Сравнительные характеристики дендритных клеток человека, дифференцированных in vitro, и проявляющих иммуностимулирующие или иммунорегуляторные свойства тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат медицинских наук Каралкин, Павел Анатольевич

• Каралкин, Павел Анатольевич
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Каралкин, Павел Анатольевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Дендритные клетки — ключевое звено в первичном иммунологическом распознавании.

1.1.1. Типы дендритных клеток и их функциональная специализация в организме.

1.1.2. Клеточные взаимодействия в процессе развития первичного иммунного ответа. Роль дендритных клеток.

1.1.3. Возможные механизмы участия дендритных клеток в негативной регуляция иммунного ответа.

1.2. Особенности экспрессии генов в дендритных клетках.

1.2.1. Транскриптомный анализ в изучении генной экспрессии.

1.2.2. Экспрессия генов, отвечающих за иммунологические функции дендритных клеток.

1.3. Перспективы клинического применения дендритных клеток.

1.3.1. Способы создания терапевтических вакцин на основе дендритных клеток.

1.3.2. Вакцины на основе дендритных клеток в лечении онкологических и хронических инфекционных заболеваний.

1.3.3. Возможности клинического использования дендритных клеток, обладающих иммунорегуляторными свойствами.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Биологический материал.

2.1.1. Кровь.

2.1.2. Опухолевая ткань.

2.2. Культуры клеток.

2.2.1. Дифференцировка дендритных клеток в культуре.

2.2.2. Смешанные культуры лимфоцитов и дендритных клеток.

2.2.3. Получение и культивирование первичных культур опухолевых клеток.

2.2.4. Культура фибробластоподобных мезенхимальных стволовых клеток.

2.2.5. Сокультивирование ДК с мезенхимальными стволовыми клетками и клетками первичной опухолевой культуры.

2.3. Проточная цитофлуориметрия.

2.3.1. Анализ поверхностных и внутренних маркеров клеток.

2.3.2. Оценка пролиферации CD4+ Т-лимфоцитов.

2.3.3. Измерение IFN-y -продуцирующих Т-лимфоцитов.

2.3.4. Определение активности эндоцитоза.

2.4. Микроскопия.

2.5. Иммуноферментный анализ.53,

2.6. Транскриптомный анализ.

2.6.1. Выделение и анализ РНК.

2.6.2. Определение качества РНК.

2.6.3. Синтез комплементарной ДНК (кДНК).

2.6.4. Синтез и очистка меченой комплементарной РНК (кРНК).

2.6.5. Гибридизация кРНК.

2.6.6. Промывка чипов после гибридизации кРНК.

2.6.7. Получение и первичная обработка транскриптомных данных.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Изменение морфологии и экспрессии поверхностных маркеров при созревании дендритных клеток.

3.2. Секреция IL-12 дендритными клетками до и после их созревания.

3.3. Эндоцитоз микро- и наноразмерных частиц дендритными клетками.

3.4. Влияние секреторных факторов, продуцируемых клетками почечноклеточной карциномы и мезенхимальными стволовыми клетками, на созревание дендритных клеток в культуре.

3.5. Функциональная характеристика дендритных клеток в смешанной культуре с аллогенными Т-лимфоцитами.

3.6. Изменение профиля экспрессии генов при созревании дендритных клеток.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

4.1. Дифференцированные in vitro зрелые дендритные клетки активируют иммунный ответ по Txl-типу.

4.2. Незрелые дендритные клетки обладают повышенной способностью к эндоцитозу микро-, но не наноразмерных частиц.

4.3. Мезенхимальные стволовые клетки, в отличие от клеток рака почки, подавляют созревание дендритных клеток в культуре.

4.4. Незрелые дендритные клетки индуцируют анергию аллогенных Т-лимфоцитов, а не дифференцировку Т-регуляторных клеток.

4.5. Незрелые и зрелые дендритные клетки характеризуются экспрессией различных генов, отвечающих за иммунологическую регуляцию.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительные характеристики дендритных клеток человека, дифференцированных in vitro, и проявляющих иммуностимулирующие или иммунорегуляторные свойства»

Дендритные клетки (ДК) человека являются объектом интенсивного изучения как со стороны клеточных биологов и иммунологов, так и ученых, специализирующихся в области клинических исследований. Это обусловлено центральной ролью ДК в функционировании иммунной системы и возможностью их использования в терапевтических целях. Исключительные свойства ДК, как наиболее специализированных антигенпрезентирующих клеток в организме, проявляются в выраженной способности к инициации адаптивных иммунных реакций. Именно поэтому использование ДК в качестве «природных адъювантов» белковых антигенов находит все большее применение в различных направлениях клеточной иммунотерапии (Shortman and Caux, 1997; Steinman and Dhodapkar, 2001; Figdor et al., 2004).

В настоящее время ДК расцениваются как гетерогенная популяция антигенпрезентирующих клеток, широко распространенных в различных тканях организма, и непосредственно контролирующих развитие первичного иммунного ответа (Hart, 1997). Первоначальное взаимодействие ДК с наивными Т-лимфоцитами является ключевым событием индукции клеточного звена иммунитета и определяет направление будущего антигенспецифичского ответа. ДК способствуют дифференцировке специфических клонов Т-хелперов и эффекторных Т-лимфоцитов, действие которых направлено на уничтожение патогенных возбудителей, а также собственных клеток, зараженных вирусами, или претерпевших опухолевую трансформацию. С другой стороны, многочисленные данные указывают на то, что в зависимости от физиологических условий ДК могут осуществлять не только позитивную, но и негативную регуляцию иммунитета (Steinman et al., 2003). Толерогенные эффекты ДК могут проявляться в индукции анергии Т-лимфоцитов либо в индукции дифференцировки Т-регуляторных клеток, что необходимо для поддержания периферической толерантности иммунной системы к аутологичным антигенам (Adler and Steinbrink, 2007).

