Особенности апоптотической активности клеток костного мозга у больных хроническим миелолейкозом. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.10, кандидат медицинских наук Сясина, Татьяна Владимировна

• Сясина, Татьяна Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Сясина, Татьяна Владимировна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Современные представления о механизмах развития ХМЛ.

1.2 Особенности течения заболевания.

1.3 Методы лабораторной диагностики ХМЛ.

1.4 Современные подходы к лечению ХМЛ.

1.5 Апоптоз: морфологические и биохимические признаки.

1.6 Особенности обмена глюкозы в опухолевых клетках.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ, МЕТОДЫ И ОБЪЕКТ

ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Клинико-гематологическая характеристика больных.

2.1.1. Характеристика групп больных.

2.1.2. Распределение больных по фазам ХМЛ.

2.1.3. Показатели периферической крови больных.

2.1.4. Показатели миелограммы больных.

2.1.5. Лечение больных.

2.2 Лабораторные методы.

2.2.1. Подсчет миелограммы.

2.2.2. Выделение клеток костного мозга.

2.2.3. Индукция апоптоза.

2.2.4. Методы определения апоптоза в клетках костного мозга.

2.2.5. Определение концентрации глюкозы в среде инкубации.

2.2.6. Кариотипирование клеток костного мозга.

2.3 Статистическая обработка результатов.

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Результаты лабораторных исследований.

3.1.1. Определение апоптоза методом флуоресцентной микроскопии.

3.1.2. Определение апоптоза методом проточной цитометрии.

3.1.3. Оценка способности клеток костного мозга к восстановлению апоптоза в ходе лечения ХМЛ.

3.1.4. Потребление глюкозы клетками костного мозга у больных ХМЛ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Особенности апоптотической активности клеток костного мозга у больных хроническим миелолейкозом.»

Актуальность проблемы

Хронический миелолейкоз (ХМЛ) представляет собой клональное миелопролиферативное заболевание, возникающее вследствие реципрокной транслокации t(9;22)(q34;qll) между хромосомами 9 и 22 [Morris С.М., 2011]. В результате данной транслокации на 22 хромосоме образуется химерный ген BCR-ABL, кодирующий синтез белка с высокой тирозинкиназной активностью [Deininger M.W. et al., 2000; Modi H. et al., 2007]. К настоящему времени патогенетическая роль данного гена в развитии хронического миелолейкоза (ХМЛ) не вызывает сомнений [Pellicano F. et al., 2011].

Заболеваемость ХМЛ в мире составляет 1-2 случая на 100 тыс. населения, таким образом, расчетное число больных находится в пределах 7—10 тыс. человек в год [Ries L.A.G., Eisner М.Р. et al., 2004].

Долгое время лечение заболевания оставалось малоэффективным и позволяло лишь несколько снизить объем опухолевой массы [Абдулкадыров К.М. и др., 1998].

Применение цитостатических препаратов (гидроксимочевина, бусульфан) позволило увеличить выживаемость больных в среднем до 3-5 лет в хронической фазе болезни, не оказывая влияния на продолжительность жизни в фазе акселерации и бластного криза [Fausel С., 2007]. Аллотрансплантация гемопоэтических стволовых клеток (аллоТГСК) стала важным этапом в лечении больных ХМЛ: 10-летняя выживаемость пациентов в хронической фазе, подвергшихся аллоТГСК, составила 60-65% [Socie G. et al., 2001; Simonsson В. et al., 2005]. Тем не менее, проведение аллоТГСК у большинства больных затруднено из-за высокого риска осложнений [Туркина А.Г. и др., 2003; Marin D. et al., 2003; Moen M.D. et al., 2007].

Появление препаратов интерферона в 80-х годах позволило достичь увеличения вероятности 10-летней выживаемости до 78% у пациентов с полным цитогенетическим ответом, хотя средняя продолжительность жизни больных существенно не возросла (6-7лет) [Ломана Е.Г. и др., 2009; Burchert A., Muller М.С., et al., 2010].

Новой эпохой в терапии больных ХМЛ стали препараты, обладающие способностью ингибировать реакции аутофосфорилирования специфических белков в опухолевой клетке [Maekawa Т. et al., 2007]. Один из представителей данной группы препаратов иматиниб - ингибитор BCR-ABL тирозинкиназы, в настоящее время является препаратом первой линии терапии у больных ХМЛ [Baccarani М, Cortes J. et al., 2009]. В ряде рандомизированных исследований было установлено, что на фоне приема иматиниба достигнута 8-летняя общая выживаемость у 85% обследованных больных, и у 92% больных не наблюдалось прогрессии заболевания в фазу акселерации и бластного криза [Deininger М., O'Brien S.G. et al., 2009; Wei G. et al., 2010].

Несмотря на высокую эффективность иматиниба, у части больных не удается получить полный цитогенетический ответ, [Туркина А.Г. и др., 2003; Marín D. et al., 2003; Cortes J.E. et al., 2006]. Другой проблемой является развитие невосприимчивости у определенной части больных. В связи с этим не теряет актуальности проблема поиска путей преодоления резистентности к препаратам, используемым для лечения, в частности к иматинибу [О'Нате Т., Shakespeare W.C. et al., 2009; Eiring A.M. et al., 2011].

