Линейно – специфический химеризм у больных гемобластозами после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.29, кандидат медицинских наук Желнова, Евгения Ивановна

• Желнова, Евгения Ивановна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Желнова, Евгения Ивановна

Список используемых сокращений Введение

Глава 1. Обзор литературы

Глава 2. Характеристика больных. Методы исследования

I. Группы обследованных больных

1.1. Группа больных, которым была проведена трансплантация аллогенного костного мозга в миелоаблативном режиме

1.2. Группа больных, которым была проведена ТКМ в режиме пониженной интенсивности

II. Методы исследования гемопоэтического химеризма в различных клеточных популяциях

II. 1. Выделение клеточных популяций II. 2. Используемые генетические маркеры II. 3. Выделение ДНК II. 4. Условия проведения ПЦР II. 5. Анализ продуктов ПЦР II. 6. Оценка полученных данных II. 7. Статистическая обработка данных

Глава 3. Результаты исследования

I. Результаты клинических исследований

I. 1. Результаты ТГСК после кондиционирования в миелоаблативном режиме

I. 2. Результаты ТГСК после кондиционирования в режимах пониженной интенсивности

II. Результаты лабораторных исследований

II. 1. Разделение клеточных популяций, выделение ДНК и выбор информативного молекулярного маркера

Глава 4.

Глава 5. Выводы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Линейно – специфический химеризм у больных гемобластозами после трансплантации аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.»

Актуальность проблемы

Аллогенная трансплантация гемопоэтических стволовых клеток (ТГСК) широко используется как эффективный метод терапии гематологических заболеваний, солидных опухолей и ряда наследственных болезней с середины 80-х годов XX века. Наибольшее распространение этот метод получил в лечении злокачественных заболеваний крови, таких как острые лейкозы (ОЛ), хронический миелолейкоз (ХМЛ), лимфопролиферативные заболевания (3,7,40,73).

Процедура аллогенной ТГСК, как правило, включает в себя интенсивную химиорадиоподготовку, уничтожающую большую часть как опухолевых, так и нормальных кроветворных клеток реципиента. Далее больному трансплантируются гемопоэтические стволовые клетки от совместимого донора — родственного или неродственного, с целью восстановления кроветворения за счет нормальных донорских кроветворных клеток. По данным различных групп исследователей, пятилетняя безрецидивная выживаемость после аллогенной ТГСК составляет 45-75% для больных ОЛ в первой ремиссии и ХМЛ в I хронической фазе, и 7-20% среди пациентов с рецидивами ОЛ или бластным кризом ХМЛ (8,68).

Успех аллогенной ТГСК, тем не менее, ограничивают многочисленные посттрансплантационные осложнения, в том числе те из них, которые возникают на фоне сложных клеточных взаимодействий между иммунокомпетентными клетками донора и реципиента, а также клетками органов-мишеней хозяина. К ним относятся отторжение трансплантата, развитие реакции «трансплантат против хозяина» (РТПХ), возникновение посттрансплантационных рецидивов основного заболевания. Каждое из перечисленных осложнений может привести к гибели больного (8,68). Поэтому изучение динамики приживления донорских гемопоэтических стволовых клеток (гемопоэтического химеризма) и определение ее связи с перечисленными осложнениями посттрансплантационного периода играет важнейшую роль для правильной оценки состояния больного и проведения дальнейших лечебных мероприятий.

Следует отметить, что особую актуальность исследование посттрансплантационного гемопоэтического химеризма приобрело в связи с развитием новых подходов к проведению аллогенной ТГСК: а именно, развитием трансплантации после немиелоаблативных режимов кондиционирования или режимов пониженной интенсивности. В основе этого подхода лежит, в первую очередь, использование иммуносупрессивного воздействия без интенсивного уничтожения кроветворения реципиента, что ведет к постепенному вытеснению хозяйского кроветворения и эрадикации опухолевого. клона иммунокомпетентными клетками донора. Этот подход позволил значительно уменьшить число токсических осложнений ТГСК и расширить показания к применению данного вида терапии. Аллогенная ТГСК стала использоваться для лечения больных старшей возрастной группы (старше 50 лет) и пациентов, страдающих тяжелой сопутствующей патологией. Внедрение новых методов проведения аллогенной ТГСК привело к развитию интереса к исследованию гемопоэтического химеризма как основного фактора, влияющего на исход трансплантации.

Таким образом, несмотря на то, что исследование гемопоэтического химеризма после аллогенной трансплантации проводится в течение многих лет, развитие новых методов ТГСК и использование трансплантации для лечения целого ряда новых патологий выявило, что до сих пор целый ряд вопросов остается нерешенным. Так, например, не определены стандартные сроки и частота исследования гемопоэтического химеризма. Нет также единого мнения о важности изучения и отдельного мониторирования химеризма в различных клеточных популяциях, в особенности - популяции Т-лимфоцитов, играющих основную роль в развитии таких посттрансплантационных реакций, как реакция трансплантат против хозяина и реакция трансплантат против лейкоза (РТПЛ). Так же не изучено значение химеризма в популяциях В-лимфоцитов и гранулоцитов периферической крови после ТГСК и его влияния на персистенцию минимальной остаточной болезни (МОБ) при разных формах гемобластозов. Нет данных проспективных исследований, которые позволили бы выявить значение исследований химеризма ядросодержащих клеток костного мозга реципиентов после ТГСК в сравнении с химеризмом клеточных популяций лейкоцитов периферической крови.

