Клиническая оценка прогностического значения пролиферативной активности и уровня экспрессии белка p53 опухолевых клеток при радиотерапии рака тела и шейки матки тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.19, Невзорова, Диана Владимировна

• Невзорова, Диана Владимировна
• 2005

Оглавление диссертации Невзорова, Диана Владимировна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Пролиферативная активность опухолевых клеток как фактор прогноза ближайших и отдаленных результатов лучевой терапии солидных опухолей, в том числе рака тела и шейки матки.

1.2. Апоптоз - важная форма гибели опухолевых и нормальных клеток и его корреляция с радиочувствительностью злокачественных опухолей.

1.3. Белок р53 и его значение в контроле клеточного цикла, репарации ДНК и апоптоза.

1.4. Роль белка р53 в регуляции радиочувствительности опухолевых клеток и прогнозе эффективности лучевой терапии злокачественных новообразований.

Глава II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Клинические группы исследования.

2.2. Иммунофлуоресцентное определение доли опухолевых клеток в фазе синтеза ДНК.

2.3. Иммуноцитохимическое определение доли р53 положительных опухолевых клеток.

2.4. Сочетанная лучевая терапия больных раком тела и шейки матки.

2.5. Оценка результатов лечения больных.

2.6. Статистическая обработка данных.

Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Оценка прогностического значения пролиферативной активности опухолевых клеток рака тела и шейки матки.

3.1.1. Отдаленные результаты сочетанной лучевой терапии больных раком тела матки с разной величиной индекса метки опухолевых клеток.

3.1.2. Результаты лечения больных раком шейки матки с разной величиной ИМ опухолевых клеток.

3.2. Оценка прогностического значения уровня экспрессии белка р53 в опухолевых клетках рака тела и шейки матки.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническая оценка прогностического значения пролиферативной активности и уровня экспрессии белка p53 опухолевых клеток при радиотерапии рака тела и шейки матки»

Актуальность проблемы

Рак тела и шейки матки занимает 2 место среди злокачественных опухолей репродуктивной системы женщины. В России в настоящее время ежегодная заболеваемость раком эндометрия составляет 5,2 на 100000 женщин, раком шейки матки -14,9. В течение последних двух десятилетий во всем мире отмечается отчетливая тенденция к увеличению частоты развития гормонозависимых опухолей, что, в первую очередь, относится к раку тела и шейки матки и раку молочной железы. Несмотря на наметившееся во многих странах мира снижение заболеваемости раком шейки матки (при одновременном росте рака тела матки), показатели смертности все продолжают оставаться высокими. В 1994 г. они составили 8,0 на 100 тыс. населения, даже превысив аналогичный показатель (5,0 на 100 тыс. населения) 1990 г. (Бохман Я.В., 1991; Двойрин В.В. и др., 1996). За последнее десятилетие увеличилось число вновь выявленных больных с местно-распространеннными формами заболевания и, как следствие, возросла летальность на первом году после установления диагноза (Чиссов В.И. и соавт., 1998). Рецидивы РШМ после специального лечения чаще возникают через 12-20 мес. после начала лечения, их частота колеблется от 3,3% до 40%, 78,3%) всех рецидивов выявляются в первые 2 года после начала лечения (Бохман Я.В., 1991).

В связи с представленными данными очевидна необходимость улучшения результатов лечения и качества жизни онкологических больных за счет оптимизации и индивидуализации планов лучевой терапии, являющейся подчас единственно возможным методом лечения. Развитие современной лучевой терапии базируется на постоянном углублении знаний не только о биологии возникновения и развития злокачественных новообразований, клиническом течении заболевания, но и оценке реакций опухолевых и нормальных тканей организма на различные виды ионизирующих излучений. Развитие и совершенствование различных направлений лучевой терапии представляется актуальной задачей и, безусловно, позитивно сказывается на эффективности метода. Повышение эффективности лучевого лечения достигается за счет пространственно-временной оптимизации лучевой терапии, развития технических средств, управления радиочувствительностью с помощью радиомодифицирующих агентов. Актуальными являются работы, посвященные поиску прогностических факторов, позволяющих приблизиться к индивидуальному планированию лучевого лечения, разработке новых технологий контактных и интраоперационных методов облучения и сочетанному использованию ядерных частиц (протонов, нейтронов, нейтрон-захватного облучения). Эти обстоятельства определяют необходимость поиска дополнительных маркеров, которые могут быть использованы в клинической практике как факторы, определяющие прогноз заболевания. В настоящее время не вызывает сомнения, что в качестве таких дополнительных маркеров могут быть использованы так называемые биологические характеристики опухоли. Общеизвестно, что даже близкие по клинико-морфологическим показателям (размер первичного очага, локализация, гистологический тип и степень дифференцировки опухоли, глубина инвазии и вовлечение в опухолевый процесс прилежащих тканей и т.д.) злокачественные опухоли по-разному отвечают на проводимое лечение, так как могут различаться по скорости роста, пролиферативной активностью, степенью оксигенации и реоксигенации, системой кровоснабжения, генетическими признаками (Деденков А.Н. и соавт., 1987; Ярмоненко С.П. и соавт., 1992). Прогресс в области молекулярно-биологических исследований канцерогенеза показал существенную гетерогенность злокачественных опухолей по наличию разнообразных генных и структурных мутаций, уровню экспрессии генов и т.д. Выяснение клинического значения этой гетерогенности, безусловно, является актуальной проблемой радиологии и онкологии в настоящее время.

Клинические исследования, посвященные изучению прогностической ценности параметров пролиферации злокачественных новообразований, проводились большим количеством ученых

Котельников A.M., 1989; Erba Е. et al., 1989; Holte H. et al., 1989; Hedley D.W., 1993; Tase Т., 1997; Victorson M., 1997; Collin F., 1997; Kamoi S. et al., 2001). Получен огромный материал по параметрам пролиферации опухолей человека и их прогностической значимости. Однако эти данные зачастую противоречивы и, в связи с появлением новых знаний относительно генетических характеристик злокачественных опухолей, требуют дальнейших исследований.

Все вышеизложенное и явилось основанием предлагаемой работы, определило ее цели и задачи.

Цели и задачи исследования

Целью настоящей работы является изучение прогностического значения показателей пролиферативной активности опухолевых клеток и уровня экспрессии белка р53 в отношении отдаленных результатов сочетанного лучевого лечения больных раком тела и шейки матки.

Для достижения поставленной цели намечены следующие задачи:

1. Оценить результаты лучевого лечения больных раком тела и шейки матки в зависимости от значения пролиферативной активности опухолевых клеток;

2. определить прогностическое значение пролиферативной активности раковых клеток с учетом стадийности опухолевого процесса и методики внутриполостной лучевой терапии при раке тела матки;

3. оценить прогностическое значение уровня экспрессии белка р53 при раке тела и шейки матки;

4. исследовать корреляцию между экспрессией белка р53 и пролиферативной активностью клеток злокачественного новообразования.

Научная новизна работы

В работе оценены отдаленные результаты сочетанного лучевого лечения больных раком тела и шейки матки с учетом пролиферативной активности опухолевых клеток, причем впервые:

• проведен анализ 10-летних результатов сочетанного лучевого лечения больных раком тела и шейки матки с учетом степени пролиферативной активности опухолевых клеток;

• прогностическая значимость пролиферативной активности опухолевых клеток тела матки оценена с учетом стадии заболевания;

• определено прогностическое значение уровня пролиферативной активности опухолевых клеток рака тела матки при использовании разных источников ионизирующей радиации (у-нейтронного и у-излучения), а также местной гипертермии в качестве радиомодификатора.

Практическая значимость работы

Проведенное в работе исследование зависимости результатов лучевого лечения больных раком тела и шейки матки от степени пролиферативной активности злокачественных клеток и экспрессии белка р53 до лечения имеет как теоретическое, так и практическое значение. Во-первых, полученные результаты исследования вносят вклад в понимание биологических характеристик опухолей женской половой сферы, их индивидуальных особенностей и причин различного ответа на лечебное воздействие.

Во-вторых, анализ выживаемости больных с разным уровнем пролиферативной активности опухолевых клеток показал перспективность использования данной характеристики опухоли перед началом проведения лучевой терапии как фактора прогноза отдаленных результатов лечения. Данное исследование открывает возможность индивидуального планирования лучевой терапии. Комплексное исследование клинико-морфологических и биологических характеристик опухоли имеет важное значение для индивидуализации плана лучевой терапии и, как следствие, для улучшения результатов лечения онкогинекологических больных.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Высокий уровень пролиферативной активности опухолевых клеток тела матки является . фактором неблагоприятного прогноза отдаленных результатов сочетанного лучевого лечения;

2. пролиферативная активность опухолевых клеток рака тела матки имеет наибольшее прогностическое значение на первых стадиях развития злокачественного процесса;

3. быстрая пролиферация злокачественных клеток шейки матки являются прогностически благоприятным фактором долговременной выживаемости больных;

4. высокий уровень экспрессии ядерного белка р53 в опухолевых клетках рака шейки и тела матки является благоприятным фактором отдаленных результатов сочетанной лучевой терапии.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы доложены на IV Съезде по радиационным исследованиям (Москва, 2001г.); на конкурсе научных работ «Наука - клинической практике» (Обнинск, 2002г.), на котором отмечены дипломом за I место. За результаты исследования, представленного на соискание Российско-Немецкой премии им. Зейдлица в области онкологии за 2002 г., получен диплом за второе место.

