Многопараметрический анализ сывороточных онкомаркеров с помощью суспензионных систем на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Бражник, Кристина Ивановна

• Бражник, Кристина Ивановна
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Бражник, Кристина Ивановна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Цель и задачи исследования

Научная новизна и практическая значимость работы

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принципы современной клинической диагностики онкологических заболеваний

1.2. Опухолевые маркеры

1.2.1. Ассоциированные с опухолью антигены - классические онкомаркеры

1.2.2. Индивидуальные онкомаркеры

1.2.2.1. Простатический специфический антиген

1.2.2.2. Раковоэмбриональный антиген

1.2.2.3. Опухолевый антиген СА 15-3

1.2.2.4. Опухолевый антиген СА 125

1.3. Флуоресцентные нанокристаллы для многопараметрического анализа

1.3.1. Характеристика и свойства полупроводниковых флуоресцентных нанокристаллов

1.3.2. Области применения флуоресцентных нанокристаллов и перспективы использования в клинической диагностике

1.3.2.1. Иммуноцитохимия и иммуногистохимия с использованием биоконъюгатов на основе флуоресцентных нанокристаллов

1.3.2.2. Многоцветная проточная цитофлуориметрия с использованием биоконъюгатов на основе флуоресцентных нанокристаллов

1.3.2.3. Мониторинг внутриклеточных процессов и взаимодействий с помощью биконъюгатов на основе флуоресцентных нанокристаллов

1.3.3. Многопараметрические суспензионные системы на основе оптически кодированных микросфер

1.3.4. Преимущества суспензионных систем на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами

I.4. Заключение

II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Коллекция образцов сыворотки крови человека

2.2. Анализ образцов сыворотки крови с помощью традиционного иммуноферментиого метода

2.3. Получение стабильных водорастворимых флуоресцентных нанокристаллов

2.3.1. Солюбилизация флуоресцентных нанокристаллов цистеином

2.3.2. Модификация поверхности флуоресцентных нанокристаллов производным полиэтиленгликоля

2.3.3. Очистка модифицированных флуоресцентных нанокристаллов

2.4. Оптическое кодирование микросфер флуоресцентными нанокристаллами

2.4.1. Подготовка поверхности микросфер

2.4.2. Кодирование микросфер водорастворимыми флуоресцентными нанокристаллами

2.5. Характеризация микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами

2.6. Конъюгация распознающих биомолекул с поверхностью флуоресцентных микросфер

2.7. Биотинилирование детекторных моноклональных антител

2.8. Многопараметрический иммуноанализ образцов сыворотки крови с помощью флуоресцентных микросфер в суспензии

2.8.1. Количественная детекция свободного и общего ПСА в образцах сыворотки крови

2.8.2. Количественная детекция CA 15-3, РЭА и CA 125 в образцах сыворотки крови

2.9. Определение аналитических характеристик суспензионной системы на основе флуоресцентных микросфер

2.9.1. Воспроизводимость анализа

2.9.2. Аналитическая чувствительность

2.9.3. Определение линейного диапазона определяемых концентраций (тест на линейность)

2.9.4. Оценка достоверности определения концентрации онкомаркеров в смешанных образцах сыворотки (тест на «открытие»)

2.10. Статистическая обработка результатов

III. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Получение стабильных водорастворимых флуоресцентных нанокристаллов

3.2. Оптическое кодирование микросфер флуоресцентными нанокристаллами

3.3. Характеризация микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами

3.4. Количественная детекция свободного и общего ПСА в образцах сыворотки крови с помощью флуоресцентных микросфер

3.4.1. Микросферы с адаптерными молекулами на поверхности

3.4.2. Антиген-специфические микросферы с распознающими антителами на поверхности

3.5. Диагностические характеристики суспензионной системы на основе флуоресцентных микросфер: регрессионный анализ

3.6. Аналитические характеристики суспензионной системы на основе флуоресцентных микросфер

3.6.1. Воспроизводимость анализа

3.6.2. Аналитическая чувствительность

3.6.3. Линейный диапазон определяемых концентраций

3.6.4. Достоверность определения концентрации онкомаркеров в смешанных образцах сыворотки

3.7. Принципы количественной детекции CA 15-3, РЭА и CA 125 в образцах сыворотки крови с помощью флуоресцентных микросфер

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

146

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

<х1-АХТ а1 -антихимотрипсин

АГ антиген

АТ антитело

БСА бычий сывороточный альбумин

ВИЧ вирус иммунодефицита человека

ДГПЖ доброкачественная гиперплазия предстательной железы

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ИК-диапазон инфракрасный диапазон

ИФА иммуноферментный анализ

КВ коэффициент вариации

КТ квантовая точка

МЖ молочная железа

мРНК матричная рибонуклеиновая кислота

НСЕ нейронспецифическая енолаза

ПЖ предстательная железа

ПСА простатический специфический антиген

ПЭГ полиэтиленгликоль

РМЖ рак молочной железы

РПЖ рак предстательной железы

РЭА раковоэмбриональный антиген

РЯ рак яичников

СО стандартное отклонение

TIT тиреотропный гормон

TITA тканевый полипептидный антиген

ХГЧ хорионический гонадотропин человека

BRET bioluminescence resonance energy transfer

CA (125, 15-3, 19.9,72.4) cancer antigen

CD (CD 8+) cluster of differentiation

CMV cytomegalovirus

CYFRA21.1 cytokeratin 19 fragment

EBV Epstein-Barr virus

EDC l-Ethyl-3-[3-dimethylaminopropyl]carbodiimide hydrochloride

ER estrogen receptor-a

FACS fluorescence-activated cell sorting

FITC fluorescein isothiocyanate

FRET Förster resonance energy transfer

GFP green fluorescent protein

HER2 human epidermal growth factor receptor

HIV Nef human immunodeficiency virus negative regulatory factor

HIV Gag human immunodeficiency virus group-specific antigen

MBP maltose-binding protein

MCA mucin-associated carcinoma antigen

MFCA microsphere-based flow cytometry assay

MDM2 mouse double minute 2 homolog

MES 2-(Af-morpholino)ethanesulfonic acid

nRNP nuclear ribonucleoprotein

PAA poly(aciylic acid, sodium salt)

PAH poly(allylamine hydrochloride)

PBS phosphate buffered saline

PCNA proliferating cell nuclear antigen

PE phycoerythrin

PE-Cy5 phycoerythrin-cyanine

PEG polyethylene glycol

pMHCI peptide-major histocompatibility complex class I

PSS poly(sodium 4-styrenesulfonate)

SCCA squamous cell carcinoma antigen

Scl-70 systemic scleroderma antigen (70 kDa fragment of human DNA topoisomerase I)

SNP single nucleotide polymorphisms

SPNT scanning probe nanotomography

sulfo-NHS N-hydroxysulfosuccinimide

TOPO trioctylphosphine oxide

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Многопараметрический анализ сывороточных онкомаркеров с помощью суспензионных систем на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы

Онкологические заболевания по-прежнему остаются одной из

ведущих причин смертности в мире. Ежегодно «рак» диагностируется у не менее чем 13 миллионов пациентов (данные за 2008 г.) [1]. По неутешительным прогнозам Всемирной организации здравоохранения число новых случаев заболевания раком в год на планете может увеличиться до 22 миллионов в следующие десятилетия. Ключевым условием для обеспечения своевременного и эффективного лечения является систематический скрининг населения и ранняя диагностика онкологических заболеваний. Многочисленные исследования показали, что уровень содержания ряда утвержденных онкомаркеров в биологических жидкостях организма (например, в сыворотке крови) напрямую коррелирует с определенной стадией развития раковой опухоли [2, 3]. По этой причине высокоточная количественная детекция специфических онкомаркеров имеет важное значение для своевременной дифференциальной диагностики и выбора эффективных методов лечения злокачественных новообразований.

К сожалению, идентифицированные на данный момент онкомаркеры не обладают достаточно высокой специфичностью, что заметно ограничивает возможности их использования в клинической диагностике при разных нозологических формах рака. Решение проблемы поиска «идеального» онкомаркера может быть частично компенсировано одновременным определением нескольких опухолеспецифических антигенов (АГ), что существенно повышает эффективность диагностики онкологических заболеваний [4].

В настоящее время в лабораторной клинической диагностике разных заболеваний применяются 2 стратегии для количественного определения растворимых маркеров, такие как традиционный твердофазный иммуноанализ на планарных носителях (иммуноферментный анализ (ИФА), микрочипы) и диагностика нового поколения с помощью суспензионных систем на основе кодированных микрочастиц [5-8].

Стандартный метод ИФА, широко использующийся в клинико-лабораторной практике, позволяет детектировать только один маркер в образце, а для последовательного анализа профиля маркеров становится дорогим и затратным по времени, требует больших объемов образцов и имеет ограниченную емкость. Одним из основных аналитических методов для определения профиля растворимых маркеров в клиническом образце в настоящий момент является многопараметрический анализ с использованием микрочипов. Микрочипы, представляющие из себя наборы детекторных молекул-зондов (олигонуклеотиды, антитела (АТ), пептиды и т.д.), нанесенных в определенные кластеры твердой подложки, позволяют определять несколько параметров одновременно [9-11]. Однако зачастую свойства неподвижного планарного носителя значительно ограничивают выбор анализируемых параметров, производительность, чувствительность, эффективность и скорость детекции [12].

