Влияние чумного микроба и его антигенов на функционально-метаболическую активность электрокинетически гетерогенных субпопуляций фагоцитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Фирстова, Виктория Валерьевна

• Фирстова, Виктория Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фирстова, Виктория Валерьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЭЛЕКТРОКИНЕТИЧЕСТКИЙ ПОТЕНЦИАЛ КЛЕТОК И ЕГО ИЗМЕНЕНИЕ В ПРОЦЕССЕ ИММУНОГЕНЕЗА (обзор литературы)

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. ИЗМЕНЕНИЕ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЙ ПОДВИЖНОСТИ КЛЕТОК СИСТЕМЫ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ МОНОНУКЛЕАРОВ В ПРОЦЕССЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ (IN VIVO И IN VITRO) С ВАКЦИННЫМ ШТАММОМ ЧУМНОГО МИКРОБА

3.1. Изменения электрофоретической подвижности макрофагов белых мышей, иммунизированных штаммом У.ревИв EV

43

43

3.2. Изменения электрофоретической подвижности макрофагов мышей линии CC57W, иммунизированных Y.pestis EV 4g

3.3. Изменения электрофоретической подвижности макрофагов белых мышей в процессе взаимодействия in

vitro с Y.pestis EV ^

3.4. Изменение электрофоретической подвижности моноцитов крови людей в процессе взаимодействия in vitro

с Y.pestis EV qq

ГЛАВА 4. ИЗМЕНЕНИЯ ЭЛЕКТРОФОРЕТИЧЕСКОЙ ПОДВИЖНОСТИ КЛЕТОК СИСТЕМЫ ФАГОЦИТИРУЮЩИХ МОНОНУКЛЕАРОВ ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ IN VIVO И IN VITRO С АНТИГЕНАМИ ЧУМНОГО МИКРОБА

4.1. Изменение электрофоретической подвижности индуцированных перитонеальных макрофагов белых мышей в процессе взаимодействия с основным соматическим антигеном чумного микроба in vivo

4.2. Изменение электрофоретической подвижности индуцированных перитонеальных макрофагов белых мышей в процессе взаимодействия с антигеном чумного микроба Fl in vivo

4.3. Изменение электрофоретической подвижности индуцированных перитонеальных макрофагов морских свинок в процессе взаимодействия с антигеном чумного микроба Fl in vivo

4.4. Изменение электрофоретической подвижности моноцитов крови людей в процессе взаимодействия с основным соматическим антигеном чумного микроба in

vitro

4.5. Изменение электрофоретической подвижности моноцитов крови людей в процессе взаимодействия in vitro с антигеном чумного микроба FI

Глава 5. ИССЛЕДОВАНИЕ (ПРИ ВЗАИМОДЕЙСТВИИ С Y.PESTIS EV IN VITRO) ФУНКЦИОНАЛЬНО-МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЭЛЕКТРОФОРЕ-ТИЧЕСКИ ГЕТЕРОГЕННЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ФАГОЦИТОВ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА

5.1. Исследование (при взаимодействии с Y.pestis EV in vitro) функциональной активности электрокинетически гетерогенных субпопуляций нейтрофильных лейкоцитов

93

93

5.2. Исследование (при взаимодействии с антигенами Y.pestis EV in vitro) метаболической активности элек-трофоретически гетерогенных субпопуляций моноцитов

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

140

УСЛОВНЫЕ ОБОЗНАЧЕНИЯ

Р1 - капсульный антиген чумного микроба

п - количество экспериментальных моделей

р - вероятность ошибки

г - коэффициент корреляции

Эг - погрешность коэффициента корреляции

Г-6-ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

ЛДГ - лактатдегидрогеназа

ЛФ - лимфоциты

МДГ - малатдегидрогеназа

Мн - моноциты

МФ - мононуклеарные фагоциты

МФС - система мононуклеарных фагоцитов

НФ - нейтрофильные лейкоциты

ОСА - основной соматический антиген чумного микроба

ПФП - пентозофосфатный путь

СДГ - сукцинатдегидрогеназа

№ Фр - номер фракции

ЭФП - электрофоретическая подвижность

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние чумного микроба и его антигенов на функционально-метаболическую активность электрокинетически гетерогенных субпопуляций фагоцитов»

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Совершенствование специфической профилактики чумы является одной из актуальных задач иммунологии. Решение этой проблемы требует комплексного подхода, который включает в себя исследование механизмов формирования противочумного иммунитета. Фундаментальными исследованиями ряда ученых (Пустовалов В.Л. с соавт.,1984; Васильева Г.И. с соавт.,1990-1998; Ледванов М.Ю. с соавт., 1990-1997; Веркина Л.М., 1994) было доказано, что течение вакцинного и инфекционного процессов при чуме в значительной степени зависит от исхода взаимодействия клеток макрофагального звена с возбудителем инфекции.

К настоящему времени изучено влияние чумного микроба и его антигенов на ряд функциональных, метаболических и морфологических изменений клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ). Современные представления о роли клеток СМФ основываются на их гетерогенности по функциональной активности, экспрессии поверхностных структур, регуляторным и эффекторным свойствам. Мононук-леарные фагоциты выполняют множество функций в большинстве из которых участвует клеточная поверхность и большое количество мембран-связанных плазматических молекул клеток (рецепторы к Рс-части иммуноглобулина, к компонентам комплемента, к терминалу сахарных остатков и т.д.). Необычайная сложность проблемы гетерогенности фагоцитарных клеток требует разработки новых нетрадиционных подходов к ее анализу. Одним из методов тестирования функционального состояния клеток СМФ является определение их элек-трофоретической подвижности (ЭФП), обусловленной величиной электрического заряда клеток. Электрический заряд, структура по-

верхностной мембраны и функциональные свойства клетки находятся в тесной взаимосвязи. Метод проточного распределительного клеточного электрофореза в свободном потоке дает возможность изучить характер изменений ЭФП клеток под действием на организм или непосредственно на мононуклеарные фагоциты различных антигенов и вакцин. В работах ряда исследователей (Ермакова Г.В.,1982; Корсуков В.Н.,1984; Ледванов М.Ю., 1984; Тихомирова Л.А.,1985; Тихомирова Е.И.,1990) показана возможность использования данного метода в качестве важного иммунологического критерия, характеризующего изменения ЭФП лимфоцитов в процессе иммуногенеза к чуме. Тем не менее, нами не было найдено работ, касающихся динамики изменений ЭФП фагоцитирующих клеток при формировании иммунитета к чуме. Неизвестна популяционная и функциональная гетерогенность фагоцитов, различающихся по признаку электрофоретиче-ской подвижности. Известно, что популяции клеток СМФ различаются по экспрессии ключевых ферментов окислительного и гликолитиче-ского пути метаболизма (Хаитов P.M., 1995). Однако сравнительной оценки биохимических показателей электрокинетически гетерогенных популяций фагоцитов при взаимодействии с различными штаммами чумного микроба до настоящего времени не проводилось.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучить влияние чумного микроба и его антигенов на функционально-метаболическую активность электрокинетически гетерогенных популяций фагоцитирующих клеток, определить возможность использования показателей электрофоретической подвижности фагоцитов для оценки иммунобиологических свойств чумного микроба и его антигенов, а также иммуномониторинга противочумного вакцинного процесса.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Изучить влияние иммунизации мышей (беспородных и инбредных) вакцинным штаммом Y.pestis EV на изменение электрофоретической подвижности перитонеальных макрофагов.

2. Определить характер и количественные критерии изменения электрофоретической подвижности перитонеальных макрофагов при взаимодействии in vitro с клетками Y.pestis EV.

3. Изучить влияние иммунизации мышей и морских свинок основным соматическим и капсульным антигенами Y.pestis на изменение электрофоретической подвижности перитонеальных макрофагов.

4. Установить изменения электрофоретической подвижности моноцитов крови людей при взаимодействии in vitro с основным соматическим и капсульным антигенами Y.pestis.

5. Провести сравнительный анализ изменений ключевых ферментов пентозофосфатного пути обмена углеводов (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы), цикла Кребса (сукцинатдегидрогеназы) и гликолиза (лактатдегидрогеназы) в электрокинетически гетерогенных фракциях фагоцитов в динамике взаимодействия с основным соматическим и капсульным антигенами Y.pestis.

6. Изучить функциональную активность электрокинетически гетерогенных популяций макрофагов при взаимодействии in vitro с клетками Y.pestis EV.

7. Определить возможность использования показателей электрофоретической подвижности фагоцитов для оценки иммунобиологических свойств чумного микроба и его антигенов, а также для иммуномонито-ринга противочумного вакцинного процесса.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые с использованием свободного распределительного клеточного электрофореза в потоке показано, что иммунизация белых мышей вакцинным штаммом Y.pestis EV сопровождается снижением электрофоретической подвижности основного пула перитонеальных макрофагов и появлением электрофоретически гетерогенных популяций. Обнаружено, что изменения электрокинетических свойств макрофагов в процессе иммуногенеза к чуме зависят от генотипа животных. Инбредная линия мышей CC57W реагирует меньшим, по сравнению с беспородными, снижением электрофоретической подвижности (ЭФП) макрофагов. Выявлены характерные для линии CC57W особенности формирования электрофоретически гетерогенных популяций перитонеальных макрофагов.

Впервые установлено, что иммунизация белых мышей основным соматическим и капсульным антигенами чумного микроба вызывает снижение ЭФП основной массы макрофагов, формирующих в большинстве сроков исследования две электрофоретически различающиеся популяции. Капсульный антиген обладает более выраженной, по сравнению с основным соматическим, способностью снижать ЭФП фагоцитов. Макрофаги неиммунизированных морских свинок формируют пять электрофоретически гетерогенных популяций. Иммунизация морских свинок капсульным антигеном сопровождается резким снижением ЭФП макрофагов и преобладанием трех элекрофоретически различающихся популяций клеток.

Новыми являются данные, показавшие, что адгезия макрофагов к стеклу, сопровождающаяся активацией клеток, приводит к фазному изменению ЭФП популяций фагоцитов - снижению ЭФП, сменяющемуся повышением их электрокинетического потенциала. Взаимодействие in vitro макрофагов животных и моноцитов крови людей с клетками и

антигенами Y.pestis EV сопровождается характерными изменениями конфигурации кривой распределения макрофагов по электрофорети-ческой подвижности.

Впервые исследован в электрокинетически гетерогенных популяциях фагоцитов характер изменений активности ключевых ферментов углеводного обмена. Показано, что взаимодействие in vitro антигенов чумного микроба с моноцитами крови людей сопровождается снижением их электрофоретической подвижности и увеличением внутриклеточной активности ключевых ферментов пентозофосфатного пути обмена углеводов - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и гиколитического пути - лак-татдегидрогеназы. Под влиянием капсульного антигена активность сукци-натдегидрогеназы снижается. Внутри общего пула выделенных моноцитов максимальные ферментативные активности регистрируются в субпопуляциях, характеризующихся более высокой электрофоретической подвижностью.

Комплексный анализ функциональной (фагоцитарного индекса и фагоцитарной активности) и метаболической активности различных типов фагоцитов позволил выявить наличие стереотипной реакции мембран в процессе активации клеток, выражающейся в снижении их электрокинетического потенциала.

На модели взаимодействия (in vivo и in vitro) фагоцитирующих клеток с чумным микробом и его антигенами подтверждена необходимость пересмотра представлений и подходов к оценке роли этих клеток в иммунопатогенезе чумы с учетом их популяционной гетерогенности.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Определены количественные критерии изменений электрофоретической подвижности мак-

и

рофагов, нейтрофильных лейкоцитов и моноцитов при контакте in vivo и in vitro с чумным микробом и его антигенами. Расширены границы области практического применения проточного клеточного распределительного электрофореза для изучения функциональной активности отдельных популяций фагоцитирующих клеток. Показана эффективность использования тестирования электрофоретической подвижности фагоцитов для характеристики иммунобиологических свойств антигенов чумного микроба и иммуномониторинга противочумного вакцинного процесса. Метод определения электрофоретической подвижности фагоцитирующих клеток (тестирование формирования электро-кинетически гетерогенных популяций фагоцитов) рекомендуется для использования на этапах испытания новых или усовершенствованных противочумных вакцинных препаратов, а также при составлении рациональных схем иммунизации и при экспериментальной разработке патогенетически обоснованных способов иммунокоррекции.

ВНЕДРЕНИЕ В ПРАКТИКУ. По материалам экспериментальных исследований составлены методические рекомендации: "Оценка попу-ляционного состава клеток системы мононуклеарных фагоцитов методом разделительного клеточного электрофореза", которые были обсуждены и одобрены Ученым Советом РНИПЧИ "Микроб" (протокол №15 от 19 ноября, 1996г), утверждены директором 19 ноября, 1996г. Метод применяется в научных исследованиях на кафедре гистологии (СГМУ), НИИ кардиологии при СМУ, 5-ой детской объединенной инфекционной больницы г.Саратова, о чем имеются соответствующие акты о внедрении. Материалы диссертационного исследования используются при чтении лекций на курсах специализации врачей по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей-

бактериологов и иммунологов общей медицинской сети (при институте "Микроб").

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

^Характеристика основных закономерностей влияния in vivo и in vitro чумного микроба на функционально-метаболическую активность электрокинетически гетерогенных субпопуляций фагоцитирующих клеток.

2.Зависимость изменения электрокинетических свойств макрофагов в процессе иммуногенеза к чуме от генотипа животных.

3.Новые данные сравнительного анализа электрокинетических свойств макрофагов, моноцитов, нейтрофильных лейкоцитов при взаимодействии с основным соматическим и капсульным антигенами чумного микроба.

4.Новые данные сравнительного анализа изменений активности ферментов углеводного обмена (глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, сукцинатдегидрогеназа, лактатдегидрогеназа, малатдегидрогеназа) в электрокинетически гетерогенных субпопуляциях фагоцитов в динамике иммунногенеза к чуме.

5.Установление обратной коррелятивной зависимости между функционально-метаболической активностью фагоцитов и их электрокинетической подвижностью.

6.Доказательства эффективности использования свободного распределительного клеточного электрофореза для оценки популяцион-ной гетерогенности и функциональной активности клеток системы мо-нонуклеарных фагоцитов в динамике иммуногенеза к чуме.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Материалы диссертации представлены: -на межгосударственной научной конференции, посвященной 100-летию открытия возбудителя чумы, Алматы, 1994;

-на научной конференции, посвященной 60-летию Иркутского ПЧИ, Иркутск, 1994;

-на итоговой научной конференции в РНИПЧИ "Микроб", Саратов, 1994;

-на международной конференции по иммунореабилитации, Дагомыс, 1994;

-на международной конференции "Гомеостаз и инфекционный процесс", Саратов, 1996;

-на научной конференции "Эколого-эпидемиологический надзор за природно-очаговыми инфекциями в Северном Прикаспии", Астрахань, 1996;

-на научно-практической конференции, посвященной 100-летию образования противочумной службы России, Саратов, 1997; -на съезде аккушеров-гинеколов, Самара, 1997; -на Российской научной конференции "Человек и здоровье", С.Петербург, 1997.

Диссертация обсуждена и одобрена на расширенной научной конференции лаборатории иммунологии РосНИПЧИ "Микроб" в 1998г.

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 17 научных работ.

