Иммунофлуорецентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат медицинских наук Соколова, Зинаида Александровна

• Соколова, Зинаида Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Соколова, Зинаида Александровна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Опухолевые маркеры и их роль в диагностике рака.

1.1.1. Индивидуальные опухолевые маркеры.

1.1.1.1. Простат-специфический антиген.

1.1.1.2. Альфа-фетопротеин.

1.1.1.3. Раково-эмбриональный антиген.

1.1.1.4. Нейрон-специфическая енолаза.

1.1.1.5. Хорионический гонадотропин.

1.1.2. Комбинации опухолевых маркеров.

1.2. Биологические микрочипы - новая технология в диагностике злокачественных новообразований.

1.2.1. Белковые микрочипы.

1.2.2. Белковые микрочипы для анализа опухолевых маркеров.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунофлуорецентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа»

По данным ВОЗ диагноз «рак» ежегодно ставят более чем 11 млн. человек. Прогнозируется, что к 2020 году число раковых больных возрастет до 16 млн. в год. Смертность от рака в мире непрерывно увеличивается и приближается к 10 млн. человек в год, что составляет 15% всех смертных случаев. Фундаментальные исследования в области онкологии направлены на раскрытие молекулярных механизмов злокачественного роста и поиск генов и антигенов, позволяющих обнаружить появление опухоли на ранних стадиях [1, 2]. Уровень опухолевых маркеров в сыворотке крови является важным информативным показателем наличия опухолевого процесса. В клинической онкологии онкомаркеры широко применяются для оценки эффективности терапии раковых больных. Их роль значима в ранней диагностике злокачественных новообразований при массовых обследованиях населения [3]. Достижения в области протеомики открыли новые перспективы для создания и внедрения современных технологий в клиническую онкологию [4, 5]. С применением таких технологий как биочипы создаются высокоинформативные диагностические системы, которые уже нашли применение в медицине в развитых странах мира [6, 7, 8]. Представленные исследования являются частью проводимых в нашей стране работ по разработке и внедрению в онкологию отечественных технологий биочипов для создания современных диагностикумов [9, 10].

В настоящие время для ранней диагностики и мониторинга проводимой терапии злокачественных новообразований широко используется неинвазивные методы количественного определения онкомаркеров в сыворотке крови [11]. В РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН ранее был разработан набор для количественного определения общего простатического специфического антигена (ПСАобщ) в сыворотке крови человека методом одностадийного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) [12].

Отсутствие у известных опухолевых маркеров высокой специфичности и чувствительности, заметно ограничивает возможности их использования в клинической диагностике при разных нозологических формах рака (исключением можно считать ПСА). Решение проблемы поиска «идеального» маркера может быть частично компенсировано одновременным определением нескольких опухолевых маркеров, что существенно повышает эффективность диагностики у пациентов с ранними стадиями опухолевого процесса [13]. Одновременное определение нескольких онкомаркеров в сыворотке крови с помощью иммуноферментных диагностических систем, широко используемых в клинике, трудоемко и дорого. Поэтому в настоящее время большие надежды связывают с мультиплексными системами, такими, как белковые микрочипы с иммобилизованными моноклональными антителами, позволяющие одновременно измерять уровень нескольких опухолевых маркеров в одном образце сыворотки крови и значительно расширить линейный диапазон определяемых концентраций [6, 14, 15, 16]. Белковые микрочипы являются экономичной, эффективной альтернативой традиционным ИФА-системам и их внедрение в широкую клиническую практику важная задача современной медицины.

В данной работе впервые на большом клиническом материале проведены испытания отечественных диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип», разработанных в ИМБ им. В.А.Энгельгардта РАН на основе технологии «трехмерных» гидрогелевых микрочипов, позволяющих проводить одновременный количественный иммуноанализ сразу нескольких опухолевых маркеров [10]. В результате совместных исследований на этапе разработки систем и проведения их лабораторных испытаний дана оценка возможности применения первых отечественных тест-систем в формате биочипа в диагностике злокачественных новообразований.

Цель и задачи исследования

Целью исследования является испытания новых отечественных мультиплексных диагностических систем на основе белковых микрочипов и оценка возможности их применения в клинической практике. Тест-системы предназначены для количественного определения в сыворотке крови человека набора опухолевых маркеров значимых в диагностике онкологических заболеваний:

- диагностическая система для одновременного определения общей и свободной формы ПСА - «ОМ-Биочип (ПСА)» (ИМБ РАН).

- диагностическая система для одновременного определения шести опухолевых маркеров: общей и свободной форм ПСА, раковоэмбрионального антигена (РЭА), альфа-фетопротеина (АФП), хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), нейронспецифической енолазы (НСЕ) - «ОМ-Биочип» (ИМБ РАН).

В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Сформировать банк образцов сыворотки крови больных со злокачественными и доброкачественными опухолевыми заболеваниями, неопухолевыми заболеваниями, а также здоровых доноров, необходимый для испытаний.

2. Изучить аналитические характеристики испытываемых тест-систем в варианте одностадийного иммунофлуоресцентного «сэндвич»-анализа, как наиболее простого и технологически приемлемого для клинического использования.

