Клинико-диагностическое значение определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека с использованием фотохимического взаимодействия белков с п-диметиламинобензальдегидом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат медицинских наук Никитенко, Екатерина Александровна

• Никитенко, Екатерина Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Никитенко, Екатерина Александровна

С1ШСОКИСПОЛЬЗОВАЬШЬ1ХСОКРА11рНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ПРОБЛЕМЫ ПОИСКА И ВНЕДРЕНИЯ НОВЫХ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕДУР ОПРЕДЕЛЕНИЯ

ИММУНОГЛОБУЛИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).

1.1. Проблемы валидации и верификации новых методов исследования.

1.2. Валидационные параметры.

1.3. Рекомендации по определению валидационных параметров.

1.3.1. Специфичность / селективность.

1.3.2. Прецизионность: сходимость и воспроизводимость.

1.3.3. Правильность.

1.3.4. Линейность и калибровочная кривая.

1.3.5. Диапазон.28,

1.3:6. Пределы обнаружения.

1.3.7. Устойчивость (надежность, прочность).

1.4. Рекомендации по организации процесса валидации методики.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-диагностическое значение определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека с использованием фотохимического взаимодействия белков с п-диметиламинобензальдегидом»

Актуальность темы

Разработка и внедрение новых аналитических процедур является актуальной проблемой современной клинической лабораторной диагностики. Известно, что одним из важнейших биохимических тестов в практической медицине является определение белковых фракций крови [12, 17, 18, 30, 34", 35]. Достаточно давно описаны, 5 классических групп белков сыворотки крови, по соотношению которых можно косвенно судить о той или иной патологии [12, 16, 32, 31, 55]. Однако протеомные исследования последних лет показали* что в действительности в сыворотке крови содержится несколько тысяч индивидуальных белков, которые в результате аналитической интерференции могут в значительной степени влиять на результаты анализов.

Основной процедурой для анализа белковых фракций сыворотки крови был и остается электрофорез и его вариации [42, 59, 65, 90, 117, 118, 120, 125, 135, 136, 164, 178, 182, 205J. Однако данный метод крайне трудоемок, плохо стандартизируется и требует специальной подготовки персонала при учете результатов. Очевидно, что в этой ситуации более технологичными для анализа, индивидуальных белков и их групп являются спектрофотометрические методы. Они просты, доступны, легко автоматизируются и стандартизируются. Но в настоящее время лишь для ограниченного количества индивидуальных белков разработаны спектрофотометрические методы количественного определения. В то время как для определения иммуноглобулинов сыворотки крови человека таких методов еще нет. Однако для клинической медицины определение содержания белков данной группы имеет важнейшее значение при диагностике парапротеинемических гемобластозов [54, 55, 58, 64, 77, 82, 86, 87, 97,104, 126, 127, 128, 130, 132, 141, 145, 155, 170, 206], аутоиммунных заболеваний [39, 75, 83, 138, 143, 150, 157, 165, 180, 187], острых и хронических воспалительных процессов. Поэтому актуальной является проблема поиска и разработки новых, отличных от электрофореза, методов определения иммуноглобулинов сыворотки крови с целью увеличения эффективности выявления указанных выше патологий.

В 2000г. Y. Susuki была описана процедура фотометрического определения содержания ряда глобулиновых белков с использованием п-диметиламинобензальдегида [179]. Однако вопрос о возможности применения метода для целей клинической лабораторной диагностики остался открытым. Поэтому важным представляется более подробное изучение предложенной процедуры.

С целью обеспечения надлежащего качества лабораторных исследований любой без исключения новый метод должен быть подвергнут процедуре валидации. При анализе отечественных и международных стандартов и рекомендаций (USP 23, ICH, WHO, FDA, ISO, АОАС, BP, ЕС, EURACHEM, IUPAC, ГОСТ-ИСО-5725 и ГОСТ-ИСО-11843) не удается найти полных, детальных методических описаний данной процедуры для биохимических методов. Большинство источников включают в себя исключительно определения и общие положения. Поэтому актуальными представляются не только проблема более полного исследования нового метода определения иммуноглобулинов сыворотки крови, но и. создание оптимального протокола полной, корректной и своевременной процедуры его валидации для решения вопроса о применимости данного подхода для целей клинической лабораторной диагностики.

Диссертация подготовлена и выполнена по плану НИР ВолГМУ на кафедре теоретической биохимии с курсом клинической биохимии. Научное сотрудничество осуществлялось с ГУЗ «Волгоградский областной клинический онкологический диспансер» (ВОКОД). Тема диссертации утверждена на заседании ученого совета ВолГМУ. Работа выполнялась в рамках общего направления работы кафедры биохимии при поддержке гранта ВолГМУ. Клиническая апробация метода осуществлялась на базе ВОКОД при поддержке фонда Бортника в рамках программы УМНИК.

Цель исследования

Аналитическая и клиническая валидация процедуры определения иммуноглобулинов сыворотки крови человека с применением метода, основанного на фотохимическом взаимодействии с п-диметиламинобензальдегидом.

Задачи исследования

1. На основании международных и отечественных правил, руководств, рекомендаций разработать оптимальный методический подход для клинико-аналитической валидации биохимических методов исследования.

2. Выявить функциональные группы,в белках, способные специфически взаимодействовать с п-диметиламинобензальдегидом; установить взаимосвязь между содержанием этих функциональных групп в белке и интенсивностью взаимодействия с ПДАБА.

3: Установить метрологические аналитические характеристики метода определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека с исполь-зованиемп-диметиламинобензальдегида.

4. Сравнить аналитические характеристики нового метода определения содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови с общепринятыми подходами в клинической лабораторной практике.

5. Установить клинико-диагностическое значение определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человеках использованием предлагаемого метода в целях диагностики, мониторинга и скрининга патологических состояний, сопровождающихся гипергаммаглобулинемией.

6. Оценить экономические преимущества от использования предлагаемого метода для определения иммуноглобулинов в сыворотке крови по сравнению с общепринятыми в клинической лабораторной диагностике подходами.

