Механизм формирования комплексов α-лактальбумина с олеиновой кислотой и молекулярные аспекты их цитотоксического действия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат биологических наук Князева, Екатерина Леонидовна

• Князева, Екатерина Леонидовна
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Князева, Екатерина Леонидовна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Белки, селективно индуцирующие гибель раковых клеток. а-Лактальбумин: физико-химические свойства.

Структура а-лактальбумина.

Связывание катионов металлов.

Стабильность а-лактальбумина.

Взаимодействие а-лактальбумина с белками, пептидами и низкомолекулярными органическими веществами.

Функции а-лактальбумина.

Цитотоксическая активность а-лактальбумина.

Состояние HAMLET.

Предклинические и клинические испытания HAMLET.

Механизм действия состояния HAMLET.

Взаимодействие с мембранами.

Взаимодействие с гистонами.

Апоптоз.

Альтернативные пути клеточной гибели, запускаемые HAMLET.

Структурные и физико-химические свойства HAMLET.

Жирные кислоты и их взаимодействие с белками.

Взаимодействие а-лактальбумина с жирными кислотами.

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Материалы.

Методы.

Общие процедуры.

Выбор величины рН и температурных условий.

Биохимические методы.

Приготовление состояния HAMLET.

Приготовление комплексов LA-OA-17 и LA-OA-45.

Приготовление комплекса bLA-0А-45.

Очистка белка от ионов кальция.

Гель-фильтрационная ВЭЖХ.

Приготовление липосом.

Выделение комплекса белка с липосомами.

Физические методы исследования.

Оценка ёмкости белка по отношению к олеиновой кислоте.

Флуоресцентные измерения.

Круговой дихроизм.

Измерение сродства белка к кальцию.

Измерение сродства белка к олеиновой кислоте.

Исследование взаимодействия а-лактальбумина с гистоном HI.

Клеточные исследования.

Тесты цитотоксичности.

Электрофизиологические исследования.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Исследование процесса формирования комплексов а-лактальбумина с олеиновой кислотой.

Зависимость ККМ олеиновой кислоты от условий раствора. мкость а-лактальбумина по отношению к олеиновой кислоте.

Механизм связывания олеиновой кислоты а-лактальбумином.

Исследование взаимодействий, стабилизирующих комплексы a-JIA с олеиновой кислотой.

Содержание олеиновой кислоты в препаратах LA-OA.

Исследование содержания олигомерных форм в комплексах а-ЛА с олеиновой кислотой.

Влияние связывания олеиновой кислоты на термостабильность алактальбумина, его сродство к Са и вторичную структуру.

Сравнение цитотоксичностей HAMLET и LA-OA комплексов.

Взаимодействие комплексов а-лактальбумин — олеиновая кислота с мембранами.

Взаимодействие комплексов а-ЛА-ОК с малыми униламеллярными везикулами дипальмитоилфосфатидилхолина.

Действие комплексов а-лактальбумина с олеиновой кислотой на ионные токи через плазмалемму Chara corallina.

Модифицирующее влияние интактного а-лактальбумина и свободной олеиновой кислоты на ионные токи через плазмалемму Chara corallina.

Взаимодействие а-ЛА-ОК комплексов с гистоном HI in vitro.