3. Оценить и сравнить диагностическую эффективность тест-систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» с традиционными ИФА-системами «Fujirebio Diagnostics» (Швеция), применив современные статистические методы ROC-анализа и логистической регрессии.

Научная новизна и практическая значимость

Впервые на большом клиническом материале проведены испытания диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» (Центр биологических микрочипов ИМБ им. В.А.Эигельгардта РАН) в сравнении с наборами ИФА «Fujirebio Diagnostics». С применением методов ROC-анализа и логистической регрессии получены положительные оценки диагностической эффективности испытанных тест-систем. Показана применимость первых отечественных диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» в формате биочипа для одновременного количественного определения нескольких опухолевых маркеров в одном образце сыворотки крови человека методом иммунофлуоресцентного анализа в диагностике злокачественных новообразований, начиная с ранних стадий опухолевого процесса. На образцах сыворотки крови больных со злокачественными и доброкачественными опухолевыми заболеваниями, неопухолевыми заболеваниями, а также здоровых доноров получены и оценены основные аналитические и диагностические характеристики тест-систем: аналитическая чувствительность, воспроизводимость, тесты на «открытие» и линейность. Показано, что аналитические и диагностические характеристики системы в формате биочипа сопоставимы с характеристиками традиционных ИФА-систем фирмы «Fujirebio Diagnostics». Продемонстрированы преимущества тест-систем в формате биочипа перед традиционными системами ИФА, каждая из которых предназначена для определения одного онкомаркера: 1) одновременное определение спектра информативных онкомаркеров; 2) расширение линейного диапазона определяемых концентраций онкомаркеров; 3) проведение анализа с микроколичествами образца и реагентов; 4) автоматизированный режим компьютерной регистрации и обработки результатов. Информативность и экономичность биочипов открывает для медицины возможность массовых скрининговых обследований населения с целью ранней диагностики онкологических заболеваний.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Соколова, Зинаида Александровна

120 ВЫВОДЫ

1. Тест-система в формате микрочипа «ОМ-Биочип (ПСА)» на две формы ПСА (общую и свободную) имеет аналитические характеристики, сопоставимые с характеристиками традиционных ИФА систем «Fujirebio Diagnostics»: аналитическая чувствительность 0.2 нг/мл, воспроизводимость KB <10%, процент «открытия» 102% и 107%. Полученные в тесте на линейность величины находятся в пределах ±10% от ожидаемых величин.

2. На большом клиническом материале (239 сывороток крови) показана высокая степень корреляции уровней ПСАобщ и ПСАсв, измеренных в системе «ОМ-Биочип (ПСА)» и в традиционной ИФА системе «Fujirebio Diagnostics».

3. Показано, что система «ОМ-Биочип (ПСА)» для одновременного определения двух форм ПСА и их соотношения имеет диагностическую эффективность, позволяющую достаточно надежно дифференцировать исследуемую группу больных РПЖ от группы здоровых доноров, больных ДГПЖ и иными злокачественными урогенитальными заболеваниями. Диагностическая эффективность новой системы не уступает эффективности традиционных ИФА систем Fujirebio Diagnostics и может быть использована для своевременной диагностики РПЖ в группе высокого риска (мужчины старше 45 лет).

4. Результаты одновременного определения уровней шести опухолевых маркеров в системе «ОМ-Биочип» хорошо коррелируют с результатами, полученными при их индивидуальном определении в традиционных ИФА-системах Fujirebio Diagnostics и DRG Diagnostics (АФП r=0.97 (pO.OOl), РЭА r=0.95 (p<0.001), ПСАобщ и ПСАсв r=0.94 и г=0.91, соответственно (pO.OOl), ХГЧ r-0.91 (pO.OOl), НСЕ r=0.71 (pcO.OOl)).

5. Применение систем в формате биочипа позволяет одновременно измерять уровень нескольких ОМ, использовать минимальные количества образца и реагентов, расширить линейный диапазон определяемых концентраций ОМ. Информативность испытанных мультиплексных систем в формате микрочипа не уступает монодиагностическим наборам ИФА и в перспективе позволит улучшить диагностику злокачественных новообразований.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Нами исследованы аналитические характеристики и диагностическая эффективность первых отечественных высокотехнологичных диагностических тест-систем на основе микрочипа, проведена их сравнительная оценка и продемонстрировны возможности их практического применения. Полученные в наших исследованиях результаты показывают преимущества тест-систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» перед традиционными ИФА-диагностикумами; новые системы могут быть рекомендованы для широкого использования в диагностике онкологических заболеваний.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Соколова, Зинаида Александровна, 2010 год

1. Заридзе, Д.Г. В кн.: Канцерогенез (под ред. Заридзе Д.Г.) / Д.Г. Заридзе -М.: Медицина, 2004. 22 с.

2. Weinberg, R.The Biology of Cancer / R.Weinberg Garland Science, Toylor & Group, LLC, 2006.- 10 p.

3. Tumor markers: Physiology, Pathobiology, Technology and Clinical Applications / E.P. Diamandis, H.A. Fritsche, D.W. Chan et al. USA. AACC Press Inc, 2002. - Chapter 1, 2.

