19. Использование новой сублинии перевиваемых клеток тестикул поросенка ПТП ТК - в качестве селективной системы для получения рекомбинантных вирусов / Е. В. Ставничий, Н. Н. Власова, С. Ж. Цыбанов [и др.] // Доклады Российской академии сельскохозяйственных наук. - 2003.- № 2. - С. 43-45.

20. Каталог коллекции клеточных культур ВНИИВВиМ. / С. Г. Юрков, О. Л. Колбасова, В. В. Зуев [и др.]. - Покров: Россельхозакадемия, ВНИИВВиМ, 2010. - 89 с.

21. Клеточная биотехнология: учебно-методическое пособие. / Г. П. Пинаев, М. И. Блинова, Н. С. Николаенко [и др.] - Санкт-Петербург: Издательство Политехнического университета, 2011. - 209 с.

22. Колокольцова, Т. Д. Культура клеток как уникальная модель для исследования в современной биологии и медицине / Т. Д. Колокольцова, И. Н. Сабурина, А. С. Рыбаков // Патогенез. - 2013. -Т. 11, № 2.-С. 17-25.

23. Культивирование однослойных культур первичных и перевиваемых клеток животных в аппарате с регулированием условий роста / В. П. Грачев, Л. Л. Миронова, М. А. Завальный [и др.] // Вопросы вирусологии. - 1980.- № 1.-С. 88-93.

24. Культуральные свойства вируса контагиозной эктимы овец, выделенного на территории Республики Тыва / Д.В. Янжиева, Ю.П. Моргунов, Н. И. Сальников [и др.] // Ветеринария. -2017. -№ 8. - С. 54-57.

25. Курносов, А. Н. Роль взвешенных в среде клеток первичных культур в формировании монослоя / А. Н. Курносов // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии. - Покров, 1978. С. 27-29.

26. Курносов, А. Н. Экспериментальная разработка и усовершенствование способов получения и выращивания первичных культур клеток и органов

животных в вирусологических целях: автореф. дис. ... докт. вет. наук. -Покров, 1980. - 44 с.

27. Лабораторная модель для изучения вируса артрита-энцефалита коз / Г. Д. Сидельников, О. Л. Колбасова, Д. В. Колбасов [и др.] // Ветеринария. - 2009. - № 4.- С. 52-55.

28. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. - 4 -е изд. - Москва: Высшая школа, 1990. - 351 с.

29. Логинова, И. В. Глобальные вызовы в агропромышленном комплексе: стрессовые сценарии для России / И. В. Логинова, И. Ф. Кузьминов, Е. Е. Хабирова // Биотехнология. - 2018. -Т. 34, № 5. -С. 7-11.

30. Макаров, В. В. Африканская чума свиней. / В. В. Макаров; Российский университет дружбы народов. - Москва, 2011. - 268 с.

31. Мамаева, С. Е. Закономерности кариотипической эволюции клеток в культуре / С. Е Мамаева // Цитология. - 1996. -N. 38, № 8. -C. 787-814.

32. Межевова, И. В. Первичные культуры опухолевых клеток: современные методы получения и поддержания in vitro / И. В Межевова, А. О. Ситковская, О. И. Кит // Южно-Российский онкологический журнал. -2020.Т. 1, № 3. - С. 36-49.

33. Методы культивирования клеток / под ред. Пинаев, Г. П. -Ленинград: Наука, 1988.- 319 с.

34. Миронова, Л. Л. Культивирование клеток животных для медицинской биотехнологии / Л. Л. Миронова, Ю. Х. Хапчаев. - Москва, 1995. - 148 с.

35. Миронова, Л. Л. Культуры клеток и применение их для изготовления противовирусных препаратов: автореф. дис. . докт. мед. наук: / Миронова, Л. Л. - Москва, 1968. - 35 с.

36. Михалишин, Д. В. Разработка технологии изготовления эмульсионной вакцины против ящура сельскохозяйственных животных: дис. .докт. вет наук: 06.02.02/ Михалишин Дмитрий Валерьевич. - Владимир, 2021. - С.13-22.

37. Муканов, К. К. Морфология и некоторые биофизические свойства вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней: автореф. дис. ... канд. вет. наук / Муканов, К. К.; ВНИИ экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко. - Москва, 1982. - 17 с.

38. Напряженность иммунитета против КЧС у животных в промышленных свинокомплексах / В. В. Куриннов, А. М. Стариков, В. М. Лыска [и др.] // Ветеринария. - 2005.- № 1. -С. 18-24.

39. Наставления по трехмерному культивированию мультипотентных мезенхимных стволовых клеток сельскохозяйственных животных т уйго / И. П., Савченкова, Д. Г. Коровина, С. А. Васильева, М. И. [и др.]. - Москва: Спутник+, 2014. - 12 с.

40. Неверовская, Н.С. Изучение чувствительности первичнотрипсинизированных культур клеток к вакцинному "45§35" и эпизоотическому штаммам вируса чумы мелких жвачных (ЧМЖ) / Н. С. Неверовская, А. В. Степанов, С. Г. Юрков // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животны: материалы. Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 192-194.

41. Некоторые аспекты культивирования вируса блютанга в различных культуральных системах / В. И. Балышева, В. В. Недосекова, Г. Н. Чурбанова [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животны: материалы. Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 179-181.

42. Новохатский, А. С. Клеточные культуры в вирусологии / А. С. Новохатский // Общая и частная вирусология / под ред. В. М., Жданов, С. Я. Гайдамович. - Москва: Медицина, 1982. - С. 463-493.

43. О терминологии в области культуры тканей животных / М. С. Бенюмович, В. Н. Блюмкин, В. И. Гаврилов [и др.] // Вопросы вирусологии. - 1975. -№ 3.- С. 371-376.

44. Пермиссивность культур клеток различного происхождения при культивировании вируса нодулярного дерматита / В. И. Балышева, С. П. Живодеров, Е. Ю. Пивова [и др.] // Сельскохозяйственная биология. - 2017. -Т. 52. № 6. -С. 1265-1272.

45. Пермиссивность культуры клеток тестикул ягнят разных пассажных уровней к вирусу КЧС / Неверовская, Н. С., С. Г. Юрков, В. В. Дмитренко [и др.] // Проблемы профилактики и борьбы с особо опасными, экзотическими и малоизученными инфекционными болезнями животных: материалы. Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2008. С. 209-211.

46. Персистенция антигена аренавируса в перевиваемых клеточных линиях. Попытки выделения инфекционного вируса / О. Г. Анджапаридзе, Ю. С. Борискин, Н.Н. Богомолова [и др.] // Вопросы вирусологии. - 1977. -№ 5. -С. 557-561.

47. Плотникова, Э. М. Подбор оптимальных условий роста первичной культуры клеток почек новорожденных кроликов / Э. М. Плотникова, Ю. М. Кириллова, И. С. Глаголева // Ветеринария и кормление.- 2012.- № 4.- С. 42-43.

48. Поволяева, О.С. Пермиссивность диплоидного штамма клеток легкого летучей мыши Pipistrellus Pipistrellus к возбудителям ряда трансмиссивных вирусных инфекций / О.С. Поволяева // Материалы Международного молодежного научного форума «ЛОМОНОСОВ-2021. Москва, 12-23 апреля 2021 года - М.: Макс, 2021. - С.

49. Поддержание мультипотентных мезенхимных стволовых клеток сельскохозяйственных животных в криогелях на основе полимеров природного происхождения / Д. Г. Коровина, В. В. Стаффорд, А. М. Гулюкин [и др.] // Сельскохозяйственная биология.- 2019. -Т. 54, № 6. -С. 1214-1224.

50. Получение аттестованных фибробластов человека, пригодных для научных и медицинских исследований / Т. Д. Колокольцова, Н. Д. Юрченко, Е. А. Нечаева [и др.] // Биотехнология. - 2007. -№ 4. -С. 33-39.

51. Получение и биологические свойства клеточной культуры синовиальной мембраны поросенка / О. Л. Колбасова, С. Г. Юрков, Н. С. Неверовская [и др.] // Ветеринария. - 2011. -№ 6. -С. 58-60.

52. Получение препарата "Тенектеплаза" с высокой активностью / Д. В. Чащинова, В. С. Леонов, К. А. Смолова [и др.] // Биофармацевтический журнал. -2019.- Т. 11, № 6.- С. 14-24.

53. Получение различных видов культур клеток почек овцы и возможность их применения в биотехнологии / Л. Л. Миронова, О. И. Конюшко, В. Д. Попова [и др.] // Биотехнология. - 1999.- № 5. - С. 19-30.

54. Попов, В. И. Разработка и усовершенствование средств и способов специфической профилактики классической чумы свиней: автореф. дис. ... докт. вет. наук: / Попов В. И.; ВНИИВВиМ. - Покров, 1981. - 42 с.

55. Применение линии 4647 для крупномасштабного производства ВАКЧУМ / Л. Л. Миронова, Ю. Х. Хапчеев, В. Д. Попова [и др.] // Цитология. - 1994. -Т. 36, № 6. - С. 573-575.

