Разработка систем клонирования, обеспечивающих продукцию вирусных антигенов в дрожжах saccharomyces cerevisiae тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Грудинин, Михаил Павлович

• Грудинин, Михаил Павлович
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Грудинин, Михаил Павлович

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Экспрессия вирусных генов, кодирующих поверхностные и коровые белки, в гетерологичных системах. Ю

2.2. Вирусо-подобные частицы - источник вирусных антигенов и основа высокоспецифичных вакцин нового поколения.

2.3. Ту-ретротранспозоны - аналоги провирусов ретровирусов.

2.3.1. Семейства Ту-ретротранспозонов: сходство и различие.

2.3.2. Генетическая организация Ту 1-ретротранспозона.

2.3.3. Стратегия и продукты экспрессии Ту-ретротранспозона.

2.3.4. Механизмы транспозиции Ту 1-ретротранспозона.

2.3.5. Транскрипция Ту-ретротранспозона.

2.3.6. Формирование вирусоподобных частиц.

2.4. Конструирование и использование дрожжевых векторов, обеспечивающих экспрессию гена структурного белка Ту 1 -ретротранспозона.

2.4.1. Принцип конструирования плазмид на основе генов Ту 1 -ретротранспозонов.

2.4.2. Использование гена, кодирующего структурный белок pi Tyl-ретротранспозона дрожжей для конструирования векторов. 3g

2.4.3. Экспрессия гибридных генов, кодирующих химерные белки, состоя-щие из фрагмента белка pi и антигена, в дрожжевых клетках.

3. Материалы и методы.

4. Результаты и обсуждение.

4.1. Создание дрожжевой системы экспрессии, секретирующей вирусные антигены в культуральную среду.

4.1.1. Создание содержащих фрагмент gag-pol генома ВИЧ-1 рекомби-нантных плазмид, определяющих секрецию вирусных антигенов клетками S. cerevisiae.

4.1.2. Анализ экспрессии фрагментов генома ВИЧ-1 дрожжевыми клетками.

4.1.3. Частичная очистка антигенов "gag-pol" из культуральной жидкости.

4.1.4. Иммунологические свойства секретируемых "gag-pol" антигенов.

4.1.4.1. Тестирование антигенных свойств продуктов гена gag-pol, секретируе- мых клетками S. cerevisiae, на охарактеризованной панели сывороток.

4.1.4.2. Сравнение антигенных и иммуногенных свойств полученного нами антигена "gag-pol" с рекомбинантными белками ВИЧ-1, полученными из различных источников.

4.2. Создание дрожжевой системы экспрессии антигенных детерминант в виде гибридов с фрагментом структурного белка pi Ту1 ретротранспозона дрожжей.

4.2.1. Определение нуклеотидной последовательности и анализ вторичной структуры РНК гена TYA ретротранспозона дрожжей S. cerevisiae Ту 1-D15.

4.2.2. Конструирование дрожжевых векторов, определяющих экспрессию фрагмента гена TYA. g

4.2.3. Анализ экспрессии полученных конструкций.

4.2.4. Конструирование гибридного гена ATYA-AgB^.

4.2.4.1. Клонирование гена антигена вируса гепатита Дельта.

4.2.4.2. Анализ экспрессии гибридного гена ATYA-AgBITJ.

4.2.5. Фракционирование клеточных лизатов, содержащих рекомбинантные белки в сахарозном градиенте.

4.2.6. Изучение специфичности антигенных свойств химерного белка р 1 -AgBrTl.

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка систем клонирования, обеспечивающих продукцию вирусных антигенов в дрожжах saccharomyces cerevisiae»

Актуальность темы

Одной из задач генной инженерии является получение эффективных продуцентов белков, необходимых для медицинских, промышленных или исследовательских целей, выделение которых из природных источников затруднено. При клонировании генов человека, животных и их вирусов, предпочтительно использование эукариотических систем, способных осуществлять правильный процессинг мРНК и посттрансляционную модификацию белков. Однако сложность и недостаточная изученность подобных систем пока препятствует созданию промышленных продуцентов на основе высших эукариот.

Дрожжи, как низшие одноклеточные эукариоты, способны осуществлять гликозилирование, ацилирование и протеолитический процессинг эукариотических белков. В связи с этим широко используются дрожжи-сахаромицеты, хорошо изученные, безвредные для организма человека и освоенные промышленностью. Кроме экспрессии в цитоплазме, сахаромицеты способны к секреции гетерологичных белков в культуральную среду, что сопряжено с правильным формированием дисульфидных связей и гликозилированием, способствующими сохранению биологической активности рекомбинантного продукта. Помимо этого, секреция рекомбинантного продукта снижает его деградацию под действием клеточных ферментов и способствует решению проблемы токсичности чужеродного белка для клетки-продуцента. Кроме того, очистка продукта значительно облегчается при его секреции.

Получение сахаромицетов - продуцентов секретирующихся актуальных вирусных белков является перспективным направлением генно-инженерных исследований.

Помимо сохранения биологической активности рекомбинантных продуктов, существует проблема, связанная с недостаточной иммуногенностью белков и/или их фрагментов, синтезируемых в гетерологичных системах.

Идеальным иммуногеном является полимер, состоящий из множества антигенных детерминант в составе высокомолекулярного переносчика, получить который химическим путем крайне сложно. При этом во многих случаях, предпочтительной является конформация белка, напоминающая естественную конформацию на поверхности инфекционного агента. Эти задачи могут быть решены путем конструирования гибридных генов, кодирующих в составе одной молекулы различные антигенные эпитопы. Лучшим носителем для подобных полиантигенов являются белки, способные к самосборке с образованием вирусоподобных частиц (ВПЧ) разных размеров, например коровые или поверхностные белки вирусов и т.п. Такие многосоставные гибридные белки, сохраняя антигенные и иммуногенные свойства исходного белка-носителя, приобретают антигенные и иммуногенные свойства внедренных эпитопов. В отличие от живых вирусных вакцин, ВПЧ не инфекционны и не способны реплицироваться в хозяйской клетке.

Ретротранспозоны являются частью генома многих, если не всех, эукариотических организмов и по своей организации подобны дефектным ретровирусам. Структурные белки ретротранспозонов способны формировать ВПЧ, похожие на нуклеокапсиды, образуемые белками gag ретровирусов. Это замечательное свойство используется в настоящее время для конструирования систем презентации различных вирусных антигенов при создании вакцин, а также для получения эукариотических белков и вирусных антигенов в гетерологичных системах в препаративных количествах. Разработка векторов для получения гибридных ВПЧ на базе ретротранспозонов дрожжей-сахаромицетов является одним из наиболее прогрессивных направлений генной инженерии. Тот факт, что полученные на их основе продукты синтезируются в системах, не связанных с млекопитающими, и не содержат их патогенов, особенно актуален в плане разработке генно-инженерных вакцинных препаратов.

Получение рекомбинантных белков, сохраняющих свою биологическую активность и/или антигенные и иммуногенные свойства, перспективно как в плане создания новых диагностических препаратов, так и разработки генно-инженерных вакцин. Однако создание промышленных продуцентов, обладающих выше перечисленными преимуществами остается делом будущего и изучение различных аспектов генно-инженерных систем является крайне актуальным.

Цели и задачи исследования.