Более того, до настоящего момента нет общего подхода и не выработана единая стратегия по лечению больных в зависимости от типа обнаруженного химеризма в разные сроки после ТГСК и при различных заболеваниях. Нет единого мнения о сроках проведения таких терапевтических мероприятий, как отмена иммуносупрессии, трансфузии лимфоцитов донора (ТДЛ) при обнаружении персистенции хозяйского кроветворения после аллогенной ТГСК.

Таким образом, актуальность работы заключается как в определении закономерностей установления гемопоэтического химеризма после аллогенной ТГСК в разных режимах кондиционирования, так и в детальном изучении роли различных клеточных популяций в течении посттрансплантационного периода у больных разными видами опухолевых заболеваний крови.

Цель исследования: динамическое исследование реконституции кроветворной и иммунокомпетентной ткани у больных гемобластозами после аллогенной трансплантации гемопоэтических стволовых клеток

Задачи:

1. Определить тип химеризма и темпы его установления в различных клеточных популяциях периферической крови (Т, В- лимфоцитах, гранулоцитах) и в популяции мононуклеаров костного мозга у реципиентов аллогенных гемопоэтических стволовых клеток.

2. Выявить зависимость развития типа гемопоэтического химеризма у больных гемобластозами после аллогенной ТГСК от режимов предтрансплантационного кондиционирования, источника стволовых клеток, основного заболевания, вида профилактики РТПХ.

3. Определить влияние типа линейно-специфического химеризма на вероятность развития реакции «трансплантат против хозяина» и посттрансплантационного рецидива.

4. Изучить влияние феномена длительного существования смешанного химеризма на динамику минимальной остаточной популяции опухолевых клеток у больных, которым выполнили аллогенную ТГСК.

5. Определить оптимальную для мониторинга химеризма клеточную популяцию.

6. Разработать алгоритм ведения пациентов с длительно сохраняющимся смешанным гемопоэтическим химеризмом или убывающим донорским химеризмом после аллогенной ТГСК с целью профилактики развития посттрансплантационного рецидива.

Научная новизна.

В настоящей работе проведено проспективное исследование линейно-специфического гемопоэтического химеризма у больных гемобластозами, перенесших аллогенную ТГСК после миелоаблативных и режимов кондиционирования пониженной интенсивности. Выявлено влияние типа химеризма на развитие важнейших осложнений посттрансплантационного периода (острой и хронической РТПХ, рецидивов основного заболевания). Изучено влияние типа гемопоэтического химеризма на персистенцию остаточного лейкемического клона у больных после аллогенной ТГСК.

Научно-практическая ценность.

Разработан протокол исследования гемопоэтического химеризма и минимальной остаточной болезни у больных после аллогенной ТГСК в зависимости от основного заболевания и типа химеризма в разные сроки после трансплантации. Предложен алгоритм ведения больных с персистирующим смешанным или убывающим донорским химеризмом с использованием отмены иммуносупрессии и проведением трансфузий донорских лимфоцитов (ТДЛ) как методов профилактики посттрансплантационного рецидива.

Положения, выносимые на защиту.

1. Восстановление донорского гемопоэза после аллогенной ТГСК происходит во всех исследованных популяциях клеток вне зависимости от примененного режима кондиционирования (миелоаблативного или пониженной интенсивности).

2. Определение смешанного гемопоэтического химеризма в любой клеточной популяции является фактором высокого риска развития посттрансплантационного рецидива.

3. Исследование типа химеризма в раздельных клеточных популяциях (а именно - в остаточной популяции мононуклеаров периферической крови) позволяет выявить группу пациентов с наибольшим риском развития посттрансплантационных рецидивов.

4. Быстрое установление полного донорского химеризма во всех клеточных популяциях и его длительное и продолжительное существование коррелирует с развитием острой РТПХ у подавляющего большинства пациентов.

5. Разработанный алгоритм ведения больных со смешанным гемопоэтическим химеризмом позволяет предотвратить развитие рецидива у большинства пациентов.

Заключение диссертации по теме «Гематология и переливание крови», Желнова, Евгения Ивановна

Выводы:

1. Восстановление донорского кроветворения происходит в одни и те же сроки у больных гемобластозами, перенесших аллогенную ТГСК после миелоаблативного режима кондиционирования, и у пациентов, подвергнутых трансплантации в режиме пониженной интенсивности

2. Не выявлено статистически значимых различий в скорости установления полного донорского химеризма в клетках, принадлежащих миелоидной и лимфоидным популяциям, однако отмечена тенденция к более раннему установлению полного донорского химеризма в гранулоцитарной фракции.

3. Обнаружена высокая корреляция возникновения посттрансплантационных рецидивов с определением смешанного гемопоэтического химеризма хотя бы в одной клеточной популяции у больных в течение года после аллогенной ТГСК (р = 0,005).

4. Наиболее значительной оказалась ассоциация смешанного гемопоэтического химеризма с возникновением рецидива для пациентов, страдающих острыми лейкозами и МДС группы высокого риска (р = 0,0005).

5. При исследовании значения химеризма в отдельных клеточных популяциях, обнаружена статистически значимая зависимость между определением смешанного химеризма в популяции мононуклеаров периферической крови после отделения Т- и В-лимфоцитов и развитием посттрансплантационного рецидива (р<0,0001).

6. Выявлена высокая степень корреляции между быстрым установлением полного донорского химеризма во всех клеточных популяциях (в течение 1 месяца после ТГСК), его постоянным существованием и развитием острой РТПХ (р < 0,0001).

7. При исследовании химеризма в различных клеточных популяциях периферической крови не было выявлено статистически значимых различий по сравнению с исследованием химеризма в ядросодержащих клетках костного мозга

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Желнова, Евгения Ивановна, 2008 год

1. Воробьев А.И. Руководство по гематологии.// Издание 4. М. Ньюдиамед 2007, стр. 181-249.

