Клинико-диагностическое исследование плазмидных ДНК грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.46, кандидат медицинских наук Бабушкина, Ирина Владимировна

• Бабушкина, Ирина Владимировна
• кандидат медицинских наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Бабушкина, Ирина Владимировна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Источники и пути передачи внутрибольничной инфекции.

1.2. Особенности внутрибольничной инфекции в травматологическом стационаре.

1.3. Возбудители внутрибольничной инфекции

1.3.1 .Полиантибиотикорезистентные грамотрицательные и грамположительные микроорганизмы.

1.3.2.Устойчивость микроорганизмов к химиопрепаратам.

1.3.3.Роль плазмид в формировании госпитальных штаммов.

1.3.4.Плазмиды как дополнительный эпидемиологический маркер.

1.4. Контроль за распространением антибиотикорезистентных штаммов.

Глава 2. Материалы и методы

2.1. Микробиологическое исследование клинических штаммов.

2.2. Изучение плазмидных ДНК грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Глава 3. Изучение клинических штаммов грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов

3.1. Исследование этиологического значения различных микроорганизмов при гнойных осложнениях в травматологическом стационаре.

3.2. Изучение распространенности полиантибиотикорезистентных грамотрицательных штаммов микроорганизмов, выделенных от больных с гнойными осложнениями.

3.3. Исследование плазмидных ДНК полиантибиотикорезистентных грамотрицательных микроорганизмов.

3.4. Выявление возможных источников и путей распространения антибиотикорезистентных штаммов микроорганизмов.

3.5. Изучение распространенности полиантибиотикорезистентных штаммов стафилококка в клиниках СарНИИТО.

3.6. Изучение распространенности плазмидных ДНК Staphylococcus aureus при различных гнойных осложнениях в клиниках СарНИИТО.

Глава 4. Исследование методов выделения и электрофоретической подвижности в агарозных гелях плазмидных ДНК, выделенных из клинических штаммов грамотрицательных микроорганизмов 4.1. Сравнительное исследование методов выделения плазмидных ДНК из грамотрицательных штаммов микроорганизмов.

4.2. Изучение электрофоретической подвижности плазмидных ДНК в агарозном геле.

Глава 5. Выделение плазмидных ДНК из грамположительных бактериальных клеток.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-диагностическое исследование плазмидных ДНК грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов»

Повышение эффективности профилактики и лечения посттравматических и послеоперационных нагноений является одной из важных проблем в травматологии и ортопедии. Частота этих осложнений, по данным различных авторов, составляет от 10 до 30% [Петраков A.A. и соавт., 1993; Покровский В.И., 1997; Блатун Л., 1998].

Госпитальная инфекция в травматологии и ортопедии характеризуется наличием широкого спектра возбудителей гнойно-воспалительных процессов. В последние годы отмечается изменение качественного и количественного состава возбудителей, что нередко определяет особенности клинических проявлений хирургической инфекции на современном этапе [Фадеев С.Б., 2001].

Одним из основных возбудителей раневой инфекции у травматолого-ортопедических больных остаётся золотистый стафилококк, который в 40% случаев является единственной причиной гнойного процесса. Грамотрицательная микрофлора является этиологическим агентом в 35% случаев гнойных осложнений [Петраков A.A., 1993; Neely J.L., 1994; Kluytmans J., 1994].

По мнению некоторых авторов [Márchese А., 2000; Сидоренко C.B., 2001], в настоящее время в хирургических стационарах количество нагноений, связанных с инфицированием грамотрицательной микрофлорой, в основном представителями рода Pseudomonas, вновь возрастает.

Изучение плазмидных ДНК грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов является дополнительным методом бактериологической диагностики и позволяет определить пути и источники распространения внутрибольничной инфекции [Домбровский A.M., 1990; Alexander J.W., 1990; Marcellino М.Т. et al., 1992].

Плазмидный профиль штаммов в комплексе с другими видами исследований используется различными авторами для изучения явления бактериальной транслокации, которая в последние годы признаётся одним из основных механизмов эндогенного инфицирования и может являться причиной значительного числа гнойных осложнений [Бородин A.B. и соавт., 2001; Kollef М.Н., 1999].

Существуют различные методы выделения плазмидных ДНК, особенно грамотрицательных бактерий, которые различаются между собой по чистоте получаемого продукта, по затрачиваемому времени, однако далеко не все они применимы к клиническим штаммам микроорганизмов, имеющим особенности морфологического строения и биохимического метаболизма [Харди К., 1989].

Выделение плазмидных ДНК из стафилококков представляет определённые трудности, одна из которых заключается в сложности разрушения клеточной стенки стафилококка [Покровский В.И., 1999; Coia J.E. et al., 1989].

В связи с этим большое значение придаётся разработке оптимальных условий выделения и изучения электрофоретической подвижности плазмидных ДНК грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, что позволит расширить возможности эпидемиологического анализа при изучении посттравматических и постоперационных гнойных осложнений.

Цель исследования:

Целью настоящего исследования является клинико-диагностический анализ частоты встречаемости плазмидных ДНК при различных гнойных осложнениях в травматологическом стационаре на основе оптимизации методов выделения и условий проведения электрофореза высоко- и низкомолекулярных плазмидных ДНК клинических штаммов грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов.

