Новые ариламидные хиральные низкомолекулярные селекторы в жидкостной хроматографии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.02, кандидат химических наук Шамшурин, Дмитрий Владимирович

• Шамшурин, Дмитрий Владимирович
• кандидат химических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат химических наук Шамшурин, Дмитрий Владимирович

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Общая модель хирального распознавания при хроматографическом

разделении. энантиомеров.

2.2. Классификация хиральных неподвижных фаз.

2.2.1. Ковалентно закрепленные хиральные селекторы.

2.2.2. Полимерные хиральные селекторы.

2.3. Строение и методы синтеза хиральных неподвижных фаз на основе низкомолекулярных селекторов.

2.4. Эволюция хиральных неподвижных фаз, работающих по принципу образования комплексов с переносом заряда.

2.5. Хиральные неподвижные фазы, содержащие я-донорную и я-акцепторную группы.

2.6. Модель энантиораспознавания для хиральных селекторов, работающих по принципу образования комплексов с переносом заряда.

2.7. Прочие хиральные неподвижные фазы на основе низкомолекулярных хиральных селекторов.

2.8. Новые подходы при синтезе ХНФ на основе низкомолекулярных хиральных селекторов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новые ариламидные хиральные низкомолекулярные селекторы в жидкостной хроматографии»

Актуальность темы. Феномен оптической изомерии является неизменным атрибутом живого мира. Бурное развитие биохимических исследований, возросшие требования фармацевтической промышленности и новые возможности современной медицинской химии требуют разработки методов получения оптически-чистых форм соединений. ВЭЖХ является одним из наиболее мощных методов разделения веществ с близкими свойствами, в том числе и энантиомеров. Разделение оптических изомеров принципиально возможно только в системах, содержащих хиральный селектор.

Для того чтобы молекула, содержащая оптически активный центр, могла проявить себя как селектор, способный специфично «распознавать» пространственную конфигурацию энантиомеров, в ней необходимо наличие нескольких функциональных групп, взаимодействующих с разделяемыми молекулами. Причем, расположение этих групп в пространстве должно в большей степени соответствовать строению одного из оптических изомеров.

Метод ВЭЖХ с хиральными неподвижными фазами (ХНФ) широко применяется для разделения оптических изомеров органических соединений. Наибольшее распространение получили ХНФ на основе низкомолекулярных хиральных селекторов, закрепленных на силикагеле. Строение хиральных селекторов в этих неподвижных фазах строго задается схемой синтеза, что позволяет целенаправленно изменять их структуру и изучать энантиоселективные свойства на вполне рациональной основе. Наибольшее развитие получили низкомолекулярные селекторы на основе образования комплексов с переносом заряда (так называемые фазы Пиркла) и селекторы, работающие по принципу образования водородных связей. Пока немногочисленный класс ариламидных селекторов, сочетающий в себе свойства обоих типов является наиболее перспективным. Поэтому создание новых ариламидных хиральных селекторов и изучение возможностей их применения является весьма актуальной задачей.

Разница в силах взаимодействия пары оптических изомеров с хиральным селектором незначительна. В связи с этим необходимо тщательно подбирать условия хроматографического разделения. В первую очередь - состав подвижной фазы. Компоненты подвижной фазы влияют не только на «элюирующую силу», но и активно участвуют в процессе энантиораспознавания разделяемых оптических изомеров. Понимание процессов, лежащих в основе энантиораспознавания, и прогнозирование оптимальных условий разделения оптических изомеров возможно только при детальном изучении закономерностей удерживания и разделения энантиомеров различных классов органических соединений.

Цель работы состояла в разработке и синтезе новых низкомолекулярных хиральных селекторов и изучении хроматографических и энантиоселективных свойств силикагелей, модифицированных этими селекторами. Для достижения этой цели были решены следующие задачи:

Разработаны методики синтеза хиральных неподвижных фаз путем модификации аминопропилсиликагелей К-(8)-пропил-К-(0)-(1-фенилэтил)-тиооксамидом и N-(3,5-динитрофенил)фенилаланинолом;

Изучена возможность хирального распознавания энантиомеров различной структуры и полярности (/яранс-стильбеноксида, флаванона, бензоина, 1-фенил-1-пропанола, 1-фенил-2-пропанола, 1 -фенил-1,2-этандиола, 1,Г-бинафтил-2,2'-диола и основания «Трёгера») на синтезированных хиральных неподвижных фазах в условиях нормально-фазовой жидкостной хроматографии;

Исследована зависимость энантиоселективных свойств от строения молекул хирального селектора и от плотности их пришивки к поверхности сорбента на примере разделения оптических изомеров основания «Трёгера» и 1,1'-бинафтил-2,2'-диола;

Установлены закономерности влияния природы и концентрации полярной добавки в подвижной фазе на удерживание и энантиоселективность разделения модельных соединений.

Изучены энантиоселективные свойства хиральной неподвижной фазы на основе N-(3,5-динитрофенил)фенилаланинола по отношению к оптически-активным амидам и предложены условия хроматографического разделения оптических изомеров, определено их соотношение для К-(фенилэтил)-фенилацетамида, N-[l-(l-нафтил)этил]фенилацетамида иК-[1-(4-хлорфенил)этил]фенилацетамида.

Научная новизна. Получены хиральные неподвижные фазы для жидкостной хроматографии на основе >Ц8)-пропил-К-(0)-(1-фенилэтил)-тиооксамида и N-(3,5-динитрофенил)фенилаланинола, энантиоселективность которых определяется суммарным эффектом водородных связей и я-тс взаимодействий с оптическими изомерами. Созданные сорбенты могут успешно применяться для разделения энантиомеров 1,Г-бинафтил-2,2'-диола, основания «Трёгера» и ряда ароматических амидов в условиях нормально-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии. Показано, что с увеличением плотности пришивки молекул хирального селектора на поверхности энантиоселективные свойства сорбента улучшаются.

По изотермам адсорбции индивидуальных изомеров 1,1'-бинафтил-2,2'-диола оценены вклады в удерживание энантиоселективных и неселективных взаимодействий между молекулами сорбата и сорбента.

Проведено систематическое изучение влияния природы полярной добавки на удерживающие и на энантиоселективные свойства синтезированных сорбентов. Установлено, что молекулы полярной добавки участвуют в процессе хиральной дискриминации и оказывают значительное влияние на разделение оптических изомеров, основной вклад в удерживание вносит образование водородных связей.

Практическая значимость: Предложены простые схемы синтеза хиральных неподвижных фаз из доступных и недорогих реактивов и материалов. Проведена оптимизация состава подвижной фазы (концентрации и природы полярной добавки) для повышения селективности и эффективности разделения оптических изомеров. Выбраны подвижные фазы, позволяющие разделить с разрешением больше 1,0 энантиомеры ряда соединений, играющих важную роль в качестве промежуточных хиральных соединений при синтезе биологически активных структур: 1,Г-бинафтил-2,2'-диола, основания «Трёгера», трифтороантранилэтанола, М-(фенилэтил)-фенилацетамида, N-[l-(l-нафтил)этил]фенилацетамида и N-[ 1 -(4-хлорфенил)этил]фенилацетамида. На защиту выносятся следующие положения:

- Методики синтеза хиральных неподвижных фаз на основе аминопропилсиликагеля и низкомолекулярных селекторов (8)-пропил-(Ы)-(а-фенилэтил)-тиооксамида и N-(3,5-динитробензоил)-фенилаланинола.