Пластичность функциональной активности ДК позволяет использовать их для создания терапевтических клеточных вакцин с целью коррекции иммунодепрессивных или аутореактивных состояний иммунной системы. Варьируя условия in vitro, можно получать иммуностимулирующие ДК для лечения онкологических и хронических инфекционных заболеваний или иммунорегуляторные ДК - для лечения аутоиммунных заболеваний и улучшения приживления аллотрансплантатов. Есть основания полагать, что ключевым показателем, определяющим по какому из двух путей пойдет иммунологический процесс, является степень зрелости ДК (Morelli, 2006). Таким образом, учитывая сложность и разнонаправленность проявляемых ДК иммунологических эффектов, чрезвычайно актуальным является изучение механизмов, обеспечивающих их стимулирующее или регуляторное действие.

Современные t высокопроизводительные методы молекулярной и клеточной биологии дают возможность проводить комплексную оценку иммунологических свойств ДК. Анализ экспрессии генома ДК позволяет определить гены, продукты которых обеспечивают их функционирование. На основе таких данных могут быть выявлены маркеры функционального состояния ДК и мишени для их фармакологической регуляции. Все это позволит повысить эффективность проводимой иммунотерапии клеточными вакцинами на основе ДК.

Целью настоящей работы явился сравнительный анализ in vitro функциональных особенностей незрелых и зрелых ДК, а также поиск различий в профилях их генной экспрессии.

Исходя из цели исследования, были сформулированы следующие конкретные задачи:

1. Отработать воспроизводимый метод дифференцировки и созревания ДК в культуре.

2. Изучить способность незрелых и зрелых ДК стимулировать иммунологические реакции в смешанной культуре с аллогенными Т-лимфоцитами.

3. Сравнить негативные иммунорегуляторные свойства, проявляемые ДК на разных стадиях созревания in vitro.

4. Сравнить фагоцитарную активность незрелых и зрелых ДК. Оценить возможность использования микро- и наноразмерных синтетических частиц для мечения и доставки антигенов внутрь ДК.

5. Изучить влияние секреторных факторов мезенхимальных стволовых и раковых клеток на созревание ДК.

6. Охарактеризовать дифференциальный профиль генной экспрессии незрелых и зрелых ДК.

Заключение диссертации по теме «Клеточная биология, цитология, гистология», Каралкин, Павел Анатольевич

выводы

1. Дифференцировка моноцитов периферической крови in vitro, индуцированная наличием в среде GM-CSF и IL-4 и дальнейшее созревание клеток в присутствии TNF-a и PGE2 позволяет получать зрелые дендритные клетки, стимулирующие иммунные реакции по Txl-типу.

2. Дендритные клетки не индуцируют образование CD4+CD25+Foxp3+ Т-регуляторных клеток в смешанной культуре с аллогенными лимфоцитами.

3. Незрелые дендритные клетки инициируют анергию Т-лимфоцитов в аллогенной смешанной культуре.

4. Незрелые дендритные клетки обладают повышенной способностью к эндоцитозу микро-, но не наноразмерных частиц. Наночастицы могут использоваться для мечения дендритных клеток вне зависимости от степени их зрелости.

5. Растворимые факторы, секретируемые мезенхимальными стволовыми клетками, оказывают негативное влияние на созревание дендритных клеток в культуре. Растворимые факторы почечноклеточной карциномы не влияют на этот процесс.

6. Транскриптомный анализ выявил наличие экспрессии ряда генов, включая LILRB2(ILT4), C1QB, HSD11B1, CD 163, продукты которых опосредуют иммунорегуляторные свойства незрелых ДК. В то же время зрелые ДК характеризуются повышенной экспрессией генов, кодирующих специфические молекулы адгезии, цитокины, хемокины, хемокиновые рецепторы и маркеры активации, необходимые для стимуляции адаптивного иммунитета.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате исследования нами были получены данные о механизмах, обеспечивающих разнонаправленное иммунологическое действие ДК человека. Был проведен сравнительный анализ in vitro функциональных особенностей незрелых и зрелых ДК, найдены существенные различия в профилях их генной экспрессии, что полностью соответствует заявленной цели работы.

Достижение цели исследования стало возможным в результате решения ряда конкретных задач: а) был отработан воспроизводимый метод индуцированной дифференцировки и созревания ДК человека в культуре; б) изучена способность незрелых и зрелых ДК стимулировать иммунологические реакции в смешанной культуре с аллогенными Т-лимфоцитами; в) проведено сравнение негативных иммунорегуляторных свойств, проявляемых ДК на разных стадиях созревания in vitro; г) оценена фагоцитарная активность незрелых и зрелых ДК с использованием микро- и наноразмерных частиц; д) изучено влияние секреторных факторов мезенхимальных стволовых и раковых клеток на созревание ДК; е) охарактеризован дифференциальный профиль генной экспрессии незрелых и зрелых ДК. Таким образом, в ходе выполнения работы в полном объеме были решены все поставленные задачи, получены экспериментальные результаты, которые должны найти свое применение как в области медико-биологических исследований, так и в клинической практике.

Было показано, что в смешанной культуре с аллогенными лимфоцитами зрелые ДК активируют иммунологические реакции, протекающие по Txl-типу, т.е. с преобладанием клеточного звена иммунитета. Данное свойство зрелых ДК может быть использовано при создании клеточных вакцин, направленных на лечение онкологических и хронических инфекционных заболеваний, поскольку именно этот тип иммунного ответа необходим для эффективной иммунотерапии. В то же время, было установлено, что незрелые ДК могут самостоятельно инициировать состояние анергии Тлимфоцитов в смешанной культуре. Таким образом, исходя из характера иммунорегуляторных свойств, незрелые ДК можно использовать для специфического подавления реактивных клонов Т-лимфоцитов в ходе иммунотерапии аутоиммунных заболеваний, а также для улучшения результатов приживления аллотрансплантатов.

