Разработка новых биотехнологических методов получения инсулина и лечения инсулинозависимого сахарного диабета мелких домашних животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, доктор биологических наук Абдрахманов, Игорь Камильевич

• Абдрахманов, Игорь Камильевич
• доктор биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации доктор биологических наук Абдрахманов, Игорь Камильевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

1 ВВЕДЕНИЕ.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1 Классификация СД.

2.2 Этиология и патогенез СД.

2.3 СД у домашних животных: современные методы лечения.

2.4 Инсулин - свойства и функции в организме.

2.4.1 Биосинтез инсулина.

2.4.2 Способы промышленного получения инсулина.

2.5 Развитие современных биотехнологических подходов к лечению ИЗСД

2.5.1 Стволовые клетки в реконструкции панкреатической функции.

2.5.2 Манипуляции с клетками млекопитающих, направленные на получение клеток с заданными свойствами.

2.5.2.1 Генетическая трансформация клеток.

2.5.2.2 Методы клеточной инженерии.

2.5.2.3 Гибридизация соматических клеток животных. Особенности получения гибридных клеточных культур на основе клеток - продуцентов биологически активных веществ и способы оценки гибридов.

2.5.2.4 Суспензионное культивирование клеток - продуцентов биологически активных веществ.

2.5.3 Особенности получения и культивирования Р-клеток - донорского материала для трансплантации.

2.5.3.1 Механизм пролиферации и факторы роста Р-клеток.

2.6 Трансплантация Р-клеток при лечении СД 1.

2.6.1 Биологическая совместимость тканей при трансплантации, НЬА-типирование.

2.6.2 Период «гестационного окна».

2.6.3 Иммунопривилегированные зоны для трансплантации островковых клеток

2.6.4 Трансплантация Р-клеток и островков Лангерганса.

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.ч.

3.1 Оборудование и реактивы.

3.2 Культуры клеток и методы работы с ними.

3.3 Гибридизация клеток.

3.4 Исследования на гистологическую совместимость.

3.5 Методы определения продукции инсулина.

3.6 Трансплантация клеток.

4 РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1 Выделение клеточных популяций, представленных р-клетками поджелудочной железы плодов животных и их очистка.

4.1.1 Выделение клеточных популяций, представленных Р-клетками ПЖ плодов кроликов и их очистка.

4.1.2 Выделение клеточной популяции, представленной Р-клетками ПЖ плодов собак и их очистка.

4.1.3 Выделение клеточной популяции, представленной р-клетками ПЖ плодов кошек и их очистка.

4.1.4 Стимуляция Р-клеток из ПЖ плодов кролика, собаки и кошек глюкозой.

4.2 Межвидовая гибридная культура почки овцы по ТК" с Р-клетками поджелудочной железы плодов кроликов, получение, клонирование и изучение её свойств и признаков.

4.2.1 Проверка на реверсию мутантной по тимидинкиназе культуры почки овцы

4.2.2 Определение показателя отрицательного контроля для оценки секреции инсулина гибридными и первичнотрипсинизированными р-клетками.

4.2.3 Гибридизация мутантной культуры ПО ТК -150 с Р-клетками, выделенными из ПЖ плодов кролика.

4.2.4 Клонирование гибридов ПО ТК- х (Зкр.

4.2.4.1 Потомки гибридов 3.1.2.А, 3.1.2.Б.

4.2.4.2 Клонирование клеточного гибрида Д.

4.2.4.3 Клонирование клеточного гибрида Г.

4.2.4.4 Реклонирование клона Г-2.

4.2.4.5 Реклонирование клона Г-1.

4.2.4.6 Реклонирование клона ГГ-4.

4.2.5 Стимуляция клеточных гибридов глюкозой.

4.2.6 Цитохимическое и иммуноцитохимическое выявление инсулина гибридными клетками.

4.2.7 Селекция клонов гибридной культуры ПО ТК" х |3кр с наиболее высокой продукцией инсулина.

4.2.8 Культурально-морфологические, кариологические и секреторные свойства гибридного клона ГА-2 культуры клеток ПО ТК- х (Зкр.

4.2.9 Кариологические свойства клонов гибридной культуры ПО ТК- х 0кр

4.2.10 Получение суспензионных клонов гибридной культуры ПО ТК- х |3кр

4.2.11 Определение гистологической совместимости гибридной культуры т vitro

4.3 Разработка модели получения инсулин-продуцирующих клеток in vitro с использованием стволовых клеток.

4.3.1 Выделение примордиальных половых зародышевых клеток из плодов свиней и их очистка.

4.3.2 Культивирование ППЗК свиньи.

4.3.3 Направленная in vitro дифференцировка ЭПК свиньи в инсулин -секретирующие клетки.

4.4 Ксеногенная трансплантация Р-клеток поджелудочной железы плодов кролика лабораторным животным с индуцированным СД.

4.5 Определение иммуногенности Р-клеток плодов кроликов и вероятности иммуноотторжения посредством экспериментальной трансплантации.

4.6 Изучение влияния фетальных р-клеток поджелудочной железы кролика после трансплантации собакам и кошкам на течение ИЗСД.

4.6.1 Особенности клинической оценки лабораторных показателей как отражение состояния больных животных и эффективности трансплантации

4.6.2 Влияние трансплантации островковых клеток поджелудочной железы кроликов на течение СД у собак и кошек.

5 ВЫВОДЫ.

6 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка новых биотехнологических методов получения инсулина и лечения инсулинозависимого сахарного диабета мелких домашних животных»

1.1 АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

Инсулинозависимый сахарный диабет (ИЗСД) является тяжелейшим заболеванием, вследствие повреждения островковой ткани поджелудочной железы (ПЖ) и сопровождается абсолютной инсулиновой недостаточностью. Синдром ИЗСД опасен не только нарушенным метаболизмом глюкозы, но, прежде всего, своими осложнениями: диабетической ретинопатией, приводящей к полной потере зрения, нефропатией, приводящей к отказу почек, поражением сосудов ног, сосудов сердца и мозга [105]. В последние десятилетия стало всё более и более очевидно, что капиллярные осложнения СД являются следствием гипергликемии. Основной задачей в сдерживании развития патологического процесса при СД является постоянный контроль уровня глюкозы крови [322].

В настоящее время во всем мире зарегистрировано резкое увеличение заболевания СД, и, как прогнозируют специалисты, в дальнейшем статистика заболевания будет только расти. В связи с этим Международная диабетическая федерация инициировала массовое движение общественности по распространению среди широких слоев населения планеты информации об угрозе диабета. Результатом этой широкомасштабной акции стало принятие Организацией Объединённых Наций Резолюции по СД за №

61/225 от 20 декабря 2006 года, в которой стремительный рост заболеваемости диабетом объявлен чрезвычайной угрозой для всего мирового сообщества [83-е пленарное заседание организации Объединенных

Наций, 20 декабря 2006 года]. В Резолюции звучит призыв государствам членам ООН принять экстренные меры для борьбы с диабетом и разработать национальные программы профилактики и лечения диабета. СД во всеуслышание признан медико-социальной проблемой XXI века, которая может привести к эпидемии неинфекционного характера и, как следствие, к тяжёлым социально-экономическим и демографическим последствиям. 9

СД по распространённости занимает первое место среди эндокринологических заболеваний и третье место после сердечнососудистых и онкологических заболеваний. В 1965 г. в мире насчитывалось 30 млн. диабетиков, а в 1972 г. - уже 70 млн. По состоянию на 2002 г. в мире СД болело около 120 млн. человек, а к 2025 году их число по прогнозам увеличится до 380 млн. человек. Ежегодно число диабетиков увеличивается примерно на 7 млн. человек, а от болезней, обусловленных СД, каждый год умирают около 3,8 млн. человек. Однако это лишь приблизительные расчёты, т. к. при существующем стремительном росте заболевания трудно приводить какие-либо точные данные.

Статистика заболевания по странам в процентном отношении к населению выглядит приблизительно так: Россия - 3-4%, США - 4-5%, страны Западной Европы - 4-5%, страны Латинской Америки - 14-15%.

По данным официальной статистики СД в России страдают более 2 млн. человек. Ведущие специалисты считают, что эта цифра существенно занижена и на самом деле число больных диабетом в России в 2-3 раза превышает официальную статистику и может достигать 7 млн. человек. Около 15 тыс. детей до 15 лет имеют диабет 1 типа, и ежегодно диагностируется еще приблизительно 2500 случаев диабета в этой возрастной группе.

Урбанизация планеты накладывает своё влияние на неуклонный рост заболеваемости СД не только на население городов, но и на т.н. «животных - спутников» - собак и кошек. Считается, что в городах, в среднем на 200 кошек или собак приходится одно животное с диагнозом ИЗСД. Как у собак, так и кошек, причиной возникновения СД служит гибель или дисфункция панкреатических Р-клеток, а факторами, способствующими его развитию, являются гиподинамия, дисбаланс компонентов рациона, переедание и связанное с этим ожирение.

Принимая во внимание угрожающие данные по статистике СД, остро встает вопрос о разработке принципиально новых подходов к его лечению.

Существующие методы лечения СД в гуманной медицине -инсулинотерапия и трансплантация ткани или всей ПЖ. Инсулинотерапия, по сути, не является лечением, это только способ отодвинуть на некоторое время наступление выраженных нарушений углеводного обмена, и, как следствие, осложнений СД. Препараты коммерческого инсулина, производимые фармкомпаниями, высокоэффективны и созданы для максимально приближения к природному, однако методы генной инженерии не могут в полной мере смоделировать процессы биологического синтеза «зрелой» молекулы гормона, происходящие в (3-клетках ПЖ. Поэтому постепенное развитие инсулинорезистентности, гипо- и гипергликемические скачки (из-за сложностей расчёта необходимого в данный момент количества экзогенного инсулина организму) для людей, применяющих инсулин, и развитие осложнений неизбежны.

Другой широко распространённый метод - это трансплантация части органа или всей ПЖ. Однако спрос на донорские органы превышает предложение. Кроме того, на сегодняшний день стало очевидно, что, несмотря на совершенствование медицинских технологий, в этой области существует множество проблем и, прежде всего, этического характера, а также необходимость применять иммуносупрессоры, которые сами обладают диабетогенным действием [296, 325].

Лечение сопутствующих диабету ангиопатий эффективно только на фоне достигнутого стабильного содержания глюкозы в крови. Все еще не решена проблема профилактики и коррекции инсулиновой недостаточности в абдоминальной хирургии, т.к. при тяжёлых сочетанных повреждениях двенадцатиперстной кишки и ПЖ, а также при тяжёлом хроническом диффузном панкреатите предполагается тотальное удаление данных органов в комплексе с селезёнкой. При этом развивается выраженный постспленэктомический иммунодефицит [9, 84]. Введение больших доз инсулина [36, 41] не позволяет достичь желаемых результатов, т.е. полной компенсации углеводного обмена, и тем самым замедлить или остановить прогрессирование поздних сосудистых осложнений СД.

В ветеринарии же лечение СД мелких домашних животных сводится только к инсулинотерапии, соблюдению диеты и симптоматическому лечению осложнений.

Профилактика СД 2 сводится к правильному сбалансированному питанию, активному образу жизни, соблюдению гигиенических правил, устранению очагов хронической инфекции в организме, поддержанию естественной микрофлоры организма.

Достижение строгой компенсации углеводного обмена у больных СД, близкой к нормогликемии, может быть достигнуто только применением технологий, предусматривающих наличие такой же нормальной обратной связи регуляции углеводного обмена, как и в здоровом организме [19].

Успешное внедрение в практику экспериментальной биологии методов длительного культивирования стволовых клеток (СК) и клеток-предшественников различных тканей человека, работа с (3-клетками ПЖ, поиск адекватного клеточного материала, не вызывающего иммунного отторжения трансплантатов, создали предпосылки для разработки технологий заместительной клеточной и тканевой терапии. Один из таких методов - трансплантация в организм больного ИЗСД ОК ПЖ -представляется перспективным способом достижения гликемического контроля, поступления в организм эндогенного инсулина, предотвращения тяжёлых гипогликемий и сопутствующих осложнений [164].

