Одновременный количественный иммуноанализ маркеров онкологических заболеваний в сыворотке крови на биологическом микрочипе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат химических наук Савватеева, Елена Николаевна

• Савватеева, Елена Николаевна
• кандидат химических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат химических наук Савватеева, Елена Николаевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Опухолевые маркеры.

1.1.1. Индивидуальные опухолевые маркеры.

1.1.1.1. Простат-специфический антиген.

1.1.1.2.' Альфа-фетопротеин.

1.1.1.3. Раково-эмбриональный антиген.

1.1.1.4. Хорионический гонадотропин человека.

1.1.1.5. Нейрон-специфическая енолаза.

1.1.2. Одновременное определение нескольких онкомаркеров.

1.2. Белковые микрочипы.

1.3. Белковые микрочипы для определения онкомаркеров.

ГЛАВА 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

2.1. Приборы и реактивы.

2.2. Буферные растворы.

2.3. Приготовление смеси флуоресцентно-меченных проявляющих антител.

2.4. Приготовление калибровочных проб и хук-образцов.

2.5. Изготовление белковых микрочипов.

2.6. «Сэндвич»-иммуноанализ на биочипах.

2.6.1. Одностадийный анализ.

2.6.2. Двустадийный анализ.

2.7. Флуоресцентные измерения.

2.8. Обработка результатов анализа.

2.9. Аналитические характеристики метода.

2.9.1. Воспроизводимость анализа.

2.9.2. Аналитическая чувствительность.

2.9.3. Тест на «открытие».

2.9.4. Тест на «линейность».

2.10. Твердофазный иммуноферментный анализ на 96-луночном планшете.

2.10.1. Определение общей формы простат-специфического антигена.

2.10.2. Определение свободной формы простат-специфического антигена.

2.10.3. Определение альфа-фетопротеина.

2.10.4. Определение раково-эмбрионального антигена.

2.10.5. Определение нейрон-специфической енолазы.

2.10.6. Определение хорионического гонадотропина человека.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Биочип для одновременного количественного анализа шести онкомаркеров.

3.1.1. Выбор пар моноклональных антител для каждого онкомаркера.

3.1.2. Иммобилизация антигенов.

3.1.3. Структура биочипа.

3.2. Метод одновременного определения шести онкомаркеров в сыворотке крови на биочипе.

3.2.1. Концентрации иммобилизованных и проявляющих антител.

3.2.2. Состав калибровочных проб.

3.2.3. Температура и время инкубации.

3.2.4. Соотношение объемов проявляющие антитела/образец.

3.3. Аналитические характеристики количественного анализа шести онкомаркеров на биочипах.

3.3.1. Воспроизводимость анализа.

3.3.2. Аналитическая чувствительность.

3.3.3. Тест на «открытие».

3.3.4. Тест на «линейность».

3.4. Определение содержания шести онкомаркеров в сыворотках крови.

3.5. Хук-эффект.

3.5.1. Двустадийный «сэндвич»-иммуноанализ на биочипах.

3.5.2. Сдвиг хук-эффекта в область более высоких концентраций.

3.5.3. Способ выявления хук-эффекта.

3.5.4. Анализ сывороток с высоким содержанием аналита.

3.6. Хранение биочипов и наборов реагентов для иммуноанализа на 84 биочипах.

3.7. Практическая значимость полученных результатов.

ВЫВОДЫ.

БЛАГОДАРНОСТИ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Одновременный количественный иммуноанализ маркеров онкологических заболеваний в сыворотке крови на биологическом микрочипе»

Своевременная диагностика — одна из основных проблем онкологии. В настоящее время для ранней диагностики первичной опухоли и ее метастазов, а также мониторинга проводимой терапии широко используется определение опухолевых маркеров в сыворотке крови. Идеальный онкомаркер должен обладать высокой специфичностью и чувствительностью в отношении определенного вида опухоли, однако большинство известных в настоящее время опухолевых маркеров не отвечает этим критериям. Одновременное определение нескольких онкомаркеров повышает эффективность скринингового анализа и увеличивает возможности дифференциальной диагностики заболеваний. Большинство иммунохимических методов позволяет выявлять содержание только одного маркера в одном клиническом образце, поэтому в настоящее время большие надежды в области диагностики рака связывают с использованием мультиплексных систем, таких как микрочипы.