Задачи исследования:

1.Исследовать распространенность различных полиантибиотикорезистентных грамположительных и грамотрицательных микроорганизмов, выделенных от больных с гнойными осложнениями в клиниках травматологического стационара и провести анализ частоты встречаемости плазмидных ДНК у этих штаммов микроорганизмов.

2. Изучить на клинических штаммах грамотрицательных микроорганизмов возможность применения различных методов выделения плазмидных ДНК.

3. Разработать доступные методы выделения плазмидных ДНК из грамположительных микроорганизмов.

4. Исследовать оптимальные условия проведения электрофореза высоко- и низкомолекулярных плазмид грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов.

Научная новизна

Впервые проведён клинико-диагностический анализ частоты встречаемости плазмидных ДНК при различных гнойных осложнениях у травматологических больных.

Впервые подобраны минимальные концентрации лизостафина, используемого при разрушении клеточной стенки стафилококка, а также модифицированы и применены в исследовательской работе доступные методы выделения плазмидных ДНК из клинических штаммов стафилококка.

Впервые разработаны оптимальные условия изучения электрофоретической подвижности высоко- и низкомолекулярных плазмидных ДНК различных грамотрицательных микроорганизмов.

Практическая значимость

Предложенные модификации методов выделения плазмидной ДНК из грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов позволяют / * У^.г-4 Л ^ 51 8 идентифицировать плазмиды бактериальных клеток, определять источники и пути передачи госпитальной инфекции в травматологическом стационаре. Результаты проведенных исследований используются в практической работе бактериологической лаборатории Саратовского НИИ травматологии и ортопедии и в учебном процессе кафедры биологической химии Саратовского государственного медицинского университета. По материалам исследований составлены и утверждены учебно-методические рекомендации «Анализ плазмидных ДНК методами биологической химии». Получено свидетельство на полезную модель «Кювета для выращивания микроорганизмов» № 22478 по заявке № 2001131454/20/033618, приор, от 21.11.2001 // БИ.- 2002.- №10. Соавт.: В.Б.Бородулин, А.М.Гнетнёв, Е.Г.Чеботарева, Ю.И.Кирова, Н.Ю.Фомина.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В клинических штаммах грамотрицательных и грамположительных микроорганизмов обнаруживается плазмидная ДНК, определена зависимость частоты встречаемости плазмидных ДНК от видовой принадлежности микроорганизмов, выделенных при различных гнойно-воспалительных осложнениях у травматологических больных.

2. Разработаны доступные методы выделения плазмидных ДНК из грамположительных микроорганизмов и эффективный метод лизиса клеток стафилококка, позволяющие шире использовать выделение плазмидных ДНК для выполнения эпидемиологического анализа в связи с упрощением методики и снижением материальных затрат.

3. Подобраны оптимальные условия электрофореза высоко- и низкомолекулярных плазмидных ДНК клинических штаммов грамотрицательных микроорганизмов, что обеспечивает высокую визуальную чёткость плазмидного профиля.

Апробация работы

Материалы диссертации доложены и обсуждены на II Российской конференции с международным участием «Внутрибольничная инфекция -проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики, лечения и профилактики» (Москва, 1999); на конференции «Лабораторные исследования в хирургии, акушерстве, травматологии» (Саратов, 2002); на научно-практической конференции СГМУ «Молодые учёные - здравоохранению региона» (Саратов, 2003). Диссертация обсуждена и одобрена на расширенном заседании кафедры биологической химии Саратовского государственного медицинского университета и лабораторного отдела Саратовского НИИ травматологии и ортопедии (2003).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, в том числе одна - в центральной печати.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, пяти глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя использованной литературы.

Заключение диссертации по теме «Клиническая лабораторная диагностика», Бабушкина, Ирина Владимировна

ВЫВОДЫ

1. Исследовано соотношение наиболее этиологически значимых грамотрицательных микроорганизмов в клиниках травматологического стационара. В клинике острой травмы распространенность представителей семейства Enterobacteriaceae составила 88,7%, а представителей рода Pseudomonas- 12,3% от общего количества изученных грамотрицательных бактерий в этом отделении. В клинике последствий травм 36,6% грамотрицательных бактерий составляли представители семейства Enterobacteriaceae и 64,4% - бактерии рода Pseudomonas.

Значительную часть штаммов, отнесенных к роду Staphylococcus, составили штаммы Staphylococcus aureus - 63,6% от всех изученных штаммов стафилококка. Из них наибольшее количество было выделено в клинике последствий травм - 44,6% и в клинике острой травмы - 28,9% от общего количества штаммов Staphylococcus aureus.

2. Изучена частота распространения плазмидосодержащих штаммов грамотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, которая колебалась от 40 до 71%, а у представителей рода Pseudomonas от 13 до 19% при различных гнойных осложнениях в клиниках травматологического стационара.

Плазмидосодержащие полиантибиотикорезистентные штаммы

Staphylococcus aureus встреча tcb с частотой от 57 до 84% при различных гнойных осложнениях в клиниках травматологического стационара.