56. Разработка процесса непрерывного культивирования клеток СНО -продуцентов рекомбинантного фактора свертываемости крови VIII / А. Н. Морозов, Г. Д. Сидельников, И. М. Емельянов [и др.] // Биопрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2015. -Т. 4, № 56. -С. 26-31.

57. Российская коллекция клеточных культур позвоночных (РККК П). / Г. Г. Полянская, Г. А. Сакута, А. С. Мусорина [и др.] // Санкт-Петербург: Институт цитологии РАН, 2018. - 161 с.

58. Саркисян, Х. В. Изучение биологических свойств штаммов вирусов трансграничных болезней (ящур и африканская чума свиней) в Республике Армения: автореф. дис.докт. вет. наук: 16.00.01/Саркисян Хачик Вазгенович. - Ереван, 2017. - 43 с.

59. Сергеев, В. А. Вирусные вакцины. / В. А Сергеев. - Киев: Урожай, 1993. -368 с.

60. Сергеев, В. А. Репродукция и выращивание вирусов животных. / В. А. Сергеев. - Москва: Колос, 1976. - 303 с.

61. Сергеев, В. А., Вирусы и вирусные вакцины / В. А. Сергеев, Е. А. Непоклонов, Т. И. Алипер. - Москва: Библионика, 2007. - 524 с.

62. Совещание Консультативной группы ВОЗ по полиомиелитным вакцинам / Всемирная организация здравоохранения // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Тридцать восьмой доклад -Женева, 1991. - С. 12-13.

63. Создание и аттестация банков перевиваемой культуры клеток МОСК для производства гриппозной вакцины / И. Ф. Радаева, Т. Д. Колокольцова, Е.

A. Нечаева [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2005. -Т. 50, № 2. -С. 43-45.

64. Ставничий, Е. В. Внутривидовые и межвидовые гибридные популяции клеток и их биологические свойства: автореф. дис. ... канд. биол. наук: / Ставничий Евгений Валерьевич. - Покров, 2003. - 25 с.

65. Строганова, И. Я.,. Использование в вирусологии культуры клеток: методические указания. / И. Я. Строганова, А. А. Трухоненко. - Красноярск: Красноярский. гос. аграрный. ун-т, 2013. - 48 с.

66. Сюрин, В. Н. Ветеринарная вирусология. / В. Н. Сюрин, Р. В. Белоусова, Н.

B. Фомина. - Москва: Колос, 1984. - 376 с.

67. Требования к полиомиелитной вакцине (инактивированной). Часть Г. Требования к перевиваемым линиям клеток для производства инактивированных вирусных вакцин / Всемирная организация здравоохранения. // Комитет экспертов ВОЗ по стандартизации биологических препаратов. Тридцать второй доклад.. - Женева, 1984. - С. 68-74.

68. Универсальная технология получения вируссодержащего материала для изготовления живых и инактивированных вакцин против особо опасных болезней мелкого и крупного рогатого скота / В. М. Балышев, С. Г. Юрков, В. И. Балышева [и др.] // Российская сельскохозяйственная наука. - 2020. -№ 4. -С. 65-68.

69. Характеристика банка линии гетероплоидных клеток почки зеленой мартышки 4647 / Л. Л. Миронова, Н. В. Шалунова, Г. А. Ломанова [и др.] // Вопросы вирусологии.- 1987. -№ 6. - С. 740-743.

70. Характеристика В1-клеток в процессе экспериментального лейкомогенеза / И.Ю. Ездакова, О.В. Капустина, М.И. Гулюкин [и др.]// Вопросы вирусологии. - 2020.- Т.65, №1. - С.35-40.

71. Характеристика перевиваемых клеточных линий, используемых в биотехнологии / В. И. Жестерев, Т. В. Каламина, В. И. Балышева [и др.] // Цитология. - 1996.- Т. 38, № 7. -С. 681-185.

72. Чувствительность серийных культур клеток тестикулярной ткани ягненка (ТЯ) к вирусам пограничной болезни (ПБО) овец и чумы мелких жвачных (ЧМЖ)/ Н. С. Неверовская, С. Г. Юрков, В. Ю. Луговцев [и др.] // Диагностика, профилактика и меры борьбы с особо опасными, экзотическими и зооантропонозными болезнями животны: материалы. Междунар. науч.-практ. конф. - Покров, 2000. - С. 190-192.

73. Шобогоров, Н. М. Разработка и совершенствование методов молекулярно-генетической диагностики аденоматоза легких овец: автореф. дис. ... канд. вет. наук: 06.02.02 / Шобогоров Николай Михайлович. - Покров, 2013. - С. 26.

74. Юрков, С. Г. О перекрестной контаминации перевиваемых культур клеток / С. Г. Юрков // Вопросы вирусологии. -1995. -№ 5. - С. 225-227.

75. A microcarrier cell culture process for propagating rabies virus in Vero cells grown in a stirred bioreactor under fully animal component free conditions / S. Rourou, A. van der Ark, T. van der Velden [et al.] // Vaccine. - 2007. - Vol. 25, N 19. - P. 3879-3889.

76. A new cell culture model to genetically dissect the complete human papillomavirus life cycle / M. Bienkowska-Haba, W. Luszczek, J. E. Myers [et al.] // PLoS Pathog. - 2018. - Vol. 14, N 3. - P. e1006846.

77. A novel serum-free medium for the cultivation of Vero cells on microcarriers / Z. Chen, C. Xiao, H. Liu [et al.] // Biotechnology Techniques. - 1996. Vol. 10, N 6. - p. 449-452.

78. A scale-down model of 4000-L cell culture process for inactivated foot-and-mouth disease vaccine production / X. R. Li, Y. K. Yang, R. B. Wang [et al.] // Vaccine. - 2019. - Vol. 37, N 43. - P. 6380-6389.

79. Alpha/beta interferon receptor deficiency in mice significantly enhances susceptibility of the animals to pseudorabies virus infection / J. Wei, Y. Ma, L. Wang [et al.] // Vet Microbiol. - 2017. - Vol. 203. - P. 234-244.

80. An immortalized goat mammary epithelial cell line induced with human telomerase reverse transcriptase (hTERT) gene transfer / Y. L. He, Y. H. Wu, X. N. He [et al.]. // Theriogenology. - 2009. - Vol. 71, N 9. - P. 1417-1424.

81. Assessment of Risk Factors of African Swine Fever in India: Perspectives on Future Outbreaks and Control Strategies / M., Bora, D. P. Bora, M. Manu [et al.] // Pathogens. - 2020. - Vol. 9, N 12.

82. Assouvie, A. Growing Murine Bone Marrow-Derived Macrophages / A., Assouvie, L. P. Daley-Bauer, G. Rousselet // Methods Mol Biol.- 2018. -Vol. 1784. - P. 29-33.

83. Authentication of Human Cell Lines by STR DNA Profiling Analysis / Y. Reid, D. Storts, T. Riss [et al.] // Assay Guidance Manual / Под ред. S. Markossian, A. Grossman, K. Brimacombe [et al.] - Bethesda (MD), 2004.

84. Bateman, A. C. Differentiated swine airway epithelial cell cultures for the investigation of influenza A virus infection and replication / A. C. Bateman, A. I. Karasin, C. W. Olsen // Influenza Other Respir Viruses. - 2013. - Vol. 7, N 2. - P. 139-150.

85. Best practices in cell culture: an overview / J. M. Baust, G. C. Buehring, L. Campbell [et al.] // In Vitro Cell Dev Biol Anim. - 2017. - Vol. 53, N 8. - P. 669672.

86. BHK-21 cell culture rabies vaccine: immunogenicity of a candidate vaccine for humans / D. Lalosevic, V. Lalosevic, L. Lazarevic-Ivanc [et al.] // Dev Biol (Basel). - 2008. - Vol. 131. - P. 421-429.

87. Bovine microvascular endothelial cells immortalized with human telomerase / R. Buser, R. Montesano, I. Garcia [et al.] // J Cell Biochem.-2006. - Vol. 98, N 2. -P. 267-286.

88. Brabb, T. Viral Diseases. Chapter 14 / T. Brabb, R. F. Di Giacomo // The Laboratory Rabbit, Guinea Pig, Hamster, and Other Rodents / Suckow, M. A., K. A. Stevens, R. P. Wilson. - Boston: Academic Press, 2012. - P. 365-413.

89. Burrell, C. J. Laboratory Diagnosis of Virus Diseases. Chapter 14 / C. J. Burrell, C. R. Howard, F. A. Murphy // Fenner and White's Medical Virology (Fifth Edition) / C. J. Burrell, C. R. Howard, F. A. Murphy. - London: Academic Press, 2017. - P. 135-154.

90. Campisi, J. Cellular senescence: when bad things happen to good cells / J. Campisi, F. d'Adda di Fagagna // Nature Reviews Molecular Cell Biology. -2007. - Vol. 8, N 9. - P. 729-740.