Торможение апоптоза является механизмом, путем которого опухолевые клетки приобретают устойчивость к лекарственным препаратам [Владимирская Е.Б., 2002; Vicente-Dueñas С. et al., 2009]. Противоопухолевые эффекты иматиниба связывают с его способностью угнетать пролиферативную активность опухолевых клеток и восстанавливать апоптотическую активность клеток [Vigneri Р., Wang J.Y., 2001; Chomel J.C., Turhan A.G., 2011]. Полагают, что иматиниб принимает участие в блокаде антиапоптотических сигналов не только на уровне протеинкиназ (тирозинкиназа BCR-ABL, c-Kit и PDGFR), но и на уровне сигнальных путей, подавляющих апоптоз, в частности RAS и STAT [Kantarjian Н.М. et al., 2011].

В механизме действия иматиниба важная роль отводится его способности угнетать процессы обмена глюкозы опухолевыми клетками [Gottschalk S. et al., 2004; Kominsky D.J. et al., 2009]. Изучение апоптоза на клеточных культурах с помощью набора классических биохимических, микроскопических и современных методов (проточной цитометрии и полимеразной цепной реакции) позволило связать гибель опухолевых клеток с нарушением процессов утилизации глюкозы под влиянием иматиниба [Осипова Е.Ю., 2003; Giuntoli S. et al., 2011]. Полагают, что он замедляет поступление глюкозы в клетку, способствует её перераспределению между различными метаболическими путями [Pelicano Н. et al., 2006; Kominsky D J. et al., 2009].

Тем не менее, механизмы вмешательства иматиниба в обмен глюкозы в опухолевых клетках выяснены недостаточно. Ряд авторов утверждают, что иматиниб эффективно подавляет метаболизм глюкозы, замедляет рост злокачественных клеток и угнетает их пролиферативную активность за счет индукции апоптоза [Cullinane С. et al., 2005; Giuntoli S. et al., 2011]. В экспериментах на клеточных культурах было показано параллельное снижение активности Всг-АЫ, скорости поглощения глюкозы и увеличения апоптотической активности клеток [Barnes К. et al., 2005].

В то же время, остаются практически неизученными взаимоотношения между способностью злокачественных клеток к восстановлению апоптоза и потреблением ими глюкозы у больных хроническим миелолейкозом. Нет ответа на вопрос, могут ли быть использованы в диагностических и прогностических целях показатели апоптоза и потребления глюкозы клетками костного мозга как лабораторные маркеры для оценки эффективности лечения больных XMJI. Решение этого вопроса будет способствовать выбору наиболее целесообразных схем терапии, и в ряде случаев, индивидуализации терапии.

Цель исследования

Изучить апоптотическую активность клеток костного мозга и их способность к поглощению глюкозы в качестве дополнительных лабораторных маркеров диагностики и прогнозирования течения хронического миелолейкоза на фоне лечения иматинибом.

Задачи исследования

1. Сравнить результаты определения апоптоза в клетках костного мозга у больных хроническим миелолейкозом двумя методами: флуоресцентной микроскопией и проточной цитометрией.

2. Сопоставить процессы спонтанного и индуцированного апоптоза в клетках костного мозга с их способностью поглощать глюкозу у больных хроническим миелолейкозом в разных фазах заболевания.

3. Изучить динамику изменения количества акридин связывающих клеток и скорость поглощения ими глюкозы при положительном ответе на проводимую терапию у больных хроническим миелолейкозом.

4. Выяснить влияние иматиниба на апоптоз и потребление глюкозы клетками костного мозга у больных хроническим миелолейкозом в разных фазах заболевания.

5. Установить значимость апоптоза в клетках костного мозга и их способность к поглощению глюкозы для оценки эффективности направленной терапии и прогнозирования течения хронического миелолейкоза.

Научная новизна

Впервые на достаточном клиническом материале, включающем 95 больных ХМЛ, в клетках костного мозга изучены апоптотическая активность и скорость поглощения глюкозы на фоне лечения иматинибом.

Установлено, что способность клеток вступать в апоптоз и интенсивность поглощения глюкозы клетками костного мозга взаимосвязаны и значительно различаются в хронической фазе, фазе акселерации и бластного криза.

Получены доказательства того, что минимальная скорость апоптотических реакций опухолевых клеток у нелеченных больных в хронической фазе и фазе акселерации существенно отличаются при сравнении с больными в фазе бластного криза, в то время как максимальная скорость поглощения глюкозы одинакова.

Показано, что максимальная скорость апоптотических реакций и минимальное поглощение глюкозы клетками костного мозга наблюдается у больных в хронической фазе, находящихся в полной цитогенетической ремиссии.

Получены новые данные о прогностическом потенциале апоптоза опухолевых клеток у больных хроническим миелолейкозом, леченных иматинибом. Изучение характера апоптотических реакций в клетках костного мозга по связыванию ими акридин оранжа в сочетании с количественной оценкой их способности поглощать глюкозу позволяет выделить больных с благоприятным ответом на проводимое лечение или прогнозировать дальнейшее развитие заболевания в фазу акселерации и бластного криза.

Практическая значимость

Полученные данные о прогностическом значении апоптоза клеток костного мозга диктуют целесообразность включения исследования скорости спонтанного и индуцированного апоптоза опухолевых клеток в сочетании с определением интенсивности потребления глюкозы в алгоритм обследования больных хроническим миелолейкозом.

Использование результатов исследования апоптоза клеток костного мозга у больных хроническим миелолейкозом может способствовать раннему выявлению прогрессии заболевания и химиорезистентности, а также делению больных на группы риска, что важно для выбора адекватной терапии.