- Данные по расчету изотерм адсорбции и термодинамических параметров адсорбции оптических изомеров 1,1'-бинафтил-2,2'-диола на хиральных неподвижных фазах.

- Закономерности удерживания ряда кислород- и азотсодержащих органических соединений, обладающих оптической изомерией, на синтезированных сорбентах в условиях нормально-фазовой ВЭЖХ.

- Данные по зависимости энантиоселективных свойств сорбентов от строения молекул хирального селектора, их плотности пришивки к поверхности матрицы и состава подвижной фазы.

- Данные по энантиоразделению ряда ароматических амидов на хиральной неподвижной фазе с селектором на основе М-(3,5-дииитробензоил)-фенилаланинола, условия и результаты определения их энантиомерного состава.

Апробация работы. Результаты работы доложены на международных конференциях и симпозиумах Результаты работы доложены на международных конференциях и симпозиумах: Euroanalysis, Dortmund, Germany, 8-13 September, 2002, Седьмая Международная конференция "Современные перспективы в исследовании хитина и хитозана", Санкт-Петербург - Репино, 15-18 сентября 2003 г., Всероссийский симпозиум "Хроматография и хроматографические приборы", Москва, 15-19 марта

2004 г., Всероссийская конференция по аналитической химии "Аналитика России 2004", Москва, 27 сентября - 1 октября 2004 г., Международная конференция студентов и аспирантов по фундаментальным наукам "Ломоносов-2002". Секция "Химия" Москва, 9-12 апреля 2002 г., Всероссийская конференция «Теория и практика хроматографии. Применение в нефтехимии", Самара, 3-8 июня 2005 г., II Международного симпозиума "Разделение и концентрирование в аналитической химии и радиохимии", Краснодар, 25-30 сентября 2005 г, X международная конференция «Теоретические проблемы химии поверхности, адсорбции и хроматографии», Москва, 2428 апреля 2006 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликованы 3 статьи и 9 тезисов докладов. Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 10 глав экспериментальной части, общих выводов и списка цитируемой литературы. Материал диссертации изложен на 148 страницах машинописного текста, содержит 91 рисунок и 22 таблиц, в списке литературы 120 наименований.

Заключение диссертации по теме «Аналитическая химия», Шамшурин, Дмитрий Владимирович

4. Выводы:

1. Разработаны методики синтеза новых хиральных неподвижных фаз (ХНФ) для ВЭЖХ на основе селекторов Ы-(8)-пропил-Ы-(0)-(1-фепилэтил)-тиооксамида и N-(3,5-динитрофенил)фенилаланинола ковалентпо пришитых к силикагелевой матрице исходя из коммерчески доступных хиральных соединений: фенилэтиламина и фенилаланина. Присутствие амидных и фенильных групп в составе молекул хирального селектора способствует проявлению энантиоселективных свойств сорбентов.

2. Показано, что синтезированные ХНФ являются полярными неподвижными фазами и позволяют разделять кислород и азот-содержащие органические соединения в условиях нормально-фазовой жидкостной хроматографии.

3. Изучены энантиоселективные свойства синтезированных сорбентов на примере разделения рацемических смесей арилалкилспиртов, арилалкиламинов и арилалкиламидов. Получено разделение энантиомеров 1,1'-бинафтил-2,2'-диола, основания «Трёгера» и трифтороантранилэтанола. Показано, что определяющими факторами в энантиораспознавании являются образование водородных связей и ля-взаимодействия между энантиомерами и селектором. Исследованы хроматографические параметры силикагелей, модифицированных хитозаном и его аналогами, низкая эффективность сорбентов не позволила их использовать в хиральной хроматографии.

4. На основании построенных изотерм адсорбции для индивидуальных оптических изомеров 1,Г-бинафтил-2,2'-диола оценены вклады энантиоселективного и неселективного взаимодействий в удерживании молекул этого соединения. Установлено, что вклад неселективных взаимодействий является преобладающим.

5. Найдено, что увеличение плотности пришивки молекул селектора на носителе улучшает селективность и эффективность разделения рацемических смесей 1,1'-бинафтил-2,2'-диола и основания «Трёгера».

6. Изучено влияние природы и концентрации полярной добавки в составе подвижной фазы на удерживание и разделение энантиомеров. Показано, что молекулы полярной добавки участвуют в процессе энантиораспознавания и оказывают значительное влияние на селективность и эффективность энантиоразделения.

7. Исследовано хроматографическое поведение оптически-активных ароматических амидов и выбраны условия разделения энантиомеров N-0-фенилэтил)-фенилацетамида, N-[ 1 -(1 -нафтил)этил] фенилацетамида и N-[l-(4-хлорфенил)этил]фенилацетамида. Показано, что исследованные амиды являются рацемическими смесями. В выбранных условиях из рацемической смеси выделены S- и R-изомеры Ы-[1-(1-нафтил)этил]фенилацетамида с оптической чистотой 98%.

Автор выражает искреннюю благодарность чл.-корр. Шпигуну О.А., проф. Нестеречко П.Н. за постоянное внимание и поддержку, помощь в работе и обсуждение результатов.

2.9. Заключение

Строение хиральных молекул, составляющих органический слой хиральных неподвижных фаз, играет ключевую роль в процессе энантиораспознавания оптических изомеров. В отличие от природных высокомолекулярных хиральных селекторов (полисахаридов, белков) структура синтетических низкомолекулярных селекторов зависит только от фантазии исследователя. Любые функциональные группы и углеводородные фрагменты могут быть введены в состав молекулы селектора. Методы органического синтеза предоставляют необходимую свободу в выборе групп и их взаимному расположению в синтезируемой целевой молекуле. Принципиальным остается вопрос введения хирального фрагмента. Оптическая изомерия - явление присущее живому миру. Наиболее простой и распространенный вариант синтеза хирального селектора предполагает использование природных соединений в качестве «строительных кирпичиков». В этом случае молекула природного соединения изначально представлена в виде одного из двух возможных оптических изомеров. Проводя реакции модифицирования не затрагивающие оптически активный центр, удается получить селектор со 100% оптической чистотой.

Согласно представлениям о механизмах разделения энантиомеров, необходимо осуществление трех одновременных взаимодействий между молекулами селектора и разделяемого соединения. Причем расположение функциональных групп, обеспечивающих взаимодействия, должно отражать хиральную структуру селектора. Взаимодействия могут быть самой различной природы: электростатические, гидрофобные, стерические, образование водородных связей и комплексов с переносом заряда. Сочетание взаимодействий, наиболее полно проявляющих энантиоселективные свойства, образуется введением тех или иных функциональных групп в состав молекулы селектора. Накопленный в настоящее время опыт трех десятилетий в области хиральной хроматографии позволяет делать предположения о роли тех или иных групп в процессе энантиораспознавания. Присутствие ароматических систем в составе молекулы селектора выступает уже, как правило, которым руководствуются при синтезе новых структур. Решающую роль образования комплексов с переносом заряда подтвердили как на примере хроматографических хиральных разделений, так и методами ПМР-спектроскопии.

Образование комплексов с переносом заряда формирует всего лишь один центр связывания. Исключение составляют селекторы типа «WHELK-О 1», где две ароматические системы находятся под прямым углом друг к другу и обеспечивают два связывания по типу «лицо к лицу» и «лицо к краю». Но даже в этом случае присутствие полярных групп необходимо для реализации трехточечного взаимодействия. Наибольшее распространение в хиральной жидкостной хроматографии получили селекторы с полярными группами, способными проявлять взаимодействие по механизму образования водородных связей. К ним относятся сложноэфирные, амидные, мочевинные, гидрокси-, амино- и др. группы, присутствующие в молекулах представляющих различные классы органических соединений.

