Получение и характеристика рекомбинантных доменов белка LigA как компонентов потенциальной субъединичной противолептоспирозной вакцины тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Шарапова, Наталья Евгеньевна

• Шарапова, Наталья Евгеньевна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Шарапова, Наталья Евгеньевна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Краткая характеристика Leptospira interrogans.

1.1.1. Классификация и таксономия лептоспир.

1.1.2. Морфология, культуральные и биохимические свойства.

1.1.3. Молекулярно-генетические особенности лептоспир.

1.1.3.1. Анализ секвенированных геномов лептоспир.

1.1.3.2. Основные факторы патогенности и антигенные детерминанты лептоспир.

1.2. Иммунопрофилактика лептоспирозов.

1.2.Г. Традиционные противолептоспирозные вакцины.

1.2.2. Разрабатываемые вакцины для профилактики лептоспирозов.

1.3. Проблемы получения основных компонентов для разработки генно-инженерных субъединичных вакцин (антигенов) и возможные пути их решения.

1.3.1. Проблемы гетерологичной экспрессии, выделения и очистки белков. Аффинные домены в технологии создания химерных белков.

1.3.2.Проблема формулирования инъекционных препаратов и повышения их иммуногенности. Использование аффинной иммобилизации антигенов на полисахаридных сорбентах.

1.3.2.1. Использование 1,3-Р-глюкана в качестве иммуносорбента.

1.3.2.2. Способы получения препарата частиц глюкана из.дрожжей и его свойства.

1.3.2.3: Глкжансвязывающие модули и их применение в качестве аффинных доменов.

Глава 2. Материалы и методы.60 <

2.1. Материалы.

2.1.1. Бактериальные штаммы.

2.1.2. Плазмидные векторы.602.1.3. Олигонуклеотиды.

2.1.4. Ферменты.

2:1.5. Сыворотки.6 Г

2.1.6. Лабораторные животные.

2.1.7. Растворы.

2.1.8. Антибиотики.

2.1.9. Питательные среды.V.V66<

2.1.10: Иммуномакс.

2.1.11. Лабораторное оборудование.

2.2. Методы.

2.2.1. Культивирование лептоспир.

2.2.2. Определение концентрации лептоспир в счетной камере Петрова-Хауссера.

2.2.3. Выделение хромосомной ДНК лептоспир.

2.2.4. Выделение и очистка аналитических количеств плазмидной ДНК.

2.2.5. Выделение и очистка препаративных количеств плазмидной ДНК.

2.2.6. Гидролиз ДНК специфическими эндонуклеазами.

2.2.7. Фракционирование фрагментов ДНК методом электрофореза в агарозном геле.

2.2.8. Препаративное разделение фрагментов ДНК и их элюция из геля

2.2.9. Лигирование фрагментов ДНК.

2.2.10. Трансформация клеток Е. coli.

2.2.10.1. Приготовление компетентных клеток.

2.2.10.2. Электропорация.

2.2.11. Полимеразная цепная реакция (ПЦР).

2.2.12. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.

2.2.13. Фракционирование белков методом электрофореза в полиакри-ламидном геле в денатурирующих условиях

ПААГ-ДСН) и иммуноблоттинг.

2.2.14. Выращивание штамма-продуцента Е. coli и индукция синтеза ре-комбинантных белков.1.

2.2.15. Анализ физико-химического состояния рекомбинантных белков.

2.2.16. Выделение и очистка химерных белков, содержащих целлюло-зосвязывающий или 1,3-р-глюкансвязывающий домен, методом аффинной иммобилизации на полисахаридных сорбентах.

2.2.17. Постановка непрямого иммуноферментного анализа.

2.2.18. Иммунизация лабораторных животных.

2.2.18.1. Иммунизация кроликов.

2.2.18.2. Иммунизация крыс.

2.2.19. Взятие крови и приготовление сывороток.

2.2.20. Определение концентраций цитокинов в сыворотках крыс.

2.2.21. Приготовление препарата частиц глюкана.

Глава 3. Результаты исследований.

3.1. Получение бактериальных штаммов-продуцентов рекомбинантных иммуноглобулиноподобных доменов белка LigA Leptospira interrogans. 81 3.1.1. Создание экспрессионных конструкций, кодирующих отдельные иммуноглобулиноподобные домены белка LigA.

3.1.1.1. Получение ПЦР-фрагментов гена ligA, кодирующих иммуноглобулиноподобные домены.

3.1.1.2. Клонирование ПЦР-фрагментов с помощью векторов pQE6 и pQE16.

3.1.1.3. Создание штаммов-продуцентов рекомбинантных доменов LigA 86 3.1.2. Создание бактериальных штаммов-продуцентов химерных белков, состоящих из рекомбинантных иммуноглобулиноподобных доменов белка LigA и целлюлозосвязывающего домена (CBD).

3.1.2.1. Создание экспрессионных конструкций, содержащих мини-гены рекомбинантных доменов белка LigA с целлюлозосвязывающим доменом (CBD).

3.1.2.2. Создание штаммов-продуцентов химерных белков Dl-CBD, D4-CBD, D5-CBD, содержащих рекомбинантный иммуноглобулиноподоб-ный домен LigA с целлюлозосвязывающим доменом.

3.2. Создание бактериальных штаммов-продуцентов химерных белков, состоящих из рекомбинантных иммуноглобулиноподобных доменов белка LigA и 1,3-Р-глюкансвязывающего домена (GBD).

3.2.1. Создание экспрессионной конструкции, кодирующей рекомбинантный 1,3-Р-глюкансвязывающий домен (GBD) Clostridium Ihermocellinn.

3.2.1.1. Клонирование фрагмента гена licA, кодирующего 1,3-J3-глюкансвязывающий домен (GBD).

3.2.1.2. Получение экспрессионной конструкции, кодирующей рекомбинантный 1,3-р-глюкансвязывающий домен (GBD) и глицин-сериновый спейсер.

3.2.2. Создание экспрессионных конструкций, кодирующих химерные белки Dl-GBD, D4-GBD, D5-GBD, содержащие рекомбинантный имму-ноглобулиноподобный домен белка LigA и 1,3-|3-глюкансвязывающий домен (GBD).

3.2.3. Создание штаммов-продуцентов химерных белков Dl-GBD, D4-GBD, D5-GBD, содержащих рекомбинантный иммуноглобулиноподоб-ный домен LigA с 1,3-Р-глюкансвязывающим доменом.

3.3. Выделение и очистка химерных белков с использованием полисаха-ридных сорбентов.

3.3.1. Выделение и очистка белка D5-CBD методом аффинной иммобилизации на аморфной целлюлозе.

3.3.2. Выделение и очистка белка D5-GBD методом аффинной иммобилизации на 1,3-Р-глюкане.

3.4. Изучение антигенных и иммуногенных свойств полученных препаратов.

3.4.1. Анализ антигенных свойств рекомбинантных белков с набором сывороток больных лептоспирозом людей.

3.4.1.1. Исследование антигенной-структуры полученных рекомбинантных белков методом иммуноблоттинга с сыворотками больных.

3.4.1.2. Изучение антигенной специфичности рекомбинантного антигена D5-CBD. Определение титров LigA-специфических антител в сыворотках больных с использованием рекомбинантных антигенов.

3.4.2. Исследование антигенных и имуногенных свойств белков D5-CBD, D5-GBD. Получение кроличьих антисывороток к рекомбинантным антигенам D5-CBD, D5-GBD и комплексам В5-СВБ-целлюлоза и D5-GBD-глюкан.