2. Демидова И.А. Автореферат// Диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук. Динамика восстановления кроветворения и гемопоэтический химеризм у больных гемобластозами после тнасплантации аллогенного костного мозга. Москва 1997.

3. Менделеева Л.П., Савченко В.Г., Любимова Л.С.// Осложнения адоптивной иммунотерапии рецидива лейкоза после алло-миелотрансплантации. Проблемы гематологии 2002, №3, стр55-56.

4. Кайдалова А.И., Смирнова О.В., Сурин В.Л., Соловьев Г.Я.// Оценка частоты встречаемости полиморфных аллелей локуса DXS52 Х-хромосомы человека в московской популяцию. Генетика 1994, ТЗОб, №7, стр.966-968.

5. Мисюрин А.В., Сурин В.Л. Соловьев Г.Я.// Определение частоты встречаемости аллельных вариантов гена фактора фон Виллебрандта на основе полиморфизма числа тандемных повторов из 40-го интрона этого гена. Генетика, 1994, Т30, №5, стр.713-717.

6. Любимова Л.С., Савченко В.Г., Менделеева Л.П., и др.// Токсические осложнения у реципиентов костного мозга. Тер. Архив 1999, №7, стр.27-32.

7. Савченко В.Г., Паровичникова Е.Н., Любимова Л.С., Менделеева Л.П.// Трансплантация костного мозга при острых миелоидных лейкозах: аргументы за и против. Тер.архив 1993, №7, стр.7-15.

8. V.Savchenko, L.Mendeleeva, L.lubimova, E.Parovitchnikova.// Donor lymphocyte infusions in the treatment of AML patients relapsed after allogenic BMT. Acute Leukemia V.5 Experimental approaches and management of refractoiy diseases. 1996; pp.383-385

9. Akpek G., Zahurak M.L. Piantadosi S. at al.// Development of a prognostic model for grading chronic graft versus - host disease. Blood 2001, V97, pp.1219-1226.

10. Alimena G, De Guia MR, Mecucci C et al.// Cytogenetic follow-up after allogeneic bone marrow transplantation for Ph'-positive chronic myelogenous leukemia. Bone Marrow Transplantation 1990, №5, pp.119-127.

11. Alizadeh M, Bernard M, Danic B at al.// Quantitative assessment of hematopoietic chimerism after bone marrow transplantation by real-time quantitative polymerase chain reaction. Blood 2002; V99, pp.4616-4625.

12. Anderson D, Bilingham RE, Lampkin GH at al.// The use of skin grafting to distinguish between monozygotic and dizygotic twins in cattle. Heredity 1951; №5, pp.379-397

13. Antin JH, Childs R, Filipovich AH.// Establishment of complete and mixed donor chimerism after allogeneic lymphohematopoietic transplantation: recommendation from a workshop at the 2001 tandem meetings.

14. Aleya EP Kim HT, Ho V et al// Comparative outcome of nonmyeloablative and myeloablative allogeneic hematopoietic cell transplantation for patients older then 50 years of age. Blood 2005, V105, pp.1810-1814.

15. Appelbaum FR.// Hatmatopoietic cell transplantation as immunotherapy. Nature 2001, N411, pp.385-389

16. Appelbaum FR.// The current status of hematopoietic cell transplantation. Annu Rev Med 2003, N54, pp.491-512.

17. Bader P, Niethammer D, Willasch A at al.// How and when should we monitor chimerism after allogeneic stem cell transplantation? Bone Marrow Transplant 2005, N35, pp.107-119.

18. Bader P, Hoelle W, Klingebiel T at al.// Quantitative assessment of mixed hematopoietic chimerism by polymerase chain reaction after allogeneic BMT. Anticancer Res 1996, N16, pp. 1759-1763.

19. Bader P, Hancock J, Kreyenberg H et al.// Minimal residual disease (MRD) status prior to allogeneic stem cell transplantation is a powerful predictor for post-transplant outcome in children with ALL. Leukemia 2002, V16, pp.1668-1672.

20. Bader P, Beck J, Frey A at al.// Serial and quantitative analysis of mixed hematopoietic chimerism by PCR in patients with acute leukemias allows the prediction of relapse after allogeneic BMT. Bone Marrow Transplant 1998, N21, pp.487-495.

21. Bader P, Stoll K, Huber S et al.// Characterization of lineage-specific chimerism in patients with acute leukaemia and myelodysplastic syndrome after allogeneic stem cell transplantation before and after relapse. Br J Haematol 2000; V108, pp.761-768.

22. Barker JN., Wagner JE.// Umbilical cord blood transplantation: current state of the art. Curr Opin Oncol 2002, N14, pp.160-164.

23. Barrett A. J., Savani B.N.// Stem cell transplantation with reduced -intensity conditioning regimens: a review of ten years experience with new transplant concerts and new therapeutic agents. Leukemia. 2006; V20, pp. 1661-1672.

24. Barrios M, Jimenez-Velasco A, Roman-Gomez J et al.// Chimerism status is a useful predictor of relapse after allogeneic stem cell transplantation for acute leukemia. Haematologica 2003; N88, pp.801-810.

25. Baron F, Baker JE, Storb R et al.// Kinetics of engraftment in patients with hematological malignancies given allogeneic hematopoietic cell transplantation after nonmyeloablative conditioning. Blood 2004; pub.ahead.

26. Bentz M., Cabot G., Moos at al.// Detection of chimeric BCR-ABL genes on bone marrow samples and blood smears in chronic myeloid and acute lymphoblastic leukemia by in situ hybridization. Blood 1994, V83, pp. 1922-1928

27. Bearman B., Appelbaum F., Buckner D. at al.// Regimen related toxicity in patients undergoing bone marrow transplantation. Clinical Oncolologi 1998, V16, № 10, pp. 1562-1568.

