Характеристика микрофлоры наружного слухового прохода у собак при отитах тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат наук Акжигитов, Абай Сарсенгалиевич
Акжигитов, Абай Сарсенгалиевич
кандидат наук
2015
- Специальность ВАК РФ06.02.02
- Количество страниц 126
Оглавление диссертации кандидат наук Акжигитов, Абай Сарсенгалиевич
ВВЕДЕНИЕ..................................................................................................................4
1 РОЛЬ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУЖНОГО ОТИТА У СОБАК И ХАРАКТЕРИСТИКА ИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)......................................................................................................10
1.1 Этиология наружного отита у собак...........................................................10
1.2 Патогенные свойства микроорганизмов, вызывающих наружные отиты у собак..................................................................................................................14
1.3 Секретируемые факторы персистенции условно-патогенных микроорганизмов................................................................................................20
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ..................................................................29
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ............................................29
2.1 Выделение и идентификация микроорганизмов.......................................29
2.2 Методы определения биологических свойств грибов рода Malassezia ..32
2.3 Методы определения факторов персистенции микроорганизмов...........34
2.4 Методика совместного культивирования грибов рода Malassezia и бактерий рода Staphylococcus............................................................................39
2.5 Метод определения чувствительности микроорганизмов к антимикробным препаратам..............................................................................39
2.6 Методы статистической обработки результатов.......................................41
3 ВИДОВОЙ СОСТАВ МИКРООРГАНИЗМОВ, ВЫДЕЛЕННЫХ ОТ СОБАК С НАРУЖНЫМИ ОТИТАМИ...............................................................42
4 ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ ГРИБОВ РОДА MALASSEZIA В МИКРОБИОЦЕНОЗЕ НАРУЖНОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДА СОБАК................................................................................................51
4.1 Факторы вирулентности и персистенции грибов рода Malassezia, выделенных при отитах......................................................................................51
4.2 Чувствительность к антимикотикам грибов рода Malassezia, выделенных при отитах............................................................................................................59
5 ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ БАКТЕРИЙ В МИКРОБИОЦЕНОЗЕ НАРУЖНОГО СЛУХОВОГО ПРОХОДА СОБАК.... 65
5.1 Факторы персистенции бактерий, выделенных при отитах.....................65
5.2 Чувствительность к антимикробным средствам бактерий, выделенных при отитах............................................................................................................77
6 ИЗУЧЕНИЕ ОСОБЕННОСТЕЙ МЕЖМИКРОБНЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ
М. PACHYDERMATIS И БАКТЕРИЙ РОДА STAPHYLOCOCCUS...................90
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ..........................................93
ВЫВОДЫ.................................................................................................................102
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ...................................................................104
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ....................................................................................105
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ.............................................................106
Рекомендованный список диссертаций по специальности «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», 06.02.02 шифр ВАК
Роль факторов персистенции условно-патогенных микроорганизмов в инфекционном процессе2018 год, кандидат наук Пашкова, Татьяна Михайловна
Совершенствование антибактериальной терапии при наружных отитах у собак и кошек на основе биопрепарата бактериофагов2024 год, кандидат наук Пустовит Егор Анатольевич
Видовой состав и свойства биопленкообразующих бактерий при хронических отитах у собак и совершенствование методов лечения больных животных2018 год, кандидат наук Карабанов Сергей Юрьевич
Бактериоценоз, клинико-эпизоотологические, иммунологические показатели при наружных отитах у собак и кошек их диагностика и озоно-фаготерапия2018 год, кандидат наук Мачалова, Жанна Геннадиевна
Характеристика микроорганизмов, выделенных при патологии мочевыделительной системы у кошек2021 год, кандидат наук Морозова Наталья Викторовна
Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Характеристика микрофлоры наружного слухового прохода у собак при отитах»
ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы
Наружные отиты являются одной из самых распространенных патологий у собак (Oliveira L.C., 2008; Lehner G., 2010; Linek M., 2011). Их возбудителями могут быть бактерии, дрожжеподобные и плесневые грибы, а также грибково-бактериальные ассоциации (Овчинников P.C. с соавт., 2013). Нередко заболевание переходит в хроническую форму, а его длительность достигает трех и более лет (Ершов П.П., 2008). Существенный вклад в длительное переживание микроорганизмов в организме хозяина вносят секретируемые факторы персистен-ции. Известно, что микроорганизмы способны инактивировать механизмы естественной противоинфекционной резистентности макроорганизма, такие как лактоферрин, катионный белок тромбоцитов, лизоцим, карнозин (Бухарин О.В., 1999, 2006).
Однако, у микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, изучена лишь антилизоцимная активность (Пензурова С.А. с соавт., 2012).
В патогенезе отитов у собак значимую роль играют симбионтные взаимоотношения микроорганизмов, колонизирующих наружный слуховой проход (Ершов П.П., 2008). В условиях микробных ассоциаций между ними могут возникать неоднозначные взаимоотношения, что оказывает существенное влияние на течение инфекционного процесса (Долгушина В.Ф., Долгушин И.И., 2004; Karagozov I. et al., 2004). В подобных ситуациях многими исследователями (Ва-хитов Т.Я., 2007; Семенов A.B., 2009; Yang Y.L., 2003; Dubuis Ch., Haas D., 2007) существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и персистенции и оценка характера взаимоотношений, складывающихся между сочленами микробных сообществ в том или ином биотопе.
Исследования последних лет направлены на решение вопросов, связанных с оптимизацией тактики лечения отитов, поскольку эмпирическое применение рекомендуемых антибактериальных препаратов зачастую не дает желаемого эффекта в борьбе с патогенными микроорганизмами и проблема их устойчивости приобретает все большую значимость (Cafarchia С. et al., 2012;
Carrillo-Muñoz AJ. et al., 2013; Figueredo L.A. et al., 2013; Chiavassa E. et al., 2014; Iatta R. et al., 2014; Buommino E. et al., 2015).
В связи с вышеизложенным, особую значимость приобретают сведения об особенностях таксономического спектра, факторах патогенности и персистенции, а также резистентности к антимикробным препаратам возбудителей наружных отитов у собак. В то же время остается неизученным вопрос об изменении персистентных характеристик данных микроорганизмов в условиях межмикробных взаимодействий.