Образование водородных связей носит достаточно универсальный характер. Как и при образовании комплексов с переносом заряда, необходимым условием является присутствие полярных групп в молекулах как селектора, так и в сорбата. При этом возникает неоднозначная ситуация. С одной стороны, присутствие большего числа разнообразных полярных групп в молекуле селектора увеличивает вероятность связывания с полярными группами сорбата. С другой стороны, расположение групп должно способствовать хиральной дискриминации, то есть находиться в определенном порядке вокруг асимметрического центра. Иначе, если полярная группа оказывается удаленной от хирального центра (как правило, им служит асимметричный атома углерода), ее вклад в удерживание оптических изомеров может носить неселективный (для хирального распознавания) характер и мешать успешному разделению оптических изомеров.

Амидная группа оказалась наиболее подходящей на роль полярного фрагмента в составе молекулы селектора. Она способна выступать как донором (за счет протона при атоме азота), так и акцептором протона (за счет карбоксильного кислорода). Присутствие электроотрицательных атомов в амидной группе приводит к смещению электронной плотности. Это дает возможность проявления диполь-дипольных взаимодействий между молекулами селектора и сорбата. Широкий спектр взаимодействий и достаточно простой способ введения в положение близкое от хирального центра делает амидную группу удобным «строительным блоком» при синтезе хиральных селекторов.

Несмотря на большой опыт синтеза и практического применения хиральных селекторов, создание новых с заданными свойствами остается очень сложной задачей. Ключевым моментом является положение функциональных групп, а также пространственная организация (строение) молекулы селектора. Гелиоцены, не имеющие в своем составе ни одной полярной группы, успешно были разделены на ХНФ с селектором на основе полиметакрилатов. Жестко заданное спиралевидное строение высокомолекулярной молекулы изотактического полимера и образование комплексов с переносом заряда за счет присутствующих фенильных колец оказались достаточными для более сильного удерживания одного из изомеров. С другой стороны, циклические олигосахариды - циклодекстрины, не содержат ароматических колец. ХНФ на основе циклодекстринов проявляют энантиоселективные свойства за счет образования водородных связей и включения гидрофобных частей молекул сорбата в полость молекул селектора. Молекулы циклических антибиотиков (ванкомицин, тикопланин) имеют в своем составе полости, ароматические и полярные группы. Сочетание разных функциональных групп в составе одной молекулы селектора приводит к успешному практическому применению в задачах по разделению оптических изомеров многих классов органических соединений [88].

В отличие от перечисленных выше вариантов пространственной организации, для хиральных селекторов на основе низкомолекулярных органических соединений характерно строгое соответствие расположения полярных /объемных/ ароматических групп в молекулах хирального селектора и сорбата. Очевидные преимущества заключаются в возможности рассмотрения механизма энантиораспознавания на молекулярном уровне и проведения оптимизации структуры селектора на рациональной основе. Такое усовершенствование структуры приводит к получению ХНФ, проявляющих весьма высокую энантиоселективность, как это было продемонстрировано на примере создания фаз для разделения оптических изомеров напроксена. Хроматографические колонки на основе низкомолекулярных селекторов отличаются высокой массовой емкостью, что весьма важно при препаративном разделении оптических изомеров.

Строгое соответствие структур селектора и сорбата («комплиментарность») подразумевает синтез уникальных ХНФ, нацеленных на разделение определенных (целевых) рацематов. То есть для каждого соединения, оптические изомеры которого требуется разделить, должна быть предложена своя ХНФ. Однако практика показывает, что один хиральный селектор проявляет энантиоселективные свойства по отношению к нескольким классам органических соединений. Также в рамках одного класса энантиоселективность проявляется в большей или меньшей степени для рядов различных производных молекул (гомологические ряды, ряды различных заместителей при хиральном фрагменте и в боковых радикалах).

Современные представления о межмолекулярных взаимодействиях пока не позволяют с необходимой точностью описывать системы сорбент-сорбат-элюент исходя лишь из теоретических предпосылок [89]. В частности, это относится к задачам по разделению энантиомеров, в которых разница в энергиях взаимодействия составляет единицы, а зачастую и меньше килокаллорий на моль. В настоящее время создание новых ХНФ начинается с поиска и синтеза структуры-лидера (lead compound), дальнейшая оптимизация которого позволяет получать хиральный селектор с заданными свойствами.

3. Экспериментальная часть 3.1. Исходные вещества, аппаратура, методика эксперимента В работе использовали реагенты и растворители:

Гексан («Криохром», о.с.ч.), 2-пропанол, этилацетат («Экос-1», х.ч.), ацетон, толуол («Экос-1», о.с.ч.), пиридин, диметилформамид, хлороформ, тетрагидрофуран (Мосреактив, х.ч.).

Для синтеза хиральных селекторов использовали карбонат натрия, серу, триэтиламин, L-фенилаланин, боргидрид натрия, тионилхлорид («ХимМед», х.ч.); 3,5-динитро,4-хлорбензойная кислоту, у-аминопропилтриметоксисилан, бромкамфаросульфо-кислота ("Aldrich", о.с.ч.); №(а-фенилэтил)хлорацетамид и №(8)-морфолин-М-(0)-(а-фенилэтил)тиооксамид, синтезированые в лаборатории института органической химии им. Зелинского; хитозан, фталилхитозан, предоставленные центром «Биоинженерия РАН»;

Растворы рацемических соединений фирм Sigma, Aldrich (США) готовили по точным навескам 1,Г-бинафтил-2,2'-диола, основания Трёгера, бензоина, 1-фенил-1,2-этандиола, транс-стильбен-оксида, 1-фенил-2-пропанола, флаванона, 1-фенил-1-пропанол трифлуороантранилэтанола, метокси и диметокси-производных 1,1'-бинафтил-2,2'-диола, 1Ч-(1-метил-3-фенилпропил)-фенилацетамида, №(1-фенилэтил)-фенилацетамида, N-(3-гидрокси-1-метилпропил)-фенилацетамида, N-( 1 -метилбутил)-фенилацетамида, N-[l-(4-хлорфенил)этил]-фенилацетамида, N-[ 1 -(1 -нафтил)этил]-фенилацетамида, N-[2,2,2-трифтор-1-(бензил)этил]-фенилацетамида.

Синтез новых хиральных фаз проводили путем модификации сорбентов:

Silasorb SPH Amin (LACHEMA CHEMAPOL, Praha, Czechoslovakia) средний размер частиц

5,0 мкм, диаметр пор 80 А, удельная площадь поверхности 250 м2/г

Kromasil 100-5-sil 6 (am (AKZO NOBEL, Bohus, Sweden), средний размер частиц 5,5 мкм, диаметр пор 100 А, удельная площадь поверхности 300 м2/г.