Апробация диссертации состоялась на научно-практической конференции клинического радиологического сектора ГУ- МРНЦ РАМН 14 апреля 2003 года.

По материалам диссертации опубликовано 4 печатные работы.

Структура и объем диссертации

По структуре содержания диссертация состоит из списка сокращений, введения, обзора литературы, 2 глав, посвященных собственным клиническим исследованиям, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 101 странице печатного текста, иллюстрирована 17 таблицами и 4 рисунками. Библиографический указатель включает 185 источников отечественных и зарубежных авторов.

Конкретное участие автора в получении научных результатов

Автор принимала непосредственное участие в динамическом наблюдении за больными, сборе информации, последующей обработке и оценке полученных результатов.

Диссертационная работа проводилась в рамках основных научных направлений ГУ- МРНЦ РАМН:

1. «Оптимизация планирования и реализации пространственно-временных параметров в лучевой терапии» (1986-90 гг.). № гос. регистрации - 01860084888.

2. «Разработка методов сочетанного лучевого лечения рака шейки и тела матки с применением местной СВЧ-гипертермии» (1986-90 гг.). ОНТ "МОДИФИКАТОР" № гос. регистрации -01860084833.

3. «Разработка новых методов комплексной терапии злокачественных новообразований» (1994-96 гг.). № гос. регистрации - 01940002774.

Выполнена в отделе лучевой терапии (руководитель - заслуженный деятель науки РФ, член-корреспондент РАМН, профессор, доктор медицинских наук Ю.С.Мардынский) Медицинского радиологического научного центра РАМН (директор - заслуженный деятель науки РФ, академик РАМН, профессор А.Ф.Цыб).

Автор выражает искреннюю благодарность научным руководителям работы доктору медицинских наук Л.И.Крикуновой и кандидату биологических наук И.А.Замулаевой, за критические замечания в процессе выполнения работы, своим коллегам - сотрудникам отделения лучевой терапии гинекологических заболеваний ГУ- МРНЦ РАМН и отдела радиационной биохимии за помощь и поддержку в выполнении исследования.

Заключение диссертации по теме «Лучевая диагностика, лучевая терапия», Невзорова, Диана Владимировна

ВЫВОДЫ

1. При раке тела матки высокая пролиферативная активность опухолевых клеток, определенная по значению индекса метки (ИМ), является неблагоприятным фактором прогноза отдаленных результатов сочетанного лучевого лечения. Так, общая выживаемость на 5 и 10 лет при медленно пролиферирующих опухолях достоверно выше и составляет 78,0±6,9% и 70,2±8,1%, против 63,5±7,9% и 47,6±9,1% соответственно при быстро пролиферирующих. новообразованиях. Безрецидивная выживаемость соответственно 78,0±6,9% и 66,2±8,6% при ИМ<4,0%; 54,4±7,7% и 47,9±8,0% при ИМ>4,0% (р<0,05).

2. Уровень пролиферативной активности опухолевых клеток тела матки имеет прогностическое значение на первой стадии заболевания. Общая десятилетняя выживаемость составила 80,5±7,9% при медленно пролиферирующих опухолях и • 49,4±12,2% при быстро пролиферирующих (р<0,05). При II и. III стадиях заболевания между группами не отмечено статистически достоверных различий.

3. Злокачественные опухоли шейки матки с высокой пролиферативной активностью имеют благоприятный • прогноз долговременных результатов сочетанной лучевой терапии. Общая выживаемость на 5 и 10 лет достоверно лучше при ИМ>5,0% и составляет 84,4±8,3% и 70,2±11,5%, в то время как при ИМ<5,0% соответственно 49,6±9,3% и 45,1±9,5%. Безрецидивная выживаемость на данных сроках при ИМ>5,0% была на уровне 84,4±8,3% и 70,2±11,5% соответственно, при ИМ опухолевых клеток <5,0% соответственно 46,2±9,3% и 41,6±9,4% СР<0,05).

4. Терморадиотерапия нивелирует неблагоприятное прогностическое значение высокой пролиферативной активности опухолевых клеток тела матки. Общая выживаемость при ИМ<4,0% на сроках 5 и 10 лет достоверно не отличалась и составила 82,9±11,0% и 69,1±15,6%, против 90,0±9,5% при ИМ>4,0%. Безрецидивная выживаемость при медленно пролиферирующих опухолях была соответственно 82,9± 11,0% и 53,7± 18,2%, при быстро пролиферирующих - 90,0±9,5% (р>0,05).

5. Отдаленные результаты сочетанной лучевой терапии статистически значимо выше в случае высокой доли р53 положительных опухолевых клеток до лечения. Трехлетняя общая и безрецидивная выживаемость больных раком эндометрия составляла 100,0% при доле р53+ клеток более 17,0%) и только 50,0±8,7%, если этот показатель был менее 17,0%.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на достигнутые на сегодняшний день успехи в лечении рака тела и шейки матки, не потеряли своей актуальности исследования, целью которых является улучшение результатов лечения и качества жизни онкологических больных. Повышение эффективности сочетанной лучевой терапии, являющейся подчас единственно возможным методом лечения, достигается, в основном, за счет развития технических средств, пространственно-временной оптимизации лучевого воздействия, применения радиомодификаторов в том числе гипертермии. Имеющееся разнообразие методов лучевого .воздействия на опухоль определяет необходимость выбора оптимальной схемы лечения конкретного больного. В настоящее время показано, что при планировании лучевой терапии важно учитывать не только клинико-морфологические, но и биологические характеристики опухолевого процесса.

В последние годы • доказано важное значение параметров пролиферативной активности, апоптоза опухолевых клеток и генов, контролирующих эти процессы, как маркеров биологической агрессивности и радиочувствительности опухолей ряда локализаций, для прогноза непосредственной реакции на лучевое лечение и клинического течения заболевания (Котельников A.M., 1989; Erba Е. et al., 1989; Holte H. et al., 1989; Hedley D.W., 1993; Tase Т., 1997; Victorson M., 1997; Collin F., 1997; Kamoi S. et al., 2001). Однако опухоли тела и шейки матки остаются менее исследованными в этом плане, а имеющиеся данные зачастую противоречивы (Silvestrini R. et al. в 1984; Tubiana М. et al., 1989; Heatley M.K., 1998; Gasinska A. et al.,. 1999; Mariani-L. et al., 2001; Bonatz G. et al., 1999).

Данная диссертационная работа посвящена исследованию актуальной и достаточно малоизученной проблемы - изучению возможности прогнозирования долговременных результатов лечения больных раком тела и шейки матки на основе показателей пролиферативной активности и экспрессии белка р53 в опухолевых клетках до лечения.

Материалом для исследования явился ретроспективный анализ клинических наблюдений за 79 больными раком тела и 51 раком шейки матки I-IV стадий FIGO, которым в отделении лучевой терапии гинекологических заболеваний ГУ МРНЦ РАМН в период с 1984 по 1994 гг. проводилось сочетанное лучевое лечение. Средний возраст больных раком тела матки составил 55,3±6,2 (25-78) лет, раком шейки матки -61,2±5,4 (35-67) год. : .

Степень распространения опухолевого процесса устанавливалась на основании данных клинического обследования. В группе больных раком тела матки I стадия заболевания диагностирована у 54 (68,4%), II стадия -у 20 (25,3%), III-IV стадии - у 5 .(6,3%) женщин. Среди больных раком шейки матки распределение по стадиям было следующим: I - наблюдалась у 14 (27,4%), II - у 21 (41,1%), III стадия у 14 (27,4%), IV- у 2 (4,0%) пациенток.

Данные морфологических исследований оценивались в соответствии с рекомендациями ВОЗ по международной гистологической классификации опухолей (Geneva, 1975). Аденокарцинома шейки матки выявлена у 7 больных (14%), плоскоклеточный неороговевающий рак - у 39 (76%), плоскоклеточный ороговевающий - у 5 пациенток (10%). По форме роста преобладали новообразования со смешанным типом - 46,7%, экзофитная и эндофитная формы роста наблюдались соответственно в 30,0% и 23,3% случаев.

Все больные раком эндометрия имели гистологический диагноз -аденокарцинома, причем высокая, умеренная и низкая степень дифференцировки ее имели место соответственно в 27(34,2%), в 42 (53,2%) и 10 (12,6%) клинических случаях.