28. Bertheas MF, Maraninchi D, Lafage M at al.// Partial chimerism after T-cell-depleted allogeneic bone marrow transplantation in leukemic HLA-matched patients: a cytogenetic documentation. Blood 1988, V72, pp.89-93.

29. Bertheas MF, Lafage M, Blaise D at al.// Mixed chimarism after allogeneic bone marrow transplantation for leukemias. Bone Marrow Transplant 1990, N6: pp.61-63.

30. Bielorai B, Trakhtenbrot L, Amariglio N at al.// Multilineage hematopoietic engraftment after allogeneic peripheral blood stem cell transplantation without conditioning in SCID patients. Bone Marrow Transplant 2004, N34, pp.317-320.

31. Blaise D, Vey N, Faucher C, Mohty M.// Current Status of reduced intencity conditioning allogeneic stem cell transplantation for acute myeloid malignancies. Blood 2007, V23, pp.1567-1575

32. Blazar BR, Orr HT, Arthur DC, at al.// Restriction fragment length polymorphisms as markes of engraftment in allogeneic marrow transplantation. Blood 1985, V66. pp. 1436-1444.

33. Boerwinkle E., Xiong W., Fourest E., Chan L.// Rapid typing of tandemly repeated hypervariable loci by the polymerase chain reaction: application to the apolipoprotein B 3' hypervariable region. Proc.Natl.Acad.Sci USA. 1989, N86, pp.212-216.

34. Bordignon C, Carlo-Stella C, Colombo MP, De Vincentiis A, Lanata L, at al.// Cell therapy: achievements and perspectives. Haematologica 1999, N84, pp.1110-1149.

35. Bornhauser M, Thiede C, Platzbecker U et al.// Dose-reduced conditioning and allogeneic hematopoietic stem cell transplantation from unrelated donors in 42 patients. Clin Cancer REs 2001, N7, pp.2254-2262.

36. BraunR.A., Wolf S.N., Fay J. at al. //Blood 1995, V85, №5, pp.1391-1395.

37. Brodsky RA, Smith BD.// Bone maroow transplantation for autoimmune diseases. Curr Opin Oncol 1999, N11, pp. 83-86.

38. Brunei S, Casals T, Madoz P at al.// DNA polymorphism as implant markers in allogeneic bone marrow transplantation. Preliminary evaluation. Med Clin 1989, N93, pp.765-771.

39. Childs R, Clave E, Contentin N at al.// Engraftment kinetics after nonmyeloablative allogeneic peripheral blood stem cell transplantation: full donor T-cell chimerism precedes alloimmune responses. Blood 1999, V94, pp.3234-3241.

40. Casado LF, Steegmann JL, Pico M et al.// Stady of chimerism in long-term survivors after bone marrow transplantation for severe acquired aplastic anemia. Bone Marrow Transplant. 1996, N18, pp.405-409.

41. Casarino L, Carbone C, Capucci MA at al.// Analysis of chimerism after bone marrow transplantation using specific oligonucleotide probes.// Bone Marrow Transplant 1992, N10, pp.165-170.

42. CIBMTR (Center for International Blood and Marrow Transplantai Research).Volume 12 Issue 1 May 2006

43. Choi S J, Lee KH, Lee JH et al.// Prognostic value of hematopoietic chimerism in patients with acute leukemia after allogeneic bone marrowtransplantation: a prospective study. Bone Marrow Transplant 2000, N26, pp.327-332.

44. Collins Jr RH, Shpilberg O, Drobyski WR Porter Dl, Giralt S, et al.// Donor leukocyte infusions in 140 patients with relapsed malignancy after allogeneic bone marrow transplantation. J Clin Oncol 1997; V15, pp.443-444.

45. Cotteret S, Belloe F, Boiron JM et al.// Fluorescent in situ hybridisation on flowsorted cells as a tool for evaluating mrd after allogenic bone marrow transplantation. Cytometry 1998, 15,35 (5),pp.216-222.

46. Djulbegovic B., Seidenfield J., Bonnell C., Kumar A.// Nonmyeloablative allogeneic stem cell transplantation for hematological malignancies: a systematic review. Cancer control. 2003, N10, pp.17-41.

47. De Lima M, John LS, Wieder ED et al.// Double-chimaerism after transplantation of two human leucocyte antigen mismatched, unrelated cord blood units. Br J Haematol 2002, VI19, pp.773-776.

48. Dermime S, Mavroudis D, Jiang YZ, Hensel N at aX.ll Immune escape from a graft-versus-leukemia effect may play a role in the relapse of myeloid leukemias following allogeneic bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplant 1997; N19, pp.989-999;

49. DeWeger RA, Tilanus MG, Scheidel KC at al.// Monitoring of residual disease and guided donor leucocyte infusion after allogeneic bone marrow transplantation by chimerism analysis with short tandem repeats. Br J Haematol 2000, VI10, pp.647-653.

50. Diaz MA, Kanold J, Vicent MG et al.// Using peripheral blood progenitor cells (PBPC) for transplantation in pediatric patients: a state-of-the-art review. Bone Marrow Transplant 2000, N26, pp.1291-1298.

51. Diaconescu R, Flowers CR, Storer B et al.// Morbidity and mortality with nonmyeloablative compared to myeloablative conditioning before hematopoietic cell transplantation from FILA matched related donors. Blood 2004, VI04, pp. 961-968

52. Djulbegovic B, Seidenfeld J, Bonnell C et al.// Nonmyeloablative allogeneic stem-cell transplantation for hematologic malignancies: a systematic review. Cancer Control 2003, V10, pp. 17-41.