Трансплантация (3-клеток ПЖ как потенциальный метод лечения диабета была внедрена в медицинскую практику более 10 лет назад, в ветеринарии этот метод не был отработан ни экспериментально, ни клинически. Однако применение этого метода будет всегда ограничиваться трудностями получения достаточного количества островков от доноров. Решением проблем тканевой трансплантации, а, следственно, лечения ИЗСД людей и животных, является разработка методов получения возобновляемых ресурсов клеток путём использования клеточных технологий.

1.2 ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ

Цель настоящей работы: разработать новые биотехнологические методы, направленные на получение инсулина, а также на лечение инсулинозависимого сахарного диабета мелких домашних животных.

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выделить из ПЖ плодов кролика, собаки, кошки (З-клетки, очистить; изучить их свойства и признаки in vitro.

2. Провести гибридизацию (3-клеток ПЖ плодов кролика с мутантной линией почки овцы, дефектной по тимидинкиназе (ПО ТК~).

3. Провести сравнительный анализ клонов межвидовых гибридных культур ПО ТК" х (З-клетки и отобрать клоны с высокой продукцией инсулина.

4. Адаптировать клоны с наиболее высокой продукцией инсулина к роллерно-суспензионному культивированию и получить суспензионные клоны гибридной культуры.

5. Изучить гистологическую совместимость межвидовых гибридных культур in vitro с сыворотками крови человека.

6. Разработать методы получения и культивирования примордиальных половых зародышевых клеток (ППЗК) свиньи.

7. Получить in vitro инсулин-секретирующие клетки, подобные (3-клеткам ПЖ, путем направленной дифференцировки эмбриональных половых клеток (ЭПК) свиньи.

8. Осуществить трансплантацию (3-клеток ПЖ плодов кролика лабораторным животным с экспериментальным СД и изучить влияние данной процедуры на течение заболевания.

9. Разработать метод трансплантации Р-клеток ПЖ плодов кролика мелким домашним животным с диагнозом СД и изучить влияние трансплантации клеток на течение заболевания.

1.3 НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ

Впервые из ПЖ собак и кошек получены культуры Р-клеток, изучены их свойства и признаки in vitro. Оптимизированы методики выделения Р-клеток ПЖ плодов кроликов, разработаны методики выделения фетальных Р-клеток кошек и собак.

Впервые посредством слияния получена гибридная культура почка овцы х Р-клетки кролика (ПО ТК- х Ркр), способная продуцировать инсулин in vitro.

Впервые получены и прокультивированы ППЗК свиней. Проведена направленная индукция ЭПК свиньи в инсулин-секретирующие клетки.

В опытах на лабораторных животных установлено, что ксенотрансплантация Р-клеток ПЖ плодов кроликов нормализует течение экспериментального СД.

Впервые проведена клиническая трансплантация Р-клеток ПЖ плодов кроликов мелким домашним животным, больным СД. При этом доказано, что в результате трансплантации происходит снижение уровня глюкозы в крови и моче, снижение дозы либо отказ от экзогенного инсулина, уменьшение возникновения сопутствующих диабету сосудистых осложнений.

1.4 ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЙ

Разработан и запатентован способ выделения Р-клеток кроликов, собак и кошек из плодной ПЖ на определенных сроках гестации и очистки их культивированием, а также способ лечения СД у собак и кошек, заключающийся в трансплантации Р-клеток непосредственно через брюшную стенку в паренхиму левой доли печени, без применения иммуносупрессивной терапии (патент на изобретение РФ №2325921).

Указанный способ успешно используется в ряде ветеринарных клиник.

14

Разработаны и утверждены «Методические рекомендации о порядке аттестации и поддержания перевиваемых линий клеток, используемых для культивирования вирусов и производства иммунобиологических препаратов ветеринарного назначения».

Разработаны и утверждены «Методические рекомендации по лечению инсулинозависимого сахарного диабета (СД 1) собак и кошек методом внутрипеченочной трансплантации ß-клеток плодов кроликов».

Полученные результаты расширяют представление о методах клеточной инженерии, направленных на получение клеточных культур, стабильно продуцирующих инсулин.

Полученные результаты открывают перспективы, позволяющие разрабатывать способы получения клеточного материала, используемого в терапии СД.

Результаты исследования могут найти применение в теоретической и экспериментальной клеточной биологии, биотехнологии, физиологии, фармакологии и клинической ветеринарии.

1.5 АПРОБАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на: Vllth International Congress of Andrology «Andrology in the 21 st Century», Montreal, Quebec, Canada, 2001; международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний», Казань, 2005; международной научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы исследовании по инфекционной и протозойной патологии животных, рыб и пчел», ВИЭВ, Москва, 2008; Всероссийской научной конференции «Современные проблемы науки и образования» Российской академии естествознания, Москва, 2008.

1.6 ПУБЛИКАЦИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

По материалам диссертации опубликовано 23 печатные работы, в том числе 10 в журналах, рекомендованных ВАК РФ и 1 патент.

1.7 ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ

1. Инсулино-продуцирующие и культурально - морфологические свойства культур Р-клеток из ПЖ плодов кроликов, собак, кошек не однозначны. Наиболее перспективным материалом для клеточной инженерии являются кроличьи р-клетки.

2. Гибридизация Р-клеток с постоянной линией клеток почки овцы (ПО ТК-) и последующее клонирование позволяют получить культуру клеток - продуцентов инсулина in vitro.

3. Продукция инсулина в гибридных клонах зависит от длительности и метода культивирования.

4. Культивирование ЭПК свиньи в индукционной среде приводит к формированию КОЛОНИЙ инсулин-продуцирующих клеток, подобных Р" клеткам ПЖ.

5. Предложенный метод терапии СД мелких домашних животных путем трансплантации очищенных Р-клеток ПЖ плодов кролика позволяет улучшить течение заболевания и сопутствующих ему осложнений.

1.8 СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ

Работа изложена на 300 страницах стандартного компьютерного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования с обсуждением полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список использованной литературы и приложение. Материалы диссертации иллюстрированы 36 таблицами, 119 рисунками. Библиографический список литературы включает 341 источник, из которых 240 - иностранных.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Абдрахманов, Игорь Камильевич

выводы

1.Получены культуры Р-клеток ПЖ, выделенные из плодов кроликов, собак и кошек, изучены их свойства и признаки: а) по цитологическим признакам, наличию специфической альдегид-фуксин позитивной зернистости, специфическому окрашиванию мечеными AT против инсулина, а также феномену дегрануляции, наступающему в ответ на повышение содержания глюкозы в культуральной среде, установлено, что выделенные клеточные популяции являются Р-клетками островков Лангерганса; б) уровень продукции инсулина (в кондиционированных средах) Р -клетками кроликов составляет в среднем 80 мкИЕ/мл, собак - 84 мкИЕ/мл, кошек - 77 мкИЕ/мл, соответственно, на 3-4 сут культивирования; в) выявлена низкая адгезивная способность Р-клеток ПЖ плодов кролика, которая позволяет их очистить от остальных типов клеток в процессе культивирования, посредством последовательного отбора и переноса в новые культуральные флаконы.

2. Сравнительный анализ свойств и признаков Р-клеток, выделенных из ПЖ плодов кроликов, собак и кошек показал, что наиболее перспективным материалом для клеточной инженерии являются кроличьи Р-клетки.

3. Получены межвидовые гибридные клоны - продуценты инсулина посредством слияния Р-клеток, выделенных из ПЖ плодов кролика, и клеток почки эмбрионов овец, дефектных по ТК (ПО ТК"), в соотношении 1:1, соответственно, в присутствии ПЭГ 1000: а) сравнительный анализ межвидовых гибридных клонов ПО ТК" х Ркр. по способности продуцировать инсулин in vitro показал, что полученная популяция гетерогенна и представлена 4 клонами с повышенной продукцией инсулина (18-30 мкИЕ/мл). б) отбор клонов с высокой продукцией инсулина и их последующее реклонирование позволяют сохранить продукцию инсулина in vitro в течение 24 пассажей и нормальный кариотип. в) установлено, что длительное культивирование (до 54 пассажа) и перевод клеток в суспензионное культивирование приводит к снижению уровня продукции инсулина межвидовыми клеточными гибридами.

4. Микролимфоцитотоксический тест показал, что межвидовая гибридная культура ПО ТК" х Ркр. обладает определенной гистологической совместимостью с антителами человека.

5. Из 23-33-х суточных плодов свиньи выделены первичные половые клетки (ППЗК) и разработаны условия поддержания их в культуре. Установлено, что наличие фидерного слоя, представленного эмбриональными фибробластами мыши линии STO и среды ДМЕМ, дополненной 15% сыворотки плодов коров, 2шМ альфа-глутамина, 10"6 тМ 2-меркаптоэтанола позволяет получить колонии эмбриональных половых клеток (ЭПК) с фенотипом подобным ЭСК свиньи.

6. Культивирование ЭПК свиньи в индукционной среде, содержащей глюкозу, гидрокортизон, аскорбиновую кислоту, а также факторы роста - Ь-FGF, IGF, VEGF, EGF ведет к их направленной дифференцировке in vitro в клетки с морфологией, подобной Р-клеткам ПЖ.

7. Установлено, что трансплантация культуры фетальных кроличьих Р-клеток лабораторным мышам с экспериментальным СД позволяет добиться снижения уровня сахара в крови и его нормализации на протяжении 60 сут. без введения экзогенного инсулина. Нормализация уровня глюкозы после трансплантации происходит без применения иммуносупрессантов.

8. Показано, что длительное культивирование Р-клеток ПЖ плодов кролика способствует снижению иммунной реакции у экспериментальных собак на их введение.

9. Установлено, что ксеногенная трансплантация Р-клеток ПЖ плодов кролика позволяет добиться положительного результата у 6 животных из 8

262 испытуемых. В результате наблюдали: улучшение лабораторных показателей - снижение уровня глюкозы в крови и моче, исчезновение кетоацидоза; значительное снижение доз экзогенного инсулина, либо отказ от него; улучшение течения сопутствующих СД осложнений (нефропатий, ангиопатий, гепатопатий).

10. Предложен новый неинвазивный способ введения Р-клеток домашним животным через брюшную стенку в паренхиму левой доли печени, под контролем ультразвука, который позволяет провести трансплантацию без общей анестезии, без обездвиживания животного и без лапаротомии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Очищенные путем культивирования (3-клетки ПЖ кролика могут быть использованы для клинической трансплантации животным, больным СД.

2. Гибридную культуру ПО ТК- х (Зкр. возможно использовать для дальнейших исследований, направленных на получение постоянной линии клеток, продуцирующей инсулин in vitro.

3. (3-клетки, получаемые дифференцировкой из ППЗК, возможно применять в дальнейших исследованиях, направленных на разработку методов клеточной терапии для лечения СД.

4. Трансплантация Р-клеток ПЖ плода кролика непосредственно через брюшную стенку в паренхиму левой доли печени, без применения иммуносупрессивной терапии, позволяет добиться снижения уровня глюкозы крови и улучшения течения ангиопатий у больных СД.

Заключение.

В процессе культивирования мы наблюдали тенденцию по снижению продуктивной способности клеток, увеличению митотического индекса и пролиферации, скорости формирования монослоя.

Морфологически клеточные культуры тоже изменились: уменьшилось число напластований кластеров округлых клеток на поверхности монослоя и в суспензии, увеличилась адгезивная способность клеток.

Результаты, полученные нами посредством иммуноцитохимического, радиоиммунного и цитохимического методов, позволяют нам заключить, что округлые клетки на поверхности монослоя и кластеры округлых клеток в суспензии, вероятнее всего, являются клетками с генотипом р-клеток пппчгрчл/ттппипи мсрттр'Зм тл ррьпртппиаа

11V^ Д V шч/и шилулл XX положительно коррелирует с количеством таких клеток. В наших исследованиях, кроме выявления уровня инсулина в культуральной жидкости радиоиммунным методом, это подтверждалось иммуноцитохимическим исследованием и окрашиванием ПАФ.

Некоторые авторы считают, что в связи с потерей хромосом одного из видов клеток в гибриде в процессе культивирования от пассажа к пассажу вместе с изменением морфологии снижается секреторная способность клеток [44, 57].

Следует заметить, что в некоторых клонах наблюдалось варьирование показателя уровня инсулина в процессе культивирования. Однако, эти значения не превышают значений отрицательного контроля. Можно предположить, что такой эффект связан с использованием сывороток различных серий, уровень инсулина в которых зависит от физиологического статуса животного, от которого она была получена (Таблица 5).

