Особенности дифференцировки и созревания дендритных клеток под воздействием факторов различной природы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат биологических наук Чикилева, Ирина Олеговна

• Чикилева, Ирина Олеговна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Чикилева, Ирина Олеговна

Список сокращений.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Характеристика ДК.

2.2. Происхождение и развитие ДК.

2.3. Методы получения ДК.

2.4. Применение ДК в медицинской практике. Современное положение и перспективы.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Реагенты и лабораторные животные.

3.2. Получение ДК человека и мыши.

3.3. Анализ фенотипа ДК.

3.4. Исследование влияния ганглиозида GM1 на фенотип ДК человека и мыши.

3.5. Исследование влияния на дифференцировку ДК человека ИЛ-452 при разных концентрациях ГМ-КСФ.

3.6. Исследование воздействия ИЛ-482 на активацию транскрипционного фактора STAT6.

3.7. Обработка ДК человека и мыши препаратами ЛПС и белковыми антигенами Y.pestis Cafl nLcrV.

3.8. Определение концентрации ИЛ-1 и ФНО-а методом ИФА.

3.9. Статистическая обработка данных.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Получение ДК человека из разных источников.

4.2. Получение ДК мыши.

4.3. Воздействие на фенотип ДК человека и мыши ганглиозида GM1.

4.4. Исследование воздействия альтернативной формы ИЛ-4 на экспрессию молекул антигенного представления и костимуляции на поверхности ДК при различных концентрациях ГМ-КСФ.

4.5. Исследование воздействия альтернативной формы ИЛ-4 на активность транскрипционного фактора STAT6.

4.6. Созревание ДК под воздействием ЛПС различных видов патогенных и условно патогенных бактерий.

4.7. Воздействие на фенотип ДК человека антигенов Y.pestis Cafl и LcrV.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности дифференцировки и созревания дендритных клеток под воздействием факторов различной природы»

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ

Исследование свойств дендритных клеток (ДК) представляет собой одно из наиболее интересных и перспективных направлений современной иммунологии. Это обусловлено тем, что ДК играют ключевую роль в инициации и регулировке реакций врожденного и приобретенного иммунитета [66, 67, 182, 192].

Функциональная активность ДК зависит от различных факторов. Так, в зависимости от состава среды, условий культивирования клеток-предшественников, факторов созревания и др. можно получить ДК с различными свойствами. Одни из них будут индуцировать иммунный ответ по Тх1/Тх2 типу, другие, наоборот, активировать регуляторные Т-клетки (Трег) и приводить к иммуносупрессии (толерогенные ДК). Известно, что факторы созревания, прибавляемые к ДК при инкубации с антигеном, существенным образом влияют на их способность к миграции в лимфатические узлы и представлению антигена Т-лимфоцитам [54, 192].

Как было показано в недавних работах, ЛПС различных видов бактерий и даже ЛПС одного и того же штамма, культивируемого в различных условиях, по-разному действуют на иммунную систему хозяина [57]. Это обусловлено тем, что тонкие модификации структуры ЛПС вызывают существенные изменения в связывании данного бактериального продукта со сложной системой рецепторов многоклеточных хозяев [57]. Несмотря на то, что ЛПС традиционно используют в лабораторной практике в качестве индуктора созревания ДК, отсутствуют данные о сравнительном действии на ДК ЛПС различных видов бактерий. Отсутствуют также данные о действии на ДК ряда белковых факторов вирулентности бактерий. Исследование действия на ДК различных бактериальных антигенов могло бы способствовать уточнению особенностей патогенеза инфекционного процесса и разработке новых подходов к получению вакцин.

Наряду с факторами, повышающими функциональные свойства ДК, существуют соединения, способные ингибировать их активность. Например, ИЛ-10 снижает способность ДК созревать в ответ на провоспалительные факторы, что приводит к развитию толерогенных ДК, которые не только не стимулируют иммунные реакции, а даже подавляют их [182, 231]. ДК играют важную роль в индукции и поддержании иммунных реакций на аллергены при астме [121]. Один из естественных механизмов предотвращения развития гиперчувствительности к аллергенам, предположительно, заключается в подавлении экспрессии молекул антигенной презентации главного комплекса гистосовместимости П-го типа (ГКГ-П) на поверхности ДК легких под влиянием аутокринного ИЛ-10 [121]. Анализ данных литературы свидетельствует от том, что ИЛ-452 - естественный антагонист ИЛ-4 не активирует последующий сигнальный каскад и конкурирует с ИЛ-4 за общую для них цепь рецептора ИЛ-4Ра. Соотношение этих двух форм ИЛ-4 в организме, по мнению некоторых авторов, играет важную роль в патогенезе атопической астмы [77, 194]. Действие ИЛ-452 на ДК до сих пор не было исследовано.

Ряд исследователей продемонстрировали негативное влияние некоторых ганглиозидов на ДК и другие антигенпредставляющие клетки (АПК) [33, 162, 196, 197, 233]. Ганглиозиды - мембранные гликосфинголипиды, содержащие сиаловую (нейраминовую) кислоту. Они представлены в мембранах абсолютно всех клеток и выполняют многообразные биологические функции, включая регуляцию роста, дифференцировки и гибели клеток [206]. Качественный состав ганглиозидов изменен в опухолевых клетках [165, 224]. Известно, что ганглиозиды способны отщепляться с поверхности опухолевых клеток в окружающую их среду [24, 166], что вносит значительный вклад в вызываемую раковыми клетками иммуносупрессию [51, 86, 112, 117, 132]. Исследование влияния различных ганглиозидов на ДК представляет собой новое и перспективное направление в иммунологии, существенное для клинической практики при лечении опухолевых заболеваний.

Несмотря на большое количество исследований, посвященных ДК и все возрастающий интерес к ним, многие аспекты их развития (пути диффе-ренцировки, созревания, факторы, влияющие на их способность к представлению антигена и т.д.) изучены не достаточно полно. Все изложенное выше и определило цель настоящего исследования

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ Изучение особенностей дифференцировки и созревания дендритных клеток под действием факторов бактериального (ЛПС, белковые факторы) и эукариотического происхождения (ганглиозиды, цитокины).

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Определить морфологические и иммунофенотипические характеристики ДК при использовании в качестве индукторов созревания ЛПС условно патогенных и патогенных бактерий {Escherichia coli, Shigella sonnei, Salmonella typhi, Yersiniapestis, Francisella tularensis).

2. Провести сравнительное исследование действия белковых антигенов Y. pestis (фактора вирулентности LcrV и капсульного белка Cafl) на иммунофенотип ДК.

3. Исследовать секрецию ДК ФНО-а и ИЛ-1 в присутствии антигенов Y.pestis LcrV и Cafl.

4. Определить иммунофенотип ДК при их дифференцировке в присутствии ганглиозида GM1.

5. Изучить особенности иммунофенотипа ДК, дифференцирующихся из моноцитов периферической крови человека в присутствии альтернативного сплайс-варианта ИЛ-4 (ИЛ-452).

6. Исследовать влияние ИЛ-482 на активацию транскрипционного фактора STAT6.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА Впервые проведено сравнительное изучение особенностей дифференцировки и созревания ДК под действием факторов бактериального (ЛПС, белковые факторы) и эукариотического происхождения (ганглиозиды, цито-кины).

Препараты бактериальных ЛПС значительно различаются по способности индуцировать созревание ДК. Наиболее эффективным индуктором созревания дендритных клеток является ЛПС E.coli. ЛПС возбудителя чумы Y. pestis характеризуется менее выраженной способностью индуцировать созревание ДК, а ЛПС возбудителя туляремии F. tularensis вообще не способен индуцировать созревание ДК.

Впервые показано, что белковые факторы вирулентности LcrV и Cafl Y.pestis оказывают неоднозначное действие на иммунофенотип ДК человека. Секретируемый фактор вирулентности LcrV подавляет экспрессию маркера зрелости ДК CD83, но стимулирует экспрессию молекул костимуляции CD80. Капсульный антиген Cafl является мощным индуктором секреции ФНО-а и созревания ДК.