В последнее время большие надежды связывают с многопараметрическими суспензионными системами на основе кодированных микрочастиц с иммобилизованными на их поверхности биологическими зондами [13]. Такие пространственные системы детекции имеют значительные преимущества перед твердофазными

планарными микрочипами. Они характеризуются эффективной кинетикой связывания; обладают расширенным линейным диапазоном определяемых концентраций; позволяют с высокой чувствительностью и точностью измерять уровень нескольких растворимых маркеров одновременно в одном биологическом образце с помощью проточной цитометрии [14,15].

Существует несколько возможных принципов кодирования и, соответственно, формирования индивидуального кода микрочастиц в суспензионной системе [7, 16]. Наиболее доступна и проста в исполнении и детекции оптическая схема кодирования микрочастиц, основанная на включении в структуру латексных микросфер флуорофоров и хромофоров для создания индивидуальных оптических кодов.

Принцип работы многопараметрической суспензионной системы заключается в количественной детекции и индивидуальной визуализации каждого анализируемого маркера в составе иммунодиагностических комплексов, сформированных на поверхности оптически кодированных микрочастиц (принцип «лаборатории-на-частице»), с помощью проточной цитометрии. Каждому анализируемому маркеру присваивается индивидуальный оптический код популяции микросфер, который помогает количественно дифференцировать данный маркер в тестируемом биологическом образце. При смешивании нескольких популяций флуоресцентных микросфер, оптические коды которых присвоены различным биомолекулам, реализуется возможность многопараметрической детекции набора специфических маркеров в одном образце [15-17].

До настоящего времени наиболее успешной разработкой в области суспензионных диагностических систем является МРСА-технология компании Ьиттех, основанная на детекции биомолекул с помощью суспензии оптически кодированных микросфер, содержащих органические флуорофоры [18, 19]. Для такой диагностической суспензионной системы характерны более широкие диапазоны детекции анализируемых биомолекул, гораздо более простой и быстрый технический протокол реализации анализа по сравнению с классическим методом ИФА [13]. Тем не менее существующие суспензионные системы на основе флуоресцентных микросфер компании Ьиттех имеют ряд ограничений, связанных с несовершенными оптическими свойствами органических флуорофоров, используемых для кодирования: доступно ограниченное число уникальных спектральных кодов микросфер для одновременной детекции растворимых маркеров; при увеличении количества флуорофоров система требует наличия сложного аналитического оборудования; низкая фотостабильность и яркость флуоресцентных микросфер и т.д. [15].

Благодаря последним достижениям в области нанотехнологии был получен новый класс усовершенствованных флуорофоров -полупроводниковых флуоресцентных нанокристаллов (квантовые точки, КТ), которые обладают уникальными оптическими свойствами и имеют неоспоримое преимущество перед классическими органическими флуорофорами для широкого использования в различных биологических и клинико-диагностических системах детекции [20]. На данный момент доступна целая палитра КТ, обладающих различными оптическими свойствами, широкие спектры поглощения которых позволяют возбуждать их одним источником света, а узкие спектры флуоресценции

дают возможность комбинировать KT разного типа и получить невероятно большое количество уникальных оптических кодов микрочастиц. Кроме того, KT и композиты на их основе обладают высокой яркостью и фотостабильностью. Таким образом, использование KT для кодирования микросфер позволяет значительно усовершенствовать многопараметрические возможности,

фотостабильность и чувствительность диагностической суспензионной системы, предполагает использование простого декодирующего оборудования и значительно снижает время и стоимость анализа [21]. Кроме того, благодаря своим уникальным оптическим свойствам, KT могут использоваться как эффективные доноры энергии при Ферстеровском резонансном переносе энергии (Förster resonance energy transfer, FRET) на подходящий акцептор [22, 23]. Такая возможность позволяет значительно усовершенствовать качество детекции, а также повысить порог чувствительности и эффективность диагностической системы.

В настоящее время технологии, основанные на использовании KT и микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами, находятся на этапе интенсивного исследования и развития для дальнейшей интеграции в клинико-диагностическую практику. Получены первые интересные результаты применения таких систем в протеомике для идентификации аутоантител (ауто-АТ) в сыворотке крови пациентов [24]. Эти исследования открывают широкие перспективы для применения разработанных диагностических систем для многопараметрической детекции целого спектра растворимых маркеров белковой природы с высокой точностью и чувствительностью. Возможность реализации системы детекции в формате резонансного

переноса энергии от возбужденных КТ на специфически связанную вторичную флуоресцентную метку позволяет значительно повысить чувствительность анализа [24]. Следовательно, с помощью диагностической суспензионной системы на основе микросфер, кодированных КТ, возможно детектировать минимальные количества онкомаркеров в крови пациентов [15].

Разработка принципов применения в клинической диагностике суспензионных микрочипов на основе микросфер, кодированных нанокристаллами, имеет важное медицинское значение, т.к. подобные системы для пространственного анализа образцов биологических жидкостей малого объема являются экономичной и эффективной альтернативой традиционным ИФА-системам.

Таким образом, разработка высокоэффективных диагностических суспензионных систем нового поколения на основе микросфер, кодированных КТ, для высокоточной многопараметрической количественной детекции профиля онкомаркеров в минимальном объеме биологического образца представляется актуальной задачей для клинической лабораторной диагностики онкологических заболеваний.

Цель и задачи исследования

Целью данной работы является разработка диагностической

суспензионной системы нового поколения на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами, для многопараметрической количественной детекции онкомаркеров в сыворотке крови человека.

В соответствии с целью исследования поставлены следующие задачи:

1. Создать панель стабильных в биологических жидкостях флуоресцентных микросфер различных диаметров, кодированных КТ с различными оптическими свойствами и применимых для многопараметрической детекции сывороточных онкомаркеров.

2. Оптимизировать условия иммуноанализа на микрочастице для количественной детекции двух (две формы простатического специфического антигена (ПСА)) или трех (СА 15-3; раковоэмбриональный антиген (РЭА); СА 125) специфических сывороточных онкомаркеров.

3. Сформировать коллекцию образцов сыворотки крови пациентов и здоровых доноров и проанализировать их с помощью разработанной многопараметрической суспензионной системы на основе флуоресцентных микросфер в сравнении со стандартным иммуноферментным методом индивидуальной детекции маркеров (Fujirebio Diagnostics).

4. Оценить диагностическую эффективность и преимущества разработанной многопараметрической суспензионной системы.

5. Определить аналитические характеристики разработанной многопараметрической суспензионной системы.

Научная новизна и практическая значимость работы

В настоящем исследовании впервые разработаны

диагностические суспензионные системы нового поколения на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами, предназначенные для высокоточной и чувствительной многопараметрической лабораторной диагностики онкологических заболеваний человека.

С помощью усовершенствованной технологии оптического кодирования полимерных микрочастиц водорастворимыми флуоресцентными нанокристаллами получена уникальная панель высокостабильных в биологических жидкостях ярких микросфер различных диаметров и цветов, обладающих различными оптическими свойствами.

Разработаны принципы многопараметрической количественной детекции профиля сывороточных онкомаркеров с помощью иммунодиагностических комплексов на поверхности синтезированных флуоресцентных микросфер (многопараметрическая суспензионная система). Разработанные суспензионные микрочипы апробированы на клинических образцах сыворотки крови для одновременного количественного определения двух или трех сывороточных онкомаркеров и демонстрируют высокую эффективность, чувствительность, достоверность и точность анализа, сопоставимые с характеристиками стандартного иммуноферментного метода индивидуальной детекции маркеров (Fujirebio Diagnostics).

Продемонстрированы и обоснованы преимущества использования многопараметрических суспензионных систем на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами, для анализа профиля онкомаркеров в формате «лаборатория-на-частице» перед традиционными твердофазными иммунометрическими системами (ИФА, Fujirebio Diagnostics), предназначенными для индивидуальной детекции онкомаркеров:

1. одновременное определение панели онкомаркеров в одном образце;

2. достижение высокой чувствительности и эффективности количественной детекции маркеров в формате многопараметрического анализа;

3. возможность расширения диапазона определяемых концентраций без предварительных разведений образцов;

4. сокращение времени иммуноанализа, количеств образца и реагентов для определения количественного содержания нескольких маркеров;

5. анализ с помощью стандартного лабораторного оборудования (минимальная комплектация проточного цитометра);

6. принципиальная возможность оперативного увеличения количества одновременно определяемых маркеров, свидетельствующая об универсальности системы.

Информативность разработанной многопараметрической системы по каждому отдельно взятому онкомаркеру не уступает монопараметрическим наборам ИФА и в перспективе позволит улучшить высокоточную диагностику онкологических заболеваний в лабораторной клинической практике.

Данные, полученные в настоящем исследовании, могут быть использованы в качестве практического обоснования преимуществ клинико-лабораторного использования диагностических суспензионных систем на основе микросфер, кодированных флуоресцентными нанокристаллами, для многопараметрического анализа профиля специфических онкомаркеров в биологических жидкостях пациентов. Разработка и применение такого высокоэффективного анализа для адресного скрининга населения будет способствовать своевременной ранней диагностике и рациональному выбору подходов к лечению.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принципы современной клинической диагностики онкологических заболеваний

Современные подходы к клинической диагностике онкологических заболеваний человека в большинстве случаев позволяют детектировать патологию уже на определенной стадии ее развития. Они ограничены набором классических методов: биохимическое и иммунологическое определение онкомаркеров, морфологическое и иммуноцитохимическое исследование биопсийных образцов тканей, инструментальные методы исследования [25].