В иммунодиагностических системах, основанных на «сэндвич»-принципе анализа, при высоких концентрациях аналита в пробе возможно возникновение так называемого хук-эффекта, при котором зависимость величины регистрируемого сигнала на твердой фазе от концентрации аналита становится обратно пропорциональной. В традиционных тест-системах проявление хук-эффекта можно выявлять и контролировать, только используя последовательные разведения анализируемого образца.

Целью данного исследования является разработка метода одновременного количественного определения шести маркеров онкологических заболеваний в сыворотке крови человека на биологическом микрочипе. Разработанный метод должен также обеспечивать выявление хук-эффекта непосредственно в ходе проведения анализа. Для достижения поставленной цели потребовалось: создать биологический микрочип с ковалентно иммобилизованными в гидрогеле антителами и антигенами, разработать протокол проведения одновременного количественного анализа шести онкомаркеров в сыворотке крови и получить основные аналитические и диагностические характеристики разработанного метода.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Савватеева, Елена Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Разработан метод одновременного количественного определения общей и свободной форм простат-специфического антигена (ПСАсвоб и ПСАобщ), альфа-фетопротеина (АФП), раково-эмбрионального антигена (РЭА), хорионического гонадотропина человека (ХГЧ) и нейрон-специфической енолазы (НСЕ) в сыворотке крови на биологическом микрочипе. Разработан биологический микрочип и протокол одностадийного «сэндвич»-иммуноанализа шести онкомаркеров в сыворотке крови на биочипе.

2. Получены основные аналитические характеристики разработанного метода: воспроизводимость, чувствительность, значения «открытия» и «линейности». Результаты полностью удовлетворяют требованиям, предъявляемым к иммунологическим аналитическим системам.

3. Показано, что результаты одновременного определения шести онкомаркеров в сыворотке крови на биочипе хорошо коррелируют с результатами, полученными при индивидуальном определении концентрации каждого из онкомаркеров с использованием стандартных ИФА тест-систем.

4. Разработан метод, позволяющий выявлять хук-эффект непосредственно при проведении анализа на биочипе, что препятствует искажению диагностической картины при высоких концентрациях аналита в пробе.

БЛАГОДАРНОСТИ

Выражаю глубокую благодарность моему научному руководителю Рубиной Алле Юрьевне за всестороннюю помощь и интеллектуальную поддержку, оказанную при выполнении и написании этой работы. Я искренне признательна Цыбульской Марии, Дементьевой Екатерине за критическое обсуждение экспериментов и их результатов; Филипповой Марине, Коноваловой Лизе, Иванову Сергею, Зубцовым Жанне и Диме, Стомахину Андрею, Дарий Екатерине за помощь, моральную поддержку, теплое и дружеское отношение. Также выражаю признательность Осиповой Татьяне Владимировне и Рябых Татьяне Павловне за сотрудничество. Выражаю благодарность Турыгину Александру, Юрасову Роману, Прокопенко Дмитрию и Чечеткину Владимиру за разработку специальных компьютерных программ. Выражаю признательность группе производства микрочипов: Панькову Сергею, Крейндлину Эдуарду Яковлевичу, Моисеевой Ольге, Сомовой Ольге, Грачевой Маше, Юрасову Дмитрию и Черепанову Алексею.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Савватеева, Елена Николаевна, 2008 год

1. Белохвостов А.С., Румянцев А.Г. 2003. Онкомаркеры. Молекулярно-генетические, иммунохимические, биохимические анализы. Пособие для врачей. М.: Макс Пресс.

2. Maruvada P., Wang W., Wagner P.D., Srivastava S. 2005. Biomarkers in molecular medicine: cancer detection and diagnosis. Biotechniques. Suppl, 915.