3.4.2.1. Иммунизация кроликов рекомбинантными антигенами D5-CBD и D5-GBD и комплексами В5-СВВ-целлюлоза и DS-GBD-глюкан.

3.4.2.2. Определение титров специфических антител в полученных кроличьих сыворотках.

3.4.3. Сравнительное исследование иммуногенных свойств препаратов в эксперименте на крысах.

3.4.3.1. Исследование сывороточных цитокинов крыс, синтезируемых при иммунизации разработанными препаратами.

3.4.3.1. Определение титров специфических антител в сыворотках иммунизированных крыс.

Глава 4. Обсуждение результатов.

Выводы.

Благодарности.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и характеристика рекомбинантных доменов белка LigA как компонентов потенциальной субъединичной противолептоспирозной вакцины»

Актуальность проблемы. Лептоспирозы относятся к числу повсеместно распространенных природно-очаговых инфекций человека и животных. Действующие природные и антропургические очаги этого заболевания расположены во многих странах мира, включая Россию [24-26].

Для специфической профилактики лептоспирозов в России применяется цельноклеточная инактивированная вакцина, содержащая инактивированные формальдегидом культуры лептоспир четырех основных серогрупп, использование которой обеспечивает развитие напряженного серовароспецифического иммунитета длительностью не более 12 месяцев [29]. Инактивированные вакцины, как правило, характеризуются сравнительно высокой реактогенностью и риском возникновения различных поствакцинальных осложнений. Кроме того, существует ряд технологических проблем, связанных с использованием крупномасштабного культивирования микроорганизмов при производстве биопрепаратов. В экономически развитых странах (Западная Европа, США) инактивированные вакцины используют только в ветеринарии [24], вакцина для профилактики лептоспирозов человека отсутствует.

Одним из перспективных направлений в области совершенствования иммунопрофилактики инфекционных заболеваний является разработка подходов к созданию профилактических препаратов нового поколения. Особые надежды возлагаются на создание субъединичных генно-инженерных вакцин, содержащих протективные антигены возбудителей болезни. Субъединичные вакцины имеют ряд преимуществ, важнейшими из которых являются низкая реактоген-ность и возможность создания препарата, обеспечивающего перекрестный (се-роваронезависимый) иммунитет [35]. Вместе с тем, основные сложности при разработке субъединичных вакцин связаны с недостаточными сведениями о протективных антигенах лептоспир и механизмах развития иммунного ответа макроорганизма [88, 150].

Основная роль в формировании невосприимчивости к лептоспирозу отводится гуморальному иммунному ответу. Среди антигенов лептоспир наибо8 лее хорошо изученным является ЛПС, однако характеристики иммунного ответа, вызываемого ЛПС, имеют существенные расхождения среди разных групп исследователей [127, 185]. Стратегии идентификации консервативных антигенов разных сероваров лептоспир сводятся, в основном, к изучению белков наружной мембраны (ОМР) [60, 85]. Важнейшим открытием среди ОМР стало обнаружение иммуноглобулиноподобных белков Li g (Leptospiral immunoglobulin-like), представляющих семейство нефимбрильных адгезинов лептоспир, что придало огромный импульс исследованиям, направленным на создание кандидатных субъединичных препаратов [124, 148]. В настоящее время спектр основных иммуногенных белков патогенных лептоспир окончательно не определен, однако исследователи сходятся во мнении, что из всех известных на сегодняшний день антигенов лептоспир наибольшим вакцинным потенциалом обладает белок LigA [77, 149].

Однако, на этапе получения рекомбинантных антигенов - основных компонентов для разработки субъединичных генно-инженерных препаратов, зачастую возникают различные сложности, связанные с гетерологичной экспрессией, выделением и очисткой рекомбинантных антигенов, а таюке формулированием инъекционных препаратов. Таким образом, разработка подхода, направленного на преодоление указанных сложностей экспрессии, очистки и повышения иммуногенности рекомбинантных антигенов лептоспир для получения компонентов кандидатных субъединичных препаратов, представляет самостоятельный научный и практический интерес.

Цель работы: разработка технологии получения рекомбинантных антигенов лептоспир и получение препаратов рекомбинантных антигенов, иммобилизованных на полисахаридных сорбентах, а также изучение антигенных и иммуногенных свойств полученных препаратов.

Для достижения поставленной цели предстояло решить следующие задачи:

1. Создать рекомбинантные плазмиды, кодирующие иммуноглобулиноподобные домены адгезина LigA Leptospira interrogans sensn 9 lato и получить штаммы-продуценты, обеспечивающие высокий уровень экспрессии целевых белков.

2. Разработать методику выделения, очистки и формулирования препаратов рекомбинантных антигенов с использованием разных по-лисахаридных сорбентов.

3. Исследовать антигенные свойства полученных препаратов рекомбинантных белков.

4. Изучить иммуногенные свойства полученных препаратов рекомбинантных антигенов и их комплексов с полисахаридными сорбентами.

Научная новизна. Сконструированы рекомбинантные плазмиды, кодирующие химерные белки, которые содержат консервативный иммуноглобули-ноподобный домен Lig А, соединенный с целлюлозосвязывающим (CBD) либо 1,3-Р-глкжансвязывающим (GBD) доменом-. На основе полученных плазмид впервые удалось создать эффективные штаммы-продуценты отдельных структурных модулей белка LigA в составе соответствующих химерных белков с высоким уровнем синтезам клетках Е. coli.

Разработана эффективная система выделения, очистки и формулирования препарата рекомбинантного антигена методом его аффинной иммобилизации на частицах 1,3-Р-глюкана дрожжей, позволяющая получать белково-полисахаридный комплекс, напоминающий по структуре и составу известный иммуностимулирующий препарат зимозан.

Впервые исследованы антигенные свойства рекомбинантных автономных иммуноглобулиноподобных доменов и подтверждено сохранение их антигенной конформации. Кроме того, обнаружена групповая специфичность этих антигенов при,исследовании с сыворотками больных лептоспирозами.

Проведено оригинальное сравнительное исследование иммуногенных свойств химерных белков, иммобилизованных на аморфной целлюлозе и частицах 1,3-Р-глюкана, в сравнении с иммунизацией живой культурой и инактивированной противолептоспирозной вакциной. Изучена динамика синтеза ци

10 токинов in vivo при введении разработанных препаратов и получены цитокино-вые профили иммунного ответа крыс, а также определены титры специфических антител к использованным в эксперименте антигенам.

Научно-практическая значимость работы. Предложенный подход, позволяющий получать иммуногенные композиции на основе рекомбинантных антигенов лептоспир и углеводных сорбентов, может быть использован для разработки аналогичных препаратов, содержащие рекомбинантные антигены других микроорганизмов.

Также проведены сравнительные исследования антигенных и иммуно-генных свойств полученных белково-полисахаридных комплексов и индивидуальных антигенов. Полученные охарактеризованные препараты, рекомбинантных антигенов лептоспир могут быть использованы при разработке новых субъединичных кандидатных препаратов для профилактики лептоспироза, а также при создании новых диагностических тест-систем на основе ИФА.

На созданные в данной работе рекомбинантные плазмиды и антигены, штаммы-продуценты рекомбинантных белков, а также способ их выделения и очистки оформлены 3 заявки на.получение патента.