Научная новизна

Разработан методический подход, в соответствии с которым проведена полная процедура валидации нового биохимического метода определения иммуноглобулинов сыворотки крови.

Установлены основные функциональные группы белковой молекулы, обеспечивающие взаимодействие с ПДАБА, в результате чего при математическом моделировании сделан вывод о специфичности метода к иммуноглобулинам сыворотки крови.

Показана диагностическая эффективность определения иммуноглобулинов предлагаемым методом в целях диагностики, мониторинга и скрининга патологических состояний, сопровождающихся гипер - и гипогаммагло-булинемией.

Проведен сравнительный клинико-экономический анализ предлагаемого метода количественного определения иммуноглобулинов в сыворотке крови человека и других современных подходов для целей клинической лабораторной диагностики.

Практическая значимость

Предложен метод, на основании которого могут быть созданы коммерческие наборы для клинической лабораторной диагностики для определения иммуноглобулинов сыворотки крови.

На основании международных и отечественных правил, руководств, рекомендаций разработан оптимальный методический поход для клинико-аналитической валидации биохимических методов исследования. Это, в свою очередь, позволяет выявить и минимизировать наличие случайных и систематических погрешностей, при внедрении новых методов в клиническую лабораторную практику, а также своевременно и четко ограничить область применения новых диагностических подходов.

Использование ПДАБА-метода позволяет достаточно быстро, доступно и в то же время с достаточной степенью чувствительности и специфичности оценить содержание у-глобулинов сыворотки крови человека в целях скрининга и мониторинга за состоянием пациентов с гипергаммаглобулинемиче-ским синдромом.

Показаны экономические преимущества от применения ПДАБА-метода по сравнению с общепринятыми подходами в клинической лабора-торнойпрактике.

Основные положения, выносимые на защиту

1 .Метод с использованием п-диметиламинобензальдегида взаимодействует с остатками триптофана в белковых молекулах, что определяет большую специфичность метода к у-фракции белков сыворотки крови.

2.Метод с использованием п-диметиламинобензальдегида обладает высокой аналитической чувствительностью к иммуноглобулинам сыворотки крови. ПДАБА-метод по правильности не уступает электрофоретическим подходам, но в то же время обладает несколько худшей вариабельностью.

3.ПДАБА-метод обладает 100% диагностической чувствительностью и высокими показателями диагностической значимости, что делает его перспективным для использования в клинической лабораторной практике для скрининга и мониторинга за состоянием пациентов с гипергаммаглобулинемическим синдромом.

4.Использование ПДАБА-метода в клинической лабораторной практике сопровождается меньшими затратами по сравнению с электрофорезом и в то же время может существенно повысить эффективность выявления заболеваний, сопровождающихся гипергаммаглобулинемическим синдромом.

Апробация

Основные положения диссертации доложены и обсуждены: на 63-й и 64-й научных конференциях студентов и молодых ученых ВолГМУ «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Волгоград, 2005, 2006). на 5-й научно-практической конференции с международным участием «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины» (Астрахань, 2006). в XI региональной конференции молодых исследователей Волгоградской области (Волгоград, 2006). на научно-практической конференции студентов и молодых ученых «Молодежь и наука: итоги и перспективы» (Саратов, 2006). на XIX зимней молодежной научной школе "Перспективные направления физико-химической биологии и биотехнологии" (Москва, 2007). на II Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2007). на Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных "Ломоносов-2008" (Москва, 2008). на научно-практическом симпозиуме «Лабораторная медицина: инновационные технологии в аналитике, диагностике, образовании, организации» в рамках традиционных Национальных дней лабораторной медицины России (Москва, 2008).

Внедрение в практику

Предложенный диагностический подход с использованием п-диметиламинобензальдегида внедрен в практику на базе ГУЗ «Волгоградский областной клинический онкологический диспансер» как дополнительного метода исследования для скрининга и мониторинга гипергаммаглобу-линемических состояний. Отдельные положения и выводы нашли применение в учебном процессе для подготовки врачей клинической лабораторной диагностики на кафедре теоретической биохимии с курсом клинической биохимии ГОУ ВПО «ВолГМУ Росздрава». В настоящее время ведутся переговоры с компаниями А/О Юнимед (Москва) и ЗАО Диакон (Москва, Пущине») о разработке коммерческих наборов для определения иммуноглобулинов сыворотки крови с ЦЦАБА.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 1 — в издании, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Никитенко, Екатерина Александровна

выводы;

1. Способность белков к фотохимическому взаимодействию с Г1ДАБЛ определяется количеством остатков Тгр в составе полипептидных цепей, поэтому фракцией иммуноглобулинов, ввиду большего количества остатков Тгр, обусловлено от 70 до 78 % суммарной оптической плотности продуктов реакции цельной сыворотки с ПДАБА.

2. Установлены основные аналитические характеристики ПДАБА-метода: коэффициент чувствительности - 26,9±0,855 мг/(лхо.е.), минимальная обнаруживаемая концентрация — 1,333 г/л,' диапазон линейной зависимости оптической плотности от . концентрации - 3,5-35,5 г/л. Рабочий реактив стабилен с течение 2 недель при хранении в охлажденном месте. Окраска продукта реакции стабильна в течение, по крайней мере, 24 часов.

31 ПДАБ А-метод обладает большей правильностью (В= 10%), а также более технологичен и удобен по сравнению с различными вариантами определения концентрации глобулинов методами высаливания (В=20%).

4. ПДАБ А-метод обладает меньшей аналитической вариабельностью (СУ = 5-15%) и большей правильностью (В — 0-15 %) по сравнению с биурет-БКЗ методом (В=0-40%, СУ=10-25%) при анализе модельных белковых смесей и образцов контрольной сыворотки.

5. ПДАБ А-метод по правильности (В=0-15%) и воспроизводимости (СУ=5-15%) сравним с электрофорезом в агарозном геле (В=0-15%, СУ=5-8%) при определении содержания иммуноглобулинов в модельных белковых смесях и образцах контрольной сыворотки крови, однако в отличие от последних, он более технологичещ прост и доступен.