Установлено, что ганглиозид GM1 из бычьего мозга угнетает нормальную дифференцировку ДК мыши, приводя к уменьшению экспрессии молекул костимуляции.

Впервые исследовано действие альтернативной формы ИЛ-4 (ИЛ-482) на диффренцировку ДК. Показано, что ИЛ-482, в отличие от ИЛ-4, не поддерживает экспрессию молекул костимуляции CD86 и антигенной презентации ГКГ-П HLA-DR на поверхности ДК. ИЛ-482 слабо подавляет экспрессию HLA-DR, индуцируемую ИЛ-4 и оказывает супрессивное действие на активацию транскрипционного фактора STAT6, индуцируемую ИЛ-4.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Результаты, полученные при исследовании влияния факторов бактериального и эукариотического происхождения на дифференцировку и созревание ДК, могут быть использованы для оптимизации методов получения вакцин на основе ДК.

Полученные данные об особенностях действия ЛПС возбудителей особо опасных заболеваний (Y.pestis и F.tularensis) и белковых антигенов Y.pestis на

ДК могут иметь существенное значение для выяснения механизмов взаимодействия патогенных микроорганизмов с иммунной системой хозяина, а также для отбора антигенных компонентов с целью конструирования противо-инфекционных профилактических и терапевтических вакцин.

Присутствие иммуносупрессивных ганглиозидов в опухолевых лизатах при нагрузке ими препаратов ДК может существенным образом повлиять на эффективность таких противоопухолевых препаратов. В работе было показано, что ганглиозид GM1 не влияет на иммунофенотип полностью развившихся незрелых ДК человека при кратковременной культивации с ним (3 суток). Таким образом, он, по-видимому, не способен негативно повлиять на способность ДК, нагруженных опухолевым лизатом, представлять опухолевые антигены.

Толерогенные ДК могут быть использованы для подавления иммунных реакций при аутоиммунных заболеваниях и трансплантации органов. Настоящая работа позволяет предположить, что подобного типа ДК могут быть получены в присутствии ИЛ-482.

Результаты исследований используются в циклах лекций курса «Вакци-нопрофилактика» и курса по иммуноонкологии ММА им. И. М. Сеченова.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ДК кожи (необычные клетки с многочисленными отростками - ветвями - «дендритами») были впервые описаны Лангергансом уже в 1868-м году [84]. Однако на тот момент ничего не было известно относительно их функций, предполагалось даже, что они представляют собой особые нервные клетки. Стейнман и Кон (Steinman and Cohn) в 1973-м году идентифицировали ДК в селезенке мышей [210].

На данный момент твердо установлено, что ДК представляют собой мощные профессиональные АПК, обладающие уникальной способностью индуцировать первичный иммунный ответ [4, 22, 84, 103]. ДК примируют наивные Т-клетки, а также активируют клетки памяти. Кроме того, ДК способны активировать В-клетки и ЕК [66, 78,103].

ДК играют наиважнейшую роль в инициации и регулировке иммунных реакций, направленных против вирусов, бактерий и других патогенных микроорганизмов. Существуют также данные, указывающие на то, что ДК могут запускать противоопухолевые иммунные реакции [54]. В настоящее время ряд исследователей ведут работы с целью внедрения в клиническую практику препаратов на основе ДК для лечения или предотвращения инфекционных и опухолевых заболеваний [54, 103, 121, 153].

2.1. Характеристика ДК.

Стейнман и Кон описывают ДК, как крупные клетки, которые отличаются неправильностью формы, имеют многочисленные выступы мембраны, включая дендриты, напоминающие формой иглы, выпуклые псевдоподы, вуалевидные ламелиоподы [210]. По их наблюдениям, ДК мышиной селезенки сначала прикрепились к пластику, но после культивирования в течение ночи отлипли, что, наряду с их низкой плотностью, позволило отделить их от макрофагов [210-212]. В отличие от макрофагов, ДК мышиной селезенки не фагоцитировали [211-212].

Последующие исследования показали, что ДК, в отличие от моноцитов/макрофагов, постоянно экспрессируют на высоком уровне молекулы ГКГ главного комплекса гистосовместимости) П-го класса [214]. Особое положение ДК среди других АПК объясняется их невероятно высокими способностями стимулировать первичный ответ Т-лимфоцитов как в аллогенной смешанной лейкоцитарной реакции (CJ1P), так и в антигенспецифических системах [93, 213]. Эта особенность ДК определяется не только большой плотностью молекул ГКГ на поверхности ДК, но и высоким уровнем экспрессии костимулирующих молекул В7-1 (CD86), В7-2 (CD80).

Фенотипически ДК охарактеризовать достаточно сложно, так как до сих пор не обнаружено абсолютно специфических маркеров на их поверхности [84, 127]. Обычно их определяют как Lin"MHCII+ клетки, так как на их поверхности отсутствуют линейные маркеры, свойственные В-, Т-клеткам, ЕК, моноцитам/макрофагам (CD 19, CD3, CD 16, CD56, CD 14), но отмечается высокая плотность молекул ГКГ-П.

Морфологические и функциональные характеристики ДК существенным образом меняются при их развитии [84]. Разделяют предшественники ДК, незрелые и зрелые ДК. ДК происходят из костного мозга [174]. Небольшое количество предшественников ДК (а также зрелых и рециркулирующих форм) находятся в крови и выходят из кровяного потока в ткани. В тканях локализованы незрелые формы ДК, которые именуются интерстициальными ДК. Клетки Лангерганса населяют эпидермис и другие типы эпителия, где они также находятся в незрелой форме. Незрелые ДК имеют длинные мембранные выступы и служат детекторами патогенных микроорганизмов.

ДК захватывают бактерии, вирусы, мертвые или умирающие клетки, белки и иммунные комплексы путем фагоцитоза, пиноцитоза или опосредованного рецепторами эндоцитоза. Далее антигенный материал процессирует-ся и представляется в комплексе с молекулами ГКГ. Обычно АПК представляют экзогенные антигены в контексте с молекулами ГКГ-П CD4+ Т-лимфоцитам, а эндогенные, синтезированные внутри клетки (например, вирусные белки) - в комплексе с молекулами ГКГ-1 CD8+ Т-лимфоцитам. Однако у ДК существует альтернативный путь процессинга экзогенных антигенов (апоптических или некротических опухолевых клеток, иммунных комплексов и т. д.), который позволяет им представлять их в комплексе с молекулами ГКГ-1 также и CD8+ Т-лимфоцитам [9, 70, 81]. Этот процесс называют кросс-презентацией. Липидные и гликолипидные антигены патогенных микроорганизмов, а также собственных тканей презентируются на CD1 (CD1 a-d) молекулах, которые структурно напоминают молекулы ГКГ-1, но специализированы для связывания с липидами, а не с пептидами [99,138]. Антигенные липиды в комплексе с CD1 распознаются некоторыми Т-клетками, а также специализированными ЕКТ-клетками.

После захвата и процессинга антигенного материала ДК начинают созревать. Созревание ДК происходит под воздействием ряда консервативных факторов бактериальной или вирусной природы, так называемых РАМР -патоген-ассоциированных молекулярных структур (вирусной РНК и ее аналогов, компонентов бактериальной клеточной стенки), а также провоспали-тельных факторов, секретируемых при проникновении в организм микробов.

Например, при инфицировании организма грамотрицательными бактериями ведущую роль в индукции созревания ДК будет играть важный структурный компонент их наружной мембраны - ЛПС. Молекулы ЛПС состоят из гидрофильного гетерополисахарида и ковалентно связанного липидного компонента - липида А [180]. Гетерополисахарид подразделяется на сильно вариабельную О-специфическую цепь и более консервативный коровый оли-госахарид.

При росте и лизисе бактерий часть ЛПС отщепляется в окружающую среду. Свободный ЛПС представляет собой мощный бактериальный токсин, именуемый эндотоксином [180]. Однако, в отличие от многих других бактериальных токсинов, ЛПС не убивает сам по себе клетки и не ингибирует клеточные процессы, а требует для своего токсического действия активного ответа клеток хозяина. Согласно современным знаниям, ЛПС взаимодействует через липид А с рядом клеток, включая мононуклеарные клетки, эндотелий, гладкую мускулатуру, полиморфноядерные гранулоциты и тромбоциты [73].