Цель и задачи исследования
Целью настоящего исследования является изучение видового состава и биологических свойств микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, а также особенностей межмикробных взаимодействий в условиях in vitro.
Для реализации поставленной цели были решены следующие задачи:
1. Изучить микробиоценоз наружного слухового прохода у собак с отитами и выявить наиболее часто встречающиеся микроорганизмы.
2. Оценить биологические свойства микрофлоры наружного слухового прохода у собак с отитами, выявить их связь с характером течения заболевания, дать сравнительную оценку персистентных свойств микроорганизмов при moho- и ассоциированной инфекции.
3. Охарактеризовать чувствительность микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, к антимикробным средствам.
4. Изучить особенности межмикробных взаимодействий в экспериментальных условиях.
Научная новизна
Проведен сравнительный анализ видового разнообразия микроорганизмов, выделенных из наружного слухового прохода собак при разных формах течения отитов. Установлено, что доминирующими видами являются М pachydermatis и S. hyicus.
Впервые изучен широкий спектр биологических свойств микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, включающий факторы вирулентности, персистенции, способность к образованию биопленок и чувствительность к антимикробным средствам.
Полученные результаты о распространенности и выраженности факторов персистенции позволили охарактеризовать биопрофили микроорганизмов, выделенных при разных формах течения наружного отита.
Установлены значимые персистентные свойства, характеризующие микроорганизмы, выделенные при хронической форме наружного отита. Наличие в бактериально-грибковых ассоциациях стафилококков с высокой антикарнози-новой активностью и М. pachydermatis с высоким уровнем антигемоглобиновой активности определяет длительность течения отита.
Впервые проведено исследование способности условно-патогенных грибов рода Malassezia и бактерий, выделенных при отитах, изменять в условиях in vitro концентрацию цитокинов ИЛ-4, ИЛ-8 и ИФН-у. Установлено, что штаммы грибов Malassezia и S. hyicus, выделенные при хронической форме заболевания, обладали более выраженной, по сравнению со штаммами, изолированными при острых формах, антицитокиновой активностью в отношении ИЛ-4. Полученные данные расширяют спектр биологических свойств, определяющих биопрофили микроорганизмов при разных формах течения наружного отита у собак.
Показано, что микроорганизмы, изолированные из наружного слухового прохода при отитах, обладают вариабельной резистентностью к антимикробным средствам, которая зависит от видовой принадлежности микроорганизмов и формы течения заболевания.
При изучении межмикробных связей грибов Malassezia spp. и бактерий рода Staphylococcus установлено преимущественное обоюдное повышение экспрессии антилизоцимной активности и коэффициента биопленкообразования, а также приобретение ими способности образовывать биопленки. Полученные данные можно рассматривать как один из механизмов, способствующих образованию патобиоценоза, на фоне которого возникает заболевание, и его хрони-зации.
Практическая ценность
Полученные данные расширяют представление о биологических свойствах микроорганизмов, выделенных при разных формах течения наружных отитов у собак, а также характере межмикробных взаимодействий.
Результаты о распространенности и выраженности факторов персистен-ции у микроорганизмов, выделенных при отитах у собак, могут быть использованы при прогнозировании течения заболевания у животных.
При выборе антибактериальных препаратов для эмпирической терапии и профилактики рецидивов у собак с наружными отитами необходимо учитывать региональный регистр антибиотико- и антимикотикорезистентности выделенной микрофлоры.
Положения, выносимые на защиту
1. Наличие в бактериально-грибковых ассоциациях, выделенных при наружных отитах, стафилококков с высокой антикарнозиновой активностью и М. pachydermatis с высоким уровнем антигемоглобиновой активности определяет длительность течения заболевания.
2. Межмикробные бактериально-грибковые взаимоотношения при наружном отите у собак характеризуются преимущественным повышением факторов персистенции микроорганизмов-ассоциантов.
Апробация работы. Материалы работы были доложены и обсуждены на Всероссийском конкурсе на лучшую научную работу среди студентов, аспирантов и молодых ученых высших учебных заведений Министерства сельского хозяйства Российской Федерации по Приволжскому федеральному округу (Ка-
зань, 2013); международной научно-практической интернет-конференции, посвященной 65-летию кафедры паразитологии Ставропольского ГАУ «Современные тенденции в ветеринарной медицине» (Ставрополь, 2013); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы незаразной патологии животных» (Оренбург, 2014); международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы использования биологических ресурсов в сельском хозяйстве в условиях глобализации» (Екатеринбург, 2014); Всероссийской интернет-конференции (Ставрополь, 2014); II Молодежной научно-практической конференции «Микробные симбиозы в природных и экспериментальных экосистемах» (Оренбург, 2014); международной научно-практической конференции «Актуальные вопросы ветеринарной науки» (Ульяновск, 2015); Российско-китайской научно-практической конференции по медицинской микробиологии и клинической микологии (Санкт-Петербург, 2015).
Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, в том числе 4 публикации в журналах, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ.
Объем и структура диссертационной работы. Текст диссертации изложен на 126 страницах компьютерного текста, содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, 4 главы результатов собственных исследований, обсуждение результатов исследования, выводы, библиографический список, включающий 95 отечественных и 98 иностранных источников. Текст иллюстрирован 28 рисунками и 2 таблицами.
Степень достоверности результатов проведенных исследований достигнута за счет научного планирования экспериментов, проведения исследований на обширном материале и с применением микробиологических методов исследования, а также апробированных в лаборатории кафедры микробиологии и заразных болезней ФГБОУ ВО «Оренбургский государственный аграрный университет» методик определения факторов вирулентности и персистенции микроорганизмов. В ходе экспериментального исследования получены результаты, которые были обработаны статистически с определением средних значений,
среднего квадратического отклонения и ошибки средней арифметической величины. Достоверность различий сравниваемых показателей оценена по 1> критерию Стьюдента.
Связь работы с научными программами. Представленные данные являются составной частью темы открытого плана НИР Оренбургского ГАУ «Биологические свойства условно-патогенной и нормальной микрофлоры организма животных в норме и при патологии» (№ гос. регистрации 0120.1450283).