При изучении физиологических свойств ДК нами было установлено, что они обладают различными механизмами эндоцитоза в зависимости от размера поглощаемых частиц. Исходя из полученных данных, микроразмерные частицы можно использовать в процессе создания клеточных вакцин для оценки фагоцитарной активности ДК, а также, при необходимости, осуществлять с их помощью активную загрузку антигенов в незрелые ДК. Наноразмерные частицы, в свою очередь, могут быть использованы для мечения ДК вне зависимости от степени созревания с целью определения их локализации после введения в организм.

Для изучения иммунологических свойств ПКК нами был разработан метод оценки чистоты получаемых первичных культур раковых клеток, основанный на измерении уровней экспрессии поверхностных маркеров CD24, CD70 и CD90. Этот метод может найти свое применение в биомедицинских исследованиях рака почки для отделения раковых клеток от клеток стромы.

Кроме того, в нашей работе впервые был проведен сравнительный полногеномный транскриптомный анализ, характеризующий изменение спектра экспрессии генов при созревании ДК, стимулированном добавлением комбинации факторов TNF-a и PGE2 в культуру. Полученные профили генной экспрессии могут быть востребованы для разработки новых фармакологических препаратов, модулирующих функцию ДК при проведении иммунотерапии.

В целом стоит отметить, что полученные в ходе настоящей работы данные могут быть использованы при создании и проведении доклинических исследований клеточных вакцин на основе ДК, обладающих иммуностимулирующей или иммунорегуляторной активностью. В то же время широкое клиническое внедрение подобных вакцин в медицинскую практику сопряжено с выработкой конкретных протоколов, включающих оптимальный метод загрузки антигенов, а также схему вакцинации для достижения эффективного терапевтического ответа при конкретных заболеваниях. Изучение подобных методологических аспектов должно явиться предметом будущих исследований. i

1 1 ■и

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Каралкин, Павел Анатольевич, 2010 год

1. Арчаков А.И. Постгеномные технологии и молекулярная медицина // Вестник РАН, Т.74, 2004, С.423-429.

2. Арчаков А.И., Говорун В.М. Методы и подходы в протеомике // Биохимия, 2002, №67, С. 1341-1359.

3. Воробьев А.А., Быков А.С., А.В. Караулов. Иммунология и аллергология / М.: Практическая медицина, 2006, 288 с.

4. Лупатов А.Ю., Каралкин П.А., Суздальцева Ю.Г., Бурунова В.В., Ярыгин В.Н., Ярыгин К.Н. Цитофлюориметрический анализ фенотипов фибробластоподобных клеток из костного мозга и пуповины человека // Клет. техн. в биол. и мед., 2006, №4, С.212-217.

5. Лысов Ю., Флорентьев В., Хорлин А., Мирзабеков А. Определение нуклеотидной последовательности ДНК гибридизацией с олигонуклеотидами // Докл. Акад. наук СССР, 1988, Т. 303, С.1508-1511.

6. Прокопович С.К., Винницкий В.Б. Дендритные клетки и перспективы их использования в иммунотерапии злокачественных новообразований // Онкология, 2001, №2-3, С. 126-131.

7. Телетаева Г.М. Цитокины и противоопухолевый иммунитет // Практ. Онкология, 2007, №4, С.211-218.

8. Ярилин А.А. Основы иммунологии / М.: Медицина, 1999, 608 с.

9. Adler H.S., Steinbrink К. Tolerogenic dendritic cells in health and disease: friend and foe // Eur. J. Dermatol., 2007, v. 17, P.476-491.

10. Akira S., Takeda K., Kaisho T. Toll-like receptors: critical proteins linking innate and acquired immunity //Nat. Immunol., 2001, v.2, P.675-680.

11. Alwine J.C., Kemp D.J., Stark G.R. Method for detection of specific RNAs in agarose gels by transfer to diazobenzyloxymethyl-paper and hybridization with DNA probes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1977, v.74, P.5350-5354.

12. Ammon C., Mondal K., Andreesen R., Krause S.W. Differential expression of the transcription factor NF-kappaB during human mononuclear phagocyte differentiation to macrophages and dendritic cells // Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000, v.268, P.99-105.

13. Apostolopoulos Y., Pietersz G.A., McKenzie I.F. MUC1 and breast cancer. Curr. Opin. Mol. Ther., 1999, v.l, P.98-103.

14. Banchereau J., Palucka A.K. Dendritic cells as therapeutic vaccines against cancer // Nat. Rev. Immunol., 2005, v.5, P.296-306.

15. Baumjohann D., Lutz M.B. Non-invasive imaging of dendritic cell migration in vivo II Immunobiology, 2006, v.211, P.587-597.

16. Bell G.W., Lewitter F. Resources for small regulatory RNAs // Curr. Protoc. Mol. Biol., 2009, Ch.19, Unitl9.8.

17. Berger T.G., Schulze-Koops H., Schafer M., Muller E., Lutz M.B. Immature and maturation-resistant human dendritic cells generated from bone marrowrequire two stimulations to induce T cell anergy in vitro II PLoS One, 2009, V.4, e6645.

18. Berzofsky J.A., Terabe M., Oh S., Belyakov I.M., Ahlers J.D., Janik J.E., Morris J.C. Progress on new vaccine strategies for the immunotherapy and prevention of cancer // J. Clin. Invest., 2004, v.l 13, P. 1515-1525.

19. Beyth S, Borovsky Z, Mevorach D, Liebergall M, Gazit Z, Asian H, Galun E, Rachmilewitz J: Human mesenchymal stem cells alter antigen-presenting cell maturation and induce T-cell unresponsiveness // Blood, 2005, Y.105, P.2214-2219.

20. Bohnenkamp H.R., Noll T. Development of a standardized protocol for reproducible generation of matured monocyte-derived dendritic cells suitable for clinical application // Cytotechnology, 2003, Y.42, P. 121-131.

21. Bottino C., Castriconi R., Moretta L., Moretta A. Cellular ligands of activating NK receptors // Trends Immunol., 2005, v.26, P.221-226.

22. Brandes M., Willimann K., Bioley G., Levy N., Eberl M., Luo M., Tampe R., Levy F., Romero P., Moser B. Cross-presenting human gammadelta T cells induce robust CD8+ alphabeta T cell responses // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2009, v.106, P.2307-2312.