В связи с этим, своевременная высокоточная диагностика онкологических заболеваний и разработка эффективных методов лечения являются наиболее актуальными задачами современной медицины. Для реализации этих задач прежде всего необходимо понимать основные механизмы возникновения и развития рака.

Злокачественная трансформация включает в себя изменения в экспрессии белков с последующей клональной пролиферацией измененных клеток. Аномальная экспрессия генов в опухолевых клетках обуславливает синтез эмбриональных, плацентарных и эктопических белков, ферментов, АТ и гормонов [2]. Сывороточные онкомаркеры представляют собой глико- или липопротеины, повышение концентрации в периферической крови которых коррелирует с наличием, ростом опухоли и ее метастазированием [2, 4, 26]. Поэтому сывороточные онкомаркеры являются важным информативным биохимическим показателем наличия опухолевого процесса и представляют мощный инструмент для мониторинга и оценки

эффективности проводимой терапии онкологических заболеваний. Такие маркеры имеют важное значение в клинической онкологии, поскольку их концентрация в сыворотке крови может коррелировать с наличием и ростом злокачественной опухоли до появления выраженных клинических симптомов.

Поиск, идентификация и качественный анализ специфических онкомаркеров в биологических жидкостях и разработка высокоточных многопараметрических систем для их количественной детекции по-прежнему остаются наиболее актуальными задачами ранней диагностики и прогнозирования онкологических заболеваний. Существуют разнообразные геномные и протеомные технологии для мониторинга многочисленных изменений и процессов, протекающих в организме на молекулярном уровне: степень опухолеспецифического метилирования ДНК [27, 28], модификация профилей мРНК [29], изменение уровня экспрессии и степени гликозилирования белков [30], появление АГ-специфических ауто-АТ [31-34] и циркулирующих раковых клеток [35, 36] и т.д.

Тем не менее, несмотря на большое количество проводимых научных исследований, подавляющее большинство потенциальных онкомаркеров нового поколения не выдерживают полноценных клинических испытаний для их регламентированного успешного применения в клинической диагностике и практике [37]. Причины такого критического отбора в процессе клинических испытаний заключаются в естественных различиях протеомных профилей пациентов; тонких вариациях методик отбора и обработки биологических проб, что может приводить к серьезным систематическим

ошибкам; ограниченности технологических ресурсов и недостатках используемых количественных методов детекции и анализа.

С учетом всех этих ограничений идеальный белковый онкомаркер должен отражать истинную биологическую гетерогенность в уровне экспрессии опухолеспецифических белков в зависимости от стадии и типа заболевания, а идеальная диагностическая система должна быть многопараметрической, высокоточной, а также простой и функциональной для использования в рутинной клинической практике.

1.2. Опухолевые маркеры

1.2.1. Ассоциированные с опухолью антигены — классические онкомаркеры

С точки зрения диагностической ценности опухолеспецифический АГ должен продуцироваться опухолевой клеткой в количествах, достаточных для обнаружения с помощью современных методов анализа. Кроме того, он не должен выявляться (или его уровень должен быть значительно меньше) в крови здоровых доноров и пациентов с незлокачественными заболеваниями. Важно, чтобы экспрессия маркера индуцировалась уже на ранних стадиях опухолевого процесса и, в дальнейшем, его концентрация в сыворотке коррелировала с результатами противораковой терапии. «Идеальных онкомаркеров», т.е. индивидуальных маркеров со 100% специфичностью (отсутствие маркера в образцах сыворотки крови контрольных групп здоровых доноров и пациентов с незлокачественными заболеваниями) и 100% чувствительностью (появление маркера в сыворотке крови онкологических пациентов) на сегодняшний день нет [4]. Поэтому в применяемых и разрабатываемых системах детекции пока используются

известные онкомаркеры с ограниченной диагностической специфичностью и чувствительностью.

На сегодняшний день известно более 200 онкомаркеров белковой природы, однако только часть из них эффективно применяется в лабораторной клинической практике для диагностики и/или мониторинга эффективности лечения разных типов рака, как то: ПСА (рак предстательной железы, РПЖ); РЭА (рак молочной железы, РМЖ; рак легкого; рак желудка; рак толстой кишки); СА 15-3 (РМЖ); СА 125 (рак яичников, РЯ); альфа-фетопротеин (АФП) (рак печени; герминогенные опухоли); хорионический гонадотропин человека (ХГЧ) (герминогенные и трофобластические опухоли); антиген плоскоклеточной карциномы (squamous cell carcinoma antigen, SCCA) (рак шейки матки); фрагмент цитокератина 19 (cytokeratin 19 fragment, CYFRA 21.1) (рак мочевого пузыря; рак легкого); нейронспецифическая енолаза (НСЕ) (рак легкого); СА 19-9 (рак поджелудочной железы; рак желудка; рак печени); белок S100 (меланома) и т.д. [38, 39]. Продолжается поиск новых специфических онкомаркеров, поэтому их число с каждым годом увеличивается.

Определение профиля и уровня содержания специфических онкомаркеров в биологических образцах имеет важное значение для мониторинга течения заболевания и эффективности хирургического лечения, лучевой или лекарственной терапии. Причем наиболее значим мониторинг динамики уровня маркера, а не единичное определение его значения. Динамика уровня онкомаркеров в некоторых случаях позволяет проводить дифференциальную диагностику между доброкачественными и злокачественными процессами. Кривая зависимости концентраций онкомаркера во времени при

доброкачественных заболеваниях обычно остается ниже диапазона патологических значений. В ряде случаев возможно по профилю изменений онкомаркера в динамике выявить рецидив или метастазирование за 1-6 месяцев до клинических проявлений опухолевого процесса [40].

Традиционные прямые иммунохимические методы твердофазного анализа (ИФА) позволяют определять концентрацию только одного опухолеспецифического АГ в образце сыворотки крови в одном рабочем тестировании. Одновременное определение нескольких онкомаркеров с помощью соответствующих диагностических наборов позволяет повысить чувствительность скринингового анализа, расширяет возможности дифференциальной диагностики заболеваний, а в ряде случаев может обеспечить определение типа опухоли и ее локализацию [41]. Повышенная концентрация двух и более маркеров в сыворотке крови пациента с большей вероятностью свидетельствует о наличии заболевания, поэтому они комплексно применяются в онкологической практике при диагностике и мониторинге (табл.1) [4, 42].

Табл. 1. Различные комбинации онкомаркеров, используемые в клинической практике при диагностике и мониторинге онкологических заболеваний [40].

Опухоли (по локализации) РЭА АФП СА 19-9 СА 125 СА 15-3 р-хгч ПСА (общ., своб.)

Рак прямой и толстой кишки ++ + + +

Рак желудка + ++ + +

Рак поджелудочной железы + ++ + +

РМЖ + + + ++

Рак легких + + +

Опухоли яичников + ++ + ++

Рак эндометрия + +

Рак щитовидной железы +

РПЖ ++

Рак печени -н-

Рак шейки матки + + +

К широко используемым в клинической практике онкомаркерам относятся ПСА, РЭА, СА 15-3 и т.д. Из них наилучшими диагностическими характеристиками обладает ПСА (общая и свободная формы), применяемый для диагностики и мониторинга РПЖ.

1.2.2. Индивидуальные онкомаркеры

1.2.2.1. Простатический специфический антиген

ПСА относится к наиболее эффективным маркерам РПЖ и является общепризнанным онкомаркером, получившим широкое внедрение в клиническую практику в целях диагностики и мониторинга заболевания [43]. Несмотря на интенсивные исследования молекулярных механизмов, приводящих к развитию РПЖ, до сих пор нет ясного понимания причин возникновения заболевания [44, 45]. Впервые информация об АГ, специфичном для ткани нормальной предстательной

железы (ПЖ), появилась в 1970 г. [46]. Несколько позже, в 1979 г. группа исследователей (Wang M. и соавт.) выделили и охарактеризовали этот АГ [47]. В 1980 г. ПСА был определен в сыворотке крови больных РПЖ [48].

ПСА представляет собой небольшой гликопротеин с молекулярной массой около 34 кДа, относится к семейству калликреиновых сериновых протеаз и является химотрипсин-подобной гликопротеазой [49]. Этот белок синтезируется эпителиальными клетками ПЖ, а затем поступает в семенную жидкость, где и проявляет свои протеолитические свойства. В норме концентрация ПСА в сыворотке крови невысокая, тогда как процесс малигнизации сопровождается существенным увеличением уровня ПСА [50], что служит основанием для использования этого маркера в диагностике РПЖ. При поступлении в кровь ПСА связывается с ингибиторами протеаз, в результате чего в сыворотке крови он обнаруживается в различных связанных молекулярных формах, не обладающих специфической ферментативной активностью. В 1991 г. было установлено, что формой, доминирующей в сыворотке крови человека, является комплекс ПСА с al-антихимотрипсином (al-AXT) (70-90%) [51], тогда как на долю минорных комплексов ПСА с другими ингибиторами протеаз (al-антитрипсин (al-AT), ингибитор С-белка и др.) приходится менее 1 % [52]. Помимо этого в сыворотке крови всегда циркулирует не связанная с ингибиторами свободная форма ПСА, которая составляет около 10-30% от общего количества ПСА [43]. На сегодняшний день в клинической практике используются диагностические ИФА-системы для количественного определения в сыворотке крови свободного и общего ПСА.