91. Canine distemper virus as a threat to wild tigers in Russia and across their range / M. Gilbert, S. V. Soutyrina, I. V. Seryodkin [et al.] // Integr Zool. - 2015. - Vol. 10, N 4. - P. 329-343.

92. Carrel, A. An Address On The Method Of Tissue Culture And Its Bearing On Pathological Problems / A. Carrel // The British Medical Journal. - 1924.- Vol. 2, N 3317. - P. 140-145.

93. Cell line cross-contamination and accidental co-culture / I. Routray, A. Mahmood, N. E. Ngwa [et al.] // Journal of Stem Cell Research & Therapeutics. -2016. - Vol. 1, N 5.- P. 179-185.

94. Cell line cross-contamination initiative: an interactive reference database of STR profiles covering common cancer cell lines / W. G. Dirks, R. A. MacLeod, Y. Nakamura [et al.] // Int J Cancer. - 2010. - Vol. 126, N 1. - P. 303-304.

95. Cell line cross-contamination: KB is not an oral squamous cell carcinoma cell line / L. Jiang, X. Zeng, Z. Wang [et al.] // Eur J Oral Sci. - 2009. - Vol. 117, N 1. - P. 90-91.

96. Characteristics and viral propagation properties of a new human diploid cell line, Walvax-2, and its suitability as a candidate cell substrate for vaccine production / B. Ma, L. F. He, Y. L. Zhang [et al.] // Hum Vaccin Immunother. - 2015. - Vol. 11, N 4. - P. 998-1009.

97. Characteristics of A172 and T98g Cell Lines / L. N. Kiseleva, A. V. Kartashev, N. L. Vartanyan [et al.] // Tsitologiia. - 2016. - Vol. 58, N 5. - P. 349-355.

98. Characterization of spontaneous cell death in monolayer cultures of primary hepatocytes / M. Vinken, E. Decrock, T. Doktorova [et al.] // Arch Toxicol. -2011. - Vol. 85, N 12. - P. 1589-1596.

99. Check your cultures! A list of cross-contaminated or misidentified cell lines / A. Capes-Davis, G. Theodosopoulos, I. Atkin [et al.] // Int J Cancer. - 2010. -Vol. 127, N 1. - P. 1-8.

100. Chicken hematopoietic cells transformed by seven strains of defective avian leukemia viruses display three distinct phenotypes of differentiation / H. Beug, A. von Kirchbach, G. Doderlein [et al.] // Cell. - 1979. - Vol. 18, N 2. - P. 375-390.

101. Chromosome preparations of leukocytes cultured from human peripheral blood / P. S. Moorhead, P. C. Nowell, W. J. Mellman [et al.] // Exp Cell Res. - 1960. -Vol. 20. - P. 613-616.

102. Cipro, S. Tkanové kultury / S. Cipro, T. Groh // Cesk Patol. - 2014. - Vol. 50, N 1. - P. 30-32.

103. Comparison of human mammary epithelial cells immortalized by simian virus 40 T-Antigen or by the telomerase catalytic subunit / C. D. Toouli, L. I. Huschtscha, A. A. Neumann [et al.] // Oncogene. - 2002. - Vol. 21, N 1. - P. 128-139.

104. Comparison of rhinovirus A infection in human primary epithelial and HeLa cells / S. P. Amineva, A. G. Aminev, J. E. Gern [et al.] // J Gen Virol.- 2011. - Vol. 92, N 11. - P. 2549-2557.

105. Continuous cell lines from the Muscovy duck as potential replacement for primary cells in the production of avian vaccines / I. Jordan, K. John, K. Howing [et al.] // Avian Pathol. - 2016. - Vol. 45, N 2. - P. 137-155.

106. Control of swine pseudorabies in China: Opportunities and limitations / Y. Sun, Y. Luo, C. H. Wang [et al.] // Vet Microbiol. - 2016. - Vol. 183. P. 119-124.

107. Corro, C. A brief history of organoids / C. Corro, L. Novellasdemunt, V. S. W. Li // Am J Physiol Cell Physiol. - 2020. - Vol. 319, N 1. - P. C151-C165.

108. Cote, R. J. Aseptic technique for cell culture / R. J. Cote // Curr Protoc Cell Biol. - 2001. Vol. Chapter 1. P. Unit 13.

109. Crameri, G., S. Todd, S. Grimley [et al.]. Establishment, immortalisation and characterisation of pteropid bat cell lines / G. Crameri, S. Todd, S. Grimley [et al.] // PLoS One. - 2009. - Vol. 4, N 12. - P. e8266.

110. Crossing the Interspecies Barrier: Opening the Door to Zoonotic Pathogens / C. Gortazar, L. A. Reperant, T. Kuiken [et al.] // PLOS Pathogens. - 2014. - Vol. 10, N 6. - P. e1004129.

111. Cross-Species Virus Transmission and the Emergence of New Epidemic Diseases / C. R. Parrish, E. C. Holmes, M. D. M. [et al.] // Microbiology and Molecular Biology Reviews. - 2008. - V. 72, N 3. - P. 457-470

112. Culturing the unculturable: human coronavirus HKU1 infects, replicates, and produces progeny virions in human ciliated airway epithelial cell cultures / K. Pyrc, A. C. Sims, R. Dijkman [et al.] // J Virol. - 2010. - Vol. 84, N 21. - P. 11255-11263.

113. Deletion of pseudorabies virus US2 gene enhances viral titers in a porcine cerebral cortex primary culture system / C. Lyu, S. Wang, M. Sun [et al.] // Virus Genes. - 2018. - Vol. 54, N 3. - P. 406-413.

114. Detection of contaminants in cell cultures, sera and trypsin / T. F. Pinheiro de Oliveira, A. A. Fonseca, Jr., M. F. Camargos [et al.] // Biologicals. - 2013. - Vol. 41, N 6. - P. 407-414.

115. Development of suspension adapted Vero cell culture process technology for production of viral vaccines / C. F. Shen, C. Guilbault, X. Li [et al.] // Vaccine. -2019. - Vol. 37, N 47. - P. 6996-7002.

116. Differentiation of human adipose stromal cells into hepatic lineage in vitro and in vivo / M. J. Seo, S. Y. Suh, Y. C. Bae [et al.] // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2005. - Vol. 328, N 1. - P. 258-264.

117. Dolskiy, A. A. Cell Cultures for Virology: Usability, Advantages, and Prospects / A. A. Dolskiy, I. V. Grishchenko, D. V. Yudkin // International Journal of Molecular Sciences. - 2020. -Vol. 21, N 21.

118. Efficacy evaluation of the C-strain-based vaccines against the subgenotype 2.1d classical swine fever virus emerging in China / Y. Luo, S. Ji, J. L. Lei [et al.] // Vet Microbiol. - 2017. - Vol. 201. - P. 154-161.

119. Efficacy, safety, and immunogenicity of a Vero-cell-culture-derived trivalent influenza vaccine: a multicentre, double-blind, randomised, placebo-controlled trial / P. N. Barrett, G. Berezuk, S. Fritsch [et al.] // Lancet.- 2011. - Vol. 377, N 9767. - P. 751-759.

120. Efficient immortalization and morphological transformation of human fibroblasts by transfection with SV40 DNA linked to a dominant marker / L. V. Mayne, A. Priestley, M. R. James [et al.] // Exp Cell Res. - 1986. - Vol. 162, N 2. - P. 530538.

121. Efficient replication of the novel human betacoronavirus EMC on primary human epithelium highlights its zoonotic potential / E. Kindler, H. R. Jonsdottir, D. Muth [et al.] // mBio. - 2013. - Vol. 4, N 1. - P. e00611-00612.

122. Eloit, M. Risks of virus transmission associated with animal sera or substitutes and methods of control / M. Eloit // Dev Biol Stand. - 1999. -Vol. 99. P. 9-16.

123. Eloit, M. Risques virologiques associés aux matières premières extraites de tissus animaux utilisées dans la fabrication des médicaments / M. Eloit // Virologie. -1997. -Vol. 1, N 5. - P. 413-422.

124. Enders, J. F. Cultivation of the Lansing Strain of Poliomyelitis Virus in Cultures of Various Human Embryonic Tissues / J. F. Enders, T. H. Weller, F. C. Robbins // Science. - 1949. - Vol. 109, N 2822. - P. 85-87.

125. Establishing and maintaining primary cell cultures derived from the ctenophore Mnemiopsis leidyi / L. E. Vandepas, K. J. Warren, C. T. Amemiya [et al.] // J Exp Biol. - 2017. - Vol. 220, N Pt 7. - P. 1197-1201.

126. Establishment and Evaluation of a Stable Bovine Thyroid Cell Line for Investigating Foot-and-Mouth Disease Virus / R. Mao, D. Sun, F. Yang [et al.] // Front Microbiol. - 2018. - Vol. 9. - P. 2149.