Апробация работы. Результаты работы доложены, на третьей международной конференции «Фундаментальные науки - медицине» в г. Новосибирске 2-8 сентября 2007 г, на Международном междисциплинарном симпозиуме «От экспериментальной биологии к превентивной и интегративной медицине» в г. Судак (Крым, Украина) 19-30 сентября 2008 г., на международном конкурсе научных работ молодых ученых в области нанотехнологий (секция Нано-технологии в медицине) (3-е место) в рамках Международного форума по на-нотехнологиям в г. Москве 3-5 декабря 2008 г., на конкурсе молодых ученых в рамках четвертого съезда Общества биотехнологов России в г. Пущино 17-19 октября 2006 г. (3-е место), на второй всероссийской научно-практической конференции молодых ученых и специалистов «Окружающая среда и здоровье» в г. Рязани 29 мая - 1 июня 2007 г., на заседании Ученого Совета НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН в рамках научного доклада 24 апреля 2008 г., на седь

11 мой молодежной научной конференции «Биотехнология в растениеводстве, животноводстве и ветеринарии» в ГНУ ВНИИ сельскохозяйственной биотехнологии РАСХН 4 апреля 2007 г.

Апробация диссертации состоялась 19 февраля 2009 г. на совместной научной конференции отделов генетики и молекулярной биологии бактерий, медицинской микробиологии, природноочаговых инфекций НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ. По результатам работы оформлены 3 заявки на получение патента.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Шарапова, Наталья Евгеньевна

выводы

1. Созданы пггаммы-продуценты химерных белков, состоящих из иммуног-лобулиноподобных доменов адгезина LigA Leptospira interrogans, соединенных с полисахарид-связывающими аффинными доменами.

2. Разработана одностадийная технология выделения, очистки и формулирования препарата рекомбинантных антигенов LigA на целлюлозном и глюкановом сорбентах.

3. Исследованы антигенные свойства рекомбинантных белков, состоящих из иммуноглобулиноподобного домена LigA с целлюлозосвязывающим доменом и иммуноглобулиноподобного домена LigA с глюкансвязываю-щим доменом, подтверждено сохранение антигенных свойств иммуног-лобулиноподобных доменов в составе химерных белков.

4. Использование полисахаридных сорбентов для иммобилизации рекомбинантных антигенов способствует повышению их иммуногенности за счет развития неспецифической воспалительной реакции, о чем свидетельствуют высокие уровни синтеза провоспалительных цитокинов в первые дни после инъекции.

5. Препарат рекомбинантного белка, состоящего из иммуноглобулиноподобного домена LigA с глюкансвязывающим доменом, иммобилизованного на частицах глюкана, активирует гуморальное звено иммунитета и является перспективным компонентом для разработки субъединичной противолептоспирозной вакцины.

БЛАГОДАРНОСТИ

Считаю своим приятным долгом выразить глубокую благодарность научным руководителям чл.-корр. РАМН, д.м.н., проф. Ю.В. Ананьиной и к.б.н. В.Г. Лунину за постоянное внимание, всестороннюю помощь, полученные знания и>навыки.

Искренне признательна сотрудникам лаборатории лептоспирозов НИИ-ЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН Самсоновой А.П. и Петрову Е.М. за большую помощь, предоставление материалов для исследований, а также прочтение рукописи диссертации. За оказанное содействие и помощь в иммунологической части работы, прочтение рукописи и ценные замечания благодарю в.н.с. лаборатории молекулярной биотехнологии НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи. РАМН Верхов-скую Л.В. Глубокую признательность выражаю заведующей отделением подопытных животных НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН к.б.н: Ветковой Л.Г. за решение организационных вопросов и большую помощь в работе с животными.

За оказанную помощь в работе, прочтение рукописи, критические замечания и ценные советы благодарю сотрудников лаборатории биологически активных наноструктур НИИЭМ им: Н.Ф. Гамалеи РАМН: Галушкину З.М., Полетаеву Н.Н., Халину Т.Е., Сняткову И.Н; Аксенову Е.И., Котнову А.П., Каря-гину А.С., Грабко В.И., Лаврову Н.В., Сергиенко О.В., Рязанову Е.М., Большакову Т.Н., Добрынину О.Ю., Лящука A.M., Павлову Л.К. Искренне признательна с.н.с. лаборатории биологически активных наноструктур к.б.н. Ворониной О.Л. за многочисленные советы, оказанную помощь и поддержку.

Выражаю глубокую благодарность администрации НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН за предоставленную возможность заниматься научной работой и оказанное содействие в организации и проведении научных исследований.

Глубокую признательность выражаю ученому секретарю диссертационного совета НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Н.Ф. Гамалеи РАМН, д.м.н. профессору Русаковой Е. В. за помощь при подготовке диссертации к защите.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Шарапова, Наталья Евгеньевна, 2009 год

1. Аркадьева Г.Е. Биологическая активность некоторых микробных полисахаридов: Автореф. дисс. докт. биол. наук. Л., 1974. -24 с.

2. Басс-Шадхан Х.Ф. Зимозан: методы получения. Биохимическая характеристика и перспективы применения. Рига.: Зинатне, 1970. - 315 с.

3. Беседнова Н.Н., Иванушко Л.А., Звягинцева Т.Н. и др. Иммунотропные свойства 1—>3; 1 —>6-{3-0-глюканов // Антибиотики и химиотерапия. -2000. №2. - С.37-44.

4. Волков И. Ю., Лунина Н. А., Великодворская Г. А. Перспективы практического применения субстратсвязывающих модулей гликозилгидролаз (обзор) // Прикладн. Биох. И мик. 2004. - Т. 40. - С. 499-504.

5. Гурвич А.Е. Использование целлюлозных матриц в иммунохимии // Сб. Иммуносорбенты и их использование в биотехнологии. 1986. - С.5-22.

6. Гурвич А.Е., Капнер Р.Б., Незлин Р.С. Выделение чистых антител при помощи фиксированных на целлюлозе антигенов и изучение их свойств // Биохимия. 1959. - Т. 24 - С. 144-156.

7. Гурвич А.Е., Корукова А.А., Эльгорт Д.А. Иммуногенность белково-целлюлозных комплексов // Сб. Молекулярные и клеточные механизмы регуляции иммунитета. 1985. - С. 56-62.

8. Гурвич А.Е., Корукова А.А., Эльгорт Д.А. Усиление иммуногенности белков путем их присоединения к целлюлозной матрице // Сб. Иммуно-модуляторы. 1987. - С. 67-76.

9. Гурвич А.Е., Кузовлева О.Б., Орлов Г.Е. Приготовление иммуносорбен-тов в виде комплекса белковых антигенов с частицами сефадекса // Лаб. дело. 1967. - №12. - С. 732-734.

10. Гурвич А.Е., Кузовлева О.Б., Туманова А.Е. Получение белково-целлюлозных комплексов (иммуносорбентов) в виде суспензий, способных присоединять большие количества антител // Биохимия. 1961. -Т.26. - С. 934-942.

11. Блинов Н.П. Успехи микробиологии. 1982. Т. 7. - С. 158-177.12.3акенфельд Г.К. Иммунологический- механизм действия полисахаридов дрожжевых клеток Saccharomyces cerevisiae. Рига: - 1990. - 152 с.

12. Калебина, Т.С., Кулаев И.С. Роль белков в формировании молекулярной структуры клеточной стенки дрожжей // Успехи биологической химии. — 2001.-Т. 41.-С. 105-130.

13. Кашкина М.А. Влияние дрожжевых полисахаридов на иммунологическую реактивность организма: Автореф. дисс. . канд. биол. наук. Л., 1974. 19 с.

14. Корукова А.А., Григорьева О.С., Гурвич А.Е. Использование белково-целлюлозного комплекса для индукции у мышей интенсивного антитело-образования// Бюлл. эксп. мед. и биол. 1985. - Т. 100. - С.44-46.