4. Latterich, M. Proteomics: new technologies and clinical applications / M. Latterich, M. Abramovitz, B. Leyland -Jones // Eur. J. Cancer 2008. - 44(18) -P. 2737-2741.

5. Seibert, V. Advances in clinical cancer proteomics: SELDI-ToF-mass spectrometry and biomarker discovery / V. Seibert, M. Ebert et al. // Briefing in functional genomics and proteomics 2005 - 4(1) - P. 16-26.

6. Cho, W. Contribution of oncoprotemics to cancer biomarker discovery /W. Cho// Molecular Cancer 2007. - 6 - P. 25-38.

7. Maurya, P. Proteomic approaches for serum biomarker discovery in cancer / P. Maurya, P. Meleady, P. Dowling, M. Clynes // Anticancer Res. 2007. -27(3A) - P. 1247-1255.

8. Xiao, G. Recent Advances in Proteomics and Cancer Biomarker Discovery / G. Xiao, R. Recker, H. Deng // Clinical Medicine Oncology. 2008. - 2 - P. 6372.

9. Осипова, T.B. Диагностические микрочипы: применение в онкологии / Т.В.Осипова, Т.П. Рябых, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. 2006. - 5(3) - С. 72-81.

10. Maruvada, P. Biomarkers in molecular medicine: cancer detection and diagnosis / P. Maruvada, W. Wang, P.D. Wagner, S. Srivastava // Biotechniques. Suppl 2005. - P. 9-15.

11. Wingren, С. Microchip Methods in Diagnostics / С. Wingren, A. Borrebaeck // Antibody-Based Microarrays. 2009. - V.509 - P. 57-84. Chapter 5.

12. Nakamura, R.M. Cancer Diagnostics: Current and Future Trends / R.M. Nakamura, W.W. Grody, J.T. Wu, R.B. Nagle // USA.: Humana Press Inc. -2004. Chapter 1,2.

13. Wright , J.L. Newer Potential Biomarkers in Prostate Cancer / J.L. Wright, P.H. Lange // Diagnostic Update. 2007. - 9(4) - P. 207-213. "

14. Balk, S. Biology of Prostate-Specific Antigen / S. Balk, Y. Ko, G. Bubley // J. Clin. Oncol.-2003 -21 P. 383-391.

15. Schulz, W. Molecular biology of prostate cancer / W. Schulz, M. Burchardt, M. Cronauer // Molecular Human Reproduction. 2003. - 9(8) - P. 437-448.

16. Mimeault, M. Recent advances on multiple tumorigenic cascades involved in prostate cancer progression and targeting therapies / M. Mimeault, S. Batra // Carcinogenesis. 2006. - 1 - P. 1-22.

17. Ablin, R.J. Precipitating antigens of the normal human prostate / RJ. Ablin, W.A. Soanes, P. Bronson, E. Witebsky // J. Reprod. Fertil. 1970. - 22(3) - P. 573-574.

18. Wang, M.C. Purification of a human prostate specific antigen / M.C. Wang, L.A. Valenzuela, G.P. Murphy, T.M. Chu // Invest. Urol. 1979. - 17(2) - P. 159-163.

19. Papsidero, L.D. A prostate antigen in sera of prostatic cancer patients / L.D. Papsidero, M.C. Wang, L.A. Valenzuela, G.P. Murphy, T.M. Chu // Cancer Res. 1980. - 40(7) - P. 2428-2432.

20. Young, F. Regions of prostate specific antigen (PSA) promoter confer androgen independent expression of PSA in prostate cancer cell / F. Young, X. Li, J. Ellet, et al II J. Biol. Chem. - 2000. - 275(52) - P. 40486-40855.

21. Bostwick, D.G. Prostate specific antigen. Current role in diagnostic pathology of prostate cancer // J. Clin. Pathol. 1994. - 102 - P. 31-37

22. Lilja, H. Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with alpha 1-antichymotrypsin / H. Lilja, A. Christenssons, U. Dahlen, M.T. Matikainen, O. Nilsson, K. Pettersson, T. Lovgren // Clin. Chem. 1991 -37(9) -P. 1618-1625.

23. Zhang, W.M. Characterization and immunological determination of the complex between prostate-specific antigen and a2 macroglobulin / W.M.

24. Zhang, P. Finne, J. Leinonen, S. Vesalainen, S. Nordling, et al Clin. Chem. -1998.-44-P. 2471-2479.

25. Gretzer, M.B. PSA markers in prostate cancer detection / M.B. Gretzer, A.W. Partin // Urol. Clin. N. Am. 2003. - 30 - P. 677-686.

26. Кушлинский, H.E. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в онкологической клинике / Клин.лаб.диагн. 1999. - №3,4, 25-32. - Части 1 и 2.

27. Slev, P. Intermethod differences in results for total PSA, free PSA and Percentage of free PSA / P. Slev, S. La^ulu, W. Roberts // Am. J. Clin. Pathol. -2008.- 129-P. 952-958.

28. Матвеев, Б.П. Рак предстательной железы / Б.П. Матвеев, Б.В. Бухаркин, В .Б. Матвеев 1999. - М. - Р. 153.

29. Uzzo, R. Free prostate-specific antigen improves prostate cancer detection in a high-risk population of men with a normal total PSA and digitalrectal examination / R. Uzzo, W. Pinover, E. Horwitz et al. // Urology. 2003. - 61(4) -P. 754-759.