6. ПДАБА-метод не применим для исследования проб с патологически низким уровнем у-глобулинов (до 5 г/л).

7. При исследовании образцов сыворотки крови от пациентов с па-рапротеинемическими гемобластозами при диагностически значимом уровне у-фракции 30 г/л величины диагностической чувствительности ПДАБА-метода и электрофореза равны, что позволяет столь же эффективно использовать предлагаемый метод как надежный скрининговый подход, но при этом минимизировать затраты на исследования.

8. . При исследовании образцов сыворотки крови от пациентов с парапротеинемическими гемобластозами при диагностически значимом уровне у-фракции от 20 до 30 г/л по соотношению диагностическая чувствительность-специфичность ПДАБА-метод значительным образом превосходит электрофоретический подход.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Описанный в работе протокол валидации биохимических методик рекомендуется для применения в целях контроля качества лабораторных исследований и как один из этапов внедрения новых биохимических методик в клиническую лабораторную практику.

2. Использование ПДАБА-метода, как более простого, технологичного и в то же время достаточно чувствительного может быть целесообразно для применения в целях скрининга и мониторинга за состоянием пациентов с гипергаммаглобулинемическим синдромом.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Никитенко, Екатерина Александровна, 2009 год

1. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, ЮЛ. Харитонов // Фармация.-2006.-№4.-С.20-21.

2. Галь, Э. Электрофорез в разделении биологических макромолекул / Э. Галь, Г. Мельдеши.- М: Мир, 1982.-448 с.

3. Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц.- М.: Практика, 1998.-459 с.

4. ГОСТ-Р-ИСО-11843-2-2007 Статистические методы. Способность обнаружения. Часть 2. Методология в случае линейной калибровки // М: ИПК Издательство стандартов, 2007. — 30 с.

5. ГОСТ-Р-ИСО 5725-1-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1 Основные положения и опре-' деления // М: ИПК Издательство стандартов, 2002. 32 с.

6. ГОСТ-Р-ИСО-5725-4-42002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4 Основные методы определения правильности стандартного метода измерений // М: ИПК Издательство стандартов, 2002. — 32 с.

7. Государственная фармакопея Российской Федерации // М.: Научный центр экспертизы средств медицинского применения, 2008. — 704 с.

8. Доусон, Р. Справочник биохимика / Р. Доусон., Д. Элиот, У.Элиот.-М.:Мир, 1991.-543с.

9. Жданова, В.В. Критерии оценки методов исследования / В®. Жданова // Совершенствование качества работы клинико-диагностических лабораторий: Метод, пос. ЗАОч<Вёктор Бест». - Кольцово, 1999: — С. 1—5;

10. Комитет экспертов ВОЗ по спецификациям для фармацевтических препаратов. Тридцать второй доклад // Серия технических докладов ВОЗ.-Женева;1995.- №823. , '

11. Коткина, Т.И: Методические приемы исследования альбумина сыворотки крови. / Т.И: Коткина, Е.И. Волкова, В.Н: Титов // Клин. лаб. диагн.-: 1992.-№3-4.-С.55.

12. Лабораторные методы» исследования в клинике / под ред. В.В.Меныпикова.- М: Медицина, 1987.-485с. .

13. Маршалл, В.Дж. Клиническая биохимия: Пер. с англ. / В.Д. Маршалл.-М:Бином= 2001.-373с.

14. Меньшиков, В.В. Биохимические исследования в клинике / В.В: Меньшиков^ Ф.И. Комаров, Б.Ф. Коровкин.- М.:Медицина,1976.-383 с.

15. Молчанов, В. И. Определение уровня гликированного гемоглобина и его клинико-диагностическое значение / В. И. Молчанов, В. А. Королев // Военно-медицинский журнал.- 2006.-№327.-Т.З.-С.З9-41.

16. Молчанов, В.И. Метод изоэлекгрофокусирования и фотоколориметрия для определения гемоглобина Aïc / В.И: Молчанов, В.А. Королев // Биомедицинская химия;- 2006.- №52 Т.2:- С.200-210.

17. Назаренко, Г. И: Клиническая оценка результатов лабораторных исследований / Г. И. Назаренко, А. А. Кишкун.- М:Медицина.-541 с.■'■■'■'■■-. • 115 ' "

18. Приказ МЗ РФ от 26.05.2003 г. № 220" «Об утверждении отраслевого стандарта «Правила проведения внутрилабораторного контроля качества , количественных методов клинических лабораторных исследований с использованием контрольных материалов».

19. Приказ; МЗШФ'№380?от 25112.1997 «О состоянии ш мерах по совершенствованию лабораторного обеспечения? диагностики и лечения пациентов в! учреждениях здравоохранения Российской Федерации» // Приложение №13 «Расчет себестоимости лабораторного анализа».

20. Реброва, ОЯО? Статистический анализ медицинстких данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA/ О.Ю. Реброва.-М.: Ме-диаСфера,2002.- 312 с.

21. Ройтберг, F.E. Лабораторная и инструментальная диагностика заболеваний внутренних органов / Г.Е.Ройтберг, А.В.Струтынский.- М.:Бином, 1999.-622 с.

22. Меньшиков В.В. Руководство по клинической лабораторной диагностике/ В.В.Меньшиков.- М., 1982.-576 с.

23. Сергеева, H.A. Электрофорез в современном диагностическом процессе (лекция) /H.A. Сергеева//Клин. лаб. диагностика.-!999.-№2.-С.25-32.

24. Скоупс, Р. Методы очистки белков / Р. Скоупс.- М.:Мир,1985.-358с.

25. Справочник по лабораторным, методам исследования / под ред. JI.A. Дат ниловой.-СПб.: Питер,2003г.-514с.

26. Ткачук, В.А. Клиническая биохимия / В.А. Ткачук.- М.:Гэотар-Мед., 2004:- 506с.