3.Разработана модификак методов Birnboim, Doli и Kado, Liu, которая является наиболее удобной для выделения как высоко-, так и низкомолекулярных плазмидных ДНК из клинических штаммов грамотрицательных микроорганизмов, обладает хорошей разрешающей способностью и воспроизводимостью.

-ШЩЩЩЧ''

P5t

4.0пределена минимальная концентрация лизостафина, необходимая для полного лизиса клеток Staphylococcus aureus - 1 ЕД при инкубации 120 минут} 2 ЕД при времени инкубации 60 минут. Продемонстрировано, что существенное уменьшение концентрации лизостафина не сказывается на процедуре лизиса клеток стафилококка.

Разработаны модификации методов Bhaduri и Demchick, Townsend выделения плазмидных ДНК из клинических штаммов Staphylococcus aureus, доступные для бактериологических лабораторий лечебных учреждений.

5.Разработана процедура проведения электрофореза высоко- и низкомолекулярных плазмидных ДНК, выделенных из клинических штаммов грамотрицательных микроорганизмов и Staphylococcus aureus. Наиболее оптимальным является проведение электрофореза в течение 4-8 часов при напряжении 40-60 V в трис-боратном буфере как для высоко-, так и для низкомолекулярных плазмидных ДНК различных видов грамотрицательных микроорганизмов. Продолжительность электрофореза в течение 2-3 часов при напряжении 80-100 V в том же буфере являлась наиболее оптимальной при исследовании электрофоретических профилей плазмидных ДНК клинических штаммов Staphylococcus aureus.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Для выделения плазмидных ДНК из клинических штаммов грамотрицательных микроорганизмов предлагается модифицированная методика Birnboim-Doli и Kado-Liu. Для выделения плазмидных ДНК из клинических штаммов Staphylococcus aureus предлагаются модифицированные методики Bhaduri - Demchick и Townsend.

Разработанные модификации методов могут быть рекомендованы для внедрения в практику бактериологических лабораторий лечебных учреждений. Выделение плазмидных ДНК может служить дополнительным лабораторным тестом для обнаружения штаммов, вызывающих нозокомиальные инфекции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Бабушкина, Ирина Владимировна, 2003 год

1. Абаев И.В., Акимова Л. А., Шитов В.Т., Воложанцев Н.В., Светоч Э.А. Трансформация патогенных псевдомонад плазмидной ДНК // Молекулярная генетика, микробиология и вирусология. 1992. -№ 3-4. - С.17-20.

2. Адарченко A.A., Красильников А.П., Собещук О.С. Сравнительноеисследование антибиотиков и антисептиков в отношении Staphylococcusaureus // Антибиотики и химиотерапия. -1991. Т.36, № 2. - С.21-24.

3. Акатов А., Зуева B.C. Стафилококки. М.: Медицина, 1983. - С.14-35,156-178.

4. Алешкин Г.И. Репарация ДНК и мутагенез у бактерий, зависящие от плазмид. Автореф. дис.д-ра. мед.наук. М., 1989. - 45 с.

5. Алмагамбетов Н.Х. и др. Профилактика транслокации кишечной микрофлоры после выведения организма из терминального состояния //ЖМЭИ. 1992. -№5-6.-С. 11-14.

6. Альберте Б., Брей Д., Льюис Дж. и др. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, - 1987.-Т.2., С. 34-51.

7. Афиногенов Г.Е., Блинов Н.П. Антисептики в хирургии. Л.: Медицина, 1987. -144 с.

8. Ба Т.А.Т., Емшанов О.В., Каминский Г.Д. Анализ плазмидного профиля коллекции штаммов для бактериоцинотипирования Shigella Sonnei // ЖМЭИ. -1993.-№6.-С. 23-24.

9. Белобородое Ю.В., Левашов B.C. Трансформирующая активность R- и Lac-плазмид клинических штаммов грамотрицательных бактерий // ЖМЭИ.- 1979.-№11.-С.86-90.

10. Белокрысенко С.С., Самсонова Л.П. Структура и функции плазмид. М., 1980. - С.24-27.

11. Белокрысенко С.С., Парфенюк Р.Л. Микробиологический контроль за лекарственной устойчивостью возбудителей гнойно-септических инфекций новорожденных детей // Антибиотики и химиотерапия.- 1990.- Т.35, № 5,- С.21-24.

12. З.Беляков В.Д., Рябис Л.А., Калинский Г.Ф. Типирование возбудителей инфекционных болезней на современном этапе // ЖМЭИ.- 1998.- № 3. -С.37.

13. Бердичевский Б.А. и др. Значение аутогенного инфицирования в развитии послеоперационных осложнений //Хирургия. 1993. - № 5. - С.63-66.

14. Бил Дж., Ноулз Дж. Внеядерная наследственность. -М.: Мир, 1981.- С. 56-64.

15. Блатун Л. Некоторые аспекты госпитальной инфекции // Врач. -1998.-№1.-С.41.

16. Бондаренко В.М., Боев Б.В. Применение компьютерных технологий при оперативном анализе вспышек внутрибольничных инфекций // ЖМЭИ.- 1999.1. S (< н, -V «. да»? ^ $ *1381. Xs3.-C.21.

17. Бородин A.B., Захаров В.В., Симоненко Е.В. Транслокация бактерий при повреждениях. Обзор литературы // Анналы травматологии и ортопедии. -2001.-№2.-С. 27-34.