23. Cambi A., Lidke D.S., Arndt-Jovin D.J., Figdor C.G., Jovin T.M. Ligand-conjugated quantum dots monitor antigen uptake and processing by dendritic cells // Nano Lett., 2007, V.7, P.970-977.

24. Castellano G., Woltman A.M., Nauta A.J., Roos A., Trouw L.A., Seelen M.A., Schena F.P., Daha M.R., van Kooten C. Maturation of dendritic cells abrogates Clq production in vivo and in vitro II Blood, 2004, V.l03, P.3813-3820.

25. Chen Z., Moyana Т., Saxena A., Warrington R., Jia Z., Xiang J. Efficient antitumor immunity derived from maturation of dendritic cells that had phagocytosed apoptotic/necrotic tumor cells // Int. J. Cancer., 2001, v.93, P.539-548.

26. Chomarat P., Dantin C., Bennett L., Banchereau J., Palucka A.K. TNF skews monocyte differentiation from macrophages to dendritic cells // J. Immunol., 2003, v.171, P.2262-2269.

27. Christopherson K. 2nd, Hromas R. Chemokine regulation of normal and pathologic immune responses // Stem Cells, 2001, v. 19, P.3 88-396.

28. Chung D.J., Rossi M., Romano E., Ghith J., Yuan J., Munn D.H., Young J.W. Indoleamine 2,3-dioxygenase-expressing mature human monocyte-derived dendritic cells expand potent autologous regulatory T cells // Blood, 2009, V.l 14, P.555-563.

29. Colonna M., Nakajima H., Cella, M. A family of inhibitory and activating Ig-like receptors that modulate function of lymphoid and myeloid cells // Semin. Immunol., 2000, V.12, P.121-127.

30. Conway Т., Schoolnik G.K. Microarray expression profiling: capturing a genome-wide portrait of the transcriptome // Mol. Microbiol., 2003, v.47, P.879-889.

31. Coquerelle C., Moser M. Are dendritic cells central to regulatory T cell function? // Immunol. Lett., 2008, V.l 19, P.12-16.

32. Corcoran L., Ferrero I., Vremec D., Lucas K., Waithman J., O'Keeffe M., Wu L., Wilson A., Shortman K. The lymphoid past of mouse plasmacytoid cells and thymic dendritic cells // J. Immunol., 2003, v. 170, P.4926-4932.

33. Coyle A.J., Gutierrez-Ramos J.C. The expanding B7 superfamily: increasing complexity in costimulatory signals regulating T cell function // Nat. Immunol., 2001, v.2, P.203-209.

34. Curiel T.J. Tregs and rethinking cancer immunotherapy // J. Clin. Invest., 2007, v.117, P.l 167-1174.

35. Decker W.K., Xing D., Shpall E.J. Dendritic cell immunotherapy for the treatment of neoplastic disease // Biol. Blood. Marrow. Transplant., 2006, v.12, P.l 13-125.

36. Dejbakhsh-Jones S., Jerabelc L., Weissman I.L., Strober S. Extrathymic matutation of alpha beta T cells from hemopoietic stem cells // J. Immunol., 1995, V.155, P.3338-3344.

37. Dieckmann D., Plottner H., Berchtold S., Berger Т., Schuler G. Ex vivo isolation and characterization of CD4(+)CD25(+) T cells with regulatory properties from human blood//J. Exp. Med., 2001, v.193, P.1303-1310.

38. Dietz A.B., Bulur P.A., Knutson G.J., Matasic R., Vuk-Pavlovic S. Maturation of human monocyte-derived dendritic cells studied by microarray hybridization // Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000, v.275, P.731-738.

39. Dorf M.E., Kuchroo V.K., Collins M. Suppressor T cells: some answers but more questions // Immunol. Today., 1992, v. 13, P.241-243.

40. Drexhage H.A., Mullinlc H., de Groot J., Clarke J., Balfour B.M. A study of cells present in peripheral lymph of pigs with special reference to a type ofcell resembling the Langerhans cell // Cell. Tissue Res., 1979, v.202, P.407-430.

41. Druyan S., de Oliveira J.E., Ashwell C.M. Focused microarrays as a method to evaluate subtle changes in gene expression // Poult Sci., 2008, v.87, P.2418-2429.

42. Fazekas de St Groth B. DCs and peripheral T cell tolerance // Semin. Immunol., 2001, v. 13, P.311-322.

43. Ferlazzo G., Tsang M.L., Moretta L., Melioli G., Steinman R.M., Mtinz C. Human dendritic cells activate resting natural killer (NK) cells and are recognized via the NKp30 receptor by activated NK cells // J. Exp. Med. 2002, v.195, P.343-351.

44. Figdor C.G., van Kooyk Y., Adema G.J. C-type lectin receptors on dendritic cells and Langerhans cells // Nat. Rev. Immunol., 2002, v.2, P.77-84.

45. Figdor C.G., de Vries I.J., Lesterhuis W.J., Melief C.J. Dendritic cell immunotherapy: mapping the way // Nat. Med., 2004, V.10, P.475-480.

46. Flatekval G.F., Sioud M. Modulation of dendritic cell maturation and function with mono- and bifunctional small interfering RNAs targeting indoleamine 2,3-dioxygenase //Immunology, 2009, V.128(Suppl), e837-848.

47. Foged C., Brodin В., Frokjaer S., Sundblad A. Particle size and surface charge affect particle uptake by human dendritic cells in an in vitro model I I Int. J. Pharmaceutics, 2005, v.98, P.315-322.

48. Freudenthal P.S., Bhardwaj N. Dendritic cells in human blood and synovial exudates // Int. Rev. Immunol., 1990, v.6, P.103-116.

49. Frohman E.M., van den Noort S., Gupta S. Astrocytes and intracerebral immune responses // J. Clin. Immunol., 1989, v.9, P. 1-9.