30. Gonzalgo, M.L. Update on PSA testing / M.L. Gonzalgo, H.B. Carter // J. Natl. Compr. Cane. Netw. 2007. - 5(7) - P. 737-742.

31. Абелев, Г.И. Альфа-фетопротеин взгляд в биологию развития и природу опухолей // Соросовский образовательный журнал. - 1998. - №9 - Р. 8-13.

32. Marrero, J.A. Alpha-fetoprotein, des-gamma carboxyprotrombin, and lectin-bound alpha-fetoprotein in early hepatocellular carcinoma / J.A. Marrero, Z. Feng, Y. Wang et al. II Gastroenterology. 2009. - 137(1) - P. 26-29.

33. Zhou, L. Serum tumor markers for detection of hepatocellular carcinoma / L. Zhou, J. Liu, F. Luo // World J. Gastroenterology. 2006. -12(8) - P. 11751181.

34. Khan, S.A. Diagnosis of hepatocellular carcinoma // World J. Gastroenterol. -2009. 15(11) — P. 1301-1304.

35. Bergstrand, C.G. Demonstration of a new protein fraction in serum from human fetus / C.G. Bergstrand, B. Czar // Scan. J. Clin. Lab. Invest. 1956. - 8 -P. 174-176.

36. Muralt, G. Immunological study of human fetal serum proteins / G. Muralt, D.L.A Roulet // Helv. Pediatr. Acta. 1961. - 16 - P. 517-520.

37. Abelev, G.I. Production of embryonal alpha-globulin by transplantable mouse hepatomas / G.I. Abelev, S.D. Perova, N.I. Khramkova, Z.A. Postnikova, I.S. Irlin // Transplantation. 1963. - 1 - P. 174-180.

38. Татаринов, Ю.С. В кн. I Всесоюзный биохимический съезд. Тезисы 2 // АН СССР, М.-Л. 1963. - с. 274.

39. Gomaa, A. Diagnosis of hepatocellular carcinoma / A. Gomaa, S. Khan, E. Leen, I. Waked, S. Taylor-Robinson // World Journal of Gastroenterology ISSN.-2009.- 15(11)-P. 1301-1314.

40. Bellini, C. Serum a-fetoprotein in newborns / C. Bellini, W. Bonacci, E. Parodi, G. Serra // Clin. Chem. 1998. - 44(12) - P. 2548-2550.

41. Ruoslahti, E. Studies of carcino-fetal proteins. 3. Development of a radioimmunoassay for a-fetoprotein. Demonstration of a-fetoprotein in serum of healthy human adults / E. Ruoslahti, M. Seppala // Int. J. Cancer. 1971. -8(3)-P. 374-383.

42. Jones, E.A. Differences between human and mouse a-fetoprotein expression during early development / E.A. Jones, M. Clement-Jones, O.F. James, D.I. Wilson // J. Anat. 2001. - 198 (5) - P. 555-559.

43. Debruyne, E.N. Diagnosing and monitoring hepatocellular carcinoma with a-fetoprotein: new aspect and applications / E.N. Debruyne, J.R. Delanghe // Clin. Chim. Acta. 2008. - 395 (1-2)-P. 19-26.

44. Koide, N. Alpha-fetoprotein-producing gastric cancer: histochemical analysis of cell proliferation, apoptosis, and angiogenesis / N. Koide, A. Nishio, J. Igarashi, S. Kajikawa et al. //Am. J. Gastroenterol. 1999. - 94(6) - P. 16581663.

45. Chan, M.H. Alpha-fetoprotein variants in a case of pancreatoblastoma / M.H. Chan, M.M. Shing, T.C. Poon, P.J. Johnson, C.W. Lam // Ann. Clin. Biochem. 2000.-37(5)-P. 681-685.

46. Карпищенко, А.И. Онкомаркеры и их диагностическое значение / А.И. Карпищенко, В.Г. Антонов, А.Б. Бутенко, А.С. Белохвостов, Е.П. Шелепина СПб.: ВМедА., 1999. - 47 с.

47. Thomas, P. The structure, metabolism and function of carcinoembryonic antigen gene family / P. Thomas, C.A. Toth, K.S. Saini, J.M. Jessup, G. Steele // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - 1032 - P. 177-189.

48. Thompson, J.A. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives / J.A. Thompson, F. Grunet, W. Zimmermann // J. Clin. Lab. Anal. 1991. - 5 - P. 344-366.

49. Gold, P. Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system / P. Gold, S.O. Freedman // J. Exp. Med. 1965. - 122 - P. 467-481.

50. Gold, P. Demonstration of tumor-specific antigen in human colonic carcinomata by immunological tolerance and absorption technique / P. Gold, S.O. Freedman// J. Exp. Med. 1965. - 121 - P. 439-462.

51. Boucher, D. Studies on the control of gene expression of the carcinoembryonic antigen family in human tissue / D. Boucher, D. Cournoyer, C.P. Stanners, A. Fuks // Cancer Res. 1989. - 49 - P. 847-852.