В качестве РАМР ЛПС служит сигналом опасности для эффекторов врожденного иммунитета, в том числе и для ДК [95]. Главным рецептором ЛПС принято считать комплекс То11-подобного рецептора (TLR) 4 с CD 14 и дополнительной молекулой MD-2, который присутствует на поверхности ДК. Однако ЛПС способен взаимодействовать также с рядом других клеточных молекул, начиная с интегринов (CDllb/CD18) и кончая рецепторами хемо-кинов. Особо важную роль в процессе распознавания и ответа на ЛПС играют макрофаги/моноциты, продуцирующие под его воздействием биоактивные липиды, реактивные формы кислорода, оксид азота N0, ряд провоспали-тельных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8, ИЛ-12) и хемокины [73]. Умеренный уровень данных медиаторов воспаления способствует развитию защитных реакций организма на инфекцию. Однако их избыток может быть крайне опасен, ведет к сильному повышению температуры, гипотензии и даже к гибели от необратимого шока.

По мере созревания ДК в значительной степени теряют способность эндоцитировать и процессировать антигены [185]. Однако зрелые ДК сохраняют способность презентировать иммуногенные пептиды, не требующие предварительного процессинга внутри клетки [185]. Зрелые ДК стабильно экспрессируют на своей поверхности комплексы молекул ГКГ с пептидами [37]. От незрелых ДК они отличаются также экспрессией характерного маркера зрелых ДК - CD83, кроме того, в значительной степени возрастает количество костимулирующих молекул. Зрелые ДК экспрессируют ряд молекул адгезии (CD54), способствующих взаимодействию с Т-лимфоцитами и хемо-киновые рецепторы, такие как CCR7, которые необходимы для миграции в лимфатические узлы [186]. Кроме того, только зрелые ДК секретируют значительное количество цитокинов и хемокинов, необходимых для хемотаксиса и активации Т-клеток и других эффекторов иммунной системы (FLT3L, Г-КСФ, ИЛ-1а, -1(3, -2, -12, -6, CCL-2, -3, -4, -5, -17, -22, MIP-2) [39, 78]. Созревающие ДК мигрируют из тканей в афферентные лимфатические сосуды, где принимают форму вуалевидных клеток. В лимфатических узлах они полностью созревают и превращаются в интердигитатные ДК Т-зоны, где стимулируют специфический иммунный ответ Т-лимфоцитов. Интердигитатные ДК также присутствуют в миндалинах и белой пульпе селезенки.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Чикилева, Ирина Олеговна

выводы

1. Впервые показано, что соединения бактериального (ЛПС, белковые факторы вирулентности) и эукариотического (ганглиозиды, цитокины) происхождения могут активировать или ингибировать экспрессию костимули-рующих молекул и молекул антигенного представления на ДК.

2. Наиболее эффективным индуктором созревания дендритных клеток является ЛПС E.coli, в меньшей степени Y.pestis, а ЛПС F. tularensis не вызывает созревания дендритных клеток.

3. Секретируемый белковый фактор вирулентности Y.pestis LcrV подавляет экспрессию маркера зрелости ДК CD83, но в присутствии ЛПС E.coli LcrV обладает адъювантным действием на экспрессию CD83.

4. Капсульный антиген Y.pestis Cafl стимулирует повышение экспрессии на ДК костимулирующей молекулы CD80 и способствует индукции ДК ФНО-а.

5. Ганглиозид GM1 из бычьего мозга приблизительно в 2 раза понижает экспрессию молекул костимуляции CD86 дендритными клетками мыши при их получении из костного мозга в его присутствии, однако не влияет на иммунофенотип уже сформировавшихся дендритных клеток человека.

6. Альтернативная форма ИЛ-4 (ИЛ-452) не способна поддерживать экспрессию молекул костимуляции (CD86) на поверхности дендритных клеток, а также понижает, при длительной культивации в присутствии ее избытка, экспрессию молекул антигенного представления ГКГ-П HLA-DR, инду-цируюмую ИЛ-4.

7. ИЛ-452 выступает конкурентным ингибитором активации транскрипционного фактора STAT6 в ответ на стимуляцию клеток ИЛ-4.

чумных вакцин без потери их иммуногенности, но в присутствии низких доз какого-либо иммуностимулятора. 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

Несмотря на огромное количество исследований в отношении ДК и все возрастающий интерес к ним, наше знание об их развитии (путях дифферен-цировки, созревания, факторах, влияющих на их способность к представлению антигена и т.д.) все еще не достаточно полно. В данной работе было прослежено развитие и созревание ДК под воздействием различных факторов (белковых, ЛПС, ганглиозидов), как эукариотического, так и бактериального происхождения.

F. Sallusto и F. Lanzavecchia разработали эффективный метод получения ДК in vitro из моноцитов чекловека в присутствии комбинации ИЛ-4 и ГМ-КСФ [184]. Эта же комбинация цитокинов используется для развития мышиных ДК из КМП [130]. Для получения ДК из костного мозга мышей зачастую с достаточной эффективностью используется один лишь ГМ-КСФ [124, 125]. Первооткрыватели метода получения ДК человека из моноцитов отмечали, что АПК, хоть и с меньшей эффективностью и худшими способностями к презентации антигена, развиваются из моноцитов в присутствии одного из факторов (ГМ-КСФ либо ИЛ-4) [184]. Недавно появилась работа К. С. Roy et al. [183], разработавших эффективную методику получения ДК, не уступающих по своим способностям представлять антиген ДК, развившимся в присутствии традиционной комбинации цитокинов, под воздействием одного лишь ИЛ-4. Противоречие их данных с результатами основоположников метода получения ДК из моноцитов F. Sallusto и F. Lanzavecchia можно объяснить благодаря исследованию М. В. Lutz et al., показавших, что ИЛ-4 и ГМ-КСФ синергично участвуют в повышении уровня молекул костимуляции и ГКГ-П на поверхности ДК, компенсируя недостаток одного из цитокинов [125].

Нами было исследовано влияние на экспрессию на поверхности ДК молекул костимуляции (CD86) и ГКГ-П HLA-DR ИЛ-482, альтернативного сплайс-варианта ИЛ-4, в котором отсутствуют аминокислоты, закодированные во втором экзоне [12, 205], при разных концентрациях в среде ГМ-КСФ. При нормальной концентрции ГМ-КСФ (10 нг/мл) не наблюдалось разницы в экспрессии данных маркеров между клетками, которые выращивались со стандартной комбинацией ИЛ-4 и ГМ-КСФ, либо в присутствии одного лишь ГМ-КСФ, либо ГМ-КСФ и ИЛ-482. Однако при низкой концентрации ГМ-КСФ (1 нг/мл) наблюдалась совершенно другая картина. В присутствии пониженного содержания ГМ-КСФ, но нормальной концентрации ИЛ-4 развивались клетки с морфологией и фенотипом, типичным для ДК, полученных из моноцитов по стандартной методике. Единственное отмеченное отличие заключалось в повышенной доле клеток, несущих маркер зрелых ДК CD83. В отличие от ИЛ-4, его альтернативная форма оказалась не способна поддерживать экспрессию молекул костимуляции и ГКГ-П на поверхности клеток. Мало того, цитокин ингибировал экспрессию молекул ГКГ-П, индуцированную ИЛ-4. Подобная разница в действии двух форм ИЛ-4, очевидно, объясняется тем, что ИЛ-482 не способен активировать сигнальный каскад ИЛ-4, так как связывается лишь с высокоаффинной цепью гетеродимерного рецептора ИЛ-4, но не со вспомогательным компонентом (общая у-цепь, либо а-цепь рецептора ИЛ-13) [225]. Таким образом, как и в случае В-, Т-клеток и моноцитов [17, 19], альтернативная форма ИЛ-4 действует на ДК как антагонист ИЛ-4.

Кроме того, в данной работе был прослежен вероятный механизм ин-гибиторного действия ИЛ-482 на экспрессию молекул ГКГ-П HLA-DR. Было показано, что по мере повышения концентрации альтернативной формы ИЛ-4 в среде происходит подавление как эндогенной, так и индуцированной ИЛ-4 активности транскрипционного фактора STAT6. Активность данного фактора необходима для экспрессии молекул костимуляции CD86 и ГКГ-П [52, 125], а также для развития CD4+Тх2-клеток [176].