ГЛАВА 1. ЭЛЕКТРОКИНЕТИЧЕСТКИЙ ПОТЕНЦИАЛ ИММУНОКОМПЕ- I/ ТЕНТНЫХ КЛЕТОК И ЕГО ИЗМЕНЕНИЕ В ПРОЦЕССЕ ИММУНОГЕНЕЗА (обзор литературы)

Явление электрофореза - направленного перемещения электрически заряженных частиц дисперсной фазы в дисперсионной среде под действием внешнего электрического поля, было открыто профессором Московского университета Ф.Ф.Рейссом в 1807 году. Электрокинетические явления, к которым относится электрофорез, обусловлены наличием на границе раздела фаз двойного электрического слоя и способностью диффузной части этого слоя смещаться относительно адсорбционно-связанной его части. Электрический потенциал поверхности, разделяющей подвижную и неподвижную части двойного электрического слоя, носит название электрокинетического или г; (дзета)-потенциала. Частицы дисперсной фазы, находящиеся в буферном растворе, несут определенный суммарный электрический заряд, величина и знак которого зависят от величины pH среды. Под действием электрического поля частицы дисперсной фазы, в соответствии со знаком суммарного заряда, движутся в направлении катода, т.е. происходит катафорез, или анода - анафорез. В зависимости от величины заряда и своих размеров частицы в электрическом поле приобретают различные скорости. Смесь разнородных частиц, внесенная в узкую зону, в этих условиях разделяется на зоны, образующиеся частицами, движущимися с одинаковой скоростью, т.е. обладающими одинаковой электрофоретической подвижностью (Раменский Е.В., 1986; Bauer J., 1994).

Использование электрофореза в биологии и медицине началось в 30-е гг. XX века, когда А. Тизелиус разработал метод электрофореза в

свободной жидкости и сконструировал прибор для электрофоре-тического разделения и анализа смеси белков так называемым методом подвижных, или свободных, границ (свободнопроточный электрофорез). В настоящее время для фракционирования, очистки и идентификации белков и нуклеиновых кислот чаще применяют зональный электрофорез, или электрофорез на инертных носителях, обладающих порами, способными пропускать разделяемые молекулы. Данный подход сводит к минимуму эффект теплового движения разделяемых частиц и позволяет при необходимости выделить тот участок носителя, который содержит индивидуальное вещество. Это различные модификации собственно электрофореза макромолекул, их изоэлектрическое фокусирование и иммуноэлектрофорез, которые проводятся в гелях агарозы или полиакриламида (Остерман Л.А., 1981, 1983).

Для фракционирования более крупных частиц - эукариотических и бактериальных клеток, вирусов, а также лизосом, митохондрий, комплекса Гольджи и других клеточных органелл используют свободнопроточный электрофорез в его аналитических и препаративных вариантах. Наиболее традиционные области применения препаративного клеточного электрофореза в свободном потоке в медицине - это гематология, иммунология, онкология (Дозоморов И.М., 1984; Сигал

B.Р., 1994; Filho S.,1987; Seidel А., 1990; Hashimoto N., 1992;Knippel E., 1992; Shutt W., 1994). Использование этого метода при работе с клетками крови основано на том, что величина заряда при физиологическом значении рН специфична для каждого вида клеток (Хараморенко

C.С., Ракитянская А.А., 1974; Bauer J., 1994) и зависит от их функционального состояния (Мирошников А.И., 1986; Зубов И.В., 1994; Hannig К., Zeiller К., 1969; Eggleton Р., 1992). Колебания зарядов у разных, но

здоровых индивидуумов очень незначительны. Последнее приобретает большое значение для дифференцировки некоторых патологических состояний. При патологии электрический заряд может существенно меняться как в результате изменения физико-химической структуры клеточной поверхности, так и вследствие нарушения состава окружающей среды - появление в крови антител, патологических белков, продуктов распада клеток и т.д. (Хараморенко С.С., 1974; Борзо-ва Л.В., 1975; Темнов A.B., 1982; Дозоморов И.М., 1984; Корсуков В.Н., 1984; Мирошников А.И., 1986; Голубинский Е.П., 1987; Тихомирова Е.И., 1990; Preece A.W., 1970; 1981; Kotzsch М., 1982; Silva Filho, 1987; Golovanov M.V., 1991; Walter H., 1995;Kapur R., 1996).

Поэтому изучение величины электрического заряда клеток приобретает важное значение для мониторинга изменений гомеостаза, в том числе иммунологического (Хараморенко С.С., 1974; Козинец Г.И., 1975; Тихомирова Л.А., 1995; Петров Р.В., 1987; Тихомирова Е.И., 1990).

Повышенный интерес к электрическим свойствам клеток связан с рядом достоинств такого подхода к изучению клеток:

1) тесная взаимосвязь с процессами жизнедеятельности клетки (величина <;-потенциала зависит от вида клеток, возраста культуры, свойств среды и т.д.);

2) измерение этих характеристик можно проводить быстро и без нарушения жизнедеятельности, что позволяет исследовать процессы, происходящие в живых клетках;

3) разные электрические параметры характеризуют различные структурные элементы клетки, т.к. заряд определяется физико-химической структурой, строением клеточной поверхности и составом окружающей среды; электрофоретическая подвижность (ЭФП) связана

не только с поверхностными, но и с внутренними физико-химическими свойствами клеток и отдельных структур.

Метод препаративного клеточного электрофореза в свободном потоке позволяет составить представление о доле клеток в популяции, вовлекаемых в процесс активации. Эта особенность метода важна в силу того, что в процесс активации вовлекаются не все клетки популяции. В частности, это было подтверждено в экспериментах на мо-нонуклеарных фагоцитах (МФ) с помощью ферментативных маркеров (Suga M., 1980), и с помощью моноклональных антител, инактивирую-щих различные субпопуляции МФ (Sun D., 1982; Eggleton P., 1992).

Изучение участия различных популяций клеток в иммунологических реакциях требует разработки щадящих методов их выделения из крови и других органов иммунной системы (Зарецкая Ю.М., 1982; Бе-йум А., 1980; Мирошников А.И., 1986). Поэтому в большинстве случаев наиболее предпочтительными оказываются физические методы, в частности метод препаративного клеточного электрофореза в свободном потоке (Иенсен Г.Л., 1979; Hannig К., 1993).

Как известно, клетки крови выполняют в организме человека и животных многогранные физиологические функции: они участвуют в газообмене, белковом обмене, адсорбции аминокислот, полипептидов, белков, антител, антигенов, ферментов, продуктов распада белков и других структурных элементов клеток. Для нормального выполнения этих функций клетки должны быть разобщены, т.е. находиться на некотором расстоянии друг от друга. При слипании клеток их поверхность будет уменьшаться, что повлечет за собой снижение их физиологических функций, которые осуществляются через свободную поверхность мембран. Кроме того, клетки крови могут циркулировать по сосудам только в разобщенном виде. Слипшиеся или агглютиниро-

ванные клетки закупоривают мелкие сосуды и капилляры. Чтобы клетки крови не склеивались одна с другой, между ними должны постоянно действовать силы отталкивания, которые не позволяют клеткам при их столкновении соприкасаться своими поверхностями и агглютинировать. Благодаря отталкивающим и гидродинамическим силам клеток циркулирующая по сосудам кровь приобретает строго упорядоченную радиально-кольцевую пространственную структуру, которая необходима для поддержания на должном уровне обмена веществ как в целом организме, так и в отдельных клетках крови. В результате действия сил отталкивания между отдельными клетками сохраняются строго постоянные равновесные расстояния, создаются благоприятные условия для обмена веществ между клетками.

Действующие между клетками силы отталкивания обуславливаются их двойными электрическими слоями. Силы электростатического отталкивания возникают лишь во время перекрытия ионных атмосфер клеток. Наряду с силами отталкивания между двойными электрическими слоями существуют силы притяжения. Эти силы удерживают вместе агглютинированные клетки, а также обеспечивают в процессе роста организма формирование тканей, в которых клетки взаимосвязаны (Хараморенко С.С., 1974; Van Oss С.J., 1990).

В настоящее время известно, что биологические мембраны представляют собой жидкокристаллические бислойные фосфолипидные мембраны, в которых «плавают» молекулы белков, а углеводы, кова-лентно связанные с протеинами и липидами, находятся на наружной поверхности мембран (Козинец Г.И. с соавт., 1975; Bretscher M.S., 1971; Shutt W., 1991; Hyrc К., 1993). В результате того, что компоненты клеточных мембран имеют гидрофильные ионизированные полярные группы, ориентирующиеся в сторону водной среды, мембраны

обладают поверхностным ионным зарядом, который играет важную роль во многих процессах, обеспечивающих жизнедеятельность клетки. Он во многом определяет физико-химические свойства поверхности клетки и в свою очередь зависит от биологического состояния клетки и ее окружения (Хараморенко С.С., 1974; Eylar E.H., 1962; Zamparo О., 1990; Sabolovic D., 1992). Заряды клеточной поверхности располагаются не только по площади цитоплазматической мембраны, но и по глубине гликокаликса. ЭФП клетки определяется теми некомпенсированными зарядами, которые находятся в данный период жизнедеятельности клетки и при данных параметрах среды в плоскости скольжения - в соответствии с физико-химической теорией электрофореза. Количество этих зарядов может изменяться в результате перестройки гликокаликса, перемещения зарядов вдоль поверхности клетки, перераспределения ионов, молекул вокруг клетки и внутри клетки под влиянием пассивного и активного транспорта через клеточную поверхность (Мирошников А.И. с соавт., 1986; Simmon M.I., 1992; Stoddard B.L., 1992).

Как правило, все клетки млекопитающих несут отрицательный поверхностный заряд, который имеет определенную характерную величину для каждого вида клеток. Работами ряда авторов показано, что отрицательный заряд поверхности клеток прежде всего обусловлен полисахаридными компонентами, в частности сиаловыми кислотами. В результате потери сиаловых кислот происходит уменьшение числа L-карбоксильных групп на поверхности клеток, что вызывает снижение ЭФП. У эритроцитов поверхностный заряд обусловлен нейрамино-выми кислотами на 62% от общего отрицательного заряда. Под влиянием фермента нейраминидазы, разрушающей сиаловые кислоты, наблюдается снижение ЭФП эритроцитов (Eylar E.H., 1992). Однако,

количество сиаловых кислот, освобождающихся под действием ней-раминидазы, было приблизительно в 2,5 раза больше, чем можно было ожидать на основании электрофоретических измерений, если считать, что сразу все карбоксильные группы сиаловых кислот определяют ЭФП клеток. Это подтверждает мнение о том, что сиаловые кислоты расположены не в одной плоскости, а по глубине гликокаликса и поэтому не все определяют ЭФП эритроцитов.

У тромбоцитов поверхностный заряд обусловлен сиаловыми кислотами на 61% (Madoff М.А., 1964). Помимо сиаловых кислот тромбоциты содержат на своей поверхности сульфгидрильные группы (Mehrishi J.N., 1969), аминогруппы (Mehrishi J.N., 1970), а также фосфатные группы (Mehrishi J.N., 1972), которые также влияют на общий заряд клетки.

На поверхности клеток присутствуют в небольшом количестве РНК, которые образуют анионные комплексы. РНК обнаружены на поверхности ретикулоцитов, макрофагов и полиморфноядерных лейкоцитов человека (Weiss L., 1969; Mehrishi J.N., 1972). Мембраны клеток кроме анионных групп, содержат также и основные группы (Weiss L., 1969; Mehrishi J.N., 1972). Это могут быть положительно заряженные NH3+- группы, что подтверждается увеличением на 15-20% ЭФП в результате блокирования аминных групп формальдегидом. (Козинец Г.И. с соавт., 1975)

Использование метода клеточного электрофореза в иммунологии основано на способности клеток изменять величину поверхностного заряда при их активации антигенами, пролиферации и дифференци-ровке в процессе иммуногенеза. Конечным результатом сложного иммунологического механизма является продукция антител и диффе-ренцировка иммунокомпетентных клеток. Ему предшествуют такие

важные процессы, как антигенное распознавание и межклеточные взаимодействия. Известно, что развитие иммунного ответа требует взаимодействия, по меньшей мере, трех типов клеток: макрофагов, Ти B-лимфоцитов (Петров Р.В., 1970; Фримель Г., 1986; Манько В.М., 1987; Маянский Д.Н., 1990; Ляшенко В.А., 1995; Потапнев М.П., 1995). В литературе по иммунологии чумы подчеркивается, что ведущая роль в формировании протективного иммунитета к возбудителю чумы принадлежит клеточным реакциям (Горькова A.B., 1987; Самойлова Л.В., 1980; Пустовалов В.Л., 1984; Ледванов М.Ю., 1990; Васильева Г.И., 1994). Прежде чем приобрести иммунокомпетентность, клетки проходят многоэтапный путь дифференцировки. При этом особенно важным является начальный этап развития иммунного ответа, что связано с закладыванием, именно в этот период, основных свойств популяции иммунокомпетентных клеток, определяющих эффективность клеточного звена иммунологической защиты и регуляторный потенциал иммунной системы (Петров Р.В., 1972; Саяпина Л.В., 1991; Адаменко Г.П., 1995).

Учитывая огромную роль межклеточных взаимодействий, изменений соотношения функциональной активности различных популяций и субпопуляций лимфоцитов (ЛФ) и мононуклеарных фагоцитов (МФ) в регуляции иммунного ответа, можно сделать заключение о том, что оценка иммунологической реактивности организма в настоящее время предполагает обязательную количественную дифференцированную характеристику Т- и B-систем иммунитета, а также клеток системы МФ (Татибана Т., 1979; Зацепина Г.Н., 1980; Петров Р.В., 1980; Дозо-моров И.М., 1984; Ледванов М.Ю., 1987; Boehmer Н., 1974; Al-Essa L.Y., 1995).

Тимус-зависимая система реализует иммунный ответ клеточного типа с накоплением сенсибилизированных лимфоцитов. B-система отвечает за реализацию гуморального иммунного ответа. Т-система контролирует работу B-системы. Установлено, что Т- и В-лимфоциты различаются по поверхностному заряду и их можно разделить методом препаративного клеточного электрофореза в свободном потоке по ЭФП на две основные популяции: высоко- и низкоподвижные (Зарецкая Ю.М., 1983; Дозоморов И.М., 1984; Zeiller К., 1974; Е. Burkhardt, 1985). Из литературных данных (Петров Р.В., 1983; Пол У., 1989) известно, что в процессе дифференцировки лимфоидных клеток происходит последовательная смена их поверхностных дифференци-ровочных антигенов, при этом закономерно изменяется физическое состояние мембран лимфоцитов и в первую очередь, его электрический заряд (N. Kraskina et ai, 1985; Bauer J., 1990).

В процессе созревания поверхностный заряд лимфоцитов меняется. Зрелые периферические Т-лимфоциты имеют самое низкое содержание Q-антигена, поэтому обладают высоким отрицательным зарядом и располагаются во фракциях клеток с высокой ЭФП. В зависимости от степени созревания и потери Q-антигена Т-лимфоциты распределяются в группы, где самые молодые - с самым большим содержанием Q-антигена и низкой ЭФП (Zeiler К., 1974; Bauer J., 1990).