Курс сочетанной лучевой терапии состоял из двух компонентов: дистанционного облучения в подвижном или статическом режимах первичного очага и зон регионарного метастазирования, на аппаратах Рокус-М и АГАТ-РМ-1 с источником* излучения 60Со, и внутриполостного облучения на аппаратах АГАТ-В, АНЕТ-В.

В зависимости от методики лучевой терапии были сформированы три группы. В первую группу вошло 35 больных раком тела матки получавших внутриполостное лечение на аппарате АГАТ-В (60Со (HDR)) в разовой очаговой дозе в точке А 5,0 Гр при ритме облучения 2 раза в неделю до СОД в точке А 50,0 Гр (ВДФ - 117 ед.). Метод терморадиотерапии применялся во второй группе 22 больным раком тела матки. Причем внутриполостное облучение источниками 60СО высокой активности сопровождалось 5 предварительными (за 15 мин до лечения) сеансами внутриполостной локальной СВЧ-г'ипертермии на аппарате Яхта-3 в течение 60 мин при температуре нагревания 43°С.

В третью группу включены 22 пациентки, внутриполостное лечение которым проводили с использованием источника ионизирующего излучения Cf в разовой очаговой дозе в точке А 5,0 Гр, при ритме облучения 2 раза в неделю до СОД в точке А 30-35 Гр.

Больные раком шейки матки получали внутриполостное лечение на аппарате АГАТ-В источником 60Со (HDR) идентично терапии рака тела матки.

В отделе радиационной биохимии ГУ МРНЦ РАМН у всех больных была определена доля опухолевых, клеток в фазе синтеза ДНК. Для этого был использован метод непрямой иммунофлуоресценции с поликлональными антителами к тимидину. В аспиратах из полости матки и соскобах с шейки матки до начала лечения определяли долю опухолевых клеток, связывающих указанные антитела, - индекс метки (ИМ).

Значения ИМ опухолевых клеток рака тела матки варьировали у разных больных от 0,0% до 39,7%, составляя в среднем (±SE) 6,9±2,9%. Нами не было выявлено статистически значимой корреляции между уровнем ИМ и стадией опухолевого процесса. Средние значения (±SE) ИМ при I, II и III стадиях составили 6,6±1,9%, 8,0±1,6%, 4,8±1,7% соответственно (р>0,05).

Проведенный анализ среднего значения тимидинового ИМ опухолевых клеток при разной степени дифференцировки аденокарциномы показал, что высоко- и среднедифференцированные опухоли имели этот показатель равный 6,6±1,9% и 6,3±2,1% соответственно. Однако, при низкой степени дифференцировки аденокарциномы эндометрия среднее значение ИМ было несколько выше и составило 9,6± 1,5% (р=0,02).

Таким образом, низкодифференцированные опухоли имели более высокую пролиферативную активность, тем самым обладали большей биологической агрессивностью, что достаточно хорошо согласуется с литературными данными (Peters et al., 1986; Erba E. et al., 1989; Bolger B.S. etal., 1996).

Для оценки прогностического значения уровня пролиферативной активности опухолевых клеток, все больные раком тела матки были распределены на группы с медленно и быстро пролиферирующими опухолями в зависимости от значения ИМ. Выбранное нами дискриминационное значение ИМ обеспечивало максимальные различия в выживаемости больных с благо- и неблагоприятным прогнозом. Для рака тела матки оно составило 4,0%. В 37 случаях ИМ опухолевых клеток был

4,0%, включая случаи отсутствия иммунореактивности в ядрах опухолевых клеток, ИМ которых был равен 0%, у 42 больных опухоли характеризовались высокой пролиферативной активностью и имели

ИМ> 4,0%. Распределение пациенток по стадиям в исследуемых группах было следующим: I стадия установлена соответственно у 28 (75,7%) и 26 (61,9%), II - у 7 (18,9%) и 13 (30,9%), III стадия диагностирована у 2 женщин (5,4%) первой группы и у 3 пациенток второй группы (7,2%).

С целью оценки прогностического значения величины ИМ опухолевых клеток была определена эффективность сочетанного лучевого лечения на различных сроках наблюдения с использованием актуариального метода построения таблиц дожития (Двойрин В.В., 1982; Березкин Д.П., 1982).

Показатели общей выживаемости на 5 и 10 лет составили 78,0±6,9% и 70,2±8,1% для медленно пролиферирующих опухолей и 63,5±7,9% и 47,6±9,1% соответственно для быстро пролиферирующих. Различия статистически значимы на сроках от 6 до 10 лет. •

В ходе проведенного анализа безрецидивной выживаемости было выявлено, что в группе больных с ИМ<4,0% ее показатели составили на 5 лет 78,1±6,9%, при ИМ>4,0% - 54,4±7,7% (р<0,05), на 10 лет - 66,2±8,6% и 47,9±8,0% соответственно (р>0,05). Различия статистически достоверны на сроках наблюдения от 2 до 7 лет.

Таким образом, отдаленные результаты лечения больных медленно пролиферирующими опухолями тела матки статистически значимо лучше, чем быстро пролиферирующими, что согласуется с данными литературы (Silvestrini R. et al., 1984; Geisinger et al., 1986; Bonatz G. et al., 1999; Mariani L. et al., 2001) и представлениями о механизмах клеточного ответа на повреждающие воздействия лучевой терапии.- Так, опухоли с высокой пролиферативной активностью включают большее количество клеток в радиочувствительных фазах цикла, успешнее отвечают на лечение, чем новообразования с низкой пролиферативной активностью. В то же время высокая пролиферативная активность определяет высокую агрессивность опухолевого процесса и является неблагоприятным прогностическим показателем долговременных результатов лечения больных (Деденков А.Н., 1987; Сергеева Н.С, 1991).

В ходе проведенного анализа отдаленных результатов лечения больных раком тела матки с учетом стадии заболевания нами было установлено, что наибольшую прогностическую значимость уровень пролиферативной активности имеет при I стадии заболевания. Так, общая 5- и 10-летняя выживаемость больных раком эндометрия составила 85,2±6,8% и 80,5±7,9% при ИМ<4,0%, ' а в группе быстро пролиферирующих опухолей 76,4±8,4% и 49,4±12,2% соответственно. Различия статистически достоверны на сроках 2 года, 6 лет и от 8 до 10 лет. При II и III стадиях заболевания общая выживаемость при различных уровнях пролиферации опухолевых клеток не имела статистически значимых различий. Так, на сроке наблюдения 5 лет она была равна 55,6±16,6% при ИМ<4,0% и 41,2±13,7% при ИМ>4,0% (р>0,05), на 10 лет -27,8± 18,7% и 41,2±13,7% соответственно (р>0,05). Таким образом, уровень пролиферативной активности злокачественных клеток, как было отмечено выше, имеет наибольшее прогностическое значение на первой стадии заболевания. При запущенном опухолевом процессе для прогнозирования результатов лучевой терапии необходимо учитывать иные клинико-морфологические и биологические характеристики опухоли.

Значения ИМ опухолевых клеток у разных больных раком шейки матки варьировали от 0,0% до .24,1%, имея • средний уровень равный 5,3±1,6%. Нами был выбран дискриминационный уровень ИМ, равный 5,0%), при котором различия выживаемости больных в двух группах с благоприятным и неблагоприятным прогнозами были максимальными. Все больные были распределены на группы с медленно и быстро пролиферирующими неоплазиями, причем ИМ<5,0% имела 31 женщина, включая случаи отсутствия иммунореактивности в. ядрах опухолевых клеток, ИМ которых был равен 0%; группу с ИМ опухолевых клеток >5,0% составили 20 пациенток. Распределение больных по стадиям в исследуемых группах было достаточно сходным. Так, I стадия заболевания наблюдалась у 8 (25,8%) и 6 (30,0%) больных, II - у 11 (35,5%) и 10 (50,0%), III - у 12 (38,7%) и 4 пациенток (20,0%) соответственно.

В ходе анализа зависимости величины ИМ от стадии опухолевого процесса у пациентов с диагнозом рак шейки матки нами не было выявлено статистически значимой корреляции. При I, II, и III стадиях средние значения ИМ были на уровне 3,9±1,1%, 7,1±1,3% и 7,3±1,9% соответственно (р>0,05). Тимидиновый ИМ в группе больных раком шейки матки также не имел статистически значимой корреляции со степенью дифференцировки опухоли. Средние значения (±SE) этого показателя были несколько выше у больных ороговевающим раком шейки матки (п=5), по сравнению с таковым в случае неороговевающего (п=39): 6,6±1,9% и 5,3±1,6% соответственно. Отсутствие статистически значимых различий, вероятно, связано с незначительным количеством больных ороговевающей формой рака шейки матки в нашем исследовании.

В ходе проведенного анализа отдаленных результатов лечения больных раком шейки матки выявлено, что на сроке наблюдения 5 лет при ИМ>5,0% общая выживаемость составила 84,4±8,3%, при ИМ<5,0% -49,6±9,3% (р<0,05), 10-летняя - 70,2±11,5% и 45,1±9,5% соответственно (р>0,05). Статистически достоверные различия были установлены на сроках наблюдения от 2 до 7 лет.