Последнее время весьма активно исследуются иммуносупрессивные факторы. К ним относят как белки, так и небелковые факторы эукариотического и бактериального происхождения. В этой работе было исследовано воздействие на ДК иммуносупрессивного белка возбудителя чумы Yersinia pestis антигена вирулентности LcrV и липида - ганглиозида GM1 из бычьего мозга. Белок LcrV подавил экспрессию на поверхности ДК человека маркера зрелости CD83, но несколько стимулировал молекулу костимуляции CD80. В присутствии ЛПС E.coli данный антиген кооперативно стимулирловал экспрессию CD83. Таким образом, его воздействие на ДК оказалось неоднозначным, несмотря на ряд исследований, показавших его подавляющее воздействие на макрофаги [191, 195, 199-201, 203]. Параллельно было показано, что кап-сульный антиген Yersinia pestis Cafl, структурно сходный с ИЛ-1 [7, 8], стимулирует секрецию у ДК ФНО-а и является индуктором их созревания.

Функции ганглиозидов весьма разнообразны: рецепция микробных токсинов, регуляция клеточного роста, диффреренцировки и гибели [206]. Ряд опухолей отщепляет ганглиозиды в межклеточное пространство, подавляя таким образом иммунный ответ [24, 51, 86, 112, 117, 132]. Как было показано в нашей работе, ганглиозид GM1 существенно нарушает развитие ДК из КМП мыши, но не влияет на уже сформировавшиеся из моноцитов ДК человека. Негативное воздействие других ганглиозидов на ДК и другие АПК было отмечено в ряде работ других исследователей [33, 162,196,197, 233].

Бактериальный ЛПС традиционно используется как один из мощных факторов созревания ДК [4, 22, 54, 59, 89]. Однако в литературе отсутствуют данные о сравнении воздействия ЛПС различных бактерий на ДК. Было проведено сравнительное исследование влияния на созревание ДК препаратов ЛПС E.coli, S.sonnei, S.typhi («Пирогенал»), Y.pestis и F.tularensis. Препарат ЛПС внутриклеточного паразита - возбудителя туляремии - F. tularensis оказался абсолютно не способен вызывать созревание ДК. В наибольшей степени активировал ДК эндотоксин E.coli. ЛПС Y.pestis, хоть и индуцировал созревание ДК, но гораздо слабее, чем эндотоксин E.coli. По-видимому, в ходе своей эволюции некоторые патогенные бактерии оказались способны модифицировать без потери жизнеспособности даже столь консервативную структуру, как ЛПС, так чтобы она активировала слабее или даже вовсе не активировала ДК (ЛПС F.tularensis). Вероятно, это представляет собой один из способов снизить реакции иммунной системы организма хозяина.

Вакцинация препаратами ЛПС F.tularensis оказывает профилактическое протективное воздействие при последующем инфицировании вирулентными штаммами бактерий [105]. Отсутствие у него свойств эндотоксина делает его абсолютно апирогенным, что значительно снижает побочные эффекты при вакцинации ЛПС F.tularensis [105]. Однако для более эффективной вакцинации препаратами на его основе может потребоваться добавление иммуностимуляторов.

Таким образом, ряд факторов существенно влияет на иммунофенотип ДК. Изменения в иммунофенотипе ДК отражают степень их зрелости (экспрессия маркера CD83) и способность к презентации антигена (молекулы костимуляции CD80 и CD86, ГКГ-П HLA-DR).

Большинство бактериальных ЛПС активируют созревание ДК, но в разной степени. Способностью активировать ДК обладает также капсульный белок Y.pestis Cafl. Необычный инертный ЛПС F.tularensis, у которого отсутствуют свойства эндотоксина, не способен индуцировать дифференциров-ку ДК в их зрелые формы.

Ганглиозид GM1 и альтернативная форма ИЛ-4 угнетают нормальную дифференцировку ДК, так как в их присутствии падает экспрессия молекул костимуляции и/либо ГКГ-П HLA-DR.

Фактор вирулентности Y.pestis LcrV, подавляющий активность макрофагов, имеет неоднозначное влияние на иммунофенотип ДК. Кроме того, его влияние на ДК меняется в зависимости от присутствия в среде веществ, активирующих ДК (ЛПС, ФНО-а).

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Чикилева, Ирина Олеговна, 2006 год

1. Васильева Г. И., Беспалова И. А., Мишанькин М. Б., Иванова И. А., Киселева А. К., Дорошенко Е. П., Омельченко Н. Д. Сравнительная оценка препаратов ЛПС Yersinia pestis, полученных разными методами.// Фундаментальные исследования. -2005. Стр. 25.

2. Пащенков М. В., Пинегин Б. В. Основные свойства дендритных клеток. //Иммунология. 2001. - с. 7-16.

3. Птитцын Л. Р., Смирнов,С. В., Альтман И. Б., Самсонова Н. Н., Ходя-кова А. В., Василенко Р. Н. Продукция рекомбинантного hIL-4 52 на-тивной изоформы человеческого интерлейкина-4 в клетках Escherichia coli.// Биоорг. Хим. - 1999. - т. 25. - стр. 623-9.

4. Ackerman A. L., Kyritsis C., Tampe R., Cresswell P., Early phagosomes in dendritic cells form a cellular compartment sufficient for cross presentation of exogenous antigens.//Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2003. - vol. 100. -p. 12889-12894.

5. Alms J. W., Atamas S. P., Yurovsky V. V., White B. Generation of a variant of human interleukin-4 by alternative splicing., Mol. Immunol., 1996, vol. 33, pp. 361-370.

6. Ancuta P., Pedron Т., Girard R., Sandstorm G., Chaby R. Inability of the Francisella tularensis lipopolysaccharide to mimic or to antagonize the induction of cell activation by endotoxins.// Infection and Immunity. 1996. -p. 2041-46.

7. Ardavin C., Wu L., Li C. L., Shortman K. Thymic dendritic cells and T cells develop simultaneously in the thymus from a common precursor popula-tion.//Nature. 1993. - vol. 362. - p. 761-763.

8. Ardavin C. Thymic dendritic cells.//Immunol. Today. 1997. - vol. 180. -p. 350-361.

9. Ardavin С., Martinez del Hoyo G., Martin, P., Anjuere F., Arias C. F., Marin A. R., Ruiz S., Parrillas V., Hernandes H. Origin and differentiation of dendritic cells. Trends in Immunology, 2001, vol. 22, p. 691-700.

10. Atamas S. P., Choi J., Yurovsky V. V., White B. An alternative splice variant of human IL-4, IL-452, inhibits IL-4-stimulated T cell proliferation., J. Immunol., 1996, vol. 156, p. 435-441.

11. Atamas S. P., White B. Interleukin-4 in systemic sclerosis: not just an in-crease.//Clin. Diagn. Lab. Immunol. 1999. - vol. 6. - p. 658-659.

12. Banchereau J., Steinman R. M. Dendritic cells and the control of immunity. Nature, 1998, vol. 392, p. 245-252.

13. Bernhard H., Meyer zum Buschenfelden К. H., Dippold W. G. Ganglioside GD3 shedding by human malignant melanoma cells.// Int. J. Cancer. 1989. -vol. 44.-p. 155.

14. Bjorck P. Isolation and characterization of plasmacytoid Dendritic cells from Flt3 ligand and granulocyte-macrophage colony-stimulating factor-treated mice.//Blood. -2001. vol. 98. - p. 3520-3526.

15. Blankenstein T. & Schuler T. Cross-priming versus cross-tolerance: are two signals enough? Trends in Immunology, 2002, vol. 23, p. 171-173.

16. Blom В., Ho, S., Antonenko S., Liu Y. J. Generation of interferon-a-producing predendritic cell(Pre-DC)2 from human CD34+ hematopoietic stem cells.//J. Exp. Med. 2000. - vol. 192. p. 1785-1795.