Данные о характере апоптотических реакций в клетках костного мозга в сочетании с количественной оценкой их способности поглощать глюкозу позволяют выделить пациентов с неблагоприятным течением хронического миелолейкоза.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Способность клеток вступать в апоптоз и интенсивность поглощения глюкозы клетками костного мозга взаимосвязаны и значительно различаются в хронической фазе, фазе акселерации и бластного криза.

2. У больных хроническим миелолейкозом в хронической фазе, в фазе акселерации и бластного криза наблюдается резкое замедление спонтанного и индуцированного апоптоза на фоне выраженного поглощения глюкозы.

3. Максимальное усиление апоптотических реакций, как при спонтанном, так и при индуцированном апоптозе и минимальное поглощение глюкозы наблюдается у больных в хронической фазе, достигших при лечении иматинибом цитогенетической ремиссии.

4. Изучение апоптотических реакций в клетках костного мозга в сочетании с количественной оценкой их способности поглощать глюкозу способствует определению прогноза течения хронического миелолейкоза и подбора адекватной терапии.

Реализация результатов исследования

Результаты исследования используются в учебном процессе на циклах «Клиническая лабораторная диагностика», «Гематологические и общеклинические методы исследований» на кафедре клинической лабораторной диагностики ГБОУ ВПО СЗГМУ им. И.И. Мечникова Минздравсоцразвития России (Санкт-Петербург), кафедре гематологии и трансфузиологии в ФГБУ «РосНИИ Гематологии и Трансфузиологии» ФМБА России (Санкт-Петербург) и внедрены в практику работы поликлинического отделения и клинического отдела «Химиотерапии гемобластозов, депрессий гемопоэза и трансплантации костного мозга ФГБУ «Российский научно-исследовательский институт гематологии и трансфузиологии ФМБА России».

Апробация работы

Материалы диссертационного исследования были доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции «Фундаментальные и прикладные исследования в медицине» (Сочи, 2010), Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Современные проблемы гематологии и трансфузиологии» (Санкт-Петербург, 2011), юбилейной научно-практической конференции молодых ученых Санкт-Петербургской медицинской академии последипломного образования «Актуальные вопросы клинической и экспериментальной медицины» (Санкт-Петербург, 2011), Всероссийской научно-практической конференции «Клиническая лабораторная диагностика в гематологии и службе крови» (Санкт-Петербург, 2011).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе 4 в изданиях, поименованных перечнем ВАК.

Объем и структура диссертации

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Сясина, Татьяна Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Апоптотическая активность клеток костного мозга и их способность поглощать глюкозу являются лабораторными маркерами, характеризующими ответ опухолевых клеток больных хроническим миелолейкозом на действие направленной терапии.

2. Апоптотическая активность опухолевых клеток в хронической фазе хронического миелолейкоза при положительном ответе на проводимое лечение достоверно увеличивается, в то время как их способность поглощать глюкозу уменьшается. При достижении полного цитогенетического ответа у больных, получающих иматиниб, наблюдается максимальное ускорение процессов спонтанного и индуцированного апоптоза.

3. У больных в фазе акселерации и бластного криза выявляется резкое замедление апоптотических реакций, как при спонтанном, так и индуцированном апоптозе на фоне выраженного поглощения глюкозы.

4. Обнаружение низкого числа клеток, связывающих акридин оранж, на фоне высокой скорости поглощения глюкозы, позволяет отнести этих больных в прогностически неблагоприятную группу и, наоборот, при высоком количестве клеток и низком уровне поглощения глюкозы вероятность достижения цитогенетической ремиссии хронического миелолейкоза достоверно выше.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Определение количества клеток костного мозга, связывающих АО в сочетании с количественным определением поглощения глюкозы целесообразно использовать при диагностике хронического миелолейкоза в дополнении к стандартным методам исследования.

2. Обнаружение низкого числа клеток костного мозга, связывающих АО на фоне высокого поглощения глюкозы, позволяет отнести этих больных к прогностически неблагоприятной группе и, наоборот, при высоком количестве клеток, связывающих АО в сочетании с низким уровнем поглощения глюкозы прогнозировать вероятность достижения ремиссии.

3. Изучение количества акридин связывающих клеток костного мозга и степени поглощения ими глюкозы могут быть использованы для формирования групп риска больных хроническим миелолейкозом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Сясина, Татьяна Владимировна, 2012 год

1. Абдулкадыров K.M., Бессмельцев С.С. Хронический миелолейкоз// Гематология: новейший справочник. Под общ. ред. Абдулкадырова K.M. -М., Эксмо, СПб, Сова. 2004. - С. 496-555.

2. Абдулкадыров K.M., Бессмельцев С.С., Рукавицын O.A. Лечение хронического миелолейкоза. С-Петербург, ЛЕКА, 1999. -151 с.

3. Абдулкадыров K.M., Бессмельцев С.С., Рукавицын O.A. Хронический миелолейкоз. С-Петербург, Специальная литература. 1998. - 446с.

4. Виноградова О. Ю., Туркина А. Г., Хорошко Н. Д. Организация терапии хронического миелолейкоза. Первый общероссийский регистр больных хроническим миелолейкозом: анализ и перспективы. Гематология и трансфузиология 2008. - №5. - С. 54

5. Виноградова О.Ю. Клиническая эволюция хронического миелолейкоза в процессе лечения ингибиторами тирозинкиназ. Автореф. дис. док. мед. наук. -М., 2011.-46с.

6. Владимирская Е. Б. Апоптоз и его роль в регуляции клеточного равновесия// Клиническая лабораторная диагностика. 2002. - №11. -С.25-32.