53. Durnam DM, Anders KR, Fisher L et al.// Analysis of the origin of marrow cells in bone marrow transplant recipients using a Y-chromosome-specific in situ hybridization assay. Blood 1989, V74, pp.2220-2226;

54. Elfenbein GJ, Brogaonkar DS, Bias WB, at al.// Cytogenetic evidence for reccurrence of acute myelogenous leukemia after allogeneic bone marrow transplantation in donor hematopoietic cells. Blood 1978, V52, pp.627-636.

55. Feinstein LC, Sandmaier BM, Hegenbart U et al.// Nonmyeloablative allografting from human leucocyte antigen-identical sibling donors for treatment of acute myeloid leukemia in first complete remission. Br J Haematol 2003, VI20 pp.281-288.

56. Fehse B, Chukhlovin A, Kuhlcke K at al.// Real-time quantitative Y chromosome-specific PCR (QYCS-PCR) for monitoring hematopoietic chimerism after sex-mismatched allogeneic stem cell transplantation. J Hematother Stem Cell Res 2001, V10, pp.419-425.

57. Fialkow PJ, Thomas ED, Bryant JI, Neiman PE.// Leukemic transformation of engrafted human marrow cells in vivo. Lancet 1972, N1, pp. 1310-1313.

58. Ford C.// Cytological identification of radiation chimaeras. Nature 1956, VI77, pp.452-454

59. Forman SJ, Blume KJ, Thomas ED.// Bone Marrow Transplantation. Blackwell Scientific Publications, 1994, pp.136-149, pp.204-220.

60. Formankova R, Honzatkova L, Sieglova Z et a 1.// Detailed monitoring of hematopoietic chimerism in a child treated by adoptive immunotherapy for high risk of relapse after BMT for acute myeloid leukemia. Bone Marrow Transplant 2000, N25, pp.453-456.

61. Formankova R, Sedlacek P, Krskova L et al.// Chimerism-directed adoptive immunotherapy in prevention and treatment of post-transplant relapse of leukemia in childhood. Haematologica 2003, V88, pp.117-118

62. Frsdriksson M, Barbany G, Liljedahl U at al.// Assessing hematopoietic chimerism after allogeneic stem cell transplantation by multiplexed SNP genotyping using microarrays and quantitative analysis of SNP alleles. Leukemia 2004, VI8, pp.255-266.

63. Gale R.P., Horowitz M.M., Rees J.K.H. at al. Chemotherapy versus transplants for AML in second remission.// Leukemia/ 1996. - Vol.10.- pp.13-19.

64. Gaziev J, Lucarelli G.// Stem cell transplantation for hemoglobinopathies. Curr Opin Pediatr 2003, N15, pp.24-31.

65. Gerritsen W., Jagiello C. Bourhis J. Detection of chimerism in subpopulations of cells by fluorescence in situ hybridization and immunofluorescent staining of cell surface antigens.// BMT1994, N13, pp.441-447

66. Gardiner N., Lawler M., Riordan J. et al// Monitoring lineage-specific chimerism allows early prediction of response following donor lymphocyte infusions for relapsed chronic myeloid leukemia. BMT 1998, N21, pp.711-719.

67. Giralt S., Estey E., Abitar M. at al.// Engraftment of allogeneic hematopoietic progenitor cells with purine analog-containing chemotherapy: harnessing graft versus leukemia without myeloablative therapy. Blood 1997, V89, pp.4531-4536.

68. Ginsburg D, Antin JH, Smith BR, et al.// Origin of cell populations after bone marrow transplantation analysis using DNA sequence polymorphisms. Journal of Clinical Investigations 1985, V75, pp.596-603.

69. Goh K, Klemperer MR.// In vivo leukemic transformation: Cytogenetic evidence of in vivo leukemic transformation of engrafted marrow cells. American Journal of Hematology 1977, N3, pp.283-290.

70. Gomez JR, Garcia MJ, Serrano J et al.// Chimerism analysis in long-term survivor patients after bone marrow transplantation for severe aplastic anemia. Haematologica 1997, N82, pp.588-591.

71. Gonzales M., Lopez-Perez R., Garcia-Sanz R., Perez-Simon JA., San Miguel JF.// Debate round-table: Comments concerning chimerism stadies. Leukemia. 2001, VI5, pp. 1986-1988.

72. Grigg A, Bardy P, Byron et al.// Fludarabine-based non-myeloablative chemotherapy followed by infusion of HLA -identical stem cells for relapsed leukaemia and lymphoma. Bone Marrow Transplant 1999;N23, pp. 107-108.

73. Guimond M, Busque L, Baron C et al.// Relapse after bone marrow transplantation: evidenct immunological mechanisms between adult and pediatric populations. Br J Haematol 2000, V109, pp.130-137.

74. Gupta V, Lazarus HM, Keating A.// Myeloablative conditioning regimens for AML grafts: 30 years later. Bone Marrow Transplant 2003, N32, pp.969-978.

75. Hendriks EC, de Man AJ, van Berkel YC et al.// Flow cytometric method for the routine follow-up of red cell populations after bone marrow transplantation. Br J Hematol 1997, V97, pp.141-145.

76. Hill GR., Ferrara JL.// The primacy of gastrointestinal tract as a target organ of acute graft — versus host disease: rationale for the use of cytokine shields in allogeneic bone marrow transplantation. Blood 2000, V95, pp.2754-2759.