Аналогичные результаты получены в отношении безрецидивной выживаемости, как важного показателя эффективности проведенного лечения. Так, при ИМ опухолевых клеток <5,0% 5- и 10-летняя выживаемость больных составила 46,2±9,3% и 41,6±9,4%, в то время как при ИМ>5,0% - 84,4±8,3% и 70,2±11,5% соответственно. Данные статистически значимы на сроках от 2 до 7 лет.

Как отмечалось и другими исследователями, рак шейки матки занимает в отношении прогностического значения пролиферативной активности особое место по сравнению с опухолями других локализаций (Bolger B.S. et al., 1996; Heatley М.К., 1998; Gasinska A. et al., 1999). Указанные авторы установили, что долговременные (3- и 5-летние) результаты лечения больных лучше при высокой пролиферативной активности опухолевых клеток. В ходе проведенного нами исследования, впервые были получены результаты, подтверждающие эти данные на более отдаленных сроках наблюдения. Лучшие ' долговременные результаты сочетанной лучевой терапии больных быстро пролиферирующими опухолями шейки матки объясняется, вероятно, нивелированием высокой агрессивности высоко пролиферативно активных опухолей их лучшей непосредственной реакцией на лучевую терапию (TubianaM. etal., 1989).

По современным представлениям от 10 до 15% онкологических больных нуждаются в лучевой терапии с использованием радиосенсибилизаторов или плотноионизирующих излучений. Выявление таких больных до начала лечения является актуальной проблемой радиационной онкологии. Исследования в области радиобиологии и экспериментальной онкологии не оставляют сомнений в том, что для разрешения этой проблемы необходимо учитывать биологические характеристики опухолевого процесса, в том числе пролиферативную активность опухолевых клеток (Ярмоненко С.П. и др., 1992). Однако, клинические исследования в этом направлении пока в целом немногочисленны, а в отношении гинекологических опухолей практически отсутствуют. В связи с этим .нами проведен ретроспективный анализ прогностического значения пролиферативной активности опухолевых клеток тела матки при 3-х методиках внутриполостного лечения.

В данной работе установлено, что негативное влияние высокой пролиферативной активности клеток рака тела матки нивелируется при проведении облучения на фоне местной гипертермии, применяемой в качестве радиомодификатора, являющегося фактором сглаживания колебаний в выживаемости злокачественных клеток в зависимости от стадии клеточного цикла. При этом чувствительность клеток медленно пролиферирующих опухолей, характеризующихся небольшой S-фазной фракцией и подвергшихся облучению на фоне или без гипертермии, по-видимому, отличается в меньшей . степени, чем в случае быстро пролиферирующих новообразований. В с,вязи с этим эффективность лечения больных, оцениваемая нами по общей и безрецидивной выживаемости, существенно улучшалась при терморадиотерапии быстро пролиферирующих опухолей. Общая выживаемость больных при данном методе лечения статистически достоверно не отличалась при высокой и низкой пролиферативной активности опухолей, составляя на 5 и 10 лет соответственно 82,9±11,0% и 69,1±15,6% при ИМ<4,0%, в то время как при ИМ>4,0% на данных сроках 90,0±9,5%. Безрецидивная выживаемость была на уровне 82,9±11,0% и 53,7±18,2% соответственно при медленно пролиферирующих опухолях и 90,0±9,5% при быстро пролиферирующих.

При использовании у-излучения (60Со), высокая пролиферативная активность являлась показателем неблагоприятного прогноза. Так, общая 5-летняя выживаемость больных составила 80,6±6,1 % при ИМ<4,0% и 64,7±5,6% при ИМ>4,0%, 10-летняя - 72,5±9,9% и 48,9±8,9% соответственно. Различия статистически достоверны на сроках 2, 3 года и от 8 до 10 лет. Показатели безрецидивной выживаемости на сроках наблюдения 5 и 10 лет были на уровне 80,6±6,1% и 72,5±9,8% при низкой пролиферативной активности опухолей, в то время как при высокой

58,5±6,7% и 44,3±8,6% соответственно. Различия статистически достоверны на сроках от 2 до 10 лет.

Как отмечают Ярмоненко С.П. и др., 1992, при использовании плотноионизирующих излучений имеет, место: 1) меньшая вариация радиочувствительности по фазам клеточного цикла (кинетический фактор выигрыша - КФВ); 2) отсутствие репарации сублетальных и потенциально летальных повреждений клеток (репаративный фактор выигрыша - РФВ) по сравнению с фотонными излучениями. Кинетический фактор выигрыша плотноионизирующего излучения по сравнению с фотонным зависит от средней скорости пролиферации опухолевых клеток и наиболее высокий у медленно пролиферирующих опухолей. В случае нейтронной терапии быстро пролиферирующих опухолей вместо фактора выигрыша можно иметь фактор кинетической потери. Говоря о РФВ, следует отметить, что он связан с отсутствием при нейтронном облучении репарации в клетках некоторых опухолей, особенно если они находятся в радиорезистентных стадиях клеточного цикла, например в Go и Gi, когда возможно восстановление потенциальных летальных повреждений. По-видимому, КФВ и РФВ имеют существенное значение при лечении медленно пролиферирующих опухолей и в меньшей степени для быстро пролиферирующих. Полученные нами данные согласуются с этими представлениями. Так, при анализе отдаленных результатов сочетанного лучевого лечения с использованием нейтронного излучения было выявлено, что общая 5-летняя выживаемость при медленно и быстро пролиферирующих опухолях составила 57,1±18,7% и 41,9±13,6% (р>0,05), 10-летняя - 57,1±18,7% и 33,5±13,2% соответственно (р>0,05). Показатели 5- и 10-летней безрецидивной выживаемости больных этой группы составили 57,1±18,7% при ИМ<4,0% и 27,0±12,6% при ИМ>4,0% (р>0,05). Причиной такой низкой выживаемости больных после гамма-нейтронной терапии в целом, возможно, явилась малочисленность группы и то, что в нее вошли пациентки с более отягощенными анамнезом и течением заболевания.

Полученные нами результаты. • наглядно демонстрируют необходимость учета такой важной биологической характеристики опухолевых клеток, как пролиферативная активность, при индивидуальном планировании лучевой терапии рака тела матки. По нашим данным оценка пролиферативной активности опухолевых клеток до начала лучевой терапии предоставляет возможность, с одной стороны, выбрать группу пациентов, у которых гипертермическое воздействие будет эффективным, а, с другой стороны, избежать неоправданного использования терморадиотерапии у остальных больных.

В результате проведенного иммуноцитохимического исследования уровня экспрессии ядерного белка р53 в опухолевых клетках рака тела матки было выявлено, что количество р53 положительных клеток у разных больных находилось в пределах от 0,0% до 46,5%, среднее значение (±SE) составило 17,7±5,9%.

В ходе исследования все больные были распределены на две группы с учетом значения данного показателя. Дискриминационный уровень р53 положительных клеток, выбранный нами и равный 17,0%, обеспечил наибольшие различия выживаемости больных в исследуемых группах. Группу с уровнем р53<17,0% составили 7 женщин, р53 > 17,0% имели 5 пациенток. Распределение по стадиям в исследованных группах было достаточно сходным. Так, количество р5'3 положительных клеток менее 17,0% имели 5 больных (71,4%) с I стадией заболевания и 2 (28,5%) пациентки со II стадией. Этот показатель составлял более 17,0% у 4 (80,0%) больных с I стадией и 1 (20,0%) - со второй.

Что касается опухолевых клеток рака шейки матки, то определенная в ходе исследования доля р53 положительных опухолевых клеток варьировала в разных клинических случаях от 17,1% до 41,2%, составляя в среднем (±SE) 24,3±1,6%. В связи с чем все опухоли были оценены нами как р53 положительные.

Проведен анализ общей и безрецидивной выживаемости больных раком тела и шейки матки на сроке наблюдения 3 года после лечения. При этом в группе больных раком тела матки с р53<17,0% общая и безрецидивная выживаемость на сроке наблюдения 3 года составила 50,0±8,7%, при р53>17,0% - 100,0% (р<0,05).

Несмотря на малочисленность исследуемых групп, полученные в работе результаты подтверждают данные Tada V. et al. (1998) и Koelbl О. et al. (2001) в отношении глиобластом и опухолей ротовой полости. Таким образом, по нашим предварительным данным большая доля р53 положительных клеток в опухолях тела матки коррелирует с лучшей выживаемостью больных. К сожалению, мы не имели возможность сопоставить уровень экспрессии белка р53 и выживаемость больных РШМ по двум причинам: 1) небольшое количество обследованных больных; 2) опухолевые клетки всех больных характеризовались довольно высокой экспрессией белка р53. Однако обращает на себя внимание 100% общая и безрецидивная выживаемость больных раком шейки матки с р53 положительными опухолями. Приведенные в работе данные относительно прогностического значения доли р53+ клеток являются предварительными, однако они свидетельствуют о перспективности определения этого показателя при раке тела матки. Для более, определенного заключения необходимо проведение дальнейших исследований в этом направлении

Список литературы диссертационного исследования Невзорова, Диана Владимировна, 2005 год

1. Абассова С.Г., Липкин В.М., Трапезников Н.Н., Кушлинский Н.Е. Система Fas FasL в норме и при патологии // Вопросы биол. мед. и фарм. химии.-1999.-№ З.-С. 3-16.