Цель настоящей работы состояла в создании дрожжевых систем экспрессии вирусных антигенов и/или антигенных детерминант, обладающих преимуществами в плане разработки диагностических и/или вакцинных препаратов, а именно: секретирующих продукты в культуральную среду или способных к формированию гибридных ВПЧ; а также исследование иммунологических свойств полученных рекомбинантных антигенов.

В соответствии с этой целью были сформированы следующие задачи:

1. Осуществить генно-инженерное конструирование содержащих фрагмент гена gag ВИЧ-1 рекомбинантных плазмид, определяющих секрецию вирусных антигенов клетками дрожжей-сахаромицетов.

2. Получить дрожжевые клетки — продуценты секретируемых вирусных антигенов, провести анализ экспрессии фрагмента генома ВИЧ-1 в дрожжевых клетках и изучить иммунологические свойства синтезируемых рекомбинантных продуктов.

3. Осуществить генно-инженерное конструирование рекомбинантных плазмид, определяющих экспрессию в дрожжевых клетках гибридных генов, кодирующих химерный белок, состоящий из фрагмента структурного белка pi (gag) Tyl-ретротранспозона дрожжей и вирусного антигена.

4. Провести анализ экспрессии гибридных генов в дрожжевых клетках и изучить иммунологические свойства синтезируемого ими химерного белка.

Научная новизна работы.

В настоящее время, для экспрессионного клонирования используются различные системы (E.coli, дрожжи, эукариотические клетки). Вместе с тем, в большинстве случаев при клонировании вирусных антигенов возникают определенные трудности. Эти трудности связаны с тем, что не во всех системах вектор-реципиент возможно получение вирусных белков, близких по своим антигенным свойствам к нативным белкам.

Лимитирующими факторами в некоторых случаях являются необходимость гликозилирования, самосборки, а также капсидной организации клонируемых антигенов. Поэтому, в данной работе предпринята попытка решить эти ключевые проблемы, используя секреторный путь дрожжевой системы и способность структурного белка pi образовывать вирусоподобные структуры. Нами показана возможность секреции антигенно- и иммуногенноактивных белков, кодируемых геном gag ВИЧ-1 в культуральную среду. Впервые создана система дрожжевой экспрессии антигена вируса гепатита Дельта в виде гибридов с фрагментом структурного белка pi Tyl-ретротранспозона дрожжей, а также изучены антигенные свойства полученных химерных белков.

Практическая значимость работы.

Потребность в вирусных антигенах исключительно велика. В первую очередь это диктуется спросом на разработку диагностических систем. В последнее десятилетие все больше и больше обращают на себя внимание рекомбинантные противовирусные вакцины. При создании рекомбинантных вирусных антигенов в первую очередь учитывается безопасность их производства по сравнению с цельным вирусом или даже, так называемыми, расщепленными вирионами. Особенно это относится к таким вирусам, как ВИЧ, вирусы гепатита и т.д. Учитывая, что рекомбинантные вирусные антигены могут быть легко модифицированы сайт-специфическим мутагенезом, могут подвергаться слиянию с суперантигенами и факторами стимуляции иммунного ответа, наличие клонированного рекомбинантного антигена создает возможности целенаправленного конструирования нового поколения рекомбинантных вакцин. Результаты работы могут быть использованы в практических разработках по созданию эффективных систем гетерологической экспрессии в дрожжах.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Генно-инженерное конструирование дрожжевых рекомбинантных плазмид, содержащих фрагмент gag или gag-pol генома ВИЧ-1 в рамке считывания лидерного пептида дрожжевого киллерного токсина под контролем индуцибельного промотора GAL-CYC позволяет обеспечить контролируемую секрецию вирусных белков.

2. Конструирование плазмиды YEpsec/gag-pol и продуцента DII-38 (YEpsec/gag-pol) обеспечивает секреция белков ВИЧ-1 в культуральную среду, что сопровождается накоплением свободного и протеолитически стабильного белка р24 -продукта гена gag.

3. Секретируемые в разработанной системе вирусные антигены - продукты фрагмента gag-pol генома ВИЧ-1 обладают иммуногенностыо и рядом антигенных свойств, соответствующих свойствам природных структурных белков ВИЧ-1, и могут быть использованы для создания специфичных диагностических систем.

4. Генно-инженерное конструирование челночного вектора, предназначенного для получения гибридных генов на основе фрагмента гена структурного белка Tyl-ретротранспозона дрожжей S. cerevisiae под контролем индуцибельного GAL-CYC промотора, позволяет получать вирусные антигены в различных молекулярных формах.

Апробация работы.

Материалы диссертации были представлены на 17 Международном конгрессе по химиотерапии, Берлин, 1991 г., на Международной конференции "Медицинская биотехнология, иммунизация и СПИД, Ленинград, 1991 г., и на 5-ой Международной конференции "СПИД, рак и родственные болезни", Санкт-Петербург, 1997 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения; обзора литературы, включающего четыре главы; результатов собственных исследований, включающих разделы "Материалы и методы" и "Результаты и обсуждение", изложенные в двух главах; выводы и список литературы. Работа изложена на 127 страницах машинописного текста, содержит 4 таблицы, 36 рисунков; список литературы содержит 224 наименования на русском и английском языках.

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Грудинин, Михаил Павлович

Выводы:

1. Создана генно-инженерная конструкция, обеспечивающая направленную секрецию рекомбинантных белков "gag-pol" ВИЧ-1 клетками S. cerevisiae, сопровождающуюся специфическим протеолитическим процессингом и накоплением р24 антигена.

2. Полученные данные позволяют утверждать, что рекомбинантные белки, секретируемые штаммом DII-38(YEpsec/gag-pol) S. cerevisiae обладают рядом антигенных свойств, соответствующих природным структурным белкам ВИЧ-1, и с высокой специфичностью взаимодействуют с антителами ВИЧ-1-серопозитивных сывороток крови человека и с антителами сыворотки крови кролика, полученной при иммунизации животных природным ВИЧ.

3. Комплексный антиген "gag-pol", секретируемый дрожжевыми клетками штамма DII-38 (YEpsec/gag-pol) обладает иммуногенностью и способен индуцировать у животных синтез специфических антител определенного спектра. Об этом свидетельствуют данные о реакции антител иммунных кроличьих сывороток против gag-pol из S. cerevisiae с белками природного ВИЧ-1. Перекрестный анализ иммунологических свойств белков сходной конструкции, полученных в разных системах экспрессии, позволяет сделать вывод о степени сходства и различия белков такой конструкции.

4. Совокупность полученных нами сведений об иммунологических свойствах рекомбинантного белка "gag-pol", секретируемого штаммом DII-38 (YEpsec/gag-pol) S. cerevisiae подтверждает принципиальную возможность использования конструкций данного типа для получения вирусных антигенов и создания на их основе диагностических тест-систем.

5. Проведен анализ нуклеотидной последовательности фрагмента генома ретротранспозона Tyl-D15, содержащего последовательность З'-конца левого длинного прямого повтора, кодирующую сигнал инициации трансляции гена TYA, полноразмерный ген TYA, и 84 первых нуклеотидов гена TYB.

6. Сконструирован дрожжевой вектор, определяющий эффективную экспрессию фрагмента гена структурного белка pi (gag) Ту 1-ретротранспозона дрожжей под контролем индуцибельного промотора GAL-CYC, позволяющий клонировать любые белки или их фрагменты с получением химерных продуктов экспрессии.