17. Bhattacharyya S., Sen P., Wallet M., Long В., Baldwin A. S. Jr., Tisch R. Immunoregulation of dendritic cells by IL-10 is mediated through suppression of the PI3K/Akt pathway and of IkappaB kinase activity.// Blood. -2004.-vol. 104.-p. 1100-1109.

18. Brasel K., De Smedt Т., Smith J. L., Maliszewski C. R. Generation of murine dendritic cells from flt3-ligand-supplemented bone marrow cultures.//Blood. 2000. - vol. 96. - p. 3029-3039.

19. Bruneteau M. Minka S. Lipopoly saccharides of bacterial pathogens from the genus Yersinia-, a mini-review.// Biochimie. 2003. - Vol. 85. - P. 145-52.

20. Caldwell S., Heitger A., Shen W., Liu Y., Taylor В., Ladisch S. Mechanisms of ganglioside inhibition of APC function.//! Immunol. 2003. vol. 171. -p. 1676-1683.

21. Cao W., Lee S. H., Lu J. CD83 is preformed inside monocytes, macrophages and dendritic cells, but it is only stably expressed on activated dendritic cells.//Biochem. J. 2005. - vol. 385. - p. 85-93.

22. Се11а M., Engering A., Pinet V., Pietras Т., Lanzavecchia A. Inflammatory stimuli induce accumulation of MHC class II complexes on dendritic cells.// Nature. 1997. - vol. 388. - p. 782-787.

23. Cella M., Jarrosay D., Facchetti F., Alebardi O., Nakajima H., Lanzavecchia A., Colonna M. Plasmacytoid monocytes migrate to inflamed lymph nodes and produce large amounts of type I interferon. //Nat. Med. 1999. - Vol. 5. -p. 919-923.

24. Cho В. K. A proposed mechanism for the induction of cytotoxic T lymphocyte production by heat shock fusion proteins. Immunity, 2000, vol. 12, p. 263-272.

25. Cho H. J., Takabayashi К., Cheng P. M., Nguyen M. D., Corr M., Tuck S., Raz E. Immunostimulatory DNA-based vaccines induce cytotoxic lymphocyte activity by a T-helper cell-independent mechanism.// Nat. Biotechnol.2000.-vol. 18.-p. 509-514.

26. Colonna M., Krug A., Cella M. Interferon-producing cells: on the front line in immune responses against pathogens.//Curr. Opin. Immunol. 2002. -vol. 14.-p. 373-379.

27. Corinti S., Albanesi C., La Sala A., Pastore S., Girolomoni G. Regulatory activity of autocrine IL-10 on dendritic cell functions.// J. Immunology.2001.-Vol. 166.-P. 4312-8.

28. Cowley S. C., Myltseva S. V., Nano F. E. Phase variation in Francisella tularensis affecting intracellular growth, lipopolysaccharide antigenicity and nitric oxide production.// Mol. Microbiol. 1996. - vol. 20. - p. 867-74.

29. Demangel C.,Palendira U., Feng C. G., Heath A. W., Bean A. G., Britton W. J. Stimulation of dendritic cells via CD40 enhabces immune responses to Mycobacterium tuberculosis infection.//Infect. Immunol. 2001. - vol. 69. -p. 2456-2461.

30. Deng W., Li R., Ladisch S. Influence of cellular gangliosides on tumor formation.// J. Natl. Cancer Inst. 2000. - vol. 92. - p. 912.

31. Deszo E. L., Braqke D. K., Kelley K. W., Freund G. G. IL-4-dependent CD86 expression requires JAK/STAT6 activation and is negatively regulated by PKCdelta. Cell Signal., 2004, vol. 16, p. 271-280.

32. Dhodapkar M. V., Bhardwaj N. Active immunization of humans with dendritic cells. J. Clin. Immunol., 2000, vol. 20, p. 167-173.

33. Dhodapkar M. V., Steinman R. M., Krasovsky J., Munz C., Bhardwaj N. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells.//J. Exp. Med. -2001.- vol. 193. p. 233-238.

34. Dixon D. R., Darveau R. P. Lipopolysaccharide heterogeneity: innate host responses to bacterial modification of lipid A structure.//J. Dent. Res. -2005.-vol. 84.-p. 584-595.

35. Elkord E., Williams P. E., Kynaston H., Rowbottom A. W. Human monocyte isolation methods influence cytokine production from in vitro generated dendritic cells. Immunology. - 2005. - Vol. 114 - P. 204-12.

36. Епк A. H. & Jonuleit H. How do dendritic cells prevent autoimmunity: what is a mature dendritic cell in the mouse? Trends in Immunology, 2001, vol. 22, p. 547.

37. Feng C. G., Demangel C., Kamath А. Т., Macdonald M., Britton W. J. Dendritic cells infected with Mycobacterium bovis Calmette Guerin activate CD8+ T cells with specificity for a novel mycobacterial epitope.// Int. Immunol.-2001.-vol. 13.-p. 451-458.

38. Ferlazzo G., Wesa A., Wei W. Z., Guli A. Dendritic cells generated from CD34+ progenitor cells or from monocytes differ in their ability to activate antigen-specific CD8+ T cells. J. Immunol., 1999, vol. 163, P. 3597.

39. Ferlazzo G., Munz C. NK cell compartments and their activation by dendritic cells./J. Immunology. 2004. - vol. 172-p. 1333-1339.

40. Fernandez N. C., Flament C., Crepineau F., Angevin E., Vivier E., Zitovgel L. Dendritic cells (DC) promote natural killer (NK) cell functions: dynamics of the human DC/NK cross talk. Eur. Cytokine Netw., 2002.- vol. 13,- p. 17-27.

41. Fields K.A., Nilles M. L., Cowan C., Straley S. C. Virulence role of V-antigen of Yersinia pestis at the bacteria surface.//Infect. Immunol. 1999. -vol. 67.-p. 5395-5408.

42. Fong L., Brockstedt D., Benike C., Engeman E. G. Dendritic cells injected via different routes induce immuni9ty in cancer patients.//! Immunol.2001.- vol. 166. p. 4254-4259.

43. Fonteneau J. F., Larsson M., Bhardwaj N., Interactions between dead cells and dendritic cells in the induction of antiviral CTL responses .//Curr. Opin. Immunol. 2002. - vol. 14. - p. 471-477.

44. Foss F. M. Immunologic mechanisms of antitumor activity. Semi. Oncol.,2002, vol. 29, p. 5-11.

45. Fulop M., Manchee R., Titball R. Role of lipopolysaccharide and a major outer membrane protein from Francisella tularensis in the induction of immunity against tularemia.// Vaccine. 1995. - vol. 13. - p. 1220-5.

46. Galanos C., Freudenberg M. A. Mechanisms of endotoxin shock and endotoxin hypersensitivity.//Immunobiology. 1993.- Vol. 187. - P. 346-356.

47. Galy A., Travis M., Cen D., Chen B. Human T, B, natural killer, and dendritic cells arise from a common bone marrow progenitor cell sub-set.//Immunity. 1995. - vol. 3. -p. 459-473.

48. Geiger J., Hutchinson R., Hohenkirk L., McKenna E., Chang A., Mule J. Treatment of solid tumors in children with tumor-lysate-pulsed dendritic cells. Lancet, 2000, vol. 356, p. 1163-1165.

49. Girolomoni G., Caux C., Dezutter-Dambuyant C., Lebecque C., Ricciardi-Castagnoli P. Langerhans cells : still a fundamental paradigm for studying the immunobiology of dendritic cells.//TREND in Immunology. 2002. -vol. 23.-p. 6-8.

50. Glare E. M., Divjak M., Rolland J. M., Walters E. H. Asthmatic airway biopsy specimens are more likely to express the IL-4 alternative splice variant IL-4delta2.//J. Allergy Clin. Immunol. 1999. - vol. 104. - p. 978-982.

51. Granucci F., Andrews D. M., Degli-Espoti M. A., Ricciardi-Castagnoli P. IL-2 mediates adjuvant effect of dendritic cells. Trends in Immunology, 2002, vol. 23, p. 169-171.