2. Абраменко И.В., Фильченков А.А. Прогностическое значение апоптотического и пролиферат'ивного индексов при солидных новообразованиях// Онкология.-2002.-Т. 4.-№ З.-С. 165-170.

3. Белушкина Н.Н., Хасан Хамад Али, Северин С.Е. Молекулярные основы апоптоза // Вопросы биол. мед. и фарм. химии.-1998.-№ 4.-С. 15-23.

4. Березкин Д.П. Метод расчета показателей наблюдаемой и скорректированной выживаемости онкологических больных // Вопросы онкологии.-1982.-Т. 28.-№ 11.-С. 12-19.

5. Бохман Я.В. Руководство по онкогинекологии.-Л.,: Медицина.-1989.-С.463.

6. Владимировская Е.Б., Масчан А.А., Румянцев А.Г. Апоптоз и его роль в развитии опухолевого роста // Гемотол. трансфузиол.-1997.-№ 42.-С. 4-9.

7. Волянский Ю.Л., Колотова Т.Ю., Васильев Н.В. Молекулярные механизмы программированной клеточной гибели. // Успехи современной биологии.-1994.-Т. 1'14.-№ 6.-С. 679-692.

8. Габелов А.А., Грачева Н.Д., Фунштейн JI.B., Щербань Э.И. Влияние дозы и ритма облучения на митотическую активность клеток рака шейки матки // Вопр. онкологии.-1973.-Т. 19.-№ 2.-С. 10-14.

9. Ю.Двойрин В.В., Аксель Е.М., Трапезников Н.Н. Заболеваемость злокачественными новообразованиями и смертность от них населения стран СНГ в 1995 г. // ОНЦ РАМН.: М.-1996.-125 с.

10. П.Двойрин В.В. Статистическая оценка эффекта лечения онкологических больных // Вопросы онкологии.-1982.-Т. 28.-№ 12.-С. 29-37.

11. Двойрин В.В., Клименков А. А: Методика контролируемых клинических испытаний.-М.-Медицина.-1985.-143с.

12. Киселев Ф.Л. Вирус-ассоциированные опухоли человека: рак шейки матки и вирусы папиллом // Биохимия.-2000.-Т. 65.-№ 1.-С. 79-91.

13. Комарова Е.А., Гудков А.В. Супрессия р53: новый подход к преодолению побочных эффектов противоопухолевой терапии // Биохимия.-2000.-Т. 65.-№ 1.-С. 48-56.

14. Копнин Б.Н. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрессоров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза // Биохимия.-2000.-Т. 65.-№ 1.-С. 5-33.

15. Коршунов А.Г., Сычева Р.В., Голанов А.В. Иммуногистохимическое изучение апоптоза в глиобластомах больших полушарий головного мозга // Архив Патологии.-1998.-Т. 60.-№ З.-С. 23-27.

16. Котельников A.M. Прогностическое значение параметров пролиферации опухолевых клеток // Эксперим. онкология.-1989.-Т. 11.-№5.-С. 3-8.

17. Лихтенштейн А.В., Шапот B.C. Опухолевый рост: ткани, клетки, молекулы // Пат. Физиология и экспериментальная терапия.-1998.-№ З.-С. 25-44.

18. Лукьянова Н.Ю., Кулик Г.И., Чехун В.Ф. Роль генов р53 и bcl-2 в апоптозе и лекарственной резистентности опухолей // Вопр. онкологии.-2000.-Т. 46.-№ 2.-С. 121-128.

19. Лушников Е.Ф., Абросимов А.Ю. Гибель клетки (апоптоз).-М.-2001,-190 с.

20. Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития // Архив патологии,-1987,-Т. 49.-С. 84-89.

21. Мазурик В.К., Мороз Б.Б. Проблемы радиобиологии и белок р53 // Радиационная биология. Радиоэкология.-2001.-Т. 41.-№ 5.-С. 548-572.

22. Мардынский Ю.С, Гулидов И.А., Дмитренко Ю.О. Место адронной терапии в лечении злокачественных заболеваний // Сборник докладов. Школа-семинар "Энергетика и Человек". Обнинск,-1999.

23. Минкина Г.Н., Манухин И.Б., Франк Г.А. Предрак шейки матки.-М,-2001.-118 с.

24. Нестерова М.В., Чо-Чанг Ю.С., Северин Е.С. Роль антисмысловых олиго нуклеотидов в регуляции клеточных процессов // Вопр. биол. мед. и фарм. химии.- 1998.-№ 4.-С. 3-14.

25. Новикова B.C. Программированная клеточная гибель.// С.Петербург.-1996.-276 с.

26. Нурмухаметова Е. Роль р53 в возникновении и развитии злокачественных опухолей // Русский Медицинский Журнал.-1996.-Т. 4.-№6.-С. 15-17.

27. Павлов А.С., Каракулов Р.К., Симакина Е.П., Пелевина И.И. Параметры пролиферации клеток опухолей прямой кищки человека и их изменение при фракционированном облучении // Вопр. онкологии.-1981.-Т. 27.-№ 4.-С. 52-59.

28. Петров С.В., Кулагин Р.Н., ДыПлаков Д.Э. и др. Маркеры пролиферации опухолевых клеток в раковых опухолях гортани // Казанский медицинский журнал.-2000.-Т. 81.-№ 4.-С. 265-268.

29. Потапов СЛ., Киселева Е.С., Сидорова О.В. и др. Параметры пролиферации клеток рака шейки матки до облучения // Медицинская радиология.-1979.-№ 11.-С. 45-51.

30. Ременник Л.В., Старинский В.В. Эпидемиология злокачественных новообразований. // Избранные лекции по клинической онкологии.-2000.-736 с.-С. 24-52.

31. Роговская С.И. Апоптоз ■ при патологии шейки матки, ассоциированной с вирусом :.папилломы человека // Гинекология.-2000.-Т. 2.-№ З.-С. 17-23.

32. Романенко A.M. Апоптоз и рак //Архив патологии.-1996.-Т. 58.-№ 3.-С. 18-23.

33. Сергеева Н.С. Прогнозирование индивидуальной реакции злокачественных опухолей Человека на лучевую и лекарственную терапию // Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук. Москва.-1991.-40 с.

34. Скулачев В.П. В своем межмембранном пространстве митохондрия таит "белок самоубийства", который выйдя в цитозоль, вызывает апоптоз//Биохимия.-1996.-Т. 61.-№ 11.-С. 2060-2063.

35. Соловьева JI.П., Сынзыныс Б.И., Подгородниченко В.К., Андреев

36. B.Г. Определение количества клеток, синтезирующих ДНК,с помощью иммунофлуоресцентного метода // Цитология.-1986.-Т. 28.-№ З.-С. 373-376.

37. Ставровская А. А. Клеточные механизмы множественной лекарственной устойчивости опухолевых клеток // Биохимия.-2000.-Т.65.-№ 1.-С. 112-126.

38. Уманский С.Р. Апоптоз: молекулярные и клеточные механизмы. // Молекулярная биология.-1996.-Т. 30.-№ З.-С. 487-502.

39. Харрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы.-М.-1999.-558 с.

40. Цыпленкова В.Г., Бескровнова Н.Н. Апоптоз // Архив патологии.-1996.-Т. 58.-№ 5.-С. 71-74.

41. Чиссов В.И., Сергеева Н.С., Петров А.Н. и др. Оценка пролиферативной активности некоторых злокачественных опухолей человека непрямым иммунофлуоресцентным методом с помощью антитимидиновых антител // Эксперим. онкология.-1989.-Т. 11.-№ 4.1. C. 44-46.

42. Чулкова О.В., Новикова Е.Г. К вопросу о лечении рака эндометрия умолодых // Казанский мед. журнал.- 2000.-Т. 81.-№ 4.-е. 297-300. 47.Чумаков П.М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью // Биохимия.-2000.-т.65 .-№ 1 .-с.34-47.

43. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология.-1996.-№ 6.-С. 10-23.

44. Ярилин А.А. Апоптоз. Природа феномена и его роль в целостном организме //Пат. Физиология.-1998.-№ 2.-С. 38-48.

45. Ярмоненко С.П., Коноплянников А.Г., Вайнсон А.А. Клиническая радиобиология // М.-Медицина.-1992.-317 с.

46. Adelson M.D., Johnson T.S., Sneige N. et al. Cervical carcinoma DNA content, S-fraction and malignancy grading // Gyn.Oncology.-1987.-V. 26, Nl.-P. 57-70.