1 РОЛЬ МИКРООРГАНИЗМОВ В ПАТОГЕНЕЗЕ НАРУЖНОГО ОТИТА У СОБАК И ХАРАКТЕРИСТИКА ИХ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ
(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 1.1 Этиология наружного отита у собак
Наружные отиты являются одной из самых распространенных патологий у собак (Ершов П.П., 2008; Oliveira L.C., 2008; Lehner G., 2010; Linek M., 2011) и могут быть вызваны множеством факторов.
Первичными факторами являются аллергия, атопический дерматит, аутоиммунные заболевания, паразитозы, нарушения кератинизации, инородные тела в слуховом канале, различные эндокринные нарушения, вирусные инфекции, опухоли. К предрасполагающим факторам относятся аномалии строения наружного слухового прохода, повышенная влажность, механическая травма, системные заболевания. Влияние данных факторов, в конечном итоге, ведет к инфицированию наружного слухового прохода, так как создаются благоприятные условия для роста микроорганизмов. Микроорганизмы относят к вторичным (поддерживающим) факторам: они препятствуют ремиссии и поддерживают воспалительный процесс (Saridomichelakis M.N. et al., 2007).
Возбудителями наружного отита у собак могут являться бактерии, дрож-жеподобные и плесневые грибы, а также грибково-бактериальные ассоциации микроорганизмов (Овчинников P.C. с соавт., 2013).
Как правило, при воспалении наружного слухового прохода собак доминируют грибы рода Malassezia. Ершовым П.П. (2008) обнаружено, что при наружных отитах многократно возрастает обсемененность слухового канала животных грибами рода Malassezia, что доказывает их этиологическую значимость при данной патологии.
Основным возбудителем Malassezia-отитов является М. pachydermatis (Edmund J.R., 2004), вместе с тем, в 5,3 % случаев М. Crespo с соавт. (2002) при изучении этиологии отитов у собак изолировали грибы видов М. furfur и М. obtusa. С. Cafarchia с соавт. (2005) выделяли Malassezia spp. в 57,3 % случаев от собак с наружным отитом и в 28,0 % случаев - от здоровых животных. При
и
этом 97,6 % изолятов были представлены видом М. pachydermatis, а 2,4 % - М. globosa.
В. Losson, A. Benakhla (1980) выделяли М. pachydermatis от здоровых собак в 22 % случаев, от собак с острым отитом - в 55 % и от собак с хроническим отитом - в 80 % случаев.
D. Hajsig с соавт. (1980) при наружных отитах, наряду с М. pachydermatis, которые выделяли в 49,7 % случаев, изолировали также другие дрожжеподоб-ные грибы - Candida tropicalis (в 2,4 % случаев) и плесневые грибы Aspergillus spp. (в 0,6 % случаев). В 2006 году G. Fernandez также установил превалирование М. pachydermatis (69,85 %), однако дрожжеподобные грибы Candida spp. и плесневые грибы A. flavus и A. niger этим автором выделялись значительно чаще (в 20,8 % и 3,8 % случаев, соответственно).
У собак с отитом F. Breitwieser (1997) высевал М. pachydermatis в 72,1 % случаев, причем в 21,9 % - в монокультуре, в 27,9 % случаев были изолированы только бактерии: синегнойная палочка - в 22,9 % случаев, гемолитические стрептококки - в 8,0 % случаев.
По данным V. Bornand (1992), наряду с М. pachydermatis (в 56 % случаев), наружные отиты вызывают также следующие бактерии: Staphylococcus intermedius (в 23 % случаев), Pseudomonas aeruginosa (в 12% случаев), Proteus spp. (в 6 % случаев) и Streptococcus canis (в 5 % случаев).
Исследованиями P. Lyskova с соавт. (2007) установлено, что наиболее часто выделяемыми микроорганизмами при наружном отите у собак являются S. intermedius (58,8 %), М. pachydermatis (30,9 %), S. canis (29,9 %) Proteus spp. (14,4%) и E: coli{ 10,3 %).
E. Müller, A. Heusinger (1994) показали, что бактерии при отитах у собак могут быть выделены в 82 % случаев, а дрожжи или плесени в 28 % случаев. Наиболее часто авторы выделяли коагулазоположительные стафилококки, си-негнойную палочку, бета-гемолитический стрептококк и протей, причем стафилококки и М. pachydermatis являлись наиболее распространенными изолята-ми.
В. Penna с соавт. (2010) идентифицировали стафилококки, выделенные при наружном отите у собак, и установили, что они представлены следующими видами: S. pseudointermedius в 38,4 %, S. schleiferi schleiferi — в 15,4 %, S. aureus
- в 14,3 %, S. epidermidis - в 11 %, S. simulans - в 11 %, S. schleiferi coagulans - в 8,8 % и S. saprophyticus - в 1,1 % случаев.
По данным G. Fernandez (2006), этиологически значимыми возбудителями наружного отита у собак являются P. aeruginosa (в 22,2 % случаев), P. mirabilis (в 13,9 % случаев), S. aureus (в 12,5 % случаев), S. epidermidis (в 8,3 % случаев), Е. coli (в 5,6 % случаев) и коагулазоотрицательные стафилококки (в 5,6 % случаев). Согласно данным, полученным М.Н. Zamankhan с соавт. (2010) - S. intermedius, P. aeruginosa, P. mirabilis, Е. coli и Pasteurella canis.
K.S. Kumar с соавт. (2010) в качестве эпизодических возбудителей наружного отита у собак выделяли Streptococcus spp. (8,3 %), Bacillus spp. (8,3 %) и Micrococcus spp. (3,3 %).
Показано, что при наружных отитах у собак часто выделяются корине-формные бактерии. В. Aalbaek с соавт. (2010) установили, что доминирующим видом (в 66,7 % случаев) является Corynebacterium auriscanis, в 20,0 % случаев
- С. amycolatum, и лишь в 13,3 % - С. freneyi. Причем коринебактерии авторы выделяли только в составе ассоциаций: в 50 % со S. pseudointermedius и в 50 % -с M pachydermatis.
В то же время, этиологическая значимость коринебактерий в патогенезе наружного отита не доказана. Так, К. Henneveld с соавт. (2012) показали, что коринебактерии при наружных отитах, как правило, играют роль вторичных инфектов, и лишь в 2,5 % случаев способны самостоятельно вызывать заболевание.