50. Frumento G., Piazza Т., Di Carlo E., Ferrini S. Targeting tumor-related immunosuppression for cancer immunotherapy // Endocr. Metab. Immune Disord. Drug Targets, 2006, v.6, P.233-237.

51. Gallucci S., Matzinger P. Danger signals: SOS to the immune system. Curr. Opin. Immunol., 2001, V. 13, P. 114-119.

52. Gant T.W., Zhang S.D., Taylor E.L. Novel genomic methods for drug discovery and mechanism-based toxicological assessment // Curr. Opin. Drug Discov. Devel., 2009, v. 12, P.72-80.

53. Garg S., Oran A., Wajchman J., Sasaki S., Maris C.H., Kapp J.A., Jacob J. Genetic tagging shows increased frequency and longevity of antigen-presenting, skin-derived dendritic cells in vivo II Nat. Immunol., 2003, v.4, P.907-912.

54. Gilliet M., Liu YJ. Generation of human CD8 T regulatory cells by CD40 ligand-activated plasmacytoid dendritic cells // J. Exp Med., 2002, v.l95, P.695-704.

55. Goldberg A.L., Rock K.L. Proteolysis, proteasomes and antigen presentation //Nature, 1992, v.357, P.375-379.

56. Goldschneider I., Cone R.E. A central role for peripheral dendritic cells in the induction of acquired thymic tolerance // Trends. Immunol., 2003, v.24, P.77-81.

57. Grouard G., Rissoan M.C., Filgueira L., Durand I., Banchereau J., Liu Y.J. The enigmatic plasmacytoid T cells develop into dendritic cells with interleukin (IL)-3 and CD40-ligand // J. Exp. Med., 1997, v. 185, P. 1101-1111.

58. Groux H. Type 1 T-regulatory cells: their role in the control of immune responses // Transplantation, 2003, v.75, P.8S-12S.

59. Han Т.Н., Jin P., Ren J., Slezak S., Marincola F.M., Stroncek D.F. Evaluation of 3 clinical dendritic cell maturation protocols containing lipopolysaccharide and interferon-gamma // J. Immunother., 2009, V.32, P.399-407.

60. Hart D.N.J. Dendritic Cells: Unique Leukocyte Populations Which Control the Primary Immune Response // Blood, 1997, v.90, P.3245-3287.

61. Huang Q., Liu D., Majewski P., Schulte L.C., Korn J.M., Young R.A., Lander E.S., Hacohen N. The plasticity of dendritic cell responses to pathogens and their components // Science, 2001, v.294, P.870-875.

62. Holt P.G., Schon-Hegrad M.A., McMenamin P.G. Dendritic cells in the respiratory tract // Int. Rev. Immunol., 1990, v.6, P. 139-149.

63. Hsu F.J, Benike С., Fagnoni F., Liles T.M., Czerwinski D., Taidi В., Engleman E.G., Levy R. Vaccination of patients with B-cell lymphoma using autologous antigen-pulsed dendritic cells //Nat. Med., 1996, v.2, P.52-58.

64. Imai Y., Yamakawa M., Kasajima T. The lymphocyte-dendritic cell system // Histol. Histopathol., 1998, v. 13, P.469-510.

65. Inaba K., Pack M., Inaba M., Sakuta H., Isdell F., Steinman R.M. High levels of a major histocompatibility complex on dendritic cells from the T cell areas of lymph nodes // J. Exp. Med., 1997, v. 186, P.665-672.

66. Jager D., Jager E., Knuth A. Vaccination for malignant melanoma: recent developments // Oncology, 2001, v.60, P. 1-7.

67. Jarrossay D., Napolitani G., Colonna M., Sallusto F., Lanzavecchia A. Specialization and complementarity in microbial molecule recognition by human myeloid and plasmacytoid dendritic cells // Eur. J. Immunol., 2001, v.31, P.3388-3393.

68. J Fong L., Brockstedt D., Benike C., Wu L., Engleman E.G. Dendritic cells injected via different routes induce immunity in cancer patients // Immunol. 2001, v.166, P.4254-4259.

69. Jonuleit H., Schmitt E. The regulatory T cell family: distinct subsets and their interrelations // J. Immunol., 2003, v. 171, P.6323-6327.

70. Jordan M.S., Boesteanu A., Reed A.J., Petrone A.L., Holenbeck A.E., Lerman M.A., Naji A., Caton A.J. Thymic selection of CD4+CD25+ regulatory T cells induced by an agonist self-peptide // Nat. Immunol., 2001, v.2, P.301-306.

71. Junker K., Hindermann W, von Eggeling F., Diegmann J., Haessler K., Schubert J. CD70: a new tumor specific biomarker for renal cell carcinoma // J. Urol, 2005, v.173, P.2150-2153.

72. Kadowaki N, Antonenko S, Lau J.Y, Liu Y.J. Natural interferon a/(3-producing cells link innate and adaptive immunity // J. Exp. Med, 2000, v.192, P.219-226.

73. Kaye J., Kersh G., Engel I., Hedrick SM. Structure and specificity of the T cell antigen receptor// Semin. Immunol., 1991, v.3, P.269-281.

74. Kelsall B.L., Stiiber E., Neurath M., Strober W. Interleukin-12 production by dendritic cells. The role of CD40-CD40L interactions in Thl T-cell responses // Ann. N. Y. Acad. Sci., 1996, v.795, P.l 16-126.

75. Khorlin A.A., Khrapko K.R., Ivanov I.B., Lysov Yu.P., Yershov G.K., Vasilenko S.K., Florentiev V.L., Mirzabekov A.D. An oligonucleotide matrix hybridization approach to DNA sequencing // Nucleic Acids Symp. Ser., 1991, v.24, P.l91-192.

76. Kiama S.G., Cochand L., Karlsson L., Nicod L.P., Gehr P. Evaluation of phagocytic activity in human monocyte-derived dendritic cells // J. Aerosol. Med., 2001., v. 14, P.289-299.

77. Kidd P. Thl/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implications for health and disease //Altern. Med. Rev., 2003, v.8, P.223-246.