7. Владимирская Е.Б. Механизмы апоптоза клеток крови.// Лабораторная медицина.-2001. -Т.121. -№4.-с. 47-54.

8. Владимрская Е. Б. Биологические основы противоопухолевой терапии (очерки). -М.: «Агат-Мед», 2001.- 6 с.

9. Волкова М.А. Гливек первый препарат патогенетического действия в терапии хронического миелолейкоза// Современная онкогематология. — 2003. - Экстравыпуск. - С.5-10.

10. Волкова М.А. Новые возможности в терапии хронического миелолейкоза: дазатиниб// Клиническая онкогематология. 2008. - Т.1, №3. - С.218-225.

11. П.Глузман Д.Ф., Скляренко Л.М., Надгорная В.А. Опухоли кроветворной и лимфоидной тканей (цитоморфология, иммуноцитохимия, алгоритмыдиагностики). К.: ДИА, 2008.—196с.

12. Глузман Д.Ф., Скляренко Л.М., Надгорная В.А., Ивановская Т.С. Современная лабораторная диагностика миелопролиферативных новообразований// Мед газ Здоровье украины. 2011 - № 1(14)- С.26-27.

13. Куцев, С.И., Оксенюк О.С., Вельченко М.В. Влияние концентрации иматиниба в плазме на достижение молекулярной ремиссии у больных хроническим миелолейкозом// Казанский медицинский журнал. 2009. -том 90, №3,-С. 339-343.

14. Ласунская Е.Б., Кравцов В.Д., Фрейдлин И.С. Взаимодействие макрофагов и стволовых кроветворных клеток мышей in vitro// Цитология. 1989. -Т.31, №3. - С. 359-363.

15. Ломана Е.Г., Моторин Д.В., Романова Е.Г., Зарицкий А.Ю. Хронический миелолейкоз до и после применения иматиниба// Онкогематология. -2009.- №2. -С.4-17.

16. Луговская С. А., Морозова В. Т., Почтарь М. Е. Лабораторная диагностика лейкозов. Тверь: "Губернская медицина". -1999. С.29-34.

17. Луговская С.А., Почтарь М.Е. Гематологический атлас. 2004. — изд. «Триада». С.83-99.

18. Мамаев H.H., Зарицкий А.Ю. Хронический миелолейкоз// Гематология: руководство для врачей. Под общ. ред. Мамева H.H., Рябова С.И. СПб, СпецЛит. - 2008. - С. 271-289.

19. Ольшанская Ю.В. Стандартизация протоколов цитогенетического исследования при острых лейкозах, миелопролиферативных заболеваниях и миелодиспластических синдромах// Справочник заведующего КДЛ. -2010.-№12.-С. 15-20.

20. Осипова Е.Ю. Клеточные модели для оценки уровня и характера апоптоза клеток крови человека. Автореф. дис. канд. биол. наук. -М., 2003. 45с.

21. Погорелов В.М., Козинец Г.И. Морфология апоптоза при нормальном и патологическом ге мопоэзе.// Гематология и трансфузиология. 1995. -Т.40.-№5. - С. 17-24.

22. Тронов В.А., Константинов Е.М. Репарация ДНК и гибель покоящихся лимфоцитов крови человека , индуцированные перекисью водорода// Биохимия. 2000. - Т.65.- Вып. 11. - С.1516 - 1524.

23. Туркина А.Г., Виноградова О.Ю., Хорошко Н.Д., Воробьев А.И. Достижения в диагностике и лечении больных хроническим миелолейкозом в Российской Федерации (2004 2008 гг.)// Бюллетень сибирской медицины. - 2008. - Прил. 3. - С. 76-80.

24. Черныш Н.Ю. Особенности связывания акридин оранжа клетками костного мозга больных множественной миеломой. Автореф. канд. мед. наук, СПб, 2002.- с.22.

25. ЗО.Чухловин А.Б. Усиление апоптоза лейкоцитов периферической крови в связи с развитием лейкопении после интенсивной химиотерапии.//

26. Вопросы онкологии,- 1999. -Т.45. №4. - с.384 - 386.

27. Ярилин A.A. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме. / / Патол. Физиол. Эксперим. Терапия. 1998. - №2. - С.38-48.

28. Adams J.M. Ways of dying: multiple pathways to apoptosis// Gene Dev. -2003. Vol.17, №20. -P. 2481-2495.

29. AI Ali H.K., Leiblein S., Kovacs I., Henning E., Neiderwieser D., Deininger M.W. CML with and ela3 BCR-ABL fusion : rare, bening, and a potential diagnostic pitfall//Blood.-2002.-Vol. 100.-P. 1092-1093.

30. Baccarani M., Rosti G., de Vivo A., et al. A randomized study of interferonalpha versus interferon-alpha and low-dose arabinosyl cytosine in chronic myeloid leukemia// Blood. 2002. - Vol.99. - P.l527-1535.

31. Barnes D.J., Melo J.V. Primitive, quiescent and difficult to kill: the role of non- proliferating stem cells in chronic myeloid leukemia.// Cell Cycle.— 2006.—Vol.5, №24.—P. 2862-2866.

32. Barnes K., Mcintosh E., Whetton A.D., Daley G.Q., Bentley J., Baldwin S.A. Chronic myeloid leukaemia: an investigation into the role of Bcr-Abl induced abnormalities in glucose transport regulation // Oncogene 2005.- Vol. 24.-P. 3257-3267.