15. Корукова А.А., Эльгорт Д.А., Гурвич А.Е. Вторичный иммунный ответ у мышей при иммунизации белково-целлюлозным комплексом // Бюлл. экст мед. и биол. 1986. - Т. 102. - С. 736-738.

16. Лебедев В.В., Авдеева М.Г., Шубич М.Г., Ананьина Ю.В., Турьянов М.Х., Лучшев В.И. Иктерогеморрагический лептоспироз. Краснодар:'. Советская Кубань. - 2001. - 208 с.

17. Лептоспирозы людей и животных. Под ред. проф. В.В. Ананьина. М.: Медицина. - 1971.

18. Лунин B.F., Карягина-Жулина А.С., Лящук A.M., Сергиенко О.В., Лаврова Н. В., Родионова Э.В., Кормилицина М:И, Мещерякова И.С., Наро-дицкий Б.С., Гинцбург А.Л. Патент РФ № 2270249 от 20 февраля 2006.

19. Лунин В.Г., Карягина-Жулина А.С., Тихонова Т.В., Сергиенко О.В., Лаврова Н.В., Лунина Н.А., Зверлов В.В., Великодворская.Г.А. Патент РФ №2278160 от 20 июня 2006 г.

20. Лящук A.M. Получение и характеристика рекомбинантного белка TUL4, потенциального компонента генно-инженерной субъединичной вакцины против туляремии. Дисс. канд.биол.наук. М., 2005. 19 с.

21. Покровский В. И., Онищенко Г. Г., Черкасский Б. Л. Эволюция инфекционных процессов в России в XX веке. Руководство для врачей. М.: Медицина, 2003.

22. Рабинович М.Л., Мельник М.С. Прогресс в изучении целлюлолитиче-ских ферментов и механизм биодеградации высокоупорядоченных форм целлюлозы // Успехи биологической химии. 2000. - Т. 40. - С. 205-266.

23. Скворцов В.Т., Гурвич А.Е. Синтез высокоемкого иммуносорбента с ориентированной иммобилизацией Ба^-фрагментов для выделения антигена // Бюлл. эксп. мед. и биол. 1984. - Т.97. - С.179-180.

24. Ada G. Overview of vaccines // Methods Mol Med. 2003. V. 87. - P. 1-17.

25. Aderem A, Underhill DM. Mechanisms of phagocytosis in macrophages // Annu Rev Immunol. 1999. - Vol. 17. - P. 593-623.

26. Andrades J, Santamaria J, Wu L, Hall F, Nimni M, Becerra J. Production of a recombinant human basic fibroblast growth factor with a collagen binding domain //Protoplazma. 2001. Vol. 218. - P. 95-103.

27. Arean VM, Sarasin G, Green JH The pathogenesis of leptospirosis: toxin production by Leptospira icterohaemorrhagiae // Am J Vet Res. 1964. - Vol. 25.-P. 836-843.

28. Arnon R, Ben-Yedidia T. Old and new vaccine approaches // Int Immunopharmacol. -2003. Vol. 8. P. 1195-204.

29. Barbosa AS, Abreu PA, Neves FO, et al. A newly identified leptospiral adhesin mediates attachment to laminin // Infect Immun. 2006. - Vol. 74. - P. 63566364.

30. Barnett Ж, Barnett D, Bolin CA, et al. Expression and distribution of leptospiral outer membrane components during renal infection of hamsters // Infect Immun. 1999. - Vol. 6. -P. 853-861.

31. Barocchi MA, Ко Al, Reis MG, et al. Rapid translocation of polarized MDCK cell monolayers by Leptospira interrogans, an invasive but nonintracellular pathogen // Infect Immun. 2002. - Vol. 70. - P. 6926-6932.

32. Bergey's manual of systematic bacteriology. Vol. 1.: Williams & Wilkins, Baltimore, Md; In T. Bergan and J. R. Norris (ed.). Methods in Microbiology. - Vol. 11. Academic Press, London, U.K.; Kmety, E., H. Dikken. - 1993.

33. Beutler В. Endotoxin, toll-like receptor 4, and the afferent limb of innate immunity // Cur. Opin. Microbiol. 2000. - Vol. 3. - P. 23-28.

34. Bonney RJ, Wightman PD, Davies P, Sadowski SJ, Kuehl FAJ, Humes JL: Regulation of prostaglandin synthesis and of the selective release of lysosomal hydrolases by mouse peritoneal macrophages // Biochem J. Vol. 1978. - P. 433-442.

35. Boraston AB, Warren RAJ, Kilburn DG. /?-l,3-Glucan Binding by a Thermostable Carbohydrate-Binding Module from Thermotoga maritima // Biochem. -2001. Vol. 40. - P. 14679-14685.

36. Brendle J, Rogul M, Alexander AD. Deoxyribonucleic acid hybridization among selected leptospiral serotypes // Int. J. Syst. Bacteriol. 1974. - Vol. 24.-P. 205-214.

37. Brown GD, Gordon S. Immune recognition. A new receptor for beta-glucans // Nature. -2001. Vol. 413. - P. 36-37.

38. Brown GD, Taylor PR, Reid DM, Willment JA, Williams DL, Martinez-Pomares L, Wong SY, Gordon S. Dectin-1 is a major beta-glucan receptor on macrophages // J. Exp. Med. 2002. - Vol. 196. - P. 407-412.

39. Bulach DM, Kalambaheti T, de la Pena-Moctezuma A, Adler B. Functional analysis of genes in the rfb locus of Leptospira borgpetersenii serovar Hardjo subtype Hardjobovis // Infect Immun. 2000. - Vol. 68. - P. 3793-3798.

40. Bulach DM, Kalambaheti T, de la Pena-Moctezuma- A, Adler B. Lipopolysaccharide biosynthesis in Leptospira // J Mol Microbiol Biotechnol.- 2000. Vol. 2. - P. 375-380.

41. Bulach DM, Zuerner RL, Wilson P, et al. Genome reduction in Leptospira borgpetersenii reflects limited transmission potential // Proc Natl Acad Sci USA. 2006. - Vol. 103.-P. 14560-14564.

42. Chang Y-F, Chen C-S, Palaniappan RU, He H, McDonough SP, Barr SC, Yan W, Faisal SM, Pan M-J, Chang C-F. Immunogenicity of the recombinant leptospiral putative outer membrane proteins as vaccine candidates // Vaccine.- 2007. Vol.25. - P. 8190-8197.

43. Choy HA, Kelley MM, Chen TL, Moller AK, Matsunaga. J, Haake DA. -Physiological Osmotic Induction of Leptospira interrogans Adhesion: LigA and LigB Bind Extracellular Matrix Proteins and Fibrinogen // Infect Immun. -2007. Vol. 75. - P. 2441-2450.

44. Cinco M, Domenis R, Perticarari S, et al. Interaction of leptospires with murine microglial cells // The new microbiologica. 2006. - Vol. 29. - P. 193-199.

45. Croda J, Ramos JG, Matsunaga J. Leptospira Immunoglobulin-Like Proteins as a Serodiagnostic Marker for Acute Leptospirosis // J Clin Microbiol. 2007. -Vol. 45.-P. 1528-1534.

46. Cullen PA, Cordwell SJ, Bulach DM, et al. Global analysis of outer membrane proteins from Leptospira interrogans serovar Lai // Infect Immun. 2002. -Vol. 70.-P. 2311-2318.

47. Cullen PA, Haake DA, Adler B. Outer membrane proteins of pathogenic spirochetes // FEMS Microbiol Rev. 2004. - Vol. 28. - P. 291-318.