52. Griffith T. S., Wiley S. R., Kubin M. Z, Sedger L. M., Maliszewski C. R., Fanger N. A. Monocyte-mediated tumoricidal activity via the tumor factor-related cytokine, TRAIL. J. Exp. Med., 1999, vol. 189, p. 1343-1354.

53. Grouard G., Rissoan M.-C., Filgueira L., Durand I., Banchereau J., Liu Y.-J. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with IL-3 and CD40 ligand.//J. Exp. Med. 1997.-vol. 185.-p. 1101-1111.

54. Guermonprez P., Saveanu L., Kleijmeer M., Davoust J., Van Endert P., Amigorena S. ER-phagosome fusion defines an MHC class I cross presentation compartment in dendritic cells.//Nature. 2003. - vol. 425. - p. 397402.

55. Haase C., Jorgensen T. N., Michelsen В. K. Both exogenous and endogenous interleukin-10 affects the maturation of bone-marrow-derived dendritic cells in vitro and strongly influences T-cell priming in vivo JI Immunology. -2002.-vol. 107.-p. 489-499.

56. Harizi H., Norbert G. Inhibition of IL-6, TNF-alpha, and cyclooxygenase-2 protein expression by prostoglangin E2-induced IL-10 in bone marrow-derived Dendritic cells.// Cell Immunol. 2004. - vol. 228. - p. 99-109.

57. Hart D. N. J. Dendritic cells: unique leukocyte populations which control the primary immune response./Blood. 1997. - vol. 90. - p. 3245-3287.

58. Hasebe H., Nagayama H., Sato K., Enomoto M., Takeda Y., Takahashi T. A., Hasumi K., Eriguchi M. Dysfunctional regulation of the development of monocyte-derived dendritic cells in cancer patients. Bio-med.&Pharmacother., 2000, vol. 54, p. 291-298.

59. Heitge, A., Ladisch S. Gangliosides block antigen presentation by human monocytes.// Biochim. Biophys. Acta. 1996. - vol. 1303. - p. 161.

60. Hemmi H., Kaisho Т., Takeuchi O., Sato S., Sanjo H., Hoshino K., Horiuchi Т., Tomizawa H., Takeda K., Akira S. Small antiviral compounds activate immune cells via the TLR7 MyD88-dependent signaling pathway.//Nat. Immunol. 2002. - vol. 3. - p. 196-200.

61. Homma S., Toda G., Gong J., Kufe D., Ohno T. Preventive antitumor activity against hepatocellular carcinoma (HCC) induced by immunization with fusions of dendritic cells and HCC cells in mice. J. Gastroenterol., 2001, vol. 36, p. 764-771.

62. Holmstrom A., Olsson J., Cherepanov P., Maier E., Nordfelth R., Pettersson J., Benz R., Wolf-Watz H., Forsberg A. LcrV is a channel size-determining component of the Yop effector translocon of Yersinia.ll Mol. Microbiol. -2001.-vol. 39.-p. 620-632.

63. Jefford M., Maraskovsky E., Cebon J., Davis I. D. The use of dendritic cells in cancer therapy. Lancet Oncol., 2001, vol. 2, p. 343-353.

64. Joyce S., Van Kaer L. CD 1-restricted antigen presentation: an oily mat-ter.//Curr. Opin. Immunol. 2003. - vol. 15. - p. 95-104.

65. Kadowaki N., Antonenko S., Lau J. Y.-N., Liu Y.-J. Natural inter-feron-a/p-producing cells link innate and adaptive immunity.//J. Exp. Med. -2000.-vol. 192.-p. 219-226.

66. Katz S. I. Tamaki K., Sachs D. H. Epidermal Langerhans cells are derived from cells originating in bone marrow.//Nature. 1979. - vol. 282. -p. 324-326.

67. Kawahara K., Tsukano H., Watanabe H., Lindner В., Matsuura M. Modification of the structure and activity of lipid A in Yersinia pestis lipopolysaccharide by growth temperature.// Infection and Immunity.2002. Vol. 70. - pp. 4092-4098.

68. Keller R. Dendritic cells: their significance in health and disease. -Immunol. Letters, 2001, vol. 78, p. 113-122.

69. Kelly K. A., Lucas K., Hochrein H., Metcalf D., Wu L., Shortman K. Development of dendritic cells in culture from human and murine thymic precursor cells.//Cell Mol. Biol. (Noisy-le-grand). 2001. - vol. 47. - p. 4354.

70. Kieffer T. L., Cowley S., Nano F. E., Elkins K. L. Francisella novicida LPS has greater immunobiological activity in mice than F. tularensis LPS, and contributes to F. novicida murine pathogenesis.// Microbes Infect.2003.-vol. 5.-p. 397-403.

71. Kumagi Т., Akbar S. M., Horiike N., Onji M., Increased survival and decreased tumor size due to intratumoral injection of ethanol followed by administration of immature dendritic cells.//Int. J. Oncol. -2003. vol. 23. -p. 949-955.

72. Kumamoto Т., Huang E. К., Раек H. J., Morita A., Matsue H., Valen-tini R. F., Takashima A. Induction of tumor-specific protective immunity by in situ Langerhans cell vaccine.//Nat. Biotechnol. 2002. - vol. 20. - p. 6469.

73. Kutyrev V., Mehigh R. J., Motin V. L., Pokrovskaya M. S., Smirnov G. В., Brubaker R. R. Expression of the plague plasminogen activator in Yersinia pseudotuberculosis and Escherichia co/z.//Infection and Immunity. 1999.-Vol. 67.-P. 1359-1367.

74. Ladisch S., Kitada S., Hays E. F. Gangliosides shed by tumor cells enhance tumor formation in mice.// J. clin. Invest. 1987. - vol. 79. - p. 1879.

75. Lappin M. В., Weiss J. M., Delattre V., Mai В., Dittmar H., Maier C., Manke K., Grabbe S., Martin S., Simon J. C. Analysis of mouse dendritic cell migration in vivo upon subcutaneous and intravenous injection. Immunology, 1999, vol. 98, p. 181-188.

76. Lee W. Т., Tam C., Schneewind 0. LcrV, a substrate for Yersinia en-terocolitica type III secretion, is required for toxin targeting into the cytosol of HrLa cells.// J. Biol. Chem. 2000. - vol. 275. - p. 36869-36875.

77. Lipscomb M. F., Masten B. J. Dendritic cells: immune regulators in health and disease.// Physiol. Rev. 2002. - Vol. 82. - P. 97-130.

78. Lutz M. В., Kukutsch N., Oglivie A. L., Rossner S., Koch F., Romani N., Schuler G. An advanced culture method for generating large quantities of highly pure dendritic cells from mouse bone marrow.//J. Immunol. Methods. 1999.-vol. 223. p. 77-92.

79. Lyakh L. A., Koski G. K., Telford W., Gress R. E., Cohen P. A., Rice N. R. Bacterial lipopolysaccharide, TNF-a, and calcium ionophore under serum-free conditions promote rapid dendritic cell-like differentiation in

80. CD 14+monocytes through distinct pathways that activate NF-кВ.// J. Immunology. 2000. - vol. 165. - p. 3647-55.

81. MacDonald K. P. A., Munster D. J., Clark G. J., Dzionek A., Schmitz J., Hart D. N. J. Characterization of human blood Dendritic cell sub-sets.//Blood. -2002. vol. 100. -p-. 4512-4520.

82. Marquez C., Trigueros C., Fernandez E., Toribio M. L. The development of T and non-T cell lineages from CD34+ human thymic precursors can be traced by the differential expression of CD44.//J. Exp. Med. 1995. -vol. 181.-p. 475-483.

83. McBride J. M., Jung Т., de Vries J. E., Aversa G. IL-10 alters DC function via modulation of cell surface molecules resulting in impaired T-cell responces.//Cell Immunol. 2002. - vol. 215. - p. 162-172.

84. McKallip R., Li R., Ladisch S. Tumor gangliosides inhibit the tumor specific immune response.//J. Immunol. 1999. - vol. 163. - p. 3718.

85. McKenna K., Beignon A.-S., Bhardwaj N. Plasmacytoid dendritic cells: linking innate and adaptive immunity .//J. Virology. 2005. - vol. 79. -p. 17-27.