P.C. Овчинниковым с соавт. (2013) установлено, что в 40 % случаев инфекционные отиты у животных вызываются ассоциацией грибов рода Malassezia и бактерий.
Коагулазоположительные гемолитические бактерии рода Staphylococcus и М. pachydermatis были совместно изолированы в 31,8 % всех изученных образ-
цов F. Breitwieser (1997). G. Kiss с соавт. (1997) при наружном отите у собак в 76 % случаев диагностировали грибы М. pachydermatis, нередко в сочетании со S. intermedius. A. Kumar (2002) отмечал, что у больных отитом собак грибы рода Malassezia существуют не только в ассоциации со стафилококками, но также и бактериями родов Pseudomonas, Proteus, Streptococcus, грибами родов Candida и Aspergillus.
Представленные данные свидетельствуют о широкой распространенности наружных отитов у собак и разнообразном видовом составе их возбудителей. Немаловажное значение имеет тот факт, что заболевание может быть вызвано ассоциацией нескольких видов микроорганизмов.
Присутствуя в биоценозе, грибы взаимодействуют с другими видами условно-патогенных микроорганизмов и представителями нормальной микрофлоры макроорганизма, изменяя их факторы персистенции и вирулентности (Капустина O.A., 2013).
Установлена антагонистическая активность грибов рода Malassezia spp. в отношении дерматофитных грибов (Weary P.E., 1968), а также С. albicans. Ма-лассезии способны выделять термолабильные фунгистатические метаболиты, активные по отношению к штаммам С. albicans (Шелемех О.В. и соавт., 2003). Показано, что антагонистическая активность грибов рода Malassezia детерминирована хромосомными генами (Арзуманян В.Г. и соавт., 2010), она способствует распространению штаммов грибов рода Malassezia, а также защите кожных покровов от заселения прочими микроорганизмами (Ожован И.М. с соавт., 2003).
В то же время доказано наличие симбиотического взаимоотношения между грибами рода Malassezia spp. и стафилококками. Существует взаимосвязь, дающая взаимную пользу факторам роста, которые изменяют микроокружение с пользой для обоих микроорганизмов. Стафилококки и малассезии выделяют липазы, способные менять баланс секрета сальной железы. Экспериментально доказано, что рост грибов рода Malassezia in vitro улучшался в присутствии
стафилококков, подавление роста одного микроорганизма не вызывало подавления роста другого (Mason I.S., 1996).
1.2 Патогенные свойства микроорганизмов, вызывающих
наружные отиты у собак
Грибы рода Malassezia относятся к нормальной микрофлоре кожи человека и теплокровных животных, обеспечивают защиту кожных покровов от колонизации другими микроорганизмами, в том числе и патогенными, однако при нарушении защитных механизмов иммунной системы, влиянии неблагоприятных факторов внешней среды, а также наследственной предрасположенности к заболеванию, в свою очередь, могут явиться причиной развития патологических процессов в организме. Это объясняется наличием у грибов рода Malassezia комплекса факторов патогенности.
Определяющую роль в развитии инфекционного заболевания играет коммуникация микроорганизмов при помощи так называемых «сигнальных молекул», контролирующих многие фундаментальные процессы в популяции грибов, в частности процессы их репродукции. В момент достижения популяцией грибов определенной численности, в ней возникает «чувство кворума», что служит стартовым сигналом для активации факторов патогенности (Феофилова Е.П., 2005).
Основными факторами патогенности грибов рода Malassezia являются гидролитические ферменты.
Внеклеточные липазы, выделяемые грибами рода Malassezia, гидролизу-ют липиды кожного секрета до свободных жирных кислот, которые, в свою очередь, могут вызвать повреждение клеточных мембран кератиноцитов (Coutinho S.D. et al., 2000).
Фосфолипазы - ферменты, разрушающие эфирные связи в глицерофос-фолипидах клеточных мембран — играют существенную роль в патогенности грибов рода Malassezia (Бачурская Н.С. и соавт., 2007).
Установлено, что грибы М. pachydermatis синтезируют фосфатазу и фос-фогидролазу, гиалуронидазу и хондроитин-сульфатазу, эстеразы и липоксиге-
назу, причастные к воспалению кожных покровов, а также проявляют протеаз-ную, казеиназную, лецитиназную и пероксидазную активности (Kiss G. et al., 1996; Coutinho S.D. et al., 2000; Mancianti F. et al., 2001; Juntachai W., 2009).
C. Cafarchia с соавт. (2004) показано, что фосфолипазная активность Malassezia spp. играет ведущую роль в возникновении кожных поражений у собак. Авторами установлено, что 93,9 % изолятов М. pachydermatis, выделенных при отитах и дерматитах у собак, способны к продукции фосфолипаз, в то время как штаммы, изолированные от здоровых собак, лишь в 10,6 % случаев обладают фосфолипазной активностью. Аналогичные результаты получены M.L. Machado с соавт. (2010).
Установлено, что штаммы М. pachydermatis, выделенные при поражениях кожи, в 55,9 % случаев обладают фосфолипазной активностью (Figueredo L.A. et al., 2012).
Напротив, S. Coutinho (2005) установлено наличие хондроитин-сульфатазной, гиалуронидазной, фосфолипазной и протеиназной активности у 30 штаммов М. pachydermatis, выделенных от клинически здоровых собак и собак с наружным отитом. При этом достоверных различий в уровне активности ферментов у штаммов исследуемых групп выявлено не было. В этой связи автор предположил, что изученные ферменты не являются определяющим фактором в развитии инфекционного процесса.
В исследовании, проведенном G. Ortiz с соавт. (2013), было показано, что
75.8 % изолятов обладали фосфолипазной активностью при рН среды 6,3, и
97.9 % из них проявляли протеиназную активность. Выраженность фосфолипазной активности была выше у штаммов, выделенных из собак с отитами. Протеиназная активность отмечена у 97,9 % штаммов при рН среды 6,8 и у 81% штаммов при рН среды 6,3. Авторы полагают, что фосфолипаза может играть значимую роль в патогенезе хронических отитов у собак, а снижение рН среды способствует уменьшению активности протеиназы и повышает эффективность лечения отитов, вызванных М. pachydermatis.