48. Cullen PA, Haake DA, Bulach DM, Zuerner RL, Adler B. LipL21 is a novel surface-exposed lipoprotein of pathogenic Leptospira species // Infect Immun. 2003. - Vol. 71. - P. 2414-2421.

49. Cullen PA, Xu X, Matsunaga J, Sanchez Y, Ко AI, Haake DA, Adler B. Surfaceome of Leptospira spp // Infect Immun. 2005. - Vol. 73. - P. 48534863.

50. Dai B, You Z, Chen Z, Yan H, Fang Z: Protection against leptospirosis by immunization with plasmid DNA encoding 33 kDa endoflagellin of L. interrogans serovar lai // Chin Med Sci J. 2000. - Vol. 15. - P. 14-19.

51. Dertzbaugh MT. Genetically engineered vaccines: an overview // Plasmid. -1998.-Vol. 39.-P. 100-13.

52. Di Carlo F.J., Fiore J.V. On the composition of zymosan // Science. 1958. -Vol. 127.-P. 756-757.

53. Di- Luzio NR, Williams DL, McNamee RB, Edwards BF, Kitahama A. Comparative tumor-inhibitory and anti-bacterial activity of soluble and particulate glucan // Int J Cancer. 1979. - Vol. 24. - P: 773-779.

54. DiLuzio N.R. Springer Semin Immunopathol. 1985. - Vol. 8. - P. 387-400.

55. Dunne, W. M. Jr. Bacterial adhesion: seen any good biofilms lately? // Clin. Microbiol. Rev. 2002. - Vol. 15: - P. 155-166.

56. Einhauer A, Schuster M, Wasserbauer E, Jungbauer A Expression and purification of homogenous proteins in Saccharomyces cerevisiae based on ubiquitin-FLAG fusion // Protein Expr Purif. 2002. - Vol'. 24. -P: 497-504.

57. Ellinghausen, HC, McCullough WG. Nutrition of Leptospira pomona and growth of 13 other serotypes: fractionation^ of oleic albumin complex- and a medium of bovine albumin and polysorbate 80. // Am. J. Vet. Res. 1965. -Vol» 26.-P. 45-51.

58. Evan GI, Lewis GK, Ramsay G, Bishop JM. Isolation of monoclonal antibodies specific for human c-myc proto-oncogene product // Mol Cell Biol. 1985. - Vol. 5. - P. 3610-3616.

59. Faine S, Adler B, Bolin C, Perolat P. Leptospira and leptospirosis, 2nd^ed. MedSci, Melbourne, Australia. 1999.

60. Faine S, Stallman ND. Amended descriptions of the genus Leptospira Noguchi 1917 and the species L.interrogans (Stimson 1907) Wenyon 1926 and L. biflexa (Wolbah and Binger 1914) Noguchi 1918 // Int. J. Syst. Bacteriol. -19821 Vol. 32. - Pi 461-463.

61. Faine, S., Adler В., Palit A. Chemical^ serological and biological properties of a serotype-specific polysaccharide antigen in Leptospira II Aust. J. Exp. Biol. Med. Sci. 1974. - Vol. 52. - P. 311-319.

62. Faisal SM, Yan WW, Chen C-S, Palaniappan RUM, McDonough SP, Chang Y-F. Evaluation of protective immunity of Leptospira immunoglobulin like protein A (LigA) DNA vaccine against challenge in hamsters // Vaccine. -2008. Vol. 26. - P. 277—287.

63. Fitzpatrick FW, DiCarlo FJ. Zymosan // Ann N Y Acad Sci. 1964. - Vol. 118.-P. 233-262.

64. Fletcher MA, Saliou P. Vaccines and infectious disease // EXS. 2000. - Vol. 89.-P. 69-88.

65. Franklin MJ, Ohman DE. Mutant analysis and cellular localization of the Algl, AlgJ, and AlgF proteins required for О acetylation of alginate in Pseudomonas aeruginosa II J. Bacterid. 2002. - Vol. 184. - P. 3000-3007.

66. Fuchs KP, Zverlov VV, Velikodvorskaya GA, Lottspeich F, Schwarz WH. Licl6A of Clostridium thermocellum, a non-cellulosomal, highly complex endo-b-l,3-glucanase bound to the outer cell surface // Microbiology. 2003. -Vol. 149.-P. 1021-1031.

67. Guerreiro H, Croda J, Flannery B, Mazel M, Matsunaga J, Reis M, Levett PN, Ко Al; Haake DA. Leptospiral proteins recognized during the humoral immune response to leptospirosis in humans. // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69.-P. 4958^1968.

68. Gurvich AE, Drizlikh GI. Use of antibodies on an insoluble support for specific detection of radioactive antigens // Nature. 1964. - Vol.203. - P.648-649.

69. Haake DA, Chao G, Zuerner RL, Barnett JK, Barnett D, Mazel M, Matsunaga J, Levett PN, Bolin С A. The leptospiral major outer membrane protein LipL32 is a lipoprotein expressed during mammalian infection // Infect. Immun. -2000. Vol. 68. - P. 2276-2285.

70. Haake DA, Matsunaga J. Characterization of the leptospiral outer membrane and description of three novel leptospiral membrane proteins // Infect Immun. 2002. - Vol. 70. - P. 4936^1945.

71. Haake DA, Mazel MK, McCoy AM, Milward F, Chao G, Matsunaga J. Leptospiral outer membrane proteins OmpLl and LipL41 exhibit synergistic immunoprotection // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67. - P. 6572-6582.

72. Haake DA, Suchard MA, Kelley MM, et al. Molecular evolution and mosaicism of leptospiral outer membrane proteins involves horizontal DNA transfer // J Bacteriol. 2004. - Vol. 186. - P. 2818-2828.

73. Haake DA. Spirochetal lipoproteins and pathogenesis // Microbiology. 2000. -Vol. 146.-P. 1491-1504.

74. Haapala DK, Rogul M, Evans LB, Alexander AD. Deoxyribonucleic acid base composition and homology studies of Leptospira II J. Bacteriol. 1969. - Vol. 98.-P. 421-428.

75. Hamburger ZA, Brown MS, Isberg RR. Bjorkman PJ. Crystal Structure of Invasin: A Bacterial Integrin-Binding Protein // Science. 1999. - Vol 286. -P. 291-295.

76. Han B, Hall F, Nimni M. Refolding of a recombinant collagen-targeted TGF-beta2 fusion protein expressed in Escherichia coli // Protein Expr Purif. 1997. -Vol. 11.-P. 169-178.

77. Hunnicutt DW, Kempf MJ, McBride MJ. Mutations in Flavobacterium johnsoniae gldF and gldG disrupt gliding motility and interfere with membrane localization of GldA // J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184. - P. 2370-2378.

78. Ilan L, Oded S. Cellulose-binding domains. Biotechnological applications // Biotechnology Advances. 2002. - Vol. 20. - P. 191-213.

79. Ito T, Yanagawa R. Leptospiral attachment to extracellular matrix of mouse fibroblast (L929) cells // Vet Microbiol. 1987. - Vol. 15. - P. 89-96.

80. Ito T, Yanagawa R. Leptospiral attachment to four structural components of extracellular matrix // Nippon Juigaku Zasshi. 1987. - Vol. 49. - P. 875-882.

81. Jager W, Rijkers GT. Solid-phase and bead-based cytokine immunoassay: A comparison // Methods. 2006. - Vol.38. - P.294-303.

82. Jamas S, Rha C, Sinskey AJ. Glucan compositions and process for preparation thereof. US Patent 4810646. March 7, 1989.

83. Jamas S, Rha C, Sinskey AJ. Glucan compositions and process for preparation thereof. US Patent 5028703. July 2, 1991.