27. Флетчер, Р. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины / Р.Флетчер, С. Флетчер, Э. Вагнер.- М.:Медиа Сфера, 1998.-352с.3 7. Хаитов, P.M. Иммунология / P.M. Хаитов.- М.:Медицина;2000.-420с.

28. Харитонов, Ю.Я. Аналитическая химия. Количественный-анализ, физико-химические методы-анализа / Ю.Я. Харитонов.- М.: Высш.шк., 2003.-559с.

29. Шульпекова, Ю.О. Алгоритм обследования и лечения пациентов с гепатитами и гепатозами / Ю.О: Шульпекова // Вопросы современной педиатрии.- 2008:- № 7.- Т.16.- С.1-6.

30. Энциклопедия клинических лабораторных тестов / под ред. проф. Н.У.Тица.- М.: Лабинформ,1997.-960с.

31. Ярилин, А.А. Основы иммунологии / А.А. Ярилин.- М. Медицина,1999.-608с.

32. Aguzzî, F. Electrophoresis: cellulose acetate vs agarose, visual inspection vs densitometr / F.Aguzzi, S.D: Jayakar, G. Merlini, C. Petrini // Clin. Chem.-1981.- Vol.27.-P.1944—1945.

33. Aho, K. Serum immunoglobulins and the risk of rheumatoid arthritis / K. Aho, M. Heliovaara, P. Knekt, A. Reunanen// Ann. Rheum. Dis. — 1997.-Vol.56,№6.- P.351—356.

34. Ali, Y.M. Monoclonal gammopathy in systemic lupus erythematosus / Y.M. Ali, M.B. Urowitz, D. Ibanez, D.D. Gladman // Lupus.- 2007.-Vol.l6,№6.-P.426-429.

35. Analytical Procedures and Methods Validation. Guidance for Industry / British Pharmacopoeia, 2001.- Электронный ресурс.- Режим доступа: http://www.pharmacopoeia org.uk/

36. Armbruster, D.A. Limit of Blank, Limit of Detection and Limit of Quantitation / DîA. Armbruster, T.Piy // Clim Biochem. Rev.- 200&- Vol;29i-P!-49-52.

37. Armbruster, DiA. Limit of detection (LOD)/limit of quantitation (LOQ): . comparisonof the empirical and the statistical,;methods exemplified withiGC

38. MSï assays of abused! drugs / D;A; Armbruster, MiD* Tilhnan^L.M; Hubbs // Clin: Chem.- 1994.- Vol:40:-PI1233-1238.

39. Basha,. S.M!. M simple colorimetric method for the détermination- of tryptophan./S ;MI Basha, R.M.Roberts // Anal Biochem.-1977.-Vol.77, №2.-P;378-386:

40. Bauer, N. Evaluation of three methods for measurement of hemoglobin and calculated hemoglobin variables with the ADVIA 120® andÀDVIA 2120® systems in goats / N. Bauer, A. Moritz // J. Vet. Diagn. Invest 2008.-Vol.20.- P.593 - 597.

41. Bradwell, A.R. Serum test for assessment of patients with Bence Jones myeloma / A.R. Bradwell, H.D. Carr-Smith, G.P. Mead'//1 .ancet.-2003.-Vol.361 .-P.489-491.

42. Breaux, Ji Analytical methods development and validation / J. Breaux, K. Jones, P. Boulas // Pharmaceutical Technology, Analytical Technology and Testing.-2003.-V0I.6.-P. 13.

43. Brigden, M.L The search for meaning in monoclonal protein. Is it multiple myeloma or monoclonal gammopathy of undeteraiiiiedi significance? / Brigden // Postgrad Med. -1999.- Vol.106,№2.- P.135-142.

44. Bossuyt, X. Serum protein electrophoresis and immunofixation by a semiau-tomated electrophoresis system / X. Bossuyt, A. Bogaerts, G. Schiettekatte // Clinical Chemistry.- 1998.-№5.-PI944^-949: ; ;

45. Bossuyt, X. Serum protein electrophoresis by CZE 2000 clinical capillary electrophoresis system/ X. Bossuyt, A. Bogaerts, G. Schiettekatte // Clinical Chemistry.- 1998.- №44.- P.749-759.

46. Bossuyt, X. Automated serum protein electrophoresis by Capillarys / X. Bossuyt, G. Marinn, D> Maisin // Clin: Chem. Lab: Med.- 2003:- Vol.41 ,№5> P.704-710.

47. Bossuyt, X. False-negative results in detection of monoclonal proteins by capillary zone electrophoresis: a prospective study / X. Bossuyt, G. Marie:// Clin.

48. Chem.- 2001.- Vol.47.- P. 1477—1479:

49. Cassidy, J.T. Abnormalities in the distribution of serum immunoglobulin concentrations in Juvenile rheumatoid arthritis / J.T. Cassidy, D.B. Sullivan // The Journal of Clinical Investigation:- 1973.- Vol.52.- P.1931-1936:

50. Cesana, C. Prognostic factors for malignant transformation in monoclonal gammopathy of undetermined significance and smoldering multiple myeloma / C. Cesana, C. Klersy, L. Barbarano // J: Clin. Oncol.- 2002.-Vol.20.-P; 1625-1634.

51. Chang, C.Y. Underestimation of monoclonal proteins by agarose serum protein electrophoresis / C.Y. Chang, H.A. Fritsche, A.B. Glassman// Annals of Clinical and Laboratory Science.- 1997.- Vol.27, Issue 2.- P.123-129.

52. Chari, A. Monoclonal immunoglobulins of alpha-2 mobility on protein electrophoresis: a case series / A.Chari, A. Eisenberger, M. Pesce // Blood. ASH Annual Meeting Abstracts.- 2007.- Vol.P.l 10:

53. Claeys, R. Capillary zone electrophoresis of proteins in body fluids: Comparison of Capillary and Agarose Gel Electrophoresis / R. Claeys, C. Groven, K. Frans // Clin. Chem.- 2001.- Vol.47, №5.-P.967-970.