127. Establishment of human fibroma cell lines from a MEN1 patient by introduction of either hTERT or SV40 early region / R. Voglauer, J. Grillari, K. Fortschegger [et al.] // Int J Oncol. - 2005. - Vol. 26, N 4. - P. 961-970.

128. Establishment of immortal swine kidney epithelial cells / S. Kwak, J. E. Jung, X. Jin [et al.] // Anim Biotechnol. - 2006. - Vol. 17, N 1. - P. 51-58.

129. Establishment of Primary Transgenic Human Airway Epithelial Cell Cultures to Study Respiratory Virus-Host Interactions / H. R. Jonsdottir, S. Marti, D. Geerts [et al.] // Viruses. - 2019. - Vol. 11, N 8.

130. Evaluation of a real-time polymerase chain reaction assay for Pseudorabies virus surveillance purposes / E. L. Zanella, L. C. Miller, K. M. Lager [et al.] // J Vet Diagn Invest. - 2012. - Vol. 24, N 4. - P. 739-745.

131. Evaluation of cell substrates for the production of biologicals: Revision of WHO recommendations. Report of the WHO Study Group on Cell Substrates for the Production of Biologicals, 22-23 April 2009, Bethesda, USA / I.Knezevic, G. Stacey, J. Petricciani [et al.] // Biologicals.- 2010. - Vol. 38, N 1. - P. 162-169.

132. Ex vivo culture of oral keratinocytes using direct explant cell culture technique / H. R. Shwetha, V. S. Kotrashetti, N. C. Babu [et al.] // J Oral Maxillofac Pathol. -2019. - Vol. 23, N 2. - P. 243-247.

133. Extension of Life-Span by Introduction of Telomerase into Normal Human Cells / A. G. Bodnar, M. Ouellette, M. Frolkis [et al.] // Science. - 1998. - Vol. 279, N 5349. - P. 349-352.

134. Fedoroff, S. Proposed usage of animal tissue culture terms / S. Fedoroff // Exp Cell Res. - 1967. - Vol. 46, N 3. - P. 642-648.

135. Fernandez-de-Cossio-Diaz, J. Maximum entropy and population heterogeneity in continuous cell cultures / J. Fernandez-de-Cossio-Diaz, R. Mulet // PLoS Comput Biol. - 2019. - Vol. 15, N 2. - P. e1006823.

136. Fletcher, M. A. Human diploid cell strains (HDCS) viral vaccines / M. A Fletcher, L. Hessel, S. A. Plotkin // Dev Biol Stand. - 1998. - Vol. 93. - P. 97107.

137. Fogh, J. A review of cell culture contaminations / J. Fogh, N. B. Holmgren, P. P. Ludovici // In Vitro. - 1971. - Vol. 7, N 1. - P. 26-41.

138. Ford, C. E. A colchicine, hypotonic citrate, squash sequence for mammalian chromosomes / C. E. Ford, J. L. Hamerton // Stain Technol. - 1956. - Vol. 31, N 6. - P. 247-251.

139. Freedman, L. P. The Economics of Reproducibility in Preclinical Research / L. P. Freedman, I. M. Cockburn, T. S. Simcoe // PLoS Biol. - 2015. - Vol. 13, N 6. P. e1002165.

140. Freshney, R. I. Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications. / R. I. Freshney. - John Wiley & Sons, Inc, 2010. - 732 p.

141. Freshney, R. I. Primary Culture / R. I. Freshney // Culture of Animal Cells: A Manual of Basic Technique and Specialized Applications. - John Wiley & Sons, Inc, 2010. - P. 163-186.

142. Freshney, R. I. Transformation and Immortalization / R. I. Freshney // Culture of Animal Cells. - 2005.

143. Gartler, S. M. Apparent Hela cell contamination of human heteroploid cell lines / S. M. Gartler // Nature. - 1968. - Vol. 217, N 5130. - P. 750-751.

144. Genomic and phenotypic characterization of myxoma virus from Great Britain reveals multiple evolutionary pathways distinct from those in Australia / P. J. Kerr, I. M. Cattadori, M. B. Rogers [et al.] // PLoS Pathog. - 2017. - Vol. 13, N 3. P. e1006252.

145. Genzel, Y. Designing cell lines for viral vaccine production: Where do we stand? / Y. Genzel // Biotechnol J. - 2015. - Vol. 10, N 5. - P. 728-740.

146. Gomez, P. L. Vaccine Manufacturing / P. L. Gomez, J. M. Robinson // Plotkin's Vaccines (Seventh Edition) / Plotkin, S. A., W. A. Orenstein, P. A. Offit, K. M. Edwards. - Elsevier, 2018. - P. 51-60.e51.

147. Gonzalez, J.-P. Dangerous Viral Pathogens of Animal Origin: Risk and Biosecurity / J.-P. Gonzalez, G. Macgregor-Skinner // Zoonoses - Infections Affecting Humans and Animals: Focus on Public Health Aspects / Sing, A. -Dordrecht: Springer Netherlands, 2015. - P. 1015-1062.

148. Good cell culture practices &in vitro toxicology / C. Eskes, A. C. Bostrom, G. Bowe [et al.] // Toxicol In Vitro. - 2017. - Vol. 45, N Pt 3. - P. 272-277.

149. Goodman, T. T. 3-D Tissue Culture Systems for the Evaluation and Optimization of Nanoparticle-Based Drug Carriers / T. T. Goodman, C. P. Ng, S. H. Pun // Bioconjugate Chemistry. - 2008. - Vol. 19, N 10. - P. 1951-1959.

150. Grachev, V. P. Use of continuous human and animal cell lines for the production of viral vaccines / V. P. Grachev, I. Khapchaev // Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol. - 2008. N 1. - P. 82-90.

151. Gultom, M. Well-Differentiated Primary Mammalian Airway Epithelial Cell Cultures / M. Gultom, L. Laloli, R. Dijkman // Methods Mol Biol. - 2020. - Vol. 2203. - P. 119-134.

152. Guy, J. S. Laryngotracheitis. , Chapter 5 / J. S. Guy, T. Bagust, M. Garcia // Diseases of Poultry / Y. M. Saif, H. J. Barnes, J. R. Glisson [et al.] - Ames, Iowa: Iowa State Press, 2003. - P. 121-134.

153. Harkness, J. W. Quantitative evaluation of syncytium formation in cell culture by British isolates of Aujeszky's disease virus / J. W. Harkness, J. J. Sands // Br Vet J. - 1985. - Vol. 141, N 2. - P. 151-159.

154. Hayflick, L. The serial cultivation of human diploid cell strains / L. Hayflick, P. S. Moorhead // Exp Cell Res. - 1961. - Vol. 25. - P. 585-621.

155. Hegde, N. R. Cell culture-based influenza vaccines: A necessary and indispensable investment for the future / N. R. Hegde // Hum Vaccin Immunother. - 2015. - Vol. 11, N 5. - P. 1223-1234.

156. High immunogenic enterovirus 71 strain and its production using serum-free microcarrier Vero cell culture / C.-C. Liu, W.-C. Lian, M. Butler [et al.] // Vaccine. - 2007. - Vol. 25, N 1. - P. 19-24.

157. Holper, J. C. Characteristics of primary cultures and diploid cells-technology of production / J. C. Holper // Natl Cancer Inst Monogr. - 1968. -Vol. 29. - P. 21-31.

158. Honegger, P. Overview of cell and tissue culture techniques / P. Honegger // Curr Protoc Pharmacol. - 2001. - Vol. Chapter 12. - P. Unit12 11.

159. Hughes, C. S. Comparison of cultural methods for primary isolation of infectious laryngotracheitis virus from field material / C. S. Hughes, R. C. Jones // Avian Pathol. - 1988. - Vol. 17, N 2. - P. 295-303.

160. Human Stem Cell Technology and Biology: A Research Guide and Laboratory Manual / Под ред. Stein, G. S., M. Borowski, M. X. Luong [et al.]. Hoboken, New Jersey: Wiley-Blackwell 2011. 419 с.

161. Identification and characterization of lumpy skin disease virus isolated from cattle in the Republic of North Ossetia-Alania in 2015 / N. Salnikov, T. Usadov, A. Kolcov [et al.] // Transbound Emerg Dis. - 2018. - Vol. 65, N 3. - P. 916-920.

162. Immortalization and characterization of human myometrial cells from term-pregnant patients using a telomerase expression vector / M. S. Soloff, Y. J. Jeng, M. Ilies [et al.] // Mol Hum Reprod. - 2004. - Vol. 10, N 9. - P. 685-695.

163. Immunization Safety Review: SV40 Contamination of Polio Vaccine and Cancer / Ed. Stratton, K., D. A. Almario, M. C. McCormick Сост. . Washington (DC): National Academies Press (US), 2002. - 118 p.

164. In vitro culture of isolated primary hepatocytes and stem cell-derived hepatocyte-like cells for liver regeneration / C. Hu, L. Li // Protein Cell. - 2015. - Vol. 6, N 8. - P. 562-574.