52. Thomson, D.M.P. The radioimmunoassay of circulating carcinoembryonic antigen of the human digestive system / D.M.P. Thomson, J. Krupey, S.O. Freedman, P. Gold // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1969. - 64 - P. 161-167.

53. Huerta, S. Recent advances in the molecular diagnosis and prognosis of colorectal cancer//Expert. Rev. Mol. Diagn. 2008. - 8(3) - P. 277-288.

54. Uedo, N. Measurement of carcinoembryonic antigen in colonic effluent as a high-risk marker for colorectal carcinoma / N. Uedo, H. Ishikawa, H. Narahara et al. // Cancer Detect.Prev. 2000. - №3 - P. 290-294.

55. Engwegen, J. Detection of colorectal cancer by serum and tissue protein profiling: A Prospective study in a population at risk / J. Engwegen, A. Depla, M. Smits et al. // Biomarker Insights. 2008. - 3 - P. 375-385.

56. Скворцов, С.В. Опухолевые маркеры в оценке степени распространенности опухолевого процесса при злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта / С.В. Скворцов, И.М. Храмченко, Н.Е. Кушлинский // Клин. лаб. диагн. 1999. - № 9. - с.26.

57. Lee, Y.C. Tissue polypeptide antigen and carcinoembryonic antigen as tumor marker in lung cancer / Y.C. Lee, P.C. Yang, S.H. Kuo, K.T. Luh // J. Formos. Med. Assoc. 1991. - 90 - P. 631-636.

58. Sajid, K.M. Carcinoembryonic antigen (CEA) levels in hookan smokers, cigarette smokers and non-smokers / K.M. Sajid, R. Parveen, Duur-e-Sabin., K. Chaouachi, A. Naeem, R. Mahmood, R. Shamin // J. Pak. Med. Assoc. 2007.-57(12)-P. 595-599.

59. Ferrigno, D. Neuronspecific enolase is an effective tumour marker in non-small cell lung cancer (NSCLC) / D. Ferrigno, G. Buccheri, C. Giordano // Lung Cancer.-2003-41 P. 311-320.

60. Sung, H.J. Biomarkers for the lung cancer diagnosis and their advances in proteomics / H.J. Sung, J.Y. Cho // BMB Rep. 2008. - 41(9) - P. 615-625.

61. Riley, R.D. A systematic review of molecular and biological tumor markers in neuroblastoma / R.D. Riley, D. Heney, D.R. Jones, A.J. Sutton, P.C. Lambert, K.R. Abrams et al //Clin. Cancer Res. 2004. - 10 (1 pt 1) - P. 4-12.

62. Andoh, M. Serum Neuron Specific Enolase Level as a Prognostic Factor in Non-Small Cell Lung Cancer / M. Andoh, A. Gemma, K. Takenaka, S. Hisakatsu, K.Yamada, J. Usuki, K. Hasegawa, Sakonji M. et al. II Intern. Med. 1994. - 33(5) - P. 271-276.

63. Tofani, A. S-100 and NSE as serum markers in melanoma / A.Tofani, R. Cioffi, R. Sciuto et al. // Acta. Oncol. 1997. -36(7) - P. 761-764.

64. Poyner, R.R. Role of metal ions in catalysis by enolase: an ordered kinetic mechanism for a single substrate enzyme / R.R. Poyner, W.W. Cleland, G.H. Reed //Biochemistry. 2001. - 40(27) - P. 8009-8017.

65. Kaiser, E. Clinical biochemistry of neuron specific enolase / E. Kaiser, R. Kuzmits, P. Pregant, O. Burghuber, W. Worofka // Clin. Chim. Acta. 1989. -183(1)-P. 13-31.

66. Pierce, J.G. Glycoprotein hormones: structure and function / J.G. Pierce, T.F. Parsons // Annu. Rev. Biochem. 1981. - 50 - P. 465-495.

67. Cole, L.A. The deactivation of hCG by nicking and dissotiation / L.A. Cole, A. Kardana, S.-Y. Park, G.D. Braunstein // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1993. -76-P. 704-713.

68. Norman, R.J. Monoclonal antibodies to human chorionic gonadotropin: implications for antigenic mapping, immunoradiometric assay, and cinical application / R.J. Norman, T. Poulton, T. Gard, T. Chard // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1985.-61 P. 1031-1038.

69. Cole, L.A. Human chorionic gonandropin tests // Expert. Rev. Mol. Diagn. -2009. 9(7) - P. 721-747.

70. Hoermann, R. Immunological recognition and clinical significance of nicked human chorionic gonadotropin in testicular cancer / R. Hoermann, P. Berger, G. Spoettle, F. Gillesberger, A. Kardana, L.A. Cole, et al. // Clin. Chem. -1994. 40-P. 2306-2312.

71. Cole, L.A. New perspectives in measuring human chorionic gonadotropin levels for measuring and monitoring trophoblast disease // J. Reprod. Med. -1994.-39-P. 193-200.

72. Hoshi, S. Significance of simultaneous determination of serum human chorionic gonadotropin (hCG) and hCG-beta in testicular tumor patients / S. Hoshi, K. ISuzuki, S. Ishidoya, C. Ohyama, M. Sato, et al. //nt. J. Urol. 2000. -7-P. 218-223.