84. Jamas S, Rha C, Sinskey AJ. Glucan compositions and process for preparation thereof. US Patent 5037972. August 6, 1991.

85. Jamas S, Rha CK, Sinskey AJ. Morphology of yeast cell wall as affected by genetic manipulation of P(l—>6) glycosidic linkage. // Biotechnol Bioeng. -1986. Vol. 28. - P. 769-784.

86. Janeway С A, Medzhitov R. Innate immune recognition // Ann. Rev. Immunol. 2002. - Vol.20. - P.197-216.

87. Johnson RC, Faine S. Leptospira. // N. R. Krieg and J. G. Holt (ed.), Bergey's manual of systematic bacteriology, vol. 1. Williams & Wilkins, Baltimore, Md. 1984. P. 62-67.

88. Johnson RC, Harris VG. Differentiation of pathogenic and saprophytic leptospires. 1. Growth at low temperatures // J. Bacteriol. 1967. - Vol. 94. -P. 27-31.

89. Jost BH, Adler B, Faine S. Experimental immunisation of hamsters with lipopolysaccharide antigens of Leptospira interrogans II J Med Microbiol. -1989.-Vol. 29.-P. 115-120.

90. Karpeisky MY, Senchenko VN, Dianova MV, Kanevsky V. Formation and properties of S-protein complex with S-peptide containing fusion protein // FEBS Lett. 1994. - Vol. 339. - P. 209-212.

91. Karsten H, Joanne C. QIAexpress detection and assay handbook // The QIAexpressionist. QIAGEN GmbH, QIAGEN Inc. - 2002.

92. Kelly В A, Carchman RA. The relationship between lysosomal enzyme release and protein phosphorylation in human monocytes stimulated by phorbol esters and opsonized zymosan // J Biol Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 17404-17411.

93. Klaasen HL, Molkenboer MJ, Vrijenhoek MP, Kaashoek MJ. Duration of immunity in dogs vaccinated against leptospirosis with a bivalent inactivated vaccine // Vet Microbiol. 2003. - Vol. 95. - P. 121-132.

94. Kmety E., Dikken H. Classification of the species Leptospira interrogans. 1993.

95. Koizumi N, Watanabe H. Leptospiral immunoglobulin-like proteins elicit protective immunity // Vaccine. 2004. - Vol. 22. - P. 1545-1552.

96. Kraus J, Franz O. Fungal" cell walls and immune response / Ed. J.P. Latge 1991. Berlin; Ser H53. P. 431-444

97. Kulicke WM, Lettau AJ, Thielking H. Correlation between immunological activity, molar mass, and molecular structure of different (1— >3)-beta-D-glucans // Carbohydr Res. 1997. - Vol. 297. - P. 135-143.

98. Kunimoto T, Baba H, Nitta K. Antitumor polysaccharide-induced tumor-regressing factor in the serum of tumor-bearing mice: purification and characterization // J Biol. Response Modif. 1986. - Vol. 5. - P. 225-235.

99. Laemmli UK. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature. 1970. - Vol. 227. - P. 680-685.

100. Lamothe GT, Jolly L, Mollet B, Stingele F. Genetic and biochemical characterization of exopolysaccharide biosynthesis by Lactobacillus delbrueckii subsp. bulgaricus. // Arch. Microbiol. 2002. - Vol. 178. - P. 218228.

101. Lee SH, Kim S, Park SC, Kim MJ. Cytotoxic activities of Leptospira interrogans hemolysin SphH as a pore-forming protein on mammalian cells // Infect Immun. 2002. - Vol. 70. - P. 315-322.

102. Lee SW, Cooksey DA. Genes expressed in Pseudomonas putida during colonization of a plant-pathogenic fungus // Appl Environ Microbiol. 2000. -Vol. 66.-P. 2764-2772.

103. Letocart M, Boerlin P, Boerlin-Petzold F, Goudet J, Baranton G, Perolat P. Genetic structure of the genus Leptospira by mutlilocus enzyme electrophoresis // Int. J. Syst. Bacteriol. 1999. - Vol. 49. - P. 231-238.

104. Levett PN. Leptospirosis // Clin Microbiol Rev. 2001. - Vol. 14. - P. 296-326.

105. Liljeqvist S, Stahl S. Production of recombinant subunit vaccines: protein immunogens, live delivery systems and nucleic acid vaccines // J Biotechnol. 1999. - Vol. 73. - P. 1-33.

106. Matsunaga J, Sanchez Y, Xu X, Haake DA. Osmolarity a key environmental signal controlling expression of leptospiral proteins LigA and LigB and the extracellular release of LigA // Infect Immun. 2005. - Vol. 73. - P. 70-78.

107. Matsunaga J, Young ТА, Barnett JK, Barnett D, Bolin CA, Haake DA: Novel 45-kilodalton leptospiral protein that is processed to a 31-kilodaltongrowth-phase-regulated peripheral membrane protein // Infect Immun. 2002. -Vol. 70.-P. 323-334.

108. Matsuo K, Isogai E, Araki Y: Control of immunologically cross-reactive leptospiral infection by administration of lipopolysaccharides from a nonpathogenic strain of Leptospira biflexa II Microbiol Immunol. 2000: -Vol. 44.-P. 887-890.

109. McBride AJ, Athanazio DA, Reis MG, Ко Al. Leptospirosis // Curr Opin Infect Dis. 2005. - Vol. 18. - P. 376-386.

110. McCormick M, Berg J. Purification and S-Tag detection of CBD fusion proteins // innovations. 1997. - Vol. 7. - P. 12-15.

111. Merien F, Baranton G, Perolat P. Invasion of Vero cells and induction of apoptosis in macrophages by pathogenic Leptospira interrogans, are correlated with virulence // Infect Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 729—38!.

112. Merien F, Truccolo J> Baranton1 G, Perolat P. Identification of a 36-kDa fibronectin-binding protein expressed by a virulent variant of Leptospira interrogans serovar Icterohaemorrhagiae // FEMS Microbiol Lett. 2000. -Vol! 185.-P. 17-22.

113. Midwinter, A, Faine S, Adler B: Vaccination of mice with lipopolysaccharide (LPS) and LPS-derived immuno-conjugates from Leptospira interrogans // J Med Microbiol. 1990. - Vol. 33. - P. 199-204.

114. Midwinter A, Vinh T, Faine S, Adler B: Characterization of an antigenic oligosaccharide from Leptospira interrogans serovar pomona and its role in immunity // Infect Immun. 1994. - Vol. 62. - P. 5477-5482.

115. Miura T, Ohno N, Miura NN, Adachi Y, Shimada S, Yadomae T. Antigen-specific response of murine immune system toward a yeast (3-glucan preparation, zymosan // FEMS Immunol. Med.Microbiol. — 1999. — Vol. 24. — P. 131-139

116. Nahori MA, Fournie-Amazouz E, Que-Gewirth NS, Balloy V, Chignard M, Raetz CR, Saint Girons I, Werts C. Differential TLR recognition ofleptospiral lipid A and lipopolysaccharide in murine and human cells // J Immunol. -2005. Vol. 175. - P. 6022-6031.

117. Naiman BM, Alt D, Bolin CA, Zuerner R, Baldwin CL. Protective killed Leptospira borgpetersenii vaccine induces potent Thl immunity comprising responses by CD4 and gammadelta T lymphocytes // Infect Immun. 2001. -Vol. 69.-P. 7550-7558.

118. Nally JE, Artiushin S, Timoney JF. Molecular characterization of thermoinduced immunogenic proteins Qlp42 and Hspl5 of Leptospira interrogans // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69. - P. 7616-7624.