33. Bayley J.P., Devilee P. The Warburg effect in 2012// Curr Opin Oncol. -2012. Vol.24, №1. - P. 62-67.

34. Behrend L., Henderson G., Zwacka R.M. Reactive oxygen species in oncogenic transformation// Biochem Soc Trans. 2003. - Vol.31. - P. 14411444.

35. Bekisz J., Baron S., Balinsky C., Morrow A., Zoon K.C. Antiproliferative properties of type I and type II interferon// Pharmaceuticals (Basel). 2010. -Vol.3, №4.-P. 994-1015.

36. Bentley J., Walker I., Mcintosh E., Whetton A.D., Owen-Lynch P.J., Baldwin S.A. Glucose transport regulation by p210 Bcr-Abl in a chronic myeloid leukaemia model // Br J Haematol 2001 - Vol. 112, № l.-P. 212 - 215.

37. Bhatia R., Munthe H.A., Forman S.J. Abnormal growth factor modulation ofbetal-integrin-mediated adhesion in chronic myelogenous leukaemia haematopoietic progenitors// Br J Haematol. 2001. - Vol.115, №4. -P.845-853.

38. Biswas S.K., Zhao Y., Sandirasegarane L. Imatinib induces apoptosis by inhibiting PDGF- but not insulin-induced PI 3-kinase. Akt survival signaling in RGC-5 retinal ganglion cells// Mol Vis. 2009. - Vol.15. - P.1599-1610.

39. Blagosklonny M.V. Cell death beyond apoptosis// Leukemia. 2000. -Vol.14, №8.-P.1502-1508.

40. Boros L.G., Lee W.N., Go V.L. A metabolic hypothesis of cell growth and death in pancreatic cancer // Pancreas.- 2002- Vol. 24- P. 26 33.

41. Bratton S.B., Salvesen G.S. Regulation of the Apaf-l-caspase-9 apoptosome// J Cell Sci. 2010. - Vol. 123(Pt 19).-P. 3209-3214.

42. Brehme M., Hantschel O., Colinge J., Kaupe I., Planyavsky M., Kocher T.,

43. Mechtler K., Bennett K.L., Superti-Furga G. Charting the molecular network of the drug target Bcr-Abl// Proc Natl Acad Sci USA. 2009. - Vol.106, №18. -P.7414-7419.

44. Burchert A., Muller M.C., Kostrewa P., et al. Sustained molecular response with interferon alfa maintenance after induction therapy with imatinib plus interferon alfa in patients with chronic myeloid leukemia. J Clin Oncol 2010;28(8):1429- 1435.

45. Chasseriau J., Rivet J., Bilan F., Chomel J.C., Guilhot F., Bourmeyster N., Kitzis A. Characterization of the different BCR-ABL transcripts wuth a single multiplex RT-PCR// Journal of Molecular Diagnostics. 2004. - Vol.6, №4. -P. 343-347.

46. Chawla-Sarkar M., Lindner D.J., Liu Y.F., Williams B.R., Sen G.C., Silverman R.H., Borden E.C. Apoptosis and interferons: role of interferonstimulated genes as mediators of apoptosis// Apoptosis. -2003. Vol.8, №3. - P.237-249.

47. Chen Y., Peng C., Sullivan C., Li D., Li S. Critical molecular pathways in cancer stem cells of chronic myeloid leukemia// Leukemia. 2010. - Vol.24, №9 - P. 1545-1554.

48. Chomel J.C., Turhan A.G. Chronic myeloid leukemia stem cells in the era of targeted therapies: resistance, persistence and long-term dormancy// Oncotarget. 2011. - Vol.2, №9. - P.713-727.

49. Cohen J.J. Apoptosis //Immunol. Today. 1993. - Vol. 14. - P. 126-130.

50. Darzynkiewicz Z., Galkowski D., Zhao H. Analysis of apoptosis by cytometry using TUNEL assay// Methods. 2008. - Vol. 44, №3. - P. 250-254.

51. Deininger M. W., Vieira S., Mendiola R. et al. BCR-ABL tyrosine kinase activity regulates the expression of multiple genes implicated in the pathogenesis of chronic myeloid leukemia // Cancer Res. 2000. - Vol. 60. -P. 2049—2055.

52. Dewar A.L., Cambareri A.C., Zannettino A.C., Miller B.L., Doherty K.V., Hughes T.P., Lyons A.B. Macrophage colony-stimulating factor receptor c-fms is a novel target of imatinib// Blood. 2005. - Vol. 105, № 8. - P.3127-3132.

53. Dix M.M., Simon G.M., Cravatt B.F. Global mapping of the topography and magnitude of proteolytic events in apoptosis// Cell. 2008. — Vol. - 134, №4. -P.679-691.

54. Doonan F., Cotter T.G. Morphological assessment of apoptosis// Methods. -2008. Vol.44, №3. - P. 200-204.

55. Druker B.J., Lydon N.B. Lessons learned from the development of an abltyrosine kinase inhibitor for chronic myelogenous leukemia// J Clin Invest. -2000. Vol.105, №1. -P.3-7.

56. Eiring A.M., Khorashad J.S., Morley K., Deininger M.W. Advances in the treatment of chronic myeloid leukemia// BMC Med. 2011. - Vol. 9. -P.99-104.

57. Elkon K. Apoptosis and Autoimmunity// Apoptosis and Autoimmunity. Eds in J. R. Kalden, M. Herrmann WILEY-VCH Verlag GmbH & Co. KGaA, Weinheim.-2003.-P. 3-11.