18. Воронин A.M. Плазмиды резистентности и биодеградации бактерий рода Pseudomonas: Автореф. дис. д-ра. биол. наук. М., 1987. - 38 с.

19. Бриан JI.E. Бактериальная резистентность и чувствительность к химиопрепаратам. М.: Медицина, 1984. - С. 195 -230.

20. Брискин Б. Антибактериальная профилактика и лечение послеоперационных осложнений и внутрибольничных инфекций // Врач. 1998. -№ 1.- С.30-34

21. Брода Л. Плазмиды. М.: Мир, 1982. - С.119-173.

22. Веселов А.Я. Микрофлора гнойно-воспалительных очагов и чувствительность ее к антибиотикам // Антибиотики и химиотерапия. 1990.- Т.37, № 1. - С.40

23. Вильяме Д. Резистентность к беталактамным антибиотикам // Антибиотики и химиотерапия. 1997.- № 10 - С.5-10.

24. Влодавец В.В. Современные представления о механизмах распространения внутрибольничной инфекции // Актуальные проблемы нозокомиальных инфекций и лекарственной устойчивости микроорганизмов. Минск, 1986.

25. Влодавец В.В. Этиология // Профилактика внутрибольничной инфекции. М.,43.1. С.53-54.-'4'i1993.-С. 6-11.

26. Воропаева С.Д., Ратгауз Г.Л., Миронова Т.Г. и др. Некоторые особенности госпитальных штаммов стафилококка // Антибиотики и химиотерапия. 1979. - № 4. - С.263-267.

27. Гааль Э., Медьеши Г., Верец Т.И. Электрофорез в разделении биологических макромолекул. Под ред. В.И. Розенгарта. М.: Мир, 1982.-446 с.

28. Габисония Т.Г. Распространение R-плазмид в штаммах Staphylococcus aureus и Pseudomonas aeruginosa: Автореф. дис. д-ра. биол.наук. Абовян, 1987. - 24 с.

29. Габисония Т.Г., Галушка Ф.П., Чанишвили Т.Г. Изучение конъюгативных R-плазмид, выделенных из госпитальных штаммов синегнойной палочки // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т.37, №12. - С.39-41.

30. Габисония Т.Г., Чаишвили Т.Г., Макаридзе P.M., Чиковани Л.А., Адамия Р.Ш., Галушка Ф.П., Харатаев Г.Н. Изучение плазмид антибиотикорезистентности из различных штаммов Staphylococcus aureus // Антибиотики и химиотерапия.- 1993.- т.38, № 6. С.30-34.

31. Глатман В.И., Кравец А.Н., Новикова И.С. Внехромосомные генетические элементы: значение для науки и практики. М., 1981. - С.43.

32. Гостищев В.К., Омельяновский В.В. Пути и возможности профилактики инфекционных осложнений в хирургии // Хирургия. 1997. - № 8. - С. 11-15.

33. Грибанова Л.К. Использование плазмид NPL-41 (INC Р-9) и RP-4 (INC Р-1) для1. V { Ii- ГЛ»1 f » V .конструирования векторов с широким кругом хозяев и клонирование генов в грамотрицательных бактериях. Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1989.-23с.

34. Гришина Е.В., Пехов A.M. Несовместимость и репликация плазмид // Бюл. эксп. биологии и медицины. 1991. - № 10. - С. 409-411.

35. Дальвадянц В.Г., Зарубин В.В., Кальной С.М. Определение наличия плазмидной ДНК методом электрофоретического скрининга у бактерий // Генетика и биохимия вирулентности возбудителей особо опасных инфекций: Мат-лы Рос. науч. конф. Волгоград, 1992. - С. 34.

36. Данилович В.М. Всесоюзное совещание по программе "Плазмида".-М.,1995.- С.61-63.

37. Девис Р. Генетика бактерий. -М.: Мир, 1984. С.176.

38. Домарадский Н.В., Ермолаев A.B. Основы бактериологии для экологов. М., 1999.-С. 70-74.

39. Домбровский A.M. Анализ плазмидного профиля антибиотикоустойчивых энтеробактерий, циркулирующих в стационаре // Антибиотики и химиотерапия. 1990. - Т.35, № 4. - С.28-31.

40. Дубейковский А.Н., Есикова Т.З., Воронин A.M. Новая плазмида с широким кругом хозяев pBSlOOl // Молекул, генетика, микробиология и вирусология. -1989. № 11. - С.40-44.

41. Ерова Т.Е. Генетические детерминанты антибиотикорезистентности штаммовбактерий родов Pseudomonas, Klebsiella, Serratia, Enterobacter: Автореф. дис.канд. биол. наук.- М., 1991. 17 с.

42. Ерова Т.Е., Анисимова JI.A., Смолянская А.З., Воронин А.М. Плазмиды и генетические детерминанты резистентности к антибиотикам грамотрицательных бактерий // Антибиотики и химиотерапия. 1989. - № 5. -С.365-370.

43. Исхакова Х.И., Баженов Л.Г. Госпитальные штаммы Pseudomonas aeruginosa в хирургической практике // ЖМЭИ. 1991. - № 9. - С.27-29.