7. На основе разработанной системы получен штамм-продуцент DII-38 (YEpgal420/AgBI7D гибридного белка pl-AgBr^ и свободного антигена ВГД. Химерный белок pl-AgB^, синтезируемый штаммом DII-38 (YEpgal420/AgB^), сохраняет антигенные свойства природного антигена ВГД и может быть использован для обнаружения суммарных aHTH-AgB^ в сыворотке крови.

Работы выполнялась в рамках проекта: «Конструирование рекомбинантных дрожжевых штаммов-продуцентов, секретирующих антигены вируса иммунодефицита человека, а также антигенов в составе дрожжевых вирусоподобных частиц» - Комитет при призидиуме РАМН по проблемам СПИД - 1990-1992 г. Совместный грант с лабораторией генно-инженерных препаратов института Вирусологии им.Д.И.Ивановского.

Публикации:

1. Равков Е.В., Грудинин М.П., Киселев О.И. Конструирование дрожжевых плазмид, несущих ген белка pi Ту-элементов. В сб.: Молекулярная вирусология и медицинская биотехнология., 1990, Л., стр. 83-87.

2. Денисова Г.Ф., Лидеман Л.Ф., Гибадулин Р.А., Грудинин М.П., Равков Е.В., Карасева Н.Г., Киселев О.И. Дрожжевые штаммы Saccharomyces cerevisiae, экспрессирующие антигены вируса иммунодефицита человека. Международная конференция по медицинской биотехнологии, иммунизации и СПИД. 1991, Л., S 1-6.

3. Ravkov E.V., Ryzhova E.V., Grudinin М.Р., Kiselev O.I. The usage of Ту element of yeast Saccharomyces cerevisiae in the immunological purpose. 1991, 17th International congress of chemotherapy, Berlin, 1483.

4. Трушинская Г.Н., Грудинин М.П., Денисова Г.Ф., Гибадулин Р.А. Антигенные и иммуногенные свойства рекомбинантного белка гена gag-pol ВИЧ-1, секретируемого дрожжевыми клетками Saccharomyces cerevisiae. Вопросы вирусологии, 1992, 1, стр. 19-22.

5. Ryzhova E.V., Gultyaev А.Р., Grudinin М.Р., Kiselev O.I. The possible RNA packaging signals of Ty-1 transposons: the structural analogies with viral origins of assembly. 1993, Inter.J.Genome Res., V.l, P. 149-157.

6. Грудинин М.П., Иванюшина В.А., Рыжова E.B., Бузицкая Ж.В., Киселев О.И. Оригинальная векторная система для клонирования вирусных антигенов. 5-я международная конференция "СПИД, рак и родственные проблемы". Россия, Петербург, 1997, сгр 2.2 V

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Грудинин, Михаил Павлович, 2001 год

1. Бабков А.Ф., Казеннова Е.В., Бобкова М.П., ГараевМ.М. Докл. АН СССР,1989, т. 304, №3, с. 727-729.

2. Захаров И. А., Кожин С. А., Кожина Т. Н., Федорова И. В. Сборник методик по генетике дрожжей-сахаромицетов. Л.: Наука, Ленингр. отделение, 1984, 143 с.

3. Новое в клонировании ДНК. Методы, (под ред.) Д. Гловер, Москва, "Мир", 1989,215.

4. Резник Н. Л., Чеперегин С. Э., Горелова Т. В., Арман И. П., Шуппе Н. Г. Экспрессия ретротранспозона дрозофилы в дрожжах. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1988, N 7, с. 20-23.

5. Резник Н. Л., Горелова Т. В., Шуппе Н. Г. Экспрессия гомологичных и гетерологичных ретротранспозонов в модельной системе дрожжевых клеток. Молекулярная генетика, микробиология и вирусология, 1990, N 7, с. 11-17.

6. Рыбчин В.Н. Основы генетической инженерии Выш. школа, 1986, стр. 118140.

7. Трушинская Г.Н., Березин В.Э., Клюшник С.Ю., Маренникова С.С., Зайдес В.М. Маркирование антигена вируса иммунодефицита человека специфическими антителами в модельном эксперименте. Вопр. вирусол., 1989, № 66, с. 579 -684.

8. Чернов Ю. О., Горденин Д. А. Фенотипическое проявление инсерции дрожжевого транспозона в гене LYS2 и делеций, возникающих при неточном вырезании транспозона. Генетика, 1987, 23, N 1, с. 30-40.

9. Шуленин С.В., Царева Н.В., Бобков А.Ф., Гараев М.М. Докл. АН СССР,1990, т. 310, № 1, с. 210-215.

10. Adam М.А., Miller A.D. Identification of a signal in a Murine retrovirus that is sufficient for packaging of nonretroviral RNA into virions. J.Virol., 1988, v.62, p. 3802-3806.

11. Adams S. E., Dawson К. M., Gull K., Kingsman S. M., Kingsman A. G. The expression of hybrid HIV:Ty virus-like particles in yeast. Nature, 1987a, v. 329, p. 68-70.

12. Adams S. E., Kingsman S. M., and Kingsman A. J. The yeast Ту element: recent advances in the study of a model retroelement. BioEssays, 19876, v. 7, No. 1, p. 3-9.

13. Adams S. E„ Mellor J., Gull K„ Sim R. В., Tuite M. F., Kingsman S. M., Kingsman A. J. The functions and relationships of Ty-VLP proteins in yeast reflect those of mammalian retroviral proteins. Cell, 1987b, vol. 49, p. 111-119.

14. Adams S. E., Senior J. M., Kingsman S. M., and Kingsman A. J. Induction of HIV antibodies by Ty:HIV hybrid virus-like particles. In Technical Advances in Vaccine Development. Edited by Lasky L., New York: Alan R Liss, 1988, p. 117-126.

15. Adams SE, Burns NR, Layton GT, Kingsman A.J. Hybrid Ту virus-like particles. -Int. Rev. Immunol., 1994a, v. 11, p. 133-141.

16. Adams S. E., Richardson S. M. H., Kingsman S. M., Kingsman A. J. Expression vectors for the construction of hybrid Ty-VLPs. Mol. Biotechn., 19946, v.l, 125-136.

17. Adams SE, Kingsman A.J. Retrovirus and retrotransposon particles as antigen presentation and delivery systems. Pharm Biotechnol 1995;6:769-86

18. Araki K., Shiosaki K., Araki M., Chisaka O., Matsubara K. The essential region for assembly and particle formation in hepatitis В virus surface antigen produced in yeast cells. Gene, 1990, v. 89, p. 195 - 201.

19. Aronoff R., Hajjar A.M., Linial V.L. Avian retroviral RNA encapsidation: reexamination of functional 5' RNA sequences and the role of nucleocapsid Cys-His motifs. J.Virol., 1993, v. 67, p. 178-188.

20. Ballario P., Filetici P., Junakovic N., Pedone F. Tyl extrachromosomal copies in Saccharomyces cerevisiae. FEBS Lett., 1983, vol. 155, N 2, p. 225 - 228.

21. Barr P. J., Power M. D., Lee-Ng С. Т., Gibson H. L., Lusiw P. A. Expression of active human immunodeficiensy virus reverse transcriptase in Saccharomyces cerevisiae.- Biotechnology, 1987, vol. 5, p. 486 489.