58. Elstrom R.L., Bauer D.E., Buzzai M., Karnauskas R., Harris M.H., Pias D.R., Zhuang H., Cinalli R.M., Alavi A., Rudin C.M., Thompson C.B. Akt stimulates aerobic glycolysis in cancer cells // Cancer Res 2004 - Vol. 64-P. 3892-3899.

59. Fantin V.R., St-Pierre J., Leder P. Attenuation of LDH-A expression uncovers a link between glycolysis, mitochondrial physiology, and tumor maintenance// Cancer Cell. 2006. - Vol.9, №6. - P. 425-434.

60. Farquharson M., Shepherd P. Clinical Features of CML// Myeloproliferative Disorders. Eds in Melo J., Goldman J. New York, Springer. - 2007. -P. 59-74.

61. Fausel C. Targeted chronic myeloid leukemia therapy: seeking a cure// J Manag Care Pharm. 2007. - Voll3, №8( Suppl A). - P. 8-12.51.

62. Fischer U., Jänicke R.U., Schulze-Osthoff K., Many cuts to ruin: a comprehensive update of caspase substrates// Nature Publishing Group. -2003.-Vol. 10.-P. 76-100.

63. Fulda S., Debatin K.M. Signaling through death receptors in cancer therapy// Curr Opin Pharmacol. 2004. - Vol.4, №4. - P.327-332.

64. Giuntoli S., Rovida E., Barbetti V., Cipolleschi M.G., Olivotto M., Dello Sbarba P. Hypoxia suppresses BCR/Abl and selects Imatinib-insensitive progenitors within clonal CML population // Leukemia- 2006.- Vol. 20, № 7- P. 1291-1293.

65. Giuntoli S., Rovida E., Gozzini A., Barbetti V., Cipolleschi M.G., Olivotto M.,

66. Dello Sbarba P. Severe hypoxia defines heterogeneity and selects highly immature progenitors within clonal erythroleukemia cells // Stem Cells.-2007- Vol. 25, № 5 -P. 1119- 1125.

67. Goldman J. Management of chronic myeloid leukemia// Semin Hematol. -2003.-Vol.40.-P.l-103.

68. Gottschalk S., Anderson N., Hainz C., Eckhardt S. G., Serkova N.J. Imatinib (STI571)-mediated changes in glucose metabolism in human leukemia BCR-ABL-positive cells // Clin Cancer Res 2004 - Vol. 10 - P. 6661-6668.

69. Haberkorn U., Altmann A., Kamencic H., Morr I., Traut U., Henze M., Jiang S., Metz J., Kinscherf R. Glucose transport and apoptosis after gene therapy with HSV thymidine kinase// Eur J Nucl Med.-2001-Vol. 28.-P. 16901696.

70. Hehlmann R., Berger U., Pfirrmann M., Hochhaus A., Metzgeroth G., Maywald O., Hasford J., Reiter A., Hossfeld D.K., Kolb H.J., Loffler H.,

71. Heinrich M.C., Griffith D.J., Druker B.J., Wait C.L., Ott K.A., Zigler A.J. Inhibition of c-KIT receptor tyrosine kinase activity by STI 571, a selective tyrosine kinase inhibitor// Blood. 2000. - Vol. 96, № 3. - P.925—932.

72. Hochhaus A., La Rosée P. Imatinib therapy in chronic myelogenous leukemia: strategies to avoid and overcome resistance// Leukemia. 2004. -Vol.18, №8.-P.1321-1331.

73. ISCN (1995): An International System for Human Cytogenetic Nomenclature, (ed) Mitelman F.; S. Karger, Basel. 1995.

74. Johnstone A., Thore R. Immunochemistry in Practice. 3-rd ed. Oxford, 1998.

75. Jones D., Luthra R., Cortes J. et al. BCR-ABL fusion transcript types and levels and their interaction with secondary genetic changed in determining the phenotype of Philadelphia chromosome-positive leukemias// Blood. 2008. -Vol.15, №112.-P.5190-5192.

76. Kantaijian H.M., Giles F., Quintas-Cardama A., Cortes J. Important therapeutic targets in chronic myelogenous leukemia// Clin Cancer Res. -2007. Vol.13, №4. - P. 1089-1097.

77. Keeshan К., Cotter T.G., McKenna S.L. High Bcr-Abl expression prevents the translocation of Bax and Bad to the mitochondrion// Leukemia. 2002. -Vol.16, №9.-P.1725-1734.

78. Kiladjian J.J., Mesa R.A., Hoffman R. The renaissance of interferon therapy for the treatment of myeloid malignancies// Blood. 2011 - Vol.11,18.-P. 4706-4715.

79. Kirschner M.W. The meaning of systems biology // Cell-2005- Vol. 121, №4-P. 503-504.

80. Kominsky D.J., Klawitter J., Brown J.L., Boros L.G., Meló J.V., Eckhardt G.S., Serkova N.J., Abnormalities in glucose uptake and metabolism in imatinib-resistant human BCR-ABL positive cells // Clin Cancer Res 2009-Vol. 10-P. 3442-3450.

81. Kominsky D.J., Klawitter J., Brown J.L., Boros L.G., Meló J.V., Eckhardt G.S., Serkova N.J., Abnormalities in glucose uptake and metabolism in imatinib-resistant human BCR-ABL positive cells // Clin Cancer Res 2009.-Vol. 10-P. 3442-3450.