Общий ПСА представляет собой суммарную фракцию ПСА: свободного ПСА и ПСА, связанного с al-AXT. Концентрация общего ПСА в сыворотке крови здоровых мужчин не превышает 4 нг/мл, однако после 50 лет сывороточная концентрация этого маркера постепенно увеличивается в среднем на 0,04 нг/мл в год [53]. Значительное повышение уровня общего ПСА иногда обнаруживается при доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ), а также при воспалительных заболеваниях ПЖ. Наибольшие трудности в дифференциальной диагностике РПЖ и ДГПЖ возникают в диапазоне концентраций общего ПСА 4-10 нг/мл, в так называемой «серой» зоне, в которую попадает 10-41% больных с ДГПЖ [54]. При РПЖ увеличивается количество связанной фракции ПСА и снижается содержание свободной. Оценка соотношения двух форм ПСА способствует значительному увеличению специфичности ПСА как онкомаркера в дифференциальной диагностике РПЖ и ДГПЖ [55, 56]. В норме у здорового мужчины и при доброкачественных заболеваниях ПЖ соотношение [свободный ПСА]/[общий ПСА] в сыворотке крови выше 15% [55]. Соотношение 2-х форм ПСА ниже 15% свидетельствует о высокой вероятности наличия РПЖ [57].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бражник, Кристина Ивановна, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ferlay, J. Estimates of worldwide burden of cancer in 2008: GLOBOCAN 2008 / J. Ferlay, H. R. Shin, F. Bray, D. Forman, C. Mathers, and D. M. Parkin // Int J Cancer. -2010.-127.-P. 2893-917.

2. Diamandis, E. P. Tumor markers: Physiology, Pathobiology, Technology and Clinical Applications / E. P. Diamandis, H. A. Fritsche, and D. W. Chan; Eds. by E. P. Diamandis, H. A. Fritsche, and D. W. Chan. - USA: AACC Press Inc. - 2002 - P. 546.

3. Sturgeon, C. Practice guidelines for tumor marker use in the clinic / C. Sturgeon // Clin Chem. - 2002. - 48. - P. 1151-59.

4. Maruvada, P. Biomarkers in molecular medicine: cancer detection and diagnosis / P. Maruvada, W. Wang, P. D. Wagner, and S. Srivastava // Biotechniques. - 2005. - 38. -P. 9-15.

5. Cretich, M. Protein and peptide arrays: recent trends and new directions / M. Cretich, F. Damin, G. Pirri, and M. Chiari // Biomol Eng. - 2006. - 23. - P. 77-88.

6. Pregibon, D. C. Multifunctional encoded particles for high-throughput biomolecule analysis / D. C. Pregibon, M. Toner, and P. S. Doyle // Science. - 2007. - 315. - P. 13936.

7. Braeckmans, K. Encoding microcarriers: present and future technologies / K. Braeckmans, S. C. De Smedt, M. Leblans, R. Pauwels, and J. Demeester // Nat Rev Drug Discov. -2002. - 1. - P. 447-56.

8. Petrik, J. Diagnostic applications of microarrays / J. Petrik // Transfus Med. — 2006. — 16. -P. 233-47.

9. Blohm, D. H. New developments in microarray technology / D. H. Blohm and A. Guiseppi-EIie // Curr Opin Biotechnol. - 2001. - 12. - P. 41-7.

10. Gershon, D. Microarray technology: an array of opportunities / D. Gershon // Nature. — 2002.-416.-P. 885-891.

11. Gonzalez-Gonzalez, M. Nanotechniques in proteomics: protein microarrays and novel detection platforms / M. Gonzalez-Gonzalez, R. Jara-Acevedo, S. Matarraz, M. Jara-Acevedo, S. Paradinas, J. M. Sayagues, A. Orfao, and M. Fuentes // Eur J Pharm Sci. -2012.-45.-P. 499-506.

12. Zhi, Z. L. Multianalyte immunoassay with self-assembled addressable microparticle array on a chip / Z. L. Zhi, Y. Murakami, Y. Morita, Q. Hasan, and E. Tamiya // Anal Biochem. - 2003. - 318. - P. 236-43.

13. Nolan, J. P. Suspension array technology: evolution of the flat-array paradigm / J. P. Nolan and L. A. Sklar // Trends Biotechnol. - 2002. - 20. - P. 9-12.

14. Elshal, M. F. Multiplex bead array assays: performance evaluation and comparison of sensitivity to ELISA / M. F. Elshal and J. P. McCoy // Methods. - 2006. - 38. - P. 31723.

15. Sukhanova, A. Fluorescent nanocrystal-encoded microbeads for multiplexed cancer imaging and diagnosis / A. Sukhanova and I. Nabiev // Crit Rev Oncol Hematol. — 2008. -68.-P. 39-59.

16. Czarnik, A. W. Encoding methods for combinatorial chemistry / A. W. Czarnik // Curr Opin Chem Biol. - 1997. - 1. - P. 60-6.

17. Kellar, K. L. Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays / K. L. Kellar and M. A. Iannone // Exp Hematol. - 2002. - 30. - P. 1227-37.

18. Fulton, R. J. Advanced multiplexed analysis with the FlowMetrix system / R. J. Fulton, R. L. McDade, P. L. Smith, L. J. Kienker, and J. R. Kettman, Jr. // Clin Chem. - 1997. -43.-P. 1749-56.

19. Sun, K. Establishment of multiplexed, microsphere-based flow cytometric assay for multiple human tumor markers / K. Sun, Q. Wang, X. H. Huang, M. C. Zhen, W. Li, and L. J. Zhang // Acta Pharmacol Sin. - 2007. - 28. - P. 2011-8.

20. Resch-Genger, U. Quantum dots versus organic dyes as fluorescent labels / U. Resch-Genger, M. Grabolle, S. Cavaliere-Jaricot, R. Nitschke, and T. Nann // Nat Methods. -2008.-5.-P. 763-75.

21. Nabiev, I. Fluorescent colloidal particles as a detection tools in biotechnology systems, in Colloidal nanoparticles in Biotechnology. / I. Nabiev, A. Sukhanova, M. Artemyev, and V. Oleinikov; Eds. by A. Elissari. - London-Singapore-NY: Wiley. - 2008 - P. 133-68.

22. Medintz, I. L. Quantum dot bioconjugates for imaging, labelling and sensing / I. L. Medintz, H. T. Uyeda, E. R. Goldman, and H. Mattoussi // Nat Mater. - 2005. - 4. - P. 435-46.

23. Shi, L. Luminescent quantum dots fluorescence resonance energy transfer-based probes for enzymatic activity and enzyme inhibitors / L. Shi, N. Rosenzweig, and Z. Rosenzweig // Anal Chem. - 2007. - 79. - P. 208-14.

24. Sukhanova, A. Nanocrystal-encoded fluorescent microbeads for proteomics: antibody profiling and diagnostics of autoimmune diseases / A. Sukhanova, A. S. Susha, A. Bek, S. Mayilo, A. L. Rogach, J. Feldmann, V. Oleinikov, B. Reveil, B. Donvito, J. H. Cohen, and I. Nabiev // Nano Lett. - 2007. - 7. - P. 2322-7.

25. Varadhachary, G. R. Diagnostic strategies for unknown primary cancer / G. R. Varadhachary, J. L. Abbruzzese, and R. Lenzi // Cancer. - 2004. - 100. - P. 1776-85.

26. Brinton, L. T. Metastatic biomarker discovery through proteomics / L. T. Brinton, T. A. Brentnall, J. A. Smith, and K. A. Kelly // Cancer Genomics Proteomics. - 2012. - 9. - P. 345-55.

27. Brena, R. M. Quantitative assessment of DNA methylation: Potential applications for disease diagnosis, classification, and prognosis in clinical settings / R. M. Brena, T. H. Huang, and C. Plass // J Mol Med (Berl). - 2006. - 84. - P. 365-77.

28. Lee, J. S. A comparative study of Korean with Caucasian breast cancer reveals frequency of methylation in multiple genes correlates with breast cancer in young, ER, PR-negative breast cancer in Korean women / J. S. Lee, P. K. Lo, M. J. Fackler, P. Argani, Z. Zhang, E. Garrett-Meyer, and S. Sukumar // Cancer Biol Ther. - 2007. - 6. - P. 1114-20.

29. Resnick, K. E. The detection of differentially expressed microRNAs from the serum of ovarian cancer patients using a novel real-time PCR platform /K. E. Resnick, H. Alder, J. P. Hagan, D. L. Richardson, C. M. Croce, and D. E. Cohn // Gynecol Oncol. — 2009. -112.-P. 55-9.

30. Jacob, F. Serum antiglycan antibody detection of nonmucinous ovarian cancers by using a printed glycan array / F. Jacob, D. R. Goldstein, N. V. Bovin, T. Pochechueva, M. Spengler, R. CadufT, D. Fink, M. I. Vuskovic, M. E. Huflejt, and V. HeinzelmannSchwarz // Int J Cancer. - 2012. - 130. - P. 138-46.

31. Anderson, K. S. Multiplexed detection of antibodies using programmable bead arrays / K. S. Anderson // Methods Mol Biol. - 2011. - 723. - P. 227-38.

32. Bei, R. A common repertoire of autoantibodies is shared by cancer and autoimmune disease patients: Inflammation in their induction and impact on tumor growth /R. Bei, L. Masuelli, C. Palumbo, M. Modesti, and A. Modesti // Cancer Lett. - 2009. - 281. - P. 823.

33. Chapman, C. Autoantibodies in breast cancer: their use as an aid to early diagnosis / C. Chapman, A. Murray, J. Chakrabarti, A. Thorpe, C. Woolston, U. Sahin, A. Barnes, and J. Robertson // Ann Oncol. - 2007. - 18. - P. 868-73.