165. Induction of blood-brain barrier differentiation in a rat brain-derived endothelial cell line / D. Lechardeur, B. Schwartz, D. Paulin, [et al.] // Exp Cell Res. - 1995. -Vol. 220, N 1. - P. 161-170.

166. Infection and Rapid Transmission of SARS-CoV-2 in Ferrets / Y. I. Kim, S. G. Kim, S. M. Kim [et al.] // Cell Host Microbe. - 2020. - Vol. 27, N 5. - P. 704-709 e702.

167. Infection of ciliated cells by human parainfluenza virus type 3 in an in vitro model of human airway epithelium / L. Zhang, A. Bukreyev, C. I. Thompson [et al.] // J Virol. - 2005. - Vol. 79, N 2. - P. 1113-1124.

168. Influence of cell type and cell culture media on the propagation of foot-and-mouth disease virus with regard to vaccine quality / V. Dill, B. Hoffmann, A. Zimmer [et al.] // Virology Journal. - 2018. Vol. 15, N 1. - P. 46.

169. Introduction to cell culture / C. Philippeos, R. D. Hughes, A. Dhawan[et al.] // Methods Mol Biol. - 2012. - Vol. 806. - P. 1-13.

170. Isolation and characterisation of oncornavirus from primary cultures of tissues from cattle with leukemia / M. F. Parfanovich, N. P. Kasak, A. E. Baranov [et al.] // Arch Virol. - 1977. - Vol. 53, N 1-2. - P. 9-23.

171. Isolation and characterization of current human coronavirus strains in primary human epithelial cell cultures reveal differences in target cell tropism / R. Dijkman, M. F. Jebbink, S. M. Koekkoek [et al.] // J Virol. - 2013. - Vol. 87, N 11. - P. 6081-6090.

172. Jaroch, K. Cell cultures in drug discovery and development: The need of reliable in vitro-in vivo extrapolation for pharmacodynamics and pharmacokinetics assessment / K. Jaroch, A. Jaroch, B. Bojko // J Pharm Biomed Anal. - 2018. -Vol. 147. - P. 297-312.

173. Jedrzejczak-Silicka, M. History of Cell Culture / M. Jedrzejczak-Silicka // New Insights into Cell Culture Technology / Gowder, S. J. T. - IntechOpen, 2017. - P. 141.

174. Jerabek, J. Applicability of Shope Fibroma Virus Replicated in Cell Cultures for Immunoprophylaxis of Rabbit Myxomatosis / J. Jerabek // Acta Veterinaria Brno. - 1980. - Vol. 49. - P. 259-267.

175. Kaye, M. SARS-associated coronavirus replication in cell lines / M. Kaye // Emerg Infect Dis. - 2006. - Vol. 12, N 1. - P. 128-133.

176. Kerr, P. J. Viral infections of rabbits / P. J. Kerr, T. M. Donnelly // Vet Clin North Am Exot Anim Pract. - 2013. - Vol. 16, N 2. - P. 437-468.

177. Kretzmer, G. Industrial processes with animal cells / G. Kretzmer // Applied Microbiology and Biotechnology. - 2002. - Vol. 59, N 2. - P. 135-142.

178. Kwist, K. The effect of cell passage number on osteogenic and adipogenic characteristics of D1 cells / K. Kwist, W. C. Bridges, K. J. Burg // Cytotechnology. - 2016. - Vol. 68, N 4. - P. 1661-1667.

179. Lednicky, J. A. The Art of Animal Cell Culture for Virus Isolation / J. A. Lednicky, D. E. Wyatt // Biomedical Tissue Culture / Ceccherini-Nelli, L., B. Matteoli. - IntechOpen, 2012.

180. Levenbook, I. S. Tumorigenicity of Vero cells / I. S. Levenbook, J. C. Petricciani, B. L. Elisberg // J Biol Stand. - 1984. - Vol. 12, N 4. - P. 391-398.

181. Lloyd, G. Infection of laboratory workers with hantavirus acquired from immunocytomas propagated in laboratory rats / G. Lloyd, N. Jones // J Infect. -1986. - Vol. 12, N 2. - P. 117-125.

182. Lokhman, E. The Preparation of Chicken Kidney Cell Cultures for Virus Propagation / E. Lokhman, S. Rai, W. Matthews // Methods Mol Biol. - 2020. -Vol. 2203. - P. 89-95.

183. Lucey, D. J. Costello. Impostor Cell Lines / D. J. Lucey, M. A. Walsh, R. Costello // The Laryngoscope. - 2006. - Vol. 116, N 1. - P. 161-162.

184. Luria, S. E., J. E. Darnell, Jr., D. Baltimore, A. Campbell. General Virology. / Luria, S. E., J. E. Darnell, Jr., D. Baltimore, A. Campbell. - New York: John Wiley & Sons Inc., 1978. - 578 p.

185. Mahmood, A., Microbial and viral contamination of animal and stem cell cultures: common contaminants, detection and elimination / A. Mahmood, S. Ali

// Journal of Stem Cell Research & Therapeutics. - 2017. - Vol. 2, N 5. - P. 149155.

186. Maintenance of expression of differentiated function of kidney cells following transformation by SV40 early region DNA / D. M. Scott, C. MacDonald, H. Brzeski [et al.] // Exp Cell Res. - 1986. - Vol. 166, N 2. - P. 391-398.

187. Management and potentialities of primary cancer cultures in preclinical and translational studies / G. Miserocchi, L. Mercatali, C. Liverani [et al.] // J Transl Med. - 2017. - Vol. 15, N 1. - P. 229.

188. Masters, J. R. HeLa cells 50 years on: the good, the bad and the ugly / J. R. Masters // Nat Rev Cancer. - 2002. - Vol. 2, N 4. - P. 315-319.

189. MCF-7 Cells as a Three-Dimensional Model for the Study of Human Breast Cancer / do J. B. Amaral, P. Rezende-Teixeira, V. M. Freitas [et al.] // Tissue Engineering Part C: Methods. - 2011. - Vol. 17, N 11. - P. 1097-1107.

190. Merten, O. W. Virus contaminations of cell cultures - A biotechnological view / O. W. Merten // Cytotechnology. - 2002. - Vol. 39, N 2. - P. 91-116.

191. Mitra, A. Technologies for deriving primary tumor cells for use in personalized cancer therapy / A. Mitra, L. Mishra, S. Li // Trends in Biotechnology. - 2013. -Vol. 31, N 6. - P. 347-354.

192. Molecular epidemiology of infectious diseases / S. Eybpoosh, A. A. Haghdoost, E. Mostafavi [et al.] // Electron Physician. - 2017. - Vol. 9, N 8. - P. 5149-5158.

193. Morrow, K. J., M. Sha. Vero Cell-based Vaccine Production: Rabies and Influenza Cell lines, Media and Bioreactor Options / Morrow, K. J., M. Sha. -Текст: электронный.- 2013. -URL: https: //www.eppendorf.com/product-media/doc/en/93796/Fermentors-Bioreactors_White-Paper_CelliGen-310-

510 Fibra-Cel Vero-Cell-based-Vaccine-Production-Rabies-Influenza-Cell-lines Media-Bioreactor-Options.pdf.

194. Myxoma virus protein M029 is a dual function immunomodulator that inhibits PKR and also conscripts RHA/DHX9 to promote expanded host tropism and viral replication / M. M Rahman, J. Liu, W. M. Chan [et al.] // PLoS Pathog. - 2013. -Vol. 9, N 7. - P. e1003465.

195. Narrod, C. A one health framework for estimating the economic costs of zoonotic diseases on society / C. Narrod, J. Zinsstag, M. Tiongco // Ecohealth. - 2012. - Vol. 9, N 2. - P. 150-162.

196. Nelson-Rees, W. A . Cross-contamination of cells in culture / W. A. Nelson-Rees, D. W. Daniels, R. R. Flandermeyer // Science. - 1981. - Vol. 212, N 4493. - P. 446-452.

197. Nikfarjam, L. Prevention and detection of Mycoplasma contamination in cell culture / L. Nikfarjam, P. Farzaneh // Cell J. - 2012. - Vol. 13, N 4. - P. 203-212.

198. Observations of the living developing nerve fiber / R. G. Harrison, M. J. Greenman, F. P. Mall // The Anatomical Record. - 1907. - Vol. 1, N 5. - P. 116128.

199. Pampaloni, F. Three-dimensional tissue models for drug discovery and toxicology / F. Pampaloni, E. H. Stelzer, A. Masotti // Recent Pat Biotechnol. - 2009. - Vol. 3, N 2. - P. 103-117.

200. Pathogenesis and transmission of SARS-CoV-2 in golden hamsters / S. F. Sia, L. M. Yan, A. W. H. Chin [et al.] // Nature. - 2020. - Vol. 583, N 7818. - P. 834-838.

201. Pathogenicity and genomic characterization of a pseudorabies virus variant isolated from Bartha-K61-vaccinated swine population in China / Y. Luo, N. Li, X. Cong [et al.] // Vet Microbiol. - 2014. - Vol. 174, N 1-2. - P. 107-115.