3. Ablin R.J., Soanes W.A., Bronson P., Witebsky E. 1970. Precipitating antigens of the normal human prostate. J. Reprod. Fertil. 22 (3), 573-574.

4. Wang M.C., Valenzuela L.A., Murphy G.P., Chu T.M. 1979. Purification of a human prostate specific antigen. Invest.Urol. 17(2), 159-163.

5. Papsidero L.D., Wang M.C., Valenzuela L.A., Murphy G.P., Chu T.M. 1980. A prostate antigen in sera of prostatic cancer patients. Cancer Res. 40 (7), 2428-2432.

6. Paitin A.W., Oesterling J.E. 1994. The clinical usefulness of prostate specific antigen: update 1994. J. Urol. 152(5 Pt 1), 1358-1368.

7. Pollen J.J, Dreilinger A. 1984. Immunohistochemical identification ofprostatic acid phosphatase and prostate specific antigen in female periurethral glands. Urology. 23 (3), 303-304.

8. Young F., Li X, Ellet J., et al. 2000. Regions of prostate specific antigen (PSA) promoter confer androgen -independent expression of PSA in prostate cancer cell. J. Biol. Chem. 275(52), 40486-40855.

9. Lilja H., Christensson A., Dahlen U., Matikainen M.T., Nilsson O., Pettersson K., Lovgren T. 1991. Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with alpha 1-antichymotrypsin. Clin. Chem. 37(9), 1618-1625.

10. Lilja H. 1993. Structure, function, and regulation of the enzyme activity of prostate-specific antigen. World. J. Urol. 11(4), 188-191.

11. Davis M.I., Bennett M.J., Thpmas L.M., Bjorkman PJ. 2005. Crystal structure of prostate-specific membrane antigen, a tumor marker and peptidase. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 102, 5981-5986. (http://www.rcsb.org/pdb)

12. Кушлинский H.E. 1999. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в современной онкологической клинике. Часть 2. Клиническая лабораторная диагностика. №4, С. 25-32.

13. Gonzalgo M.L., Carter Н.В. 2007. Update on PSA testing. J. Natl. Compr. Cane. Netw. 5(7), 737-742.

14. Bergstrand C.G., Czar B. 1956. Demonstration of a new protein fraction in serum from human fetus. Scan. J. Clin. Lab. Invest. 8, 174-176.

15. Muralt G., Roulet D.L.A. 1961. Immunological study of human fetal serum proteins. Helv. Pediatr. Acta. 16, 517-520.

16. Abelev G.I., Perova S.D., Khramkova N.I., Postnikova Z.A., Irlin I.S. 1963. Production of embryonal alpha-globulin by transplantable mouse hepatomas. Transplantation. 1, 174-180.

17. Татаринов Ю.С. 1963. В кн. I Всесоюзный биохимический съезд. Тезисы, 2, АН СССР, М.-Л., с. 274.

18. Bellini С., Bonacci W., Parodi Е., Serra G. 1998. Serum alpha-fetoprotein in newborns. Clin. Chem. 44(12), 2548-50.

19. Ruoslahti E., Seppala M. 1971. Studies of carcino-fetal proteins. 3. Development of a radioimmunoassay for a-fetoprotein. Demonstration of a-fetoprotein in serum of healthy human adults. Int. J. Cancer. 8(3), 374-383.

20. Jones E.A., Clement-Jones M., James O.F., Wilson D.I. 2001. Differences between human and mouse alpha-fetoprotein expression during early development. J. Anat. 198(5), 555-559.

21. Debruyne E.N., Delanghe J.R. 2008. Diagnosing and monitoring hepatocellular carcinoma with alpha-fetoprotein: new aspects and applications. Clin. Chim. Acta. 395(1-2), 19-26.

22. Koide N., Nishio A., Igarashi J., Kajikawa S., Adachi W., Amano J. 1999. Alpha-fetoprotein-producing gastric cancer: histochemical analysis of cell proliferation, apoptosis, and angiogenesis. Am. J. Gastroenterol. 94(6), 16581663.