78. Kiertscher S.M., Luo J., Dubinett S.M., Roth M.D. Tumors promote altered maturation and early apoptosis of monocyte-derived dendritic cells // J. Immunol., 2000, V.164, P.1269-1276.

79. Kim R., Emi M., Tanabe K. Cancer immunosuppression and autoimmune disease: beyond immunosuppressive networks for tumour immunity // Immunology, 2006, V.l 19, P.254-264.

80. Kimber I., Cumberbatch M. Stimulation of Langerhans cell migration by tumor necrosis factor alpha (TNF-alpha) // J. Invest. Dermatol., 1992, v.99, P.48-50.

81. Koller M., Willheim M., Krugluger W., Kurz M., Hocker P., Forster O., Boltz-Nitulescu G. Immunophenotyping of human bone marrow-derived macrophages // Scand. J. Immunol., 1996, v.43, P.626-632.

82. Корр E.B., Medzhitov R. The Toll-receptor family and control of innate immunity // Curr. Opin. Immunol., 1999, v.l 1, P. 13-18.

83. Kovacsovics-Bankowski M., Clark K., Benacerraf В., Rock K.L. Efficient major histocompatibility complex class I presentation of exogenous antigenupon phagocytosis by macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993, v.90, P.4942-4946.

84. Krampera M, Glennie S, Dyson J, Scott D, Laylor R, Simpson E, Dazzi F. Bone marrow mesenchymal stem cells inhibit the response of naive and memory antigen-specific T cells to their cognate peptide // Blood, 2003, V.101, P.3722-3729.

85. Kronick M.N. Creation of the whole human genome microarray // Expert. Rev. Proteomics, 2004, v.l, P. 19-28.

86. Kuwana M. Induction of anergic and regulatory T cells by plasmacytoid dendritic cells and other dendritic cell subsets // Hum. Immunol., 2002, v.63, P.l 156-1163.

87. Kyewski В., Klein L. A central role for central tolerance // Annu. Rev. Immunol., 2006, v.24, P.571-606.

88. Lashkari D.A., DeRisi J.L., McCusker J.H., Namath A.F., Gentile C., Hwang S.Y., Brown P.O., Davis R.W. Yeast microarrays for genome wide parallel genetic and gene expression analysis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1997, v.94, P. 13057-13062.

89. Le Blanc K. Immunomodulatory effects of fetal and adult mesenchymal stem cells // Cytotherapy, 2003, v.5, P.485-489.

90. Lee N.H., Saeed A.I. Microarrays: an overview // Methods Mol. Biol., 2007, v.353, P.265-300.

91. Liau L.M., Black K.L., Prins R.M., Sykes S.N., DiPatre P.L., Cloughesy T.F., Becker D.P., Bronstein J.M. Treatment of intracranial gliomas with bone marrow-derived dendritic cells pulsed with tumor antigens // J. Neurosurg., 1999, v.90, P.l 115-1124.

92. Lim S.C., Oh S.H. The role of CD24 in various human epithelial neoplasias // Pathol. Res. Pract., 2005, v.201, P.479-486.

93. Lipscomb M.F., Masten В.J. Dendritic cells: immune regulators in health and disease // Physiol Rev., 2002, v.82, P.97-130.

94. Liu G., Wu C., Wu Y., Zhao Y. Phagocytosis of apoptotic cells and immune regulation // Scand. J. Immunol., 2006, v.64, P.l-9.

95. Liu Z., Tugulea S., Cortesini R., Suciu-Foca N. Specific suppression of T helper alloreactivity by allo-MHC class I-restricted CD8+CD28- T cells // Int. Immunol., 1998, v.10, P.775-783.

96. Lutz M.B. Differentiation stages and subsets of tolerogenic dendritic cells / Handbook of Dendritic Cells Biology, Diseases and Therapy. 2006. Weinheim: VCH-Wiley. P.517-543.

97. Macian F., Im S.H., Garcia-Cozar F.J., Rao A. T-cell anergy // Curr. Opin. Immunol., 2004, v. 16, P.209-216.

98. MacPherson G.G., Jenkins C.D., Stein M.J., Edwards C. Endotoxinmediated dendritic cell release from the intestine. Characterization of released dendritic cells and TNF dependence // J. Immunol., 1995, v. 154, P: 1317-1322.

99. Maldonado-Lopez R., Moser M. Dendritic cell subsets and the regulation of Thl/Th2 responses // Semin. Immunol., 2001, v.13, P.275-282.

100. Manavalan J.S., Rossi P.С., Vlad G., Piazza F., Yarilina A., Cortesini R., Mancini D., Suciu-Foca N. High expression of ILT3 and ILT4 is a general feature of tolerogenic dendritic cells // Transpl. Immunol., 2003, V.l 1, P.245-258.

101. Martin-Fontecha A., Sebastiani S., Hopken U.E., Uguccioni M., Lipp M., Lanzavecchia A., Sallusto F. Regulation of dendritic cell migration to the draining lymph node: impact on T lymphocyte traffic and priming // J. Exp. Med., 2003, v.198, P.615-21.

102. Masten B.J., Yates J.L., Pollard Koga A.M., Lipscomb M.F. Characterization of accessory molecules in murine lung dendritic cell function: roles for CD80, CD86, CD54, and CD40L // Am. J. Respir. Cell. Mol. Biol., 1997, v. 16, P.335-342.

103. Melief C.J. Cancer immunotherapy by dendritic cells // Immunity, 2008, V.29, P.372-383.

104. Merlo A., Tagliabue E., Menard S., Balsari A. Matured human monocyte-derived dendritic cells (MoDCs) induce expansion of CD4+CD25+FOXP3+ T cells lacking regulatory properties // Immun. Lett., 2008, Y.l 17, P.106-113.

105. Messmer D., Messmer В., Chiorazzi N. The global transcriptional maturation program and stimuli-specific gene expression profiles of human myeloid dendritic cells // Int. Immunol., 2003, v.15, P.491-503.