47. Bandoh N., Hayashi Т., Kishibe K. et al. Prognostic value of p53 mutations, bax, and spontaneous apoptosis in maxillary sinus squamous cell carcinoma // Cancer.-2002.-V. 94, N7.-P. 1968-1980.

48. Baptiste N., Friedlander P., Chen X., Prives C. The proline-rich domain of p53 is required for cooperation with anti-neoplastic agents to promote apoptosis of tumor cells // Oncogene.-2002.-V. 21, Nl.-P. 9-21.

49. Biard D.S., Martin M., Rhun Y.L. et al. Concomitant p53 gene mutation and increased radiosensitivity in rat lung embryo epithelial cells during neoplastic development // Cancer Res.-1994.-V: 54, N13.-P. 3361-3364.

50. Blank K.R., Rudoltz M.S., Kao G.D. et al. The molecular regulation of apoptosis and implications for radiation oncology // Int. J. Radiat. Biol.-1997.-V. 71, N5.-P. 455-466.

51. Bolger BS, Symond RP, Stanton PD et al. Prediction of radiotherapy response of cervical carcinoma through measurement of proliferation rate //Br. J. Cancer.-1996.-N74.-P. 1223-1226.

52. Bonatz G., Luttes J., Hamann S. et al. Immunohistochemical assessment of pi70 provides prognostic information in endometrial carcinoma // Histopathology.-1999.-N34.-P. 43-50.

53. Bowen I.D. Apoptosis or programmed cell death? //Cell Biol. Int.-1993.-V. 17, N4.-P. 365-380.

54. Brachman D.G., Beckett M., Graves D. et al. p53 mutation does not correlate with radiosensitivity in 24 head and neck cancer cell lines // Cancer Res.-1993.-V. 53,N16.-P. 3667-3669.

55. Bristow RG, Benchimol S, Hill RP. The p53 gene as a modifier of intrinsic radiosensitivity: implications for radiotherapy//Radiother. Oncol.-1996.-V. 40, N3.-P. 197-223.

56. Broet P., Romain S., Daver A. et al. Thymidine kinase as a proliferative marker: clinical relevance in 1692 primary breast cancer patients // J. Clin. 0ncol.-2001.-v. 19.-P. 2778-2787.

57. Brown J.M., Wouters B.G. Apoptosis, p53, and tumor cell sensitivity to anticancer agents// Cancer Res.-1999.-V. 59,N7.-P. 1391-1399.

58. Brown D.C., Gatter K.S. Monoclonal antibody Ki-67: its use in histopathology//Histopathology.-1990.-V. 17, N6.-P. 489-503.

59. Bruno S., Darzynkiewisz Z. Cell cycle dependent expression and stability of the nuclear protein detected by Ki-67 antibody in HL-60 cells // Cell Prolif.-1992.-V. 25, Nl.-P. 31-40.

60. Chang Т.Н., Liebeskind D., Hsu K.C. et al. Labeling index in clinicalspecimens estimated by the antinucleoside antibody technique // Cancer Res.-1978.-N38.-P. 1012-1018.

61. Chang J., Ormerod M., Powles T.J. et al. Apoptosis and proliferation as predictors of chemotherapy response in patients with breast carcinoma // Cancer.-2000.-V. 89, N11.-P. 2145-2152.

62. Clarke A.R., Purdie C.A. Harrison D.J. et al. Thymocyte apoptosis induced by p53-dependent arid independent pathways // Nature.-1993.-V. 362.-P. 849-851.

63. Collin F., Chassevent A., Bonichon F. et al. Flow cytometric DNA content analysis of 185 soft tissue neoplasms indicates that S-phase fraction is a prognostic factor for sarcoma's // Cancer.-1997.-V. 79.-P. 2371-2379.

64. Conte P. Marco E., Alama H. et al. Thymidine labelling index (TLI) and primer dependent a-DNA polimerase assay as prognostic parameters in human epitelial ovarian carcinoma // Cell Tissue Kinet.-1987.-V. 20, N2.-P. 252.

65. Courdi А., Негу M., Chauvel P. et al. Prognostic value of continuous variables in breast cancer and head and neck cancer. Dependence on the cut-off level //Br. J. Cancer.-1988.-N58.-P. 88-90.

66. Crook Т., Wrede D., Tidy J.A. et al. Clonal p53 mutation in primary cervical cancer association with human papillomavirus negative tumoura // Lancet.-1992.-N339.-P. 1070-1073.

67. Cui Y.F., Zhou P.K., Woolford L.B. et al. Apoptosis in bone marrow cells of mice with different p53 genotypes after gamma-rays irradiation in vitro //J.Environ. Pathol. Toxicol. Oncol.-1995.-V. 14,N6.-P. 1767-1773.

68. Dahlberg W.K., Azzam E.I., Yu Y., Little J.B. Response of human tumor cells of varying radiosensitivity and radiocurability to fractionated irradiation // Cancer Res.-1999.-V. 59, N20.-P. 5365-5369.

69. Denekamp J. Cell proliferation kinetics of tumours in relation to cancer therapy//Nowotwory.-1989.-V. 39.-P. 3-4.

70. Dixon В., Ward A.J., Joslin C.A.F. Pretreatment 3H- TDR labeling of cervical biopsies: histology, staging and tumor response to radiotherapy // Clin. Radiology.-1977.-N28.-P. 491-497.

71. Erba E., Uberzio P., Pepe S. et al. Flow cytometric analysis of DNA content in human ovarian cancers // Br. J. Cancer.-1989.-V. 60.-P. 45-50.

72. Fang S., Jensen J.P., Ludwig R.L. et al. Mdm2 is a RING finger-dependent ubiquitin protein ligase for itself and p53 // J. Biol. Chem.-2000.-V. 275, N12.-P. 8945-8951.

73. Fan S., el-Deiry W.S., Bae I. et al. p53 gene mutations are associated with decreased sensitivity of human lymphoma cells to DNA damaging agents // Cancer Res.-1994.-V. 54, N22.-P. 5824-5830.

74. Fairman M.P., DNA polymerase delta/PCNA: actions and interactions // J Cell Sci.-1990.-V. 95.-P. 1-4.

75. Finley G.G., Schulz N.T., Hill S.A. et al. Expression of the myc gene family in different stages of human colorectal cancer // Oncogene.-1989.-V. 4, N8.-P. 963-971.

76. Fisher D.E. Apoptosis in cancer therapy: crossing the threshold // Cell.-1994.-N78.-P. 539-542.

77. Friedman P.N., Kern S.E., Vogelstein В., Prives C. Wild-type, but not mutant, human p53 proteins inhibit the replication activities of simian virus 40 large tumor antigen // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1990.-V. 87, N23.-P. 9275-9279.

78. Fogel S., Riou G. The early HPV16 proteins can regulate mRNA levels of cell cycle genes in human cervical carcinoma cells by p53-independent mechanisms // Virology.-1998.-V. 244, Nl.-P. 142-146.

79. Fossa S.D., Berner A.A., Jacobsen A.B.et al. Clinical significance of DNA ploidy and S-phase fraction and their relation to p53 protein, c-erbB-2 protein and HCG in operable muscle-invasive bladder cancer // Br. J. Cancer.-1993.-V. 68, N3.-P. 572-578.

80. Gasinska A., Urbanski K., Jakubowicz J. et al. Tumour cell kinetics as a prognostic factor in squamous cell carcinoma of the cervix treated with radiotherapy//Radiother. Oncol.- 1999.-V. 50.-P. 77-84.

81. Gavrieli Y., Sherman Y., Ben-Sasson S.A. Identification of programmed cell death in situ via spec of nuclear DNA fragmentation. // J Cell Biol.-1992.-V. 119, N3.-p. 493-501.

82. Geisinger K.R., Homesley H.D., Morgan T.M. et al. Endometrial adenocarcinoma: A multiparameter clinicopathologic analysis including the DNA profile and the sex steroid hormone receptors // Cancer.-1986.-N58.-P. 1518-1525.

83. Golstein P. Controlling cell death // Science.- 1997.-V. 275, N5303.-P. 1081-1082

84. Gottlieb T.M., Oren M. p53 in growth control and neoplasia // Biochimica et biophysica acta-reviews on cancer.-1996.-V. 1287, N7.-P. 77-102

85. Haas-Kogan D.A., Kogan S.S., Yount G. et al. p53 function influences the effect of fractionated radiotherapy on glioblastoma tumors // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.-1999.-V. 43, N2.-P. 399-403.

86. Haensgen G., Krause U., Becker A., Stadler P. et al. Tumor hypoxia, p53, and prognosis in cervical cancers // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.-2001.-V. 50.-N4.-P. 865-872. • .

87. Haupt Y., Maya R., Kazaz A., et -al. Mdm2 promotes the rapid degradation ofp53 //Natura.-1997.-N387.-P. 296-299.

88. Hardt N., Nagell J.R, Hanson M. et al. Radiation-induced tumor regression as a prognostic factor in patients with invasive cervical cancer // Cancer.-1982.-V. 49, Nl.-P. 35-39.