23. Chan M.H., Shing M.M., Poon T.C., Johnson P.J., Lam C.W. 2000. Alpha-fetoprotein variants in a case of pancreatoblastoma. Ann. Clin. Biochem. 37 (5), 681-685.

24. Абелев Г.И. 1998. Альфа-фетопротеин — взгляд в биологию развития и природу опухолей. Соросовский образовательный журнал. 9, 8-13.

25. Macdonald J.S. 1999. Carcinoembryonic antigen screening: pros and cons. Semin. Oncol. 26, 556-560.

26. Gold P., Freedman S.O. 1965. Demonstration of tumor-specific antigen in human colonic carcinomata by immunological tolerance and absorption technique. J. Exp. Med. 121, 439-462.

27. Gold P., Freedman S.O. 1965. Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system. J. Exp. Med. 122, 467-481.

28. Boucher D., Cournoyer D., Stanners C.P., Fuks A. 1989. Studies on the control of gene expression of the carcinoembryonic antigen family in human tissue. Cancer Res. 49, 847-852.

29. Thomson D.M.P., Krupey J., Freedman S.O., Gold P. 1969. The radioimmunoassay of circulating carcinoembryonic antigen of the human digestive system. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 64, 161-167.

30. Thomas P., Toth C.A., Saini K.S., Jessup J.M., Steele G. 1990. The structure, metabolism and function of carcinoembryonic antigen gene family. Biochim.

31. Biophys. Acta. 1032, 177-189.

32. Thompson J.A., Grunet F., Zimmermann W. 1991. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives. J. Clin. Lab. Anal. 5, 344-366.

33. Boehm M.K., Perkins S.J. 2000. Structural models for carcinoembryonic antigen and its complex with the single-chain Fv antibody molecule MFE23. FEBS Lett. 475, 11-16. ftittp://www.rcsb.org/pdb)

34. Huerta S. 2008. Recent advances in the molecular diagnosis and prognosis of colorectal cancer. Expert. Rev. Mol. Diagn. 8(3), 277-288.

35. Скворцов C.B., Храмченко И.М., Кушлинский H.E. 1999. Опухолевые маркеры в оценке степени распространенности опухолевого процесса при злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта. Клин. лаб. диагн. № 9, с.26.

36. Lee Y.C.; Yang P.C.; Kuo S.H.; Luh K.T. 1991. Tissue polypeptide antigen and carcinoembryonic antigen as tumor marker in lung cancer. J. Formos. Med. Assoc. 90, 631-636.

37. Карпищенко А.И., Антонов В.Г., Бутенко А.Б., Белохвостов А.С., Шелепина Е.П. 1999. Онкомаркеры и их диагностическое значение. СПб.:ВМедА., 47 стр.

38. Sajid К.М., Parveen R., Durr-e-Sabih , Chaouachi К., Naeem A., Mahmood R., Shamim R. 2007. Carcinoembryonic antigen (CEA) levels in hookah smokers, cigarette smokers and non-smokers. J. Pak. Med. Assoc. 57(12), 595-599.

39. Pierce J.G., Parsons T.F. 1981. Glycoprotein hormones: structure and function. Annu. Rev. Biochem. 50, 465-495.

40. Wu H., Lustbader J.W., Liu Y., Canfield R.E., Hendrickson W.A. 1994. Structure of human chorionic gonadotropin at 2.6 A resolution from MAD analysis of the selenomethionyl protein. Structure. 2, 545-558. (http://www.rcsb.org/pdb)

41. Cole L.A., Kardana A., Park S.-Y., Braunstein G.D. 1993. The deactivation of hCG by nicking and dissotiation. J. Clin. Endocrinol. Metab. 76, 704-713.

42. Norman R.J., Poulton Т., Gard Т., Chard T. 1985. Monoclonal antibodies to human chorionic gonadotropin: implications for antigenic mapping, immunoradiometric assay, and clinical application. J. Clin. Endocrinol. Metab. 61, 1031-1038.

43. Hoermann R., Berger P., Spoettle G., Gillesberger F., Kardana A., Cole L.A., et al. 1994. Immunological recognition and clinical significance of nicked human chorionic gonadotropin in testicular cancer. Clin. Chem. 40, 23062312.