В работе применяли следующую аппаратуру:

ВЭЖХ систему, состоящую из насоса LC-10ATvp, спектрофотометрического детектора SPD-10AVvp, контроллера SCL-10AVvp (Shimadzu GmbH, Германия), инжектор Rheodyne 7725/ с петлей 20 мкл. Для сбора данных использовали программное обеспечение Shimadzu Class-VP version 5.03. Колонки заполняли с помощью пневматического насоса высоких давлений фирмы «Кпаиег» К-1900. В работе использовали стальные колонки размерами 250x4,6 мм, 150x3 мм и 150x2 мм. Измерение оптической плотности растовров проводили на спектрофотометре Shimadzu UV 2201

Техника эксперимента Заполнение колонок

Колонки заполняли суспензионным методом из смеси изопропанол : вода (1:1) при давлении 25-30 МРа. После заполнения колонки промывали изопропанолом в течение 30 мин.

Получение и обработка хроматограмм

Перед получением хроматограмм колонку кондиционировали в течение 20 - 30 мин, промывая подвижной фазой. Аликвотную часть (20 мкл) растворов исследуемых соединений вводили в колонку при помощи петлевого дозатора (инжектора). Из полученных хроматограмм рассчитывали исправленное время удерживания (t'R) фактор удерживания (к), коэффициент селективности (а) и разрешение пиков (Rs) по формулам: tR=tR-tM (1) k = t'R/tM (2) a = tRl/t'R2 ( 3)

Rs= tR2~tm (4)

Ki+Ww)/2 где tM- "мертвое время", tR,, tM - времена удерживания компонентов; Wbi, Wb2 - значения ширины пика у основания.

Мертвое время" определяли по системному пику из полученных хроматограмм. Построение изотерм адсорбции

Расчет проводили по методу, предложенному Глюкауфом [90]. В случае равновесной хроматографии форма пика определяется изотермой адсорбции, величину адсорбции можно определить из уравнения a = —[Vcdc (5) ms * где ms - масса адсорбента в колонке, Vc - удерживаемый объем, с - концентрация вещества в подвижной фазе. Уравнение позволяет найти зависимость a=f(c), т.е. изотерму адсорбции для данного вещества. Для количественного расчета удобнее заменить величины Vc и с параметрами, которые определяются непосредственно по хроматограмме.

Амплитуда сигнала (й<) детектора пропорциональна концентрации (с):

Ci=k*hj (6)

Выразив равновесную концентрацию через измеряемые величины (подробный вывод приведен в работе [91]), получаем уравнение т * f с • = —-— hj (7)

S*F а т где Fm - скорость подвижной фазы, / - коэффициент, учитывающий масштаб, приведенный к времени получения хроматограммы, ша - масса адсорбата, введенного в колонку, a Sa - площадь пика, соответствующий массе адсорбата.

Величина адсорбции рассчитывается по формуле а. = к*F. К

- 10Щ (8) ms*Sa О где (4 - 1о) расстояние на хроматограмме от максимума хроматографической зоны несорбируемого вещества до момента, когда из колонки выходит подвижная фаза с концентрацией вещества с,-.

Интеграл в правой части уравнения решается графически, в этом случае уравнение принимает вид k*F

9) ai =- / ms*Sa i-1 где S, - площадь, соответствующая заштрихованной области, изображенной на рис.48.

S ади Л

О I о

Рис. 48. Графическое интегрирование хроматографических кривых для расчета изотерм адсорбции.

Расчет и построение изотерм адсорбции осуществляли при помощи программ Grafula 3.0 v 2.1 и Microsoft®Excel 2000 v.9.0.2812.

3.2. Синтез сорбентов

Синтез ХНФ 1 проводили в соответствии со следующей схемой (Рис. 49).

Рис. 49. Схема синтеза ХНФ 1.

Навеску серы 1,6 г внесли в трехгорлую колбу, содержащую 50 мл пиридина и 10 мл триэтиламина. Смесь нагрели до 47°С и выдерживали при этой температуре в течение 10 мин. Затем в колбу поместили навеску 6,0 г у-аминопропилсиликагеля (Silasorb SPH Amin). К образовавшейся суспензии при интенсивном перемешивании и контроле температуры добавили маленькими порциями 6,8 г Ы-(а-фенилэтил)хлорацетамида. Реакционную смесь нагревали в течение 4 часов. Сорбент отфильтровали на воронке со стеклянным дном. Промывали 5 порциями по 20 мл последовательно теплым пиридином, диэтиловым эфиром и гексаном. Затем сорбент высушили под вакуумом при комнатной температуре. Элементный анализ: исходный у-аминопропилсиликагель (С 3.75% Н 1.21%), ХНФ 1 (С 7,30% Н 1,41% N 1,48 S 1,21%).

Синтез ХНФ 2 проводили в соответствии со следующей схемой (Рис. 50).

Рис. 50. Схема синтеза ХНФ 2.

В колбу, содержащую 15 мл ДМФА и 2 мл ТЭА, поместили 0,5 г у-аминопропилсиликагеля (Silasorb SPH Amin), и нагрели до 70°С. К смеси добавили 0,84 г. N-(S)-морфолин-Н-(0)-(а-фенилэтил)тиооксамида и выдерживали при температуре 70°С в течение 12 часов при перемешивании. Полученный сорбент отфильтровали на воронке со стеклянным дном и промыли тремя порциями (по 20 мл) ацетона, затем высушили под вакуумом при комнатной температуре. Элементный анализ: ХНФ 2 (С 6,34% Н 1,29% N 1,30% S 1,0%).

Для получения ХНФ 3 использовали многостадийную схему синтеза (Рис. 51) и \^СН2ОН

02n. NH,

NO,

NO, стадия 1 toluene/HjO, NajCOj ci стадия 2 он

N0, ч| APTMS Si—ОН 3 toluene, t \ \ стадия 3 nh2 +

CI он

N0,

THF, EtjN стадия 4

NO,

Рис. 51. Схема синтеза ХНФ 3.

Стадия 1. Синтез 3,5-динитро,4-хлорбензоилхлорида

3,5-динитро,4-хлорбензойную кислоту (1,0 г) смешали с тионилхлоридом (20 мл) и диметилформамидом (0,01 г) в качестве катализатора. Смесь кипятили, пока она не стала гомогенной (около 1,5 часов). Избыток SOCb отогнали под вакуумом. К остатку добавили толуол (20 мл) и отогнали досуха. Получили 3,5-динитро-4-хлорбензоилхлорид в количестве 1,07 г.

Стадия 2. Синтез N-(3,5-duHumpo, 4-хлор)-(Ь)-фенилаланинола

3,5-динитро,4-хлорбензоилхлорид (1,0 г) растворили в толуоле (10 мл). Полученный раствор добавляли при интенсивном перемешивании в колбу, содержащую раствор 0,65 г L-фенилаланинола в 40 мл толуола и 2% раствор карбоната натрия в воде (50 мл). Смесь перемешивали в течение 10 минут. Перемешивание прекратили, и оставили реакционную смесь на 1 час в закрытом сосуде. Выпавший светло-желтый кристаллический осадок отфильтровали на воронке со стеклянным дном и промыли последовательно дистиллированной водой и смесью толуол - гексан (1:1). Полученный продукт дополнительно очистили методом колоночной препаративной хроматографии на силикагеле Merck 50/100. В качестве элюента использовали смеси петролейного эфира с этилацетатом. Масса выделенного Ы-(3,5-динитро,4-хлор)-(Ь)-фенилаланинола составила 0,98 г. (Выход реакции 42%). Элементный анализ Ы-(3,5-динитро,4-хлор)-(Ь)-фенилаланинола: С 50,2% Н 4,5% N 11,1% (теор. С 50,61 Н 3,72% N 11,06). Стадия 3. Амипирование силикагеля

Навеску силикагеля (Kromasil ЮО-5-sil) массой 2,0 г поместили в колбу на 100 мл и добавили 20 мл абсолютированного толуола. Смесь перемешали встряхиванием, затем добавили 1,1 мл у-аминопропилтриметоксисилана и нагревали при 100°С в течение 20 часов. Сорбент отфильтровали, промыли последовательно толуолом, ацетоном, гексаном и высушили в вакууме при комнатной температуре. Данные элементного анализа аминированного силикагеля: С 3,53% Н 0,78% N 1,12%.