86. Menetrier-Caux C., Thomachot M. C., Alberti L., Montamin G., Blay J. Y. IL-4 prevents the blockade of dendritic cell differentiation induced by tumor cells. Cancer Res., 2001, vol. 61, p. 3096-3104.

87. Merad M., Sugie Т., Engleman E. G., Fong L. In vivo manipulation of dendritic cells to induce therapeutic immunity.//Blood. 2002. - vol. 99. -p. 1676-1682.

88. Metcalf D. Murine hematopoietic stem cells committed to macrophage dendritic cell formation: stimulation by Flk2 ligand with enhancement by regulators using the gpl30 receptor chain.// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1997. - vol. 94. p. 11552-11556.

89. Moody D. В., Porcelli S. A. Intracellular pathways of CD1 antigen presentation.//Nat. Rev. Immunol. 2003. - vol. 3. - p. 11-22.

90. Morel P. A. & Feili-Hariri M. How do dendritic cells prevent autoimmunity? Trends in Immunology, 2001, vol. 22, p. 546-547.

91. Morse M. A., Coleman R. E., Akabani G., Niehaus N., Coleman D., Lyerly H. K. Migration of human dendritic cells after injection in patients with metastatic malignancies. Cancer Res., 1999a, vol. 59, p. 56-58.

92. Nair S., McLaughlin C., Weizer A., Su Z., Boczkowski D., Dannull J., Vieweg J., Gilboa E. Injection of immature dendritic cells into adjuvant-treated skin obviates the need for ex vivo maturation.//! immunol. 2003. -vol. 171.-p. 6272-6285.

93. Nakamura I., Kajino K., Bamba H., Itoh F., Takikita M., Ogasawara K. Phenotypic stability of mature dendritic cells tuned by TLR or CD40 to control the efficiency of cytotoxic T cell priming.// Microbiol. Immunol. -2004.-vol. 48.-P. 211-219.

94. Nakano H., Yanagita M., Gurni M. D. CDllc+B220+Gr-l+ cells in mouse lymph nodes and spleen display characteristics of plasmacytoid dendritic cells.//J,. Exp. Med. -2001. vol. 194. -p. 1171-1178.

95. Nencioni A., Brossart P. Cellular immunotherapy with dendritic cells in cancer: current status.//Stem Cells. 2004. - vol. 22. - p. 501-513.

96. Nestle F. O., Alijagic S., Gilliet M., Sun Y., Grabbe S., Dummer R., Burg G., Schadendorf D. Vaccination of melanoma patients with peptide- or tumor lysate-pulsed dendritic cells. Natur. Med., 1996, vol. 2, p. 328-332.

97. Nouri-Shirazi M., Banchereau J., Fay J., Palucka K., Dendritic cell based tumor vaccines. Immunol. Letters, 2000, vol. 74, p. 5-10.

98. Olweus J., BitMansour A., Warnke R., Thompson P. A., Carballido J., Picker L. J., Lund-Johansen F. Dendritic cell ontogeny: a human dendritic cell lineage of myeloid origin.//Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1997. - vol. 94-p. 12551-12556.

99. O'Neill D. W., Adams S., Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer.//Blood. 2004. - vol. 104. -p. 2235-2246.

100. Oyston P. C. F., Prior J. L., Kiljunen S., Skurnik M, Hill J., Titball R. W. Expression of heterologous O-antigen in Yersinia pestis KIM does not affect virulence by the intravenous route.// J. Med. Microbiology. 2003. -vol. 52. - P. 289-294.

101. Parmiani G., Castelli, C., Dalerba P., Mortarini R., Rivoltini L., Marincola F. M, Anichini A. Cancer immunotherapy with peptide-based vaccines: what have we achieved? Where are we going? J. Natl. Cancer Inst, 2002, vol. 94, p. 805-818.

102. Раиска K. A., Taquet N., Sanchez-Chapuis F., Gluckman J. C. Dendritic cells as the terminal stage of monocyte differentiation.// J. Immunology. 1998. - Vol. 160. - P. 4587-95.

103. Peguet-Navarro J., Sportouch M., Popa I., Berthier O., Schmitt D., Portoukalian J. Gangliosides from human melanoma tumors impair Dendritic cell differentiation from monocytes and induce their apoptosis.//J. Immunol. 2003. - vol. 170. - p. 3488-3494.

104. Portoukalian J., Zwingelstein G., Dore J. F. Lipid composition of human malignant melanoma tumors at various levels of malignant growth.// Eur. J. Biochem. -1979. vol. 94-p. 14.

105. Portoukalian J., David M. J., Gain P., Richard M. Shedding of GD2 ganglioside in patients with retinoblastoma.// Int. J. Cancer. 1993. - vol. 53.-p. 948.

106. Price S. В., Cowan C., Perry R. D., Straley S. C. The Yersiniapestis V antigen is a regulatory protein necessary for Ca -dependent growth and maximal expression of low- Ca2+ response virulence genes.//J. Bacteriol. -vol. 173.-p. 2649-2657.

107. Prior J. L., Hitchen P. G., Williamson D. E., Reason A. J., Morris H. R., Dell A., Wren B. W., Titball R. W. Characterization of the lipopolysaccharide of Yersinia pestis.// Microb. Patog. 2001a. - Vol. 30. - P. 49-57.

108. Prior J. L., Parkhill J., Hitchen P. G., Mungall K. L., Stevens K., Morris H. R, Reason A. J, Oyston P. C, Dell A., Wren B. W., Titball R. W.

109. The failure of different strains of Yersinia pestis to produce lipopolysaccharide O-antigen under different growth conditions is due to mutations in the O-antigen gene cluster.// FEMS Microbiol. Lett. 2001b. - Vol. 197. - P. 229-33.

110. Ptitsyn L. R., Al'tman I. B. Recombinant Escherichia coli strains providing high level expression of human interleukin-3 and interleukin-4. Bui. Exp. Biol, and Med., 1995.-vol. 9.-Nl.-p. 83-85.

111. Rafiq Q., Bergtold A., Clynes R., Immune complex mediated antigen presentation induces tumor immunity.//J. Clin. Invest. 2002. - vol. 110. -p. 71-79.

112. Randollph G. J., Beaulieu S., Lebecque S., Steinman R. M., Muller W. A. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendo-thelial trafficking. Science, 1998, vol. 282, p. 480-483.

113. Randollph G. J., Inaba, K., Robbiani D. F., Steinman R. M., Muller W. A. Differentiation of phagocytic monocytes into lymph node dendritic cells in vzvo.//Immunity. 1999. - vol. 11. p. 753-761.

114. Ranjeny Т., Lipsky P. E. Dendritic cells: origin and differentiation. -1996.-vol. 14.-p. 196-206.

115. Rebeil R., Ernst R. K., Gowen В. В., Miller S. I., Hinnebusch B. J. Variation in lipid A structure in the pathogenic yersiniae.il Mol. Microbiol. -2004.-Vol. 52.-P. 1363-73.

116. Rengarajan J., Szabo S. J., Glimcher L. H. Transcriptional regulation of ТЫЯ112 polarization.//Immunol. Today. 2000. - vol. 21. - p. 479-483.

117. Res P. C., Couwenberg F., Vyth-Dreese F. A., Spits H. Expression of pTa mRNA in a committed Dendritic cell precursor in the human thy-mus.//Blood. -1999. vol. 94. - p. 2647-2657.

118. Rossi M. & Young J. W. Human dendritic cells: potent antigen-presenting cells at the crossroads of innate and adaptive immunity.//! Immunol.-2005.-vol. 175.-p. 1373-1381.

119. Sallusto F., Nicolo C., De Maria R., Corinti S., Testi R. Ceramide inhibits antigen uptake and presentation by dendritic cells. J. Exp. Med., 1996, vol. 184, N6, p. 2411-2416.

120. Sandstorm G., Sjostedt A., Johansson Т., Kuoppa K, Williams J. C. Immunogenicity and toxicity of lipopolysaccharide from Francisella tularensis LVS.// FEMS Microbiol. Immunol. 1992. - vol. 5. - p. 201-10.