44. Cole L.A. 1994. New perspectives in measuring human chorionic gonadotropin levels for measuring and monitoring trophoblast disease. J. Reprod. Med. 39, 193-200.

45. Mann K., Sailer В., Hoermann R. 1993. Clinical use of HCG and hCG beta determinations. Scand. J. Clin. Lab. Invest. 216, 97-104.

46. Hoshi S., Suzuki K., Ishidoya S., Ohyama C., Sato M., et al 2000. Significance of simultaneous determination of serum human chorionic gonadotropin (hCG) and hCG-beta in testicular tumor patients. Int. J. Urol. 7, 218-223.

47. Ferrigno D., Buccheri G., Giordano C. 2003. Neuronspecific enolase is aneffective tumour marker in non-small cell lung cancer (NSCLC). Lung Cancer. 41,311-320.

48. Sung H.J., Cho J.Y. 2008. Biomarkers for the lung cancer diagnosis and their advances in proteomics. BMB Rep. 41(9), 615-625.

49. Riley R.D., Heney D., Jones D.R., Sutton A.J., Lambert P.C., Abrams K.R., Young В., Wailoo A.J., Burchill S.A. 2004. A systematic review of molecular and biological tumor markers in neuroblastoma. Clin. Cancer Res. 10(1 Pt 1), 4-12.

50. Poyner R.R., Cleland W.W., Reed G.H. 2001. Role of metal ions in catalysis by enolase: an ordered kinetic mechanism for a single substrate enzyme. Biochemistry. 40(27), 8009-8017.

51. Kaiser E., Kuzmits R, Pregant P., Burghuber O., Worofka W. 1989. Clinical biochemistry of neuron specific enolase. Clin. Chim. Acta. 183(1), 13-31.

52. Chai G., Brewer J., Lovelace L., Aoki Т., Minor W., Lebioda L. 2004. Expression, Purification and the 1.8 A Resolution Crystal Structure of Human Neuron Specific Enolase J. Mol. Biol. 341, 1015-1021.

53. Andoh M., Gemma A., Takenaka K., Hisakatsu S., Yamada K., Usuki J., Hasegawa K., Sakonji M., Kudoh S., Tsuboi E., et al. 1994. Serum Neuron Specific Enolase Level as a Prognostic Factor in Non-Small Cell Lung Cancer. Intern. Med. 33(5), 271-276.

54. American Cancer Society. Cancer Facts & Figures 2006. http://www.cancer.org/downloads/STT/CAFF2006PWSecured.pdf.

55. Алексеева M.JI., Гусарова E.B., Муллабаева C.M., Понкратова Т.С. 2005. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования. Проблемы репродукции. №3, С. 65-79.

56. Кушлинский Н.Е. 1999. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в современной онкологической клинике. Часть 1. Клиническая лабораторная диагностика. №3, С. 25-32.

57. Liao Q., Zhao Y.P., Yang Y.C., Li L.J., Long X., Han S.M. 2007. Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head. Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 6(6), 641-645.

58. Саркисян Г.П., Булычева Т.И., Карагюлян С. Р., Точенов А. В., Шавлохов В. С. 2005. Возможности ранней диагностики опухолей. Терапевтический архив. №4, С 33-37.

59. Carpelan-Holmstrom М., Louhimo J., Stenman U.H., Alfthan H., Jarvinen H., Haglund С. 2004. Estimating the probability of cancer with several tumor markers in patients with colorectal disease. Oncology. 66(4), 296-302.

60. D. Wild. 2005. The Immunoassay handbook. ELSEVIER Ltd., ISBN: 0-08044526-8. 930 pages.

61. Earley M.C., Vogt R.F. Jr., Shapiro H.M., Mandy F.F., Kellar K.L., Bellisario R., Pass K.A., Marti G.E., Stewart C.C., Hannon W.H. 2002. Report from a workshop on multianalyte microsphere assays. Cytometry. 50(5), 239-242.

62. Kellar K.L., Iannone M.A. 2002. Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays. Exp. Hematol. 30(11), 1227-1237.