A. Chowdhaiy с соавт. (2005) обнаружили кератинолитические свойства у штаммов Malassezia furfur.
Липоксигеназы - ферменты, вырабатываемые грибами рода Malassezia и обеспечивающие перекисное окисление липидов. С. de Luca с соавт. (1996) наблюдали повышенное образование липопероксидов, когда среда была обогащена полиненасыщенными жирными кислотами. Авторы полагают, что липопе-роксиды способны оказывать токсическое действие на меланоциты.
Грибы рода Malassezia способны метаболизировать триптофан в биологически активные пигменты - производные индола, выполняющие защитную функцию и играющие ключевую роль в депигментации кожных покровов. Наиболее активным соединением является малассезин, вызывающий апоптоз мела-ноцитов (Krämer H.J. et al., 2005). Питириацитрины обеспечивают грибам защиту от воздействия ультрафиолетового излучения, а также ответственны за процессы депигментации кожных покровов (Machowinski A. et al., 2006).
Благодаря ряду персистентных свойств грибы рода Malassezia способны к длительному существованию на поверхности кожных покровов хозяина.
Одним из механизмов длительного выживания в условиях макроорганизма, является способность образовывать биопленки - надорганизменные структуры, обеспечивающие защитные и трофические функции (Мальцев C.B., 2011). F.T. Cannizzo (2007) установил, что грибы M pachydermatis способны к образованию биопленок на поверхности таких субстратов как полистирол и полиуретан.
Впоследствии L.A. Figueredo с соавт. (2012) была выявлена способность к образованию биопленок у штаммов M. pachydermatis, выделенных от здоровых собак и собак с поражениями кожи. При этом штаммы, выделенные при поражениях кожи, в 55,9 % обладали фосфолипазной активностью, а также более выраженной способностью к образованию биопленок по сравнению со штаммами, выделенными у здоровых животных. Авторы предполагают, что продукция фосфолипазы коррелирует с образованием биопленок, вызывая или усиливая поражения кожи у собак.
Весьма важным является тот факт, что грибы рода Malassezia устойчивы к механизмам фагоцитоза и способны ингибировать образование провоспали-тельных цитокинов (Ashbee H. et al., 2002).
Фагоцитоз является важным неспецифическим иммунным механизмом для элиминации микроорганизмов. В то же время, литературные данные о фагоцитозе и киллинге грибов рода Malassezia ограничены. Опытами in vitro показано, что нейтрофилы захватывают Malassezia в комплемент-зависимом процессе, который выходит на плато после 40 минут. Через 2 часа погибает только 5 % от общего числа клеток грибов (Richardson M.D., Shankland G.S., 1991).
Липиды клеточной стенки грибов Malassezia spp. обеспечивают их защиту от фагоцитоза, а также подавляют воспалительные процессы (Boekhout T. et al., 2010).
Наличие липидной капсулы у грибов рода Malassezia способствует их длительному переживанию в условиях макроорганизма (Kantarcioglu S. et al., 2005). Также липидная оболочка на поверхности клеток грибов Malassezia spp. выполняет функцию осмопротектора (устойчивость к концентрации NaCl в среде до 18 %), а также снижает проницаемость клеточной мембраны для некоторых антисептиков (например, мирамистина) (Гейдебрехт О.В. и соавт., 2003; Арзуманян В.Г. и соавт., 2005).
Наличием липидной капсулы вокруг клеток грибов рода Malassezia, а также липидами клеточной стенки обусловлено ингибирование синтеза цитокинов ИЛ-lß, ИЛ-6 и ФНО-а иммунокомпетентными клетками (Kesavan S. et al, 1998, 2000).
Питириарубины - пигменты, вырабатываемые грибами рода Malassezia из триптофана, подавляют высвобождение продуктов окислительного «взрыва» из активированных гранулоцитов, что обеспечивает слабую воспалительную реакцию в организме хозяина и длительное персистирование микроорганизма (Krämer HJ. et al, 2005).
Известно, что снижение фагоцитарной активности нейтрофилов может происходить за счет синтеза азелаиновой кислоты грибами рода Malassezia (Бо-
гданова T.B. и соавт., 2011). Н. Akamatsu с соавт. (1991) установили, что азе-лаиновая кислота не влияет на процессы хемотаксиса и фагоцитоза, однако подавляет выработку активных форм кислорода (Ог, ОН", Н2О2) нейтрофилами, а также разрушает кислородные радикалы.
Основными факторами патогенности бактерий при острых отитах у собак являются липолитические, протеолитические ферменты и токсины (Lowell S.H., JuhnS.K., 1979).
Е.А. Tron с соавт. (2001) установили наличие эластазной активности у культур P. aeruginosa, выделенных из наружного слухового прохода собак с хроническим отитом.
W. Mann с соавт. (1983) установили, что значимыми факторами патогенности Р. aeruginosa при наружных отитах у собак являются липазная и протеаз-ная активности. Однако корреляции между тяжестью течения заболевания и активностью ферментов агрессии псевдомонад авторами выявлено не было.
Установлено, что изоляты Pseudomonas spp., выделенные от животных, способны продуцировать коллагеназу, лецитиназу, гемолизины, фибринолизин, лейкоцидин и энтеротоксин. Многие штаммы также секретируют экзотоксин А, вызывающий некроз тканей. Липополисахариды синегнойной палочки могут выступать в качестве эндотоксина.
R.P. Allaker с соавт. (1991) установили, что в 90 % случаев штаммы S. intermedius, выделенные от собак при пиодермии, обладают протеазной, в 100 % случаев - бета-гемолитической активностями, в 15 % - способны к продукции энтеротоксина С.