119. Nally JE, Chow E, Fishbein MC, Blanco DR, Lovett MA. Changes in lipopolysaccharide О antigen distinguish acute versus chronic Leptospira interrogans infections // Infect Immun. 2005. - Vol. 73. - P. 3251-3260.

120. Nally JE, Whitelegge JP, Bassilian S, Blanco DR, Lovett MA. Characterization of the outer membrane proteome of Leptospira interrogans expressed during acute lethal infection // Infect. Immun. 2007. - Vol. 75. - P. 766-773.

121. Nascimento AL, Ко Al, Martins EA. L. et al. Comparative Genomics of Two Leptospira interrogans Serovars Reveals Novel Insights into Physiology and Pathogenesis // J Bacteriol. 2004. - Vol. 186. - P. 2164-2172.

122. Nascimento AL, Verjоvski-Almeida S, Van Sluys MA. et al. Genome features of Leptospira interrogans serovar Copenhageni // Braz J Med Biol Res. 2004. - Vol. 37. - P. 459-478.

123. Nauseef WM, Root RK, Newman SL, Malech HL: Inhibition of zymosan activation of human neutrophil oxidative metabolism by a mouse monoclonal antibody // Blood. 1983. - Vol. 62. - P. 635-644.

124. Nelson KE, Paulsen IT, Heidelberg JF, Fraser CM. Status of genome projects for nonpathogenic bacteria and archaea // Nat Biotechnol. 2000. -Vol. 18.-P. 1049-1054.

125. Nygren PA, Stahl S, Uhlen M. Engineering proteins to facilitate bioprocessing // Trends Biotechnol. 1994.1- Vol. 2. - P. 184-188.

126. Ozinsky A, Smith KD, Hume D, Underhill DM. Co-operative induction of pro-inflammatory signaling by Toll-like receptors // J Endotoxin Res. -2000. Vol. 6. - P. 393-396.

127. Palaniappan RU, Chang YF, Jusuf SS, et al. Cloning and molecular characterization of an immunogenic LigA protein» of Leptospira interrogans // Infect Immun. 2002. - Vol. 70. - P. 5924-5930.

128. Palaniappan RU, Ramanujam S, Chang Y-F. Leptospirosis: pathogenesis, immunity, and diagnosis // Curr Opin Infect Dis. 2007. - Vol. 20.-P. 284-292.

129. Palit A, Haylock LM, Cox JC. Storage of pathogenic leptospires in liquid nitrogen // J. Appl. Bacteriol. 1986. - Vol. 61. - P. 407-411.

130. Pasare C, Medzhitov R. Toll-like receptors and acquired immunity. // Semin. Immunol. 2004. - Vol. 16: - P. 23-26.

131. Paster В J, Dewhirst FE, Weisburg WG, Tordoff LA, Fraser GJ, Hespell RB, Stanton ТВ, Zablen L, Mandelco L, Woese CR. Phylogenetic analysis of the spirochetes // J. Bacteriol. 1991. - Vol. 173. - P. 6101-6109.

132. Patchen ML, D'Alesandro MM, Brook J. et al. // J Leukocyte Biol. -1987,-Vol. 42.-P. 95-105.

133. Patchen ML, MacVitte TJ, Brook J. et al. 10th Intern Congr Reticuloendothelial Soc/ Japan, Sept 2-7. 1984. II J Leukocyte Biol. 1984. -Vol. 36.-P. 228-229.

134. Picardeau M, Bulach DM, Bouchier C, et al. Genome sequence of the saprophyte Leptospira biflexa provides insights into the evolution of Leptospira and the pathogenesis of leptospirosis // PLoS One 2008. 3:el607

135. Pillemer L, Ecker EE. Anticomplementary factor in fresh yeast // J: Biol. Chem. 1941. - Vol. 137. - P. 139-142.

136. Porath J, Carlsson J, Olsson I, Belfrage G. Metal chelate affinity chromatography, a new approach to protein fractionation // Nature. 1975. -Vol. 258.-P. 598-599.

137. Postic D, Riquelme-Sertour N, Merien F, Perolat P, Baranton G. Interest of partial 16S rDNA gene sequences to resolve heterogeneities between Leptospira collections: application to L. meyeri // Res. Microbiol. 2000. -Vol. 151.-P. 333-341.

138. Preston A, Parkhill J, Maskell DJ. The bordetellae: lessons from genomics. // Nat Rev Microbiol. 2004. - Vol. 2. - P. 379-390.

139. Priya CG, Bhavani K, Rathinam SR, Muthukkaruppan VR: Identification and evaluation of LPS antigen for serodiagnosis of uveitis associated with leptospirosis // J Med Microbiol. 2003. - Vol. 52. - P. 667-673.

140. Rabinovich ML. // Materials of Soviet-Finland Seminar on Bioconversion of Plant Raw Materials by Microorganisms. Institute of Biochemistry and Physiology of Microorganisms. Pushchino. 1984. - P. 31—48.

141. Ramadass PD, Jarvis BD, Corner RJ, Cinco M, Marshall RB. DNA relatedness among strains of Leptospira biflexa II Int. J. Syst. Bacteriol. -1990. Vol. 40. - P. 231-235.

142. Ramadass PB. Jarvis DW, Corner RJ, Penny D, Marshall RB. Genetic characterization of pathogenic Leptospira species by DNA hybridization // Int. J. Syst. Bacteriol. 1992. - Vol. 42. - P. 215-219.

143. Ramesh RH, Tharanathan RN. Carbohydrates the renewable raw materials of high biotechnological value // Crit Rev Biotech. - 2003. - Vol. 23. -P. 149-173.

144. Ren SX, Fu G, Jiang XG. et al. Unique physiological and pathogenic features of Leptospira interrogans revealed by whole genome sequencing // Nature. - 2003. - Vol. 422. - P. 888-893.

145. Roubin R, Mencia Huerta JM, Landes A, Benveniste J. Biosynthesis of platelet-activating factor (PAF-acether). IV. Impairment of acetyl-transferase activity in thioglycollate-elicited mouse macrophages // J Immunol. 1982. -Vol. 129.-P. 809-813.

146. Saier M, Garcia-Lara J. The spirochetes: molecular and cellular biology. Wymondham, UK: Horizon Scientific Press. 2001.

147. Sambrook JE, Fritsch EF, Maniatis T. Molecular Cloning: a Laboratory Manual // Cold Spring Harbor Laboratory Press. Cold Spring Harbor, New York. 1989. lst.2nd,3th v's.

148. Sanguedolce MV, Capo C, Bongrand P, Mege JL. Zymosan-stimulated tumor necrosis factor-a production by human monocytes. Down-modulation by phorbol ester // J Immunol. 1992. - Vol. 148. - P. 2229-2236.

149. Sasaki T, Hohenester E, Gohring W, Timpl R. Crystal structure and mapping by site-directed mutagenesis of the collagen-binding epitope of an activated form of ВМ-40/SPARC/osteonectin // EMBO Journal. 1998. - Vol. 17.-P. 1625-1634.

150. Schmidt TG, Koepke J, Frank R, Skerra A. Molecular interaction between the Strep-tag affinity peptide and its cognate target, Streptavidin< // J Mol Biol. 1996. - Vol. 255. - P. 753-766.

151. Schmidot TG, Skerra A. The random peptide library assisted engineering of a C-terminal affinity peptide, useful for the detection and purification of a functional Ig Fv fragment // Protein Eng. 1993. - Vol. 6: - P. 109-122.

152. Schroder NW, Eckert J, Stubs G, Schumann RR. Immune responses-induced^ by spirochetal outer membrane lipoproteins and' glycolipids // Immunobiology. 2008. - Vol. 213. - P. 329-340.