Стадия 4. Закрепление Ы-(3,5-дипитро,4-хлор)-(Ь)-фепилалаиииола на поверхности 3-аминопрпилсиликагеля

Синтезированный у-аминопропилсиликагель (2,2 г) внесли в колбу содержащую N-(3,5-динитро,4-хлор)-(Ь)-фенилаланинола (0,95 г) и смесь ТГФ : пиридин (10:1 мл). Полученную смесь в течении 2 часов кипятили с обратным холодильником при перемешивании. Затем сорбент отфильтровали на воронке со стеклянным дном. Промывали последовательно ТГФ, ацетоном и гексаном. Полученный сорбент высушили в вакууме при комнатной температуре. Данные элементного анализа синтезированного сорбента: С 5,70% Н 0,84% N 1,56%.

ХНФ 4 получали в соответствии со схемой синтеза сорбента 3. Мольное отношение реагентов сохранилось на всех стадиях. Синтез вели, исходя из навески силикагеля 3,0 г. Отличие в схеме синтеза заключалось в дополнительно введенной стадии восстановления L-аминокислоты до соответствующего аминоспирта (Рис. 52).

Рис. 52. Реакция восстановления аминокислоты до аминоспирта. Стадия 3'. Восстановление L-феншаланина.

В трехгорлую колбу объемом 150 мл, содержащую 50 мл тетрагидрофурана, поместили 8,2 г фенилаланина и 5,0 г боргидрида натрия. Охладили смесь на бане со льдом, и по каплям при интенсивном перемешивании добавили смесь серной кислоты (3,3 мл) с диэтиловым эфиром (6,7 мл). Затем реакционную смесь перемешивали в течение 20 часов при комнатной температуре. Добавили 5 мл метанола и 50 мл 5 М водного раствора гидроксида натрия. Отогнали растворитель, летящий ниже 100°С, и выдерживали смесь при кипячении с обратным холодильником в течение 3 часов. Реакционную смесь остудили до комнатной температуры и отфильтровали. Фильтрат трижды проэкстрагировали хлористым метиленом (по 20 мл). Органический слой упарили в вакууме, получили 5,9 г. L-фенилаланинола (Выход рекации: 78%).

THF стадия 3'

Также при синтезе ХНФ 4 схема синтеза была расширена за счет повторения стадии 4. Для этого полученный сорбент после промывки на стадии 4 дополнительно обработали N-(3,5-динитро,4-хлор)-(Ь)-фенилаланинолом (0,6 г) в растворе ТГФ : пиридин (10:1 мл). Элементный анализ ХНФ 4: С 6,62% Н 0,96% N 1,77%.

При синтезе хиральных селекторов обязательным условием является сохранение оптически активного центра в ходе проводимых реакций. В качестве исходных хиральных соединений в нашей работе использовали М-(а-фенилэтил)хлорацетамид (ФХА) и N-(S)-морфолин-М-(0)-(сс-фенилэтил)тиооксамид для синтеза селектора А, фенилаланинол и фенилаланин для синтеза селектора Б. Во всех схемах синтеза (Рис. 49-Рис. 52) использовали реакции, не затрагивающие оптически активный центр.

Селектор, содержащий тиооксамидную группу, получали гетерогенной реакцией, протекающей между аминогруппами у-аминопропилсиликагеля и молекулой ФХА в присутствии молекулярной серы. Эта реакция хорошо изучена для гомогенных условий, где компонент, содержащий аминогруппу, растворим в использующемся органическом растворителе [92,93]. Выходы реакции весьма высоки и в случае использования хлорацетамидов составляют 92% процента. Для более полного протекания реакции в гетерофазном варианте мы использовали 5 кратный избыток ФХА и соответствующий стехиометрии описанной реакции 10 кратный избыток серы по отношению к получаемым аминогруппам. Все это позволяет предположить, что реакция проходит в соответствии с уравнением, приведенным на Рис. 49. Состав молекулы селектора подтвержден методом элементного анализа.

Из-за присутствия в системе молекулярной серы отмывка сорбента после проведения синтеза представляла довольно длительный процесс с использованием таких растворителей, как пиридин, диэтиловый эфир и гексан. Для упрощения методики мы применили другой вариант синтеза ХНФ на основе селектора А. В нем получение требуемой структуры осуществляется реакцией обмена амина (морфолина) тиоамидного фрагмента К-(3)-морфолин-К-(0)-(а-фенилэтил)тиооксамида на аминогруппу у-аминопропилсиликагеля (Рис. 50). Реакция описана [94] для гомогенных условий и протекает с высокими выходами. Также как и в предыдущем методе синтеза, для полноты протекания использовали пятикратный избыток морфолинсодержащего реагента. Данные элементного анализа показывают, что, в случае использования реакции обмена аминами, плотность пришивки молекул селектора уменьшается.

Сорбенты на основе селектора Б получали в результате многостадийного синтеза. Сравнение характеристик доступных силикагелей показало, что наиболее подходящей исходной матрицей является силикагель марки «KROMASIL 100-5-SIL». Аминирование силикагеля проводили в соответствии со стандартной методикой [95]. Данные элементного анализа (табл.4) показывают, что плотность пришивки аминопропильных групп близка к эксперементально-получаемым значениям 3 мкмоль/м2 [95]. Восстановление карбоновых кислот до спиртов обычно проводят алюмогидридом лития в абсолютированном диэтиловом эфире [96]. Работа с этим восстанавливающим агентом сопряжена с рядом сложностей. Требуется тщательная осушка растворителя используемого в реакции восстановления. Алюмогидрид лития чрезвычайно реакционноспособен, и проведение реакции следует вести при охлаждении. Альтернативные методы получения аминоспиртов описаны в работах [97, 98]. Наиболее удобным при использовании в лабораторной практике оказался метод восстановления аминокислот с помощью боргидрида натрия в присутствии серной кислоты [99]. При этом, как отмечают авторы, не требуется дополнительная осушка тетрагидрофурана, используемого в качестве растворителя.

Несмотря на избыток селектора по отношению к аминогруппам аминопропилсиликагеля, дополнительная обработка М-(3,5-динитро,4-хлор)-(Ь)-фенилаланинолом при синтезе ХНФ 4 увеличивает плотность пришивки в 1,5 раза. По-видимому, происходит сильное межмолекулярное взаимодействие между молекулами хирального селектора при модифицировании аминопропилсиликагеля, препятствующее получению плотного ковалентно привитого органического слоя.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Шамшурин, Дмитрий Владимирович, 2006 год

1. Dalgliesh С. Chiral recognition is a three point process. // J. Chem. Soc. 1952. P. 3940-3942.

2. Лисичкин Г.В., Фадеев А.Ю., Сердан A.A., Нестеренко П.Н. Мингалев П.Г., Фурман Д.Б. Химия привитых поверхностных соединений. М.: Физмалит, 2003. 366 с.