44. Калнин К.В., Глатман Л.И., Бондаренко В.М., Березина JI.A., Терехов A.A., Цепева Г.Я. Плазмида резистентности Klebsiella pneumonia, контролирующая цитотоксическую активность // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - № 2.ч .-»:** л* v.^» f-tj,1«!-» j., л

45. Каплан A.B., Махсон Н.Е., Мельникова В.М. Гнойная травматология костей и суставов. М.: Медицина, 1985. - 384с.

46. Колганов А.Н., Вакуленко С.Б. Гены резистентности к аминогликозидным антибиотикам клинических штаммов Serratia marcescens и кодируемые ими ферменты//Антибиотики и химиотерапия. 1992. -Т.37, № И. -С.10-14.

47. Ковтун Г.Ю. Дифференцированное выделение низкомолекулярных плазмид // Лаб. дело. 1989.-№ 4. - С. 61-62.

48. Костюченко А.Л., Вельских А.Н., Тулупов А.И. Интенсивная терапия послеоперационной раневой инфекции и сепсиса.- СПб.: Фолиант, 2000.-447с.

49. Коробов В.П., Титова A.B., Лямкина Л.М., Механошина И.И. Изменение ант ибиотикочувствительности стафилококков в условиях реализации эффекта пептидного антибактериального фактора // Антибиотики и химиотерапия. -2002.-Т.47, № 2. С.11-15.

50. Коротяев А.И., Малышева Т.В. Классификация и эпидемиология R-плазмид энтеробактерий // Антибиотики и химиотерапия. 1988. - Т.ЗЗ, № 2. - С. 149154

51. Кравец А.Н., Солонин А.С., Захарова М.В., Тарутина З.Е. Плазмидная локализация и клонирование генов системы рестрикции-модификации из штаммов Citrobacter freundii // Молекул, генетика, микробиология и вирусология. 1992. -№ 7-8. - С.4-7.

52. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Местное лечение гнойных ран // Раны и раневая инфекция. М.: Медицина, 1990. - С.223-288.

53. Кулумбетова Д.Е. Системы регуляции конъюгационного переноса плазмид Escherichia coli: Автореф. дис. канд. мед. наук.- М., 1989. 16 с.

54. Лаптева Т.А., Баженов Л.Г., Суюмова А.С., Шабанова Н.Г. Идентификация и чувствительность к антимикробным препаратам энтеробактерий, выделенных при гнойно-воспалительных заболеваниях // Антибиотики и химиотерапия. -1993. Т.38, № 6. - С.35-40.

55. Леванова Г.Ф., Трошкина Д.М., Усачева С.Ю. //Стафилококковые инфекции. -Ростов. 1990.-С. 35-23.

56. Лившиц М.Л., Брусина Е.Б. Госпитальная инфекция: проблемы и пути решения // ЖМЭИ.- 1992.-№ 2.-С.22-24.

57. Литтл П.Ф.Р., Джексон Й.Дж., Постка А.-М., Лерах X. Новое в клонировании ДНК: Методы. М.: Мир, 1989. - 367 с.

58. Малышева Т.В., Коротяев А.И. Плазмиды как организмы и роль их в современной эпидемиологии бактериальных инфекций // VI Всерос. съезд микробиологов, эпидемиологов и паразитологов: Тез. докл., Н. Новгород. М., 1991. - с.103-104.

59. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбруг Д.А. Молекулярное клонирование: Пер. с англ. -М., 1984.-С 112-207.

60. Мельникова В.М., Беликов Г. П., Богомолова Н. С. Химиопрофилактика и химиотерапия при некоторых хирургических операциях // Профилактика внутрибольничной инфекции. М., 1993. - С.205-211.

61. Мельникова В.М., Беликов Г. П., Локтионова И.В. II Росс. конф. "Внутрибольничные инфекции проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики": Тез. докл. -М., 1999.- С.152-153.

62. Меньшиков Д.Д., Олейник В.А., Янискер Г.Я. Оптимизация надзора за экологией микрофлоры очагов нагноения // Антибиотики и химиотерапия.-1990.- Т.35., № 7.- С.44-47.

63. Меныпиков Д.Д., Олейнин В.А., Янискер Г.Я., Кумачева Е.Г., Залогуева Г.В., Финогеева Л.Г., Енилеев Р.Х. Организация надзора за экологией микрофлоры очагов нагноений // Антибиотики и химиотерапия. -1990. Т.35, № 7. - С.44-47.

64. Мейнелл Г. Бактериальные плазмиды. М.: Мир, 1976. - 237с.

65. Митрохин С.Д. Выбор антибиотиков при внутрибольничных инфекциях у больных со злокачественными новообразованиями // Антибиотики и химиотерапия. 2002. - Т.47., № 3 - С.29-32.

66. Молочаева И.С., Гуторова Л.Д., Рязанова А.И. Биологические свойства энтеробактерий и их использование в практических целях // Госпитальные инфекции и лекарственная устойчивость микроорганизмов: Сб. науч. тр. М., 1992. - С.90-92.

67. Мороз А.Ф., Анциферова Н.Г., Баскакова Н.В. Синегнойная инфекция. М.: Медицина, 1988.-256 с.