34. Desmetz, C. Identifying autoantibody signatures in cancer: a promising challenge / C. Desmetz, T. Maudelonde, A. Mange, and J. Solassol // Expert Rev Proteomics. — 2009. -6.-P. 377-86.

35. Cristofanilli, M. Circulating tumor cells, disease progression, and survival in metastatic breast cancer / M. Cristofanilli, G. T. Budd, M. J. Ellis, A. Stopeck, J. Matera, M. C.

Miller, J. M. Reuben, G. V. Doyle, W. J. Allard, L. W. Terstappen, and D. F. Hayes // N Engl J Med. - 2004. - 351. - P. 781 -91.

36. Pantel, K. Circulating tumour cells in cancer patients: challenges and perspectives / K. Pantel and C. Alix-Panabieres // Trends Mol Med. - 2010. - 16. - P. 398-406.

37. Cramer, D. W. Ovarian cancer biomarker performance in prostate, lung, colorectal, and ovarian cancer screening trial specimens / D. W. Cramer, R. C. Bast, Jr., C. D. Berg, E. P. Diamandis, A. K. Godwin, P. Hartge, A. E. Lokshin, К. H. Lu, M. W. Mcintosh, G. Мог, С. Patriotis, P. F. Pinsky, M. D. Thornquist, N. Scholler, S. J. Skates, P. M. Sluss, S. Srivastava, D. C. Ward, Z. Zhang, C. S. Zhu, and N. Urban // Cancer Prev Res (Phila). -2011.-4.-P. 365-74.

38. Алексеева, M. Л. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования (обзор литератутры) / М. JI. Алексеева, Е. В. Гусарова, С. М. Муллабаева и Т. С. Понкратова // Проблемы репродукции. — 2005. -З.-С. 65-79.

39. Ludwig, J. A. Biomarkers in cancer staging, prognosis and treatment selection / J. A. Ludwig and J. N. Weinstein // Nat Rev Cancer. - 2005. - 5. - P. 845-56.

40. Белохвостов, А. С. Онкомаркеры. Молекулярно-генетические, иммунохимические, биохимические анализы. Пособие для врачей / А. С. Белохвостов и А. Г. Румянцев. - Москва: МАКС Пресс, 2003.

41. Nakamura, R. М. Cancer Diagnostics: Current and Future Trends / R. M. Nakamura, W. W. Grody, J. T. Wu, and R. B. Nagle; Eds. by R. M. Nakamura, W. W. Grody, J. T. Wu, and R. B. Nagle - USA: Humana Press Inc. - 2004 - P. 508.

42. Wright, J. L. Newer potential biomarkers in prostate cancer / J. L. Wright and P. H. Lange // Rev Urol. - 2007. - 9. - P. 207-13.

43. Balk, S. P. Biology of prostate-specific antigen / S. P. Balk, Y. J. Ко, and G. J. Bubley // J Clin Oncol.-2003. -21. - P. 383-91.

44. Schulz, W. A. Molecular biology of prostate cancer / W. A. Schulz, M. Burchardt, and M. V. Cronauer // Mol Hum Reprod. - 2003. - 9. - P. 437-48.

45. Mimeault, M. Recent advances on multiple tumorigenic cascades involved in prostatic cancer progression and targeting therapies / M. Mimeault and S. K. Batra // Carcinogenesis. - 2006. - 27. - P. 1-22.

46. Ablin, R. J. Precipitating antigens of the normal human prostate / R. J. Ablin, W. A. Soanes, P. Bronson, and E. Witebsky // J Reprod Fertil. - 1970. - 22. - P. 573-4.

47. Wang, M. C. Purification of a human prostate specific antigen / M. C. Wang, L. A. Valenzuela, G. P. Murphy, and Т. M. Chu // Invest Urol. - 1979. - 17. - P. 159-63.

48. Papsidero, L. D. A prostate antigen in sera of prostatic cancer patients /L. D. Papsidero, M. C. Wang, L. A. Valenzuela, G. P. Murphy, and Т. M. Chu // Cancer Res. - 1980. -40.-P. 2428-32.

49. Yeung, F. Regions of prostate-specific antigen (PSA) promoter confer androgen-independent expression of PSA in prostate cancer cells / F. Yeung, X. Li, J. Ellett, J. Trapman, C. Kao, and L. W. Chung // J Biol Chem. - 2000. - 275. - P. 40846-55.

50. Bostwick, D. G.. Prostate-specific antigen. Current role in diagnostic pathology of prostate cancer/D. G. Bostwick // Am J Clin Pathol. - 1994. - 102. - S31-7.

51. Lilja, H. Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with alpha 1-antichymotrypsin /Н. Lilja, A. Christensson, U. Dahlen, M. T. Matikainen, O. Nilsson, K. Pettersson, and T. Lovgren // Clin Chem. - 1991. - 37. - P. 1618-25.

52. Zhang, W. M. Characterization and immunological determination of the complex between prostate-specific antigen and alpha2-macroglobulin / W. M. Zhang, P. Finne, J. Leinonen, S. Vesalainen, S. Nordling, S. Rannikko, and U. H. Stenman // Clin Chem. -1998.-44.-P. 2471-9.

53. Gretzer, M. B. PSA markers in prostate cancer detection /М. B. Gretzer and A. W. Partin // Urol Clin North Am. - 2003. - 30. - P. 677-86.

54. Кушлинский, H. E. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в онкологической клинике / Н. Е. Кушлинский // Клин лаб диагн. - 1999. - 3 - С. 25-32.

55. Catalona, W. J. Use of the percentage of free prostate-specific antigen to enhance differentiation of prostate cancer from benign prostatic disease: a prospective multicenter clinical trial / W. J. Catalona, A. W. Partin, К. M. Slawin, M. K. Brawer, R. C. Flanigan, A. Patel, J. P. Richie, J. B. deKernion, P. C. Walsh, P. T. Scardino, P. H. Lange, E. N. Subong, R. E. Parson, G. H. Gasior, K. G. Loveland, and P. C. Southwick // JAMA. -1998.-279.-P. 1542-7.

56. Slev, P. R. Intermethod differences in results for total PSA, free PSA, and percentage of free PSA /Р. R. Slev, S. L. La'ulu, and W. L. Roberts // Am J Clin Pathol. - 2008. - 129. -P. 952-8.

57. Uzzo, R. G. Free prostate-specific antigen improves prostate cancer detection in a high-risk population of men with a normal total PSA and digitalrectal examination / R. G. Uzzo, W. H. Pinover, E. M. Horwitz, A. Parlanti, S. Mazzoni, S. Raysor, I. Mirchandani, R. E. Greenberg, A. Pollack, G. E. Hanks, and D. Watkins-Bruner // Urology. - 2003. -61.-P. 754-9.

58. Gonzalgo, M. L. Update on PSA testing / M. L. Gonzalgo and H. B. Carter // J Natl Compr Cane Netw. - 2007. - 5. - P. 737-42.

59. Eekers, D. B. Why determine only the total prostate-specific antigen, if the free-to-total ratio contains the information? / D. B. Eekers, A. Laschet, M. de Groot, E. Roelofs, A. Kester, K. Delaere, P. Lambin, F. van Gils, M. Nap, and J. ten Kate // Ann Clin Biochem. -2008.-45.-P. 270-4.

60. Thomas, P. The structure, metabolism and function of the carcinoembryonic antigen gene family / P. Thomas, C. A. Toth, K. S. Saini, J. M. Jessup, and G. Steele, Jr. // Biochim Biophys Acta. - 1990. - 1032. - P. 177-89.

61. Thompson, J. A. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives / J. A. Thompson, F. Grunert, and W. Zimmermann // J Clin Lab Anal. — 1991.-5.-P. 344-66.

62. Gold, P. Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system /Р. Gold and S. O. Freedman // J Exp Med. - 1965. - 122. - P. 467-81.

63. Boucher, D. Studies on the control of gene expression of the carcinoembryonic antigen family in human tissue/D. Boucher, D. Cournoyer, C. P. Stanners, and A. Fuks // Cancer Res. - 1989. - 49. - P. 847-52.

64. Thomson, D. M. The radioimmunoassay of circulating carcinoembryonic antigen of the human digestive system / D. M. Thomson, J. Krupey, S. O. Freedman, and P. Gold // Proc Natl Acad Sci USA.- 1969. - 64. - P. 161-7.

65. Huerta, S. Recent advances in the molecular diagnosis and prognosis of colorectal cancer / S. Huerta // Expert Rev Mol Diagn. - 2008. - 8. - P. 277-88.

66. Harris, L. American Society of Clinical Oncology 2007 update of recommendations for the use of tumor markers in breast cancer / L. Harris, H. Fritsche, R. Mennel, L. Norton, P. Ravdin, S. Taube, M. R. Somerfield, D. F. Hayes, and R. C. Bast, Jr. // J Clin Oncol. -2007.-25.-P. 5287-312.

67. Скворцов, С. В. Опухолевые маркеры в оценке степени распространенности опухолевого процесса при злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта / С. В. Скворцов, И. М. Храмченко и Н. Е. Кушлинский // Клин лаб диагн. - 1999. - 9. - С. 26.

68. Engwegen, J. Y. Detection of Colorectal Cancer by Serum and Tissue Protein Profiling: A Prospective Study in a Population at Risk / J. Y. Engwegen, A. C. Depla, M. E. Smits, A. Cats, H. Tuynman, H. A. van Heukelem, P. Snel, W. Meuleman, L. F. Wessels, J. H. Schellens, and J. H. Beijnen // Biomark Insights. - 2008. - 3. - P. 375-85.