3. Dobashi А., Ока К., Нага S. Optical resolution of the D- and L-amino acid family by liquid-solid chromatography. // J. Am. Chem. Soc. 1980. V. 102. №.11. P. 7122-7123.

4. Sousa L.R., Sogah G.D., Hoffman D.H., Cram D.J. Host-guest complexation. 12. Total optical resolution of amino and amino esters salts by chromatography.// J. Am. Chem. Soc. 1978. V. 100. №14. P. 4569-4576.

5. Ward T.J., Farris A.B. Chiral separation using the macrocyclic antibiotics: a review.// J. Chromatogr. A. 2001. V. 906. P. 73-89.

6. Hermansson J.J. Direct liquid chromatographic resolution of racemic drugs using a-acid glycoproteins as the chiral stationary phase. // J. Chromatogr. 1983. V. 269. №2. P. 71-80.

7. Haginaka J. Protein-based chiral stationary phases for high-performance liquid chromatography enantioseparations. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 906. N 1. P. 253-273.

8. Алленмарк С. Хроматографическое разделение энантиомеров. М.: Мир, 1991. С. 131140.

9. Shibata Т., Okamoto I., Ishii К. The resolution of enantiomers by liquid chromatography on chiral. stationary phases. // J. Liquid Chromatogr. 1986. V. 9. №. 2. P. 313-340.

10. Okamoto Y., Kawashima M., Hatada K. Chromatographic resolution XI. Controlled chiral recognition of cellulose triphenylcarbamate derivatives supported on silica gel. // J. Chromatogr. 1986,363. P. №.2 173-186.

11. Меркулова Н.Л, Шаповалова E.H., Шпигун O.A. Влияние структуры карбонильных и дициклопентадиеновых комплексов металлов на их энантиораспознавание. // Вестник МГУ. Сер.2. Химия. 2004. Т. 45. №1. С. 31-37.

12. Blaschke G. Chromatographic resolution of chiral drugs on polyamides and cellulose Triacetate. // J. Liquid Chromatogr. 1986. V. 9. №. 2. P. 341-368.

13. Budge J.R., Ellis P.E., Jones R.D., Linard J.E., Szymanski Т., Basolo F., Baldwin J.E., Dyer R.L. Optically active poly(triphenylmethyl methacrylate) with one-handed helical conformation. //J. Am. Chem. Soc. 1979. V. 101. №. 16. P. 4763-4765.

14. Gasparriny F., Missity D., Vilany. C. High perfomance liquid chromatography chiral stationary phases based on low molecular selectors. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 906. P. 35-50.

15. Pirkle W.H., Beare S.D. Optically active solvents in nuclear magnetic resonance spectroscopy. IX. Direct determination of optical purities and corellations of absolute configurations of a-amino acids. // J. Am. Chem. Soc. 1969. V. 91. P.5150-5155.

16. Pirkle W.H., Sikkenga D.L. Resolution of optical isomers by liquid chromatography. // J. Chromatogr. 1976. V. 123. P. 400-404.

17. Pirkle W.H., Finn J.M. Chiral High-Pressure Liquid chromatographic Stationary Phases. 3. General Resolution of Arylalkylcarbinols. // J. Org. Chem. 1981. V. 46. №. 14. P. 2935-2938.

18. Pirkle W.H., Finn J.M., Schreiner J.L., Hamper B.C. A widely useful chiral stationary phase for the high-performance liquid chromatography separation of enantiomers. // J. Am. Chem. Soc. 1981. V. 103. №. 13. P. 3964-3966.

19. Pirkle W.H., Dappen R. Reciprosity in chiral recognition comparison of several chiral stationary phases. // J. Chromatogr. 1987. V. 404. P. 107-115.

20. Pirkle W., Pochapsky C. A new, easily accessible reciprocal chiral stationary phase for the chromotographic separation of enantiomers. // J. Am. Chem. Soc. 1986. V. 108. №. 2. P. 352354.

21. Pirkle W.H, Hyun M.H. A Chiral stationary phase for the facile resolution of amino acids, amino alcohols, and amines as the N-3,5-dinitrobenzoyl derivatives. // J. Org. Chem. 1984. V. 49. №. 17. P. 3043-3046.

22. Pirkle W.H, Alessi D.M., Hyun M.H., Pochapsky T.C. Separation of some enantiomeric di-and tripeptides on chiral stationary phases. //J. Chromatogr. 1987. V. 398. P. 203-209.

23. Hyun M.H., Pirkle W.H. Liquid chromatographic separation of the stereoisomers of thiazide diuretics. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 876. P. 221-227.

24. Pirkle W.H, Hyun M.H. Preparetion and use of hydantoin-based chiral stationary phases. // J. Chromatogr. 1985. V. 322. P. 309-320

25. Pirkle W.H., Sowin T.J. Synthesis and separation of diastereomeric imino alcohol derivatives of chiral phtalides: a method for Assignment of phtalide absolute configurations. // J. Org. Chem. 1987. V. 52. №. 14. P. 3011-3017.

26. Pirkle W.H., Sowin T.J. Design, preparation and performance of a phthalide-based chiral stationary phase. // J. Chromatogr. 1987. V. 396. P. 83-92.

27. Pirkle W.H., Liu Y., Design, synthesis, resolution, determination of absolute configuration, and evaluation of a chiral naproxen selector. // J. Org. Chem. 1994. V. 59. №. 23. P. 6911-6916.

28. Pirkle W.H., McCune J. Imrpvoed chiral stationary phase for the separation of the enantiomers of chiral acids as their anilide derivatives. // J. Chromatogr. 1989. V. 471. P. 271281.

29. Pirkle W.H., Welch C.J., Lamm B. Design, synthesis and evaluation of an improved enantioselective naproxen selector. //J. Org. Chem. 1992. V. 57. №. 14. P. 3854-3860.

30. Pirkle W.H., Liu Y. Incremental development of chiral selectors for underivatized pro fens. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 736. P. 31-38.

31. Pirkle W.H., Brice L.J, Resolution and determination of the enantiomeric purity and absolute configurations of a aryl -a hydroxythanephosphonates. // Tetrahedron.: Asymm. 1996. V, 7. №. 8. P. 2173-2176.

32. Pirkle W.H, Brice L.J., Caccamese S., Principato G., Failla S. Facile separation of the diethyl N-(aryl)-l-amino- 1-arylmethanephosphonates on a rationally designed chiral stationary phase. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 721. P. 241-246.

33. Pirkle W.H., Spence P.L. Enantiodifferentiation of aryl-substituted heterocycles: a mechanistic study using y-lactones. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 775. P. 81-90.

34. Pirkle W.H., Gan K.Z., Brice L.J. The enhancement of enantioselectivity by halogen substituents. // Tetrahedron Asymm. 1996. V. 7. №. 10. P. 2813-2816.

35. Welch C.J., Szczerba Т., Perrin S.R. Some recent high-perfomance liquid chromatography separations of the enantiomers of pharmaceuticals and other compounds using the Whelk-0 1 chiral stationary phase. //J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 93-98.

36. Pirkle W.H, Koscho M.E., Predictable chromatographic separations of enantiomers: aryl allenic acids and their derivatives. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 761. P. 65-70.

37. Villani С., Pirkle W.H. Chromatographic resolution of the interconverting stereoisomers of hindered sulfmyl and sulfonyl naphthalene derivatives. // Tetrahedron: Asymm. 1995. V. 5. №. l.P. 27-30.