121. Scandella E, Men Y, Gillessen S, Forster R, Groettrup M. Prostaglandin E2 is a key factor for CCR7 surface expression and migration of monocyte derived dendritic cells. Blood. 2002,- vol. 100. - p. 1354-1361.

122. Schmidt A, Rollinghoff M, Beuscher H. U. Suppression of TNF by V antigen of Yersinia spp. Involves activated T cells .//Eur. J. Immunol. -1999.-vol. 29. p. 1149-57.

123. Schott M. Immunourveillance by dendritic cells: potential implication for immunotherapy of endocrine cancers .//Endocrine-Related Cancer. -2006.-vol. 13.-p. 779-795.

124. Schreus M. W. J, Eggert A. A. O, De Boer A. J, Figdor C. G, Adema G. J. Generation and functional characterization of mouse monocyte-derived dendritic cells.//Eur. J. Immunol. 1999. vol. 29. - p. 2835-2841.

125. Seah G. T, Gao P. S, Hopkin M. J, Rook G. A. W. Interleukin-4 and its alternatively spliced variant (IL-482) in patients with atopic asthma.//Am. J.Respir. Crit. Care Med.-2001.-vol. 164.-p. 1016-1018.

126. Sharma R. K, Sodhi A, Batra H. V, Tuteja U. Effect of rLcrV an-drYopB from Yersinia pestis on murine peritoneal macrophages in vitro.ll Immunol. Lett. 2004. - vol. 93. -p. 179-87.

127. Shen W., Ladisch S. Gnglioside GDla impedes lipopoysaccharide-induced maturation of human Dendritic cells.//Cell Immunol. 2002. - vol. 220.-p. 125-133.

128. Shurin G. V., Shurin M. R., Bykovskaia S., Lotze M. Т., Barksdale E. M. Jr. Neuroblastoma-derived gangliosides inhibit Dendritic cell generation and function.//Cancer Res. 2001. - vol. 61. - p. 363-369.

129. Siegal F. P., Kadowaki N., Shodell M., Fitzgerald-Bocarsly P. A., Shah К., Ho, S., Antonenko S., Liu Y. J. The nature of the principal type I interferon-producing cells in human blood. Science, 1999, vol. 284, p. 1835-1837.

130. Sing A., Tvardovskaia N., Rost D., Kirsching C. J., Wagner H., Heesmann J. Contribution of toll-like receptors 2 and 4 in an oral Yersinia enterocolitica mouse infection model.// Int. J. Med. Microbiol. 2003. -vol. 293.-p. 341-8.

131. Skurnik M., Bengoechea J. A., The biosynthesis and biological role of lipopolysaccharide O-antigens of pathogenic Yersiniae.il Carbohydr. Res. -2003.-Vol. 338 -P. 2521-9.

132. Sodhi A., Sharma R. K., Batra H. V., Tuteja U. Mechanism of rLcrV and rYopB mediated immunosuppression in murine peritoneal macrophges.//Mol. Immunol. 2004. - vol. 41. - p. 767-74.

133. Sombroek M. J., Stam A. J., Masterson A. J., Lougheed S. M., Schakeel M. J., Meijer C. J., Pinedo H. M., van den Eertwegh A. J., Scheper

134. R. J., de Gruijl T. D. Prostanoids play a major role in the primary tumor induced inhibition of dendritic cell differentiation. J. Immunol., 2002, vol. 168, p. 4333-4343.

135. Sorg R. V., Enczmann J., Sorg U. R., Schneider E. M., Wernet P. Identification of an alternatively spliced transcript of human interleukin-4 lacking the sequence encoded by exon 2., Exp. Hematol, 1993, vol. 21, p. 560-563.

136. Spiegel S., Merrill A. H. JR. Sphingolipid metabolism and cell growth regulation.// FASEB J.- 1996. vol. 10. - pp. 1388-1397.

137. Steinbrink K., Wolfl M., Jonuleit H., Knop J., Enk A. H. Induction of tolerance by IL-10-treated Dendritic cells.//J. Immunol. 1997. - vol. 159. -p. 4772-4780.

138. Steinman R. M., Cohn Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution.//!. Exp. Med. 1973. - vol. 137.-p. 1142-1162.

139. Steinman R. M., Cohn Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. II. Functional properties in vitro.//L Exp. Med. 1974. - vol. 139. - p. 380-397.

140. Steinman R. M., Adams J. C., Cohn Z. A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. IV. Identification and distribution in mouse spleen.//J. Exp. Med. 1975. - vol. 141. - p. 804-820.

141. Steinman R. M, Witmer M. D. Lymphoid Dendritic cells are potent stimulators of the primary mixed leucocyte reaction in mice.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. - vol. 75. -p. 5132-5136.

142. Steinman R. M. The dendritic cell system and its role in immuno-genicity.// Annu. Rev. Immunol. 1991. - vol. 9 - p. 271 - 296.

143. Steinman R. M., Pope M. Exploiting dendritic cells to improve vaccine efficacy.// J. Clin. Investigation. 2002. - vol. 109.- p. 1519-1526.

144. Takeda K, Kishimoto T, Akira S. STAT6: its role in interleukin 4-mediated biological functions.//! Mol. Med. 1997. - vol. 75. - p. 317-326.

145. Tanaka H, Tanaka J, Kjaergaard J, Shu S. Depletion of CD4+CD25+ regulatory cells augments the generation of specific immune T cells in tumor-draining lymoph nodes.// J. Immunother. 2002. - vol. 25. - p. 207217.

146. Thurner M., Zelle-Rieser С., Ramoner R., Bartsch G., Holtl L. The disabled dendritic cell. FASEB J., 2001, vol. 15, p. 1054-1061.

147. Traver D., Akashi K., Manz M., Merad M., Miyamoto Т., Engleman E. G., Weissman I. L. Development of CD8a-positive Dendritic cells from а common myeloid progenitor.//Science. 2000. - vol. 290. - p. 2152-2154.

148. Triozzi P. L., Khurram R., Aldrich W. A., Walker M. J., Kim J. A., Jaynes S. Intratumoral injection of dendritic cells derived in vitro in patients with metastatic cancer. Cancer, 2000, vol. 89, p. 2646-2653.

149. Tsyuhida Т., Saxton R. E., Morton D. L., Irie R. F. Gangliosides of human melanoma.// J. Natl. Cancer Inst. 1987. - vol. 78. - p. 45.

150. Venezia D. N., Minka S., Bruneteau M., Mayer H., Michel G. Lipopo-lysaccharides from Yersinia pestis. Studies on lipid A of lipopolysaccharides I and II.// European J. Biochemistry. 1985. - Vol. 151. - P. 399-404.

151. Wallet M. A., Sen P., Tisch R. Immunoregulation of Dendritic cells.//Clinical Medicine&Research. -2005. vol. 3. - p. 166-175.

152. Westphal O. & Jann K. Bacterial lipopolisaccharides. Extraction with phenol-water and further application of the procedure.//Methods Carbohydr. Chem.- 1965.-vol. 5.-p. 83-91.

153. Wolfl M., Batten W. Y., Posovszky C., Bernhard H., Berthold F. Gangliosides inhibit the development from monocytes to dendritic cells.// Clin. Exp. Immunol. 2002. - vol. 130. p. 441-448.

154. Wu D. Y., Segal N. H., Sidobre S., Kronenberg M., Chapman P. B. Cross-presentation of disialoganglioside GD3 to natural killer T cells.//J. Exp. Med.-2003.-vol. 198.-p. 173-181.

155. Wu L., Scollay R., Egerton M., Pearse M., Spangrude G. J., Shortman K. CD4 expressed on earliest T-lineage precursor cells in the adult murine thymus.//Nature. 1991. - vol. 349. - p. 71-74.

156. Wu L., D'Amico A., Hochrein H., O'Keefe M., Shortman K., Lucas K. Development of thymic and splenic dendritic cell populations from different hematopoietic precursors.//Blood. 2001. - vol. 98. - p. 3376-3382.

157. Yang A. S, Lattime E. C. Tumor-induced interleukin-10 suppresses the ability of splenic dendritic cells to stimulate CD4 and CD8 T-cell responses.// Cancer Res. 2003. - vol. 63. - p. 2150-2157.