В динамике инфекционного и вакцинного процессов наблюдаются значительные изменения электрокинетической подвижности лимфоцитов. Так, в работах ряда авторов (Тихомирова Л.А., Тихомирова Е.И., 1990; Ермакова Г.В., 1982; Щуковская Т.Н., 1984; Ледванов М.Ю., 1987; Koenig U.D., 1985; Kraskina N., 1985) было показано, что изменение ЭФП лимфоцитов органов иммунной системы и крови в процессе иммуногенеза к чуме носит фазный характер. Было отмечено

понижение ЭФП лимфоцитов (ЛФ) в ранние сроки после иммунизации вакцинным штаммом чумного микроба и повышение ЭФП в более поздние, что свидетельствовало об активации процессов пролиферации и дифференцировки ЛФ. Причем для Т-ЛФ снижение ЭФП носило кратковременный характер. Снижение ЭФП Т-ЛФ связано, очевидно, с появлением клеток с большим количеством дифференцировочных антигенов, наличие которых коррелирует с низкой ЭФП. В дальнейшем Т-клетки, по-видимому, теряли часть дифференцировочных антигенов, приобретали иммунокомпетентность и их ЭФП приближалась к исходной (Ледванов М.Ю., 1987; Тихомирова Е.И., 1990; Moretta L., 1980; De Maele M., 1983). Увеличение ЭФП B-лимфоцитов также можно объяснить изменением мембранных структур. По данным ряда исследователей (Хейри П., 1980; Ледванов М.Ю., 1984) клетки, имеющие наибольшее количество связанных с поверхностью иммуноглобулинов, выходят в наименее подвижных фракциях популяции. Поскольку ЭФП лимфоцитов зависит от нагруженности клетки белком, а В-лимфоциты под влиянием антигенной стимуляции утрачивают СЗ-рецептор (Mason D.W., 1976) и иммуноглобулиновые молекулы (Kimura А.К., 1977), можно предположить, что увеличение их ЭФП связано с утратой иммуноглобулиновых молекул в связи со специфической функцией B-лимфоцитов в иммуногенезе (Ледванов М.Ю., 1984; Тихомирова Л.А., 1985). Между функциональной активностью лимфоцитов и свойствами их поверхностных мембран (электрокинетическим потенциалом) существует тесная взаимосвязь (Иенсен Г.Л., 1979). Антигенное воздействие на организм в первую очередь приводит к стимуляции (или угнетению) метаболизма лимфоцитов (Комиссаренко C.B., 1982), следствием чего является изменение их специфической активности (Ледванов М.Ю., 1982; Потапнев М.П., 1995). Очевидно,

что клетки, различные по электрическому заряду, должны различаться и по основным характеристикам внутриклеточного обмена веществ. Иммунобиологическая перестройка, развитие полноценного иммунитета, эффективное протекание общих неспецифических адаптационных реакций - все эти процессы сопровождаются усилением энергетического обмена лимфоидных клеток (Ледванов М.Ю., 1992). Энергетический заряд адениловой системы отражает энергетический «статус» клетки, ее потенциальную способность к выполнению специфической функции (Деркачев Ф.Э., 1975). Иными словами, выраженность метаболической активности различных популяций лимфоцитов, определяемая энергетическим зарядом, может свидетельствовать о степени стимуляции гуморального или клеточного звена иммунитета на ранних этапах вакцинного процесса (Ледванов М.Ю., 1982).

Макрофаг - это клетка, которая выполняет множество функций в большинстве из которых участвует клеточная поверхность. Большое количество мембран-связанных плазматических молекул МФ выполняют фундаментальную роль в процессе распознавания чужеродных частиц или молекул. Это, например, рецепторы к Рс-части иммуноглобулина, к компонентам комплемента, к терминалу сахарных остатков и т.п. МФ реагируют на внешние стимуляторы, идущие непосредственно от микроорганизмов или от активированных лимфоцитов, которые изменяют функциональную активность МФ, а именно:

1) способность к адгезии;

2) активность эндоцитоза и слияния лизосом с фагосомами;

3) способность продуцировать 02-радикалы и лизосомальные ферменты;

4) способность к фагоцитозу;

5) способность экспрессировать некоторые антигены на клеточной поверхности (Хаитов P.M., 1995; North R.,1978; Beuth J., 1990; Nielsen H., 1990; Moonis N., 1992).

Современные представления о роли клеток системы мононуклеар-ных фагоцитов основываются на их гетерогенности по функциональной активности, экспрессии поверхностных структур, регуляторным и эффекторным свойствам. Предполагается, что функциональная гетерогенность связана с наличием специализированных популяций макрофагов, исследование которых в настоящее время является ключевой проблемой иммунологии (Васильева Г.И., 1990; Corvaia N., 1995). Особенно хорошо эту гетерогенность удается выявить путем стимуляции макрофагов. Стимулирование может быть различным: от пептон-ной воды до инфекционного агента. Внутрибрюшинная иммунизация приводит к резкому усилению миграционной активности МФ перитоне-ального экссудата (Ковальчук Л.В. с соавт., 1976). По-видимому, эти изменения происходят не только за счет увеличения количества мигрирующих клеток, вызванного иммунизацией, а главным образом, в результате повышения их функциональной активности (Петров Р.В. с соавт., 1983). Изменение морфологии макрофагов, повышение уровня лизосомальных ферментов, изменение фагоцитарной активности, выброс монокинов и т.д. проявляется в различной степени в отдельных популяциях МФ (Зайцева Л.Г., 1988; Васильева Г.И., 1990; Земсков В.М., 1995; Манько В.М., 1995).

Вероятно, объяснением возникновения этой гетерогенности моно-нуклеарных клеток может явиться различие в происхождении клеток и различные стадии дифференцировки, степень активации, возникающая под влиянием микроокружения или иного стимулирующего агента, а также другие причины (Маянский А.Н., 1989).

Созревание в ряду - мононуклеары-фагоциты характеризуется появлением набора мембранных маркеров, новых рецепторов и функций (Van Furth R., 1980; Velde A.A., 1990). Предыдущие исследования (Maddox D.E., 1982) показали, что лектин Limulus polyphemus, который специфически взаимодействует с сиаловыми кислотами, связывался с поверхностью резидентных и индуцированных МФ. Было показано, что на поверхности моноцитов человека лектин связывался с 75% клеточной поверхности. После трансформации моноцитов в макрофаги, лектин связывался только с 17% клеточной поверхности. Эти данные позволяют предположить, что в процессе трансформации моноцитов в макрофаги происходит процесс сиализации мембранных гликопротеи-нов или гликолипидов (Haimovitz А., 1982). В различных морфологических формах лейкоцитов кроме обычного процесса созревания ядра идет процесс созревания клеточной мембраны, сопровождающийся уменьшением избыточного отрицательного заряда. Процесс созревания клетки на уровне мембраны не всегда синхронен процессу созревания ядра (G.Ruhenstroth-Bauer, 1961). Seidel А. с сотрудниками (1987) была изучена ЭФП альвеолярных макрофагов крупного рогатого скота в зависимости от времени культивирования клеток in vitro. После инкубации в течение 20 часов идентифицировали три субгруппы макрофагов, которые различались по содержанию лизосомальных гидролаз, L-нафтилацетилэстеразе и щелочной фосфодиэстеразе. Авторами сделан вывод, что выявленные субгруппы соответствовали различным стадиям созревания макрофагов и фракция с наибольшей ЭФП содержала наиболее зрелые макрофаги.

При стимуляции макрофагов в клетках происходит серия структурных изменений, которые оказывают прямое влияние на электрические свойства клетки (Земсков В.М. с соавт., 1983; Shold С.М., 1990).

Хотя процесс активации МФ уже был описан во многих работах, тем не менее молекулярный механизм этого процесса полностью не изучен. В ряде работ (Ляшенко В.А. с соавт., 1988; Нескромный А.Г., 1993; Чередеев А.Н., 1995; R.Petty et. al., 1980; С.Е. Lewie 1992; J.Bauer, 1994) уже сообщалось, что сочетание и расположение компонентов клеточной поверхности изменяется в процессе активации МФ. Сюда включается: 1) количество Fc-рецепторов, рецепторов комплемента и маннозо-фруктозо-Ы-ацетилглюкозамин рецепторов; 2) активность 5'-нуклеотидазы; 3) процентное количество клеток, содержащих la и F4/80 антигены на клеточной поверхности.

Fernando С. Silva Filho с сотрудниками (1990) было установлено, что активированные МФ обладают более высоким отрицательным поверхностным зарядом, чем резидентные или индуцированные перито-неальные МФ. Причем интересно отметить, что популяции резидентных, индуцированных и активированных МФ не гомогенны по ЭФП. По-видимому, это связано с их различной функциональной активностью. В опытах A.N.Biscy с сотрудниками (1977) было показано, что предварительная инкубация перитонеальных макрофагов с винбластином или колхицином вызывала повышение ЭФП клеток. По мнению авторов этот эффект не обусловлен изменением заряда клеточной поверхности за счет сорбции этих веществ. С помощью сканирующей электронной микроскопии выявлено, что под действием винбластина и колхицина на поверхности макрофагов образуется большое количество микроворсинок различной длины. Описанные изменения ЭФП клеток и топографии их поверхности объясняются деполимеризацией микротрубочек в присутствии винбластина и колхицина.

Большое влияние на формирование заряда клетки оказывает среда в которой она находится. Fernando С. Silva Filho с сотрудниками

(1987) была проанализирована зависимость поверхностного отрицательного заряда от концентрации ионов кальция в среде. Было установлено, что на поверхности МФ находятся Са2+-связывающие компоненты. При инкубации клеток в присутствии ионов Са2+ отрицательный заряд МФ снижался пропорционально концентрации ионов в среде. Подобные данные были получены в экспериментах на эритроцитах и лейкоцитах (Wilkins D.T., 1962). Проведенные исследования подтвердили, что фосфатные группы фосфолипидов и остатки сиало-вых кислот имеют Са2+-связывающиеся сайты (Baugham A.D., 1958).

Известно, что в иммунном ответе макрофаги участвуют в качестве важных секреторных клеток, продуцируя монокины и другие активные вещества, регулирующие ключевые иммунологические процессы (Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1983; Пол У., 1989; Печковский Д.В., 1993; Cordier G., 1991; Odie С.К., 1994). С помощью синтетического аналога гликолипида - препарата ВАУ 1005 изучали регуляцию плотности отрицательного заряда поверхности моноцитов крови людей. Спустя 24 часа инкубации с указанным соединением ЭФП моноцитов оставалась неизменной. Препарат тормозил дифференцировку моноцитов в макрофаги, индуцировал продукцию монокина, а также отменял супрессорную активность и способность моноцитов распластываться по поверхности полистероловых чашек. Сделан вывод о связи продукции монокина и поддержании низкой ЭФП моноцитов (Bauer J., 1994).

МФ являются необходимым участником межклеточных взаимодействий как в гуморальном, так и в клеточном иммунитете. Взаимодействие МФ с Т-ЛФ составляет основу эффекторной фазы клеточного звена иммунитета. При чуме иммунный ответ обеспечивается, в конечном итоге, активацией макрофагов, и в первую очередь, повыше-

нием их внутриклеточной киллерной активности (Васильева Г.И., 1990). В первые минуты контакта чумного микроба и МФ в последнем развиваются характерные биохимические изменения, связанные с активацией основных бактерицидных систем МФ. Синтез активных форм кислорода является ведущим механизмом формирования антимикробного потенциала клеток мононуклеарно-фагоцитарной системы (МФС). Происходит образование перекиси водорода и таких свободных радикалов, как супероксид-анион, синглетный кислород, гидро-ксильный радикал, гипохлорит (Никитина Г.А., 1990; Стукова Н.Ю., 1990; Ледванов М.Ю., 1992; Зонова И.В., 1993).

Застрожновой с сотрудниками (1985) была проведена серия экспериментов в которых была обнаружена корреляционная связь между картинами повышения ЭФП и развитием хемилюминесценции. Это наводит на мысль о существовании единого механизма, обуславливающего оба процесса. Как известно, развитие хемилюминесценции обусловлено появлением на поверхности клеток и выделением в среду супероксид-анионов, имеющих отрицательный заряд (Pick Е., 1981). Возможно, те же анионы сообщают дополнительный заряд, который изменяет ЭФП МФ.

В иммунном макроорганизме происходит опсонизация возбудителя чумы специфическими иммуноглобулинами. Последующий процесс адгезии осуществляется в результате взаимодействия Fc-участка иммуноглобулина с Fc-рецептором МФ. Вслед за адгезией происходит процесс фагоцитоза - поглощение адгезированного микроба. В случае завершенного фагоцитоза происходит фрагментация антигена в лизо-сомах, транспорт фрагментов антигена на поверхность МФ и представление антигена (в комплексе с la белками) Т-лимфоцитам (Брондз В.Д., 1987; Тада Т., 1988; Наумов A.B., 1992). Электрофоретическая

подвижность МФ повышается после контакта с некоторыми полисаха-ридными антигенами, причем это повышение связано с процессом активации МФ. ЭФП перитонеальных МФ мыши значительно повышалась после инкубации их с Т-независимыми антигенами - ЛПС, Vi-антигеном, менингококковым полисахаридом. При этом повышение ЭФП наблюдалось не у всех субпопуляций клеток и носило различный характер в зависимости от строения воздействующего антигена. Способность молекул бактериального полисахарида активировать МФ в высокой степени зависит от степени их полимеризации (Кашкина М.А., 1980). Высокополимерная фракция Vi-антигена активировала МФ и повышала количество высокоподвижных клеток в электрическом поле. Низкополимерная фракция Vi-антигена оказывала действие обратное действию высокополимерной. Кроме того, низкополимерная фракция была способна снижать уровень иммуногенного действия высокополимерной фракции Vi-антигена (Александер С.К., Ляшенко В.А., 1975). Возможно, низкополимерный полисахарид блокировал активацию различных иммунокомпетентных клеток (Засторожнова H.H., 1985). Ясно, что повышение ЭФП МФ связано не столько с пассивной адсорбцией антигена на клетке, сколько с активацией МФ, что подтверждается сопоставлением динамики и интенсивности различных признаков активации, наблюдаемых после воздействия Т-независимых антигенов. Так, лизосомальная активность МФ заметно повышалась под влиянием Vi-антигена, и одновременно повышалась их ЭФП. Препарат Vi-антигена заметно увеличивал накопление кислой фосфатазы в клетках и выделение этого фермента в культуральную среду. Причем высокополимерная фракция Vi-антигена увеличивала выделение кислой фосфатазы в культуральную среду, в то время как низкополимерная фракция Vi-антигена тормозила это выделение. Известно, что

активации макрофагов предшествует серия структурных, биохимических и функциональных изменений (Ляшенко В.А., 1995;Хаитов P.M., 1995). Это приводит к изменению электрических свойств клеток. Рациональность функциональной гетерогенности макрофагов подразумевает идею о том, что антиген реагирует с определенным субклассом для того, чтобы стать оптимально иммуногенным и, в этой связи, слабый иммунный ответ макроорганизма может быть связан с утратой определенного субкласса макрофагов, необходимых для оптимальной индукции иммунного ответа (Васильева Г.И., 1990; Веркина Г.И., 1995). Поэтому выделение и сравнение субпопуляций макрофагов может дать реальное представление о реактивности макроорганизма и обеспечить прогноз течения вакцинного и инфекционного процессов. Была изучена связь между величиной отрицательного поверхностного заряда макрофагов и их фагоцитарной активностью (Knyszynski А., 1978; Walter Н., 1980). На основании полученных данных высказано предположение о существовании непрямой корреляции между поверхностным зарядом макрофагов и их фагоцитирующей активностью в отношении чужеродного агента.

Для развития активированного состояния макрофагов необходимо их взаимодействие со стимулированными Т-лимфоцитами или их продуктами. Макрофаги захватывают, перерабатывают и представляют антигены Т-клеткам; Т-клетки, вступившие в контакт со специфическим антигеном, синтезируют лимфокины, модулирующие функцию макрофагов. Активированные лимфокинами макрофаги приобретают повышенную бактерицидность по отношению к внутриклеточным паразитам и уничтожают их (Васильева Г.И., 1990; Solbach W., 1991). Предполагается, что лимфокины индуцируют образование фибрина из фибриногена на поверхности макрофагов, агрегацию и усиленную ад-

гезию Мф к серозным оболочкам брюшной полости, что проявляется в резком снижении количества макрофагов в перитонеальном экссудате (Васильева Г.И., 1990).