82. Koppenol W. H., Bounds P.L., Dang C.V. Otto Warburg's contributions to current concept of cancer metabolism // Nat Rev Cancer.-2001.-Vol.ll, № 5-P. 325- 337.

83. Kroemer G. Mitochondria in cancer // Oncogene. 2006.- Vol. 25.- P. 4630-4632.

84. Kurzrock R., Kantaijian H.M., Druker B.J., Talpaz M. Philadelphia chromosome-positive leukemias: from basic mechanisms to molecular theurapeutics // Annual Internal Medicine. 2003. - Vol. 138, № 10. - P.819-830.

85. Kvasnicka H.M, Thiele J, Staib P, Engels K, Kriener S, Schmitt-Graeff A. Therapy-related changes of angiogenesis in Philadelphia chromosome positive chronic myelogenous leukemia// Pathologe. 2004. - Vol.25, №2. - P. 127134.

86. Lee W.I., Kantaijian H., Glassman A., Talpaz M., Lee M.S. Quantitativemeasurement of BCR/abl transcripts using real-time polymerase chain reaction// Ann Oncol. 2002. - Vol.13, №5. - P.781-788.

87. Levav-Cohen Y., Goldberg Z., Zuckerman V., Grossman T., Haupt S., Haupt Y. C-Abl as a modulator of p53// Biochem. Biophys. Res. Commun. -2005. Vol. 331. -P.737-749.

88. Ma Y.B., Chang H.Y. Caspase work model during pathogen infectionII Virol Sin. -2011. Vol.26, №6. -P. 366-375.

89. Maekawa T., Ashihara E., Kimura S. The Bcr-Abl tyrosine kinase inhibitor imatinib and promising new agents against Philadelphia chromosome-positive leukemias// Int J Clin Oncol. 2007. - Vol. 12, №5. - P.327-340.

90. Marzocchi G., Castagnetti F., Luatti S., Baldazzi C., Stacchini M., Gugliotta

91. Maziarz R.T. Who with chronic myelogenous leukemia to transplant in the era of tyrosine kinase inhibitors? // Curr Opin Hematol. 2008. - Vol.15. -P.127-133.

92. McGahon A.J., Martin S.J., Bissonnette R.P., Mahboubi A., Shi Y., Mogil R.J., Nishioka W.K., Green D.R.The end of the (cell) line : methods for the study of apoptosis in vitro // Methods Cell Biol. 1995. -Vol.46. - P. 153185.

93. Merz A.L., Serkova N.J. Use of nuclear magnetic resonance-based metabolomics in detecting drug resistance in cancer // Biomark Med.-2009.-Vol.3, № 3.-P. 289 306.

94. Modi H., McDonald T., Chu S., Yee J.K., Forman S.J., Bhatia R. Role of BCR/ABL gene-expression levels in determining the phenotype and imatinib sensitivity of transformed human hematopoietic cells// Blood. 2007. - Vol.109, №12.-5411-5421.

95. Moen M.D., McKeage K., Plosker G.L., Siddiqui M.A. Imatinib: a review of its use in chronic myeloid leukaemia// Drugs. 2007. - Vol.67, №2. - P.299-320.

96. Morris C.M. Chronic myeloid leukemia: cytogenetic methods and applications for diagnosis and treatment// Methods Mol Biol. 2011. - Vol. 730. - P. 33-61.

97. Noh E.M., Yi M.S., Youn H.J., Lee B.K., Lee Y.R., Han J.H., Yu H.N., Kim J.S., Jung S.H. Silibinin enhances ultraviolet B-induced apoptosis in mcf-7 human breast cancer cells// J Breast Cancer. 2011. - Vol. 14, №1. -P.8-13.

98. Ocker M., Hopfner M. Apoptosis-modulating drugs for improved cancer therapy// Eur Surg Res. 2012. - Vol. 48, №3. - P. 111-120.

99. Res. -2005. Vol.65, № 11. -P. 4500—4505.

100. Okuda K., Weisberg E., Gilliland D.G., Griffin J.D. ARG tyrosine kinase activity is inhibited by STI571// Blood. 2001. - Vol.97, № 8. - P. 24402448.

101. Pelicano H., Martin D.S., Xu R.H., Huang P. Glycolysis inhibition foranticancer treatment // Oncogene.- 2006.- Vol. 25.- P. 4633-4646.

102. Pellicano F., Sinclair A., Holyoake T.L. In search of CML stem cells' deadly weakness// Curr Hematol Malig Rep. 2011. - Vol.6, №2. - P. 82-87.

103. Perrotti D., Jamieson C., Goldman J., Skorski T. Chronic myeloid leukemia: mechanisms of blastic transformation// J Clin Invest. 2010. - Vol. 120, №7. -P. 2254-2264.

104. Pluk H., Dorey K., Superti-Furga G. Autoinhibition of c-Abl// Cell. 2002. - Vol. 108, №2. - P.247-259.

105. Polak R., Buitenhuis M. The PI3K/PKB signaling module as key regulator of hematopoiesis: implications for therapeutic strategies in leukemia// Blood. -2012.-Vol. 119, №4. P.911-923.

106. Ren R. Mechanisms of BCR-ABL in the pathogenesis of chronicmyelogenous leukaemia// Nat Rev Cancer. 2005. - Vol.5, №3. - P. 172-183.

107. Ries L.A.G., Eisner M.P., Kosary C.L., Hankey B.F., Miller B.A., Clegg L., Mariotto A., Feuer E.J., Edwards B.K. SEER Cancer Statistics Review, 19752002. Bethesda. National Cancer Institute. - 2005.