68. Мороз А.Ф., Глатман Л.И. Роль R-плазмид в формировании госпитальных штаммов грамотрицательных бактерий // Антибиотики и химиотерапия.- 1983.-Т.28, № 11.- С.859-874.

69. Медицинская микробиология // Гл. ред. Покровский В.И., Поздеев O.K. М.: ГЭОТАР Медицина, 1999. - 462 с.

70. Навашин С.М., Сазыкин Ю.О. Антибиотики: новые механизмы передачи резистентности // Антибиотики и химиотерапия. 1998.- Т.43, № 6. - С.28-36.

71. Навашин С.М., Фомина И.П. Рациональная антибиотикотерапия. M«: Медицина, 1982.-495 с.

72. Парфенова О.В. Метод выделения хромосомной ДНК, свободной от плазмид на примере эшерихий клинического происхождения // Биотехнология и генетика: Межвуз. сб. науч. тр. Н.Новгород. - 1991. - С.32-35.

73. Песнякевич А.Г. Поведение гетерологичных R-плазмид в клетках Erwinia: Автореф. дис. канд. биол. наук. Минск, 1987. - 18 с.

74. Петраков A.A. Травматолого-ортопедические стационары // Профилактика ВБИ.-М., 1993.-С.113-115.

75. Петраков A.A., Арутчева A.A., Аржакова И.И. и др. Профилактика эндогенных инфекционных осложнений у больных после тяжелых травм и ортопедических операций // Антибиотики и химиотерапия. 1993. - Т.38, № 6. - С.55-59.

76. Пехов А.П. Плазмиды бактерий. М.: Медицина, 1986. - С.152-223.

77. Покровский В.И. Внутрибольничная инфекция // Тер. архив.- 1998. Т.60, № 11.-С.З-6.

78. Полевода Б.Д. Плазмиды резистентности Pseudomonas aeruginosa pBS52 и pBS222 с широким кругом бактериальных хозяев: Автореф. дис. канд. биол. наук. М., 1987.- 17с.

79. Пяткин К.Д., Кривошеин B.C. Микробиология. М. 1980. - 108 с.

80. Самсонова A.JL, Левашев B.C. Чувствительность к дезинфектантам штаммов Е.coli, содержащих плазмиды множественной лекарственной устойчивости // ЖМЭИ. 1993. - № 6. - С. 33-34.

81. Сидоренко С.В. Теоретические и практические проблемы антибиотикорезистентности // Антибиотики и химиотерапия. 1992. - Т.37, № 9. С. 44-47.

82. Сидоренко С.В. Перспективы контроля распространения антибиотикорезистентности // Антибиотики и химиотерапия,- 1998.- Т.43, № 7. -С. 3-5.

83. Сидоренко С.В., Резван С.П., Грудинина С.А., Стерхова Г.В. Динамика антибиотикорезистентности возбудителей госпитальных инфекций в отделении реанимации // Consilium medicum: Экстра-выпуск. 2001. - С. 6-9.

84. Сидоренко С.В., Яковлев С.В. Инфекции в интенсивной терап и. М.: Зеркало, 2000. -237 с.

85. Скала Л.З., Сидоренко С.В., Нехорошева А.Г., Резван С.П., Карп В.П. Практические аспекты современной клинической микробиологии. М.: Медицина, 1990.-215 с.

86. Скобло JI.E., Уланова Т.И., Мазепа В.Н., Бруснигина Н.Ф., Барышева Н.Н. Плазмиды бактерий семейства Enterobacteriaceae, несущие ген термолабильного эндотоксина // Биотехнология и генетика: Межвуз. сб. науч. тр.- Н.Новгород, 1991. С. 20-23.

87. Стент Г. Молекулярная генетика. М.: Мир, - 1986. - 315 с.

88. Страчунский JI.С., Белоусов Ю.Б., Козлов С.Н. Антибактериальная терапия: 1 Практическое руководство. М., 2000. - 190 с.

89. Трошкина Д.М., Леванова Г.Ф. Плазмидный анализ кадмий-пенициллинорезистентных штаммов стафилококков, выделенных в акушерских стационарах // Антибиотики и химиотерапия.- 1992. Т.37, № 5. -С.7-9.

90. Фадеев С.Б. Некоторые этиологические аспекты хирургической инфекции мягких тканей // Анналы травматологии и ортопедии. 2001. - № 2.- С. 23-25.

91. Харди К. Плазмиды. Методы . М.: Мир, 1989. - 267 с.

92. Холловей Б.В. Генетика Pseudomonas // Молекулярные основы генетических процессов. М.: Наука 1981. -С.269-278.

93. Яковлев С.В. Клиническое значение резистентных микроорганизмов для выбора режима антибактериальной терапии в хирургии //Consilium medicum: Экстра-выпуск. 2001.- С 11-14.

94. Яфаев P. X., Зуева Л. П. Эпидемиология внутрибольничной инфекции. Л.: Медицина, 1989. - 168 с.

95. Alexander J.W. et al. Plasmid labeling confirms bacterial translocation in pancreatitis // Ann. Surg. 1990. - V. 212. - P. 496-512.

96. Bigelow N., Robson H.G., Dillom J.R. Strategies for molecular characterisation of methicillin- and gentamicin-resistant Staphylococcus aureus in a Canadian nosocomial outbreak // J. Med. Microbiol. 1989. - Vol.30. - P. 51-58.