22. Barteling S. J., Vreeswijk J. Developments in foot-and-mouth disease vaccines. -Vaccine, 1991, v. 9, p. 75 88.

23. Baudin F., Marquet R., Isel C., Darlix J.L., Ehresmann В., Ehresmann C. Functional site in the 5' region of human immunodeficiency virus type 1 RNA from defined structural domains. J.Mol.Biol., 1993, v. 229, p.382-397.

24. Beames В., Lanford R. E. Insertions within the hepatitis В virus capsid protein influence capsid formation and RNA encapsidation. J. Virol., 1995, v. 69, p. 6833 -6838.

25. Belcourt M.F. and Farabaugh P.J. Ribosomal frameshifting in the yeast retrotransposon Ту: tRNAs induce slippage on a 7 nucleotide minimal site. Cell,1990, v. 62, p. 339-352.

26. Bidou L., Stahl G., Grima В., Liu H„ Cassan M., Rousset J.P. In vivo HIV-1 frameshifting efficiency is directly related to the stability of the stem-loop stimulatory signal. RNA, 1997, v. 3, p. 1153 1158.

27. Birnbaum F. and Nassal M. Hepatitis В virus nucleocapsid assembly: primary structure requirements in the core protein. -J.Virol., 1990, v. 64, p. 3319 3330.

28. Bitter G. A., Egan К. M., Burnette W. N., Samal В., Fieschko J. C., Peterson D. L., Downing M. R., Wypych J., Langley К. E. Hepatitis В vaccine produced in yeast. J. Med. Virol., 1988, v. 25, p. 123-140.

29. Boeke, J.D. Transposable elements in Saccharomices cerevisiae. In Mobile genetics elements. Proceedings of Johns Hopkins University School of Medicine, Baltimore, 1989, p. 336 374.

30. Boeke J. D., Eichinger D.J., Natsoulis G. Doubling Tyl element copy number in Saccharomyces cerevisiae: host genome stability and phenotypic effect. Genetics,1991, v. 129, p. 1043-1052.

31. Boeke J. D., Garfinkel D. J., Styles C. A., and Fink G. R. Ту elements transpose through an RNA intermediate. Cell, 1985, v. 40, p. 491 - 500.

32. Boeke J. D., Styles C. A., Fink G. R. Saccharomyces cerevisiae SPT3 gene is required for transposition and transpositional recombination of chromosomal Ту elements. Mol. Cell. Biol., 1986, v. 6, p. 3575 - 3581.

33. Boeke J. D., Xu H., Fink G. R. A general method for the chromosomal amplification of genes in yeast. Science, 1988, v. 239, p. 280 - 282.

34. Bowen B. A., Fulton A. M., Tuite M. F., Kingsman S. M., and Kingsman A. J. Expression of Ty-lacZ fusions in Saccharomyces cerevisiae. Nucl. Acids Res., 1984, v. 12, N3, p. 1627 - 1640.

35. Braddock M., Chambers A., Wilson W., Esnouf M.P., Adams S.E., Kingsman A.j., Kingsman S.M. HIV-1 TAT "activates" presynthesized RNA in the nucleus. Cell, 1989, v.59, p.269-279.

36. Brierley I., Digard P., Inglis S.C. Characterization of an efficient coronavirus ribosomal frameshifting signal: Requirement for an RNA pseudo-knot. Cell, 1989,v. 57, p. 537-547.

37. Brookman J.L., Stott A.J., Cheeseman P.J., Adamson C.S., Holmes D., Cole J., Burns N.R. Analysis of TYA protein regions necessary for formation of the Tyl viruslike particle structure. Virol., 1995a, v. 212, p. 69-79.

38. Brookman JL, Stott AJ, Cheeseman PJ, Burns NR, Adams SE, Kingsman AJ, Gull K. An immunological analysis of Tyl virus-like particle structure. Virol., 19956, v. 207, p. 59-67.

39. Brown P. O., Bowerman В., Varmus H. E., Bishop J. M. Correct integration of retroviral DNA in vitro. Cell, 1987, v. 49, p. 347 - 356.

40. Bujdoso R., Williamson M., Roy D., Hunt P., Blacklaws В., Sargan D., McConnell I. Molecular cloning and expression of DNA encoding ovine interleukin 2. Cytokine, 1995, v. 7, p. 223 -231.

41. Burns R. N., Saibil N. S., Waite R., Pardon J. F., Adams S. A., Kingsman S.M., Kingsman A. J. Symmetry, flexibility and permeability in the structure of yeast retrotransposon virus-like particles. EMBO, 1992, v. 11, p. 1155 1164.

42. Burns N. R, Gilmour J. E. M, Kingsman S. M, Kingsman A. J, Adams S. E. Production and purification of hybrid Ty-VLPs. J. Mol.Biotech, 1994, v.l, p. 137145

43. Butler P.J.G. The current picture of the structure and assembly of tobacco mosaic virus. J.Gen.Virol, 1984, v. 65, p. 253-259.

44. Calos M. P. and Miller J. H. Transposable elements. Cell, 1980, v. 20, p. 579 -595.

45. Carriere C, Gay B, Chazal N, Morin, Boulanger P. Sequence requirements for encapsidation of deletion mutants and chimeras of human immunodeficiency virys type 1 Gag precursor into retrovirus-like particles. J. Virol, 1995, v.69, p. 2366-2377.

46. Casey J. M, Kim Y, Anderson P. R, Watson K. F, Fox J. L, Devare S.G. Human T-cell lymphotropic virus type II: immunologic characterization and primary structure analysis of the major internal protein, p 24. J. Virol, 1985, v. 55, p. 417 - 423.

47. Chalker D. L, Sandmeyer S. B. Transfer RNA genes are genomic targets for de novo transposition of the yeast retrotransposon Ty3. Genetics, 1990, v. 126, p. 837 -850.

48. Cheynet V, Verrier B, Mallet F. Overexpression of HIV-1 proteins in Escherichia coli by a modified expression vector and their one-step purification. Protein. Expr. Purif, 1993, v. 4, p. 367-372.

49. Clare J, Farabaugh Ph. Nucleotide sequence of a yeast Ту element: Evidence for an unusual mechanism of gene expression. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, v. 82, p. 2829 -2833.

50. Clark D. J, Bilanchone V. W, Haywood L. J, Dildine S. L, Sandmeyer S. В. A yeast sigma composite element, Ty3, has properties of retrotransposon. J. Biol. Chem, 1988, v. 263, p. 1413 - 1423.

51. Clarke В. E, Newton S. E, Carrol A. R, Francis M. J, Appleyard G, Syred A. D, Highfield P. E, Rowlands D. J, Brown F. Improved immunogenicity of a peptide epitope after fusion to hepatitis В core protein. Nature, 1987, v. 330, p. 381 - 384.

52. Clavel F., Orenstein J.M. A mutant of human immunodeficiency virus with reduced RNA packaging and abnormal particle morphology. J.Virol., 1990, v. 61, p. 52305234.

53. Clever J., Sassetti C., Parslow T.G. RNA secondary structure and binding sites for gag gene products in the 5' packaging signal of human immunodeficiency virus type 1. -J Virol., 1995, v. 69, p. 2101-2109.

54. Curcio M. J., Hulge A. -M., Boeke J. D., Garfinkel D. J. Ту RNA levels determine the spectrum of retrotransposition events that activate gene expression in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Gen. Genet., 1990, v. 220, N 2, p. 213 - 221.