106. Miller M.J., Hejazi A.S., Wei S.H., Cahalan M.D., Parker I. T cell repertoire scanning is promoted by dynamic dendritic cell behavior and random T cell motility in the lymph node // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 2004, v. 101, P.998-1003.

107. Mitchell D.A., Nair S.K., Gilboa E. Dendritic cell/macrophage precursors capture exogenous antigen for MHC class I presentation by dendritic cells // Eur. J. Immunol., 1998, v.28, P. 1923-1933.

108. Moestrup S.K., Moller H.J. CD 163: a regulated hemoglobin scavenger receptor with a role in the anti-inflammatory response // Ann. Med., 2004, V.36, P.347-354.

109. Morelli A.E. The immune regulatory effect of apoptotic cells and exosomes on dendritic cells: its impact on transplantation // Am. J. Transplant., 2006, v.6, P.254-261.

110. Morelli A.E., Thomson A.W. Dendritic cells: regulators of alloimmunity and opportunities for tolerance induction //Immunol Rev., 2003, v.196, P.125-146.

111. Moretta A., Vitale M., Sivori S., Morelli L., Pende D., Bottino C. Inhibitory and activatory receptors for HLA class I molecules in human natural killer cells // Chem. Immunol., 1996, v.64, P.77-87.

112. Mosier D. A requirement for two cell types for antibody formation in vitro 11 Science, 1967, v.158, P.1573-1575.

113. Nair S., Babu J.S., Dunham R.G., Kanda P., Burke R.L., Rouse B.T. Induction of primary, antiviral cytotoxic, and proliferative responses with antigens administered via dendritic cells // J. Virol., 1993, v.67, P.4062-4069.

114. Nauta A.J., Kruisselbrink A.B., Lurvink E., Willemze R., Fibbe W.E. Mesenchymal stem cells inhibit generation and function of both CD34+-derived and monocyte-derived dendritic cells // J. Immunol., 2006, v. 177, P.2080-2087.

115. Norbury C.C., Hewlett L.J., Prescott A.R., Shastri N., Watts C. Class I MHC presentation of exogenous soluble antigen via macropinocytosis in bone marrow macrophages // Immunity, 1995, v.3, P.783-791.

116. O'Neill D.W., Adams S., Bhardwaj N. Manipulating dendritic cell biology for the active immunotherapy of cancer // Blood, 2004, v.104, P.2235-2246.

117. Pariset L., Chillemi G., Bongiorni S., Spica V.R., Valentini A. Microarrays and high-throughput transcriptomic analysis in species with incomplete availability of genomic sequences //N. Biotechnol., 2009, v.25, P.272-279.

118. Pavli P., Woodhams C.E., Doe W.F., Hume D.A. Isolation and characterization of antigen-presenting dendritic cells from the mouse intestinal lamina propria // Immunology, 1990, v.70, P.40-47.

119. Prazma C.M., Tedder T.F. Dendritic cell CD83: a therapeutic target or innocent bystander? // Immunol. Lett., 2008, v.l 15, P.l-8.

120. Provenzano M., Mocellin S. Complementary techniques: validation of gene expression data by quantitative real time PCR // Adv. Exp. Med. Biol., 2007, v.593, P.66-73.

121. Pytlik R., Hofman P., Kideryova L., Cervinkova P., Obrtlikova P., Salkova J., Trneny M., Klener P. Dendritic cells and T lymphocyte interactions in patients with lymphoid malignancies // Physiol. Res., 2008, v.57, P.289-298.

122. Randolph G.J., Angeli V., Swartz M.A. Dendritic-cell trafficking to lymph nodes through lymphatic vessels //Nat. Rev. Immunol, 2005, v.5, P.617-628.

123. Randolph G.J., Beaulieu S., Lebecque S., Steinman R.M., Muller W.A. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendothelial trafficking // Science, 1998, v.282, P.480-483.

124. Rissoan M.C, Soumelis V, Kadowaki N, Grouard G, Briere F, de Waal Malefyt R, Liu Y.J. Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation // Science, 1999, v.283, P.l 183-1186.

125. Rock K.L, Shen L. Cross-presentation: underlying mechanisms and role in immune surveillance // Immunol. Rev, 2005, v.207, P. 166-183.

126. Rutella S, Danese S, Leone G. Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age // Blood, 2006, v.108, P.1435-1440.

127. Ryan JM, Barry FP, Murphy JM, Mahon BP. Mesenchymal stem cells avoid allogeneic rejection // J. of Inflamm. 2005; 2:8.

128. Ryman-Rasmussen J.P, Riviere J.E, Monteiro-Riviere N.A. Surface coatings determine cytotoxicity and irritation potential of quantum dot nanoparticles in epidermal keratinocytes // J. Invest. Dermatol, 2007, v.127, P.143-153.

129. Scandella E, Men Y, Gillessen S, Forster R, Groettrup M. Prostaglandin E2 is a key factor for CCR7 surface expression and migration of monocyte-derived dendritic cells // Blood, 2002, V.100, P.1354-1361.

130. Schena M., Shalon D., Heller R., Chai A., Brown P.O., Davis R.W. Parallel human genome analysis: microarray-based expression monitoring of 1000 genes//Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v.93, P.10614-10619.

131. Schwartz R.H., Mueller D.L., Jenkins M.K., Quill H. T-cell clonal anergy // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol., 1989, V.54, P.605-610.

132. Shi G.P., Munger J.S., Meara J.P., Rich D.H., Chapman H.A. Molecular cloning and expression of human alveolar macrophage cathepsin S, an elastinolytic cysteine protease // J. Biol. Chem., 1992, V.267, P.7258-7262.

133. Shortman K., Caux C. Dendritic cell development: multiple pathways to nature's adjuvants // Stem Cells, 1997, v. 15, P.409-419.