63. Haab B.B. 2003. Methods and applications of antibody microarrays in cancer research. Proteomics. 3(11), 2116-2122.

64. Kingsmore S.F. 2006. Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays. Nat. Rev. Drug Disc. 5(4), 310320.

65. Kricka L.J., Master S.R., Joos Т.О., Fortina P. 2006. Current perspectives in protein array technology. Ann. Clin. Biochem. 43(Pt 6), 457-467.

66. Zhang S. 2004. Hydrogels: Wet or let die. Nat. Mater. 3(1), 7-8.

67. Rubina A.Yu., Kolchinsky A., Makarov A. A., Zasedatelev A. S. 2008. Why 3-D? Gel-based microarrays in proteomics. Proteomics. 8, 817-831.

68. Angenendt P. 2005. Progress in protein and antibody microarray technology. Drug Discov. Today. 10, 503-511.

69. Rusmini F., Zhong Z., Feijen J. 2007. Protein immobilization strategies for protein biochips. Biomacromolecules. 8(6), 1775-1789.

70. Ball V., Huetz P., Elaissari A., Cazenave J.P., Voegel J.C., Schaaf P. 1994. Kinetics of exchange processes in the adsorption of proteins on solid surfaces. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 91(15), 7330-7334.

71. Seurynck-Servoss S.L., Baird C.L., Rodland K.D., Zangar R.C. 2007. Surface chemistries for antibody microarrays. Front. Biosci. 12, 3956-3964.

72. PiiTung M.C., Huang, C.Y. 1996. A general method for the spatially defined immobilization of biomolecules on glass surfaces using "caged" biotin. Bioconjug. Chem. 7(3), 317-321.

73. Tinazli A., Tang J., Valiokas R., Picuric S., Lata S., Piehler J., Liedberg В.,

74. Tampe R. 2005. High-affinity chelator thiols for switchable and oriented immobilization of histidine-tagged proteins: a generic platform for protein chip technologies. Chemistry. 11(18), 5249-5259.

75. Cheng M.M., Cuda G., Bunimovich Y.L., Gaspari M., Heath J.R., Hill H.D., Mirkin C.A., Nijdam A.J., Terracciano R., Thundat Т., Ferrari M. 2006. Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics. Curr. Opin. Chem. Biol. 10(1), 11-19.

76. Angenendt P., Glokler J., Murphy D., Lehrach H., Cahill D.J. 2002. Toward optimized microarrays: a comparison of current microarray support material. Anal. Biochem. 309, 253-260.

77. Vasiliskov V., Timofeev E., Surzhikov S., Drobyshev A., Shick V., Mirzabekov A. 1999. Fabrication of microarray of gel-immobilized compounds on a chip by copolymerization. BioTechniques. 27, 592-606.

78. Arenkov P., Kukhtin A., Gemmell A., Chupeeva V., Voloschuk S., Mirzabekov A. 2000. Protein microchips: Use for immunoassay and enzymatic reactions. Anal. Biochem. 278, 123-131.

79. Bacarese-Hamilton Т., Mezzasoma L., Ingham C., Ardizzoni A., Rossi R., Bistoni F., Crisanti A. 2002. Detection of allergen-specific IgE on microarrays by use of signal amplification techniques. Clin. Chem. 48, 1367-1370.

80. Harwanegg C., Hutter S., Hiller R. 2007. Allergen microarrays for the diagnosis of specific IgE against components of cow's milk and hen's egg in a multiplex biochip-based immunoassay. Methods Mol. Biol. 385, 145-157.

81. Huang R.P. 2004. Cytokine protein arrays. Methods Mol. Biol. 264, 215-231.

82. Zhou X., Zhou J. 2007. Antibody-microarrays on hybrid polymeric thin film-coated slides for multiple-protein immunoassays. Methods Mol. Biol. 382,259.271.

83. Bacarese-Hamilton Т., Mezzasoma L., Ardizzoni A., Bistoni F., Crisanti A. 2004. Serodiagnosis of infectious diseases with antigen microarrays. J. Appl. Microbiol. 96, 10-17.