55. Curcio M. J., Garfinkel D. J. Single-step selection for Tyl element retrotransposition. Pros. Natl. Acad. Sci. USA, 1991, v. 88, p. 936 - 940.

56. Curcio M. J., Garfinkel D. J. Posttranslational control of Tyl retrotransposition occurs at the level of protein processing. Mol. Cell. Biol., 1992, v. 12, p. 2813 - 2825.

57. Curcio M. J., Garfinkel D. J. Heterogenous functional Tyl elements are abundant in the Saccharomyces cerevisiae genome. Genetics, 1994, v. 136, N 4, p. 1245 -1259.

58. DiMarchi R., Brooke G., Gale C., Craknell V. Doel Т., Mowat N. Protection of cattle against foot-and-mouth disease by a synthetic peptide. Science, 1986, v.232, p. 639641.

59. Dobson M. J., Mellor J., Fulton A. M., Roberts N. A., Bowen B. A., Kingsman S. M., and ingsman A. J. The identification and high level expression of a protein encoded by the yeast Ty-element. EMBO J., 1984, v. 3, N 5, p. 1115 - 1119.

60. Dowbenko D. J., Bell J. R., Benton С. V. et al. Bacterial expression of the acquired immmunodeficiency syndrome retrovirus p24 gag protein and its used as diagnostic reagent. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, v. 82, p. 7748 7752.

61. Doyon L., Croteau G., Thibeault D., Poulin F., Pilote L., Lamarre D. Second locus involved in human immunodeficiency virus type 1 resistance to protease inhibitors. J. Virol., 1996, v. 70, p. 3763- 3769.

62. Edwards S. J., Hayden M. В., Hamilton R. C., Haynes J. A., Nisbet I. Т., Jagadish M. N. High level production of potyvirus-like particles in insect cells infected with recombinant baculovirus. Arch. Virol., 1994, v. 136, p. 375 - 380.

63. Eichinger D. J. and Boeke J. D. The DNA intermediate in yeast Tyl element transposition copurifies with virus-like particles: cell-free Tyl transposition. Cell,1988, v. 54, p. 935 966.

64. Eisenmann D. M., Dollard C., Winston F. SPT15, the gene encoding the yeast TATA binding factor TF1 ID, is required for normal transposition initiation in vivo. -Cell, 1989, v. 58, p. 1183-1191.

65. Eisenmann D. M., Chapon C., Roberts S. M., Dollard C., Winston F. The Saccharomyces cerevisiae SPT8 gene encodes a very acidic protein that is functionally related to SPT3 and TATA-binding protein. Genetics, 1994, v. 137, p. 647 - 657.

66. Elder R. Т., Loh E. Y., Davis R. W. RNA from the yeast transposable element Tyl has both ends in the direct repeats, a structure similar to retrovirus RNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v. 80, p. 2432 - 2436.

67. Ellis J., Bernstein A. Retrovirus vectors containing an internal attachment site: evidence that circles are not intermediates to murine retrovirus integration. J. Virol.,1989, v. 63, N 6, p. 2844 2846.

68. Ernst J.F. Improved secretion of heterologous proteins by Saccharomyces cerevisiae: Effect of promoter substitution i alpha-factor fusions. DNA, 1986, v. 5, p. 483-491.

69. Ernst J.F. Efficient secretion and processing of heterologous proteins in Saccharomyces cerevisiae is mediated solely by the pre- segment of alpha-factor precursor. DNA, 1988a, v. 7, p 355-360

70. Ernst J. F., Kawashima E. Variation in codon usage are not correlated with heterologous gene expression in Saccharomyces cerevisiae and E. coli. J. Biotech., 19886, v.7, p. 1 - 10.

71. Fisher J., Goff S.P. Mutational analysis of stem-loop in the RNA packaging signal of the Moloney murine leukemia virus. Virol., 1998, v. 244, p. 133 - 145.

72. Flavell A. J., Smith D. В., Kumar A. Extreme heterogenity of Tyl-copia group retrotransposons in plants. Mol. Gen. Genet., 1992, v. 231, p. 233 - 242.

73. Flexner C., Broyles S. S., Earl P., Chakrabarti S., Moss B. Characterization of human immunodeficiency virus gag/pol gene products expressed by recombinant vaccinia viruses. Virology, 1988, v. 166, p. 339 - 349.

74. Francis M. G., Hastings G. Z., Clarke В. E., Brown A. L., Beddell C. R., Rowlands D. J., Brown F. Neutralizing antibodies to all seven serotypes of foot-and-mouth disease virus elicited by synthetic peptides. Immunology, 1990, v. 69, p. 171 - 176.

75. Francis M. G., Fry C.M., Rowlands D.J., Broun F. Qualitative and quantitative differences in the immune response to foot-and-mouth disease virus antigens and synthetic peptides. I.Gen. Virol., 1988., v.69.p. 2483-2491.

76. Franzusoff A., Volpe A.M., Josse D., Pichuantes S., Wolf J.R. Biochemical and genetic definition of the cellular protease required for Hiv-1 gpl60 processing. -J.Biol.Chem., 1995, v. 270, p. 3154-3159.

77. Fuetterer J. and Hohn T. Involvement of nucleocapsids in reverse transcription: a general phenomenon? TIBS, 1987, v. 12, p. 92 - 97.

78. Fujimura Т., Esteban R., Esteban L.M. and Wickner R.B. Portable encapsidation signal of the L-A double stranded RNA virus of S.cerevisiae. Cell, 1990, v. 62, p. 819-828.

79. Fujimura Т., Esteban R. Recognition of RNA encapsidation signal by the yeast L-A double-stranded RNA virus. J.Biol.Chem., 2000, v. 47, p 37118-37126.

80. Garfinkel D. G., Boeke J. D., and Fink G. R. Ty-element transposition: reverse transcriptase and virus-like particles. Cell, 1985, v. 42, p. 507-517.

81. Garfinkel D. G., Hedge A.-M., Youngren S. D., and Copeland T. D. Proteolytic processing of pol-TYB proteins from the yeast retrotransposon Tyl. J. Virol., 1991, v. 65, p. 4573 -4581.

82. Gilmour J.E., Senior J.M., Burns N.R., Esnouf M.P., Gull K., Kingsman S.M., Kingsman A.J, Adams S.E. A novel method for the purification of HIV-1 p24 protein from hybrid Ту virus-like particles (Ty-VLPs). AIDS, 1989, v.3, p. 717-723.

83. Gowda S.D., Stein B.S., Steimer K.S., Engleman E.G. Expression and processing of human immunodeficiency virus type 1 gag and pol genes by cells infected with a recombinant vaccinia virus. J.Virol., 1989, v. 63, p. 1451-1454.

84. Groner В., Hynes N.E. Long terminal repeats provide regulatory signals at the ends of retroviral genes. TIBS-November, 1982, v. 11, p. 400-404.

85. Gultyaev A.P. The computer simulation of RNA folding involving pseudoknot formation Nucl. Acid. Res., 1991, v. 19, p. 2489-2494.

86. Gupta S., Sengupta J., Bisht R., Bhatnagar A., Kaul R. Human immunodeficiency virus type-1 p24 sequence from an Indian strain: expression in Escherichia coli and implications in diagnostics. Gene, 1997, v. 190, p. 27-30.

87. Gupta S., Arora K., Gupta A., Chaudhary V.K. Gag-derived proteins of HIV-1 isolates from Indian patients: cloning, expression, and purification of p24 of B- and C-subtypes. Protein. Expr. Purif., 2000, v. 19, p. 321-328.