77. Hoelle W, Beck JF, Dueckers G et al.// Clinical relevance of serial quantitative analysis of hematopoietic chimerism afterallogeneic stem cell transplantation in children for severe aplastic anemia. Bone Marrow Transplant 2004, N33, pp.219-223

78. Hoelle W, Kreyenberg H, Lang P et al.// Haematopoietic chimerism and donor lymphocyte infusion after allogeneic SCT in children with non malignant diseases: is there an option to improve outcome? Klin Paediatr2004,33,pp:219-223.

79. Horn G.T., Richards B, Klinger K.W.// 1989. Amplification of a highly polymorphic VNTR segment by the polymerase chain reaction. Nucleic Acid Res. N17, pp.2140

80. Junghanss C, Boeckh M, Carter RA et al// Incidence and outcome of cytomegalovirus infections following nonmyeloablatve compared with myeloablative allogeneic stem cell transplantation, a matched controlled study. Blood 2002, V99, pp.1978-1985.

81. Kern W, Schoch C, Haferlach T.// Monitoring of minimal residual disease in acute myeloid leukemia. Hematology 2005, V56, pp.283-309.

82. Knechtli CJ, Goulden NJ, Hancock JP et al.// Minimal residual disease status as a predictor of relapse after allogeneic bone marrow transplantation for children with acute lymphoblastic leukaemia. Br.J.Haematol 1998, VI02, pp.860-871.

83. Knowlton RG, Brown VA, Braman JC, at al.// Use of highly polymorphic DNA probes for genotypic analysis following bone marrow transplantation. Blood 1986, V68, pp.378-385.

84. Khan F, Agarwal A, Agarwal S.// Significance of chimerism in hematopoietic stem cell transplantation: new variations on an old theme Bone Marrow Transplant 2004, N34, pp. 1-12

85. Kolb HJ, Schattenberg A, Goldman YM, Hertenstein B, Jacobsen N, at al.// Graft-versus-leukemia effect of donor lymphocyte transfusions in marrow grafted patients. Blood 1995, V86, pp.2041-2050.

86. Kristt D, Stein J, Yaniv I, Klein T.// Assessing quantitative chimerism longitudinally: technical considerations, clinical applications and routine feasibility. Bone Marrow Transplantation 2007, N39, pp.255-268.

87. Kobzev Y., Domracheva E., Zakharova A.// Fluorescence in situ hybridization studies of interphase nuclei for assessing response to therapy in patients with chronic myeloid leukemia. Cancer Genetics and Cytogenetics 1998, N106, pp. 128-134.

88. Korver K, de Lange GG, van den Bergh R1 at al.// Lymphoid chimerism after allogeneic bone marrow transplantation. Y-chromatin staining of peripheral T and B lymphocytes and allotyping of serum immunoglobulinas. Transplantation 1987, V44, pp.643-650.

89. Lamb Jr LS, Robbins NF, Abhyankar S et al.// Flow cytometric cell sorting combined with molecular chimerism analysis to detect minimal recurrent leukemia: good news and bad news. Bone Marrow Transplant 1997, N19 pp.1157-1161.

90. LapointeC., Forest L., Lussier P.// Sequential analysis of early hematopoietic reconstitution following allogeneic bmt with fluorescence in situ hybridization (FISH). BMT 1996, N17, pp. 1143-1148.

91. Lawler M, Mc Cann SR, Conneally E at al.// Chimerism following allogeneic bone marrow transplantation: detection of residual host cell using the polymerase chain reaaction. Br J haematol 1989, V73, pp.205-210.

92. Lawler M, Humphries P, McCann S.// Evalution of mixed chimerism by in vitro amplification of dinucleotide repeat sequence using the polymerase of dinucleotide repeat sequences using the polymerase chain reaction. Blood 1991, V77, pp.2504-2514

93. Lawler SD, Barker MC, Harris H, Morgenstern CR.// Cytogenetics studies on recipients of allogeneic transplantation.British Journal of Hematology 1985, V57, pp.232-233.

94. Lawler M, Mc Cann SR, Gardiner N et al.// Mixed chimerism predicts graft rejection following BMT for severe aplastic anemia. Bone Marrow Transplant 1995, N15, pp64. (abstract)

95. Lion T, Daxberger H, Dubovsky J at al.// Analysis of chimerism within specific leucocyte subsets for detection of residual or recurrent leukemia in pediatric patients after allogeneic stem cell transplantation. Leukemia 2001, VI5, pp.307-310.

96. Lo YM, Tein MS Lau TK at al.// Quantitative analysis of fetal DNA in maternal plasma and serum: implications for noninvasive prenatal diagnosis. Am J Hunt Genet 1998, N62, pp.768-775.

97. Maas F, Schaap N, Kolen S at al.// Quantification of donor and recipient hemopoietic cell by real-time PCR of single nucleotide polymorphisms. Leukemia 2003, V17, pp.621-629.

98. Mangioni S, Balduzzi A, Rivolta A at al.// Long-term persistence of hematopoietic chimerism following sex-mismatched bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplant 1997, N20, pp.969-973.

99. McCann S, Lawler M.// Mixed chimerism; detection and significance following BMT. Bone Marrow Transplant 1993, N11, pp.91-94.

100. McCann SR, Lawler M, Humphries P.// Mixed chimerism. Br J Haematol 1991, V77, pp.257.

101. McSweeney PA, Niederwieser D, Shizuru JA et al.// Hematopoietic cell transplantation in older patients with hematologic malignancies:replacing highdose cytotoxic therapy with graft-versus-tumor effects. Blood 2001, V97 pp.3390-3400.

102. Mohty M., Kuentz M., Michallet M. at al// Chronic graft versus - host disease after allogeneic blood stem cell transplantation: long - term results of a randomized study. Blood 2002, V100, pp. 3128-34.