69. Sajid, К. M. Carcinoembryonic antigen (CEA) levels in hookah smokers, cigarette smokers and non-smokers /К. M. Sajid, R. Parveen, S. Durr e, K. Chaouachi, A. Naeem, R. Mahmood, and R. Shamim // J Рак Med Assoc. - 2007. - 57. - P. 595-9.

70. Duffy, M. J. CA 15-3: uses and limitation as a biomarker for breast cancer / M. J. Duffy, D. Evoy, and E. W. McDermott // Clin Chim Acta. - 2010. - 411. - P. 1869-74.

71. Colomer, R. Circulating С A 15-3 antigen levels in non-mammary malignancies / R. Colomer, A. Ruibal, J. Genolla, and L. Salvador // Br J Cancer. - 1989. - 59. - P. 283-6.

72. Duffy, M. J. CA 15-3: a prognostic marker in breast cancer /М. J. Duffy, S. Shering, F. Sherry, E. McDermott, and N. O'Higgins // Int J Biol Markers. - 2000. - 15. - P. 330-3.

73. Soletormos, G. Monitoring different stages of breast cancer using tumour markers CA 15-3, CEA and TPA / G. Soletormos, D. Nielsen, V. Schioler, H. Mouridsen, and P. Dombernowsky // Eur J Cancer. - 2004. - 40. - P. 481-6.

74. Jager, W. Breast cancer and clinical utility of CA 15-3 and CEA / W. Jager, S. Kramer, V. Palapelas, and L. Norbert // Scand J Clin Lab Invest Suppl. - 1995. - 221. - P. 87-92.

75. Nicolini, A. Intensive post-operative follow-up of breast cancer patients with tumour markers: CEA, TPA or CA15.3 vs MCA and MCA-CA15.3 vs CEA-TPA-CA 15.3 panel in the early detection of distant metastases / A. Nicolini, G. Tartarelli, A. Carpi, M. R. Metelli, P. Ferrari, L. Anselmi, M. Conte, P. Berti, and P. Miccoli // BMC Cancer. — 2006.-6.-P. 269.

76. Bast, R. C. Jr. Reactivity of a monoclonal antibody with human ovarian carcinoma /R. C. Bast, Jr., M. Feeney, H. Lazarus, L. M. Nadler, R. B. Colvin, and R. C. Knapp // J Clin Invest.-1981.-68.-P. 1331-7.

77. Grover, S. Factors influencing serum CA 125 levels in normal women / S. Grover, M. A. Quinn, P. Weideman, and H. Koh // Obstet Gynecol. - 1992. - 79. - P. 511-4.

78. Сергеева, H. С. Использование опухолеассоциированных маркёров для диагностики и контроля за эффективностью терапии у больных с распространенным раком яичников. Пособие для врачей / Н. С. Сергеева, Н. В. Ермошина и Мишунина М. П. и. др.- Москва: МНИОИ им. П.А. Герцена, 2002 - С. 3-6.

79. Suh, К. S. Ovarian cancer biomarkers for molecular biosensors and translational medicine /К. S. Suh, S. W. Park, A. Castro, H. Patel, P. Blake, M. Liang, and A. Goy // Expert Rev Mol Diagn. - 2010. - 10. - P. 1069-83.

80. Gocze, P. Ovarian carcinoma antigen (CA 125) and ovarian cancer (clinical follow-up and prognostic studies) /Р. Gocze and H. Vahrson // Orv Hetil. - 1993. - 134. - P. 915-8.

81. Алексеева, М. Л. Опухолевые маркеры в гинекологии / М. Л. Алексеева, Н. Д. Фанченко, Е.А. Новиков и Г. Р. Маргиани // Акушерство и гинекология. — 1995. — 5. -С. 35-7.

82. Fritsche, Н. А. СА 125 in ovarian cancer: advances and controversy / H. A. Fritsche and R. C. Bast // Clin Chem. - 1998. - 44. - P. 1379-80.

83. Michalet, X. Quantum dots for live cells, in vivo imaging, and diagnostics /X. Michalet, F. F. Pinaud, L. A. Bentolila, J. M. Tsay, S. Doose, J. J. Li, G. Sundaresan, A. M. Wu, S. S. Gambhir, and S. Weiss // Science. - 2005. - 307. - P. 538-44.

84. Waggoner, A. Fluorescent labels for proteomics and genomics / A. Waggoner // Curr Opin Chem Biol. - 2006. - 10. - P. 62-6.

85. Zhang, J. Creating new fluorescent probes for cell biology / J. Zhang, R. E. Campbell, A. Y. Ting, and R. Y. Tsien // Nat Rev Mol Cell Biol. - 2002. - 3. - P. 906-18.

86. Murphy, C. J. Optical sensing with quantum dots / C. J. Murphy // Anal Chem. - 2002. -74. — 520A-526A.

87. Sukhanova, A. Biocompatible fluorescent nanocrystals for immunolabeling of membrane proteins and cells / A. Sukhanova, J. Devy, L. Venteo, H. Kaplan, M. Artemyev, V. Oleinikov, D. Klinov, M. Pluot, J. H. Cohen, and I. Nabiev // Anal Biochem. - 2004. -324.-P. 60-7.

88. Бражник, К. И. Новые направления в исследовании и ранней диагностике рака с применением детекционных систем на основе флуоресцентных нанокристаллов / К. И. Бражник, М. А. Барышникова, 3. А. Соколова, И. Р. Набиев и А. В. Суханова // Рос Биотер Журнал. - 2013. - 12. - С. 11-24.

89. Zipfel, W. R. Nonlinear magic: multiphoton microscopy in the biosciences / W. R. Zipfel, R. M. Williams, and W. W. Webb // Nat Biotechnol. - 2003. - 21. - P. 1369-77.

90. Kim, S. Near-infrared fluorescent type II quantum dots for sentinel lymph node mapping / S. Kim, Y. T. Lim, E. G. Soltesz, A. M. De Grand, J. Lee, A. Nakayama, J. A. Parker, T. Mihaljevic, R G. Laurence, D. M. Dor, L. H. Cohn, M. G. Bawendi, and J. V. Frangioni // Nat Biotechnol. - 2004. - 22. - P. 93-7.

91. Larson, D. R. Water-soluble quantum dots for multiphoton fluorescence imaging in vivo / D. R. Larson, W. R. Zipfel, R. M. Williams, S. W. Clark, M. P. Bruchez, F. W. Wise, and W. W. Webb // Science. - 2003. - 300. - P. 1434-6.

92. Tkaczyk, E. R. In Vivo Monitoring of Multiple Circulating Cell Populations Using Two-photon Flow Cytometry /Е. R. Tkaczyk, C. F. Zhong, J. Y. Ye, А. Мус, Т. Thomas, Z. Cao, R. Duran-Struuck, К. E. Luker, G. D. Luker, Т. B. Norris, and J. R Baker // Opt Commun. - 2008. - 281. - P. 888-94.

93. Jares-Erijman, E. A. FRET imaging / E. A. Jares-Erijman and T. M. Jovin // Nat Biotechnol. - 2003. - 21. - P. 1387-95.

94. Kim, G. B. Analysis of protease activity using quantum dots and resonance energy transfer/G. B. Kim and Y. P. Kim // Theranostics. - 2012. - 2. - P. 127-38.

95. Medintz, I. L. Self-assembled nanoscale biosensors based on quantum dot FRET donors / I. L. Medintz, A. R. Clapp, H. Mattoussi, E. R. Goldman, B. Fisher, and J. M. Mauro // Nat Mater. - 2003. - 2. - P. 630-38.

96. Sukhanova, A. Oriented conjugates of single-domain antibodies and quantum dots: toward a new generation of ultrasmall diagnostic nanoprobes / A. Sukhanova, K. Even-Desrumeaux, A. Kisserli, T. Tabary, B. Reveil, J. M. Millot, P. Chames, D. Baty, M. Artemyev, V. Oleinikov, M. Pluot, J. H. Cohen, and I. Nabiev // Nanomedicine. — 2012. -8.-P. 516-25.

97. Liu, W. Compact biocompatible quantum dots functionalized for cellular imaging / W. Liu, M. Howarth, A. B. Greytak, Y. Zheng, D. G. Nocera, A. Y. Ting, and M. G. Bawendi // J Am Chem Soc. - 2008. - 130. - P. 1274-84.

98. Walling, M. A. Quantum dots for live cell and in vivo imaging / M. A. Walling, J. A. Novak, and J. R. Shepard // Int J Mol Sci. - 2009. - 10. - P. 441 -91.

99. Delehanty, J. B. Delivering quantum dots into cells: strategies, progress and remaining issues / J. B. Delehanty, H. Mattoussi, and I. L. Medintz // Anal Bioanal Chem. — 2009. — 393.-P. 1091-105.

100. Wu, X. Immunofluorescent labeling of cancer marker Her2 and other cellular targets with semiconductor quantum dots / X. Wu, H. Liu, J. Liu, K. N. Haley, J. A. Treadway, J. P. Larson, N. Ge, F. Peale, and M. P. Bruchez //Nat Biotechnol. - 2003. - 21. - P. 41-6.

101. Sweeney, E. Quantitative multiplexed quantum dot immunohistochemistry / E. Sweeney, T. H. Ward, N. Gray, C. Womack, G. Jayson, A. Hughes, C. Dive, and R. Byers // Biochem Biophys Res Commun. - 2008. - 374. - P. 181-6.