88. Hansen L. J., Chalker D. L., and Sandmeyer S. В. Ty3, a yeast retrotransposon associated with tRNA genes, has homology to animal retroviruses. Mol. Cell. Biol., 1988, v. 8, p. 5245-525.

89. Harris SJ, Gearing AJ, Layton GT, Adams SE, Kingsman A.J. Enhanced proliferative cellular responses to HIV-1 V3 peptide and gpl20 following immunization with V3:Ty virus-like particles. Immunology 1992 Nov;77(3):315-321.

90. Harris S.J.,Woodrow S.A., Gearing A.J.H., Adams S.E., Kingsman A.J., fnd Layton G.T. The effects of adjuvants on CTL induction by V3:Ty-virus-like particles (V3-VLPs) in mice. Vaccine, 1996, v. 14, p.971-976.

91. Hauber J., Nelbock-Noehstetter P, and Feldmann H. Nucleotide sequence and characteristics of а Ту element from yeast. Nucl. Acids Res., 1985, v. 13, No. 8, p. 2745 - 2749.

92. Hauber J., Stucka R., Kreig R., Feldmann H. Analysis of yeast chromosomal regions carrying members of the glutamate tRNA gene family: various transposable elements are associated with them. -Nucl.Acids Res., 1988, v. 16, No. 22, p. 1062310634.

93. Hitzeman R.A., Chen C.Y., Hagie F.E., Patzer E.J., Liu C.C., Estell D.A., Miller J.V., Yaffe A., Kleid D.G., Levinson A.D. and Oppermann H. Expression of hepatitis В virus surface antigen in yeast. Nucleic Acids Res., 1983, v.l 1, p.2745-2763.

94. Houwing C.J.and Jaspars E.M. Protein binding sites in nucleation complexes of alfalfa mosaic virus RNA4. Biochemestry, 1982, v. 21, p. 3408-3414.

95. Imai M., Yanase Y., Nojiri Т., Miyakawa Y. And Mayumi M. A receptor for polymerized human and chimpanzee albumins on hepatitis В virus particles co-occurring with HBeAg. -Gastroenterology, 1979, v.76, p.242-247.

96. Imamura Т., Araki M., Miyanohara A., Nakao J.,Yonemure H., Ohtomo N. and Matsubara K. Expression of hepatitis В virus middle and large surface antigen genes in Saccharomyces cerevisiae. J. Virol., 1987, v.61, p.3543-3549.

97. Jacks T, Madhani H.D, Masiarz F.R, et al. Signals for ribosomal frameshifting in the Rous sarcoma virus gag-pol region. Cell, 1988, v. 55, p. 447-458.

98. Jacobs E, Rutgers T, Voet P, Dewerchin M, Cabezon T. and De Wildem M. Simultaneous synthesis and assembly of various hepatitis В surface proteins in Saccharomyces cerevisiae. Gene, 1989, v.80, p. 279-291.

99. Jones T. A, Blaug C. Y, Hausen M, and Pourklis E. Assembly of gag-galactosidase proteins into retrovirus particles. J. Virol, 1990, v. 64, p. 2265-2279.

100. Kang C.Y. Expression of human immunodeficiency virus genes using baculovirus expression system. -Mol. Biotechnol, 1997, v. 8, p. 173-187.

101. Kattenbeck B, Rohrhofer A, Niedrig B, Wolf H, Modrow. Defined amino acids in the gag proteins of human immunodeficiency virus type 1 are functionally active during virus assembly. Intervirology, 1996, v. 39, p. 32-39.

102. Katz R.A, Terry R.W, Skalka A.M. A conserved cis-acting sequence in the 5' leader of avian sarcoma virus RNA is required for packaging. J.Virol, 1986, v. 59, p. 163-167.

103. Katz R.A. and Skalka A.M. Generation of diversity in retroviruses. -Annu.Rev.Genet, 1990, v. 24, p. 409-445.

104. Kingsman A.J. and Kingsman S.M. Ту: a retroelement moving forward. Cell, 1988a v.53, p. 333-335.

105. Kingsman S.M, Kingsman A.J. Polyvalent recombinant antigens: a new vaccine strategy. Vaccine, 19886, v. 6, p. 304-307.

106. Kingsman A.J., Kingsman S.J, Choter K. The yeast retrotransposon Ту and related elements. In: Transposition. Cambridge: Univ. Press, 1988 в, p. 223-246.

107. Kingsman A.J., Adams S.E., Burns N.R., Martin-Rendon E., Marfany G., Hurd D. W., Kingsman S.M. Virus-like particles: Ту retrotransposos. In Molecular Genetics of Yeast. Johnston J.R. (Ed.) Oxford: IRL Press, 1994, p. 203 -216.

108. Kingsman AJ, Burns NR, Layton GT, Adams S.E. Yeast retrotransposon particles as antigen delivery systems. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1995, v. 754, p 202-213.

109. Koito A., Hattori Т., Matsushita S. et al. Conserved immunogenic region of a major core protein (p24) of human and simian immunodeficiency viruses. AIDS Res.Human Retroviruses, 1988, v.4, p. 409-417.

110. Kornbluth S., Jove R., and Hanafusa H. Characterization of avian and viral p60 src proteins expressed in yeast. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, vol. 84, p. 4455-4459 (1987).

111. Kramer R. A., Schaber M. D., Skalka A. M., Ganguly K., Wond-Staal F., Reddy E. P. HTLV-III gag protein is processed in the yeast cells by the virus pol-protease. -Science, 1986, v. 231, p. 1580-1584.

112. Krausslich H.G., Facke M., Heuser A.M., Konvalinka J., Zentgraf H. The spacer peptide between human immunodeficiency virus capsid and nucleocapsid proteins is essential for ordered assembly and viral infectivity. J. Virol., 1995, v. 69, p. 3407-3412.

113. Kuroda S., Otaka S., Miyazaki Т., Nakao M. and Fujisawa Y. Hepatitis В virus envelope L protein particles. Synthesis and assembly in Saccharomyces cerevisiae, purification and characterization. J. Biol. Chem., 1992, v. 267, p. 1953-1961.

114. Laloux I., Dubois E., Deverchin M., and Jacobs E. TEC1, a gene involved in the activation of Tyl and Tyl-mediated gene expression in Saccharomyces cerevisiae: cloning and molecular analysis. Mol. Cell. Biol., 1990, v.10, No. 7, p. 3541-3550.

115. Landschultz W.H., Jonson P.F., McNight S.L. The DNA binding domain of the rat liver nuclear protein C/EBP is bipartite. Science,1989, v. 243, p. 207-218. (16811688)

116. Lanford R.E. and Notvall L. Expression of hepetitis В virus core and precore antigens in insect cells and characterization of a core-associated kinase activity. -Virology, 1990, v.176, p.222-233.

117. Layton GT, Harris SJ, Gearing AJ, Hill-Perkins M, Cole JS, Griffiths JC, Burns NR, Kingsman A J, Adams S.E. Induction of HIV-specific cytotoxic T lymphocytes in vivo with hybrid HIV-1 V3:Ty-virus-like particles. J Immunol, 1993, v.151, p. 1097-1107.

118. Le S.Y., Shapiro B.A., Chen J.H., Nussinov R. Maizel J.V. RNA pseudoknots downstream of the frameshift sites of retroviruses. Genet.Anal.Tech.Appl., 1991, v. 8, p. 191-205.