73. Алексеева, M.JI. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования / M.JI. Алексеева, Е.В. Гусарова, С.М. Муллабаева, Т.С. Понкратова // Проблемы репродукции. -2005. -№3 с. 65-79.

74. Alaoui-Jamali, М.А. Protein technology for biomarker profiling in cancer: an update / M.A. Alaoui-Jamali, Y. Xu // J.Zhejiang University Science B. 2006. -7(6)-P. 411-420.

75. Lahousen, M. The predictive value of combination of tumor markers in monitoring patients with ovarian cancer / M. Lahousen, H. Stettner, H. Pickel // Cancer. 1987. - 60 - P. 2228-2232.

76. Muzushima, Y. Clinical significance of the number of positive tumor markers in assisting the diagnosis of lung cancer with multiple tumor marker assay / Y. Muzushima, H. Hirata, S. Isumi, et al. II Oncology. 1990. - 47 - P. 43-48.

77. Zhang, Z. Three biomarkers identified from serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian cancer / Z. Zhang, R.C. Bast, Y. Yu, et al. // -2004.-64-P. 5882-5890.

78. Саркисян, Г.П. Возможности ранней диагностики опухолей / Г.П. Саркисян, Т.И. Булычева, С.Р. Карагюлян, А.В. Точенов, B.C. Шавлохов // Терапевтический архив. 2005. - №4 - с. 33-37.

79. Carpelan-Holmstrom, М. Estimating the probability of cancer with several tumor markers in patients with colorectal disease / M. Carpelan-Holmstrom, J. Louhimo, U.H. Stenman, H. Alfthan, H. Jarvinen, C. Haglund // Oncology.-2004. 66(4) - P. 296-302.

80. Liao, Q. Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head / Q. Liao, Y.P. Zhao, Y.C. Yang, L.J. Li, X. Long, S.M. Han // Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 2007. - 6(6) -P. 641-645.

81. Proudnikov, D. Immobilization of DNA in polyacrilamide gel for the manufacture of DNA and DNA-oligonucleotide microchips / D. Proudnikov, E.Timofeev, A. Mirzabekov // Anal. Bichem. 1998. - 259 - P. 34-41.

82. Rubina, A. Hydrogel drop microchips with immobilized DNA properties and methods for large-scale production / A. Rubina, S. Pan'kov, E. Dementieva, et al. // Anal. Biochem. 2004. - 325 - P. 92-106.

83. Мирзабеков, А.Д. Применение матричных биочипов с иммобилизованной ДНК в биологии и медицине / А.Д. Мирзабеков , Д. В. Прокопенко , В.Р. Чечеткин // Информационные медико-биологические технологии. 2002. - М.,с. 166-198.

84. Скотникова, О. И. Новые технологии определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis / О.И. Скотникова, В. М. Михайлович, Е. Ю. Носова и др. // Пробл. туб. 2004. - № 6 с. 40-43.

85. Kricka, L.J. Current perspectives in protein array technology / L.J. Kricka, S.R. Master, Т.О. Joos, P. Fortina // Ann. Clin. Biochem. 2006. - 43(Pt 6) - P. 457

86. Zhang S. Hydrogels: Wet or let die // Nat. Mater. 2004. - 3(1) - P. 7-8.

87. Rubina, A. Yu. Why 3-D? Gel-based microarrays in proteomics / A.Yu. Rubina, A. Kolchinsky, A.A. Makarov, A.S. Zasedatelev // Proteomics. 2008. -8-P. 817-831.

88. Angenendt, P. Progress in protein and antibody microarray technology // Drug Discov. Today.-2005.- 10-P. 503-511.

89. Rusmini, F. Protein immobilization strategies for protein biochips / F. Rusmini, Z. Zhong, J. Feijen // Biomacromolecules. 2007. - 8(6) - P. 1775-1789.

90. Fang, F. Kinetics and thermodynamics of protein adsorption: a generalized molecular theoretical approach / F. Fang, I. Szleifer // Biophys. J. 2001. -80 -2568-2589.

91. Seurynck-Servoss, S.L. Surfaces chemistries for antibody microarrays / S.L. Seurynck-Servoss, C.L. Baird, K.D. Rodland, R.C. Zangar // Front. Biosci. -2007.-12-P. 3956-3964.

92. Pirrung, M.C. A general method for the spatially defined immobilization of biomolecules on glass surfaces using "caged" biotin / M.C. Pirrung, C.Y. Huang // Bioconjug. Chem. 1996. - 7(3) - P. 317-321.

93. Cheng, M.M. Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics / M.M. Cheng, G. Cuda, Y.L. Bunimovich, M. Gaspari, J.R. Heath et al. //Curr. Opin. Chem. Biol. 2006. - 10(1) P. 11-19.

94. Angenendt, P. Toward optimized microarrays: a comparison of current microarray support material / P. Angenendt, J. Glokler, D. Murphy, H. Lenrach, D.J. Cahill // Anal. Biochem. 2002. - 309 - P. 253-260.

95. Vasiliskov, V. Fabrication of microarray of gel-immobilized compounds on a chip by copolymerization // V. Vasiliskov, E. Timofeev, S. Surzhikov; A. Drobyshev, V. Shick, A. Mirzabekov // BioTechniques. 1999. - 27 - P. 592606.