Таким образом, мы попытались создать новую клеточную систему посредством межвидовой гибридизации (3-клеток - продуцентов инсулина перевиваемой линией ПО ТК\ Селекция клонов, проведенная нами на выявление наилучшего клона-продуцента инсулина, позволила нам отобрать три клона, отвечающих нашим требованиям. Однако, при переводе их на роллерно-суспензионной культивирование, к 10 пассажу произошла их дегенерация. Вполне вероятно, что в результате слияния нам не удалось отобрать клетки, которые отличались бы одновременно высокой продукцией инсулина, хорошими культурально-морфологическими свойствами, способностью отвечать на введение глюкозы продукцией инсулина и возможностью перехода в линию суспензионного культивирования.

Однако, несмотря на существование ряда проблем, связанных с культивированием, селекцией, гистологической совместимостью этих клеток, есть надежда, что наши исследования явились еще одним шагом

ПТТЛЛЛТТ ттп ГТТ ГРХХ ТТ ПТТ11ГТ тж ТЮДГТТОТТПГТ » ЖЛМ/Т>Т1 ттлпт IV ГЧТ^ПТ! ТТТТТ IV туттатту ои^/рч/д па п^ ш у^иодаппл п пэ^ ч^пил м^л\опдиЬв1л 1 пирпДпоАл ал^хихч сельскохозяйственных животных, как продуцентов биологически активных веществ.

2.3 РАЗРАБОТКА МОДЕЛИ ПОЛУЧЕНИЯ ИНСУЛИН

ПРОДУЦИРУЮЩИХ КЛЕТОК IN VITRO С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК.

2.3.1 Выделение примордиальных половых зародышевых клеток из плодов свиней и их очистка.

Работа по получению примордиальных половых зародышевых клеток (ППЗК) была выполнена в 1998-2001 гг. в отделе клеточной инженерии ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства совместно с д.б.н., проф. И.П.Савченковой и к.б.н. Т.А.Приданцевой.

Выделение ППЗК из зачатков гонад млекопитающих с целью получения из них культур ЭПК представляет собой одно из перспективных направлений в клеточной биологии, поскольку позволяет создать экспериментальные модели для изучения in vitro процессов цитодифференцировки в развитии млекопитающих [42].

Известно три типа эмбриональных стволовых клеток. Первый тип включает клетки, полученные из эмбриобласта предымплантационных зародышей млекопитающих. Именно их принято называть эмбриональными стволовыми клетками (ЭСК). Вторым типом эмбриональных стволовых клеток являются клетки эмбриональных карцином (ЭКК). К третьему типу эмбриональных стволовых клеток относятся ППКЗ, выделенные из полового бугорка эмбрионов [66].

Подобно ЭСК, ППЗК при культивировании образуют эмбриоидные тела, содержащие в себе как дифференцированные клетки, так и пролиферирующие прогениторные клетки. Дезагрегация эмбриоидных тел и последующее культивирование их потомков даёт начало клеточным линиям с нормальным диплоидным кариотипом, экспрессирующим как прогениторные, так и дифференцированные маркеры [314].

Продукция инсулина in vitro клетками, полученными в результате манипуляций со стволовыми клетками, описана многими исследовательскими группами. Однако подавляющее большинство работ связано с использованием ЭСК [221, 217, 293] и СК костного мозга [136, 183, 319].

Вероятно, это связано с определенными трудностями в получении и культивировании ППЗК.

Тем не менее, анализ литературных данных показал, что уже неоднократно предпринимались попытки выделения ППЗК крупного рогатого скота, свиней, кролика [186, 210, 215].

Что касается сельскохозяйственных животных, то, на наш взгляд, наиболее подходящим объектом для выделения ППЗК служит свинья. Это объясняется тем, что свинья является многоплодным животным, которое характеризуется высокой физиологической и половой скороспелостью (воспроизводительный цикл составляет 110-140 суток). Приблизительно к 38 суткам развития плода происходит закладка основных органов, в том числе формирование гонад [50, 80]. Достоверно установлено [181], что у 19-суточных зародышей свиньи ППЗК обнаруживаются только в дорсальной тм/aiirra т* г» лтдйтта гт^глиттлг'л натттг^п r-i nnnTinv г» плплплта ОЛ ТО v тттлтг upDimvniic jri d viwjiv munuTnui и iviv^iiiivci, d илидал d DUjpavi^ vу hjiv

ППЗК выявляются в дорсальной брыжейке, стебле желточного мешка и в половых гребнях. В возрасте 31-33-х суток развития в половой железе плода -будущего самца начинается соматическая дифференцировка структуры семенника, в то время как яичник имеет вид недифференцированной железы.

Следует заметить, что ППЗК называют только половые клетки, располагающиеся вне зачатка гонады, либо те клетки, которые уже колонизировали зачаток гонады, но находятся в нем до того времени, когда можно различить пол зачатка гонады, т.е до дифференцировки соматических элементов гонады [20].

За основу выделения ППЗК из плодов свиней мы взяли метод выделения ППЗК из плодов мышей и их очистки от других клеточных типов, базирующийся на дифференциальной адгезии клеток к поверхности [67].

ППЗК выделяли поэтапно из плодов, взятых от свиноматок, которых забивали в различные сроки супоросности: на 23-и сутки беременности (14 плодов), на 26-е сутки беременности (16 плодов), на 31-е сутки беременности (15 плодов), на 33-и сутки беременности (6 плодов) (Таблица 22).

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Абдрахманов, Игорь Камильевич, 2011 год

1. Абрамов В.Ю. Оценка биологической совместимости донора и реципиента при трансплантации почки / В.Ю. Абрамов. Москва, 2005. - С. 42.

2. Балаболкин М.И. Сахарный диабет / М.И. Балаболкин. М.: Медицина. - 1994. - С. 384.

3. Баранов В.Г. Экспериментальный сахарный диабет. Роль в клинической диабетологии / В.Г. Баранов, И.М. Соколоверова, Э.Г. Гаспарян -Л: Наука. 1983. - С. 240.

4. Бекикова Е.А. Опыт лечения детей, страдающих сахарным диабетом, при помощи алло- и ксенотрансплнтации культуры островковых клеток поджелудочной железы / Е.А. Беникова, И.С. Турчин, Л.С. Белякова и др. // Проблемы эндокринологии. 1987. - №2. - С. 19-22.

5. Бенюмович М.С. Суспензии клеток человека и животных / М.С. Бенюмович // Итоги науки и техники, 4.1, ВИНИТИ, серия «Цитология». -1990. -т.6. С. 300.

6. Бикхарт К. Клиническая ветеринарная патофизиология / К. Бикхарт -М.: «Аквариум», 2001. С. 400.

7. Бордуновский В.Н. Пластическая хирургия селезенки и печени (экспериментально-клиническое исследование): автореферат дис. д-ра мед. наук / Бордуновский В.Н., Пермь. 1992. - С.52.

8. Бурыкин И.М. Динамика бета- и альфа-клеточных популяций поджелудочной железы и содержания глюкозы в крови крыс при аллоксановом диабете / И.М. Бурыкин Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 2002. - Т. 133. - №2. - С. 151-153.У

9. Васильев A.C. Гемореологическое действие асковертина при аллоксановом диабете у крыс/ A.C. Васильев Вопр. биол. мед. и фармац. химии. - 2001.- №4. - С. 26-28.

10. Волчегорский И. А. Инсулинпотенцирующее действие антиоксидантов при экспериментальном сахарном диабете / И.А. Волчегорский, J1.M. Рассохина, И.Ю. Мирошниченко // Проблемы эндокринологии. 2010. - 56. - № 2. - С. 27-35.

11. Газарян К.Г. Экспериментальный перенос генов в соматических клетках млекопитающих / К.Г. Газарян, В.З. Тарантул // Успехи современной биологии. 1981. - Т.92. - №2. - С. 163-179.

12. Гладких А.И. Влияние фенсукцинала на функциональное состояние панкреатических бета-клеток у крыс с неонатально индуцированным стрептозотоциновым диабетом / А.И. Гладких Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 2001. - Т. 132. - №7. - С. 55-58.

13. Глебов O.K. Генетическая трансформация соматических клеток / O.K. Глебов Л.: Наука. - 1989. - С. 351.

14. Григорьева М.В. Функциональная морфология рыхлой волокнистой соединительной ткани кожи в условиях аллоксанового диабета и коррекции его альфа- токоферолом : дис. . канд. мед. наук / Григорьева М.В.; Великий Новгород. 2009. - 165 с.

15. Дедов И.И. Современные аспекты трансплантации островков поджелудочной железы при сахарном диабете / И.И. Дедов, М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова // Сахарный диабет.- 2004.- №2(23).- С. 43-41.

16. Дыбан А.П. Раннее развитие млекопитающих / А.П. Дыбан Л.: Наука., Лен. отд., 1988. - С. 228.

17. Дьяконов Л.П. Животная клетка в культуре / Л.П. Дьяконов, В.И.

18. Гитч/пп // Л/Г • ОППП Г 4Г>0lAALilWiJ // ITA. W11J X lllliV I • W. V-/. T^V/V.

19. Дьяконов Л.П. Методические рекомендации по гибридизации соматических клеток сельскохозяйственных животных / Л.П. Дьяконов, A.A. Кущ, Ш.М. Тугизов и др. // Москва. 1988. - С. 11.

20. Дьяконов Л.П. Методические рекомендации по получению мутантных штаммов перевиваемых линий клеток сельскохозяйственных животных, пригодных для гибридизации / Л.П. Дьяконов, A.A. Кущ, Ш.М. Тугизов // Москва. 1984. - С. 16.

21. Дьяконов Л.П. Основные достижения и перспективы развития клеточной биотехнологии / Л.П. Дьяконов // Труды ВИЭВ. 1998. - т.71. - С. 149-162.

22. Елизарова Ю.Н. Влияние некоторых производных 3-оксипиридинана морфо-функциональное состояние сердца при экспериментальном сахарном диабете : дис. . канд. мед. наук / Елизарова Ю.Н.; Саранск. 2008. - 158 с.

23. Жданкина A.C. Морфофункциональные изменения сетчатки глаза при фотоповреждении на фоне аллоксанового диабета и их коррекция асковертином : (экспериментальное исследование) : автореф. дис. . канд. мед. наук / Жданкина A.C.; Томск. 2006. - 23 с.

24. Игнатенко С.Н. Трансплантологические методы лечения сахарного диабета: автореф. дис. . докт. мед. наук / С.Н. Игнатенко; Москва. 1989.-С.46.

25. Карпенко Л.Ю. Особенности проявления и лечения сахарного диабета у кошек / Л.Ю. Карпенко, Е.А. Ермолаева // Материалы 13 международного Московского конгресса по болезням мелких домашних животных. 2005. - С. 42-43.

26. Кистнер Ю.И. Паравазальная субкапсулярная аллотрансплантация ткани неонатальной поджелудочной железы в семенник крыс / Ю.И. Кистнер, И.Д. Кирпатовский, Н.Ю. Александров и др. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2003. - №1. - С. 31-33.

27. Клюшниченко В.Е. Генно-инженерный инсулин человека. ВЭЖХ в анализе продуктов основных стадий производства / В.Е. Клюшниченко,

28. С.А. Акимов, К.В. Мальцев и др.// Биорганическая химия. 1992. - 18. - № 12.-С. 1478-1486.

29. Комиссаренко В.П. Трансплантация культуры островковых клеток поджелудочных желез плодов человека и животных как метод лечения сахарного диабета / В.П. Комиссаренко, И.С. Турчин, И.В. Комиссаренко и др. // Врач. Дело. 1983. - №4. - С. 52-56.

30. Кузин М.И. Хронический панкреатит / М.И. Кузин, М.В. Данилов, Д.Ф. Благовидов // М.: Медицина. 1985. - С. 275—298.

31. Лакин Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин- М.: Высшая школа. 1990. -С. 352.

32. Лейбсон Л.Г. Биологическая активность инсулинов разного происхождения и связывание их специфическими рецепторами. Механизм действия гормонов / Л.Г. Лейбсон // Ташкент. 1976. - С. 86.

33. Лейниекс A.A. Оценка эффективности трансплантации культуры островковых клеток поджелудочной железы у больных сахарным диабетом: автореф. дис. . канд. мед. наук / Лейниекс A.A.; Москва. 1989. - С.33.