134. Shortman K., Liu Y.J. Mouse and human dendritic cell subtypes // Nat. Rev. Immunol., 2002, v.2, P. 151-161.

135. Siegal F.P., Fitzgerald-Bocarsly P., Holland B.K., Shodell M. Interferon-alpha generation and immune reconstitution during antiretroviral therapy for human immunodeficiency virus infection // AIDS, 2001, v. 15, P. 1603-1612.

136. Smits H.H., de Jong E.C., Wierenga E.A., Kapsenberg M.L. Different faces of regulatory DCs in homeostasis and immunity // Trends. Immunol., 2005, v.26, P.123-129.

137. Sprent J. Antigen-presenting cells. Professionals and amateurs // Curr. Biol., 1995, v.5, P.1095-1097.

138. Stanley M.A. Human papillomavirus vaccines // Curr. Opin. Mol. Ther., 2002, v.4,P.l5-22.

139. Starzl Т.Е., Demetris A.J., Trucco M., Murase N., Ricordi C., Ildstad S., Ramos H., Todo S., Tzakis A., Fung J.J. Cell migration and chimerism after whole-organ transplantation: the basis of graft acceptance // Hepatology, 1993, v.l7,P.l 127-1152.

140. Steinbrink K., Wolfl M., Jonuleit H., Knop J., Enk A. Induction of tolerance by IL-10-treated dendritic cells // J. Immunol., 1997, v. 159, P.4772-4780.

141. Steinman R.M. The dendritic cell system and its role in immunogenicity // Annu. Rev. Immunol., 1991, v.9, P.271-296.

142. Steinman R.M., Cohn Z.A. Identification of a novel cell type in peripheral lymphoid organs of mice. I. Morphology, quantitation, tissue distribution // J. Exp. Med., 1973, v.137, P. 1142-1162.

143. Steinman R.M., Dhodapkar M. Active immunization against cancer with dendritic cells: the near future // Int. J. Cancer., 2001, v.94, P.459-473.

144. Steinman R.M., Hawiger D., Nussenzweig M.C. Tolerogenic dendritic cells // Annu. Rev. Immunol., 2003, v.21, P.685-711.

145. Strickland F.M., Kripke M.L. Immune response associated with nonmelanoma skin cancer // Clin. Plast. Surg., 1997, v.24, P.637-647.

146. Thomas R., Lipsky P.E. Dendritic cells: origin and differentiation // Stem Cells, 1996, v.14, P.196-206.

147. Thomson A.W., Sacks J.M., Kuo Y.R., Ikeguchi R., Horibe E.K., Unadkat J., Solari M.G., Feili-Hariri M., Lee W.P. Dendritic ceil therapy in composite tissue allotransplantation // Transplant Proc., 2009, V.41, P.537-538.

148. Trayhurn P. Northern blotting // Proc. Nutr. Soc., 1996, v.55, P.583-589.

149. Treon S.P., Raje N., Anderson K.C. Immunotherapeutic strategies for the treatment of plasma cell malignancies // Semin. Oncol., 2000, v.27, P.598-613.

150. Tuan R.S., Boland G., Tuli R. Adult mesenchymal stem cells and cell-based tissue engineering // Arthritis Res. Ther., 2003, v.5, P.32-45.

151. Villadangos J.A., Cardoso M., Steptoe R.J., van Berkel D., Pooley J., Carbone F.R., Shortman К. MHC class II expression is regulated in dendritic cells independently of invariant chain degradation // Immunity, 2001, v.14, P.739-749.

152. Walsh S.R., Bhardwaj N., Gandhil R.T. Dendritic cells and the promise of therapeutic vaccines for human immunodeficiency virus (HIV)-l // Curr. HIV Res., 2003, v.l,P.205-216.

153. Wang J., Ioan-Facsinay A., van der Voort E.I., Huizinga T.W., Toes R.E. Transient expression of FOXP3 in human activated nonregulatory CD4+ T cells // Eur. J. Immunol., 2007, V.37, P.129-138.

154. Weiner H.L. Induction and mechanism of action of transforming growth factor-beta-secreting Th3 regulatory cells // Immunol. Rev., 2001, v. 182, P.207-214.

155. Whiteside T.L., Stanson J., Shurin M.R., Ferrone S. Antigen-processing machinery in human dendritic cells: up-regulation by maturation and down-regulation by tumor cells // J. Immunol., 2004, v.l73, P. 1526-1534.

156. Wilson S.B., Delovitch T.L. Janus-like role of regulatory iNKT cells in autoimmune disease and tumour immunity // Nat. Rev. Immunol., 2003, v.3, P.211-222.

157. Wolf A.M., Wolf D., Steurer M., Gastl G., Gunsilius E., Grubeck-Loebenstein B. Increase of regulatory T cells in the peripheral blood of cancer patients. Clin Cancer Res., 2003, v.9, P.606-612.

158. Woltman A.M., van Kooten C. Functional modulation of dendritic cells to suppress adaptive immune responses // J. Leukoc. Biol., 2003, v.73, P.428-441.

159. Yang F., Yang X.F. New concepts in tumor antigens: their significance in future immunotherapies for tumors // Cell. Mol. Immunol., 2005, v.2, P.331-341.

160. Yang L., Carbone DP. Tumor-host immune interactions and dendritic cell dysfunction // Adv. Cancer. Res., 2004, v.92, P. 13-27.

161. Yannelli J.R., Wroblewski J.M. On the road to a tumor cell vaccine: 20 years of cellular immunotherapy // Vaccine, 2004, v.23, P.97-113.

162. Zhou L.J., Tedder T.F. CD 14+ blood monocytes can differentiate into functionally mature CD83+ dendritic cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1996, v.93, P.2588-2592.

163. Zhou Т., Chen Y., Hao L., Zhang Y. DC-SIGN and immunoregulation // Cell. Mol. Immunol., 2006, v.3, P.279-283.

164. Ziegler S.F. FOXP3: of mice and men // Annu. Rev. Immunol., 2006, V.24, P.209-226.

165. Zinov'ev A.S., Kononov A.V. Chronic inflammation of mucous membranes: integration of immunity and regeneration // Arkh. Patol., 1997, v.59, P. 18-24.