119. Lee E-G., Yeo A., Kraemer В., Wickens M., Linial M.L. The Gag domains required for avian retroviral RNA tncapsidation determined by using two independent assays. J.Virol.,1999, v. 73, p. 6282 - 6292.

120. Lee E-G., Linial M.L. Yeast three-hybrid screening of Rous sarcoma virus mutants with randomly mutagenized minimal packaging signals reveals regions important for Gag interaction. J.Virol., 2000, v. 74, p. 9167 - 9174.

121. Lee F.W.F. and Da Silva N.A. Application of Tyl for cloned gene insertion: amplification of a large regulated expression cassette in Saccharomyces cerevisiae. -Appl.Microbiol.Biotechnol., 1996, v. 44, p. 620-623.

122. Loktev V.B., Ilyichev A.A., Erochkin A.M., Karpenco L.I., Pokrivsky A.G., Pereboev A.V., Sandakhchiev L.S. Desing of immunogens as components of a new generation of molecular vaccines. J. Biotech., 1996, v. 44, p. 129-137.

123. Louis J., Nashed N.T. et al. Kinetics and mechanism of autoprocessing of HIV type 1 protease from an analog of the gag-pol polyprotein. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, v. 91, p. 7970-7974.

124. Madisen L., Travis В., Hu S.-L., Purchio A.F. Expression of human immunodeficiency virus gag gene in insect cells. Virology, 1987, v. 158, p. 248-250.

125. Malim M. H., Adams S. E., Gull K., Kingsman A. J., and Kingsman S. M. The production of hybrid Ty:IFN virus-like particles in yeast. Nucl. Acids Res., 1987, v. 15, No. 18, p. 7571-7580.

126. Mandart E., Kay A. and Galibert F. Nucleotide sequence of a cloned duck hepatitis В virus genome: comparison with woodchuck and human hepatitis В virus sequences.- J.Virol., 1984, v.49, p.782-792.

127. Mann R., Mulligan R., Baltimor D. Construction of aretrovirus packaging mutant and its use to produce helper-free defective retrovirus. Cell, 1983, v. 33, p. 153 -159.

128. Marco S. Di, Fendrich G., Meyhack В., Grutter M.G. Refolding, isolation and characterization of crystallizable human interferon-alfa8 expressed in Saccharomyces cerevisiae. J.Biothechnol., 1996, v. 50, p. 63-73.

129. Marcus-Sekura C.J., Woerner A.M., Klutch M., Quinnan G.V. Reactivity of an HIV gag gene polypeptide expressed in E.coli with sera from AISD patients and monoclonal antibodies to gag. Biochim. Biophys. Acta, v.949, p.213-223, 1988.

130. Miyanohara A., Toh-e A., Nozaki C., Hamada F., Ohtomo N and Matsubara K. Expression of hepatitis В surfac antigen gene in yeast.- Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1983, v.80,p.l-5.

131. Mougel M., Zhang Y., Barklis E. cis-active structural motif involved in specific encapsidation of Moloney murine leukemia virus RNA. J.Virol., 1996, v.70, p. 5043 -5050.

132. Mougel M., Barklis E. A role for two hairpin structures as a core RNA encapsidation signal in murine leukemia virus virions. J.Virol., 1997, v. 71, p. 8061 -8065.

133. Moulard M., Achstetter Т., Kieny M.P., Montagnier L., Bahraoui E. Kex2p: a model for cellular endoprotease processing human immunodeflciecy virus type 1 envelope glycoprotein precursor. Eur.J.Biochem., 1994, v. 225, p. 565-572.

134. Mount S. M. and Rubin G. M.Complete nucleotide sequence of the Drosophila transposable element copia: homology between copia and retroviral proteins. Mol. Cell. Biol., 1985, v. 5, No. 7, p. 1630-1638.

135. Mulcahy G., Pullen L.A., Gale C., DiMarchi R., Doel T.R. Mouse protection test as a predictor of the protective capacity of synthetic foot-and-mouth disease vaccines. -Vaccine, 1991, v.9, p. 19-24.

136. Muller F., Bruhl K. U., Freidel K., Kowallik К. V., and Ciriacy M. Processing of TY1 proteins and formation of Tyl virus-like particles in Saccharomyces cerevisiae. -Mol. Gen. Genet., 1987, v. 207, p. 421-429.

137. Nixon D.F., Townsend A.R.M., Elvin J.G., Rizza C.R., Gallwey J., McMichael A.J. HIV-1 gag-specific cytotoxic T lymphocytes defined with recombinant vaccinia virus and synthetic peptides. -Nature, 1988, v.336, p.484-487.

138. Petersheim M. and Turner D.H. Base-stacking and base-pairing contributions to helix stability: thermodynamics of double-helix formation with CCGG, CCGGp, CCGGAp, ACCGGp, CCGGUp, and ACCGGUp. Biochemistry, 1983, v. 22, p. 256263.

139. Pichuantes S., Babe L.M., Barr P.J., Craik C.S. Recombinant HIV1 protease secreted by Saccharomyces cerevisiae correctly processes myristylated gag polyprotein. Proteins, 1989, v. 6, p. 324-337.

140. Pichuantes S., Babe L.M., Barr P.J., DeCamp D.L., Craik C.S. Recombinant HIV2 protease processes HIV1 Pr53gag and analogous juction peptides in vitro. -J.Biol.Chem., 1990, v.265,p. 13890-13898.

141. Poggeler S., Schwerk C., Kamper U., Kuck U. Efficient synthesis of a 72-kDa mitochondrial polypeptide using the yeast Ту expression system. -Biochem.Biophys.Res.Commun.,1996, v. 219, p. 890-899.

142. Prange R., Clemen A. and Streeck R.E Myristylation is involved in intracellular retention of hepatitis В virus envelope proteins. J.Virol., 1991, v. 65, p. 3919-3923.

143. Ratner L., Haseltine W., Paterka R., Livak K.J., Starcich В., Josephs S.F., Doran E.R., Rafalski J.A. et al. Complete nucleotide sequence of the AIDS virus, HTLV-III. -Nature, 1985, v. 313, p. 277-284.

144. Rio D. C., Barnes J., Laski F., Rine J., and Rubin G. M. Evidence for Drosophila P element transposase activity in mammalian cells and yeast. J. Mol. Biol., 1988, v. 200, p. 411-415.

145. Rodner В., Vinga-Martins C., Muller-Lantzsch N. Expression of a processed and a non-processed form of the integrase protein of HIV-1 in the baculovirus system. -Arch. Virol., 1993, v. 131p. 177-183.

146. Roeder G. S. and Fink G. R. Transposable elements in yeast.- In: Mobile Genetic Elements/ed. by J. A. Shapiro.-Acad. Press, Orlando etc., 1983, pp.299-328.

147. Roy P. Genetically engineered particulate virus-like structures and their use as vaccine delivery systems. Intervirology, 1996 v.39, p.62-71.

148. Ruppert A., Arnold D., Hobom G. OmpA-FMDV VP1 fusion proteins: production, cell surface exposure and immune responses to the major antigenic domain of foot-and-mouth disease virus. Vaccine, v. 12, p.492-498, 1994.

149. Salfeld J., Pfaff E., Noah M. and Schaller H. Antigenic determinants and functional domains in core antigen and e antigen from hepatitis В virus. J. Virol., 1989, v.63, p.798-808.