34. Леонович С.И. Трансплантация культуры островковых клеток поджелудочной железы в красный костный мозг/ С.И. Леонович, Б.А. Слука, И.Н. Игнатович и др. // Белорусский медицинский журнал. 2004. - №1. - С. 44.

35. Литтман И. Оперативная хирургия / И. Литтман Будапешт: Изд-во Академии наук Венгрии. Academia Kiado. - 1985. - С. 662—670.

36. Лукина H.A. Клеточное размножение и процессы дифференциации / H.A. Лукина. Л.: Наука, Лен отд. -1983. - С.248

37. Лучкина O.A. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на развитие стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета : дис. . канд. мед. наук / O.A. Лучкина; Смоленск. 2008. - 148 с.

38. Марри Р. Биохимия человека./ Р. Марри, Д. Греннер, П. Мейес, В. Родуэлл М.: Мир. - 1993. - С.384.

39. Мартов Ю.Б. Ксенотрансплантация культуры В-клеток поджелудочной железы больным сахарным диабетом / Ю.Б. Мартов, С.Г. Подолинский, A.A. Чиркин и др. // Здравоохранение. 1996. - №9. - С. 41-43.

40. Миргородская O.A. Протеолиз проинсулина человека, катализируемый нативным, модифицированным и иммобилизованным трипсином. / O.A. Миргородская, Г.А. Казанина, Е.П. Миргородская и др. // Биоорганическая Химия. 1997. - 23. - № 2. - С. 91 - 97.

41. Моренкова С. А. Способ получения препарата инсулина для перорального применения : Пат 2058788 Россия, МКИ6 А61К 38/28, 9/14 Моренкова С. А. № 5000106/14 Заявл. 26.7.91; Опубл. 27.4.96, Бюл. № 12.

42. Назаренко Г.И. Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г.И. Назаренко, A.A. Кишкун М.: Медицина. - 2000. - С. 544.

43. Невзгодина М.В. Формирование половых желез в эмбриогенезе свиней / М.В. Невзгодина Сельскохозяйственная биология. - 1971. - Т. 6. -№ 6. - С. 887-894.

44. Новиков И.И. Морфологические изменения губчатого вещества кости после его трансплантации под фиброзную капсулу почки / Новиков И.И. // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1972. - №1. - С. 31-37.

45. Панин Л.Е. Синтез фрагментов инсулина и изучение их физико-химических и иммунологических свойств / Л.Е. Панин, Ф.В. Тузиков, О.Н. Потеряева и др. // Биоорганическая Химия. 1997. - 23. - № 12. - С. 953 - 960.269

46. Пиняев В.И. Влияние низкотемпературного консервирования на первичные половые клетки ранних зародышей человека: дис. канд. мед. наук / Пиняев В.И.; Харьков. 1989. - 117 с.

47. Писарев В.Б. Механизмы токсического действия стрептозотоцина на бета-клетки островков Лангерганса / В.Б. Писарев, Г.Л. Снигур, A.A. Спасов и др. // Бюл.эксперим.биологии и медицины. 2009. - Т. 148. - № 12. -С. 700-702.

48. Плате H.A. Макромолекулярные системы с инсулином в связи с проблемой диабета / H.A. Плате, Л.И. Валуев, Л.К. Старосельцева и др. // Высокомолек. соед. 1994. - 36. - № 11. - С. 1876 - 1879.

49. Подшивалин A.B. Оценка эффективности трансплантации культур островковых клеток поджелудочной железы у больных сахарным диабетом радионуклидными методами: автореф. дис. . канд. мед. наук / Подшивалин A.B.; Москва. 1993. -С.35.

50. Полянская Г.Г. Особенности кариотипической изменчивости в постоянных клеточных линиях / Полянская Г.Г. Ветеринарная патология. -2003.-№1(5).-С. 21-22.

51. Пужалин А. Н. Моделирование сахарного диабета стрептозотоцином / А. Н. Пужалин. Фармация. - 2006. - № 4. - С. 35-37.

52. Райцина С.С. Происхождение и развитие половых клеток // Современные проблемы сперматогенеза / С.С. Райцина М.: Наука. - 1982. -С. 5-25.

53. Розенталь Р.Л. Трансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы при лечении гнойных хирургических заболеваний убольных сахарным диабетом / P.JI. Розенталь, В.А. Закревский, И.М. Ильинский и др. // Вестник хирургии. 1988. - №5. - С. 83-85.

54. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл М.: Мир. - 2000. - С. 582.

55. Романовский А.И. Определение оптимальной методики пересадки островковых клеток поджелудочной железы: автореф. канд. мед. наук / Романовский А.И.; Минск. 2001. - С. 20.

56. Савенко Н.Б. Получение поликлональных антител к синтетическому пептиду прионного белка и определение их специфичности: дисс. . канд. биол. наук 03.00.23 / Савенко наталья Борисовна; ГНУ ВИЭВ, Москва. -2005,-С.119.

57. Савченкова И.П. Эмбриональные стволовые клетки в биологии: настоящее и будущее / И.П. Савченкова Дубровицы. - 1999. - С. 95.

58. Савченкова И.П. Выделение и очистка примордиальных половых клеток зародышей мышей / И.П. Савченкова, Т.А. Приданцева, Н.И. Сергеев и др. // С.-х. биология. 2000. - №2. - С. 119-125.

59. Сафина А.Н. Стационарное и роллерно-суспензионное культивирование межвидовой гибридной культуры клеток свинья х лошадь (A4xL) / А.Н. Сафина, Л.П. Дьяконов, Т.В. Гальнбек // Успехи современного естествознания. 2004. - №3. - С. 33.

60. Семенова-Тянь-Шанская А.Г. Изменение ядер гоноцитов на ранних этапах их дифференцировки у ранних зародышей человека / А.Г. Семенова-Тянь-Шанская Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. -1978.-Т. 74.-№ 1,-С. 91-97.

61. Семенова-Тянь-Шанская А.Г. Цитологические особенности гоноцитов в ходе их миграции у ранних эмбрионов крыс / А.Г. Семенова-Тянь-Шанская Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. - 1976. - Т. 71. -№2. - С. 52-58.

62. Скайлер Д. Эндокринология. Инсулинозависимый сахарный диабет: этиология, патогенез и принципы терапии / Д. Скайлер. Под редакцией Н. Лавина М.: Практика. - 1999. - С. 758-872.

63. Скалецкий H.H. Ксенотрансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы плодов человека крысам с экспериментальным сахарным диабетом: автореф. дис. . канд. мед. наук /Скалецкий H.H. Москва. - 1987. - С.43.

64. Скалецкий H.H. Получение культур островковых клеток для трансплантации: новые подходы и новое качество / H.H. Скалецкий, J1.A. Кирсанова, Н.В. Баранова и др. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2002. - №3. - С. 86.

65. Скалецкий H.H. Проблемы трансплантологии и искусственных органов / учебное пособие // H.H. Скалецкий, JI.A. Кирсанова, В.Н. Блюмкин -М. 1994. -С. 73—80.

66. Скалецкий H.H. Трансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы в лечении инсулинозависимого сахарного диабета / H.H. Скалецкий, H.J1. Фатеева, Г.Т. Сухих, Е.М. Молнар // Бюлл. эксп. биол. и мед. 1994. - №4. - С. 356-363.

67. Соколов П.А. Развитие половых органов у плодов свиней / Доклады ТСХА. 1972. - Вып. 178. - С. 171-178.

68. Справочник практического врача / Ю.Е.Вельтищев и др. ; под ред. А.И. Воробьева. М.: Медицина. - 1991. - В 2 томах.

69. Степанов В.М. Молекулярная биология. Структура и функции белков./ В.М. Степанов М.: Высшая школа. - 1996. -С.335.

70. Ol ЛНTT "Г*/ v' ТI л л л Я Л Г\ О I- П л 1 лoj. v^ipancp л. виихимия / ^лраиер л. — ivi.: ivinp. - ^.jiz.

71. Тимербулатов М.В. Органосохраняющая и миниинвазивная хирургия селезенки / М.В.Тимербулатов, А.Г. Хасанов, Р.Р. Фаязов и др.// М.: МЕД-пресс-информ. 2004. - С. 218.

72. Третьяк С.И. Длительное сохранение жизнеспособности аллогенных тканей в сосудах и сердце реципиента (экспериментальное исследование): автореф. дис. д-ра мед. наук / С.И. Третьяк Минск. - 1996. -С. 33.

73. Третьяк С.И. Отдаленные результаты ксенотрансплантации макроинкапсулированной культуры островковых клеток поджелудочной железы / С.И. Третьяк, A.B. Прохоров, A.A. Глинник // Трансплантология. -2004. Т.7. - №3. - С. 364-366.

74. Утяганова E.B. Изучение гипогликемической активности и факторов неспецифической резистентности у животных с аллоксановым диабетом при введении кверцетина и его производных : автореф. дис. . канд. фармац. наук Пятигорск. - 2009. - 23 с.

75. Фриденштейн А.Я. Клеточные основы кроветворного микроокружения / А.Я. Фриденштейн, Е.А. Лурия М: Медицина. - 1980. - С. 216.

76. Шотт A.B. Иммунологические парадоксы в трансплантологии / A.B. Шотт, С.И. Третьяк, А.П. Красильников и др. // Здравоохранение. -1999. №2. - С. 36-37.

77. Шотт A.B. Необычная реакция на чужеродные ткани / A.B. Шотт, A.C. Леонтюк, С.И. Третьяк и др. // ч.2, Минск. 1992. - С. 286.

78. Штамм межвидовых гибридных клеток почки овцы (ovis aries) с бета-клетками кролика продуцент инсулина. Дьяконов Л.П. и др.: патент, на изобретение РФ №2293116. - 2005.

79. Шумаков В.И. Результаты трансплантации культур островковых клеток поджелудочной железы больным сахарным диабетом / В.И. Шумаков,тз Т-j сг* ти ™ // тос лг„с1. илгигалип, ^.11. iiinaicnivu и др. // i ipvjuji. ^/пдилрипил. — i 70J. J1^ J. 67.70.

80. Шумаков В.И. Трансплантация островковых клеток поджелудочной железы / В.И. Шумаков, В.Н. Блюмкин, H.H. Скалецкий и др. -М.: Канон. 1995. - С. 384.

81. Шумаков В.И. Костный мозг как источник получения мезенхимальных клеток для восстановительной терапии поврежденныхорганов / В.И. Шумаков, Н.А. Онищенко, М.Е. Крашенинников и др. // Вестник трансплантологии и искусственных органов. 2002. - 4. - С. 4-7.

82. Шумаков В.И. Трансплантация культур островковых клеток поджелудочной железы (очерки) / В.И. Шумаков, В.Н. Блюмкин, Н.Н. Скалецкий и др. // Москва. 1994. - С. 384.

83. Шумаков В.И. Трансплантация островковых и других эндокринных клеток / В.И. Шумаков, Н.Н. Скалецкий // В кн.: Трансплантология — руководство, Тула: Репроникс Лтд. 1995. - С. 317— 331.

84. Щелкунов С.Н. Конструирование гибридных молекул ДНК / С.Н. Щелкунов Новосибирск: Наука, Сибирское отделение. - 1987. - С. 220.

85. Юрина М. А. Влияние антиокса и коэнзима Q10 на повышение устойчивости панкреатических бета-клеток к цитотоксическому действию аллоксана: Автореф. дис. . канд. биол. наук Тюмень. - 2002. - 22 с.

86. Юрченко Н.В. Структурно-функциональная реорганизация сенсомоторной коры большого мозга белых крыс при аллоксановом диабете : дис. . канд. мед. наук Омск. - 2004. - 153 с.

87. Яглов В.В. Биология ацино-островковых клеток поджелудочной железы. / В.В. Яглов // В кн.: «Эволюционная эндокринология поджелудочной железы» Л.: Наука. - 1977. - С. 82-89.

88. Ярошинский Ю.Н. Судьба биологических протезов клапанов сердца (клинико-морфологическое исследование) / Ю.Н. Ярошинский, Г.И. Цукерман, Т.В. Артюхина и др. // Вестн. АМН СССР. 1974. - №6. - С. 6872.

89. Abbott С. Somatic cell hybrids: the basics / С. Abbott, S. Povey // IRL Press at Oxford University Press, Oxford, England. 1995.