38. Villani C., Pirkle W.H. Direct high performance liquid chromatographic resolution of planar chiral tricarbonyl (ri6-arene)-chromium (0) complexes. //J. Chromatogr. A. 1995. V. 693, P. 6368.

39. Pirkle W.H., Gan K.Z. A direct chromatographic separation of enantiomers chiral by virtue of isotopic substitution. // Tetrahedron: Asymm. 1997. V. 8. №. 6. P. 811-814.

40. Pirkle W.H., Liu Y. On the relevance of face-to-edge %-n interactions to chiral recognition// J. Chromatogr. A. 1996. V. 749. P. 19-24.

41. Desiraju G.R., Gavezzott A. From molecular to crystal structure; polynuclear aromatic hydrocarbons. // J. Chem. Soc., Chem Commun., 1989. V. 20. P. 621-623.

42. Burley S.K., Petsko G.A. Aromatic-aromatic interaction: a mechanism of protein structure stabilization. // Science. 1985. V. 229. P. 23-28.

43. Hyun M.H., Ryoo J.J., Pirkle W.H. Experimental support differenciating two proposed chiral recognition models for the resolution on high-performance liquid chromatography chiral stationary phases. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 886. P. 47-53.

44. Pirkle W.H., Welch C.J. Chromatographic and *H NMR support for a proposed chiral recognition model. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 683. P. 347-353.

45. Hyun M.H., Min C.S. Unusual high enantioselectivity by a new HPLC chiral stationary phase. // Tetrahedron Lett. 1997. V. 38. №. 11. P. 1943-1946.

46. Hyun M.H., Lee J.B., Kim Y.D.J. An Improved (S)-Leucine-Derived -Acidic HPLC Chiral Stationary Phase for the Resolution of Acidic Racemates. // High Resol. Chromatogr. 1998. V. 21. P. 69-71.

47. Hyun M.H., Kang M.H., Han S.C. Liquid chromatographic resolution of 2-hydroxycarboxylic acids on a new chiral stationary phase derived from (S)-leucine. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 868. P. 31-39.

48. Pirkle W.H., Koscho M.E. Structural optimization of a chiral selector for use in preparative enantioselective chromatography. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 840. P. 151-158.

49. Pirkle W.H., Murray P.G. Chiral stationary phase design : Use of intercalative effects to enhance enantioselectivity// J. Chromatogr. 1993. V. 641. P. 11.

50. Machida Y., Nishi H., Nakamura K., Nakai H., Sato T. Enantiomeric separation of diols and P-amino alcohols by chiral stationary phase derived from (R,R)-tartamide. // J. Chromatogr. A. 1997. V. 757. P. 73-79.

51. Dobashi Y., Hara S. A chiral stationary phase derived from (R,R)-tartramide with broadened scope of application to the liquid chromatographic resolution of enantiomers. // J. Org. Chem. 1987. V. 52. №. 12. P. 2490-2496.

52. Lin C.-E., Lin C.H., Li F.K. Enantioseparation of amino acids and amino alcohols on chiral stationary phases derived from a-amino acid- and pyrrolidinyl-disubstituted cyanuric chloride. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 722. P. 189-198.

53. Iuliano A., Pieroni E., Salvadori P. New 1,3,5-triazine based chiral stationary phase for the high-performance liquid chromatographic separation of enantiomers. // J. Chromatogr. A 1997. V. 786. P. 355-360.

54. Iuliano A., Lecci C., Salvadori P. The s-triazine moiety as a scaffold for connecting different chiral auxiliaries: synthesis of new biselector CSPs for enantioselective chromatography. // Tetrahedron: Asymmetry 2003. V. 14. P. 1345-1353.

55. Kolb H.C., Andersson P.G., Sharpless K.B. Toward an understanding of the high enantioselectivity in the osmium-catalyzed asymmetric dihydroxylation (AD). 1. Kinetics. // J. Am. Chem. Soc. 1994. V. 116. №. 7. P. 1278-1291.

56. Franco P., Lammerhofer M., Klaus P.M., Lindner W. Novel cinchona alkaloid carbamate С -dimers as chiral 9 anion-exchange type selectors for high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 2000. V. 869. P. 111-127.

57. Sudo Y., Yamaguchi Т., Shinbo T. Preparation and enantioselectivity of (S)-binaphthol-bonded phase for high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1996. V. 736. P. 39.

58. Sudo Y., Yamaguchi T„ Shinbo T. Preparation and chiral recognition of (S)-binaphthol derivative bonded phase for high-performance liquid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1998. V. 813. P. 35-45.

59. Gasparrini F., Misiti D., Villani C. Enantioselective recognition by a new chiral stationary phase at receptorial level. // J. Org. Chem. 1995. V. 60. №. 14. P. 4314-4315.

60. Hong J.I., Namgoong S.K., Bernardi A., Still W.C. Highly selective binding of simple peptides by а Сз macrotricyclic receptor. // J. Am. Chem. Soc. 1991. V. 113. №. 13. P. 51115112.

61. Liu R., Still W.C. Highly selective binding of diverse neutral donor/acceptor substrates by a Сз macrotricyclic receptor. // Tetrahedron Lett. 1993. V. 34. №. 16. P. 2573-2576.

62. Van Hijfte L., Froloff N., Marciniak G. Combinatorial chemistry, automation and molecular diversity: new trends in the pharmaceutical. // J. Chromatogr. B. 1999. V. 725. №. 1. P. 3-15.

63. Kagan H.B. New screening methodologies or combinatorial chemistry applied to asymmetric catalysts. // J. Organometallic Chem. 1998. V. '567. №. 1-2 P. 3-6.

64. Dooley C., Houghten R.A., Ostresh J.M., Nefzi A. Combinatorial chemistry: from peptides and peptidomimetics to small organic and heterocyclic compounds. // Bioorgan. Medicin. Chem. Lett. 1998. V. 8. №. 17. P. 2273-2278.

65. Miguel Y.R. What next in combinatorial chemistry? // Tren. Biotech. 2000. V. 18. №. 2. P. 43-44.

66. Gasteiger J., Pfortner M., Sitzmann M., Hollering R., Sacher 0., Kostka Т., Karg N. Computer-assisted synthesis and reaction planning in combinatorial chemistry. // Perspect. Drug Discov. Design. 2000. V. 20. №. 1. P. 245-264.

67. Сое D.M. Storer R. Solution-phase combinatorial chemistry. // Molecular Diversity. 1998. V.4. N 1. P. 31-33.

68. Marsh A., Carlisle S.J., Smith S.C. High-loading scavenger resins for combinatorial chemistry. // Tetrahedron Letters. 2001. V. 42. №. 3. P. 493 496.

69. Lewandowski K., Murer P., Svec F., Freichet J.M. Highly selective chiral recognition on polymer supports: preparation of a combinatorial library of dihydropyrimidines and its screening for novel chiral HPLC ligands. // Chem. Commun. 1998. P. 2237-2238.

70. Merer P., Lewandowski K., Svec F., Frechet J. M. On-bead combinatorial approach to the design of chiral stationary phases for HPLC. // Anal. Chem. 1999. V. 71. №. 7. P. 1278-1284.

71. Schleimer M., Pirkle W.H., Schurig V. Enantiomer separation by high-performance liquid chromatography on polysiloxane-based chiral stationary phases. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 679. P. 23-24.

72. Pirkle W.H., Terfloth G.J. Naproxen-derived segmented and sidechain-modified polysiloxanes as chiral stationary phases. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 704. P. 269-277.