97. Birnboim H. C. A rapid alkaline extraction method for the isolation of plasmid DNA // Methods Ensimol. 1983. - V. 100. - P. 234-255.

98. Birnboim H. C., Doly S. A rapid alkaline extraction procedure for screening recombinant DNA //Nucleic Acid Res. 1979. - V.7. - P. 1513-1523.

99. Bhaduri S., Demchick P.H. A simple and rapid method for disraption of bacteria for protein studies // Appl. Environ. Microbiol. 1985. - V. 46. - P. 941-943.

100. Carlson C. A., Pierson L. S., Rosen J.I. Pseudomonas stutzeri and related species undergo natural transformation // J. Bacteriol. 1983. - V.31. - P.93-99.

101. Datta N. Plasmid classification. // Plasmids of medical environmental and commercial importance. Eds. K. Tummis, Puhler A. Elsevier. North. Holland: Biomed. Press, 1979. - P. 3-12.

102. Domenico P., Marx J.L., Schoch P.E., Cunha B.A. Rapid plasmid DNA isolation from mucoid gram-negative bacteria // J. Clin. Microbiol. 1992. - V. 30, № 11. - P. 2859-2863.

103. Duncle L.M., Sippel J.C. Rapid microprocedure for extraction of plasmid DNA from Staphylococcus aureus // J. Infec. Dis. 1984. - V. 149. - P. 921-923.

104. Dyer D.W., Iamdolo J.J. Rapid isolation of DNA from Staphylococcus aureus //- ^ v'1. V *

105. Appl. Environ. Microbiol. 1983. - V. 46. - P. 283-285.

106. Eckhardt T. // Plasmid. 1978. - P. 584.

107. Firth N., Ridgway K.P., Byrne M.E. et al. Analysis of a trasfer region from the staphylc :occal cojugative plasmid pSK41.// Gene. 1993. - Vol.22. - P. 13-25.

108. Grady F., Lambert H. P., Finch R. G. Antibiotic and chemotherapy: antiinfective agents and their use in therapy. Seventh edition. Churchill - Livingstone - New York, 1997.-987 p.

109. Hacker J., Blum 0. G., Mbhidorfer I., Tscliape H. Pathogenicy islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution //Mol. Microbiol. -1997.- V.23.-P.1089-1097.

110. Halle E., Grimm H. Chinolonrezistenz in der klinischen Praxis: Fortsh. Antimikrob. Antineoplast. Chemother. 1998. - 16, 1. - S. 13-19.

111. Hardy K. G. Plasmid. A practical approah. Washington DC: IRL Press Oxford, - 1990.-P.5-12, 90-92.

112. Health L. S., Gary L. S., H.E.Health. A Simple and Generally Applicable Procedure for Releasing DNA from Bacterial Cells // Appl. Environ. Microbiol. -1986.- May.-P. 1138-1140.

113. Health L. S., Gary L. S., H.E.Health. A Simple and Generally Applicable Procedure for Releasing DNA from Bacterial Cells // Appl. Environ. Microbiol. -1986.- May.-P.l 138-1140.

114. Hollingshead S., Vapnek D. // Plasmid. 1985. - P.17-30.

115. Kado C., Liu T. Rapid procedure for detection and isolation of large and small Plasmids // Bacteriol. 1981. - V.145. - P. 1365-1373.

116. Klein R. D., Seising E., Wells R. D. A rapid microscale technique for isolation of recombinant plasmid DNA suitable for restriction enzyme analis // J. Clin. Microbiol. 1980. -№ 3. -P.88-91.

117. Kloos W. E. Systematic and the natural history of staphylococcy // J. Of Appl. Bacter. -1990. №8. - P.225-375.

118. Kluytmans J., Mouton J.W., Maat A.P. et al. Surveillance of postoperative infections in thoracic surgery // J. Hosp. Infect. 1994.- V.27., № 2. - P. 139-147.

119. KollefM.H. Epidemiology and risk factors for nosocomial pneumonia//Clinics in Chest Medicine. 1999. - V. 120, № 3. - P. 653-670.

120. Lyon B.R., May J.W., Skurray P.A. Analysis of plasmids in nosocomial strain of multiple-antibiotic-resistant Staphylococcus aureus // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1983. - V. 23. - P. 817-826.

121. Ma M.Y., Goldstein E.Y., Friedman M.H. et al. Resistance of gram-negative bacille as related to hospital use of antimicrobial agents // Antimicrobial Agents and Chemotherapy. 1983. - V. 24., № 3. - P. 347-352.

122. Marcellino M.T., Iona E., Farinelli S. et al. Plasmids as epidemiologic markers in nosocomial gram-negative bacilli: experience in an intensive care unit // Drugs Exp.Clin. Res. 1992. - V.18, № 4. - P.121-128.

123. Marchese A., Schito G.C. Evolution of antibiotic resistance in gram-positive pathogens // J. chemother. 2000. - V. 12, № 6. - P.459-462.

124. Meinhardt F., Schaffrath R., Larsen M. Microbial linear plasmids // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1997. - Vol. 47. - P.329-336.