Рядом авторов изучалось влияние лимфокинов на изменение ЭФП макрофагов. При инкубации сенсибилизированных лимфоцитов со специфическим антигеном, они приобретают способность вырабатывать медиаторы, снижающие поверхностный заряд макрофагов. Образующийся через 90 мин инкубации медиатор, вызывающий снижение поверхностного заряда Мф, называется «фактором, тормозящим ЭФП». Снижение скорости передвижения обработанных клеток по сравнению с контрольными макрофагами указывало на сенсибилизацию лимфоцитов. На основании данных, полученных рядом исследователей (Petty H.R., 1980; Rotzsch М., 1982; Shenton B.R., 1977; Brown К.А., 1985; Thomaneck U., 1991) можно предположить, что степень изменения распределения макрофагов по ЭФП зависит от антигена, вызывающего продукцию лимфокинов, концентрации самого антигена, специфичности эффекторных молекул лимфокинов. Метод определения ЭФП макрофагов может быть использован для оценки клеточного иммунитета у человека (при чуме, туберкулезе, злокачественных опухолях, миастении и т.д.) и экспериментальных животных (аллергический энцефаломиелит, оценка степени инбридинга и т.д.).

Анализируя вышеизложенные литературные данные можно сделать вывод о том, что электрический заряд, структура поверхностной мембраны и функциональные свойства клетки находятся в тесной взаимосвязи. Электрокинетический потенциал клетки - постоянная величина и зависит от функционального клеточного состояния. Метод проточного электрофореза в свободном потоке дает возможность изучать характер изменения ЭФП популяций клеток под влиянием различных

антигенов и вакцин на макроорганизм. В работе ряда исследователей (Ермакова Г.В., 1982; Корсуков В.Н., 1984, 1994; Ледванов М.Ю., 1984, 1992; Тихомирова Л.А., 1985, 1994; Тихомирова Е.И., 1990) показана возможность использовать данный метод в качестве важного иммунологического критерия, характеризующего изменения ЭФП популяций лимфоцитов в процессе иммуногенеза к чуме. Тем не менее, нами не было найдено работ, касающихся динамики изменения ЭФП МФ при формировании иммунитета к чуме. Поэтому представляется целесообразным использовать метод препаративного клеточного электрофореза для оценки электрофоретической подвижности клеток системы мононуклеарных фагоцитов при формировании иммунного ответа на вакцинные препараты и антигены чумного микроба.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Фирстова, Виктория Валерьевна

ВЫВОДЫ

1. Иммунизация белых мышей вакцинным штаммом Y.pestis EV сопровождается снижением электрофоретической подвижности основного пула перитонеальных макрофагов и появлением электрофо-ретически гетерогенных популяций.

2. Изменения электрокинетических свойств макрофагов в процессе иммуногенеза к чуме зависят от генотипа животных. Инбредная линия мышей CC57W реагирует меньшим, по сравнению с беспородными, снижением электрофоретической подвижности макрофагов. Выявлены характерные для линии CC57W особенности формирования электрофоретически гетерогенных популяций перитонеальных макрофагов.

3. Адгезия макрофагов к стеклу, сопровождающаяся активацией клеток, приводит к дифференцированному изменению электрофоретической подвижности популяций фагоцитов. Через 60 минут после адгезии наблюдается выраженное снижение электрофоретической подвижности большинства клеток, сменяющееся повышением через 180 и 360 минут.

4. Взаимодействие in vitro макрофагов с клетками Y.pestis EV приводит к значительному изменению конфигурации кривой распределения макрофагов по электрофоретической подвижности. На 60 минуте инкубации тестируются до четырех электрофоретически гетерогенных популяций, одна из которых (46-47 фракция - 30±4.12% клеток) обладает резко выраженной высокой элеткрофоретической по-жвижностью.

5. Иммунизация белых мышей основным соматическим и кап-сульным антигенами чумного микроба вызывает снижение электрофоретической подвижности основной массы макрофагов, формирующих в большинстве сроков исследования две электрофоретически различающиеся популяции. Капсульный антиген обладает более выраженной, по сравнению с основным соматическим, способностью снижать электрофоретическую подвижность фагоцитов.

6. Макрофаги неиммунизированных морских свинок формируют пять электрофоретически гетерогенных популяций. Иммунизация морских свинок капсульным антигеном сопровождается резким снижением электрофоретической подвижностью макрофагов и преобладанием трех элекрофоретически различающихся популяций клеток.

7. Адгезия моноцитов крови людей к стеклу приводит к выраженному дифференцированному изменению электрофоретической подвижности популяций фагоцитов. Спустя 30 минут наблюдается снижение электрофоретической подвижности большинства клеток, разделившихся на 2 популяции. Инкубация in vitro моноцитов человека с антигенами чумного микроба (капсульным FI и основным соматическим) сопровождается снижением электрофоретической подвижности с формированием характерной кривой распределения клеток по данному свойству.

8. Взаимодействие in vitro антигенов чумного микроба с моноцитами крови людей сопровождается снижением их электрофоретической подвижности и увеличением внутриклеточной активности ключевых ферментов пентозофосфатного пути обмена углеводов - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы и гиколитического пути - лактатдегидрогеназы. Под влиянием капсульного антигена активность сукцинатдегидрогеназы снижается. Внутри общего пула выделенных моноцитов максимальные ферментативные активности регистрируются в субпопуляциях, характеризующихся более высокой электрофоретической подвижностью.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе с использованием комплекса современных иммунологических, биохимических, физико-химических методов изучена функционально-метаболическая активность электрокинетиче-ски-гетерогенных субпопуляций фагоцитирующих клеток в процессе иммуногенеза к чуме (под действием клеток вакцинного штамма EV, а также важнейших антигенов чумного микроба - капсульного и основного соматического). Объектами исследования служили перитоне-альные макрофаги экспериментальных животных (морских свинок и мышей различных линий), моноциты и нейтрофильные лейкоциты крови человека. Интерес к изучению макрофагов был обусловлен не только тем, что в активированных макрофагах происходит киллинг чумного микроба, но и определяющей ролью этих клеток в инициации и регуляции клеточного иммунного ответа (Коробкова Е.И., 1960; Пус-товалов В.Л., 1984; Васильева Г.И., 1990; Une T., Brubaker R.R., 1984). По изменению свойств моноцитов и нейтрофильных лейкоцитов крови людей, в свою очередь, представлялось возможным судить о направленности и особенностях функциональных сдвигов в фагоцитирующих клетках иммунной системы человека.

В итоге выполненных исследований получены представленные ниже в обобщенном виде следующие основные результаты.

Противочумный вакцинный процесс в организме экспериментальных животных сопровождается изменением электрофоретических свойств мононуклеарных фагоцитов. Иммунизация мышей вакцинным штаммом Y.pestis EV во все сроки наблюдения (1, 3, 7, 14 и 21 сутки иммуногенеза) приводила к снижению электрофоретической подвижности перитонеальных макрофагов по сравнению с контролем неиммунизированные животные). Уже на 1 сутки иммуногенеза было обнаружено разделение общего пула макрофагов на две субпопуляции. Большая по количеству клеток субпопуляция макрофагов обладала более низкой электрофоретической подвижностью. Наиболее значимое разделение перитонеальных макрофагов на субпопуляции с различной электрофоретической подвижностью было зарегистрировано на 7 и 14 сутки иммуногенеза. На 21 сутки формиробания иммунитета к чуме вся популяция перитонеальных макрофагов была представлена одним пулом клеток со значительно сниженной электрофоретической активностью по сравнению с контролем (р<0,001).

Электрокинетические свойства макрофагов иммунизированных животных зависели от генотипа мышей. Инбредная линия мышей CC57W также реагировала снижением электрофоретической подвижности макрофагов и формированием электрофоретически различающихся субпопуляций. Однако эти сдвиги отличались от зарегистрированных у беспородных мышей как качественно (по срокам появления и характеристикам субпопуляций), так и количественно - по уровню о л снижения электрофоретической подвижности. У исследуемой линии снижение электрофоретической подвижности (особенно на 21 сутки) было менее заметно.

В настоящее время хорошо известно, что все процессы, связанные с изменением функциональной активности иммунокомпетентных V клеток (в том числе макрофагов), начинаются с изменения свойств клеточных мембран (Ляшенко В.А., 1988; Petty R., 1980; Lewie С.Е., 1992; Bauer J., 1994). Мембрана фагоцитов рассматривается как динамичная, постоянно изменяющаяся структура. При активации или дифференцировке любых клеток на мембране происходят процессы пространственного перераспределения специфических рецепторов, молекул межклеточной адгезии, присоединившихся цитокинов, биологически активных веществ, антигенов и др. (Filho F.С., 1987; Hansen Е., 1989; Frendl G., 1990). Результатом фагоцитарных реакций может явиться также интернализация участков мембраны (Lewis С.Е., 1992). Все это закономерно приводит к изменению плотности и топологии молекулярных групп, определяющих электрический заряд клетки. Причем, изменение электрического заряда происходит как в результате перераспределения анионов и катионов на клеточной поверхности, так и в результате перераспределения их в примыкающем диффузном слое (Slivinsky G.G., 1990; Golovanov M.V., 1991). Последнее во многом определяется направленностью клеточных метаболических реакций. В связи с этим тестирование электрического заряда иммунокомпетентных клеток, по мнению большинства авторов (Schutt W., 1990; Thomanek U., 1991; Shimizu M., 1992), является надежным критерием для мониторинга изменения их функциональной активности. Обнаруженное нами снижение электрофоретической подвижности макрофагов, вероятно, связано с изменением мозаики поверхностных антигенов, выражающемся в уменьшении количества (интернализация мембраны) детерминант, несущих отрицательный заряд (Filho F.С., 1987; Bauer J., 1994) или их маскировкой вновь образующимися или присоединенными молекулами (иммуноглобулинами, цитокинами и т.д.). Полученные нами данные согласуются с результатами исследований (Knyszynski А., 1978; Malkosky М., 1980; Bauer J.,1992), показавших, что снижение отрицательного элекртокинетического потенциала клеток системы фагоцитирующих мононуклеаров связано с их активацией. На разных этапах иммуногенеза к чуме в процесс иммунобиологической перестройки, очевидно, вовлекаются различные субпопуляции клеток системы фагоцитирующих мононуклеаров. Особенно четко в условиях наших опытов идентифицировались две субпопуляции макрофагов на 7 сутки иммуногенеза. Обращает внимание, что к 21 дню (сроку развития максимально выраженного протективного иммунитета) наибольший процент клеток системы мононуклеарных фагоцитов у беспородных мышей обладал сниженной электрофоретической подвижностью. Последнее, по видимому, свидетельствует о значительной степени генерализации процесса иммунобиологической перестройки под влиянием живой чумной вакцины (штамма EV).

При анализе взаимосвязи изменений электрофоретической подвижности у беспородных мышей и мышей линии CC57W было отмечено, что линейные мыши реагировали меньшим снижением электрофоретической подвижности макрофагов в ответ на иммунизацию чумной вакциной. Следует отметить, что линия CC57W является более чувствительной к чумной инфекции и интоксикации, чем беспородные мыши (Бландова З.К., 1983). В результате иммунизации живой чумной вакциной у СС57\А/-мышей формируется менее выраженный протективный иммунитет, чем у беспородных (Назарова Л.С., 1984; Задумина С.Ю., 1990). Не исключено, что последнее может быть связано с недостаточной активацией клеток системы мононуклеарных фагоцитов (в условиях наших опытов - отсутствие на 21 сутки значительного пула активированных макрофагов с пониженной электрофоретической подвижностью).

Таким образом, электрофоретическое тестирование клеток системы мононуклеарных фагоцитов с определенной степенью достоверности позволяет судить о генетически детерминированном формировании субпопуляционной гетерогенности и доле активированных макрофагов на отдельных этапах иммуногенеза к чуме.

Обнаруженные нами изменения электрофоретической подвижности макрофагов при иммунизации мышей живой чумной вакциной EV могли быть связаны не только с влиянием чумного микроба или различных цитокинов, действующих in situ, но и явиться следствием рециркуляции, миграции и адгезии макрофагов (т.е. постоянно происходящих в перитонеальном экссудате популяционных сдвигов). Для выяснения роли непосредственного контакта чумного микроба с фагоцитирующими клетками в изменении их электрофоретической подвижности были проведены эксперименты in vitro.

Для постановки фагоцитарной реакции использовался монослой прикрепившихся к стеклу макрофагов. Адгезия фагоцитов к стеклу, являющаяся, как известно, фактором активации системы фагоцитирующих мононуклеаров (Маянский А.Н., 1983; Ройт А., 1991 ; Пол У., 1989) также вызывала изменение электрофоретической подвижности исследуемых клеток. Через 60 минут после адгезии наблюдалось выраженное снижение электрофоретической подвижности макрофагов, сменяющееся повышением электрофоретической подвижности через 180 и 360 минут. Взаимодействие макрофагов с микробными клетками Y.pestis EV сопровождалось изменениями конфигурации кривой распределения макрофагов по электрофоретической подвижности. Так на 60 минуте фагоцитарной реакции тестировалось четыре субпопуляции одна из которых (10.7±1.65% клеток) обладала резко выраженной сниженной электрофоретической подвижностью. В остальные сроки исследований электрофоретические кривые во многом повторяли конфигурацию контрольных гистограмм и не отклонялись от них более чем на пять фракций.

Для понимания механизмов развития иммунобиологической перестройки в зараженном или вакцинированном организме необходимо иметь четкие представления об особенностях влияния на макрофаги отдельных компонентов возбудителя. Среди антигенов Y.pestis EV особое значение представляют такие антигены как капсульный и основной соматический. Интерес к их изучению обусловлен не только многообразием их иммунобиологических функций (Грибоедов A.B., 1984; Вейнблат В.И., 1977), но и возможностью эффективного применения в составе химической чумной вакцины (Мохин K.M., 1988; Белов Л.Г., 1989; Кутырев В.В., 1992; Наумов A.B., 1992; Будыка Д.А., 1993; Алексеева Н.Ю., 1997).

Результаты проведенных исследований показали, что иммунизация животных основным соматическим антигеном (ОСА) чумного микроба приводит к изменению электрофоретической подвижности пери-тонеальных макрофагов. Во все сроки исследований наблюдали снижение электрофоретической подвижности основной массы макрофагов, по сравнению с контролем, и лишь к 21 суткам иммуногенеза происходило некоторое увеличение электрофоретической подвижности клеток. На 1, 7 и 21 сутки после введения животным ОСА чумного микроба профиль электрофореграммы характеризовался одним пиком. На 3 и 21 сутки иммуногенеза клетки распределялись по электрофоретической подвижности на две основные группы.

Введение животным капсульного антигена также вызывало выраженное изменение электрокинетических свойств перитонеальных макрофагов. Во все сроки исследования наблюдалась более низкая элек-трофоретическая подвижность макрофагов, по сравнению с контролем. Лишь на 3 сутки иммуногенеза основная часть клеток характеризовалась высокой электрофоретической подвижностью. В первые сутки после иммунизации белых мышей капсульным антигеном (F1) наблюдалось появление трех преобладающих популяций макрофагов с различной электрофоретической подвижностью. На 3 и 7 сутки иммуногенеза профиль электрофореграммы был представлен двумя пиками, В более поздние сроки исследований (14 и 21 сутки) преобладал выход одной электрофоретически высокоподвижной популяции макрофагов после их сортировки.

Наряду с белыми мышами наиболее распространенной экспериментальной моделью изучения противочумного иммунитета является морская свинка (Бландова З.К., 1983). Процессы иммунобиологической перестройки организма морских свинок при взаимодействии с антигенами чумного микроба наиболее близки к регистрируемым у человека (Доморадский И.В., 1966). В связи с этим в сравнительном аспекте исследование влияния капсульного антигена на электрокинетические свойства макрофагов было проведено также на морских свинках.