102. Rakovich, T. Y. Highly sensitive single domain antibody-quantum dot conjugates for detection of HER2 biomarker in lung and breast cancer cells / T. Y. Rakovich, O. K. Mahfoud, B. M. Mohamed, A. Prina-Mello, K. Crosbie-Staunton, T. Van Den Broeck, L. De Kimpe, A. Sukhanova, D. Baty, A. Rakovich, S. A. Maier, F. Alves, F. Nauwelaers, I. Nabiev, P. Chames, and Y. Volkov // ACS Nano. - 2014. - 8. - P. 5682-95.

103. Sukhanova, A. Highly stable fluorescent nanocrystals as a novel class of labels for immunohistochemical analysis of paraffin-embedded tissue sections / A. Sukhanova, L. Venteo, J. Devy, M. Artemyev, V. Oleinikov, M. Pluot, and I. Nabiev // Lab Invest. — 2002.-82.-P. 1259-61.

t

104. Bruchez, M. Jr. Semiconductor nanocrystals as fluorescent biological labels / M. Bruchez, Jr., M. Moronne, P. Gin, S. Weiss, and A. P. Alivisatos // Science. — 1998. -281.-P. 2013-6.

105. Kingeter, L. M. Expanding the multicolor capabilities of basic confocal microscopes by employing red and near-infrared quantum dot conjugates / L. M. Kingeter and B. C. Schaefer // BMC Biotechnol. - 2009. - 9. - P. 49.

106. Ness, J. M. Combined tyramide signal amplification and quantum dots for sensitive and photostable immunofluorescence detection / J. M. Ness, R. S. Akhtar, C. B. Latham, and K. A. Roth // J Histochem Cytochem. - 2003. - 51. - P. 981-7.

107. Xing, Y. Molecular profiling of single cancer cells and clinical tissue specimens with semiconductor quantum dots / Y. Xing, A. M. Smith, A. Agrawal, G. Ruan, and S. Nie // Int J Nanomedicine. - 2006. - 1. - P. 473-81.

108. Bodo, J. Quantitative in situ detection of phosphoproteins in fixed tissues using quantum dot technology / J. Bodo, L. Durkin, and E. D. Hsi // J Histochem Cytochem. - 2009. — 57.-P. 701-8.

109. Caldwell, M. L. Simple quantification of multiplexed quantum dot staining in clinical tissue samples /M. L. Caldwell, R. A. Moffitt, J. Liu, R. M. Parry, Y. Sharma, and M. D. Wang // Conf Proc IEEE Eng Med Biol Soc. - 2008. - 2008. - P. 1907-10.

110. Chen, H. Comparison of quantum dots immunofluorescence histochemistry and conventional immunohistochemistry for the detection of caveolin-1 and PCNA in the lung cancer tissue microarray /H. Chen, J. Xue, Y. Zhang, X. Zhu, J. Gao, and B. Yu // J Mol Histol. - 2009. - 40. - P. 261-8.

111. Chen, C. Quantum-dot-based immunofluorescent imaging of HER2 and ERprovides new insights into breast cancer heterogeneity / C. Chen, J. Peng, H. S. Xia, Q. S. Wu, L. B. Zeng, H. Xu, H. Tang, Z. L. Zhang, X. Zhu, D. W. Pang, and Y. Li // Nanotechnol. -2010.-21.-P. 0951011-6.

112. Clarke, S. Covalent monofunctionalization of peptide-coated quantum dots for single-molecule assays / S. Clarke, F. Pinaud, O. Beutel, C. You, J. Piehler, and M. Dahan // Nano Lett. -2010. - 10. - P. 2147-54.

113. Xing, Y. Bioconjugated quantum dots for multiplexed and quantitative immunohistochemistry / Y. Xing, Q. Chaudry, C. Shen, K. Y. Kong, H. E. Zhau, L. W. Chung, J. A. Petros, R. M. O'Regan, M. V. Yezhelyev, J. W. Simons, M. D. Wang, and S. Nie // Nat Protoc. - 2007. - 2. - P. 1152-65.

114. Smith, A. M. Engineering luminescent quantum dots for in vivo molecular and cellular imaging / A. M. Smith, G. Ruan, M. N. Rhyner, and S. Nie // Ann Biomed Eng. - 2006. -34.-P. 3-14.

115. Nie, S. Nanotechnology applications in cancer / S. Nie, Y. Xing, G. J. Kim, and J. W. Simons // Annu Rev Biomed Eng. - 2007. - 9. - P. 257-88.

116. Mahmoud, W. Advanced procedures for labeling of antibodies with quantum dots / W. Mahmoud, G. Rousserie, B. Reveil, T. Tabary, J. M. Millot, M. Artemyev, V. A. Oleinikov, J. H. Cohen, I. Nabiev, and A. Sukhanova // Anal Biochem. -2011.-416. -P. 180-5.

117. Sukhanova, A. Engineering of ultra-small diagnostic nanoprobes through oriented conjugation of single-domain antibodies and quantum dots/ A. Sukhanova, K. Even-Desrumeaux, P. Chames, D. Baty, M. Artemyev, V. Oleinikov, and I. Nabiev.// Nature Protocols / Protocols Exchange, 2012. DOI: 10.1038/protex.2012.042.

118. Saerens, D. Single domain antibodies derived from dromedary lymph node and peripheral blood lymphocytes sensing conformational variants of prostate-specific antigen / D. Saerens, J. Kinne, E. Bosmans, U. Wernery, S. Muyldermans, and K. Conrath // J Biol Chem. - 2004. - 279. - P. 51965-72.

119. Behar, G. Llama single-domain antibodies directed against nonconventional epitopes of tumor-associated carcinoembryonic antigen absent from nonspecific cross-reacting antigen / G. Behar, P. Chames, I. Teulon, A. Cornillon, F. Alshoukr, F. Roquet, M. Pugniere, J. L. Teillaud, A. Gruaz-Guyon, A. Pelegrin, and D. Baty // FEBS J. - 2009. -276.-P. 3881-93.

120. Perruchini, C. Llama VHH antibody fragments against GFAP: better diffusion in fixed tissues than classical monoclonal antibodies / C. Perruchini, F. Pecorari, J. P. Bourgeois, C. Duyckaerts, F. Rougeon, and P. Lafaye // Acta Neuropathol. - 2009. - 118. - P. 68595.

121. Perfetto, S. P. Seventeen-colour flow cytometry: unravelling the immune system / S. P. Perfetto, P. K. Chattopadhyay, and M. Roederer // Nat Rev Immunol. - 2004. - 4. - P. 648-55.

122. Chattopadhyay, P. K. Quantum dot semiconductor nanocrystals for immunophenotyping by polychromatic flow cytometry / P. K. Chattopadhyay, D. A. Price, T. F. Harper, M. R. Betts, J. Yu, E. Gostick, S. P. Perfetto, P. Goepfert, R A. Koup, S. C. De Rosa, M. P. Bruchez, and M. Roederer // Nat Med. - 2006. - 12. - P. 972-7.

123. Chattopadhyay, P. K. The use of quantum dot nanocrystals in multicolor flow cytometry / P. K. Chattopadhyay, S. P. Perfetto, J. Yu, and M. Roederer // Wiley Interdiscip Rev Nanomed Nanobiotechnol. - 2010. - 2. - P. 334-48.

124. So, M. K. Self-illuminating quantum dot conjugates for in vivo imaging / M. K. So, C. Xu, A. M. Loening, S. S. Gambhir, and J. Rao // Nat Biotechnol. - 2006. - 24. - P. 33943.

125. Yao, H. Quantum dot/bioluminescence resonance energy transfer based highly sensitive detection ofproteases/H. Yao, Y. Zhang, F. Xiao, Z. Xia, and J. Rao // Angew Chem Int Ed Engl. - 2007. - 46. - P. 4346-9.

126. Gill, R. Probing biocatalytic transformations with CdSe-ZnS QDs /R. Gill, R. Freeman, J. P. Xu, I. Willner, S. Winograd, I. Shweky, and U. Banin // J Am Chem Soc. - 2006. -128.-P. 15376-7.

127. Goldman, E. R. A hybrid quantum dot-antibody fragment fluorescence resonance energy transfer-based TNT sensor/E. R. Goldman, I. L. Medintz, J. L. Whitley, A. Hayhurst, A. R. Clapp, H. T. Uyeda, J. R. Deschamps, M. E. Lassman, and H. Mattoussi // J Am Chem Soc. - 2005. - 127. - P. 6744-51.

128. Ballou, B. Sentinel lymph node imaging using quantum dots in mouse tumor models /B. Ballou, L. A. Ernst, S. Andreko, T. Harper, J. A. Fitzpatrick, A. S. Waggoner, and M. P. Bruchez // Bioconjug Chem. - 2007. - 18. - P. 389-96.

129. Konig, K. Multiphoton microscopy in life sciences / K. Konig // J Microsc. — 2000. -200.-P. 83-104.

130. Soltesz, E. G. Intraoperative sentinel lymph node mapping of the lung using near-infrared fluorescent quantum dots / E. G. Soltesz, S. Kim, R. G. Laurence, A. M. DeGrand, C. P. Parungo, D. M. Dor, L. H. Cohn, M. G. Bawendi, J. V. Frangioni, and T. Mihaljevic // Ann Thorac Surg. - 2005. - 79. - P. 269-77.