Похожие диссертационные работы по специальности «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», 06.02.02 шифр ВАК
Характеристика грибов рода Candida как ассоциантов в микробиоценозах тела человека2013 год, кандидат биологических наук Капустина, Ольга Александровна
Микробиоценозы при кишечных инфекциях у собак на территории Прибайкалья2013 год, кандидат наук Плиска, Анна Александровна
Характеристика биологических свойств микроорганизмов в бактериально-грибковых ассоциациях кишечника2005 год, Перунова, Наталья Борисовна
Биологические эффекты антимикробных веществ животного и бактериального происхождения2016 год, доктор наук Сычева Мария Викторовна
Сравнительная характеристика биологических свойств Porphyromonas gingivalis и Aggregatibacter actinomycetemcomitans возбудителей пародонтита2017 год, кандидат наук Губайдуллин Азат Гирфанович
Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Акжигитов, Абай Сарсенгалиевич, 2015 год
- 1 -
биопленки приобретали все изученные штаммы 5". хукэБш, а также 88,9% штаммов 5. кугсш (в соответствии с рисунком 28). Отмечена потеря признака у 11,1 % штаммов & кугсия. У штамма £ ШегтесИш способность к образованию биопленок сохранялась на прежнем уровне.
50 % штаммов М. раскуЛегта^я характеризовались способностью формировать биопленки, КБ варьировал от 1,1 до 1,2 у.е. После совместного культивирования со стафилококками 21,4 % штаммов М. раскуЛегтМгз утрачивали способность к биопленкообразованию, а у 7,2 % КБ понижался до 1,1 у.е. В 50 % случаев штаммы приобретали способность формировать биопленки, у 7,1 % изолятов КБ повышался и составлял 1,2 у.е. У 14,3 % штаммов грибов способность к образованию биопленок сохранялась на прежнем уровне.
М. раскуЛегта^я Б. ШегтесИш
5*. ку1ст
0 10 20 30 40 50 60 70 80 90 100
Доля штаммов, %
□ увеличение активности ■ снижение И отсутствие изменений
Рисунок 28 - Изменение способности микроорганизмов формировать биопленки при совместном культивировании
Таким образом, результатами проведенных исследований показано, что при межмикробных взаимодействиях изученные микроорганизмы оказывают разнонаправленное действие на факторы персистенции (стимулирующее, снижающее, индифферентное) с их преимущественным повышением.
У///А '////А '/////, '/////, У///А У///Л 'УУ/УУ, '////л '/У/У/ ш У///А
У///Л У////, V//// ////// '/////, '///У/ УУУУУ/ УУУУУ/ ////л УУУАУ/
1 -
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ
Наружные отиты являются одной из самых распространенных патологий у собак. Частота регистраций наружных отитов у собак составляет 10-20 % от всех патологий. В регионах с тропическим климатом этот показатель достигает 40 % (Ершов П.П, 2008). При этом клинические признаки отита могут наблюдаться от 1 года до 3 лет. Заболевание сопровождается периодическими улучшениями и обострениями.
В числе причин высокой заболеваемости может быть недостаточная изученность микробиологического фактора в патогенезе наружного отита. Мало сведений о механизмах формирования микробного биоценоза наружного уха и факторах персистенции возбудителей.
Целью настоящего исследования явилось изучение видового состава и биологических свойств микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, а также особенностей межмикробных взаимодействий в условиях in vitro.
Для реализации поставленной цели были решены следующие задачи:
1. Изучить микробиоценоз наружного слухового прохода у собак с отитами и выявить наиболее часто встречающиеся микроорганизмы.
2. Оценить биологические свойства микрофлоры наружного слухового прохода у собак с отитами, выявить их связь с характером течения заболевания, дать сравнительную оценку персистентных свойств микроорганизмов при моно- и ассоциированной инфекции.
3. Охарактеризовать чувствительность микроорганизмов, выделенных при наружных отитах у собак, к антимикробным средствам.
4. Изучить особенности межмикробных взаимодействий в экспериментальных условиях.
Материалом для исследований явились клинические штаммы бактерий и грибов, выделенных у собак, больных наружными отитами.
Проведенный анализ видового состава микрофлоры, выделенной из наружного слухового прохода у собак с отитами, показал, что микрофлора на-
ружного слухового прохода собак при отитах достаточно разнообразна и выделяется как в монокультуре, так и в ассоциациях, при этом наибольшая значимость принадлежит микроорганизмам родов Staphylococcus (71,4 %) и Malassezia (57 %) при более низкой частоте выделения энтеробактерий, нефер-ментирующих бактерий, стрептококков, энтерококков, коринебактерий. Доминирующее положение занимают виды S. hyicus и М. pachydermatis, что находит отражение в работах других авторов.
M.D. Girao с соавт. (2005) выделяли грибы рода Malassezia при наружных отитах у собак в 63,7 % случаев, при этом частота встречаемости вида М. pachydermatis составила 57,5 %. В исследовании, выполненном J.J. Hernandez-Escareno с соавт. (2012), Malassezia pachydermatis были выделены у 72 % собак с наружным отитом. О.В. Ивченко (2010) выделяла грибы рода Malassezia от собак с клиническими проявлениями отита в 56 % случаев.
Наружные отиты, вызываемые грибами рода Malassezia, в большинстве случаев характеризуются хроническим течением. Согласно данным P.C. Овчинникова и соавт. (2013), частота обращений к ветеринарным специалистам по поводу хронических Malassezia-отитов составляет 75 %.
Наряду с малассезиями, исследователи нередко выделяли и бактерии. Так, Y. Uchida с соавт. (1990) из наружного слухового прохода собак в 75,6 % случаев выделяли стафилококки, при этом наиболее часто изолируемым видом являлся S. hyicus subsp. chromogenes (37,3 %). V. Petrov, G. Mihaylov (2008) изолировали стафилококки из наружного слухового прохода больных отитами собак в 70,8 % случаев, при этом в 18,8 % случаев стафилококки выделяли в ассоциации с грибами М. pachydermatis.
Проведенные нами исследования показали, что грибы рода Malassezia выделялись в монокультуре в 14 % случаев, в ассоциации с бактериями - в 40 % случаев, бактерии являлись возбудителями отита в 28 % случаев, в 18 % случаев роста микроорганизмов выявлено не было.
В монокультуре, наряду с преобладающим в общей структуре S. hyicus (25,7 %), были выделены также P. aeruginosa (5,7 %). S. xylosus (2,9 %), Entero-coccus sp. (2,9 %).
В ассоциациях «бактерии-бактерии» доминировали стафилококки видов S. xylosus (в 60 %) и S. hyicus (в 40 %). S. xylosus выделяли с бактериями родов Bacillus, Corynebacterium, а также вида К. terrigena (по 2,9 %). S. hyicus - с Е. coli и P. vulgaris (по 2,9 %).