90. Alejandro R. Insulin independence in 7 patients following transplantation of cultured human islets / R. Alejandro, J.V. Ferreira, A. Caulfield et al. // Am J Transplant. 2002. - vol. 2. - Suppl. 3. - p. 227.

91. American Diabetes Association. Diabetic Nephropathy. Diabetes Care // 1998. 21 (Suppl 1). - pp. S50-S53.

92. Ann MacGregor E. a-Amylase structure and activity / Ann MacGregor E. // Journal of protein chemistry. 1988. - vol. 7. - №4. - pp. 399415.

93. Appel J.Z. Xenotransplantation: the challenge to current psychological attitudes / J.Z. Appel, J.P.N. Alwayn, D.K.C. Cooper // Progress in Transplantation. 2000. - Vol. 10. - №4. - pp. 217-225.

94. Arinzeh T.L. A comparative study of biphasic calcium phosphate ceramics for human mesenchymal stem-cell-induced bone formation / T.L. Arinzeh, T. Tran, J. McAlary et al. // Biomaterials. 2005. - 26 (17). - pp. 36313638.

95. Assady S. Insulin production by human embryonic stem cells / S. Assady, G. Maor, M. Amit et al. // Diabetes. 2001. - 50. - pp. 1691-1697.

96. Badet L. The interaction between primate blood and mouse islets induces accelerated clotting with islet destruction / L. Badet, T. Titus et al. // Xenotransplantation. 2002.- №9. - Issue 2. - p. 91.

97. Bailey C.J. Immunoreactive insulin in bile and pancreatic juce of the rat / C.J. Bailey, P.R. Flatt, T.W. Atkins, A.J. Matty // J. Endocrinology. 1976. -68.-3.-pp. 19-20.

98. Barker C.F. Immunologically privileged sites / C.F. Barker, R.E. Billingham // Adv Immunol. 1977. - №25. - pp. 1-54.

99. Baron F. Nonmyeloablative Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplantation / F. Baron, Y. Beguin // Journal of Hematotherapy & Stem Cell Research. 2002. - 11. - pp. 243-263.

100. Baue A.B. The immunologic response to heterotopic allovital aortic valve transplants in presensitised and nonsensitesed recipients / A.B. Baue, W.J. Bonawick // J. Thorac, Cardiovasc. Surg. 1968. - Vol 56. - №6. - pp. 775-788.

101. Beattie G.M. Regulation of proliferation and differentiation of human feta islet cells by extracellular matrix, hepatocyte growth factor, and cellcell276contact / G.M. Beattie, J.S. Rubin, M.I. Mally et al. // Diabetes. 1996. - 45. - pp. 1223-1228.

102. Bender T.P. Site specific monoclonal antibodies to insulin / T.P. Bender, J.A. Schroer // Methods Enzymologist. 1985. - vol. 55. - p. 704.

103. Bendtzen K. Cytotoxicity of human pi 7 interleukin-1 for pancreatic islets of Langerhans / K. Bendtzen, T. Mandrup-Poulsen, J. Nerup et al. // Science. 1986. - №232. - pp. 1545-1547.

104. Berney T. Transplantation of islets of Langerhans: new developments / T. Berney, L. Buhler, A.Caulfield et al. // Swiss. Med. Wkly. 2002. - 132. - pp. 671-680.

105. Biarnijs M. P-Cell Death and Mass in Syngeneically Transplanted Islets Exposed to Short-and Long-Term Hyperglycemia / M. Biarnijs, M. Montolio, VfNacher et al. // Diabetes. 51. - 2002. - pp. 66-72.

106. Biden T. Signal transduction events in the regulation of insulin. / T. J. Biden // Proc. Austral. Physiol, and Pharmacol. Soc. 1997 - 28. - № 1. - p. 84.

107. Bobrow M. Differential staining of human and mouse chromosomes in interspecific cell hybrids / M. Bobrow, J. Cross // Nature. 1974 (London). -251. - pp. 77-79.

108. Bobzien B. Intratesticular transplantation os islet xenografts (rat to mouse) / B. Bobzien, Y. Yasunami, M. Majercik et al. // Diabetes. 1983. - Vol. 32. - Issue 3. - pp. 213-216.

109. Bonner-Weir S. A second pathway for regeneration of adultexocrine and endocrine pancreas / S. Bonner-Weir, L.A. Baxter, G.T. Schupping et al. // Diabetes. 1993. - 93. - pp. 1715-1720.

110. Bonner-Weir S. In vitro cultivation of human islets from expanded ductal tissue / S. Bonner-Weir, M. Taneja, G.C. Weir et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 2000. - 97. - pp. 7999-8004.

111. Bonner-Weir S. New sources of pancreatic (3-cells / S. Bonner-Weir, G.C. Weir // Nat Biotechnol. 2005. - 23. - pp. 857-861.

112. Bonner-Weir S. Regulation of pancreatic beta-cell mass in vivo / S. Bonner-Weir // Rec Progr Hormone Res. 1994. - 49. - pp. 91-104.

113. Bosco D. Actively synthesizing beta-cells secrete preferentially after glucose stimulation / D. Bosco, P. Meda // Endocrinology. 1991. - 129(6). - pp. 3157-3166.

114. Bosi E. Autoantibody response to islet transplantation in type 1 diabetes / E. Bosi, S. Braghi et al. // Diabetes. 2001. - №50. - pp. 2464-2471.

115. Bretzel R.G. The liver as a site for implantation of islets of Langerhans in experimental diabetes. Morphologic and metabolic observation / R.G. Bretzel, E. Manus, C. Schomber // Acta Endocrinol. 1978. - 87. - Suppl.-.AO i u. |j. .

116. Brunetti P. Immunoprotection of pancreatic islet grafts within artificial microcapsules / P. Brunetti, G. Basta et al. // Int. J. Artif. Organs. 1991. -№14. - pp. 789-791.

117. Casanova D. Is the high level of nitric oxide metabolites a marker in early rejection after experimental islet pancreas transplantation / D. Casanova, E. Martino et al. // Transpl. Proc. 1998. - №30. - pp. 639-640.

118. Cheng L. Role of leukemia inhibitory factor and its receptor in mouse primordial germ cell growth / L. Cheng, D.P. Gearing, L.S. White et al. // Development. 1994. - V. 120. - pp. 3145-3153.

119. Chinchar V. G. Characterization of hybrids between bovine (MDBK) and mouse (L-cell) cell lines / V.G. Chinchar, A.D. Floyd, G.D. Chinchar et al. // Biochem. Genet. 1979. - 17. - pp. 133-148.

120. Choi J.B. Little evidence of transdifferentiation of bone marrow-derived cells into pancreatic beta cells / J.B. Choi et al. // Diabetologia. 2003. -46.-10.-pp. 1366-1374.

121. Clark G.O. Glucose responsive insulin production from human embrionic germ (EG) cell derivates / G.O. Clark, R.L. Yochem, J. Axelman et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2007. - May 11. - 356 (3). - pp. 587-593.

122. Comitti R. A monoclonal-based, two-site enzyme immunoassay of human insulin / R. Comitti, G. Racchetti, P. Gnocchi et al. // J. of Immunogical methods. 1987. - vol. 99. - pp. 25-37.

123. Cotterell A.H. The humoral immune response in humans following cross-perfusion of porcine organs / A.H. Cotterell, B.H. Collins et al. // Transplantation. 1995. - №60. - pp. 861-868.

124. Davidson R. L. Improved techniques for the induction of mammalian cell hybridization by polyethylene glycol / R.L. Davidson, P.S. Gerald // Sornat. Cell Genet. 1976. - 2. - pp. 165-176.

125. Davison L. Anti-insulin antibodies in dogs with naturally occurring diabetes mellitus / L. Davison, J. Ristic, M. Herrtage // Vet Immunol Immunopath. -2003.-91.-pp. 53-60.

126. De Felici M. Leukemia inhibitory factor sustains the survival of mouse primordial germ cells cultured on TM4 feeder layers / M. De Felici, S. Dolci // Dev. Biol. 1991. - 147. - pp. 281-284.

127. De Vos P. Association between capsule diameter, adequacy of encapsulation and survival of microencapsulated rat islet allografts / P. De Vos, B.J. De Haan et al. // Transplantation. 1996. - №62. - pp. 893-899.

128. Dekel B. Human and porcine early kidney precursors as a new source for transplantation / B. Dekel // Nat Med. 2003. - 9. - 1. - pp. 53-60.279

129. Delovitch T.L. T-lymphocyte recognition of insulin / T.L. Delovitch // Conference of insulin. Structure, chemistry and biology. University of York, England. 1989. - pp. 42-50.

130. Deng A. Y. Chromosomal assignment of 11 loci in the rat by mouse-rat somatic hybrids and linkage / A.Y. Deng, L. Gu, J.P. Rapp et al. // Mamm. Genome. 1994. - 5. - pp. 712-716.

131. Dodson G. 2 International Symposium: Insulin Chemistry, structure and function / G. Dodson // Editors: D. Branderburg and Wollmer, Berlin New-York. - 1980. - p. 593.

132. Dolci S. Requirement for mast cell growth factor for primordial germ cell survival in culture / S. Dolci, D. Williams, M.K. Ernst et al. // Nature. 1991. - Vol. 352. - pp. 809-811.

133. Drury R.A.B. Carleton's histological technique / R.A.B. Drury, E.A. Wallington // Ed. 5. Oxford University Press, Oxford, UK. 1980.

134. Dunger A. The effect of human amniotic fluid on DNA synthesis of rat pancreatic islets in tissue culture / A. Dunger, H. Reiher, H.J. Hahn // Exp Clin Endocrinol. 1989. - 93. - pp. 157-160.

135. Efrat S. Conditional transformation of a pancreatic beta cell line derived from transgenic mice expressing a tetracycline-regulated oncogene / S. Efrat, D. Fusco DeMane, H. Lemberg et al. // Proc Natl Acad Sei USA 1995. -92. - pp. 3576-3580.

136. Efrat S. Genetic engineering of beta-cells for cell therapy of diabetes: cell growth, function, and immunogenicity / S. Efrat // Diabetes Rev. 1996. - 4. -pp. 224-234.

137. Efrat S. Prospects for gene therapy of insulin-dependent diabetes mellitus / S. Efrat//Diabetologia. 1998.-41. - pp. 1401-1409.

138. Fagoonee S. Generation of functional hepatocytes from mouse germ line cell-derived pluripotent stem cells in vitro / S. Fagoonee, R.M. Hobbs, L. De Chiara et al. // Stem Cells Dev. 2010. - Aug, 19(8). - pp. 1183-94.

139. Farney A.C. Inhibition of pancreatic islet beta cell function by tumor necrosis factor is bloked by a soluble tumor necrosis factor receptor / A.C. Farney, E. Xenos, D.E. Sutherland et al. // Transpl. Proc. 1993. - №25. - pp. 865-866.

140. Faustman D.L. Prevention of rejection of murine islet allografts by pretreatment with antidendritic cell antibody / D.L. Faustman, R.M. Steinman et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1984. - № 81. - pp. 3864-3868.

141. Faustman D.L. Prolongation of murine islet allograft survival by pretreatment of islets with antibody directed to la determinants / D.L. Faustman, V. Hauptfeld et al. // Proc. Nat. Acad. Sei. USA. 1981. - № 78. - pp. 5156-5159.

142. Federlin K. Indications for clinical islet transplantation today and in the foreseeable future the diabetologisf s point of view / K. Federlin, G. Pozza // J Mol Med. - 1999. - 77. - pp. 148-152.

143. Feldman J.M. Preparation of islets of Langerhans from rabbits and hamsters by the collagenase digestion technique/ J.M. Feldman, B. Chapman // Acta Diabetol Lat. 1975. - 12(3-4). -pp. 208-218.

144. Feldman S.D. Intrasplenic islet isografts / S.D. Feldman, G.E. Hirshberg et al. // Surgery. 1977. - № 82. - pp. 386-394.

145. Ferber S. Surrogate beta cells / S. Ferber, H. Heimberg, M. Brownlee et al. // Diabetologia. 1997. - 40. - pp. B39-B43.

146. Freidman T. A critical role for human Cd4+ T-cells in rejection of porcine islet cell xenografts / T. Freidman, R.N. Smith, R.B. Colvin et al. // Diabetes. 1999. - Vol. 48. - Issue 12. - pp. 2340-2348.