Проведенные нами исследования позволили установить резкое снижение Электрофоретической подвижности (ЭФП) перитонеальных макрофагов (МФ) морских свинок во все сроки иммуногенеза. Максимальное снижение ЭФП МФ наблюдали на 7 сутки. К 21 суткам иммуногенеза регистрировалось некоторое восстановление ЭФП клеток. Важно отметить, что МФ неиммунизированных морских свинок характеризовались большей гетерогенностью по электрокинетическим характеристикам, чем клетки иммунизированных животных. На 1 сутки иммуногенеза 53.06±5.44% МФ тестировалось с 68 по 70 фракции, в то время как в контроле 55.92±6.07% тестировалось с 38 по 48 фракции. Во все сроки после иммунизации морских свинок наблюдали появление на электрофореграммах трех пиков максимального процента выхода клеток, в то время как для электрофореграммы контроля было характерно наличие пяти пиков.

В сравнительном аспекте, а также с целью возможной экстраполяции данных полученных в эксперименте на организм человека были проведены опыты с использованием моноцитов и нейтрофильных лейкоцитов, выделенных из крови людей. Проведенные исследования показали, что популяция интактных моноцитов в процессе адгезии на стекло разделяется на субпопуляции, обладающие различной электрофоретической активностью. Этот факт может быть весьма интересен в плане оценки адгезивных свойств моноцитов как в норме, так и при патологии как один из тестов, применяемых для характеристики основных этапов фагоцитарного процесса. Зарегистрированное нами явление разделения общего пула интактных моноцитов на субпопуляции при проведении адгезии на стекло свидетельствует о том, что общая популяция моноцитов состоит из клонов элек-трокинетически-гетерогенных клеток, каждая из которых, очевидно, обладает различным уровнем функциональной активности.

Взаимодействие моноцитов крови in vitro с Y.pestis EV приводило к значительным сдвигам в состоянии электрокинетических свойств клеток, выражающееся в повышении электрофоретической подвижности моноцитов на 10 минуте инкубации и разделение общего пула на три субпопуляции с разными электрофоретическими свойствами. Далее наблюдалось выраженное снижение уровня электрофоретической подвижности и разделение клеток на две основных субпопуляции.

Инкубация in vitro моноцитов периферической крови человека и антигенов чумного микроба (капсульного и основного соматического) сопровождалась меньшим снижением электрофоретической подвижности, по сравнению с результатами опытов, в которых использовались макрофаги, полученных от иммунизированных антигенами животных. Однако, инкубация моноцитов как с ОСА, так и с F1 приводила к формированию большего количества гетерогенных субпопуляций.

Анализ влияния каждого из используемых антигенов на ЭФП моноцитов показал, что основной соматический антиген вызывал снижение в опытах in vitro ЭФП моноцитов крови и формирование трех субпопуляций клеток. Взаимодействие адгезированных моноцитов с кап-сульным антигеном приводило к формированию уже на 10 минуте трех субпопуляций со сниженной ЭФП. Разделение клеток на субпопуляции регистрировалось во все сроки исследования, однако, к 60 минуте наблюдалось постепенное восстановление ЭФП.

Таким образом, приведенные выше данные свидетельствуют, что преобладающим направлением в изменении ЭФП фагоцитарных клеток при контакте с чумным микробом или его антигенами было снижение.

Следующий раздел работы был посвящен выяснению взаимосвязи между уровнем снижения ЭФП (соотношением популяций фагоцитов с разным электрокинетическим потенциалом) и функционально-метаболической активностью фагоцитирующих клеток.

Анализ электрофоретической подвижности нейтрофилов при взаимодействии с Y.pestis EV и показателей функциональной активности (фагоцитарный индекс и фагоцитарная активность) полученных фракций фагоцитов, показал, что через 10 минут взаимодействия чумного микроба и нейтрофилов крови человека происходило разделение общей популяции нейтрофилов на три субпопуляции, различающихся не только по электрофоретической подвижности, но и по уровню фагоцитарной активности. Показано, что в этот период взаимодействия нейтрофилов с У.резШ ЕУ наряду со снижением ЭФП, увеличивалась способность нейтрофилов к фагоцитозу. Нейтрофилы, составившие субпопуляцию с наименьшей ЭФП, обладали наиболее высокими показателями фагоцитарной активности. Фракции с наибольшим количеством клеток содержали наиболее активные по фагоцитарной способности нейтрофилы. Через 30 минут инкубации регистрировалось наличие всего одной популяции нейтрофилов. ЭФП этой популяции была снижена по сравнению с контролем. Фагоцитарный индекс составил в среднем 6.75±0.72 (р<0.001) микробных клеток на один нейтрофил. Почти все клетки популяции находились в состоянии фагоцитоза (94.2±2.76%, р<0.001). Взаимодействие нейтрофилов крови и микробных клеток У-ревИв ЕУ в течение 60 минут характеризовалось отсутствием разделения общего пула на субпопуляции по ЭФП. На гистограмме регистрировался один пик выхода клеток, которые обладали низкой ЭФП. В основном все клетки популяции находились в состоянии фагоцитоза (100%, р<0.001). Число захваченных микробных клеток на один нейтрофил составляло 9.2±0.37 (р<0.001). Наблюдалась прямая корреляционная зависимость между степенью подвижности клеток, изменением заряда и фагоцитарной активностью, наиболее выраженные на 10 и 60 минутах взаимодействия с У.реэНв ЕУ (индекс корреляции соответственно составил 0.46±0.13, р<0.001 и 0.74±0.25, р<0.05).

В следующем разделе работы был проведен сопоставительный анализ изменений метаболической активности электрофоретически-гетерогенных субпопуляций моноцитов крови человека под влиянием антигенов чумного микроба. С этой целью изучались: глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа - ключевой фермент пентозофосфатного пути, лактатдегидрогеназа - ключевой фермент гликолитического пути, малатдегидрогеназа и сукцинатдегидрогеназа - ферменты цикла Кребса. Обнаруживалась обратная корреляция между активностью ключевого фермента пентозофосфатного пути обмена углеводов -глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа и ЭФП моноцитов. Взаимодействие моноцитов с основным соматическим антигеном сопровождалось снижением активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на 10 и 30 минуте взаимодействия. Капсульный антиген, напротив, увеличивал ферментативную активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы моноцитов во все сроки исследования и снижал электрофоретическую подвижность клеток.

Инкубация in vitro моноцитов крови с капсульным антигеном чумного микроба сопровождалась повышением активности фермента цикла Кребса- малатдегидрогеназы и фермента гликолиза - лактат-дегидрогеназы. Интересно отметить, что внутри общего пула выделенных клеток субпопуляции с большей ферментативной активностью характеризовались более высокой ЭФП. Активность сукцинатде-гидрогеназы снижалась при взаимодействии моноцитов с антигенами чумного микроба . Максимальные активности ключевого регуляторно-го фермента цикла Кребса идентифицировались в высокоподвижных фракциях. Регистрировалась высокая степень коэффициента корреляции (г=0.98±0.01) между активностью сукцинатдегидрогеназы и ЭФП моноцитов.

Таким образом, использование физико-химического метода определения электрофоретической подвижности и биохимических методов определения ферментативной активности позволило дать интегральную общую характеристику изменениям функциональной активности фагоцитирующих клеток при их взаимодействии in vitro и invivo с чумным микробом и его антигенами. Полученные данные могут иметь важное значение при оценке иммунобиологических свойств разных штаммов и антигенов чумного микроба.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фирстова, Виктория Валерьевна, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Адаменко Г.П. Исследование некоторых поверхностных маркеров и функциональной активности моноцитов и нейтрофильных лейкоцитов в процессе совместного культивирования клеток// Иммунология,- 1992, N1.-С.32-35.

2.Адаменко Г.П. Роль адгезии клеток в рецепторных механизмах взаимодействия поли- и мононуклеарных фагоцитов крови человека// Иммунология,- 1995,- N4,- С. 29-30.

3.Адаменко Г.П. Взаимодействие поли- и мононуклерных фагоцитов крови человека: продукция цитокинов в смешанной культуре нейтрофилов и моноцитов, культивируемых в адгезивных и суспензионных условиях// Иммунология,- 1995, N6,- С.37-39.

4.Адо А.Д., Маянский А.Н. Современное состояние учения о фагоцитозе// Иммунология.- 1983,- N1,- С.20-26.

5.Акимович В.В., Шанина Л.Н., Метлин В.Н., Дальвадянц С.М., Белобородое P.A. Роль некоторых антигенов в вирулентности, токсичности, имму-ногенности и аллергенности чумного микроба// Материалы к конф., посвящ. 50-летию ин-та "Микроб",- 1968,- С.101-103.

6.Александер С.К., Ляшенко В.А.// Журн. Микробиол,- 1975, N6.- С.28-

31.

7.Алексеева Н.Ю. Конструирование вакцин нового поколения против сальмонеллезов и чумы// Иммунология,- 1997, N5.- С. 14-18.

8.Анисимов П.И., Кравцов А.Л., Мареев В.И., Белобородов P.A. Изучение первичного иммунного ответа лимфоцитов белых мышей на введение фракции I чумного микроба методом проточной цитометрии// Мол. биол. и генетика возб ООИ. Часть 2,- Саратов,- 1982,- С.3-6.

Э.Асадов Ч.Д., Нумерова Л.С., Мирзоева Л.Э. Связь между фагоцитарной функцией и цитотоксическими показателями нейтрофилов крови// Лаб. Дело,- 1990,- N11,-С.19-21.

Ю.Атчабаров Б.Б., Исин Ж.М., Сулейменов Б.М. Мутагенное действие полиморфно-ядерных лейкоцитов на Yersinia pestis// ЖМЭИ.- 1989.- N4.-С.10-14.

11.Батурина И.Г., Наумов A.B., Тараненко Т.М. и др. Особенности им-муномодулирующей активности капсульного антигена чумного микроба у мышей различных линий// Иммунол. и специф. проф. ООИ: Тез. докл. конф.-Саратов, 21-23 сент,- 1993,- С.5.

12.Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н., Бахов Ю.И., Насонов Е.Л. Нейтрофилы, их роль в регуляции метаболизма тканей// Успехи совр. биол. и мед.- 1987,- Т.104, вып.2(5).- С.281-296.

13.Бахов Н.И., Александрова Л.З., Титов В.Н. Роль нейтрофилов в регуляции метаболизма тканей//Лаб. Дело,- 1988,- N6.- С.3-13.

14.Бахрах Е.Э., Егорова В.Ф., Филиппов А.Ф. Влияние температуры выращивания на химический состав чумного микроба//ЖМЭИ.- 1963,- С.29-33.

15.Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М. Изучение химического состава аллергена пестина ПП. Сообщение 1. Очистка пестина фильтрацией через гель се-фадекса// Пробл. ООИ,- 1968,- N2,- С. 146-153.

16.Бахрах Е.Э., Тараненко Т.М., Дальвадянц С.М. Изучение химического состава аллергена пестина ПП. Сообщение 4. Соотношение специфических компонентов пестина при многократной экстракции// Пробл. ООИ,-1970.

17.Бахрах Е.Э., Вейнблат В.И. Соматические полисахаридсодержащие антигены чумного микроба// ЖМЭИ.- 1972.-N3.- С. 12-16.

18.Бейум А. Выделение лимфоцитов, гранулоцитов и макрофагов. В кн.: Лимфоциты: выделение, фракционирование и характеристика.-М.:Медицина,- 1980.- С.9-20.

19.Белобородов P.A., Борвикова Т.П., Бахрах Е.Э. и др. Иммунохимиче-ское изучение соматических антигенов, выделенных из штамма ЕВ чумного микроба и его псевдотуберкулезноподобного варианта ЕВМ.- В кн.: Вторая конф. Белорус, биохим общ., посвящ. 100-летию Витебска,- Витебск, 1977.-С.252-254.

20.Белов Л.Г., Дальвадянц С.М. Иммуноаллергенные свойства чумной живой сухой вакцины и основных антигенов чумного микроба// Микробиол., лаб. диагн. и специф. профилакт. карантинных инф.- Саратов, 1989,- С.84-90.

21.Бландова З.К., Душкин В.А., Малашенко A.M., Шмидт Е.Ф. Линии лабораторных животных для медико-биологических исследований.- М.: Наука.-1983,- 189с.

22.Борзова Л.В., Абезгауз H.H., Трошина В.М., Козинец Г.И. Исследование электрофоретической подвижности лейкоцитов в процессе их замораживания.// Пробл. гематологии и перелив, крови.-1975, N5,- С.31-33.

23.Борукаева Л.А. Физиологические показатели у инбредных и неин-бредных мышей в половозрелом возрасте// Тез. конф."Лабораторные животные для медико-биологических и биотехнологических исследований".-М., 20-22 ноября, 1980,-С.9.

24.Брондз В.Д. Т-лимфоциты и их рецепторы в иммунологическом рас-позновании.- М.: Наука.- 1987,- 472 с.

25.Будыка Д.А., Пинкер А.И., Фунтикова Т.Н. Специфическая активность препаратов чумной вакцины ЕВ, обогащенной протективным антигеном// Иммунология и специф. проф. ООИ: Матер. Рос. научн конф. (21-23 сент., 1993, Саратов).- Саратов., 1993,- С. 147.

26.Васильева Г.И., Ткаченко Л.Н. Гетерогенность и перераспределение субпопуляций перитонеальных макрофагов морских свинок под влиянием иммунизации вакцинным штаммом чумного микроба.// Иммунология,- 1990, N1,- С.23-26.

27.Васильева Г.И. Роль макрофагов в иммуногенезе чумы.// ЖМЭИ,-1990. -N12-C.98-104.

28.Васильева Г.И. Роль взаимодействия Y.pestis с клетками системы мононуклеарных фагоцитов в реализации вакцинного и инфекционного процессов.//Дисс... докт. мед. наук,- Саратов.-1990.

29.Васильева Г.И., Ткаченко Л.Н., Веркина Л.М., Дорошенко Е.И. Характеристика протективных свойств противочумных препаратов с помощью индекса перераспределения субпопуляций макрофагов//ЖМЭИ,- 1994, N6.-С.94-96.

30.Васильева Г.И., Веркина Л.М., Ермоленко Т.Д. Презентирующая активность тканевых макрофагов разной локализации и их фракций при первичном и вторичном иммунном ответе к возбудителям чумы// Иммунология.-

1994, N6.- С.55-56.

31.Васильева Г.И., Веркина Л.М., Ермоленко Т.Д. Участие клеток системы мононуклеарных фагоцитов в индукции противочумного иммунитета// Иммунология,- 1994, N6,- С.57-58.

32.Васильева Г.И., Мишанькин М.Б., Козловский В.Н. и др. Цитокинин-дуцирующая активность "мышиного" токсина Yersinia pestis// ЖМЭИ,- 1998, N1.- С.61-64.

33.Вейнблат В.И. Антигены Yersinia pestis (биохимические и иммунологические аспекты)//Автореф. дисс. ... докт. мед. наук,- Саратов,- 1974.

34.Вейнблат В.И., Белобородов P.A., Узенцов С.А. и др. Аллергические свойства ЛПС "основного" соматического и капсульного антигенов чумного микроба// Пробл. ООИ.- 1977,- Вып.4 (56).- С.20-23.

35.Веркина Л.М. Оцека эффективности вакцинации против чумы по модуляции функиональных свойств макрофагов при подкожном и аэрогенном введении вакцин: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук,- Ростов-н/Д, 1994,-136с.

36.Воробьева A.A., Медуницын Н.В. Клеточная теория иммунитета И.И.Мечникова и концепция антиинфекционной резистентности// ЖМЭИ.-

1995,- N3.-C. 36-42.