89. Heatley M.K. What is the value of proliferation markers in the normal and neoplastic cervix? // Histology and Histopathology.-1998.-V. 13, Nl.-P. 249-254.

90. Hedley D.W., Clark G.M., Cornelisse C.J. et al. Consensus review of clinical utility of DNA cytometry in carcinoma of the breast // Cytometry.-1993.-N14.-P. 482-485.

91. Hedley D.W., Rugg C.A., Gelber R.D. Association of DNA index and S-phase fraction with prognosis of nodes positive early breast cancer // Cancer Res.-1987.-V. 47,N17.-P. 4729-4735.

92. Hengstermann A., Linares L.K., Ciechanover A. et al. Complete switch from Mdm2 to human papillomavirus E6-mediated degradation of p53 in cervical cancer cells // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2001.-V. 98, N3.-P. 1218-1223.

93. Hietanen S., Lain S., Krausz E., Blattner C., Lane D. Activation of p53 in cervical carcinoma cells by small molecular // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2000.-V. 97, N15.-P. 8501-8506. •

94. Hollstein M., Sidransky D., Vogelstein B, et al. p53 mutation in human cancers // Science.-1991.-N253.-P. 49-53.

95. Holte H. et al. Ki-67 and 4F2 antigen expression as DNA synthesis predict survival at relapse tumor progression in, low-grade B-cell lymphoma // IntJ. Cancer.-1989.-N44.-P. 975-980,

96. Imamura J., Miyoshi I., Koeffler H.P. P53 in hematological malignancies // Blood.-1994.-V. 84, N8.-P. 2412-2421.

97. Ito Y., Matsuura N., Sakon M. et al. Both cell proliferation and apoptosis significantly predict shortened disease-free survival in hepatocellular carcinoma // Br.J.Cancer.-1999.-N81 .-P. 747-751.

98. Johnson T.S., Adelson M.D., Sneige N. et al. Cervical carcinoma DNA content, S-fraction and malignancy grading // Gynecologic Oncology.-1987.-V. 26, Nl.-P. 41-56.

99. Kallioniemi O.P., Punnonen R., Mattila J., Lehtinen M., Koivula T. Prognostic significance of DNA index, multiploidy, and S-phase fraction in ovarian cancer // Cancer.-1988.-N61.-P-. 334-339.

100. Kamoi S., Ohaki Y., Okada S. et al. Mitotic Index and Ki-67 Nuclear Antigen Labeling Index as predictors of chemotherapy response in uterine cervical carcinoma // Gynecologie Oncology.-200l.-V. 83, N3.-P. 555-559.

101. Kastan M.B., Onyekwere O., Sidransky D. et al. Participation of p53 protein in the cellular response to the DNA damage // Camcer Res.-1991.-N51.-P. 6304-6311.

102. Kastain M.B., Canmain S.E., Leonard C.J. P53, cell cycle control and apoptosis: implication for cancer // Cancer Metastasis Rev.-1995.-N14.-P. 3-15.

103. Kerr JFR, Wyllie AH, Currie A.R. Apoptosis: a basic biological phenomenon with wide-range implications in tissue kinetics // Br. J. Cancer.-1972.-N26.-P. 239-257.

104. Kessis T.D., Slebos R.J., Nelson W.G. et al. Human papillomavirus 16 E6 expression disrupts the p53-mediated cellular response to DNA damage // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1993.-V. 90, N9.-P. 3988-3992.

105. Klein W.Y., Beiser S.M., Erlanger B.F. Nuclear fluorescence employing antinucleoside immunoglobulins // J. Exp. Med.-1967.-V. 125.-P. 61-69.

106. Kokawa K., Shikone Т., Otani Т., Nakano R. Apoptosis and the expression of В ax and bcl-2 in squi carcinoma and adenocarcinoma of the uterine cervix // Cancer.- 1999.-V. 85, N8.-P. 1799-1809.

107. Komarova E.A., Chernov M.V., Franks R. et al. Transgenic mice with p53-responsive lacZ: p53 activity varies drammatically during normal development and determines radiation and drug sensitivity in vivo // EMBO J.-1997.-V. 16, N6.-P. 1391-1400.

108. Kovach J.S., Hartmann A., Blaszyk H. et al. Mutation detection by highly sensitive methods indicates that p53 gene mutations in breast cancer can have important prognostic // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1996.-V. 93.-P. 1093-1096.

109. Kramer M.H., Hermans, J., Wijburg, E. Clinical Relevance of BCL2, BCL6, and MYC Rearrangements in Diffuse Large B-Cell Lymphoma. //Blood.-1998.-V. 92, N9.-P. 3152-3162.

110. Kramer M.H., Hermans J., Parker J., Krol A.D. et al. Clinical significance of bcl2 and p53 protein expression in diffuse large B-cell lymphoma: a population-based study // J. Clin. Oncol.-1996.-V. 14, N7.-P. 2131-2138.

111. Kubbutat M.H., Ludwig R.JL, Levine A.J., Vousden K.H. Analysis of the degradation function of Mdm2 // Cell Growth Differ.-1999.-V. 10.-P. 87-92.

112. Lane D.P., Crawford L.V. T antigen is bound to a host protein in SV40-transformed cells //Nature.- 1979-V. 278, N5701.-P. 261-263.

113. Lane D.P., Benchimol S. p53: Oncogene or anti-oncogene? // Genes Dev.-1990.-N4.-P. 1-8.

114. Lassus P., Ferlin M., Piette J., Hibner U. Anti-apoptotic activity of wild-type p53 //EMBO.-1996.-V. 15,N17.-P. 4566-4573.

115. Lee W.H., Bookstein R., Houng F. et al. Human retinoblastoma gene encodes a nuclear phosphoprotein associated with DNA binding activity // Nature.-1987.-N235.-P. 1394-1399.

116. Lee J.M., Abrahamson J, Kandel R., Donehower L. Susceptibility to radiation-carcinogenesis and accumulation of chromosomal breakage in p53 deficient mice//Oncogene.-1994.-N9.-P. 3731-3736.

117. Leroy K., Haioun C., Lepage E.,- Le Metayer N. et al. P53 gene mutations are associated with poor survival in low and low-intermediate risk diffuse large B-cell lymphomas // Annals of Oncology.-2002.-V. 13.-P. 1108-1115.

118. Levine A.J., Momand J., Finlay C.A. The p53 tumour suppressor gene //Nature.-1991.-N351.-P. 453-456.

119. Levine A.J. The tumor suppressor genes // Annu Rev Biochem.1993.-V.62.-P. 623-651.

120. Levine E.L., Davidson S.E., Roberts S.A. et al. Apoptosis as predictor of response to radiotherapy in cervical carcinoma // Lancet.1994.-N344.-P. 472.

121. Lotem J., Sachs L. Hematopoietic cells from mice deficient in wild-type p53 are more resistant to induction of apoptosis by some agents // Blood.-1993.-V. 82, N4.-P. 1092-1096.'

122. Lowe S.W., Bodis S., McClatchey A. et al. p53 status and the efficacy of cancer therapy in vivo // Science.- 1994.-V. 266, N5186.-P. 807-810.

123. Lowe S.W., Ruley H.E., Jacks Т., Housman D.E. p53-dependent apoptosis modulates the cytotoxicity of anticancer agents // Cell.-1993.-N74.-P. 957-967.

124. Mariani L., Conti L., Antenucci' A. et al. Predictive value of cell kinetics in endometrial adenocarcinoma // Anticancer Res.-2001.-V. 20, N5.-P. 3569-3574.

125. Martin J.B., Jean В., Sugiu K. et al. Vertebroplasty: clinical experience and follow-up results // Bone.-1999.-V. 25.-P. 11-15.

126. Mcllwrath A.J., Vasey P.A., Ross G.M. Cell cycle arrest and radiosensitivity of human tumor cell lines: dependence on wild-type p53 for radiosensitivity // Cancer Res.-1994.-V. 54, N14.-P. 3718-3722.

127. Meyers L., Subler J.H., Shivakumar M.A. et al. Cell cycle arrests and radiosensitivity of human tumor cell lines: dependence on wild-type p53 for radiosensitivity // Cancer Res.-l-994.-V. 54, N14.-P. 3718-3722.

128. Meek D.W. New developments in the multi-site phosphorylation and integration of stress signaling at p53 // Int. J. Radiat. Biologi.-1998.-V. 74, N6.-P. 729-737.

129. Merkel D.E., McGuire W.L. Ploidy, proliferative activity and prognosis: DNA flow cytomrtry of solid tumors // Cancer.-1990.-N65.-P. 1194-1205.

130. Merritt A.J., Allen T.D., Potten C.S. et al. Apoptosis in small intestinal epithelial from p53-null mice: evidence for a delayed, p53-independent G2/M-associated cell death after gamma-irradiation // Oncogene.-1997.-V. 14, N23.-P. 2759-2766.