147. Gazdar A.F. Continuous, clonal, insulin- and somatostain-secreting cell lines established from a transplantable rat islet cell tumor / A.F. Gazdar, W.I. Chick, H.K. Oie et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1980. - 77. - pp. 3519-3523.

148. Goossens M. Response to insulin treatment and survival in 104 cats with diabetes mellitus (1985-1995) / M. Goossens, R. Nelson, E. Feldman // J Vet Intern Med. 1998. - 12. - pp. 1-6.

149. Gorman C. Transformation of mammalian cells / C. Gorman, B. Howard, R. Reeves // Nucleic Acid Res. 1983.- V. 11. - pp. 7631-7648.

150. Gotoh M. Immunological Characteristics of purified pancreatic islet grafts / M. Gotoh, T. Maki, S. Satomi et al. // Transplantation. 1986. - № 42. -pp. 387-390.

151. Green I.C. Effects of pregnancy in the rat on the size and insulin secretory response of the islets of Langerhans / I.C. Green, K.W. Taylor // J Endocrinol. 1972. - 54. - pp. 317-325.

152. Groth C.G. Transplantation of porcine fetal pancreas to diabetic patients / C.G. Groth, O. Korsgren et al. // Lancet. 1994. - Vol. 344. - № 8934. -pp. 1402-1404.

153. Guo L.H. Studies of genetic engineering of human insulin-purification and characterization of human proinsulin and insulin / L.H. Guo // Shih Yen Sheng Wu Hsueh Pao. 1992. - vol. 25. - 2. - pp. 157-163.

154. Hammerman MR. Pancreas and kidney transplantation using embryonic donor organs / M.R. Hammerman // Organogenesis. 2004. - №1. - 1. - pp.3-13.

155. Hayek A. Growth factor/matrix-induced proliferation of human adult betacells / A. Hayek, G.M. Beattie, V. Cirulli et al. // Diabetes. 1995. - 44. - pp. 1458-1466.

156. Heneine W. No evidence of infection with endogenous retrovirus in recipients of porcine islet-cell xenografts / W. Heneine, A.Tibell et al. // Lancet.1 nno \ f„T ici I„„nnnzrr»c ¿AA1770. " V UI. JJi. " issue 71Z.7. pp. vyj-vyy.

157. Hess D. Bone marrow-derived stem cells initiate pancreatic regeneration / D. Hess et al. // Nat Biotechnol. 2003. - 21. - 7. - pp. 763-770.

158. Holtz W. Migration of primordial germ cells during embryonic development in pigs / W. Holtz, E. Mahabir // Reprod. Domest. Anim. 1999. - V. 34.-p. 35.

159. Horejsi V. Murine hybridomas Monoclonal antibodies against insulin: cross reactivity with insulin's of three species and blocking of insulin binding to its receptor / V. Horejsi, I. Hildert, H. Kristofova et al. // Immunol. Lett. 1984. - 8. -p. 279.

160. Ianus A. In vivo derivation of glucose-competent pancreatic endocrine cells from bone marrow without evidence of cell fusion / A. Ianus et al. // J Clin Invest. 2003. - 111. - pp. 843-850.

161. Ianus A. In vivo derivation of glucose-competent pancreatic endocrine cells from bone marrow without evidence of cell fusion / Ianus A., et al. // J. Clin. Invest. 2003. - 111. - pp. 843-850.

162. Jahoda C.A.B. Hair follicle dermal sheath cells: unsung participants in wound healing / C.A.B. Jahoda, A.J. Reynolds // Lancet. 2001. - 358. - pp. 14451448.

163. Jianchi Ding. Isolation of germ cells from rabbit fetal gonads / Jianchi Ding, A.C. Hahnel, J.B. Keith // Theriogenology. 1995. - Vol. 25. - p. 196.

164. Jonas J.S. Chronic hyperglycemia triggers lossof pancreatic beta-cells differentiation in an animals model of diabetes / J.S. Jonas, A. Sharma, W. Hasenkapet al. //J Biol Chem. 1999. - 274. - pp. 14112-14121.

165. Juang J.H. Outcome of subcutaneous islet transplantation improved by a polymer device / J.H. Juang, S. Bonner-Weir, J.P.Vacantu et al. // Transpl. Proc. 1995. -№27. - pp. 3215-3216.

166. Katsoyannis P.G. Hepatospeciflc insulin analoques. : Пат 5208217 США, МКИ5 A61K 37/26, C07K 7/40 / P.G. Katsoyannis // Mount Sinai School of Medicine of the city University of New York, № 785146; Заявл. 29.10.91;

167. Ппчйп ПА оа. итутл сіл /і v-ШуОЛ. ut.uj.yj, xxxvjri ji*t/j.

168. Kaufman D.B. Differential roles of Mac-1+ cells and CD4+ and CD8+ T lymfocytes in primary nonfunction and classic rejection of islet allografts / D.B. Kaufman, J.L. Piatt, F.L. Rabe et al. // J Exp. Med. 1990. - №172. - pp. 291-302.

169. Kelsell D.P. Development of a panel of monochromosomal somatic cell hybrids for rapid gene mapping / D.P. Kelsell, L. Rooke, D.Warne et al. // Ann. Hum. Genet. 1995. - 59. - pp. 233-241.

170. Kelsell D.P. Gene mapping using somatic cell hybrids / D.P. Kelsell, N.K. Spurr // Methods Mol. Biol. 1997. - 68. - pp. 45-52.

171. Kimura T. Induction of pluripotency in primordial germ cells / T. Kimura, T. Nakano // Histol Histopathol. 2011. - 26(5). - pp. 643-50.

172. Klug M.G. Genetically selection cardiomyocytes from differentiating embryonic stem cells form stableintracardiac grafts / M.G. Klug, M.H. Soonpaa, G.Y. Koh et al. // J Clin Invest. 1996. - 98. - pp. 216-224.

173. Kohler G. Derivation of specific antibody-producing tissue culture and tumor lines by cell fusion / G. Kohler, C. Milstein // Eur. J. Immunol. 1976. -6. -pp. 511-519.

174. Kolb E. Clinical islet transplantation / E. Kolb, F. Largiader // Transpl. Proc. 1980. - 12. - №4. - pp. 205-207.

175. Kostia S. SINE targeting of bovine microsatellites from bovine/rodent hybrid cell lines / S. Kostia, J. Vilkki, M. Pirinen et al. // Mamm. Genome. 1997. - 8. - pp. 365-367.

176. Kotin R.M. Site-specific integration by adeno-associated virus / R.M. Kotin, M. Siniscalco, R.J. Samulski et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 1990.1. CT 1 OT1C

177. U / . j-'p. ¿'S- a I-¿.i* 1 U .

178. Koulmanda M. Pig islets xenografts are resistant to autoimmune destruction by non-obese diabetic recipients after anti CD4 treatment / M. Koulmanda, A. Qipo, R.N. Smith // Xenotransplantation. 2003. - Vol 10. - pp. 178-184.

179. Kovaric J. Islet transplantation / J. Kovaric, T.E. Mandel // Transpl. Proc. 1999. - № 31. - pp. 45-48.

180. Kozak T. Hematopoietic stem cell transplantation for multiple sclerosis / T. Kozak, E. Havrdova et al. // J. Neurol. 2002. - 249. - pp. 10881097.

181. Kroon E. Pancreatic endoderm derived from human embryonic stem cells generates glucose-responsive insulin-secreting cells in vivo / E. Kroon, L.A. Martinson, K. Kadoya et al. // Nat Biotechnol. 2008. - 26. - pp. 443-452.

182. Kulseng B. Alginate polylysine microcapsules as immune barrier: permeability of cytokines and imunoglobulins over the capsule membrane / B. Kulseng, B. Thu, T. Espevik et al. // Cell Transp. 1997. - № 6. - pp. 387-394.

183. Lacy P. Method for the isolation of intact islats of Langerhans from the rat pancreas / P. Lacy, M. Kostianovsky // Diabetes. 1967. - № 16. - pp. 3539.

184. Lacy P.E. Maintenance of normoglycemia in diabetic mice by subcutaneous xenografts of encapsulated islets / P.E. Lacy, O.D. Hegre et al. // Science. 1991. - № 254. - pp. 1782-1784.

185. Lakshmi K.G. Indications of islet allotolerance in nonhuman primates / K.G. Lakshmi, Y. Nitta et al. // Ann. NY Acc. Sci. 2002. - № 958. - pp. 199203.

186. Lanza R.P. Perspectives in diabetes. Islet transplantation with immunosupression / R.P. Lanza, S.J. Sullivan, W.L. Chic // Diabetes. 1992. - № 41. - pp. 1503-1510.

187. Lau H. Prolongation of rat islet allograft survival by direct ultraviolet irradiation of the graft / H. Lau, K. Reemtsma, M.A. Hardy // Science. 1984.1. ATnOTJ cm ^OQ1. J^^^J. pp. \J\J I -UU7.

188. Lavoir M.-C. Isolation and identification of bovine fetal germ cells / M.-C. Lavoir, P.K. Basrur, K.J. Betteridge // Mol. Reprod. Dev. 1994. - Vol. 37. -pp. 413-424.

189. Le Blanc K. HLA expression and immunologic properties of differentiated and undifferentiated mesenchymal stem cells / K. Le Blanc, C. Tammik, K. Rosendahl et al. // Exp. Hematol. 2003. - 31. - pp. 890-896.

190. Le Blanc K. Immunomodulatory effects of fetal and adult mesenchymal stem cells / K. Le Blanc // Cytotherapy. 2003. - 6. - pp. 485-489.

191. Lechner A. Stem/progenitor cells derived from adult tissues: potential for the treatment of diabetes mellitus / A. Lechner, J. Habener // Am. J. Physiol. Endocrinol. Metab. 2003. - 284. - 2. - E259-E266.

192. Lee J-H. Characterizing and mapping porcine endogenous retroviruses in Westran pigs / J-H. Lee, G.C. Webb, R.D.M. Allen et al. // J Virology. 2002. -Vol. 76. - № 11. - pp. 5548-5556.

193. Leichthammer F. In vitro culture and cryopreservation of farm animals primordial germ cells / F. Leichthammer, G. Brem // Theriogenology. -1990.-Vol. 33 (1).-p. 272.

194. Leichthammer F. Behavoir of living primordial germ cells of livestock in vitro / F. Leichthammer, E. Baunack, G. Brem // Theriogenology. 1990. -Vol. 33.-pp. 1221-1230.

195. Lester L.B. Directed differentiation of rhesus monkey ES cells into pancreatic cell phenotypes / L.B. Lester, H.C. Kuo, L. Andrews et al. // Reprod Biol Endocrinol. 2004 - 2. - p. 42.

196. Li B.C. Directional differentiation of chicken primordial germ cells into adipocytes, neuron-like cells, and osteoblasts / B.C. Li, Z.Q. Tian, M. Sun et al. // Mol Reprod Dev. 2010. - 77(9). - pp. 795-801.

197. Li M. Generation of purified neural precursors from embryonic stem cells by lineage selection / M. Li, L. Pevny, R. Lovell-Badge et al. // Curr Biol.1 nno ne.mi c\na1 y 713. — I \J. pp. y / L-y / t.

198. Liu E.H. Transplantation of the islets of Langerhans: new hope for treatment of type 1 diabtes mellitus / E.H. Liu, K.C. Herold // TEM-2000. Vol. 11. - №9. - pp. 379-382.

199. Lumelsky N. Differentiation of embryonic stem cells to insulin-secreting structures similar to pancreatic islets / N. Lumelsky, O. Blondel, P. Laeng et al. // Science. 2001. - 292. - pp. 1389-1394.

200. Ma D.R. The Location, Molecular Characterisation and Multipotency of Hair Follicle Epidermal Stem Cells / D.R. Ma, E.N. Yang, S.T. Lee // Ann. Acad. Med. Singapore. 2004. - 33. - pp. 784-788.

201. MacKenzie D.A. Analysis of pessenger cell composition of human fetal pancreas: implications for transplantation / D.A. MacKenzie, H.W. Sollinger, D.A. Hullet // Transpl. Proc. 1999. - № 254. - pp. 1782-1784.287

202. Mandrup-Poulsen T. Human tumor necrosis factor potentiates human interleukin 1-mediated rat pancreatic beta-cell cytotoxicity / T. Mandrup-Poulsen, K. Bendtzen et al. // J. Immunol. 1987. - № 139. - pp. 4077-4082.