103. Molloy K, Goulden N, Lawler M et al.// Patterns of hematopoietic chimerism following bone marrow transplantation for children acute lymphoblastic leukemia from volunteer unrelated donors. Blood 1996, V87, pp.3027-3031.

104. Mullis KB.// The unusual origin of the polymerase chain reaction. Sci Am 1990, N262, pp.56-61

105. Newburger PE, Latt SA, Pesando JM, at al.// Leukemic relapse in donor cell after allogeneic bone marrow transplantation. Neu England Journal of Medicine 1981, V304, pp.712-714.

106. Niethammer D, Goldmann SF, Flad HD at al.// Split chimerism in three patients suffering from severe combined immunodeficiency (SCID). Haematol Blood Transfus 1980, V25, pp.391-401

107. Oberkircher AR, Strout MP, Herzig GP// Description of an efficient and highly informative method for the evaluation of hematopoietic chimerism following allogeneic one marrow transplantation. Bone Marrow Transplant 1995; N16, pp.695-702.

108. O'Dwyer ME., Mauro MJ., Druker BJ.// Recent, advancements in the treatment of chronic myelogenous leukemia. Annu Rev Med 2002, N53 pp.369-381.

109. Offit K, Burns JP, Cunningham I at al// Cytogenetic analysis of chimerism and leukemia relapse in chronic myelogenous leukemia patients after Tcell-depleted bone marrow transplantation. Blood 1990, N75, pp. 1346-1355.

110. Ortega M, Escudero T, Caballin MR at al.// Follow-up of chimerism in children with hematological diseases after allogeneic hematopoietic progenitor cell transplants. Bone Marrow Transplant 1999, N24, pp.81-87.

111. Perez-Simon JA, Caballero D, Diez-Campelo M et al.// Chimerism and minimal residual disease monitoring after reduced intensity conditioning (RIC) allogeneic transplantation. Leukemia 2002, V16, pp.1423-1431.

112. Petit T, Raynal B, Socie G et al.// Highly sensitive polymerase chain reaction methods show the frequent survival of recipient multipotent progenitors after non-T cell-depleted bone marrow transplantation. Blood 1994, V8 pp.3575-3583;

113. Petz LD, Yam P, Wallace RB, et al.// Mixed hematopoietic chimerism following bone marrow transplantation for hematological malignances. Blood 1987, V70, pp.1331-1337.

114. Petz LD.// The use of the them chimera in bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplantation 1989, N4, pp. 139-140 (reply)

115. Pugatsch T, Aker M, Shapiro M. Et al.// Kinetics of engraftment post non-myeloablative stem cell transplantation (full donor chimerism). Blood 2000, V96 (Suppll), pp.172.

116. Ramirez M, Diaz MA, Garcia-Sanchez F at al.// Chimerism after allogeneic hematopoietic cell transplantation in childhood acute lymphoblastic leukemia. Bone Marrow Transplant 1996, N18, pp.1161-1165.

117. Roman et al, Hematologica 2000

118. Rose HJ. A// Handbook of Greek Mythology. Routledge: London and New York, 1989.

119. Roux E, Helg C, Chapuis B et al.// Evolution of mixed chimerism after allogeneic bone marrow transplantation as determined on granulocytes and mononuclear cells by the polymerase chain reaction. Blood 1992, V72 pp.2775-2783.

120. Roy DC, Tantravahi R, Murray C et al.// Natural histori of mixed chimerism after bone marrow transplantation with CD6-depleted allogeneic marrow: a stable equilibrium. Blood 1990, V75, pp.296-304.

121. Sachidanandam R, Weissman D, Schmidt SC at al. //A map of human genome sequence variation containing 1,42 million single nucleotide polymorphisms. Nature 2001, V409, pp.928-933.

122. Schmitz N, Godde-Salz E, Loffler H.// Cytogenetic studies on recipients of allogeneic bone marrow transplants after fractionated total body irradiation. British Jornal of Haematology 1985, V60, pp.239-245.

123. Schattenberg A, de Witte T, Salden M at al.// Mixed hematopoietic chimerism after allogeneic transplantation with lymphocyte-depleted bone marrow is not associated with a higher incidence of relapse. Blood 1989, V73, pp.1367-1372

124. Schaap N, Schattenberg A, Mensink E et al.// Long-term follow-up of persisting mixed chimerism after partially T-cell-depleted allogeneic stem cell transplantation. Leukemia 2002, V16, pp.13-21.

125. Scharf SJ, Smith AG, Hansen JA at al.// Quantitative determination of bone marrow transplant engraftment using fluorescent polymerase chain reaction primers for human identity markers. Blood 1995, V85, pp. 1954-1963

126. Shimoni A., Nagler A.// Non-myeloablative stem cell tramsplantation (NST): chimerism testing as guidance for immune-therapeutic manipulations. Leukemia 2001, V15, pp.1967-1975.

127. Scott B.L., Sandmayer B.M. Outcomes with myeloid malignancies. Hematology 2006, V6, pp.381-389.

128. Scott BL, Sandmaier BM.// Reduced Intensity Allogeneic Bone Marrow Transplantation. Outcomes with myeloid malignancies. ASH Educational Book (Hematology 2006) pp.381-389.

129. Shlomchik WD., Couzens MS., Tang CB. at al.// Prevention of graft versus host disease by inactivation of host antigen-presenting cells. Science 1999; V285, pp.412-415.

130. Seong CM, Giralt S, Kantarjian H et al.// Early detection of relapse by hypermetaphase fluorescence in situ hybridization after allogeneic bone marrowtransplantation for chronic mieloid leukemia. J Clin Oncol 2000, VI8 pp.1831-1836.