37.Воронцов Е.Д., Барсуков A.A., Годков М.Д. и др. Подавление кислородного метаболизма фагоцитов капсульным белком// Актуальн. вопр. теор. и прикл. инф. иммунол.; механизмы противочумн. иммунитета: Тез докл. II Всерос. конф.- М.,1987.- С.36.

38.Гааль Э., Медьмин Г., Верецкая Л. Электрофорез в разделении биологических макромолекул,- М.: Мир,- 1982.

39. Голуби некий Е.П., Борсук Г.И., Зонова И.В., Кондратьева A.M. НАДФ.Н-оксидаза макрофагов и полиморфно-ядерных лейкоцитов при фагоцитозе бактерий чумы// Пробл. прир. очаговости чумы: Тез. докл. к IV Сов,-Монг. конф. спец. противочумн. учрежд,- Иркутск, 1980.-Ч.2,- С. 13-15.

40.Голубинский Е.П., Борсук Г.Н., Зонова И.В. и др. Активность ферментов полиморфноядерных лейкоцитов при фагоцитозе чумы// Проф. при-родноочаг. инф.: Тез. докл. Всес. научно-практ. конф,- Ставрополь.-1983,-С.183-185.

41.Голубинский Е.П., Осипенко И.И., Скворцрва Р.Г. и др. Использование ЭФП лимфоцитов для характеристики действия вакцин// Патогенез и механизмы форм-я иммунитета к ООИ.- Саратов, 1987,- С.93-99.

42.Горькова A.B., Павлова Л.П., Тихомирова Е.И. Клеточные механизмы формирования иммунитета к чуме.// Актуальн. вопр. теор. и прикп. инф. иммунол. Механизмы противочумного иммунитета: Тез. докл. II Всес. конф,-М.,1987.- С.38.

43.Гребцова H.H., Чернявская A.C., Лебедева С.А., Иванова B.C. Изучение фагоцитарной активности перитонеальных макрофагов в отношении Yersinia pestis с дефектными и полноценными Fra-антигенами// ЖМЭИ,-1990,- N5.-C.7-11.

44.Грибоедов A.B., Барабаш Г.П. "Основной" соматический антиген или антиген, полученный по методу Буавена-Месробеану из Y.pestis.-ЖМЭИ,- 1985, N3,- С.108-115.

45.Гусев В.А., Брусов О.С., Панченко Л.Ф. Супероксиддисмутаза - радиобиологическое значение и возможности// Вопр. Мед. химии.- 1980.- N3,-С.291-301.

46.Дальвадянц С.М. Иммуногенные и аллергенные свойства соматического антигена чумного микроба, изолированного по методу Буавена и Вестфаля-Людерица: Автореф дисс. ... канд. мед. наук.- Саратов,- 1968,-16с.

47.Дальвадянц С.М., Боровикова Т.П. Содержание "основного" соматического антигена в чумном и псевдотуберкулезном микробах,- В кн.: Пробл. ООИ,- Саратов,-1971, вып.6,- С. 108-112.

48.Дальвадянц С.М., Пономарев Н.Г., Сероглазов В.В. Некоторые стороны иммунологической перестройки морских свинок, привитых препаратами соматических антигенов бактерий чумы и псевдотуберкулеза// Пробл. ООИ,- 1972,- Вып.5(27).- С.134-138.

49.Дальвадянц С.М., Дробышева Т.М. Сравнительное изучение напряженности противочумного иммунитета у белых мышей, привитых "химической", убитой и живой чумными вакцинами// Пробл.ООИ,- 1977,-Вып.6(58).- С.31-33.

бО.Деркачев Ф.Э. - В кн.: Регуляция энергетического обмена и устойчивость организма.- Пущино, 1975.- С. 195-200.

51.Дозоморов И.М., Левин А.Д., Луценко Г.В., Николаева И.С., Баг-лаев Т.Н. Характеристика электрофоретически разделяемых субпопуляций лимфоцитов крови человека.// Иммунология.- 1984, N6.- С.43-48.

52.Дозоморов И.М. //Итоги науки и техники. Сер. Иммунология,- 1984, N13.-C. 166-194.

53.Долгушин И.И., Зурочка A.B., Чукичев A.B. Регуляторные пептиды нейтрофилов// Иммунология.- 1995.- N4,- С. 40-45.

54.Доморадский И.В. Проблемы перекресного иммунитета.- М.: Медицина, 1973.- 136с.

55.Доморадский И.В. Чума: современное состояние, гипотезы, проблемы." Саратов, 1993,- 129с.

56.Ермакова Г.В., Тихомирова Л.А., Корсуков В.Н., Горькова A.B. Оценка состояния Т- и B-систем иммунитета в динамике противочумной вакцинации// Иммунол. и профилакт. ООИ,- Саратов, 1982.- С. 14-20.

57.3адумина С.Ю., Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П. Использование инбредных мышей для изучения протективной активности антигенов чумного микроба// Тез. конф.: Лаб. животные для медико-биол. и био-техн. исследований,- М., 20-22 ноября, 1990.- С.98-99.

58.3адумина С.Ю., Назарова Л.С., Исупов И.В. и др. Использование инбредных мышей для изучения протективности Y.pestis Е\///ЖМЭИ,- 1995.-N6,- С.69-70.

59.Зайцева Л.Г., Васильева Е.И., Туманян М.А. Гетерогенность популяции макрофагов, вызванная введением различных агентов.// Иммуномоду-ляторы в инф. патол..- М.,1988.- С.38-48.

бО.Зарецкая Ю.М., Войлокова Р.Я., Расулова Т.Х.// Иммунология,- 1982, N 1,-С.77-78.

61.3арецкая Ю.М. Клиническая иммуногенетика.- М.: Медицина, 1983.208 с.

62.3асторожнова H.H., Ляшенко В.А., Дроженников В.А. Активирующее воздействие полисахаридов с различной молекулярной массой на макрофаги в эксперименте// Иммунология.- 1985, N 2,- С.73-74.

63.Зацепина Г.Н., Ноздрачева А.Н. Заряд поверхности лимфоцитов как критерий функционального состояния организма// Биофизика,- 1980.- 25, N4,- С.721-726.

64.3емсков В.М., Барсуков A.A., Безносенко С.А. и др. Образование фагоцитами активных форм кислорода как показатель их функционального состояния// VII Сев.-Кавк. конф. по иммунологии, аллергологии и мол. биол.: Тез.докл.-Краснодар, 1983.- С.115-116.

65.3емсков В.М., Родионов С.В., Щербухин В.В. и др. Выделение и анализ нефагоцитирующих прилипающих клеток перитонеального экссудата мышей// Иммунология,- 1990.- N5.- С.22-25.

бб.Зонова И.В. Биохимические реакции при фагоцитозе чумного микроба макрофагами и полиморфноядерными лейкоцитами: Автореф, дисс. ... канд. биол. наук,- Саратов, 1989,- 13с.

67.3онова И.В., Осипенко И.И., Борсук Г.И., Дубровина В.И. Роль некоторых кислороднезависимых систем при фагоцитозе чумного микроба// Совр. аспекты прир. очаговости, эпидем. и проф. ООИ болезней: Тез. Докл. Научн. Конф,- Ставрополь, 1993.-С.205-207.

68.Зубов А.Н., Писарева Л.Н., Семенова С.Б. Изменение мембранного потенциала перитонеальных макрофагов крысы при экстраклеточном действии АТФ//Цитология,-1994,- Т.36, N11.- С. 1091-1001.

69.Иенсен Г.Л. В кн.: Иммунологические методы,- М., 1979,-С.323-327.

70.Исин Ж.М. Изменение активности кислородзависимого метаболизма полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови и макрофагов перитонеального экссудата при экспериментальном заражении мышей возбудителем чумы//ЖМЭИ,- 1985.- N10,- С.69-76.

71.Исин Ж.М. О влиянии антигенов чумного микроба на способность полиморфноядерных лейкоцитов периферической крови и макрофагов перитонеального экссудата мышей ответить кислородным взрывом при заражении частицами зимозана.- М., 1986.- 19с,- Деп. В ВИНИТИ 25.08.86, N6112-B.- Реф. в: ЖМЭИ,- 1986,- N6.

72.Исин Ж.М., Тугамбаев Т.И. Структурнофункциональные свойства и биологическая активность капсульного антигена, "мышиного" токсина и эндотоксина Y.pestis//>KM3M.- 1987, N4,- С.91-98.

73.Исин Ж.М. Изменение активности кислородзависимого метаболизма полиморфноядерных лейкоцитов и макрофагов первичного очага при экспериментальном заражении мышей возбудителем чумы//Журн. гиг., эпиде-миол., микробиол. и иммунол.- 1989.- Т.33,- N2.- С.235-238.

74.Исупов И.В., Назарова Л.С., Павлова Л.П. и др. Изучение влияния различных антигенов Y.pestis на клеточное звено иммунитета// ЖМЭИ.-1990,- N9.- С.85-89.

75.Йонаускене И.Д. Морфологические и биохимические особенности крови лабораторных животных// Тез. конф,- Лаб. животные для медико-биол. и биотехнол. исследований.- М., 20-22 ноября,- 1990.- С. 13-14.

76.Кашкина М.А., Фрейдлин H.C.II Бюл. Экспер. биол,- 1980, N 4,-С.439-441.

77.Кирилличева Г.Б., Наумов A.B., Ледванов М.Ю. и др. Влияние бел-ковополисахаридного комплекса и чистого белка фракции 1 чумного микро-

ба на метаболические показатели макрофагов// Бюлл. эксп. биол. и мед,-1993, N5,- С.494-497.

78.Ковальчук Л.В., Соколова Е.В., Бурцева Л.В.// Бюлл. экспер. биол.-1976, N8,-С. 972-975.

79.Козинец Г.И., Борзова Л.В., Кульман P.A. Поверхностный заряд клеток крови и некоторые аспекты его биологической роли.//Лаб. дело.-1975, N5,- С.284-289.

80.Коробкова Е.И. Фагоцитоз в приобретенном иммунитете к чуме// Тр. ин-та "Микроб".- 1960,- Вып.4,- С.32-34.

81.Корсуков В.Н., Тихомирова Л.А., Ермакова Т.В. Применение метода непрерывного клеточного электрофореза для изучения иммунологического процесса// Мол. биол., генетика и иммунология возб. ООИ.//Тез. докл. Всес. конф.-Ростов-на-Дону, 1984,- С.115-117.

82.Красникова Н.О. О преимуществах использования линейных животных при испытании стимуляторов заживления ран кожи,- В кн.: Генетика лаб. животных и эксперимент: Матер, конф. научно-иссл. лаб. экспер.-биол. моделей,- М., 1974,- С.46-48.

83.Кудрявцева Г.В. Некоторые молекулярно-кинетические характеристики ферментов пентозофосфатного пути метаболизма углеводов// Успехи совр. биол,- 1980,-Т.89, вып.1,-С.74-89.

84.Кутырев В.В., Булгакова Е.Г., Кириллина O.A. и др. Технология разработки получения компонентов химической противочумной вакцины на основе рекомбинантных штаммов.// Тез. докл. II Всес. конф. по направл. "Генная и клеточная инженерия ", (ноябрь- дек., 1991, Пущино-на-Оке).- М., 1992,- С.119-120.

85.Кукпева Л.В. Сравнительное изучение фагоцитарной активности пе-ритонеальных и альвеолярных макрофагов в отношении штаммов чумного микроба// Механизмы формирования иммунитета к ООИ,- Саратов, 1986.-С.22-32.

86.Ледванов М.Ю., Адамов А.К., Анисимова Т.И. Состояние адениловой системы лимфоцитов с различной электрофоретической подвижностью в условиях антигенной стимуляции.// Иммунол. и проф. ООИ.- Саратов.-1982,-С.60-64.

87.Ледванов М.Ю., Адамов А.К., Наумов A.B., Корсуков В.Н., Кравцов А.Л.// Пат. физиология,иммунология и аллерг. ООИ.- Саратов, 1984,- С.50-56.

88.Ледванов М.Ю. Метаболизм лимфоцитов и функциональная активность иммунной системы в противохолерном вакцинном процессе. Автореф. дисс. ... докт. мед. наук,- Саратов, 1987.

89.Ледванов М.Ю., Наумов A.B., Стукова Н.Ю. идр. Продукция активных форм кислорода фагоцитирующими клетками и их ферментативный спектр

в процессе взаимодействия с отдельными антигенами и штаммами чумного микроба// Молекул, мех. развития инф. заболев. (Звенигород, 1990): Тез. докл. Всес. конф.-

90., 1990,- С.58.

91.Ледванов М.Ю., Таран В.И., Шведун Г.П. и др. Значение признака пигментсорбции в реализации вирулентных свойств Y.pestis на уровне взаимодействия микроб-макрофаг// Микробиол., биохимия и специф. проф. карантинных инф,- Саратов.-1990.- С. 16-22.

92.Ледванов М.Ю., Емельянова Н.В., Пронин A.B. и др. Инициализация реакции бласттрансформации лимфоцитов различными антигенами чумного микроба у иммунизированных Y.pestis EV мышей// Актуальн. пробл. и задачи биохимии, диагн., иммунопроф. ООИ,- Саратов,- 1991,- С.44-50.

ЭЗ.Ледванов М.Ю., Дроздов И.Г., Пронин A.B. и др. Механизмы формирования противочумного имунитета у людей и экспериментальных животных// I съезд иммунологов России: Тез. докл. (Новосибирск, 22-25 июня, 1992).- Новосибирск, 1992,- С. 272-273.

94.Ледванов М.Ю., Емельянова Н.В., Стукова Н.Ю. и др. Влияние штаммов и антигенов чумного микроба на активность интерлейкинов (1 и 2) и уровень бласттрансформации лимфоцитов при формировании иммунитета к чуме// Матер. Научно-практ. Конф., посвящ 100-летию образов проти-вочумн службы России,- 1997.- Т.1- С.224.

95.Ледванова Т.Ю. Влияние чумного микроба и его антигенов на функционально-метаболическую активность клеток системы мононуклеарных фагоцитов: Автореф.дисс.... канд. мед. наук.- Саратов, 1995.- 161с.

Эб.Ленинджер А. Основы биохимии.- М.: Мир, 1985,- Т.2.- 368с.

97.Ляшенко В.А., Дроженников В.А., Молотовская И.М. Механизмы активации иммунокомпетентных клеток,- М.:Медицина.-1988.

98.Ляшенко В.А. Макрофаги в инфекционном процессе// Иммунология.-1995, N4.-C.48-52.

99.Манько В.М., Хаитов P.M. Иммунокомпетентные клетки (поверхностные структуры и субпопуляционная организация)// Итоги науки и техники. Иммунлогия.-1987.-Т.18- С.3-25.

ЮО.Маянский А.Н., Маянский Д.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге.-Новосибирск: Наука,- 1983,- С. 196.

101.Маянский А.Н., Цырендоржиев Д.Д. Активация макрофагов// Успехи совр. биол,- 1990,- Т. 109, вып. 1-3,- С.352-369.

102.Маянский А.Н. Фагоцитоз: проблемы и перспективы// Вестн. Рос. АМН,- 1993.- N4.- С.52-55.

103.Маянский А.Н., Невмятулин А.Л., Маянский H.A. Проблемы управления фагоцитарными механизмами иммунитета//ЖМЭИ,- 1995,- N3.- С. 2126.

104.Медведев H.A. Линейные мыши.- М.: Медицина.-1964.- 180с.

Юб.Мирошников А.И.,Фомченков В.М., Иванов А.Ю. Электрофоретиче-ский анализ и разделение клеток.- М.:Наука.- 1986.- С.72-99.