202. Perlman, D. Use of antibiotics in cell culture media / D. Perlman // Cell Culture / Jakoby, W., I. Pastan. - Academic Press, 1979. - P. 110-116.

203. Pham, T. D. The Polio Vaccine and the Restatement (Third) of Torts: Why the Controversies? / T. D. Pham, A. P. Martinez // DePaul Journal of Health Care Law. - 2008. - Vol. 11, N 2. - P. 125-202.

204. Phelan, K. Basic Techniques in Mammalian Cell Tissue Culture / K. Phelan, K. M. May // Curr Protoc Toxicol. - 2016. - Vol. 70. - P. A 3B 1-A 3B 22.

205. Platt, K. B. Biological markers for the differentiation of Aujeszky's disease virus strains / K. B. Platt; Iowa State University. - 1977. - 174 p.

206. Porcine IFITM1 is a host restriction factor that inhibits Pseudorabies virus infection / J. Wang, C. F. Wang, S. L. Ming [et al.] // Int J Biol Macromol. -2020. -Vol. 151. - P. 1181-1193.

207. Post-viraemic detection of bovine ephemeral fever virus by use of autogenous lymphoid tissue-derived bovine primary cell cultures / R. Barigye, S. Davis, R. Hunt [et al.] // Aust Vet J. - 2017. -Vol. 95, N 1-2. - P. 49-52.

208. Prasad Chennazhy, K. Effect of passage number and matrix characteristics on differentiation of endothelial cells cultured for tissue engineering / K. Prasad Chennazhy, L. K. Krishnan // Biomaterials. - 2005. - Vol. 26, N 28. - P. 56585667.

209. Price, P. J. Best practices for media selection for mammalian cells / P. J. Price // In Vitro Cell Dev Biol Anim. - 2017. - Vol. 53, N 8. - P. 673-681.

210. Primary hepatocytes: current understanding of the regulation of metabolic enzymes and transporter proteins, and pharmaceutical practice for the use of hepatocytes in metabolism, enzyme induction, transporter, clearance, and hepatotoxicity studies / N. J. Hewitt, M. J. Lechon, J. B. Houston [et al.] // Drug Metab Rev. - 2007. - Vol. 39, N 1. - P. 159-234.

211. Production of a Foot-and-Mouth Disease Vaccine Antigen Using Suspension-Adapted BHK-21 Cells in a Bioreactor / S. Park, J. Y. Kim, K. H. Ryu [et al.] // Vaccines (Basel). - 2021. - Vol. 9, N 5.

212. Protein composition of catalytically active human telomerase from immortal cells / S. B. Cohen, M. E. Graham, G. O. Lovrecz [et al.] // Science. - 2007. -Vol. 315, N 5820. - P. 1850-1853.

213. Pseudorabies virus infection inhibits autophagy in permissive cells in vitro / M. Sun, L. Hou, Y. D. Tang [et al.] // Sci Rep. - 2017. - Vol. 7. - P. 39964.

214. Pseudorabies virus US3 protein kinase mediates actin stress fiber breakdown / G. Van Minnebruggen, H. W. Favoreel, L. Jacobs, H. J. Nauwynck [et al.] // J Virol. -2003. - Vol. 77, N 16. - P. 9074-9080.

215. Purified chick embryo cell rabies vaccine / C. Wasi, P. Chaiprasithikul, L. Chavanich [et al.] // Lancet. - 1986. - Vol. 1, N 8471. - P. 40.

216. Recent shifts in the occurrence, cause, and magnitude of animal mass mortality events / S. B. Fey, A. M. Siepielski, S. Nussle [et al.] // Proc Natl Acad Sci U S A. - 2015. - Vol. 112, N 4. - P. 1083-1088.

217. Recommendation of short tandem repeat profiling for authenticating human cell lines, stem cells, and tissues / R. Barallon, S. R. Bauer, J. Butler [et al.] // In Vitro Cell Dev Biol Anim. - 2010. - Vol. 46, N 9. - P. 727-732.

218. Reproducibility: changing the policies and culture of cell line authentication / L. P. Freedman, M. C. Gibson, S. P. Ethier [et al.] // Nat Methods. - 2015. Vol. 12, N 6. - P. 493-497.

219. Research and therapy with induced pluripotent stem cells (iPSCs): social, legal, and ethical considerations / S. Moradi, H. Mahdizadeh, T. Saric [et al.] // Stem Cell Res Ther. - 2019. - Vol. 10, N 1. - P. 341.

220. SARS-CoV-2 in fruit bats, ferrets, pigs, and chickens: an experimental transmission study / K. Schlottau, M. Rissmann, A. Graaf [et al.] // Lancet Microbe. - 2020. - Vol. 1, N 5. - P. e218-e225.

221. SARS-CoV-2 is transmitted via contact and via the air between ferrets / M. Richard, A. Kok, D. de Meulder [et al.] // Nature Communications. - 2020. -Vol. 11, N 1. - P. 3496.

222. Seluanov, A. Establishing primary adult fibroblast cultures from rodents / A. Seluanov, A. Vaidya, V. Gorbunova // J Vis Exp. - 2010. N 44: 2033.

223. Sequence comparison of avian interferon regulatory factors and identification of the avian CEC-32 cell as a quail cell line / B. Zoller, I. Redman-Muller, I. Nanda [et al.] // J Interferon Cytokine Res. - 2000. - Vol. 20, N 8. - P. 711-717.

224. Sherry, B. Generating primary cultures of murine cardiac myocytes and cardiac fibroblasts to study viral myocarditis / B. Sherry // Methods Mol Biol. - 2015. -Vol. 1299. - P. 1-16.

225. Silva, G. M. M. Detec?äo de anticorpos contra laringotraqueíte infecciosa das aves no Estado de Minas Gerais / G. M. M. Silva, L. E. Ristow // XX Congresso Latinoamericano de Avicultura. Porto Alegre, Resumos., 2007. - P. 110-112.

226. Simulation of the Clinical and Pathological Manifestations of Coronavirus Disease 2019 (COVID-19) in a Golden Syrian Hamster Model: Implications for Disease Pathogenesis and Transmissibility / J. F. Chan, A. J. Zhang, S. Yuan [et al.] // Clin Infect Dis. - 2020. - Vol. 71, N 9. - P. 2428-2446.

227. Slater, J. D. Equine Herpesviruses / J. D. Slater // Equine Infectious Diseases / Ed. Sellon, D., M. T. Long. - Saunders, 2014. - C. 151-168.e158.

228. Spheroids as a Type of Three-Dimensional Cell Cultures-Examples of Methods of Preparation and the Most Important Application / K. Bialkowska, P. Komorowski, M. Bryszewska [et al.] // Int J Mol Sci. - 2020. - Vol. 21, N 17. -P. 6225.

229. Sporer, K. R. B. The PBS-12SF Cell Line: Development of an Alternative Cell Line for Influenza Vaccine Production / K. R. B. Sporer, J. L. Carter, P. M. Coussens // Journal of Vaccines & Vaccination. - 2016. - Vol. 7, N 6. - P. 1000345.

230. Stacey, G. Immortalisation of primary cells / G. Stacey, C. MacDonald // Cell Biol Toxicol. - 2001. - Vol. 17, N 4-5. - P. 231-246.

231. Standardized cryopreservation of human primary cells / T. V. Ramos, A. J. Mathew, M. L. Thompson, R. O. Ehrhardt // Curr Protoc Cell Biol. - 2014.- Vol. 64. - P. A 3I 1-8.

232. Stones, P. B. Production and control of live oral poliovirus vaccine in WI-38 human diploid cells / P. B. Stones // Dev Biol Stand. - 1976. - Vol. 37. - P. 251253.

233. Sugiura, A. Neurovirulence of influenza virus in mice. I. Neurovirulence of recombinants between virulent and avirulent virus strains / A. Sugiura, M. Ueda // Virology. - 1980. - Vol. 101, N 2. - P. 440-449.

234. Susceptibility of ferrets, cats, dogs, and other domesticated animals to SARS-coronavirus 2 / J. Shi, Z. Wen, G. Zhong [et al.] // Science. - 2020. - Vol. 368, N 6494. - P. 1016-1020.

235. Sykes, J. E. Chapter 1 - Isolation in Cell Culture / J. E. Sykes, S. C. Rankin // Canine and Feline Infectious Diseases - Saint Louis: W.B. Saunders, 2014. - P. 29.

236. Systematic variation in gene expression patterns in human cancer cell lines / D. T. Ross, U. Scherf, M. B. Eisen [et al.] // Nat Genet. - 2000. - Vol. 24, N 3. P. 227235.

237. Technology Platforms for 3D Cell Culture: A User's Guide / Ed. Przyborski, S.: John Wiley & Sons Ltd., 2017. -406 p.

238. Telomerase immortalization of principal cells from mouse collecting duct / S. L. Steele, Y. Wu, R. J. Kolb [et al.] // Am J Physiol Renal Physiol. - 2010. - Vol. 299, N 6. - P. F1507-1514.