131. Merritt A.J., Potten C.S., Kemp C.J. et al. The role of p53 in spontaneous and Radiation-induced apoptosis in the gastrointestinal tract of normal and p53-deficient mice // Cancer Res.-1994.-N54.-P. 614-617.

132. Meyn R.E., Stephens L.C., Ang K.K. et al Heterogeneity in the development of apoptosis in irradiated murine tumours of different histologies // Int J Radiat Biol.-1993.-V. 64, N5.-P. '583-591.

133. Midgeley С.A., Fisher С.J., Bartek J. et al. Analysis of p53 expression in human tumours: An antibody raised against human p53 expressed in Escherichia coli//J. Cell. Sci.-1992.-N101.-P. 183-189.

134. Mitsudomi Т., Oyama Т., Kusano T. et al. Mutations of the p53 gene as a predictor of poor prognosis in patients with non-small-cell lung cancer//J. Natl. Cancer Inst.-1993.-V. 85; N24.-P. 2018-2023.

135. Nair P., Nair K.M., Jayaprakash P.G., Pillai M.R. Decreased programmed cell death in the uterine cervix associated with high risk human papillomavirus infection // Pathol. Oncol. Res.-1999.-V. 5, N2.-P. 95-103.

136. Oka K., Hoshi Т., Arai T. Prognostic significance of the PC 10 index as a prospective assay for cervical cancer treated with radiation therapy alone // Cancer.-1992.-V. 70, N6.-P. 1545-1550.

137. Pan H., Yin C., Dyke T.V. Apoptosis and cancer mechanisms // Cancer Surveys.-1997.-V.29.-P. 305-327.

138. Pellegata N. S., Antoniono R. J., Redpath J. L., Stanbridge E. J. DNA damage and p53-mediated cell cycle arrest: A reevaluation // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, Cell. Biology.-1996.-N93.-P. 15209-15214.

139. Pereira H., Silva S., Juliao R., Garcia P., Perpetua F. Prognostic markers for colorectal cancer: expression of P53 and BCL2 // World. J. Surg.-1997.-V. 21, N2.-P. 210-213.

140. Peters I.J., Brock W.A., Johnson T.J. et al. Potential methods for predictingtumor radiocurability // Int. J. Rad. Oncol. Biol. Phys.-1986.-V. 12, N4.-P. 459-467.

141. Remvikos Y., Mosseri V., Asselain B. et al. S-phase fraction of breast cancer predict overall and post-relapse survival // Eur. J. Cancer. -1997.-N33.-P. 581-586.

142. Remvikos Y., Mosseri V., Zajdela A. et al. Prognostic value of the S-phase fraction of breast cancers treated by primary radiotherapy or neoadjuvant chemotherapy // Ann. N. Y. Acad. Sci.-1993.-V. 30, N698.-P. 193-203.

143. Ribeiro J.C., Barnetson A.R., Fisher R.J. et al. Relationship between radiation response and p53 status in human bladder cancer cells // Int. J. Radiat. Biol.-1997.-V. 72, Nl.-P. 11-20.

144. Sarraf C.E., Bowen I.D. Kinetic studies on a murine sarcoma and an analysis of apoptosis // Br J Cancer.- 1986.-V. 54, N6.-P. 989-998.

145. Scheffner M., Werness В.A., Huibregtse J.M. Levine A.J., Howley P.M. The E6 oncoprotein encoded by human papillomavirus types 16 and 18 promotes the degradation of p53 // Cell.-1990.-V. 63, N6.-P. 11291136.

146. Shoji K, Saegusa M., Takano Y.,.Ohbu M., Okayasu I. Correlation of apoptosis with to differentiation, progression, and HP V infection in cervical carcinoma // J. Clin. Pathol.-1996.-V. 49, N2.-P. 134-141.

147. Silvestrini R., Daidone M.G., Bertuzzi A., Di Fronzo G. Relationship between estrogen receptors and cellular proliferation // Recent Results Cancer Res.- 1984.-V. 91.-P. 163-168.

148. Silvestrini R., Diadone M.G., Fronco G. et al. //Breast Cancer Res. Treat.-1986.-V. 7.-P. 161-167. .

149. Silvestrini R., Daidone M.G., Costa A. Cell kinetics of solid tumors with time and its clinical implication // Tumori.-1989.-V. 75, N4.-P. 367372.

150. Siracky J., Kysela В., Siracka E. Flow cytometric analysis of primary cervical and vulvar carcinomas and their metastases // Neoplasma.-1989.-N36.-P. 437-445.

151. Somasundaram K., El-Deiery W.S. Tumor suppressor p53: regulation and function. // Frontiers in Biosci.-2000,'-N5.-P. 424-437.

152. Soussi Т., de Fromentel C.C., May P. Structural aspects of the p53 protein in relation to gene evolution // Oncogene.-1990.-V. 5, N3.-P. 945952.

153. Tada M., Matsumoto R., Iggo R.D. et al. Selective sensitivity to radiation of cerebral glioblastomas harboring p53 mutations // Cancer Res.-1998.-V. 58, N9.-P. 1793-1797.

154. Tase Т., Toki Т., Oikawa N. et al: Flow cytometric DNA analysis of human endometrial carcinoma // Tohoku J. exp. Med.-1985.-N146.-P. 429-437.

155. Tannock I.F., Lee С. Evidence against apoptosis as a major mechanism for reproductive cell death following treatment of cell lines with anti-cancer drugs // Br. J. Cancer.-2001.-V. 84, Nl.-P. 100-105.

156. Thomaidou D., Mione M.C., Cavanagh J.F., Parnavelas J.G. Apoptosis and its relation to the cell cycle in the developing cerebral cortex//J. Neurosci.-1997.-V. 17.-P. 1075-1085.

157. Thomas M., Pim D., Banks L. The role of the E6-p53 interaction in the molecular pathogenesis of HPV // Oncogene.-1999.-V.18, N53.-P. 7690-7700.

158. Tsang N.M., Nagasawa H., Li C.s Little J.B. Abrogation of p53 function by transfection of HPV 16 E6 gene enhances the resistance of human diploid fibroblasts to ionizing radiation // Oncogene.-1995.-V. 10, N12.-P. 2403-2408.

159. Tsang R.W., Fyles A.W., Li Y.Q. et al. Tumor proliferation and apoptosis in human uterine cervix carcinoma I: correlations with clinical outcome //Radiother. Oncol.-1999.-N50.-P. 93-101.

160. Tsang R.W., Wong C.S., Fyles A.W. et al. Tumor proliferation and apoptosis in human uterine cervix carcinoma II: Correlations between variables//Radiother. Oncol-1999.-N50.-P. 85-92.

161. Tubiana M., Courdi A. Cell proliferation kinetics in human solid tumors: Relation to probability of metastatic dissemination and long-term survival //Radiother. Oncol.-1989.-N15.-P. 1-18.

162. Veronese S., Mauri F.A., Caffo O. et al. Bax immunohistochemical expression in breast carcinoma: a studi with' long term follow-up // Int. J. Cancer.-1998.-V. 79.-P. 13-18.

163. Victorson M., Roberts P.J., Haglund C. et al. Ki-67, ploidy and S-phase fraction as prognostic factors in gastric cancer // Anticancer Res.-1997.-N17.-P. 2923-2926.

164. Vries A., Flores E.R., Miranda B. et al. Targeted point mutations of p53 lead to dominant-negative inhibition of wild-type p53 function // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-2002.-V.99, N5.-P. 2948-2953.

165. Wada M., Bartram C.R., Nakamura H. et al. Analysis of p53 mutations in a large series of lymphoid hematologic malignancies of childhood//Blood.-1993.-V. 82, N10.-P. 3163-3169.

166. Wilson W. H., Teruya-Feldstein J., Fest Т., Harris C., Steinberg S. M., et al. Relationship of p53, bcl-2, arid Tumor Proliferation to Clinical Drug Resistance in Non-Hodgkin's Lymphomas // Blood.-1998.-V. 89.-P. 601-609.

167. Wyllie A.H., Morris R.G., Smith A.L., Dunlop D. Chromatin cleavage in apoptosis: association with condensed chromatin morphology and dependence on macromolecular synthesis // J. Patol.-1984.-V. 142.-P. 67-77.

168. Zaika A., Marchenko N., Moll U.M. Cytoplasmically "Sequestred" wild type p53 protein is resistant to Mdm2-mediated degradation // J.Biol.Chem.-1999.-V.274, N39.-P. 27474-27480.

169. Zaghloul M.S., Ei Naggar M., El Deeb A. et al. Prognostic implication of apoptosis and angiogenesis in cervical uteri cancer // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.-2000.-N48.-P. 1409-1415.

170. Zamulaeva I.A., Podgorodnichenko V.K., Guseva L.I. et al. Prognostic significance of S-phase fraction detected by antithymidine antibodies in epidermoid cervix carcinomas // Int. J. Radiat. Oncol. Biol. Phys.-1996.-N6.-P. 685-688.