В ассоциациях «грибы-бактерии» М. pachydermatis выделяли либо с одним, либо с двумя видами бактерий.
В большинстве посевов при хроническом течении заболевания отмечен рост микроорганизмов в ассоциациях, тогда как при остром течении - в монокультуре. В последние годы наблюдается увеличение удельного веса заболеваний, вызванных ассоциациями условно-патогенных микроорганизмов. Эти инфекции характеризуются выраженным клиническим полиморфизмом, связанным с одновременным воздействием нескольких агентов, что затрудняет интерпретацию результатов, поскольку каждая из составляющих микст-культур обладает рядом характеристик, сочетание которых может определять высокий патогенный потенциал возбудителей в целом (Воробьев А.А. с соавт., 2000). Особенности межмикробных взаимодействий могут существенно определять формы и течение инфекционного процесса (Габидуллин З.Г. с соавт., 2006). Полученные нами результаты показали, что наличие ассоциаций микроорганизмов отражает хронизацию процесса и может быть использовано для дифференциальной диагностики наружных отитов.
Длительное сосуществование микроорганизмов с макроорганизмом возможно при наличии определенных биологических свойств микроорганизмов -персистентных характеристик, направленных на деградацию механизмов естественной резистентности хозяина (Бухарин О.В., 1999).
Поэтому далее нами были изучены факторы персистенции микроорганизмов, выделенных при отитах. Определение персистентных свойств микроорганизмов позволило выявить их высокую распространенность, при этом от-
мечен высокий уровень персистентных характеристик у микроорганизмов, изолированных в ассоциациях (антигемоглобиновая активность у грибов рода Malassezia и антикарнозиновая активность у стафилококков) по сравнению со штаммами, выделенными в монокультуре. Известно, что ассоциативные микроорганизмы, наряду с блокированием эффекторных механизмов защиты хозяина, нередко способствуют усилению патогенного (персистентного) потенциала таких же ассоциантов при инфекции. В ряде работ также отмечены различия экспрессии персистентных свойств (антилизоцимная и антиинтерферо-новая активности) Citrobacter spp., изолированных при моно- и ассоциированной инфекции (Габидуллин З.Г. с соавт, 2006); В.М. Изикаев (2013) установил, что ассоциации Enterobacter spp. и S. aureus, выделенные от больных инфекционно-воспалительными заболеваниями, по сравнению с монокультурами, чаще обладают факторами патогенности и персистенции, что необходимо учитывать при оценке этиологической значимости этих бактерий.
Известно, что эндогенные инфекции, к которым относится отит, могут вызывать лишь представители аутофлоры, обладающие определенным набором свойств (биопрофилем), который позволяет им состояться в качестве возбудителя. В биопрофилях возбудителей эндогенных инфекций приоритетное место по своей патогенетической значимости занимают персистентные свойства, обеспечивающие «иммунорезистентность» микроорганизмов и их выживание при контакте с гуморальными и клеточными эффекторами антимикробной защиты хозяина (Гриценко В.А, 2009).
У потенциально патогенных микроорганизмов - возбудителей многих неспецифических инфекционно-воспалительных заболеваний выявлен широкий спектр факторов персистенции, включающий антилизоцимный, антикомплементарный, антилактоферриновый, антииммуноглобулиновый и ряд других признаков (Бухарин СКВ, 1999). В настоящее время у микроорганизмов широко изучается способность утилизировать железо из гемоглобина — антигемоглобиновая активность, а также способность микрофлоры к деградации/связыванию различных видов цитокинов (Бухарин О.В. с соавт, 2011). Однако, данные ра-
боты единичны и не позволяют в полной мере оценить значимость этих свойств при разных формах течения отитов.
Нами впервые была определена способность грибов рода Malassezia к инактивации факторов естественной резистентности макроорганизма, что позволило установить биопрофиль грибов, выделенных при разном течении наружного отита. Малассезии, выделенные при хроническом течении заболевания, характеризовались более высокими значениями антигемоглобиновой активности и антицитокиновой активности в отношении ИЛ-4. Полученные результаты имеют не только теоретическое, но и практическое значение, так как могут быть использованы для оценки течения инфекционного процесса. Ранее рядом авторов , показано, что высокой информативностью при прогнозировании течения инфекционно-воспалительного заболевания характеризуются как отдельные персистентные характеристики, так и их комбинации (Валышева И.В., 2005; Карташова О.Л. с соавт., 2009; Потехина Л.П., 2010).
В нашем исследовании выявлена зависимость характера течения отита от персистентных свойств бактериальных патогенов и установлено, что стафилококки, обладающие антикарнозиновой активностью, и энтеробактерии, обладающие антилизоцимной активностью, определяют возможность развития рецидивов.
Кроме того, нами впервые проведено исследование способности условно-патогенных грибов рода Malassezia и бактерий, выделенных при наружных отитах, изменять в условиях in vitro концентрацию цитокинов ИЛ-4, ИЛ-8 и ИФН-у. Ранее, при изучении биологических свойств условно-патогенных ли-пофильных грибов Malassezia исследователями было показано, что в присутствии Malassezia продукция кератиноцитами провоспалительных цитокинов ИЛ-6, ИЛ-8 и ФНО-а может как возрастать, так и снижаться, а секреция противовоспалительных цитокинов ИЛ-10, ТРФр, как правило, индуцируется (Сергеев А.Ю., Сергеев Ю.В., 2004). Тем самым, клетки грибов Malassezia могут проявлять иммунорегуляторную активность, влияя на баланс про-, противовоспалительных цитокинов и Th-1, Th-2 цитокинов и как следствие, способны изме-
нять активность клеточных механизмов антимикробной защиты. Считают, что механизм подобного влияния экзометаболитов микроорганизмов на уровень цитокинов при совместном культивировании их с рекомбинантными цитоки-нами может быть связан с неспецифическим действием широкого спектра про-теаз, находящихся в составе экзометаболитов (Бухарин О.В. и соавт, 2011). Впервые выявленные в настоящей работе данные о способности грибов рода Malassezia изменять содержание цитокинов в условиях in vitro, в частности противовоспалительного цитокина ИЛ-4, свидетельствуют о возможном влиянии экзометаболитов липолитических грибов Malassezia на локальный цитоки-новый баланс, поддерживая воспалительный процесс. В работе показано, что для штаммов грибов, выделенных при хронических формах отита, по сравнению с острым отитом, характерна более выраженная антицитокиновая активность в отношении ИЛ-4 в сочетании с высокой антигемоглобиновой активностью.