203. Marmont A. M. Immunoablation followed or not by hematopoietic stem cells as an intense therapy for severe autoimmune diseases: new perspectives, new problems / A. M. Marmont // Haematologica. 2001. - 86. - pp. 337-345.

204. Martin J.M. Effect of growth hormone on the isolated pancreatic islets of rat in vitro / J.M. Martin, J.J. Gagliardino // Nature. 1967. - 213. - pp. 630631.

205. Martin J.M. Insulin secretion in rats with elevated circulating growth hormone due to MtT-W15 tumor / J.M. Martin, H.K. Akerblom, G. Garay // Diabetes. 1968. - 17. - pp. 661-667.

206. Mashima H. Beta-cellulin and activin A coordinately convert amylase-secreting pancreatic AR42j cells into insulin-secreting cells / H. Mashima, H. Ohnishi, K. Wakabayashi et al. // J Clin Invest. 1996. - 97. - pp. 1647-1654.

207. Mashima H. Formation of insulin-producing cells from pancreatic acinar AR42 J cells by hepatocyte growth factor / H. Mashima, H. Shibata, T. Mine et al. // Endocrinology. 1996. - 137. - pp. 3969-3976.

208. Matsubara N. The role of interleucin-4 in the regulation of mouse primordial germ cell numbers / N. Matsubara, Y. Takahashi, Y. Nishina et al. // Dev. Biol. 1996. - V. 180. - pp. 14-21.

209. Mauer S.M. Studies of the rate of regression of the glomerular lesions in diabetic rats treated with pancreatic islet transplantation / S.M. Mauer, M.W. Steffes, D.E. Sutherland et al. // Diabetes. 1975. - 24. - №3. - pp. 280-285.

210. McKusick V.A. The status of the gene map of the human chromosomes / V.A. McKusick, F.H. Ruddle // Science. 1977. - 196. - pp. 390405.

211. McLaren A. Development of primordial germ cells in the mouse / A. McLaren // Andrologia. 1992. - Vol. 24. - pp. 243-247.

212. McPaul J.J. Specificities of antibodies eluted from human cadaveric renal allografts / J.J. McPaul, P. Stastny, R.B. Freeman // J.Clin.Invest. 1981. -№67. -pp. 1405-1414.

213. McWhir J. Selective ablation of differentiated cells permits isolation of embryonic stem cell lines from murine embryos with non-permissive genetic background / J. McWhir, A.E. Schnieke, R. Ansell et al. // Nat Genet. 1996. -14. - pp. 223-226.

214. Misler S. A metabolite-regulated potassium channel in rat pancreatic B cells / S. Misler, L.C. Falke, K. Gillis et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1986. -83(18). - pp. 7119-7123.

215. Moldrup A. Effects of sex and pregnancy hormones on growth hormone and prolactin receptor gene expression in insulin-producing cells / A. Moldrup, E.D. Petersen, J.H. Nielsen // Endocrinology. 1993. - 133. - pp. 11651172.

216. Moldrup A. Rat insulinoma cells express both a 115 kDa growth hormone receptor and a 95 kDa prolactin receptor structurally related to the hepatic receptors / A. Moldrup, N. Billestrup, J.H. Nielsen // J Biol Chem. 1990. - 265. -pp. 8686-8690.

217. Motoyoshi S. Cellular characterization of pituitary adenoma cell line (AtT20 cell) transfected with insulin, glucose transporter Type 2 and glucokinase gene / S. Motoyoshi, T. Shirotani, E. Araki et al. // Diabetilogia. 1998. - 41. - pp. 1492-1501.

218. Nagy A. Embryonic stem cells alone are able to support fetal development in the mouse / A. Nagy, E. Gocza, E.M. Diaz et al. // Development. -1990.- 110.-pp. 815-821.

219. Najarían J.S. Human islet autotransplantation. A preliminary report / J.S. Najarían, D.E.R. Sutherland et al. // Transplant. Proc. 1977. - 9. - №1. - pp. 233-236.

220. Nathan S. Cell based therapy in the repair of osteochondral defects: a novel use for adipose tissue / S. Nathan, D. Das, A. Thambyah et al. // Tissue Eng. -2003.-9.-pp. 733-744.

221. Nichols E.A. A review of enzyme polymorphism, linkage and electrophoretic conditions for mouse and somatic cell hybrids in starch gels / E.A. Nichols, F.H. Ruddle // J. Hystochem. Cytochem. 1973. - 21. - pp. 1066-1081.

222. Nielsen J.H. Beta cell proliferation and growth factors / J.H. Nielsen, C. Svensson, E.D. Galsgaard et al. // J Mol Med. 1999. - 77. - pp. 62-66.

223. Nielsen J.H. Effects of growth hormone, prolactin and placental lactogen on insulin content and release, and deoxyribonucleic acid synthesis in cultured pancreatic islets / J.H. Nielsen // Endocrinology. 1982. - 110. - pp. 600606.

224. Nielsen J.H. Effects of pregnancy hormones on pancreatic islets in organ culture / J.H. Nielsen, V. Nielsen, L.M. Pedersen et al. // Acta Endocrinol (Cph). 1986. - 111. - pp. 336-341.

225. Nielsen J.H. Expression of growth hormone and prolactin receptors in the developing mouse pancreas / J.H. Nielsen, G. Gittes // J Cell Biochem Suppl.i yyZ. lOi . f\Dauav/i »vz.ii.

226. Nielsen J.H. Growth hormone is a growth factor for the differentiated pancreatic b-cell / J.H. Nielsen, S. Linde, B.S. Welinder et al. // Mol Endocrinol. -1989.-3. pp. 165-173.

227. Nielsen J.H. Growth hormone stimulates islet cell replication to form expanding monolayers / J.H. Nielsen, R. Jorgensen, K. Brunstedt et al. // Diabetologia. 1984. - 27. - p. 315A.

228. Nielsen J.H. Islet cell proliferation / In:. R.P. Lanza, W.L. Chick (eds) Pancreatic Islet Transplantation Series // Vol 1. Procurement of Pancreatic Islets. R.G. Landes Company Biomedical Publishers. - 1994. - pp. 157-168.

229. Nielsen J.H. The role of growth hormone and prolactin in beta cell growth and regeneration / J.H. Nielsen, A. Moldrup, N. Billestrup et al. // In: Vinik

230. AI (ed) Pancreatic islet cell regeneration and growth Adv Exp Med Biol. - 1992. -321. - pp. 9-17.

231. Nielsen J.H. The role of somatolactogenic hormones and receptors in the growth and function of the endocrine pancreas / J.H. Nielsen, A. Moldrup, N. Billestrup, E.D. Petersen // Pediatric Res. 1993. - 33. - p. S76.

232. Oberholzer J. (3 Cell Replacement for the Treatment of Diabetes / J. Oberholzer et al. // Annals of the New York Academy of Sciences 2001. - 944. -pp. 373-387.

233. Otoncoski T. Nicotinamide is a potent inducer of endocrine differentiation in cultured human fetal pancreatic cells / T. Otoncoski, G.M. Beattie, M.I. Mally et al. // J Clin Invest. 1993. - 92. - pp. 1459-1466.

234. Otoncoski T. Opposite effects of beta-cells différenciation and growth on reg expression of human fetal pancreas cells / T. Otoncoski, M.I. Mally, A.

235. TJawd- // F^oko+oo 1 ÛÛ/I AT. nri 1 1 £A1 1 f,f,iluJ Civ ii wiuuvivj. — i y j-t. — f>. Up. 1 1 Ut 1 1 \JVJ.

236. Otoncoski T. A role for hepatocyte growth factor/scatter factor in fetal mesenchyme-induced pancreatic beta-cell growth / T. Otonkoski, V. Cirulli, G.M. Beattie et al. // Endocrinology. 1996. - 137. - pp. 3131-3139.

237. Pedersen R.A. Studies of in vitro differentiation with embryonic stem cells / R.A. Pedersen // Reprod Fertil Dev. 1994. - 6. - pp. 543-552.

238. Penfonis A. Langerhans islet preparation in cell transplantation / A. Penfonis // Transfus. Sci. 1997. - Vol. 18. - №2. - pp. 235-241.

239. Pepper R.J. Experimental renal heterotransplantation.III. Passive transfer of transplantation immunity / R.J. Pepper, J.S. Najarían // Transplantation.- 1967. №5.-pp. 514-533.

240. Petropavlovskaia M. Identification and characterization of small cells in the adult pancreas: potential progenitor cells? / M. Petropavlovskaia, L. Rosenberg // Cell and Tissue Research. 2002. - 310 (1). - pp. 51-58.

241. Piedrahita J.-A. Generation of transgenic porcine chimeras using primordial germ cell-derived colonies / J.-A. Piedrahita, K. Moor, B. Oetama et al. // Biol, of reprod. 1998. - Vol. 58. - pp. 1321-1329. '

242. Pierluissi J. Effects of growth hormone on insulin release in the rat / J. Pierluissi, R. Pierluissi, S.J.H. Ashcroft // Diabetologia. 1980. - 19. - pp. 391— 396.

243. Pierluissi J. Effects of hypophysectomy and growth hormone on cultured islets of Langerhans of the rat / J. Pierluissi, R. Pierluissi, S.J.H. Ashcroft // Diabetologia. 1982. - 22. - pp. 134-137.

244. Piatt J.L. Islet xenotransplantation: how sweet it is / J.L. Piatt // J Clin Invest. 1996. - 15. - 98(6). - pp. 1273-1274.

245. Polak M. Demonstration of lactogenic receptors in rat endocrine pancreas by quantitative autoradiography / M. Polak, R. Scharfmann, E. Ban et al. // Diabetes. 1990. - 39. - pp. 1045-1049.

246. Pontecorvo G. Polyethylene glycol (PEG) in the production of mammalian somatic cell hybrids / G. Pontecorvo // Cytogenet. Cell Genet. 1976.- 16. pp. 399-400.

247. Qiu L. Promotes selective expansion of the nephrogenic mesenchyme during kidney organogenesis / L. Qiu et al. // Organogenesis. 2004. - 1. - №1. -pp. 14-21.

248. Quedraogo G. Determination of plasma alpha-amylase in the dog: a test of the specificity of new methods/ G. Quedraogo, J.P. Braun, B. Thorel et al. // J Clin Chem Clin Biochem. 1990. - 28(7). - pp. 493-495.

249. Rabinovitch A. Growth hormone stimulates b-cell replication in neonatal rat pancreatic monolayer cultures / A. Rabinovitch, C. Quigley, M.M. Rechler // Diabetes. 1983. - 32. - pp. 307-312.

250. Rafaelloff R. Cloning and sequencing of the pancreatic islet neogenesis associated protein gene and its expression in islet neogenesis in hamsters / R. Rafaelloff, G.L. Pittenger, S.W. Barlow et al. // J Clin Invest. 1997. -99.-pp. 2100-2109.

251. Ramiya V.K. Reversal of insulin-dependent diabetes using islets generated "in vitro" from pancreatic stem cells / V.K. Ramiya, M. Maraist, K.E. Arfors et al. // Nat Med. 2000. - 6. - pp. 278-282.

252. Rao M. Tumorigenesis and embryonic stem cell-derived therapy / M. Rao // Stem Cells Dev. 2007. - 16. - pp. 903-904.

253. Raplan H.J. A reconsideration of immunological privelege within the anterior chamber of the eye / H.J. Raplan, T.R. Stevens // Transplantation. 1975. -Vol. 19. - №4.- pp. 203-209.

254. Rasmusson I. Mesenchymal stem cells inhibit the formation of cytotoxic T lymphocytes, but not activated cytotoxic T-lymphocytes or natural killer cells/ I. Rasmusson, O. Ringden, B. Sundberg et al. /'/' Transplantation. -2003.-76. pp. 1208-1213.

255. Rathein D.A. Identification of antigenic determinants of insulin recognized by Monoclonal antibodies / D.A. Rathein, P.A. Underwood // Mol. Imunol. 1986. - Vol. 23. - pp. 441-450.

256. Rayat G.R. Potential application of neonatal porcine islets as treatment for type 1 diabetes: a review / G.R. Rayat, R.V. Rajotte, G.S. Korbutt // Ann NY Acad. SCI. 1999. - №875. - pp. 175-188.