96. Arenkov, P. Protein microchips: Use for immunoassay and enzymatic reactions / P. Arenkov, A. Kukhtin, A. Gemmell, V. Chupeeva, S. Voloschuk, A. Mirzabekov // Anal. Biochem. 2000. - 278 - P. 123-131.

97. Wild D. The Immunoassay handbook. // 2005. ELSEVIER Ltd., ISBN: 0-08044526-8. P. 930.

98. Earley, M.C. Report from a workshop on multianalyte microsphere assays / M.C. Earley, R.F. Jr. Vogt, H.M. Shapiro, F.F. Mandy et al. // Cytometry. -2002. 50(5) - P.239-242.

99. Kellar, K.L. Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays / K.L. Kellar, M.A. Iannone // Exp. Hematol. 2002. - 30(11) - P. 1227-1237.

100. Haab, B.B. Antibody arrays in cancer research. // Mol. Cell. Proteomics. -2005.-4-P. 377-383.

101. Kingsmore, S.F. Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays. // Nat. Rev. Drug Disc. 2006. -5(4)-P. 310-320.

102. Wingren, C. Atibody microarrays: current status and key technological advances / C. Wingren, C.A. Borrebaeck // OMICS. 2006. - 10(3) - P. 411427.

103. Haab B.B. Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions / Haab B.B., Dunham M.J., Brown P.O. // Genome Biol. 2001. - 2(2) - P. 1-13.

104. Bacarese-Hamilton T., Detection of allergen-specific IgE on microarrays by use of signal amplification techniques / Bacarese-Hamilton T., Mezzasoma L., Ingham C., Ardizzoni A., Rossi R., Bistoni F., Crisanti A. // Clin. Chem. -2002.-48-P. 1367-1370.

105. Harwanegg C., Allergen microarrays for the diagnosis of specific IgE againsti rcomponents of cows milk and hens egg in a multiplex biochip-based immunoassay / Harwanegg C., Hutter S., Hiller R. // Methods Mol.Biol. -2007.-385-P.145-157.

106. Huang R.P. Cytokine protein arrays. // Methods Mol. Biol. 2004. - 264 - P. 215-231.

107. Nielsen U.B., Multiplexed sandwich assays in microarray format / Nielsen U.B., Bernhard H.G. // J. of Immunol. Methods. 2004. - 290 - P. 107-120

108. Zhou X., Antibody-microarrays on hybrid polymeric thin film-coated slides for multiple-protein immunoassay / Zhou X., Zhou J. // Methods Mol. Biol. -2007.-382-P. 259-271.

109. Bacarese-Hamilton T., Serodiagnosis of infectious diseases antigen microarrays / Bacarese-Hamilton T., Mezzasoma L., Ardizzoni A., Bistoni F., Crisanti A. // J. Appl. Microbiol. 2004. - 96 - P. 10-17.

110. Feng Y., Parallel detection of autoantibodies with microarrays autoantibodies with microarray in rheumatoid diseases / Feng Y., Ke X., Ma R., Chen Y., Hu G., Liu F. // Clin. Chem. 2004. - 50(2) - P. 416-422.

111. Miller J.C., Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera. / Miller J.C., Zhou H., Kwekel J., Cavallo R., Burke J., Butler E.B., Teh B.S., Haab B.B. // Proteomics 2003. - 3 - P. 56-63.

112. Belov L., Immunophenotyping of leukemias using a cluster of differentiation antibody microarray / Belov L., de la Vega O., dos Remedios C.G., Mulligan S.P., Christopherson R.I. // Cancer Res. 2001. - 61 - P. 4483.

113. Sreekumar A., Using protein microarrays to study cancer / Chinnaiyan A.M. // BioTechniques. Suppl 2002. - P. 46-53.

114. Shafer MW, Antibody array profiling reveals serum TSP-1 as a marker to distinguish benign from malignant prostatic disease / Shafer MW, Mangold L, Partin AW, Haab BB. // Prostate. 2007. - 67(3) - P. 255-267.

115. Hamelinck D., Optimized Normalization for Antibody Microarrays and Application to Serum-Protein Profiling / Hamelinck D., Zhou H., Lin Li., Verweij C., Dillon D., Feng Z., Costa J., Haab B.B. // Molecular & Cellular Proteomics 4 2005. - P. 773-784.

116. Ligler F.S., Array biosensor for detection of toxins / Ligler F.S., Taitt C.R., Shriver-Lake L.C., Sapsford K.E., Shubin Y., Golden J.P. // Anal. Bioanal. Chem. 2003. - 377(3) - P. 469-477.

117. Ngundi M.M., Detection of bacterial toxin with monosaccharide arrays / Ngundi M.M., Taitt C.R., McMurry S.A., Kahne D., Ligler F.S. // Biosens. Bioelectron. 2006. - 21(7) - P. 1195-1201.

118. Sun Z. A protein chip system for parallel analysis of multi-tumor markers and its application in cancer detection / Sun Z, Fu X, Zhang L, Yang X, Liu F, Hu G. //Anticancer Res. 2004. - 24(2C) - P. 1159-1165.