54. Clinical and laboratory standards institute: Document EP 17: Protocols for determination of limits of detection and limits of quantitation / CLSI Approved Guideline.- Wayne, PA USA, 2004.

55. Clinical and laboratory standards institute: Document EP6-P: Evaluation of the linearity of quantitative analytical methods / CLSI Proposed' guideline.-Wayne, PA USA, 2004.

56. Comparison of bromcresol green- and agarose protein electrophoresis for quantitation of serum abumin in Multiple Myeloma / C.L.H. Snozek, A.K. Saenger, P.R. Greipp, S.C. Bryant et al. // Clin. Chem.- 2007.- Vol.53.-P.1099 1103.

57. Cook, L. Management of paraproteinaemia / L. Cook, D.H.C. Macdonald // Postgrad. Med. J.- 2007.- Vol.83.- P.217-223.

58. Corley, J. Best practices in establishing detection and quantification limits for pesticide residues in foods. Handbook of Residue Analytical Methods for Ag-rochemicals / J. Corley.-2002.-64 p.

59. Curling, J.M. Methods of plasma protein fractionation / J.M. Curling,- London: Academic Press, 1980.-380 p.

60. Davenport, J.M. Testing claimed minimal detectable concentrations of in vitro medical diagnostic devices/ J.M.Davenport, B.Schlain // Clinical Chemistry.-2000;-Vol.46.-P. 1669-1680.

61. Davies, F.E. The impact of attaining a minimal disease state after highi-dose melphalan and autologous transplantation for multiple myeloma / F.E. Da-vies, P.D; Forsyth, A.C. Rawstron // Br. J. of Haematology,-200L- VolîlïlZ-P.814-819.

62. Defining the smallest analyte concentration an immunoassay can measure / E.N.Brown, T^JiMcDermont; K.JxBloch; A.D:McCollom // Clin: Chem:-, 1996.- Vol.42.-P.893-903.

63. DRAFT: Requirements for single laboratory validationî of chemical methods / AOAC Recommendation^ 2002.-Doc.47.-P: 1-33:

64. Dimopoulos, M.A. Risk of disease progression in asymptomatic multiple myeloma / M.A. Dimopoulos, A. Moulopoulos, T. Smith, K.B. Delasalle// Am. J. of Medicine.- 1993.- Vol.94.- P.57-61.

65. Duly, E.B. Measurement of serum albumin by capillary zone electrophoresis, bromocresol green, bromocresol purple, and immunoassay methods / E.B. Duly, S. Grimason, Pi Grimason, G. Barnes// J. Clin. Pathol.-2003.-Vol.56.-P.780-781.

66. Durie, B.G. International uniform response criteria for multiple myeloma / B.G. Durie, J-L. Harousseau, J.S. Miguel // Leukemia.-2006.-Vol.20.-P.1467-1473.

67. Gay-Bellile, C. Automated multicapillary electrophoresis for analysis of human serum proteins / C. Gay-Bellile, D. Bengoufa, P.* Houze// Clin. Chem.-2003.- Vol.49,№11,- P.1909—1915.

68. Glynne, A. Serum immunoglobulin levels in thyroid disease / A. Glynne, J.A. Thomson// Clin. Exp. Immunol.- 1972.- Vol.12.- P.71-78.

69. Goodwin, W.T. The spectrophotometric determination of tyrosine and tryptophan in proteins / W.T. Goodwin, R.A. Morton // Biochem. J.-1946.-Vol.40.-P.628-632.

70. Green, J. M. A practical guide to analytical method validation / J. M. Green // Anal. Chem. News & Features.- 1996.-P.305A-309A.

71. Gregersen, H. The risk of bacteremia in patients with monoclonal gammopa-thy of undetermined significance / H. Gregersen, K.M. Madsen, H.T. Seren-sen// Eur. J. of Haematology.- 1998.- Vol.61.- P.140-144.

72. Guidance for industry: Analytical procedures and methods validation: Chemistry, manufacturing, and controls documentation / US Food and Drug Administration Guidelines.- Электронный ресурс.- Режим доступа: http://www.fda.gov/cder/guidance/2396dft.htm.

73. Guidance for industry: Bioanalytical method validation. // US Food and Drug Administration Guidelines.- Электронный ресурс.- Режим доступа: http://www.fda.gov/cder/guidance/4252fnl.h1m

74. Henskens, Y. Detection and identification of monoclonal gammopathies by capillary electrophoresis / Y. Henskens, J. de Winter, M. Pekelharing // Clin. Chem.- 1998.- Vol.44, №6.- P.l 184-1190.

75. Hjorth, M. Initial versus deferred melphalan-prednisone therapy for asymptomatic multiple myeloma, stage I1 — A randomized study / M. Hjorth , L. Hellquist, E. Holmberg// Eur. J. of Haematology.- 1993.- Vol.50.- P.95.

76. Hoddinott, S. Immunoglobulin levels, immunodeficiency and HLA in* type 1* (insulin-dependent) diabetes mellitus / S. Hoddinott, J. Dornan, J.C. Bear // Diabetologia.-l981 .-Vol.23, №4.-P.326-329.

77. Hokanson, G. C. A life cycle approach to the validation of analytical methods during pharmaceutical product development, Part I: The initial validation process / G. C. Hokanson // Pharm. Tech.- 1994.- P.l 18-130.

78. Hokanson, G.C. A life cycle approach to the validation of analytical methods during pharmaceutical product development, Part П: Changes and the need for additional validation / G. C. Hokanson // Pharm.Tech.- 1994.- P.92-100.

79. Honsa, J. D. ISO 17025: Practical benefits of implementing a quality system / J. D. Honsa, D. A. Mclntyre // AOAC International.- 2003.- Vol.86,№5.-P.1038—1044.

80. Hubert, Phi Harmonization of strategies for the validation of quantitative analytical procedures: A SFSTP proposal—part 17 Ph. Hubert, J.-J. Nguyen-Huu, B. Boulanger// J. of Pharm, and Biomed. Analysis.- 2004.- Vol.36, Issue 3.-P.579-586.