Юб.Мохин K.M., Адамова Г.В., Анисимова Т.И., Никитина Г.А. Антигенный спектр живой чумной вакцины как критерий ее качества / Всес. науч,-иссл. противочумн. ин-т "Микроб".- Саратов, 1988,- 7с.- Библиогрю: бназв.-Деп. В ВИНИТИ,- 12.08.88, N6544.

107.Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П., Доморадская Т.И. Моделирование чумной интоксикации на линейных мышах// Информ. бюл.: изобрет., рацпредлож. и метод, рекоменд. N19,- Саратов, 1984,- С.8.

108.Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П. и др. Морфологическое изучение чумной интоксикации при статусе инбридинга// Иммунология и специф. проф. ООИ,- 1986,- Саратов.- С.9.

109.Назарова Л.С., Исупов И.В., Павлова Л.П. и др. Морфологическое изучение повреждающего действия вакцинного штамма чумного микроба у инбредных мышей// Бюл. экспер. биол. и мед.- М.: Мед.- 1988, N6.- С. 761764.

1 Ю.Назарова Л.С., Исупов И.В., Кирилличева Г.Б., Сучкова О.П. Влияние чумной живой вакцины ЕВ и сальмозана на ферментативную и функциональную активности макрофагов и тимоцитов инбредных мышей// Иммунология,- 1991, N1,- С.80.

111.Наумов A.B., Дроздов И.Г., Ледванов М.Ю. Иммунология чумы,-Саратов,-1992.

112.Нескромный А.Г., Васильева В.Ю. Исследование дифференциров-ки моноцитов крови человека в суспензионном и адгезивном состоянии// ЖМЭИ,- 1993, N4,-С.14-18.

113.Никитина Г.А., Стукова Н.Ю., Ледванов М.Ю., Анисимова Т.И. Ки-слородзависимые бактерицидные системы макрофагов в процесе фагоцитоза чумной живой вакцины// Факторы клет. и гумор. иммунитета при разл. физиол. и патол. состояниях: Тез. докл. XI науч. конф.- Челябинск, 1990.-С.75.

1 И.Николаев Н.И., Пономарев Н.Г., Филиппов А.Ф., Дальвадянц С.М. Вакцинопрофилактика чумы// Профилакт. чумы.- 1973,- С. 129-137.

115.Пальцин A.A. Некоторые вопросы современного учения о поли-морфноядерных лейкоцитах//Архив патологии.- 1988, N8.-С.85-90.

116.Перфильев И.В., Осипенко И.И., Голубинский Е.П. Электронно-цитохимические данные о миелопероксидазной активности лейкоцитов морских свинок при действии фракции I чумного микроба// Эпидемиол., микробиол. и иммунол. бакт. и вирусных инф.: Тез докп обл. науч. конф. молодых ученых, 17-20 окт., 1989,- Ростов н/Д, 1989,- С.83-85.

117.Петров P.B. Формы взаимодействия генетически-различающихся клеток лимфоидных тканей (трехклеточная система иммуногенеза)// Усп. совр. биол,- 1970,- Т.60, N2,- С.261-271.

118.Петров Р.В., Чередеев А.Н., Михайлова A.A., Сидорович И.Г. Взаимодействие и кооперация клеток при индукции иммунного ответа.// Итоги науки и техники. Общие вопросы патологии,- М .,1972,- т.З. - С. 106-153.

119.Петров Р.В., Дозоморов И.М., Леви А.Д. и др. Характеристика субпопуляций лимфоцитов, полученных препаративным электрофорезом.// Иммунология,- 1980, N5.- С.5-8.

120.Петров Р.В., Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В. и др. Феномен спонтанной миграции макрофагов и лейкоцитов in vitro.// Иммунология.-1983. -N1- С.44-49.

121.Петров Р.В. Иммунология,- М.:Медицина.- 1987.-415с.

122.Печковский Д.В., Потапнев М.П., Вознюк A.B. Усиление бактерицид-ности, но не фагоцитарной активности нейтрофилов человека под действием ИЛ-6// Иммунология,- 1993,- N6,- С. 29-30.

123.Пигаревский В.Е. Зернистые лейкоциты и их свойства.- М,- 1978.

124.Пионтковский С.А., Самойлова Л.В. Изучение с помощью НСТ-теста бактерицидного потенциала нейтрофильных лейкоцитов морских свинок, привитых чумной живой вакциной// Информ. бюл. изобрет., рацпредлож. и метод, рекоменд.- Саратов.- 1987, N26.- С.29.

125.Пол У. Иммунология. М.: Мир.- 1989,-Т.З.-С. 179-185.

126.Потапнев М.П., Печковский Д.В. Иммунорегуляция антимикробной активности нейтрофилов человека// Иммунология,- 1994, N5.- С.4-6.

127.Потапнев М.П., Печковский Д.В., Гарбузенко Т.С. и др. Зависимость функции лимфокинактивированных киллерных клеток человека от присутствия моноцитов/ макрофагов// Иммунлогия.- 1995, N4,- С.30-32.

128.Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева А.К. Особенности фагоцитоза авирулентных штаммов чумного микроба, лишенных антигенов Fl, V и W// Вопр. иммунол. и молекул. Биол.: Тез. докл. конф,- Нальчик , 1981,-Т.1.- С.31-32.

129.Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева А.К. Устойчивость к фагоцитозу вирулентных штаммов чумного микроба в зависимости от температуры культивирования// Вопр. профилакт. природноочаг. инф,- Саратов, 1983,-С.16-21.

130.Пустовалов В.Л., Васильева Г.И., Киселева А.К., Дорошенко Е.П. Индекс завершенности фагоцитоза как критерий оценки иммуногенности вакцинного штамма чумного микроба// Генетика и микробиол. природноочаг. инф.- Саратов, 1984,- С.44-48.

131.Пустовалов В.Л., Васильева Г. И. Антигенный состав и антифагоцитарные свойства чумного и псевдотуберкулезного микробов// Мол. биол. и микробиол. природноочаг. инф,- Саратов, 1986.- С.50-56.

132.Ройт А. Основы иммунологии,- М.: Мир.- 1991.- 327с.

133.Самойлова Л.В., Пионтковский С.А., Кузнецова К.А. и др. О формировании прививочного и постинфекционного иммунитета к чуме.// Иммунология и иммунопроф. чумы и холеры,- Саратов, 1980. - С.50-54.

134.Сафронова В.М., Локтев H.A., Басилова Г.И., Пилипенко В.Г. Цитохимические изменения в лейкоцитах периферической крови у морских свинок, привитых против чумы, туляремии и сибирской язвы//ЖМЭИ,- 1982.-N7,- С.73-76.

135.Саяпина Л.В. Пролиферация и популяционный состав иммуноком-петентных клеток в динамике вакцинного и инфекционнго процессов при чуме: Автореф. дисс. ... канд. мед. наук,- Саратов, 1991,- С.92-122.

136.Сердобинцев Л.Н. Полиморфизм капсульного антигена чумного микроба: Автореф. Дисс. ... канд. мед. наук,- Саратов, 1984.- 19с.

137.Сигал В.Р., Осадчий П.В., Лунько А.Л. Дисперсия ЭФП эритроцитов, хранимой и донорской крови// Гематология и трансфузиол,- 1994, N3,- С.27-29.

138.Смирнова Л.А., Ольхова Н.В., Нерадовский В.А. Изучение чувствительности мышей различных линий к возбудителю чумы,- В кн.: Лаб. животные в мед. исследованиях.- М., 1974,- С.54-60.

139.Страйер Л. Биохимия: В Зт.- М: Мир,1985,- Т.2.- 307с.

140.Стукова Н.Ю., Ледванов М.Ю., Шведун Г.П., Брандзишевский Ю.В., Сердобинцев Л.Н. Влияние капсульного антигена и "мышиного" токсина на функцию кислородзависимых бактерицидных систем макрофагов// Бакт. Токсины (Юрмала, 27-30 ноября, 1989): Тез. II Всес. конф. по бактер. токсинам,-М., 1989.-С.124.

141.Стукова Н.Ю., Ледванов М.Ю., Шведун Г.П. и др. Изучение взаимодействия отдельных антигенов и факторов вирулентности чумного микроба на системы микробного киллинга фагоцитов методом люминол-зависимой хемилюминесценции// Матер. VI Всерос. съезда микробиол., эпидемиол. (Нижний Новгород, 1990).- М., 1990,- С.56.

142.Стукова Н.Ю., Попов Ю.А., Дроздов И.Г. и др. Факторы патогенно-сти чумного микроба, их генетическая детерминированность и влияние на функциональное состояние макрофагов// Генетика и биохимия вирулентности возб. ООИ: Тез. докл. конф. (Волгоград, 21-22 окт., 1992).- Волгоград, 1992,-С.22.

143.Стукова Н.Ю., Дроздов И.Г., Попов Ю.А. и др. Влияние антигенов Y.pestis на формирование бактерицидного потенциала макрофагов, процессы активации хроматина и состояние лизосомального аппарата// Иммуно-. и

специф. профил. ООИ: Тез. докл. конф. (Саратов, 21-23 сент.,1993).- Саратов, 1993.- С.68.

144.Тараненко Т.М., Вейнблат В.И. Основные представления о структуре О-соматического антигена чумного микроба// Иммунохимия и лаб. ди-агн. ООИ.- Саратов, 1985.- С.10-17.- Библиогр.: 50 назв.

145.Тараненко Т.М. Углеводсодержащие антигены чумного и псевдотуберкулезного микробов (теоритические и прикладные аспекты): Автореф. дисс. ... Дюкт.биол. наук.- Саратов, 1988.-41с.

146.Татибана Т. Иммунный ответ Т- и B-клеток// Эйсэй Кэнса,- 1979, T.28.-N2-C. 107-115.

147.Темнов A.B., Мирошников А.И., Тищенко В.В. Влияние антикоагулянтов на электрокинетические характеристики клеток// Проблемы гемотологии,- 1982, N1,- С.29-34.

148.Тихомирова Е.И. Изменение миграции и пролиферации стволовых кроветворных клеток, электрофоретической подвижности и популяционного состава имммунокомпетентных клеток в процессе формирования у мышей иммунитета к чуме: Автореф. дис. ... канд. биол. наук.- Саратов, 1990.- 22с.

149.Тихомирова Е.И., Тихомирова Л.А., Герасимова К.И., Горькова A.B. Влияние вакцинации против чумы на функциональное состояние иммунной системы у людей// Актуальн. пробл. разработки мед. средств и метод, со-хран. и восстановл. боеспос. личн. сост. ВС.- 1994.- С. 197-198.

150.Тихомирова Л.А.,Ермакова Г.В., Корсуков В.Н., Горькова A.B. ЭФП Т- и B-лимфоцитов крови и селезенки в динамике развития противочумного иммунитета// Пробл. специф. профилактики чумы и холеры.- Саратов, 1985,-С. 19-24.

151.Учитель И.Я. Макрофаги в иммунитете.- М.: Медицина, 1978.- 199с.

152.Фрейдлин И.С., Залевская А.Г., Кравцов В.Д. Уровень содержания лизосом в мононуклеарных фагоцитах как показатель их функциональной активности// Структура и функции лизосом: Тез. докл. II Всес. симпоз.- Новосибирск, 1980.-С. 182-183.

153.Фрейдлин И.С. Система мононуклеарных фагоцитов.- М.: Медицина, 1984,-272с.

154.Фримель Г., Брок И. Основы иммунологии.- М.:Мир, 1986.-254с.

155.Хаитов P.M., Земсков В.М. Некоторые избранные проблемы функциональной активности макрофагов// ЖМЭИ.- 1995.- N3.- С.27-32.

156.Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Современные подходы к оценке основных этапов фагоцитарного процесса// Иммунология.- 1995, N4.- С.3-7.

157.Хараморенко С.С., Ракитянская A.A. Электрофорез клеток крови в норме и патологии.-Минск:"Беларусь".- 1974.- 40с.

158.Хейри П., Андерсон Л. Фракционирование иммунокомпетентных клеток, обладающих различными физическими свойствами.// Лимфоциты:

выделение, фракционирование и характеристика.- М.: Медицина, 1980.-с.43-63.

159.Хейфец Л.Б., Абалкин В.А. Разделение форменных элементов крови человека в градиенте плотности верографин-фикол// Лаб. Дело.- 1973, N10,- С.59.

160.Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Мембранные белки мононуклеарных фагоцитов в межклеточных взаимодействиях//ЖМЭИ.- 1995,- N3.- С.12-20.

161.Чумаченко В.Д., 1969 Соматические антигены, изолированные из чумного микроба с помощью мочевины. Автореф. Дисс. ... канд. Мед. Наук.-Саратов,1970.

162.Щуковская Т.Н., Корсуков В.Н. Популяционный состав макрофагов в динамике иммунологического ответа на вакцинацию холерной вакциной "холероген-анатоксин+ О-антиген".- В кн.: Молекул. Биол., генетика и имму-нол. Возб. ООН- Ростов-н/Д.- 1984,- С. 156-158.

163.AII-Essa L.G., Masaynki N., Ken-lehi К. et al. Heterogeneity of circulating and exudated polymorphonuclear leukocytes in superoxidegenerating response to cyclic AMP and cyclic AMP-elevating agents: Invest, of the underlying mech.// Biochem. Pharmacol.- 1995,- V.49, N3,- P.315-322.

164.Antony V.B. The influence of immunologically commited lymphoid cells on macrophage activity in vivo// N.Engl. J.Med.- 1985, N319.- P.146-151.

165.Baker E.E. Sommer H., Fester L.E. et al. Studies on immunization against plague. The isolation and characterization of the soluble antigen of the Past, pestis//J.Immunol.- 1952,-Vol.64.- P.139-141.

166.Bauer J., Hanning K. Changes of the electrophretic mobility of human monocytes are regulated by lymphocytes// Electrophoresis.- 1984,- N5.- P.269-274.

167.Bauer J., Kachel V., Hannig K. The negative surface charge density is a maturation marker of human B-limphocytes.// Cellular immunology 111,- 1988.-P.354-364.

168.Bauer J., Stunkel Klaus G.E., Kachel Volker. Linkage between monokine production and regulatin of the negative surface charge density of human monocytes// Immunol. invest.-1992.- 21, N6,- P.507-521.

169.Bauer J. Cell electrophoresis.- CRC Press Inc.- 1994.- 328p.

170.Baugham A.D., Pethica B.A.,Seaman G.V.F. The charged groups at the interface of some blood cells.//J. Gen. Physiol.- 1958,- N69,- P. 12-18.

171.Beuth J., Ко H.L., Quie P., Pulverer G. Chemiluminescense response of human polymorphonuclear and mononuclear phagocytic cells induced by Staphilococcus saprophyticus, lectinophagocytosis versus opsonophagocytosis// Infection.- 1990,-V. 18, N1.-P.36-39.

172.Biscy A.N. et al. Alterations in electrophoretic mobility of 50 mouce macrophages treated with microtubule inhibitors// Indian J. exp. biol.- 1977.- 15, N11- P.970-972.

173.Boehmer H. The separation of T- and B-limphocytes// J.Immunol.-1974,- V.112, N1,- P.70-78.

174.Boivin A., Mesrobiamu J., Mesrobiamu L. Extraction d'un complexe toxige et antigenigue a partir du bacille d'Aertrycke// C.R.Soc. Biol.- 1933,-V.114.- P.307-310.

175.Bretscher M.S.// Nature New Biol.-1971.-Vol.231.- P.229.

176.Brown K.A.,Wolstencroft R.A.,Booth C.G., Dumonde D.C. A reappraisal of the macrophage electrophoretic mobility test for the measurment of lymphokine activity.//J Immunol, meth.- 1985,- 82, N2,- P. 189-198.