84. Feng Y., Ke X., Ma R., Chen Y., Hu G., Liu F. 2004. Parallel detection of autoantibodies with microarrays in rheumatoid diseases. Clin. Chem. 50(2), 416-422.

85. Miller J.C., Zhou H., Kwekel J., Cavallo R., Burke J., Butler E.B., Teh B.S., Haab B.B. 2003. Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera. Proteomics. 3, 56-63.

86. Sreekumar A., Chinnaiyan A.M. 2002. Using protein microarrays to study cancer. BioTechniques. Suppl, 46-53.

87. Nielsen U.B., Geierstanger B.H. 2004. Multiplexed sandwich assays in microarray format. J. Immunol. Methods. 290, 107-120.

88. Ligler F.S., Taitt C.R., Shriver-Lake L.C., Sapsford K.E., Shubin Y., Golden J.P. 2003. Array biosensor for detection of toxins. Anal. Bioanal. Chem. 377(3), 469-477.

89. Ngundi M.M., Taitt C.R., McMurry S.A., Kahne D., Ligler F.S. 2006. Detection of bacterial toxins with monosaccharide arrays. Biosens. Bioelectron. 21(7), 1195-1201.

90. Wingren C., Borrebaeck C.A. 2006. Antibody microarrays: current status and key technological advances. OMICS. 10 (3), 411-427.

91. Sun Z., Fu X., Zhang L., Yang X., Liu F., Hu G. 2004. A protein chip system for parallel analysis of multi-tumor markers and its application in cancer detection. Anticancer Res. 24(2C), 1159-1165.

92. Yu D.Y. 2005. Application of multi-tumor markers protein chip assistance diagnostic system for detection of various tumors. China Trop. Med. 5, 414416.

93. Liang Z., Wang H.F., Wu A.Z., Fu S.M. 2005. Clinical value of 12tumor markers protein biochip detection of digestive system neoplasm. China Trop. Med. 5, 407-409.

94. Jiang Z.J., Zhou W.X., Lin W., Huang Q.X. 2005. Application of multi-tumor markers protein chip diagnose system in the diagnosing of intestinal neoplasms. J. Mod. Lab. Med. 20, 17-19.

95. Мои J.H., Li Z.P., Wang D., Ma Y., Xiao H.L., Zhang Q.H. 2005. Combined detection of multiple tumor marker and its diagnostic value in colorectal cancer. J. Digest. Surg. 4, 268-270.

96. Zhong Z.Y., Wang D., Li Z.P., Li M.X., Dai N., Cao X.J., et al. 2007. Clinical significance of C-12 multiple tumor marker protein chip detective system in diagnosing colorectal carcinoma. Chongqing Med. 36, 2406-2408.

97. Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. 2007. Value of tumor markers in diagnosing and monitoring colorectal cancer and strategies for further improvement: analysis of 130 cases. Ai. Zheng. 26(11), 1221-1226.

98. Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. 2008. The application of C12 biochip in the diagnosis and monitoring of colorectal cancer: Systematic evaluation and suggestion for improvement. J. Postgrad. Med. 54(3), 186-190.

99. Chen C., Chen L.Q., Chen L.D., Yang G.L., Li Y. 2008. Evaluation of tumor markers biochip C12 system in the diagnosis of gastric cancer and the strategies for improvement: analysis of 100 cases. Hepatogastroenterology. 55(84), 991-997.

100. Song S.-P., Li В., Ни J., Li M.-Q. 2004. Simultaneous multianalysis for tumor markers by antibody fragments microarray system. Analytica Chimica Acta. 510, 147-152.

101. Wilson M.S., Nie W. 2006. Multiplex measurement of seven tumor markers using an electrochemical protein chip. Anal. Chem. 78, 6476-6483.

102. Wiese R., Belosludtsev Y., Powdrill Т., Thompson P., Hogan M. 2001. Simultaneous multianalyte ELISA performed on microarray platform. Clinical Chemistry. 47(8), 1451-1457.