81. Hubert, Ph. Harmonization of strategies for the validation of quantitative analytical procedures: A SFSTP proposal Part IP / Ph. Hubert, J.-J. Nguyen-Huu; B. Boulanger// J. of Pharm, and Biomed. Analysis.- 2007.- Vol.45.- Issue 1.- P.70-81.

82. International Myeloma Working Group. Criteria for the classification of-monoclonal gammopathies, multiple myeloma and related disorders: a report of the International Myeloma Working Group // Br. J. of Haematology.-2003.-Vol.l21.-P.749-757

83. ICH Q2A: Validation of analytical methods: definitions and terminology / Recommendations of International Conference for the Registration of Pharmaceuticals for Human Use, 1994.

84. ICH Q2B: Validation of analytical1 procedures: Methodology // Recomenda-tions of International Conference for the Registration of Pharmaceuticals for Human,Use, 1996.i

85. ISO/DEC 17025:2005 General requirements for the competence of testing and calibration laboratories // International Organization for Standardization.- Geneva, 2005,- 36 p.

86. ISO 11843-1:1997 Capability of detection-Part 1. Terms and definitions // International Organization for Standardization.- Geneva, 1997.

87. ISO 11843-2:2000 Capability of detection-Part 2: Methodology in the linear-calibration case // International Organization for Standardization.- Geneva, 2000.

88. ISO 11843-3:2000 Capability of detection -Part 3: Methodology of determination of the critical value for the response variable when no calibration data are used // International Organization for Standardization.- Geneva, 2000.

89. ГОРАС Recommendations: nomenclature in evaluation of analytical methods including detection and quantification capabilities // Pure Appl. Ghem.-1995 .-Vol. 67,№ 10.- P. 1699-1723.

90. ГОРАС Technical Reports 2002:: Harmonized guidelines for single — laboratory validation of methods of analysis // Pure Appl- Chem.- 2002 -Vol.74,№5.- P.835-855.

91. Jonsson, M. Computer-supported detection of M-components and evaluation of immunoglobulins after capillary electrophoresis / M. Jonsson; J. Carlson, J.-O. Jeppsson //Clin. Chem.-2001.-Vol.47^№i.- P.i 10-117.

92. Kahn, S.N. Imprecision of quantification of serum protein fractions by electrophoresis on cellulose acetate/ S.N. Kahn, L.P. Strony // Clin.Chem.- 1986.-Vol.32,№2.-P.356-357.

93. Kamisawa, T. Diagnostic criteria for autoimmune pancreatitis in Japan / T. Kamisawa, K. Okazaki, S. Kawa // World J. Gastroenterol 2008.-Vol. 14,№32.- P.4992-4994.

94. Katzmann, J.A. Identification of monoclonal proteins in serum: A quantitative comparison of acetate, agarose gel, and capillaiy electrophoresis / J;A. Katzmann, R. Clark, E. Wiegert// Electrophoresis.- 1997.- Vol.18, Issue 10.-P.1775 —1780.

95. Kelley, M.' Key Elements of bioanalytical method validation for macromole-cules / Ml Kelley, B. DeSilva // The AAPS Journal.- 2007.- Vol.9,< №2.- Article 17.-P.E156-E163.

96. Kyle, R.A. The monoclonal gammopathies / R.A. Kyle // Clin. Chem.- 1994.-Vol.40, №11 .-P.2154-2161.

97. Kyle, R.A. Monoclonal gammopathy of undetermined significance and solitary plasmacytoma. Implications for progression to overt multiple myeloma / R.A. Kyle // Hematol. Oncol Clin. North. Ami- 1997.- Vol.11, №1.- P.71-87.

98. Kyle, R.A., Rajkumar SV. Monoclonal gammopathy of undetermined'significance / R.A. Kyle, S.V. Rajkumar // Br. J. Haematol.- 2006.- Vol.l34.-P:573-589.

99. Kyle, R.A. Monoclonal gammopathies of undetermined1 significance: a review / R.A. Kyle, S.V. Rajkumar. // Immunological Reviews.- 2003.- Vol. 194.-P.l 12-139.

100. Kyle, R.A. A Long-term study of prognosis in monoclonal gammopathy of undetermined significance / R.A. Kyle, T.M. Therneau, S.V. Rajkumar // NEJM.- 2002.- Vol.346, №8.- P.564-569.

101. Kyle, R.A. Prevalence of monoclonal gammopathy of undetermined significance / R.A. Kyle, T.M. Therneau, S.V. Rajkumar// NEJM.- 2006.- Vol.3 54.-P. 1362-1369.

102. Liu, F.J. Underestimation of monoclonal proteins by serum protein electrophoresis on cellulose: acetate / F. Ji Liu, EL A. Fritsche, JtMi' Trujillo? // Clin; Chem.- 1987.-Vol.33.- P. 182-184.

103. Lodish, H. Molecular Cell? biology 7 H. Lodish.- N.Y.: Freeman, 2003.-967p. . ■ ■ •138: Lohse, A.W. Diagnostic criteria for autoimmune hepatitis / A.W. Lohse, E. Hennes // Hepatol; Res.- 2007.-Vol.37.- P.509.

104. Longi G.L. Limitiofdetection: a closer look at the IIJPAC definition;/ G.L. Long; J.D; Winefordner // Anal. Ghiem:-1983 .-Vo1l55;-P.712A-724A;

105. Luraschia, P. Analytical variation in the measurement of serum monoclonal component by capillary electrophoresis / P. Luraschia, I. Infusinoa, C. Merlot-tia // Clin. Chim. Acta.- 2004.- Vol.349, Issues 1-2.- P. 151-156.

106. Meadj G.P. Serum free light chains for monitoring multiple myeloma / G.P. Mead, H. D; Carr-Smith, M. T. Drayson// Br: J. of Haematology.- 2004.-Vol 126.- P.348-354.