177.Brubaker R.R. The genus Yersinia: biochemistry and genetics of virulence//Curr. Trop. Microbiol. Immunol.- 1972,-Vol.57.- P.111-158.

178.Burrows T.W. Virulence of Pasterella pestis and immunity of plague// Ergebn. Microbiol. Immunitat.- 1963,-Vol.37.- P.59-113.

179.Butler T. Plague and other Yersinia infections. Chapter 5. Pathogenesis and toxins// New York, London: Plenum Med. Boeh. Co.-1983,- XII,- 220p.

180.Chen L., Collins J. Monocyte superoxide secretion triggered by human Ig A// Immunol.- 1989,- Vol.68, N4,- P.491-496.

181.Chen Т.Н. The antigenic structure of Pasterella pestis and its relationship to virulence and immunity// Acta Trop.- 1965.- Vol.22, N2,- P.97-117.

182.Cordier G., coron G., Mornex J.F. Role du monocyte-macrophage dans L'immunite// Re. Fc. Lab.-1991,-Vol.19, N221,- P.55-64.

183.Corvaia N., Reischl I.G., Kroemer E., Mudde G.C. Modulation of Fc-receptor-mediated early events by the tyrosine phosphate CD45 in primary human monocytes// Eur. J.lmmunol.- 1995,- 25, N3- P.738-744.

184.De Maele M. Leukocyte adherence defect// J.Clin. Invest.- 1983,-P. 1457-1465.

185.Eggleton P., Crawford N., Fisher D. Fractionating of human neutrophils into subpopulations by countercurrent distribution: surface charge and functional heterogenity// Eur J.Cell Biol.- 1992,- 57(2).- P.265-272.

186.Eggleton P., Fisher D., Crawford N. Heterogenity in the circulating neutrophil pool: studies on subpopulations separated by continuous flow electrophoresis//J.leukoc. Biol.- 1992,- 51(6).- P.617-625.

187.Eylar E.H., Madoff H.A., Broudy O.K., Oncley J.L. The contribution of cialic asid to the surface charge of the erythrocytes// J.Biol. Chem.- 1992,-Vol.237.- P. 1992-2000.

188.Filho F.S., Santos B.S., Tecia M.U. de Carvalho, Wanderley de Souza. Surface charge of resident, elicited, and activated mouse peritoneal macrophages. //J. Leukocyte biology.- 1987, N 41.- P.143-149.

189.Frendl G., Fenton M.J., Beller B.D. Regulation of macrophage activation by IL-3. II. IL-3 and lypopolysaccharide act synergistically in the regulation of IL-1 expression//J.Immunol.- 1990, N144.- P.3400-3410.

190.Furth R. Origin and turnover of monocytes and macrophages// Cell kinet. Inflammatory React.- Berlin etc., 1989,- C. 125-150.

191.Golovanov M.V. New concept on the structure of an electric double layer on the cell surface under the conditions of action of a high concentration electrolite// Biophisics.-1991, N36,- P.463.

192.Haimovitz A., Fuks Z., GaliliN., Treves A.J. Changes in peanut agglutinin binding to human monocytes during their maturatin to macrophages.// J.Reticuloendothel. Soc.- 1982.-N 31.- P.187-192.

193.Hannig K., Zeiller K. Electophoretic methods and its application in biology// J.Physiol.Chem.- 1969,-Vol.359.- P.467.

194.Hannig K. Continuous free flow electrophoresis// J.Chromatogr.- 1993, N15,- P.193.

195.Hansen E., Wustrow T., Hannig K. Antigen-specific electrophoresis cell separation for immunological investigations.// Electrophoresis.- 1989, N10.-P.645-652.

196.Hashimoto N. Clinical application of cell electrophoresis// Physico-Chem. Biol. (Jpn).- 1992, N36,- P.323.

197.Hyrc K., Wilczek A., Cieszka K. Electrophoretic heterogenity of pigmented hamster melanoma cells.// Pigment. Cell. Res.- 1993, N6.- P. 100.

198.lnkik Z.A., Park Jong-gu., Huter S. et al. Molecular dissection of Fcr-Gu receptor-mediated phagocytosis// Immunol. Lett.- 1995, 44 N2,- P. 133-138.

199.Janssen W.A., Surgalla M. Plague bacills: survival within host phagocytes//Science.- 1963,-Vol.113, N2,- P. 139-143.

200.Johnston R.B. Current concepts: immunology- monocytes and macrophages// Engl. J.Med.- 1989, N318,- P747.

201.Kapur R., Lilien J., Picciolol GL., Black J. Human monocyte morphology is a affected by local substrate charge heterogenity// J.Biomed. mater. Res.-1996, N32(1).- P.133-142.

202.Kimura A.K., Rubin B., Anderson L.C.// Scand. J.Immunol.- 1977.-Vol.6.- P.787-792. ( Mm. no BpoHfl3, 1987).

203.Klebanoff S.J., Clark R.A. The neutrophil: function and clinical disorders.-Amsterdam.- 1978.

204.Knippel E., Rychly J., Thomaneck U., Schutt W. Particle electrophoresis in medicine and biology// Med. Focus Int.- 1992, N3.- P.8.

205.Knyszynski A., Leibovich S.J., Skutelsky E., Danon D Macrophages from unstimulated, mineral oil and thioglycollate stimulated mice: a comparative study of surface anionic sites and phagocytosis of "old" red blood cells.// J.Reticuloendothel. soc.-1978.- 24, N3,- P.205-215.

206.Koenig U.D. The charges of lymphocyte electrophoretic mobility in cancer patients// Eur. J.Cancer Clin Oncol.- 1985, N2,- P. 1463.

207.Kotzsh M., Grossman H. Studies of lymphokine activity in cancavalin A-stimulated lymphocyte supernatants using the macrophage electrophoretic-mobility test// Exp. pathol.- 1982,-V.21, N3,-P.143-148.

208.Kraskina N., Bliacher M., Fedorova I., Knippel E., Schutt W. Some aspects of cell electrophoresis application in immunologic investigation.// Cell. Electrophor. Proc. Int. Meet., Rostock.(Sept. 24-28, 1994).-Berlin, New York, 1985,- P. 565-580.

209.Letari O., Nicosia S., Chiavarodi C., et al. Activation by bacterial lypopolysaccharide causes changes in the single peritoneal macrophages// J.Immunol.-1991,-Vol.147, N3.- P.980-983.

21 O.Lewis C.M., McGee J.O'D. The macrophage.- IRL Press, Oxford Univ.-1992,-423p.

211.Maddox D.E., Shibata S., Goldstein S.M. Mous mononuclear phagocyte antigenic heterogenity detected by monoclonal antibody// Infect. Immun.- 1982, N29,- P.520-525.

212.Madoff M.A., Ebbe S., Baldini M. //J.Clin. Invest.- 1964,- Vol.43.- P.870.

213.Malkosky M., Bubenic J., Jakoubkova J. et al. The macrophage electrophoretic mobility assay in patients with renal cell carcinoma// Neoplasma.-1981, N28(2).- P.245-251.

214.Mason D.W.// J.Exp. Med. (USA), 1976,-Vol.143.-P.1111-1119. (Mm. no Kynb6epr, 1986).

215.Mehrishi J.N. Sulfhydril groups on the surface of intact Ehrlich ascites tumor cells, human blood platelets and lymphocytes.- British Empire Cancer Campaign for Reserch, Annual report. L.-1969.-243p.

216.Mehrishi J.N. Positively charged aminogroups on the surface of normal and cancer cells.- Europ. J.Cancer.-1970, vol 6.- P. 127-137.

217.Mehrishi J.N. Surface molecular components of human lymphocytes// Int. Arch. Allergy and Appl. Immunol.- 1972,- Vol.42.- P.69-92.

218.Moonis M., Ahmad G., Bachawat B. Macrophages in host defence// Indian J. Bichem. and Biophys.- 1992,-V.29, N2,- P.115-122.

219.Moretta L„ Mingari E.// J.Exp. Med. (USA).- 1980,- Vol. 154,- P.581-589. ( Mi/it. no BpoHA3, 1987).

220.Nielsen H. Chemotaxis of human monocytes. Methodological and clinical aspects// Dan. Med. Bull.- 1990,- V.37, N5.- P.406-423.

221.North R.J. The concept of the activated macrophage// J.Immunol.-1978, N121,- P.806-816.

222.0dle-Cora K., Wu Jun-Zen, Mao Xialing et al. Heterogenity of Kupffer cells and splenic, alveolar and peritoneal macrophages for the production of TNF, IL-1 and IL-6//Inflammation.- 1994,-V.18, N5.- P.511-523.

223.0hsawa K., Oshima H., Ohki S. Surfase potential and surfase charge density of the cerebral-cortex synaptic vesicles and stability of vesicle suspention// Biochim. Biophys. Acta.-1981, N 648,- P.206-214.

224.Petty H.R., Ware B.R., Remold H.G.,Rocklin R.E. The effects of stimulated lymphocyte supernatants on the electrophoretic mobility distribution of peritoneal macrophages.//J.Immunol.- 1980.-124, N1.- P.381-387.

225. Pick E., Keisari V.- Superoxide anion and hydrogen peroxide production by chemically elicited peritoneal macrophages induction by multiple nonphagocytic stimuli// Cell Immunol.-1981,- V.59, N2,- P.301-318.

226.Poligano A., Tostorello C., Venzia A., Jirillo E., Antonaci S. Age-assotiated changes of neutrophil responsiveness in a human healthy elderly population// Citobios.- 1994.- N4,- P. 29-30.

227.Ruhenstroth-Bauer G., Fuhr mann G.F., Naturforsch Z.I/ Biol.-1961, N166.-P.252.

228.Sabolovic D., Hashimoto N. Alterations of uninfected red blood cell membranes during in vitro and in vivo parasite growth// Phys. Chem. Biol. (Jpn.).- 1992, N36,- P.323.

229.Schutt W., Thomaneck U., Knippel E. et al. Biomedical and clinical applications of automated single cell electrophoresis// Phys. Chem. Biol.(Jpn.).-1990, N34,- P.293.

230.Seidel A., Hammer G., Rolzer G. Separation by carrier-free electrophoresis of subpopulations of bovine alveolar macrophages.// Vet. Immunol, and Immunopathol.- 1990,- 24, N3,- P.285-291.

231.Shenton B.R.,Jenssen H.L., Werner H. et al. A comparison of the kinetic of the macropahge electrophoretic mobility and the tanned sheep erythrocyte electrophoretic mobility test.// J.Immunol, meth.- 1977,14,- P.123-139.

232.Shimizu M., Iwaguchi T. Analysis of lymphocyte electrophoresis// Phys. Chem. Biol. (Jpn.).- 1992, N36,- P.329.

233.Shold C.M., Eklude A., Hallden G. Different cell surface and phagocytic properties in mononuclear phagocytes from blood and alveoli// APMIS.- 1990.-VI.98, N5,- P.415-422.

234.Shutt W., Grummer G., Preece A., Goetz P. Principles of cell electrophoresis, in Physical Charact. Of Biol. Cells, Schutt W. et al.- Verlag Gesundheit GmbH, Berlin.-1991.- 215p.

235.Shutt W., Hashimoto N., Shimizu M. Application of the cell electrophoresis for clinical diagnosis. In: Cell Electrophoresis, Bauer J.- Crc Press, Boca Ranton, Fl.- 1994,- Chap. 13.

236.Simmon M.I. Summary: the cell surface regulates information flow, material and transport, and cell identity// Cold Spring Harbor Symph. Quant. Biol.- 1992, N57,- P.673.

237.Slivinsky G.G., Magda I.N. The surface charge of the NK/Ly ascites tumor cells differing in proliferative capacity, stage of cell cycle and ploidy// Tsitologiya.- 1990, N32,- P.61.

238.Solbach W., Moll H., Rollinghoff M. Lymphocytes play the music but the macrophage call the tune// Immunol. Today.-1991.-V.12, N1,- P.4-6.

239.Springer T.A., Unkeless J.C. Analysis of macrophage differentiation and function with monoclonal antibody. // Contemp. Top. Immunobiol.- 1984, N 14,-P.1-31.

240.Stoddard B.L. Mononuclear phagocytes// Curr. Opt. In immunol.- 1992, N1,- P.26-35.

241.Suga M., Donnenberg A.M. // Amer. J. Path.- 1980.-Vol.99.- P.305-324.

242.Surgalla M.J. Properties pf virulent and avirulent strains of Pasterella pestis//Ann. N.Y.Acad. Sci.- 1960,-Vol.88.-P.1136-1145.

243.Surgalla M.J., Busley E.D. Infectivity and virulence of Non-Pesticinogenic Pasterlella pestis// Infect. Immunol.-1971.-Vol.4, N4.- P.416-418.

244.Thomaneck U., Hashimoto N. Current application of the electrophoresis mobility test. In: Physical Characteriz. of Biological Cells, Shutt W. et al.- Verlag Gesundheit GmbH.- Berlin.- 1991,- 265p.

245.Une T., Brubaker R.R. In vivo comparison et avirulent Vwa- and Pgm-or Pst phenotypes of Yersinia// Infect. Immunol.- 1984,- Vol.43, N3,- P.895-900.

246.Van Dyke K. Mediators of immunity//Adv. Immunol.- 1990, N29.- P. 136.

247.Van Furth R. Cells of the mononuclear phagocyte system. Nomenclature in terms of sites and conditions. In: Mononuclear Phagocytes: Functional Aspects, edited by R. Van Furth.- P. 1-30,- Martinus Nijhoff Publishers , The Hague.- 1980.

248.Velde A.A., Koningchbruggen P.J. Monocyten en macrofagen// Analyse.- 1990,- B.45, N4,- P.82-85.

249.Walter H., Graham Linda L.,Krob E.J., Hill M. Correlation between phagocytic and membrane surface properties reflected by partitioning of human peripheral blood monocytes in two-polymer aqueous phases.// Biochim. Et biophis. acta.- 1980.-602, N2.-P.309-322.

250.Walter H., Widen KE. Differential electrophoretic behavior in aqueous polymer solutions red blood cells from Alzheimer patients and from normal individuals// Biochim Biophys. Acta.- 1995, Mar22, 1234(2).- P.184-190.

251 .Weiss L.//lnt. Rev. Cytol.- 1969,- Vol.26,- P.23.

252.Werb Z., Cohn Z.A. Plasma membrane synthesis in the macrophage following phagocytosis of polystyrene latex particles// J.Biol. Chem.- 1988, N247,- P.2439.

253.Wilkins D.T., Ottewill R.H., Baughan A.D. On the flocation of cheep leucocytes: (.Electrophoresis studies//J.Theor. Biol.- 1962, N2.- P.165-175.

254.Williams R.S., Gewurs H., Quie P.C. Effects of fraction I from Yersinia pestis on phagocytosis in vitro// J.Infect. Dis.- 1972,- Vol.126, N3.- P.235-241.

255.Wolf-Watz H. Plasmid-mediated virulence of Yersinia// Bioechnol. Comp. Med.- 1987,-Vol.3.-P.159-178.

256.Zamparo O., Comper W.D. Model anionic polisaccharide matrices exibit lower charge selectivity than is normaly assotiated with kidney ultrafiltration// Biophys. Chem.- 1990, N38,- P. 167.

257.Zeiler K., Hannig K. Evidence for specific organ distributions of the lymphoid cells// Hoppe-Seyler's Z.Physiol. Chem.-1971, N352.- P.1162.

258.Zeiler K., Pascher G., Wagner G. et al. Distinct subpopulations of thymus-dependent lymphocytes. Tracing of the differentiation pathway of T-cells by use of preparatively electrophoretically seperated mouse lymphocytes// Immunol.- 1974.-V.26, N1,- P.995-1012.