103. Мирзабеков А.Д., Рубина А.Ю., Паньков С.В. 2003. Способ полимеризационной иммобилизации биологических макромолекул и композиция для его осуществления. Патент РФ N 2216547. Бюл. изобр. №32.

104. Rubina A.Yu., Dementieva E.I., Stomakhin A.A., Darii E.L., Pan'kov S.V., Barsky V.E., Ivanov S.M., Konovalova E.V., Mirzabekov A.D. 2003. Hydrogel-based protein microchips: manufacturing, properties, and applications. BioTechniques. 34, 1008-1022.

105. Barsky V., Perov A., Tokalov S., Chudinov A., Kreindlin E., Sharonov A., Kotova E., Mirzabekov A. 2002. Fluorescence data analysis on gel-based biochips. J. Biomol. Screening. 7, 247—257.

106. Дементьева Е.И., Рубина А.Ю., Дарий E.JI. и др. 2004. Применение белковых микрочипов для количественного определения опухолеассоциированных маркеров. ДАН. 395, 542-547.

107. Rubina A.Yu., Dyukova V.I., Dementieva E.I., Stomakhin A.A., Nesmeyanov V.A., Grishin E.V., Zasedatelev A.S. 2005. Quantitative immunoassay of biotoxins on hydrogel-based protein microchips. Anal. Biochem. 340, 317-329.

108. Dyukova V.I., Dementieva E.I., Zubtsov D.A., Galanina O.E., Bovin N.V., Rubina A.Yu. 2005. Hydrogel glycan microarrays. Anal. Biochem. 347, 94-105.

109. Шелепова В.М., Кадагидзе З.Г. 2007. Опухолевые маркеры в современной клинической практике. Вестник Московского Онкологического Общества. №1.

110. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. 1991. Теория и практика иммуноферментного анализа. Москва: Высшая школа, 288 с.

111. Тигранян Р.А., Калита Н.Ф., Роганов А.С. 1994. Методическое руководство по проведению контроля качества наборов реагентов для иммуноферментного анализа. Министерство Здравоохранения и Медицинской Промышленности РФ. Москва. 33 с.

112. Selby С. 1999. Interference in immunoassay. Ann. Clin. Biochem. 36, 704-21.

113. Killeen A.A., Ramey M.L., Dean J.J. 1993. High-dose hook effect in an immunoluminometric thyrotropin assay: the open-faced sandwich artifact. Ann. Clin. Biochem. 30, 413-414.1. Q Ь>а

114. Akamatsu S., Tsukazaki H., Inoue K., Nishio Y. 2006. Advanced prostate cancer with extremely low prostate-specific antigen value at diagnosis: an example of high dose hook effect. Int. J. Urol. 13, 1025-1027.

115. Vaidya H.C., Wolf B.A., Garrett N., Catalona W.J., Clayman R.V., Nahm M.H. 1988. Extremely high values of prostate-specific antigen in patients with adenocarcinoma of the prostate; demonstration of the "hook effect". Clin. Chem. 34, 2175-2177.

116. Dahlmann N. 1989. The hook effect as a cause of falsely lowered beta-HCG values. Dtsch. Med. Wochenschr. 114, 36-37.

117. Jassam N., Jones C.M., Briscoe Т., Horner J.H. 2006. The hook effect: a need for constant vigilance. Ann. Clin. Biochem. 43, 314-317.

118. Kuo C.Y., Fu J., Yeh M.Y., Su S.L., Lee C.Y. 1989. Generation of monoclonal antibodies to alpha-fetoprotein and application in solid-phase enzyme immunoassay. Biotechnol. Appl. Biochem. 11, 96—104.

119. Fernando S.A., Wilson G.S. 1992. Studies of the *hook' effect in the one-step sandwich immunoassay. J. Immunol. Methods. 151, 47-66.

120. Landsteiner K. 1946. The specificity of serological reactions. Cambridge, MA: Harvard University Press. 240-52.

121. Butch A.W. 2000. Dilution Protocols for Detection of Hook Effects/Prozone Phenomenon. Clin. Chem. 46, 1719-21.