107. Morie, A.G. Waldenstrom's Macroglobulinemia / A G. Morie, R. Fonseca, S.V. Rajkumar // The Oncologist.- 2000.- Vol.5.- P.63-67.

108. McFarlane, I.G. Autoimmune hepatitis: Clinical manifestations and diagnostic criteria / I.G. McFarlane // Can. J. Gastroenterol.- 2001,- Vol.15, №2.-P.107-113.

109. MacNamara, E.M. Electrophoresis and densitometry of serum and* urine in the investigation and' significance of monoclonal immunoglobulins / E.M. MacNamara, J.T. Whicher // Electrophoresis.- 1990.- Vol.11, №5.- P1376-381.

110. Mussap, M. Measurement of serum monoclonal components: comparison between densitometry and capillary zone electrophoresis / M: Mussap, F. Pietrogrande, S. Ponchia// Clin. Chem. Lab. Med.- 2006.- Vol.44, №5.-P.609-611.

111. NCCN Clinicar practice in oncology: Multiple Myeloma V.2.2009 // National Comprehensive Cancer Network Guidelines.- Электронный ресурс.-Режим • доступа: http://www.nccn.org/professionals/physician2gls/PDF/myeloma.pdf

112. Olojohungbe, A.B. et al. / A.B. Olojohungbe // British Journal of Haema-tology.- 1996.- Vol.9.-P.77.

113. Owen, R.G. Developing diagnostic criteria in Waldenstrom's macroglobu-linemia / R.G. Owen // Semin. Oncol.- 2003.- Vol.30, №2.- P.196-200.

114. Ozen, S. The correlation between immunoglobulin levels and disease activity in juvenile chronic arthritis / S. Ozen, A. Bakkaloglu, U. Saatci// Clin. Exp. Rheumatol.- 1992.- Vol.10, №2.- P. 197-198.

115. Pantazopoulos, I. Resuscitation ischaemia modified albumin in the diagnosis of acute coronary syndromes /1. Pantazopoulos, L. Papadimitriou, I. Don-tas// .- 2009.- Vol.80, №3.- P.306-310.

116. Pinnell, A.E. New automated dye-binding method for serum albumin determination with bromcresol purple / A.E. Pinnell, B.E. Northam // Clin Chem.— 1978.-Vol.24, №l.-P.80-86.

117. Pitzmann, S.E. Serum protein abnormalities: Diagnostic and clinical aspects / S.E. Pitzmann, J.E. Daniels.- Allen Less Co, 1982.

118. Rajkumar, S.V. Multiple Myeloma: Diagnosis and Treatment / S.V. Rajku-mar, R.A. Kyle // Mayo Clin. Proc.-2005.- Vol.80, №10.- P.1371-1382.

119. Rindfleisch, J.A. Diagnosis and management of rheumatoid arthritis / J.A. Rindfleisch; D. Muller // American Family Physician.- 2005.- Vol.72, №6.

120. Roger, G.O. Waldenstrom macroglobulinemia: Development of diagnostic criteria and identification of prognostic factors / G.O. Roger, L.B. Sharon, J.R. Stephen // Am. J. Clin. Pathol.- 2001.- Vol. 116.- P.420-428.

121. Rozet, E. Analysis of recent pharmaceutical regulatory documents on analytical method validation / E. Rozet, A.Ceccato, C. Hubert // Journal of Chromatography A.- 2007.- Vol.1158, Issues 1-2.- P.l 11-125.

122. Ryder, S. D. ABC of diseases of liver, pancreas, and biliary system: Other causes of parenchymal liver disease / S. D. Ryder, I. J. Beckingham // BMJ.-2001.- Vol.322.- P.290-2921

123. Sbarouni, E. Ischemia modified albumin: is this marker of ischemia ready for prime time use? / E. Sbarouni, P. Georgiadou, D.T. Kremastinos // Hellenic J. Cardiol.- 2008.- Vol.49, №4.- P.260-266.

124. Schnedl, W.J. Hemoglobin variants and determination of glycated hemoglobin (HbAlc) / WJ. Schnedl, A. Liebminger, R.E. Roller // Diabetes Me-tab. Res. Rev.- 2001.- Vol.17, №2.- P.94-98.

125. Seno, S. Analytical validation in practice at a quality control laboratory in the Japanese pharmaceutical industry / S. Seno, S. Ohtake, H. Kohno // Ac-cred. Qual. Assur.- 1997.- Vol.2.- P. 140-145.

126. Sinclair, D. Estimation of paraproteins by immunoturbidimetry and electrophoresis followed by scanning densitometry / D. Sinclair, F. Ballantyne, S. Shanley//Ann. Clin. Biochem.- 1990.- Vol.27.-P.335-337.

127. Steingrimsdottir, H. Monoclonal gammopathy: natural history studied with a retrospective approach / H. Steingrimsdottir, V. Haraldsdottir, Í. Olafsson// Haematologica.- 2007.- Vol.92.- P. 1131-1134.

128. Shah, V.P. The History of bioanalytical method validation and regulation: evolution of a guidance document on bioanalytical methods validation / V.P. Shah // The AAPS Journal.- 2007.- Vol.9, №1.- Article 5.- P.E43-E47.

129. Shih, Y-C. Some characteristics of protein precipitation by salts / Y-C.i

130. Shih, J.M. Prausnitz, H.W. Blanch // Biotech. Bioeng.-1992.-Vol.40.-P.l 1551164:

131. Silvestrini, B. Occurrence, of globulin-like migrating blood albumins, or GLIMBAL, in pathological rat and human sera / B. Silvestrini, P.G. Natali, B. Catanese // Can. J. Biochem.-1980:-Vol.58, №1.- P.89-92.

132. Shorato, N. / N. Shorato, G. Okuyama // J.Pharmac.Soc.Japan.-1956.-Vol.6.-P.620-624.

133. Snozek, C.L.H. Comparison of bromcresol green and agarose protein electrophoresis for quantitation of serum albumin in Multiple Myeloma / C.L.H. Snozek, A.K. Saenger, P.R. Greipp// Clin. Chem.- 2007.- Vol.53.- P. 10991103.