257. Richardt M. Islet transplantation in experimental diabetes of the rat / M. Richardt, A. Menden, R. Bretzel // Hormone and metab. Res. 1984. - 16. -№10. - pp. 551-552.

258. Ringertz N.R. Cell hybrids / N.R. Ringertz, R.E. Savage // Academic Press, Inc., New York. 1976. - pp.147-161.293

259. Roche E. Long-term exposure of beta-INS cells to high glucose concentration increases anaplerosis, lipogenesis and lipogenetic gene expression / E. Roche, S. Farfary, L.A. Witters et al. // Diabetes. 1998. - 47. - pp. 1086-1094.

260. Rohwedel J. Induction of cellular differentiation by retinoic acid in vitro / J. Rohwedel, K. Guan, A.M. Wobus // Cells Tissues Organs. 1999. - 165. -pp. 190-202.

261. Ronald R. A rapid and sensitive radioimmunoassay for the measurement of proinsulin in human serum / R. Ronald // Diabetes. 1992. - Vol. 41. - pp. 411-420.

262. Rooman I. Effect of vascular endothelial growth factor on growth and differentiation of pancreatic ductal epithelium /1. Rooman, F. Schuit, L. Bouwens // Lab Invest. 1997. - 76. - pp. 225-232.

263. Rucinsky R. AAHA Diabetes Management Guidelines for Dogs and Cats / R. Rucinsky, A. Cook, S. Haley et al. // J of the American Animal Hospital Association. 2010. - Vol. 46. - pp. 215-224.

264. Ruddle F.H. A new era in mammalian gene mapping: somatic cell genetics and recombinant DNA methodologies / F.H. Ruddle // Nature (London). -1981.-294. pp. 115-120.

265. Ruddle F.H. Parasexual approaches to the genetics of man / F.H. Ruddle, R.P. Creagan // Annu. Rev. Genet. 1975. - 9. - pp. 407-487.

266. Ruddle F.H. Starch gel electrophoretic phenotypes of mouse x human somatic cell hybrids and mouse isozyme polymorphisms / F.H. Ruddle // In Vitro (Rockville). 1971.-7. - pp. 120-131.

267. Ryan J. Chromosomal assignment of a family of human oncogenes / J. Ryan, P.E. Barker, K. Shimizu et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1983. - 80. -pp. 4460-4463.

268. Schroer J.A. Hybridomas antibody recognition of the insulin molecule / J.A. Schroer // New York: Ravn Press. 1981. - pp. 167-173.

269. Schuldiner M. Selective ablation of human embryonic stem cells expressing a "suicide" gene / M. Schuldiner, J. Itskovitz-Eldor, N.V. Benvenisty // Stem Cells. 2003. - 21. - 3. - pp. 257-265.

270. Secchi A. Endocrinometabolic effects of whole versus segmental pancreas allotransplantation in diabetic patients a two-year follow-up / A. Secchi, J.M. Dubernard et al. // Transplantation. - 1991. - Vol. 51. - №3. - pp. 625-629.

271. Segev H. Differentiation of human embryonic stem cells into insulinproducing clusters / H. Segev, B. Fishman, A. Ziskind et al. // Stem Cells. -2004. 22. - pp. 265-274.

272. Shamblott M.J. Derivation of pluripotent stem cells cultured human primordial germ cells / M.J. Shamblott, J. Axelman, S. Wang et al. // Proc. Natl. Acad. Rec. USA. 1998. - 95. - pp. 13726-13731.

273. Shapiro J. A prospective randomized trial of FK 506/prednizolone vs 506/azathioprine/prednizolone in renal transplant patients /' J. Shapiro, M.L. Jordan et al. // Transp. Proc. 1995. - №27. - pp. 814-817.

274. Shapiro J. Eighty years after insulin: parallels with modern islets transplantation / J. Shapiro // Can. Med. Assoc. J. 2002. - Vol. 167, - №12. - pp. 1398-1400.

275. Sharon A. Prolongation of life in anephric rats following de novo enal organogenesis / A. Sharon, M. Rogers, R. Hammerman // Organogenesis. 2004. - 1,- 1. - pp. 22-25.

276. Shim H. Isolation of pluripotent stem cells from cultured porcine primordial germ cells / H. Shim, A. Gutierrez-Adan, L.-R. Chen et al. // Biol, of reprod. 1997. - Vol. 57. - pp. 1089-1095.

277. Siebers U. Histocompability of semipermeable membranes for implantable diffisin devices (bioartificial pancreas) / U. Siebers, T. Zekorn, R.G. Bretzel et al. // Transpl. Proc. 1990. - №22. - pp. 834-835.

278. Sjoholm A. Polyamine requirement in nicotinamide-stimulated beta-cells differentiation in fetal porcine islet-like clusters / A. Sjoholm, O. Korsgren, A. Andersson // Endocriniligy. 1994. - 135. - pp. 1559-1565.

279. Smith F.E. Enchanced insulin-like growth factor 1 gene expression in the regenerating rat pancreas / F.E. Smith, K.M. Rosen, L. Villa-Komaroff et al. // Proc Natl Acad Sci USA. 1991. - 88. - pp. 6152-6156.

280. Song K. In vitro transdifferentiation of adult pancreatic acinar cells into insulin-expressing cells / K. Song // Biochem Biophys Res Commun. 2004. -316. - pp. 1094-1100.

281. Soon S.P. Insulin independence in type I diabetic patient after encapsulated islet transplantation / S.P. Soon, R.E. Heintz et al. // Lancet. 1994. -№343. - pp. 950-951.

282. Soria B. Engineering pancreatic islets / B. Soria, E. Andreu, G. Berna et al. // Pflugers Arch. 2000. - 440. - pp. 1-18.

283. Soria B. From stem cells to beta cells: new strategies in cell therapy of diabetes mellitus / B. Soria, A. Skoudy, F. Martin // Diabetologia. 2001. - 44. -pp. 407-415.

284. Soria B. Insulin-secreting cells derived from embryonic ctem cells normalize glycemia in streptozotocin-induced diabetic mice / B. Soria, E. Roche, G. Berna et al. // Diabetes. 2000. - 49. - pp. 157-162.

285. Stevens L.C. The biology of teratomas / L.C. Stevens // Adv Morphog. 1967. - 6. - pp. 1-31.

286. Stevens R.B. Is islet transplantation a realistic therapy for the treatment of type 1 diabetes in the near future / R.B. Stevens, S. Matsumoto, C.L. Marsh // Clinical Diabetes. 2001. - №19. - pp. 51-60.

287. Stevens R.B. Role of nitric oxide in the pathogenesis of early pancreatic islet dysfunction during rat and human intraportal islet transplantation / R.B. Stevens, A. Lokeh et al. // Trans. Proc. 1994. - №26. - p. 692.

288. Sumner A.T. New technique for distinguishing between human chromosomes / A.T. Sumner, H.J. Evans, R.A. Buckland // Nature (London) New Biol. 1971.-232. - pp. 31-32.

289. Sun A.M. Studies on the effects of growth hormone and thyroxine on proinsulin synthesis and insulin formation in the isolated islets of Langerhans of the rat / A.M. Sun, B.J. Lin, R.E. Haist // Can J Physiol Pharmacol. 1972. - 50. -pp. 1147-1151.

290. Surani M.A. Germ Line and Pluripotent Stem Cells / M.A. Surani, W. Reik // Epigenetics Cold Spring Harbor (N.Y.). 2007. - Vol. 20. - pp.377-395.

291. Susini S. Glucose and glucoincretin peptides synergise to induce c-fos, c-jun, junB, zif268, nur-77gene expression in pancreatic beta-cells / S. Susini, E. Roche, M. Prentki et al. // FASEB J. 1998. - 12. - pp. 1173-1182.

292. Swenne I. Growth hormone regulation of somatomedin C/insulin-like growth factor I production and DNA replication in fetal rat islets in tissue culture/ I. Swenne, D.J. Hill, A.J. Strain et al. // Diabetes. 1987. - 36,- pp. 288-294.

293. Swenne I. Pancreatic beta-cell growth and diabetes mellitus / I. Swenne // Diabetologia. 1992. - 35. - pp. 193-210.

294. Szpirer C. Chromosomal assignment of five cancer-associated rat genes: two thyroid hormone receptor (ERBA) genes, two ERBB genes and the retinoblastoma gene / C. Szpirer, J. Szpirer, M. Riviere et al. // Oncogene. 1991. -6. - pp. 1319-1324.

295. Tayaramma T. Chromatin-Remodeling factors allow differentiation of bone marrow cells into insulin-producing cells / T. Tayaramma, B. Ma, M. Rohde et al. // Stem cells. 2006. - 24. - pp. 2858-2867.297

296. Tessone M. Prolactin binding in rat Langerhans islets / M. Tessone, Oliveira-Filho, E.H. Charreau // J Recept Res. 1980. - 1. - pp. 355-382.

297. Thomson J.A. Embryonic stem cell lines derived from human blastocyst / J.A. Thomson, J. Itskovitz-Eldor, S.S. Shapiro // Science. 1998. -282. - pp. 1145-1147.

298. Till J.E. A direct measurement of the radiation sensitivity of normal mouse bone marrow cells / J.E. Till, E.A. McCulloch // Radiat Res. 1961. - 14. -pp. 1419-1430.

299. Todo S. Liver, kidney and thoracic organ transplantation under FK506 / S. Todo, J.J. Fung et al. // Ann. Surg. 1990. - №212. - pp. 295-305.

300. Vaiman D. A set of 99 cattle microsatellites: characterization, synteny mapping, and polymorphism / D. Vaiman, D. Mercier, K. Moazami-Goudarzi et al. // Mamm. Genome. 1994. - 5. - pp. 288-297.

301. Valente U. Report of clinical cases of human fetal transplantation / U. Valente, M. Ferro, S. Barocci // Transplant. Proc. 1980. - 12. - №4. - pp. 213214.

302. Verme T.B. Regulation of pancreatic duct epithelial growth in vitro / T.B. Verme, S.R. Hootman // Am J Phisiol. 1990. - 258. - pp. G833-G840.

303. Vinik A. Determinants of pancreatic islet cell mass: a balance between neogenesis and senescence/apoptosis / A. Vinik, G. Pittenger, R. Rafaeloff et al. // Diabetes Rev. 1996. - 4. - pp. 235-263.

304. Wang Z.Q. Generation of completely embryonic stem cell-derivedmutant mice using tetraploid blastocyst injection / Z.Q. Wang, F. Kiefer, P. Urbanek et al. // Mech Dev. 1997. - 62. - pp. 137-145.

305. Weiss R.A. Xenotrsnsplantation / R.A. Weiss // BMJ. 1998. - №317. -pp. 931-934.

306. Welsh M. Genetic factors of importance for beta-cell proliferation / M. Welsh, J. Mares, C. Ôberg, T. Karlsson // Diabetes Metab Rev. 1993. - 9. -pp. 25-36.

307. White M. 1RS proteins and the common path to diabetes / M. White // Am J Physiol Endocrinol Metab. 2002. -283(3). - pp. E413-422.

308. Whittaker P.G. Direct effect of rat growth hormone on rat islets of Langerhans in tissue culture / P.G. Whittaker, K.W. Taylor // Diabetologia. 1980. - 18. - pp. 323-328.

309. Wobus A. Characterization of a pluripotent stem cell line derived from a mouse embryo / A. Wobus, H. Holzhausen, P. Jäkel et al. // Exp Cell Res. -1984.- 152.-pp. 212-219.

310. Wobus A.M. Retinoic acid accelerates embryonic stem cell-derived cardiac differentiation and enhances development of ventricular cardiomyocytes / A.M. Wobus, G. Kaomei, M.C. Shan et al. // J Mol Cell Cardiol. 1997. - 29. -pp. 1525-1529.

311. Womack J.E. Gene map of the cow: conservation oflinkage with mouse and man / J.E. Womack, Y.D. Moll // J. Hered. 1986. - 77. - pp. 2-7.

312. Yang L. In vitro trans-differentiation of adult hepatic stem cells into pancreatic endocrine hormone producing cells / L. Yang, S. Li, H. Hate et al.// Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2002. - 49. - pp. 157-162.

313. Youngner J.S. Monolayer tissue cultures. Preparation and standardization of suspensions of trypsin dispersed monkey kidney cells / J.S. Youngner // Proc. Soc. exper. Biol. Med. 1954. - 85. - p. 202.