150. Sambrook J., Fritsh E.F., Maniatis T. Molecular cloning. A laboratory manual. -Cold Spring Harbor, New York: Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989.

151. Sanger F., Nicklen S. and Cjulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc.Natl.Acad.Sci., 1977, v.74, p. 5463-5467.

152. Schirmberck R., Bohm W., Reimann J. Virus-like particles induce MHC class 1-restricted T-cell responses. Intervirol., 1996, v.39, p.111-119.

153. Schwartzberg P, Colicelli J, Goff S.P. Deletion mutants of Moloney murine leukemia virus which lack glycosylated gag protein are replication competent. -J.Virol, 1983, v. 46, p. 538-546.

154. Scolnick E.M, McLean A.A, West D.J, McAleer W.J, Miller W.J. and Buynak E.B. Clinical evaluation in healthy adults of a hepatitis В vaccine made by recombinant DNA. J. Am.Med.Assoc, 1984, v.251, p. 2812-2815.

155. Shen Y. and Bruenn J.A. RNA structural requirements for RNA binding, replication, and packaging in the yeast double-stranded RNA virus. Virol, 1993, v. 195, p. 481-491.

156. Shiau A.L. and Murray K. Mutated epitopes of hepatitis В surface antigen fused to the core antigen of the virus induce antibodies that react with the native surface antigen. J.Med.Virol, 1997, v.51, p.156-166.

157. Shiosaki K, Takata K, Nishimura S, Mizokami H. and Matsubara K. Production of hepatitis В virion-like particles in yest. Gene, v.106, p.143-149, 1991.

158. Sohn M.J, Chong Y.H, Chang J.E, Lee Y.I. Overexpression and simple purification of human immunodeficiency virus-1 gag epitope derived from a recombinant antigen in E. coli and its use in ELISA. J. Biotechnol, 1994, v. 34, p. 149-155.

159. Stahl G, Bidou L, Rousset J.P, Cassan M. Versatile vectors to study recoding: conservation of rules between yeast and mammalian cells. Nucl.Acid.Res, 1995, v. 23, p. 1557-1560.

160. Stahl S. J. and Murray K. Immunogenicity of peptide fusions to hepatitis В virus core antigen. Proc.Natl. Acad. Sci. USA, 1989, v. 86, p. 6283-6287.

161. Steimer K.S, Puma J.P, Power M.D. et al. Differential antibody responses of individuals infected with AIDS-associated retroviruses surveyed using the viral core antigen p25 gag expressed in bacteria. Virology, 1986, v. 150, p. 283-290.

162. Stucka R, Hauber J, and Feldmann H. Conserved and non-conserved features among the Ту elements. Curr. Genet, 1986, v.l 1, p. 193-200.

163. Stucka R., Schwarzlose C., Lochmuller H., Hacker U. and Feldmann H. Molecular anslysis of the yeast Ty4 element: homology with Tyl, copia, and plant retrotransposons. Nucl. Acids Res., 1989, v. 17, No.13, p. 4993-5001.

164. Toh H., Ono M., Saigo K., Miyata T. Retroviral protease-like sequence in the yeast transposon Tyl. Nature, 1985, v. 315, p. 691-695.

165. Valenzuela P., Medina A., Rutter W.J., Ammerer G., and Hall B.D. Synthesis and assembly of hepatitis В virus surface antigen particles in yeast. Nature, 1982, v.298, p. 347-350.

166. Valenzuela P., Coit D. and Kuo C.H. Synthesis and assembly in yeast of hepatitis В surface antigen particles containing the polyalbumin receptor.- Bio/Technology, 1985a, v.3, p.317-320.

167. Veronese F.-M., Copeland T. D„ DeVico A. L., Rahman R., Orozslan S., Gallo R. C., Sarngadharan M. G. Characterization of highly immunogenic p66/p51 as the reverse transcriptase of HTLV-111/LAV. Science, vol. 231, p. 1289-1291 (1986).

168. Vickers T.A., Ecker D.J. Enhancement of ribosomal frameshiffing by oligonucleotides targeted to the HIV gag-pol region. Nucl.Acid.Res., 1992, v. 20, p. 3945-3953.

169. Voytas D. F. and Boeke J. D. Yeast retrotransposon revealed. Nature, 1992, v. 358, p. 717- 721.

170. Voytas D.F., Boeke J.D. Yeast retrotransposons and tRNAs. TIG, 1993, v. 9, N12, p. 421 -427.

171. Wagner R., Demi L., Notka F., Schirmbeck R., Reimann J., Teeuwsen V., Heeney J. Safety and Immunogenicity of Recombinant Human Immunodeficiency virus-like particles in rodents and rhesus macaques. Intervirology, 1996, v.39,p.93-103.

172. Wahren В., Morfeldt-Mansson L., Biberfeld G. et al. Characteristics of the specific cell-mediated immune response in human immunodeficiency virus infection. -J. Virol, 1987, v. 61, p. 2017-2023.

173. Warmington,J, Waring,R., Vewlon,C, Indge,K, and Oliver,S. Nucleotide sequence characterization of Tyl-17, a class 11 transposon from yeast. Nucl. Acids Res, 1985, v. 13, No. 18, p. 6679-6692.

174. Weber J, Cheinsong-Popov R„ Callow D, Adams S, Patou G, Hodgkin K, Martin S, Gotch F, Kingsman A.J. Immunogenicity of the yeast recombinant pl7/p24:Ty virus-like particles (p24-VLP) in healthy volunteers. Vaccine, 1995, v. 13, p. 831-834.

175. Welker R, Kottler H, Kalbitzer H.R, Krausslich H.G. Human immunodeficiency virus type 1 Nef protein is incorporated into virus particles and specifically cleaved by the viral proteinase. Virology, 1996, v. 219, p. 228-236.

176. Wickner R.D. Yeast virology. FASEB J, 1989, v. 3, p. 2257-2265.

177. Williamson V.M. Transposable elements in Yeast. International Review of Cytology, 1983, v.83, p. 1-23.

178. Winston F, Dollard C, Malone E. A, Clare J, Kapakos J. G, Farabaugh Ph, and Minehart P. L. Three genes are required for trans activation of Ту transcription in yeast. Genetics, 1987, v. 115, p. 649-656.

179. Xu H. and Boeke J. D. Localization of sequences required in cis for yeast Tyl element transposition near the long terminal repeats: analysis of mini-Tyl elements. -Mol. Cell. Biol, 1990, v. 10, No. 6, p. 2695-2702.

180. Youngren S. D., Boeke J. D., Sanders N. J., and Garfinkel D. J. Functional organization of the retrotransposon Ту from Saccharomyces cerevisiae: Ту protease is required for transposition. Mol. Cell. Biol., 1988, v. 8, No. 4, p. 1421-1431.

181. Zhou S. and Standring D.N. Production of hepatitis Bvirus nucleocapsidlike core particles in Xenopus oocytes: assembly occurs mainly in the cytoplasm and does not require the nucleus. J.Virol., 1991, v.65, p.5457-5464.

182. Zuidema D., Bierhuizen M.F.A., Cornelissen B.J.C., Bol J.F. and Jaspars E.M.J. Coat protein binding sites on RNA 1 of alfalfa mosaic virus. Virology, 1983, v. 125, p. 361-365.1. РОССИЙСКАЯ , tm