134. Sudaj, S. Serum monoclonal IgM undetectable by cellulose acetate membrane electrophoresis in four patients with B cell malignant lymphoma / S. Sudaj, T. Takiguchi, Y. Hirose// Jpn. J. Clin. Oncol.- 1986.- Vol.16.- P.365-372.

135. Susuki, Y. Color, reaction of arornatik aldehyde with serum protein and Its application to the determination of serum total globulin concentration/ Y. Susuki//Anal. Sci.-2000.-VoU6.-P. 145-149.

136. Takemura, S. Relation of clinical activity of rheumatoid arthritis to immune complexes, complement components and anti-immunoglobulins / S. Takemura, M. Ueda, H. Tagami, H. Kato// Rheumatol. Int.- 1984.-Vol.4.- P.-159-163

137. The fitness for purpose of analytical of information methods. A laboratory guide to method validation and related topics / De Bievre et al.- EURACHEM Guidance document, 1998.

138. Tseng, С. H. Accuracy of serum IgM and IgA monoclonal protein measurements by densitometry / C.H. Tseng, C.-Y. Chang, K.S. Liu, F.J. Liu // Ann. Clin. Lab. Sci.- 2003.- Vol.33, №2.- P.160-166.

139. Validation of analytical procedures: The Japanese Pharmacopoeia Fourteenth, Part 1,2001.

140. Validation of chromatographic methods / Reviewer guidance of Center for Drug Evaluation and Recearch,b 1994. — P. 30

141. Validation of compendial methods: General Chapter 1225: United States Pharmacopoeia ХХШ. National Formulary, XVI-П, Rockville, MD // The United States Pharmacopeial Convention. - 1995. - P. 1710 - 1712.

142. Vessman, J. Selectivity or specificity? Validation of analytical methods from the perspective of an analytical chemist in the pharmaceutical industry / J. Vessman// J. Pharm. & Biomed. Analysis.- 1996.- Vol.14.- P.867-869.

143. Veys, E.M. Serum levels of IgG, IgM, and IgA in rheumatoid arthritis / E.M. Veys, H.E. Claessens // Ann. rheum. Dis.- 1968.- Vol.27.- P.431.

144. Waddell, W.J. A simple UV spectrophotometric method for the determination of protein/ W.J. Waddell // J. Lab. Clin. Med.-1956.-Vol.48.-P.311-314.

145. Walker, J.M. The Protein Protocols handbook / J.M. Walker.- Totowa, New Jersey: Humana Press, 2002.

146. Weber, D.M. Prognostic features of asymptomatic multiple myeloma /D.M. Weber, M.A. Dimopoulos, L.A. Moulopoulos, K.B. Delasalle// British Journal of Haematology.- 1997.- Vol.97.- p.810-814.

147. Wegscheider Validation of analytical methods, in: Accreditation and quality assurance in analytical chemistry / Wegscheider, edited by H. Guenzler // Springer Verlag.- Berlin.- 1996.

148. Westgard, J.O. Criteria forjudging precision and accuracy in method development and evaluation / J.O. Westgard, R.N. Carey, S. Wold // ClinChem.-1974.- Vol.20.-P.825-833.

149. Westgard, J.O.Method evaluation / J.O. Westgard, DJ. deVos, M.R. Hunt, E.F. Quam// American Society for Medical Technology Bellaire.- 1978.

150. Westgard, J.O. A multi-rule Shewhart chart for quality control in clinical chemistry / J.O. Westgard, P.L. Barry, M.R. Hunt, T. Groth // Clin. Chem.-1981.-Vol.27.-P.493-501.

151. Westgard, J.O. Performance characteristics of rules for internal quality control: probabilities for folse rejection and error detection / J.O. Westgard, T. Groth, T. Aronsson, H. Falk, C-H.deVerdier // Clin. Chem.- 1977.- Vol.23.-P.1857-1867.

152. Westgard, J.O. Points of care in using statistics in method comparison studies / J.O. Westgard 11 Clin. Cliem. 1998.- Vol.44.- P.2240-2242.

153. Westgard, J.O. Use and interpretation of common statistical tests in method comparison studies / J.O. Westgard// Clin. Chem.- 2008.- Vol.54.- P.612.

154. Westgard, J.O. Basic method validation, 2nd ed. / J.O. Westgard //Westgard QC, Madison, WL- 2003.

155. Winslow, P.A Defining a master plan for the validation of analytical methods / P.A. Winslow, R.F. Meyer // J. Validation Technology.- 1997.- P.361-367.

156. Wisloff, F. Incidence and follow-up of asymptomatic multiple myeloma. : The myeloma project of health region I in Norway. II / F. Wisloff, P. Andersen, T. R. Andersson, E. Brandt// European Journal of Haematology.- 1991.-Vol.47.- P.338-341.

157. Yang, Z. Performance of the Sebia CAPILLARYS 2 for detection and immunotyping of serum monoclonal paraproteins / Z. Yang, K. Harrison, Y.A. Park, C.H. Chaffin et al. // Am. J. Clin. Pathol.- 2007.- Vol.128.- P.293-299.

158. Yu-jie, M. Clinical and laboratory features of newly diagnosed multiple myeloma: a retrospective, single-centre analysis / M. Yu-jie, Q. Pei-jing, X. Yan, Z. De-hui// Chinese Medical Journal.- 2007.- Vol.120, № 19.- P. 17271729.

159. Zak, B. Associated problems of protein electrophoresis, staining and densitometry / B. Zak, E.S. Baginski, E. Epstein // Ann. Clin. Lab. Sci.- 1978.-Vol.8.- P.385 395.

160. Zetterberg H. Ethanol precipitation is not reliable for selectively removing nonmonoclonal peaks seen in the fibrinogen region on Capillary Zone Electrophoresis of serum proteins / H. Zetterberg, H. Nilsson-Ehle 11 Clin. Chem.-2004.-Vol.50, №10.