131. Parungo, C. P. Intraoperative identification of esophageal sentinel lymph nodes with near-infrared fluorescence imaging/C. P. Parungo, S. Ohnishi, S. W. Kim, S. Kim, R. G. Laurence, E. G. Soltesz, F. Y. Chen, Y. L. Colson, L. H. Cohn, M. G. Bawendi, and J. V. Frangioni // J Thorac Cardiovasc Surg. - 2005. - 129. - P. 844-50.

132. Voura, E. B. Tracking metastatic tumor cell extravasation with quantum dot nanocrystals and fluorescence emission-scanning microscopy / E. B. Voura, J. K. Jaiswal, H. Mattoussi, and S. M. Simon // Nat Med. - 2004. - 10. - P. 993-8.

133. Rosenthal, S. J. Biocompatible quantum dots for biological applications /S. J. Rosenthal, J. C. Chang, O. Kovtun, J. R. McBride, and I. D. Tomlinson // Chem Biol. - 2011. - 18. -P. 10-24.

134. Obonyo, O. Quantum dots synthesis and biological applications as imaging and drug delivery systems / O. Obonyo, E. Fisher, M. Edwards, and D. Douroumis // Crit Rev Biotechnol. - 2010. - 30. - P. 283-301.

135. Jamieson, T. Biological applications of quantum dots / T. Jamieson, R. Bakhshi, D. Petrova, R. Pocock, M. Imani, and A. M. Seifalian // Biomaterials. - 2007. - 28. - P. 4717-32.

136. Akinfieva, O. New directions in quantum dot-based cytometry detection of cancer serum markers and tumor cells / O. Akinfieva, I. Nabiev, and A. Sukhanova // Crit Rev Oncol Hematol. — 2012. — 86. — P. 1-14.

137. Wilson, R. A simple method for preparing spectrally encoded magnetic beads for multiplexed detection / R. Wilson, D. G. Spiller, I. A. Prior, K. J. Veltkamp, and A. Hutchinson // ACS Nano. - 2007. - 1. - P. 487-93.

138. Han, M. Quantum-dot-tagged microbeads for multiplexed optical coding of biomolecules /M. Han, X. Gao, J. Z. Su, and S. Nie // Nat Biotechnol. - 2001. - 19. - P. 631-5.

139. Long, Y. Multiplex immunodetection of tumor markers with a suspension array built upon core-shell structured functional fluorescence-encoded microspheres / Y. Long, Z. Zhang, X. Yan, J. Xing, K. Zhang, J. Huang, J. Zheng, and W. Li // Anal Chim Acta. -2010.-665.-P. 63-8.

140. Ferguson, J. A. High-density fiber-optic DNA random microsphere array / J. A. Ferguson, F. J. Steemers, and D. R. Walt // Anal Chem. - 2000. - 72. - P. 5618-24.

141. Wang, Y. Evaluation of a method for the simultaneous detection of multiple tumor markers using a multiplex suspension bead array / Y. Wang, F. Fang, C. Shi, X. Zhang, L. Liu, J. Li, X. Zhou, J. Yao, and X. Kang // Clin Biochem. - 2012. - 45. - P. 1394-8.

142. Xie, C. Development of simultaneous detection of total prostate-specific antigen (tPSA) and free PSA with rapid bead-based immunoassay / C. Xie and G. Wang // J Clin Lab Anal. - 2011. - 25. - P. 37-42.

143. Kellar, K. L. Multiplexed microsphere-based flow cytometric immunoassays for human cytokines / K. L. Kellar and J. P. Douglass // J Immunol Methods. - 2003. - 279. - P. 277-85.

144. Lukacs, Z. Simultaneous determination of HIV antibodies, hepatitis C antibodies, and hepatitis B antigens in dried blood spots—a feasibility study using a multi-analyte immunoassay / Z. Lukacs, A. Dietrich, R. Ganschow, A. Kohlschutter, and R. Kruithof // Clin Chem Lab Med. - 2005. - 43. - P. 141-5.

145. Hurley, J. D. A simple, bead-based approach for multi-SNP molecular haplotyping / J. D. Hurley, L. J. Engle, J. T. Davis, A. M. Welsh, and J. E. Landers // Nucleic Acids Res. -2004. — 32.-el86.

146. Bellisario, R. Simultaneous measurement of thyroxine and thyrotropin from newborn dried blood-spot specimens using a multiplexed fluorescent microsphere immunoassay / R. Bellisario, R. J. Colinas, and K. A. Pass // Clin Chem. - 2000. - 46. - P. 1422-4.

147. Whitehead, G. S. Allergen-induced airway disease is mouse strain dependent / G. S. Whitehead, J. K. Walker, K. G. Berman, W. M. Foster, and D. A. Schwartz // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol. - 2003. - 285. - L32-42.

148. Yan, X. Multiplexed flow cytometric immunoassay for influenza virus detection and differentiation /X. Yan, W. Zhong, A. Tang, E. G. Schielke, W. Hang, and J. P. Nolan // Anal Chem. - 2005. - 77. - P. 7673-8.

149. Gao, Y. Quantum-dot-encoded microbeads for multiplexed genetic detection of non-amplified DNA samples / Y. Gao, W. L. Stanford, and W. C. Chan // Small. - 2011. - 7. -P. 137-46.

150. Stsiapura, V. Functionalized nanocrystal-tagged fluorescent polymer beads: synthesis, physicochemical characterization, and immunolabeling application / V. Stsiapura, A. Sukhanova, M. Artemyev, M. Pluot, J. H. Cohen, A. V. Baranov, V. Oleinikov, and I. Nabiev // Anal Biochem. - 2004. - 334. - P. 257-65.

151. Joumaa, N. Synthesis of quantum dot-tagged submicrometer polystyrene particles by miniemulsion polymerization / N. Joumaa, M. Lansalot, A. Theretz, A. Elaissari, A. Sukhanova, M. Artemyev, I. Nabiev, and J. H. Cohen // Langmuir. - 2006. — 22. — P. 1810-6.

152. Sheng, W. In-situ encapsulation of quantum dots into polymer microspheres / W. Sheng, S. Kim, J. Lee, S. W. Kim, K. Jensen, and M. G. Bawendi // Langmuir. - 2006. - 22. - P. 3782-90.

153. Caruso, F. Nanoengineering of Particle Surfaces/F. Caruso // Adv Mater. -2001. - 13. -P. 11-22.

154. Xu, H. Multiplexed SNP genotyping using the Qbead system: a quantum dot-encoded microsphere-based assay / H. Xu, M. Y. Sha, E. Y. Wong, J. Uphoff, Y. Xu, J. A. Treadway, A. Truong, E. O'Brien, S. Asquith, M. Stubbins, N. K. Spurr, E. H. Lai, and W. Mahoney // Nucleic Acids Res. - 2003. -31.- e43.

155. Eastman, P. S. Qdot nanobarcodes for multiplexed gene expression analysis / P. S. Eastman, W. Ruan, M. Doctolero, R. Nuttall, G. de Feo, J. S. Park, J. S. Chu, P. Cooke, J. W. Gray, S. Li, and F. F. Chen // Nano Lett. - 2006. - 6. - P. 1059-64.

156. Biagini, R. E. Comparison of a multiplexed fluorescent covalent microsphere immunoassay and an enzyme-linked immunosorbent assay for measurement of human immunoglobulin G antibodies to anthrax toxins / R. E. Biagini, D. L. Sammons, J. P. Smith, B. A. MacKenzie, C. A. Striley, V. Semenova, E. Steward-Clark, K. Stamey, A.

E. Freeman, C. P. Quinn, and J. E. Snawder // Clin Diagn Lab Immunol. - 2004. — 11. — P. 50-5.

157. Jia, X. C. A novel method of Multiplexed Competitive Antibody Binning for the characterization of monoclonal antibodies /X. C. Jia, R. Raya, L. Zhang, O. Foord, W. L. Walker, M. L. Gallo, M. Haak-Frendscho, L. L. Green, and C. G. Davis // J Immunol Methods. - 2004. - 288. - P. 91-8.

158. Ellington, A. A. Antibody-based protein multiplex platforms: technical and operational challenges / A. A. Ellington, I. J. Kullo, K. R. Bailey, and G. G. Klee // Clin Chem. -2010.-56.-P. 186-93.

159. http://www.piercenet.com/product/carboxy-peg-thiol-compounds

160. Susha, A. S. Formation of luminescent spherical core-shell particles by the consecutive adsorption of polyelectrolyte and CdTe (S) nanocrystals on latex colloids / A. S. Susha,

F. Caruso, A. L. Rogach, G. B. Sukhorukov, A. Kornowski, H. Mohwald, M. Giersig, A. Eychmuller, and H. Weller // Colloids Surf. - A 2000. - 163. - P. 39-44.

161. Mochalov, K. E. Combined scanning probe nanotomography and optical microspectroscopy: a correlative technique for 3D characterization of nanomaterials / K. E. Mochalov, A. E. Efimov, A. Bobrovsky, Agapov, II, A. A. Chistyakov, V. Oleinikov, A. Sukhanova, and I. Nabiev // ACS Nano. - 2013. - 7. - P. 8953-62.

162. http://www.piercenet.com/product/nhs-sulfo-nhs

163. http://www.piercenet.com/product/ez-link-sulfo-nhs-biotin-biotinyIation-kits

http://www.fda.gov/MedicalDevices/DeviceRegulationandGuidance/IVDReeulatoryAssi stance/ucm 124105 .htm

165. Fuzery, A. K. Translation of proteomic biomarkers into FDA approved cancer diagnostics: issues and challenges / A. K. Fuzery, J. Levin, M. M. Chan, and D. W. Chan //Clin Proteomics.-2013.- 10.-P. 13-27.