153. Seixas FK, da Silva EF, Hartwig DD et al. Recombinant Mycobacterium bovis BCG expressing the LipL32 antigen of Leptospira interrogans protects hamsters from challenge // Vaccine. 2007. - Vol. 26. - P. 88—95.

154. Shang ES, Exner MM; Summers ТА, Martinich C, Champion CI, Hancock RE, Haake DA. The rare outer membrane protein, OmpLl, of pathogenic Leptospira species is a heat-modifiable porin // Infect. Immun. -1995.-Vol. 63.-P. 3174-3181.

155. Sietsma JH, Wessels JG. Solubility of (1 leads to 3)-beta-D/(l leads to 6)-beta-D-glucan in fungal walls: importance of presumed' linkage between glucan and chitin // J of Gen Microbiol. 1981'. - Vol. 125. - P. 209-212.

156. Silhavy TJ, ShumanHA, Beckwith.J, Schwartz M. Use of gene fusions to study outer, membrane protein localization in Escherichia coli // Proc Natl Acad Sci USA. 1977. - Vol. 74. - P. 5411-5415.

157. Smith. JC, Derbyshire RB, Cook E, Dunthorne L, Viney J, Brewer SJ; Sassenfeld HM, Bell LD. Chemical'synthesis and cloning of-a poly(arginine)-coding gene fragment designed to aid polypeptide purification //Gene. 1984. -Vol. 32.-P. 321-327.

158. Sonrier C, Branger C, Michel V, Ruvoen-Clouet N, Ganiere JP, Andre-Fontaine G. Evidence of cross-protection wiibm Leptospira interrogans in'an experimental model. // Vaccine. 2000. - Vol: 19. - P: 86-94.

159. Springer T. A. Folding of the N-terminal, ligand-binding region, of integrin alpha-subunits into a beta-propeller domain // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - Vol. 94. - P. 65-72.

160. Studier FW, Rosenberg AH, Dunn JJ, Dubendorff JW, Fuerst TR, Niles EG, Moss B: Use of T7 RNA polymerase to direct expression of genes // Methods: Enzymol: Companion Methods. 1990: - Vol. 185. - P. 60-89.

161. Suga T, Maeda YY, UshidaH, Rokutanda M, Chihara G. Macrophage-mediated acute-phase transport protein production induced by lentinan // Int J Immunopharmacol. 1986. - Vol. 8. - P. 691-699.

162. Takagi J, Asai H, Saito Yu. A collagen/gelatin-binding decapeptide derived from bovine propolypeptide of von Willebrand factor // Biochem. -1992. Vol. 31.-P. 8530-8534.

163. Takeda K, Akura S. Toll-like receptors in innate immunity // Int. Immunol. 2005. - Vol. 17. - P. 1-14.

164. Terpe K. Overview of tag protein fusions: from molecular and biochemical fundamentals to commercial systems // Appl Microbiol Biotechnol. 2003. Vol. 60. - P. 523-33.

165. Tomme P, Boraston A, McLean B, Kormos J, Creagh AL, Sturch K, Gilkes NR, Haynes CA, Warren RA, Kilburn DG Characterization and affinity applications of cellulose-binding domains // J Chromatogr B. 1998. - Vol. 715. P. 283-296.

166. Towbin H, Staehelin T, Gordon J. Electrophoretic transfer of proteins from polyacrylamide gels to nitrocellulose sheets: Procedure and some applications // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1979. - Vol. 76. - P. 4350-4354.

167. Trueba G, Zapata S, Madrid K, Cullen P, Haake D. Cell aggregation: a mechanism of pathogenic Leptospira to survive in fresh water // Int Microbiol. -2004.-Vol. 7.-P. 35-40.

168. Turner LH. Leptospirosis Ш. Maintenance, isolation and demonstration of leptospires // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1970. - Vol. 64. - P. 623646.

169. Underhill DM, Ozinsky A, Hajjar AM et al. The Toll-like receptor 2 is recruited to macrophage phagosomes and discriminates between pathogens // Nature. 1999. - Vol. 401. - P. 811-815.

170. Underhill DM. Macrophage recognition of zymosan particles // J Endotoxin Res. 2003. - Vol. 9. - P. 176-180.

171. Verma A, Artiushin S, Matsunaga J, et al. LruA and LruB, novel lipoproteins of pathogenic Leptospira interrogans associated with equine recurrent uveitis // Infect Immun. 2005. - Vol. 73. - P. 7259-7266.

172. Verma A, Hellwage J, Artiushin S, et al. LfhA, a novel factor H-binding protein of Leptospira interrogans // Infect Immun. 2006. - Vol. 74. - P. 2659-2666.

173. Vernel-Pauillac F, Merien F. Proinflammatory and immunomodulatory cytokine mRNA time course profiles in hamsters infected with a virulent variant of Leptospira interrogans // Infect Immun. 2006. - Vol. 74. - P. 4172^179.

174. Vinh T, Adler B, Faine S. Ultra structure and chemical composition of lipopolysaccharide extracted from Leptospira interrogans serovar Copenhageni // J GenMicrobiol. 1986. - Vol. 132. - P. 103-109.

175. Vinh TU, Shi MH, Adler B, Faine S. Characterization and taxonomic significance of lipopolysaccharides of Leptospira interrogans serovar hardjo // J Gen Microbiol. 1989. - Vol. 135. - P. 2663-2673.

176. Volman JJ, Ramakers JD, Plat J. Dietary modulation of immune function by (3-glucans // Physiology & Behavior. 2008. - Vol. 94. - P. 276-284.

177. Waitkins S. Maintenance of Leptospira, // In В. E. Kirsop and J. J. S. Snell (ed.), Maintenance of microorganisms. Academic Press, London, U.K. 1984.-P. 57-62.

178. Wang Z, Jin L, W^grzyn A. Leptospirosis vaccines. Review. Microbial Cell Factories 2007, 6:39. BioMed Central. http://www.micr0bialcellfact0ries.c0m/c0ntent/6/l/39

179. Werts C, Tapping RI, Mathison JC, et al. Leptospiral lipopolysaccharide activates cells through a TLR2-dependent mechanism // Nat Immunol. 2001. -Vol. 2.-P. 346-352.

180. Whitfield С, Roberts IS. Structure, assembly and regulation of expression of capsules in Escherichia coli // Mol. Microbiol. 1999. - Vol. 31. -P. 1307-1319.

181. Williams DL. Overview of (1—»3)-beta-D-glucan immunobiology // Med Inflamm. 1997. - Vol. 6. - P. 247-50.

182. Xu Z, Bae W, Mulchandani A, Mehra RK, Chen W. Heavy metal removal by novel CBD-EC20 sorbents immobilized on cellulose // Biomacromolecules. 2002. Vol. 3. - P. 462-465.

183. Yang CW, Hung CC, Wu MS, et al. Toll-like receptor 2 mediates early inflammation by leptospiral outer membrane proteins in proximal tubule cells // Kidney Int. 2006. - Vol. 69. - P. 815-822.

184. Yang CW, Wu MS, Pan MJ, et al. The Leptospira outer membrane protein LipL32 induces tubulointerstitial nephritis-mediated gene expression in mouse proximal tubule cells // J Am Soc Nephrol. 2002. - Vol. 13. - P. 2037-2045.

185. Young SH, Ye J, Frazer DG, Shi X, Castranova V. Molecular mechanism of tumor necrosis factor-alpha production in 1—»3-beta-glucan (zymosan)- activated macrophages // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276. - P. 20781-20787.