108. Saraste A., Pulkki K. Morphologic and biochemical hallmarks of apoptosis// Cardiovasc Res. 2000. - Vol. 45, №3. - P. 528-5237.

109. Sattler M., Mohi M.G., Pride Y.B., Quinnan L.R., Malouf N.A., Podar K., Gesbert F., Iwasaki H., Li S., Van Etten R.A., Gu H., Griffin J.D., Neel B.G. Critical role for Gab2 in transformation by BCR/ABL// Cancer Cell. 2002. -Vol. 1, №5.-P. 479-492.

110. Sattler U.G., Hirschhaeuser F., Mueller-Klieser W.F. Manipulation of glycolysis in malignant tumors: fantasy or therapy? // Curr Med Chem 2010-Vol. 17,№2-P. 96- 108.

111. Schoch C., Haferlach T., Kern W. et al. Occurrence of additional chromosome aberrations in chronic myeloid leukemia patients treated with imatinib mesylate// Leukemia. 2003. - Vol.17. -P.461-463.

112. Shah N.P. Loss of response to imatinib: mechanisms and management// Hematology Am Soc Hematol Educ Program. 2005. Vol.2005, №1. -P. 183187.

113. Simon W., Segel G.B., Lichtman M.A. Early allogeneic stem cell transplantation for chronic myelogenous leukemia in the imatinib era: a preliminary assessment.// Blood Cells Mol Dis. 2006. - Vol.37, №2. -P.l 16-124.

114. Sorsher D.H. Molecular diagnostics for the clinical laboratorial // DNA amplification techniques / Coleman W.B., Tsongalis G.J. eds. Humana Press Totowa, NJ, 1997. -P.89- 101.

115. Sprick M.R., Walczak H. The interplay between the Bcl-2 family and death receptormediated apoptosis// Biochim Biophys Acta. 2004. - Vol.1644 (2-3).-P. 125-132.

116. Steelman L.S., Pohnert S.C., Shelton J.G., Franklin R.A., Bertrand F.E., McCubrey J.A. JAK/STAT, Raf/MEK/ERK, PI3K/Akt and BCR-ABL in cell cycle progression and eukemogenesis// Leukemia. 2004. - Vol.18, №2 -P. 189-218.

117. Tang D.G., Kehrer J.P. Carcinogenesis balance between apoptosis and survival pathways// Apoptosis, Cell Signaling, and Human Diseases: Molecular Mechanisms. Eds in Srivastava R. Totowa, New Jersey, Humana Press Inc. -2007. - Vol.1. -P. 97-117.

118. Tarn C., Skorobogatko Y.V., Taguchi Т., Eisenberg В., von Mehren M., Godwin A.K. Therapeutic effect of imatinib in gastrointestinal stromal tumors: АКТ signaling dependent and independent mechanisms // Cancer Res 2006.-Vol. 66, № 10 - P. 5477 - 5486.

119. Theml H., Diem H., Haferlach T. Color atlas of hematology. 2004. -P.114 -121.

120. Tucker B., Lardelli M. Rapid apoptosis assay in zebrafish embryos// Zebrafish. 2007. - Vol.4, №2. - P. 113-1163.

121. Vardiman J.W., Harris N.L., Brunning R.D. The World Health Organization (WHO) classification of the myeloid neoplasms// Blood. 2002. - Vol.100. -P.2292-2302.

122. Vial J.-P., Belloct F. et. al. Study of the apoptosis induced in vitro by antitumoral drugs on leukaemic cells // Leycemia Res. — 1997. Vol. 21. — N.2.-P. 163-172.

123. Vicente-Dueñas C., Pérez-Caro M., Abollo-Jiménez F., Cobaleda C., Sánchez-García I. Stem-cell driven cancer: "hands-off" regulation of cancer development. Cell Cycle. 2009. Vol.8, № 9. - P. 1314-1318.

124. Vidhya N., Devaraj S.N. Induction of apoptosis by eugenol in human breast cancer cells// Indian J Exp Biol. 2011. - Vol.49, №11. -P. 871-878.

125. Wang X. The expanding role of mitochondria in apoptosis// Genes Dev. -2001. Vol.15, №22. -P. 2922-2933.

126. Warburg O., Posener K., Negelein E. Über den Stoffwechsel der Carcinomzelle// Biochem. Z, 1924. - Vol.152. -P.309-344.

127. Wei G., Rafiyath S., Liu D. First-line treatment for chronic myeloid leukemia: dasatinib, nilotinib, or imatinib// J Hematol Oncol. 2010. - Vol.3. -P.47-56.

128. Weisberg E., Manley P., Mestan J., Cowan-Jacob S., Ray A., Griffin J.D. AMN 107(nilotinib):a novel and selective inhibitor of bcr-abl// Br J Cancer. -2006. Vol.94, № 12. - P. 1765-1769.

129. Wittig R., Coy J.F. The role of glucose metabolism and glucose-associated signalling in cancer // Perspect Medicin Chem 2008 - Vol. 1- P. 64- 82.

130. Yin C.C., Medeiros L.J., Bueso-Ramos C.E. Recent advances in the diagnosis and classification of myeloid neoplasms comments on the 2008 WHO classification// Int J Lab Hematol. - 2010. - Vol. 32, №5. -P.461-476.f

131. Zhao Y., Wieman H.L., Jacobs S.R., Rathmell J.C. Mechanisms and methods in glucose metabolism and cell death // Methods Enzymol.- 2008.-Vol.442.-P.439- 457.