131. Socie G, Lawler M, Gluckman E et al.// Studies on hemopoietic chimerism following allogeneic bone marrow transplantation in the molecular biology era. Leuk Res 1995, VI9, pp.497-504

132. Sparkes R.// Cytogenetic analysis in human bone marrow transplantation. Cancer Genet Cytogenet 1981, V4, pp.345-3 52.

133. Starzl E.Thomas.// Chimerism and tolerance in transplantation. PNAS 2004; October 5,V101, pp.14607-14614

134. Storb R.// Nonmyeloablative preparative regimens: how relevant for acute myelogenous leukemia? Leukemia 2001, VI5, pp.662-663.

135. Suttorp M, Schmitz N, Dreger P at al.// Monitoring of chimerism after allogeneic bone marrow transplantation with unmanipulated marrow by use of DNA polymorphisms. Leukemia 1993, V7, pp.679-687.

136. Thiede C.// Diagnostic chimerism analysis after allogeneic stem cell transplantation. Am J Pharmacogenomics 2004, V4, pp. 177-187.

137. ThiedeC, Bornhauser M, Ehninger G.// Strategies and clinical implications of chimerism diagnosis after allogeneic hematppoietic stem cell transplantation. Acta Haematol 2004, VI12, pp.16-23.

138. Thiede C, Lutterbeck K, Oelschlangel U et al.// Detection of relapse by sequential monitoring of chimerism in circulating CD 34+ cells. Ann Hematol 2002, V81, S27-S28.

139. Thiede C, Florek M, Bornhauser M at al.// Rapid quantification of mixed chimerism using multiplex amplification of short tandem repeat markers and fluorescence detection. Bone Marrow Transplant 1999, N23, pp. 1055-1060.

140. Thiele J, Wiekenhauser C, Kvasnicka HM at al.// Mixed chimerism of erythro- and megakaryopoiesis following allogeneic bone marrow transplant. Acta Haematol 2003, V109, pp.176-183

141. Thiele J, Wiekenhauser C, Kvasnicka HM at al.// Dynamics of lineage-restricted mixed chimerism following sex-mismatched allogeneic bone marrow transplantation. Histol Histopathol 2003, VI8, pp.557-574.

142. Thomas ED, Storb B, Clift RA et al.// Bone marrow transplantation. N Engl J Med. 1975, V292, pp.832-843

143. Thomas ED.// Bone marrow transplantation: a review. Semin Hematol 1999, V36, pp.95-103.

144. Thomas ED, Blume KG, Forman SJ.// Hematopoietic Cell Transplantation, 2nd edn. Blackwell Science, Inc:Malden, Massachusetts, USA, 1999.

145. Thomas ED, Bryant JI, Buckner CD, et al.// Leukemic transformation of engrafted human marrow cells in vivo. Lancet 1972, N1, pp.1310-1313.

146. Truitt RL, Atasoylu AA.// Impact of pretransplant conditioning and donor T-cells on chimerism, graft-versus-host disease, graft-versus-leukemia reactivity, and tolerance after bone marrow transplantation. Blood 1991, V77, N11 pp.2515-2523.

147. Trigg M.E.// Milestones in the development of pediatric hematopoietic stem cell transplantation 50 yers of progress. Pediatr Transplant 2002, V6, pp.465-474.

148. Ugozzoli L, Yam P, Petz LD at al.// Amplification by polymerase chain reaction of hypervariable regions of the human genom for evaluation of chimerism after bone marrow transplantation. Blood 1991, V77, pp.1607-1615.

149. Uharek L, Gassman W, Glass B, at al.// Influence of cell done and graft-versus-host reacctivity on rejection rates after allogeneic bone marrow transplantation. Blood 1992, V79, pp. 1612-1615

150. Van Leewen JE, van Toi MJ, Bodzinga BG at al.// Detection of mixed chimaerism in flow-sorted cell subpopulations by PCR-amplified VNTR markers after allogeneic bone marrow transplantation. Br J Haematol 1991, V79 pp.218-225

151. Van der Velden VH, Hochhaus A, Cazzaniga G et al.// Detection of minimal residual disease in hematologic malignancies by real-time quantitative PCR: principles, approaches, and laboratory aspects. Leukemia 2003, VI7, pp.1013-1034.

152. Van Leewen JE, van Toi MJ, Joosten AM et al.// Mixed T-lymphoid chimerism after allogeneic bone marrow transplantation for hematologicmalignancies of children is not correlated with relapse. Blood 1993, Y82 pp.1921-1928.

153. Vincent PC, Young GAR, Singh S et al.// Ph1 negative haematological chimaerism after marrow transplantation in Ph' positive chronic granulocyte leukemia. British Jornal ofHaematology 1986,V63, pp.181-185.

154. Vogel et al., J// Cancer Res Clin Oncol 2005.

155. Winiarski J, Gustafsson A, Wester D et al.// Follow-up of chimerism, including T-and B-lymphocytes and granulocytes in children more then one year after allogeneic bone marrow transplantation. Pediatr Transplant 2000, V4 pp.132-139.

156. Winiarski J, Mattsson J, Gustafsson A et al.// Engraftment and chimerism, particularly of T and B-cells, in children undergoing allogeneic bone marrow transplantation. Pediatr Transplant 1998, V2, pp. 150-156.

157. Yam PY, Petz LD, Knowlton RG, at al.// Use of DNA restriction fragment length polymorphisms to document engraftment and mixed hematopoietic chimerism following bone marrow transplantation. Transplantation 1987, V43 pp.399-407.