125. NeelyJ.L. Staphylococcus aureus: a continuing problem// W.V.Med. J. 1994. -Vol.90., № 6.-P.238-241.

126. Nikiforov V.V., Aistov I.A., Fedorova L.S. An improved method for isolation of total bacterial DNA // Roumanian Biotechnological Letters. 1999. - V. 4, № 5. - P. 431-438.

127. Novick R.P., Murphy E., Gryczan T. J., Bason E., Edelman I. // Plasmid. 1979. -V.2.-P. 109.

128. Pena C., Pujol M., Ardanay C. et al. Epidemiology and successeful control of large outbreak due to Klebsiella pneumonie producing extended-spectrum ß-lactamases. // Ibid. 1998. - V.2. - P.53-58.

129. Ramos J., Duque E., Ramos-Gonzalez M. Survival in soils of an herbicide-resistant Pseudomonas putida strain bearing a recombinant TOL plasmid. // Appl. Environ. Microbiol. 1991. - Vol. 57. - P.260-266.

130. Rappuoli R. New Vaccines // Molecular basis of bacterial infection. 1998.1. P. 147.

131. Refsahl K., Anderson B. M. Coagulase-negative staphylococci: problem bacteria in hospital. Identification and resistance status // Nord. Med. 1991. - V.106. -P.228-231.

132. Rosendal K., Jessen O., Bulow et al. Reduction of Multiresistant Staphylococci in Danish Hospital, 1967-1974 // Staphylococci and Staphylococcus disease.- Stuttgart, New York, 1975.-P. 1027-1032.

133. Rosendal K., Jessen O., Faber V. Et al. Frequency, phagotypes and antibiotic resistance of Staphylococcus aureus isolated from blood cultures in Danmark 19751981 // Scand J. Infect. Dis. 1983. - Suppl. 41. -P. 19-29.

134. Rodrigues L., Guenara G. Inducible tellurium resistance and the Pac B character as traits for the identification of plasmids Inc H 12 in Serratia marcescens // Biomed. Lett. -1992. V.185. -P.71-72.

135. Stewart G. J., Carlson C.A., Ingraharn J.L. Evidence for an active role of donor cells in natural transformations of Pseudomonas stutzen // J. Bacteriol. 1983. - V. 156. -P.30-35.

136. Swartz M.N. Hospital-acquired infections: diseases with increasingly limited therapies//Proc. Nat. Acad. Sei. 1994.-V. 91, № 7.-P. 2420-2427.

137. Takahashi S., Nagano G. Rapid Procedure for isolation of Plasmid DNA and Application to Epidemiological analysis // J. Clinical Microbiology. 1984. -№ 5. -P. 608-613.

138. Tend R.H.K., Kenneth J., Sharon S. E.coli resistance to ampicillin/sulbactam // Chemotherapy. 1992. - V.6. - P.399-404.

139. Tomson C. J. Trimetoprim and brodimoprim resistance of gram-positive and gram-negative bacteria // J. Chemother. 1993. - V. 5, № 6. - P. 458 - 464.

140. Townsend D.E., Ashdown N. Green L.C., Grubb W.B. Analysis of plasmids mediating gentamicin resistance in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. // J. Antimicrob. Chemother. 1984. - V.13. - P. 347-352.

141. Townsend D.E., Ashdown N. Momoh M., Grubb W.B. Distribution of plasmid-borne resistance to nucleic acid binding compounds in methicillin-resistant Staphylococcus aureus. // J. Antimicrob. Chemother. 1985. -V.l. - P. 417-434.

142. Townsend D.E., Bolton S., Ashdown N., Grubb W.B. Transfer of plasmid-borne aminoglycoside resistance determinants in staphylococci. // J. Med. Microbiol. -1985.-V. 20.-P. 169-185.

143. Williams J.D. Antibiotic resistance in hospital pathogens-acquisition or spread ? // Int. J. antimicrob. Agents. 2000. - V.l8, № 3. - P.295-298.

144. Российским агентством по патентам и товарным .шакам на основании Патентного закона Российской Федерации, введенного в действие 14 октября 1992 года, выдано настоящее свидетельство на полезную модель

145. КЮВЕТА ДЛЯ ВЫРАЩИВАНИЯ МИКРООРГАНИЗМОВ1. Обладагель(ли):

146. Саратовский пау1по-исслвдоватвлъскн£ институт травматологии и ортопедии МЗ (РФпо заявке № 2001131454, дата поступления: 21.11.20011. Приоршет от 21.11.20011. Авюр(ы):см. па оооротв I

147. Свидетельство действует на всей территории Российской Федерации в течение 5 лет с 21 ноября 2001 г. при условии своевременной уплаты пошлины за поддержание свидетельства в силе

148. Зарегистрирован в Государственном реестре полезных моделей Российской Федерацииг. Москва, 10 апреля 2002 г.сЖЗ). сЖу&ашхi9) RU an 22478 аз) U151. 7 С 12 M 1/34

149. Адрес для переписки: 410002, г.Саратов, ул. Чернышевского, 148, Саратовский НИИ травматологии и ортопедии, для директора И.И. ЖадсноваI

150. Руководитель лабораторногоотдела СарНИИТО с--——у »канд. мед. наук ^ ----"\Г Гнетнев A.M.