73. Wolf C., Pirkle W. H. Synthesis and evaluation of copolymeric chiral stationary phase. // J. Chromatogr. A. 1998. V. 799. P. 177-184.

74. Terfloth G.J., Pirkle W.H., Lynam K.G., Nicolas E.C. Broadly applicable polysiloxane-based chiral stationary phase for high-performance liquid chromatography and supercritical fluid chromatography. // J. Chromatogr. A. 1995. V. 705. P. 185-194.

75. Алленмарк С. Хроматографическое разделение энантиомеров. М.: Мир, 1991. С.80.

76. Lipkowitz К.В. Atomistic modeling of enantioselection in chromatography. // J. Chromatogr. A. 2001. V. 906. P. 417-442.

77. Glueckauf E. Theory of Chromatography. Part II. Chromatograms of a single solute. // J. Chem. Soc. (London). 1947. №10. P.1302-1308.

78. Крейчи M., Паюрек Я., Комерс P. и др. Вычисления и величины в сорбционной колоночной хроматографии. М.: Мир, 1993. С.181-187.

79. Заварзин И. В., Яровенко В.Н., Чернобурова Е.И., Краюшкин М.М. Синтез монотиооксамидов. // Изв. Акад. Наук. Сер. Хим. 2004. Т. 41. №. 2. С. 398-401.

80. Заварзин И. В., Яровенко В.Н., Краюшкин М.М. Синтез монотиооксамидов ряда тиазола. // Изв. Акад. Наук. Сер. Хим. 2004. Т. 41. №. 2. С. 454-455.

81. Заварзин И. В., Яровенко В.Н., Краюшкин М.М. Взаимодействие монотиооксамидов с N-нуклеофилами. Синтез 4,5-дигидроимидазол-2-карбоксанилидов. // Изв. Акад. Наук. Сер. Хим. 1999.Т. 27. №. 4. С. 753-757.

82. Ворошилова О.И. Киселев А.В., Никитин Ю.С. Синтез и исследование кремнеземных носителей с поверхностью, модифицированной у-аминопропильными группами. // Коллоидный журнал. 1980. Т.42. №.2. с. 223-229.

83. Марч Д. Органическая химия: реакции, механизмы и структура. М.: Мир, 1987. Т. 2. С. 238.

84. Ager D.J., Prakash I., Schaad D.R. 1,2-Amino alcohols and their heterocyclic derivatives as chiral auxiliaries in asymmetric synthesis. // Chem. Rev. 1996. V. 96. №. 2. P. 835-875.

85. Demir A.S., Akhmedov I.M., Sesenoglu O. Transition metal compound mediated reduction of a-amino acids to 1,2-amino alcohols with NaBH4 in water. // Turk. J. Chem. 1999. 23. 123126.

86. Abiko A., Masamune S. An improved, convinient procedure for reduction of amino acids to aminoalcohols: use ofNaBH4-H2S04.// Tetrahedron Letters 1992. V. 33. №. 38. P. 5517-5518.

87. Буданова H. 10., Шаповалова E. H., Лопатин С. А., Варламов В. П., Шпигун О. А. // Вестн. Моск. Ун-та. Сер. 2. Химия. 2000. Т. 42. №. 2. С. 112-116.

88. Давыдов В.Я., Киселев А.В., Сапожников Ю.М. // Коллоидный журнал. 1979. Т.41. С. 333-336.

89. Чудук Н.А., Эльтеков Ю.А. Адсорбция и жидкостная хроматография анизола на кремнеземах. //Журн.физич.химии, 1979. Т.53. С. 1032-1034.

90. Киселев А.В., Пошкус Д.П., Яшин Я.И. Молекулярные основы адсорбционной хроматографии. М.: Химия, 1986. С.171.

91. Pirkle W.H., Liu Y. On the revelance of face-to-edge к-к interactions to chiral recognition. //J. Chromatogr. A. 1996. V. 749. P.19-24.

92. Allenmark S and Schurig V. Chromatography on chiral stationary phases. // J. Mater. Chem. 1997. V. 7. №. 10. P. 1955-1963.

93. Pirkle W.H. and Sikkenga D.L, Use of achiral shift reagents to indicate relative stabilities of diastereomeric solvates. // J. Org. Chem. 1975. V. 40. №. 23. P. 3430-3434.

94. Pirkle W.H. and Hauske J.R. Broad spectrum methods for resolution of optical isomers. A discussion of the reasons underlying the chromatographic separability of some diastereomeric carbamates. //J. Org. Chem. 1977. V. 42. №. 11. P. 1839-1844.

95. Welch C. Szezerba Т., Perrin S. Some recent high-performance liquid chromatography separation of the enantiomers of pharmaceuticals and other compounds using the Whelk-0 1 chiral stationary phase. //J. Chromatogr. A. 1997. V. 758. P. 93-98

96. Uno Т., Ohkubo Т., Sugawara К Enantioselective high-performance liquid chromatographic determination of nicardipine in human plasma. // J. Chromatogr. B. 1997. V. 698. P. 181-186.

97. Markoglou N., Wainer I.W. Determination of the anticancer agent CI-980 in plasma by achiral liquid chromatography on a Pirkle-type stationary phase // J. Chromatogr. B. 1997. V. 693. P. 493-497.

98. Petersen P.V., Ekelund J., Olsen L., Ovesen S.V. Chiral separations of b-blocking drug substances using the Pirkle-type a-Burke 1 chiral stationary phase. // J. Chromatogr. A. 97. V. 757. P. 65-71.

99. Ryoo J J., Kim Т.Н., Im S.HJeong., Y.H., ParkJ.Y., Choi S.-H., LeeK.-P., ParkJ.H. Enantioseparation of racemic N-acylarylalkylamines on various amino alcohol derived p-acidic chiral stationary phases//. J. Chromatogr. A. 2003. V. 987. P. 429-438

100. Malyshev O.R., Vinogradov M.G. Convenient synthesis of л-acceptor chiral stationary phases for high-performance liquid chromatography from halogen-substituted 3,5-dinitrobenzoylamides. // J. Chromatogr. A. 1999. V. 859. P. 143-151.

101. Щатц В., Сахартова О. Высокоэффективная жидкостная хроматография. Рига.: Зинатне, 1988. С. 36-44.

102. Gasparrini F., Misiti D., Pierini M., Villani С. Enantioselective chromatography on brush-type chiral stationary phases containing totally synthetic selectors Theoretical aspects and practical applications// J. Chromatogr. A. 1996. V. 724. P. 79.

103. Aratscova A.A, Kiselev A.V., Yashin Ya. I. Influence of intermolecular interaction with the eluent on the retention of phenol and aniline on polar and non-polar surfaces. // Chromatographic 1983. V.17. №. 6. P. 312-314.

104. Kiselev A.V., Tarasova L.V., Yashin Ya.I. Influence of intermolecular interaction with the eluent on the retention and selectivity in liquid chromatography. // Chromatographic 1980.V. 13. №. 10. P.599-602.

105. Nesterenko P.N, Krotov V.V, Staroverov S.M. Effect of mobile phase composition on the enantioselectivity of chromatographic separation on a quinine bonded silica stationary phase. // J. Chromatogr. A. 1994. V. 667. P. 19-28.

106. Stinson S.C. Chiral drugs. // Science/Technology. 2000. V. 78. №. 43. P. 55-78.