119. Yu D.Y. Application of multi-tumor markers protein chip assistance diagnostic system for detection of various tumors. // China Trop. Med. 2005. - 5 - P. 414-416.

120. Liang Z., Clinical value of 12 tumor markers protein biochip detection of digestive system neoplasm / Liang Z., Wang H.F., Wu A.Z., Fu S.M. // China Trop. Med. 2005. - 5 - P. 407-409.

121. Jiang Z.J., Application of multi-tumor markers protein chip diagnose system in the diagnosing of intestinal neoplasms / Jiang Z.J., Zhou W.X., Lin W., Huang Q.X. // J. Mod. Med. 2005. - 20 - P. 17-19.

122. Mou J.H., Combined detection of multiple tumor markers and its diagnostic value in colorectal cancer / Mou J.H., Li Z.P., Wang D., Ma Y., Xiao H.L., Zhang Q.H. // J. Digest. Surg. 2007. - 4 - P. 268-270.

123. Zhong Z.Y., Clinical significance of C-12 multiple tumor markers protein chip detective system in diagnosing colorectal carcinoma / Zhong Z.Y., Wang D., Li Z.P., Li M.X., Dai N., Cao X.J., et al. // Chongqing Med. 2007. - 36 - P. 2406-2408.

124. Chen C., Value of tumor markers in diagnosing and monitoring colorectal cancer and strategies for further improvement: analysis of 130 cases / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // Ai. Zheng. 2007. - 26(11) - P. 1221-1226.

125. Chen C., The application of C12 biochip in the diagnosis and monitoring of colorectal cancer: Systematic evaluation and suggestion for improvement / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // J. Postgrad. Med. 2008. - 54(3) - P. 186-190.

126. Chen C., Evaluation of tumor markers biochip C12 system in the diagnosis of gastric cancer and the strategies for improvement: analysis of 100 cases / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // Hepatogastroenterology. '- 2008. 55(84) -P. 991-997.

127. Song S.-P., Simultaneous multianalysis for tumor markers by antibody fragments microarray system / Song S.-P., Li В., Hu J., Li M.-Q. // Analytica Chimica Acta. 2004. - 510 - P. 14.7-152.

128. Wilson M.S., Multiplex measurement of seven tumor markers using an electrochemical protein chip / Wilson M.S., Nie W. // Anal. Chem. 2006. - 78 -P. 6476-6483.

129. Wiese R., Simultaneous multianalyte ELISA performed on microarray platform / Wiese R., Belosludtsev Y., Powdrill Т., Thompson P., Hogan M. // Clinical Chemistry. 2001. - 47(8)-P. 1451-1457.

130. Gao W.M., Distinctive serum protein profiles involing abundant proteins in lung cancer patients based upon antibody microarray analysis / Gao W.M., Kuick R., Orchekowski R.P. et al. // BMC Cancer. 2005. - 5 - P. 110-119.

131. Miller J.C., Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera: antibody screening and identification of potential biomarkers / Miller J.C., Zhou H., Kwekel J. et al. // Proteomics. 2003. - 3 - P. 56-63.

132. Orechekowski R., Antibody microarray profiling reveals individual and combined serum proteins associated with pancreatic cancer / Orechekowski R., Hamelinck D., Li L. et al. // Cancer Res. 2005. - 65(23) - P. 11193-11202.

133. Мог G., Serum protein markers for early detection of ovarian cancer / Мог G., Visintin I., Lai Y. et al. // PNAS. 2005. - 102 - P. 7677-7682.

134. Greene K., Prostate Specific Antigen Best Practice Statement: 2009 Update / Greene K., Albersten P., Babain R., Carter H., Gann P., Han M. et al. // The Journal of Urology. 2009. - 182 - P. 2232-2241.

135. Shroder F., Screening and prostate-cancer mortality in a randomized European study / Shroder F., Hugosson J., Roobol M. et al. // N. Engl. J. Med. 2009 -360-P. 1320-1328.

136. Мирзабеков А.Д., Рубина А.Ю., Паньков C.B. Способ полимеризационной иммобилизации биологических макромолекул и• композиция для его осуществления. Патент РФ N 2216547. 2003.Бюл. изобр. №32.

137. Rubina A., Hydrogel-based protein microchips: manufacturing, properties, and applications / Rubina A., Dementieva E., Stomakhin A., Darii E., Pan'kov S., Barsky V., Ivanov S., Konovalova E., Mirzabekov A. // BioTechniques. 2003. -34 -P. 1008-1022.

138. Multiplex tests for heritable DNA markers, mutations and expression patterns; draft guidance for industry and FDA Reviewer. // Draft Guidance 2003.

139. Тигранян P.А., Методическое руководство по проведению контроля качества наборов реагентов для иммуноферментного анализа / Тигранян

140. Р.А., Калита Н.Ф., Роганов А.С. // Министерство Здравоохранения и Медицинской промышленности РФ. 1994. - Москва. - С. 33 159.Selby С. Interference in immunoassay. // Ann. Clin. Biochem. - 1999. - 36 - P. 704-721.

141. Jassam N., The hook effect: a need for constant vigilance / Jassam N., Jones C., Briscoe Т., Horner J. // Ann. Clin. Biochem. 2006. - 11 - P. 96-104.