239. The canine distemper epidemic in Serengeti: are lions victims of a new highly virulent canine distemper virus strain, or is pathogen circulation stochasticity to blame? / M. Guiserix, N. Bahi-Jaber, D. Fouchet [et al.] // J R Soc Interface. -2007. - Vol. 4, N 17. - P. 1127-1134.

240. The economic value of One Health in relation to the mitigation of zoonotic disease risks / B. Hasler, W. Gilbert, B. A. Jones [et al.] // Curr Top Microbiol Immunol. - 2013. - Vol. 365. - P. 127-151.

241. The first description of complete invertebrate arginine metabolism pathways implies dose-dependent pathogen regulation in Apostichopus japonicus / S. Yina, L. Chenghua, Z. Weiwei [et al.] // Sci Rep. - 2016. - Vol. 6. - P. 23783.

242. The hUC-MSCs cell line CCRC-1 represents a novel, safe and high-yielding HDCs for the production of human viral vaccines / P. Chen, K. H. Zhang, T. Na [et al.] // Sci Rep. - 2017. - Vol. 7, N 1. - P. 12484.

243. The mononuclear phagocyte system of the pig as a model for understanding human innate immunity and disease / L. Fairbairn, R. Kapetanovic, D. P. Sester [et al.] // J Leukoc Biol. - 2011. - Vol. 89, N 6. - P. 855-871.

244. Three-dimensional system enabling the maintenance and directed differentiation of pluripotent stem cells under defined conditions / D. Zujur, K. Kanke, A. C. Lichtler [et al.] // Sci Adv. - 2017. - Vol. 3, N 5. - P. e1602875.

245. Transfection of adult canine Schwann cells and olfactory ensheathing cells at early and late passage with human TERT differentially affects growth factor responsiveness and in vitro growth / S. Techangamsuwan, R. Kreutzer, M. Kreutzer [et al.] // Journal of Neuroscience Methods. - 2009. - Vol. 176, N 2. - P. 112-120.

246. Transmission of SARS-CoV-2 in Domestic Cats / P. J. Halfmann, M. Hatta, S. Chiba [et al.] // N Engl J Med. - 2020. - Vol. 383, N 6. - P. 592-594.

247. Transmission of severe acute respiratory syndrome coronavirus 2 (SARS-CoV-2) to animals: an updated review / S. Salajegheh Tazerji, P. Magalhaes Duarte, P. Rahimi [et al.] // J Transl Med. - 2020. - Vol. 18, N 1. - P. 358.

248. van Rijn, P. A. The Bluetongue Disabled Infectious Single Animal (DISA) Vaccine Platform Based on Deletion NS3/NS3a Protein Is Safe and Protective in Cattle and Enables DIVA / P. A. van Rijn, M. A. Maris-Veldhuis, R. G. P. van Gennip // Viruses. - 2021. - V. 13, N 5. - P. 857.

249. Varga, M. Chapter 14 - Infectious Diseases of Domestic Rabbits / M. Varga // Textbook of Rabbit Medicine (Second Edition) / Varga, M. - ButterworthHeinemann, 2014. - C. 435-471.

250. Verma, A. Animal tissue culture principles and applications / A. Verma, M. Verma, A. Singh // Animal Biotechnology. - 2020. - P. 269-293.

251. Vero cell platform in vaccine production: moving towards cell culture-based viral vaccines / P. N. Barrett, W. Mundt, O. Kistner [et al.] // Expert Rev Vaccines.-2009. - Vol. 8, N 5. - P. 607-618.

252. Vertical transmissibility of small ruminant lentivirus / J. Furtado Araujo, A. Andrioli, R. R. Pinheiro [et al.] // PLoS One. - 2020. - Vol. 15, N 11. - P. e0239916.

253. Viral vaccines and their manufacturing cell substrates: New trends and designs in modern vaccinology / A. F. Rodrigues, H. R. Soares, M. R. Guerreiro [et al.] // Biotechnol J. - 2015. - Vol. 10, N 9. - P. 1329-1344.

254. Watanabe, K. Interspecies extrapolation: a reexamination of acute toxicity data / K. Watanabe, F. Y. Bois, L. Zeise // Risk Anal. - 1992. - Vol. 12, N 2. - P. 301310.

255. Widespread intraspecies cross-contamination of human tumor cell lines arising at source / R. A. MacLeod, W. G. Dirks, Y. Matsuo [et al.] // Int J Cancer. - 1999. -Vol. 83, N 4. - P. 555-563.

256. Witkowski, J. A. Dr. Carrel's immortal cells / J. A. Witkowski // Medical History. - 1980. - Vol. 24, N 2. - P. 129-142.

257. Yamauchi, Y. Influenza Virus. Methods and Protocols. / Y. Yamauchi // Methods in Molecular Biology. - New York, NY: Humana Press, 2018. - 663p.

258. Yang, S., iTRAQ-based Proteomic Analysis of Porcine Kidney Epithelial PK15 cells Infected with Pseudorabies virus / S. Yang, Y. Pei, A. Zhao // Sci Rep. - 2017. -Vol. 7. - P. 45922.

S ПРИЛОЖЕНИЯ

Методические положения разработаны в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФГБНУ ФИЦВиМ

Методические положения регламентируют правила и методические приемы поддержания и хранения субкультур клеток музея клеточных культур ФГБНУ ФИЦВиМ и предназначены для специалистов в области биологии клетки в культуре и вирусологов

Рецензент: Колбасова ОЛ.

Методические положения рассмотрены и рекомендованы к утверждению на заседании объединенного ученого совета ¿7У 20=£/ г., протокол № ВВЕДЕНЫ В ДЕЙСТВИЕ с « 20^ г.

Чадаева А.А.

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор ГБНУ ФИЦВиМ Колбасов

Qij 20Л1г.

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ТКАНИ КОЗЛЕНКА (ТК)

История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток ТК получена в 2018 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации тестикулярной ткани клинически здорового козленка породы Saanenziege возрастом 1,5 месяца и дальнейшего субкультивирования клеток.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ: Происхождение: Сарга Шгсш, тестикулярная ткань.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 23 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 1, 2, 3, 5, 7, 13 пассажей. Среда культивирования: Игла-МЕМ, ОМЕМ на солевом растворе Эрла, сыворотка крови плода КРС (10%), рН 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ТК выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 - 1:2, подогретую до температуры плюс 37 °С.

Ростовые свойства: При посевной концентрации 110-150 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 2-3 день и сохраняется без смены среды в течение 14 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

Морфология: Культура представлена клетками фибробластоподобного типа с мелкозернистой цитоплазмой, границы клеток четко выражены, клеточные элементы имеют веретеновидную форму с длинными отростками. В плотных культурах клетки формируют разнонаправленные «потоки». Кариология: Диплоидный набор (2п=60)

Контроль контаминации: Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не выявлены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ГТЦР. Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных эндогенных контаминантов - лентивирусов медленных инфекций жвачных животных: артрита - энцефалита коз (АЭК), Висна-Маэди, аденоматоза легких и экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60 %), сыворотка крови плода КРС (30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - З.ОхЮ6 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляет 8792%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 2-3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам нодулярного дерматита КРС, чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ), болезни Ауески, классической чумы свиней (КЧС). Субкультура клеток ТК не чувствительна к вирусам трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС) и респираторного коронавируса свиней (РКС). Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор ГБНУ ФИЦВиМ .В. Колбасов

04 20^/г.

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК ТЕСТИКУЛЯРНОЙ ТКАНИ ЯГНЕНКА (ТЯ)

История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток ТЯ получена в 2018 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации тестикулярной ткани клинически здорового ягненка возрастом 1,5 месяца и дальнейшего субкультивирования клеток.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ: Происхождение: Ovis Aries, тестикулярная ткань.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 12 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 2, 6 пассажей. Среда культивирования: Игла-MEM, DMEM на солевом растворе Эрла, сыворотка крови плода КРС (10%), pH 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ТЯ выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 - 1:2, подогретую до температуры плюс 37 °С.

Ростовые свойства: При посевной концентрации 110-150 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 3-4 день и сохраняется без смены среды в течение 14 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

Морфология: Культура представлена клетками фибробластоподобного типа с мелкозернистой цитоплазмой, границы клеток четко выражены, клеточные элементы имеют веретеновидную форму с длинными отростками. В плотных культурах клетки формируют разнонаправленные «потоки». Кариология: диплоидный набор (2п=54).

Контроль контаминации: Бактериологическими методами бактерии, и грибы и микоплазмы не обнаружены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ПЦР. Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных эндогенных контаминантов - лентивирусов медленных инфекций жвачных животных: артрита - энцефалита коз (АЭК), Висна-Маэди, аденоматоза легких и экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней. Среда замораживания: Среда культивирования (60%), сыворотка крови плода КРС (30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - 3.0x106 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим, составила 85%. Морфология и ростовые свойства культуры восстановились на 3 пассаже. Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ), классической чумы свиней

(КЧС).

Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор 'ГБНУ ФИЦВиМ \Д.В. Колбасов

М 2^1 т.

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК

ПОЧКИ ЯГНЕНКА (ПЯ)

История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток ПЯ получена в 2018 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации коркового слоя почки клинически здорового ягненка двухмесячного возраста и последующего субкультивирования клеток.

Происхождение: Ovis Aries, почка.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 13 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 1,2,6 пассажей. Среда культивирования: Игла-МЕМ, DMEM на солевом растворе Эрла, сыворотка крови плода КРС (10%), pH 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ПЯ выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспиргирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 - 1:2, подогретую до температуры плюс 37 °С.

Ростовые свойства: При посевной концентрации 120-150 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 2-3 день и сохраняется без смены в течение 15 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 2-3. Морфология: Монослой культуры представлен клетками эпителиоподобного

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

типа полигональной формы с четко различимыми границами. Ядра овальной формы с 5 - 7 ядрышками различной величины. Возможна незначительная зернистость цитоплазмы. Кариология: Диплоидный набор (2п=54).

Контроль контаминации: Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не обнаружены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ПЦР. Методом ГТЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных эндогенных контаминантов - лентивирусов медленных инфекций жвачных животных: артрита - энцефалита коз (АЭК), Висна-Маэди, аденоматоза легких и экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60 %), сыворотка крови плода КРС (30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - 3.0x106 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляет 97%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ), классической чумы свиней

(КЧС).

Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор

ШШжШШ- ¿Ы^ГБНУ ФИЦВиМ

CA 20Лг.

[}-fliKv. Д В. Колбасов

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК

ПОЧКИ ПЛОДА КРОЛИКА (ППКр)

История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток ППКр получена в 2019 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации коркового слоя почки плода клинически здорового кролика калифорнийской породы и дальнейшего субкультивирования клеток.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ: Происхождение: Oryctolagus Cuniculus, почка плода.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 21 непрерывного пассажа. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 4, 6, 8 пассажей. Среда культивирования: Игла-МЕМ, DMEM на солевом растворе Эрла, сыворотка крови плода КРС (10%), pH 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ППКр выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 - 1:2, подогретую до температуры плюс 37 °С. Ростовые свойства: При посевной концентрации 110-120 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 2-3 день и сохраняется без смены среды в течение 20 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

Морфология: Монослой культуры представлен клетками эпителиоподобного типа полигональной формы с четко различимыми границами. Ядра клеток, в основном, овальной формы, расположены в центре и имеют 1-3 ядрышка. Кариология: диплоидный набор (2п=44).

Контроль контаминации Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не выявлены. Отсутствие микоплазмы подтверждено методом ПЦР.

Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60%), сыворотка крови плода КРС(30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - 3.5х106 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляет 97%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 2-3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам болезни Ауески, миксомы кроликов, нодулярного дерматита КРС, фибромы Шоупа.

Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор ФГБНУ ФИЦВиМ Д.В. Колбасов

%> 0'/ 2011

г.

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧИО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК

КОЖИ ПЛОДА КРОЛИКА (КПКр) История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток КПКр получена в 2019 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации кожи плода клинически здорового кролика калифорнийской породы и дальнейшего субкультивирования клеток.

Происхождение: ОгусШ^иэ Сишси1из, кожа плода.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 15 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 4, 8 пассажей. Среда культивирования: Игла-МЕМ, ОМЕМ на солевом растворе Эрла, сыворотка крови плода КРС (10%), рН 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток КПКр выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1 - 1:2, подогретую до температуры плюс 37 °С. Ростовые свойства: При посевной концентрации 110-120 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 2-3 день и сохраняется без смены среды в течение 20 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

Морфология: Культура представлена клетками фибробластоподобного типа, элементы имеют веретеновидную форму с длинными отростками. Ядро овальной формы, содержит 1-3 (иногда больше) округлых ядрышка, варьирующих по размеру. Кариология: Диплоидный набор (2п=44).

Кон трап ь кон там инации: Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не выявлены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ПЦР. Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60 %), сыворотка крови плода КРС (30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - 3.0x106 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляет 8090%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 2-3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам болезни Ауески, миксомы кроликов, нодулярного дерматита КРС, фибромы Шоупа.

Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

М»_0lf 20.11т.

УТВЕРЖДАЮ Директор ФГБНУ ФИЦВиМ ^^Д.В. Колбасов

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК

ЛЕГКОГО КРОЛЬЧОНКА (ЛКр)

История получения: Субкультура первично-трипсинизированных клеток ЛКр получена в 2020 году Чадаевой A.A., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации легочной ткани клинически здорового кролика породы «Серый великан» в возрасте 5 дней и дальнейшего субкультивирования клеток.

Происхождение: Огус1о1а§иБ Сишси1из, легкие.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 18 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 5, 6, 8, 9, 13, 18 пассажей.

Среда культивирования: DMEM/F12, McCoy's, сыворотка крови плода КРС (10%), pH 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ЛКр выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1, подогретую до температуры плюс 37 °С.

Ростовые свойства: При посевной концентрации 140±10 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 2-3 день и сохраняется без смены среды в течение 15 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

Морфология: эпителиоподобная и фибробластоподобная (смешанная популяция клеток).

Кариология: Диплоидный набор (2п=44).

Контроль контаминации: Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не выявлены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ПЦР. Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных экзогенных вирусных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60 %), сыворотка крови плода КРС 30%, диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - 3.0x106 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составляет 8590%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам болезни Ауески, миксомы кроликов, трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС), и респираторного коронавируса свиней (РКС), везикулярного стоматита (ВВС), чумы плотоядных (ВЧП). Культура клеток не чувствительна к вирусу чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ). Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

УТВЕРЖДАЮ Директор ФГБНУ ФИЦВиМ N Д.В. Колбасов

г» оч 2^1 г.

ПАСПОРТ

НА СУБКУЛЬТУРУ ПЕРВИЧНО-ТРИПСИНИЗИРОВАННЫХ КЛЕТОК

ПЕЧЕНИ КРОЛЬЧОНКА (ПеКр) История получения Субкультура первично-трипсинизированных клеток ПеКр получена в 2020 году Чадаевой А.А., Юрковым С.Г. в лаборатории «Лекарственные средства для животных» ФБГНУ ФИЦВиМ в результате стандартной трипсинизации печени клинически здорового кролика породы «Серый великан» в возрасте 5 дней и дальнейшего субкультивирования клеток.

Происхождение: Oryctolagus Cuniculus, печень.

Пассаж: Клеточная культура сохраняла характерные цитоморфологические и ростовые характеристики в течение 18 непрерывных пассажей. Клетки криоконсервированы в жидком азоте на уровне 2,3,5,7,10, 18 пассажей. Среда культивирования: DMEM/F12, McCoy's, сыворотка крови плода КРС (10%), рН 7,3-7,4.

Способ поддержания: Субкультуру клеток ПеКр выращивают в пристеночных культурах методом последовательных пересевов при температуре 37±0,5 °С. При пересевах для диспергирования клеточного пласта используют смесь 0,02% раствора версена и 0,25% раствора трипсина в соотношении 1:1, подогретую до температуры плюс 37 °С. Ростовые свойства: При посевной концентрации 140±10 тыс.кл/мл конфлюэнтный монослой формируется на 3 день и сохраняется без смены среды в течение 20 суток (срок наблюдений). Индекс пролиферации равен 23.

ХАРАКТЕРИСТИКА КУЛЬТУРЫ:

Морфология: эпителиоподобная и фибробластоподобная (смешанная популяция клеток).

Кариология: Диплоидный набор (2п=44).

Контроль контаминации Бактериологическими методами бактерии, грибы и микоплазмы не выявлены. Отсутствие микоплазм подтверждено методом ПЦР. Методом ПЦР-РВ установлено отсутствие в культуре клеток возможных эндогенных контаминантов: вируса диареи крупного рогатого скота и вируса классической чумы свиней.

Среда замораживания: Среда культивирования (60 %), сыворотка крови плода КРС (30%), диметилсульфоксид (10%). Концентрация клеток - З.ОхЮ6 клеток/мл.

Восстановление после хранения в жидком азоте: Жизнеспособность клеток по тесту витального окрашивания трипановым синим составиляет 8090%. Морфологию и ростовые свойства субкультура клеток восстанавливает в течение 3 пассажей.

Чувствительность к вирусам: Субкультура клеток чувствительна к вирусам болезни Ауески, миксомы кроликов, трансмиссивного гастроэнтерита свиней (ТГС), респираторного коронавируса свиней (РКС), везикулярного стоматита (ВВС). Культура клеток не чувствительна к вирусам ринотрахеита кошек (РТ кошек), чумы мелких жвачных животных (ЧМЖЖ). Область применения: Вирусология, биотехнология.

Руководитель коллекции клеточных культур и музея клеточных штаммов ФГБНУ ФИЦВиМ

Юрков С.Г.

Ъ> 04 20Лг.