Проведенными нами исследованиями установлено также, что и для штаммов S. hyicus, основного ассоцианта грибов Malassezia, была характерна высокая распространенность и выраженность антицитокиновой способности в отношении ИЛ-4 при хронической форме заболевания. Полученные результаты указывают на активное участие метаболитов оппортунистических грибов Malassezia и их ассоциантов в локальных иммунорегуляторных процессах, что может влиять на течение и исход инфекционного процесса.
С распространением заболеваемости собак наружным отитом и широким использованием антимикробной терапии проблема устойчивости микроорганизмов к лекарственным препаратам приобретает все большую значимость (Nijima М. et al, 2011; Carrillo-Munoz A.J. et al, 2013; Figueredo L.A. et al, 2013; Cafarchia C. et al, 2014;). Кроме того, в клинической практике, как правило, наиболее тяжело протекают инфекции, вызванные микроорганизмами с множественной лекарственной устойчивостью. Поэтому определение спектра антимикотической/антибактериальной резистентности выделенных микроорганизмов является косвенным показателем их вирулентности.
Большинство коммерческих препаратов, предназначенных для лечения инфекционных отитов, содержат комбинацию активных веществ, оказывающих противобактериальное, противогрибковое и противовоспалительное действие (Овчинников P.C., 2013). Исследованиями многих зарубежных авторов доказана высокая эффективность терапии Malassezia-отитов комбинированными препаратами, содержащими в составе антибиотики, антимикотики и кортикосте-роиды (Bensignor Е., Grandemange Е., 2006; Cole L.K. et al., 2007; Hensel P. et al., 2009).
Нами определена устойчивость к актимикробным препаратам грибов и бактерий, выделенных при разных формах наружных отитов. Полученные данные могут быть использованы при выборе эффективных препаратов для эмпирической терапии указанного заболевания и составлении регистра резистентности и чувствительности к антимикробным препаратам приоритетных возбудителей наружного отита у собак. Установлена более высокая резистентность к широкому кругу используемых в клинической практике антимикробных препаратов у штаммов, выделенных в монокультуре при разных формах течения наружного отита, а также микроорганизмов, выделенных при остром течении процесса, что также необходимо учитывать при выборе препаратов для лечения собак с данной патологией.
Условно-патогенные микроорганизмы, обладая рядом факторов патоген-ности, способны вызывать инфекционный процесс, причем чаще в том случае, если они находятся в ассоциации с другими бактериями. Одновременное присутствие нескольких возбудителей приводит не только к суммированию болезнетворных возможностей, но и вызывает взаимное усиление факторов вирулентности ассоциантов (Изикаев В.М., 2013).
В условиях микробных ассоциаций между микроорганизмами могут возникать неоднозначные взаимоотношения, в подобных ситуациях многими исследователями существенным признается определение у выделенных культур факторов патогенности и персистенции, а также оценка характера взаимоотношений (Вахитов Т.Я., 2007; Семенов A.B., 2009).
Установлено, что для оценки межмикробных взаимодействий в качестве биомишеней можно использовать персистентные свойства микроорганизмов (антилизоцимную активность и способность образовывать биопленки) (Бухарин О.В, 2011).
Поэтому далее нами были изучены межмикробные взаимодействия стафилококков и М. pachydermatis, как наиболее часто выделяемых микроорганизмов под контролем вышеуказанных факторов персистенции в условиях in vitro.
Проведенными исследованиями установлено преимущественное обоюдное повышение экспрессии АЛА и КБ у изученных бактерий и грибов, а также приобретение ими способности образовывать биопленки при межмикробных взаимодействиях.'
Взаимная стимуляция антилизоцимной активности и способности образовывать биопленки может быть одним из механизмов, способствующих формированию патологического микробиоценоза, на фоне которого возникает заболевание, и его хронизации.
Полученные данные подтверждают выявленный ранее феномен оппозит-ного (усиление/подавление) влияния микроорганизмов на биологические свойства пары микросимбионтов в условиях микросимбиоценоза (Бухарин О.В. с соавт, 2011). Изучение особенностей межмикробных взаимодействий в ассоциациях бактерий, включающее изменение уровня экспрессии факторов их па-тогенности и персистенции, позволяет получить новые данные о механизмах формирования микросимбиоценозов при разных формах течения инфекционного процесса (Лахтин В.М. с соавт, 2009).
Подтверждением этому являются данные, полученные О.А. Капустиной (2013), которая при изучении межмикробных связей индигенной и ассоциативной микрофлоры кишечника и репродуктивного тракта человека при дисбиозе и инфекционно-воспалительных заболеваниях установила преимущественное подавление факторов персистенции С. albicans под действием микроорганизмов рода Lactobacillus и Е. faecium, являющихся представителями нормальной
микрофлоры; и повышение персистентного потенциала С. albicans под действием условно-патогенного штамма Е. faecalis.
Подводя итог проделанной работе, следует заключить: наличие в бактериально-грибковых ассоциациях, выделенных при наружных отитах, стафилококков с высокой антикарнозиновой активностью и М. pachydermatis с высоким уровнем антигемоглобиновой активности определяет длительность течения заболевания; межмикробные бактериально-грибковые взаимоотношения при наружном отите у собак характеризуются преимущественным повышением фак-
I
торов персистенции микроорганизмов-ассоциантов.
102 ВЫВОДЫ
1. Изучение микробиоценоза наружного слухового прохода у собак при отитах выявило ведущее значение микроорганизмов родов Staphylococcus (71,4 %) и Malassezia (57 %)_при более низкой частоте выделения энтеробактерий, неферментирующих бактерий, стрептококков, энтерококков, коринебактерий. Доминирующее положение занимали виды Staphylococcus hyicus и Malassezia pachydermatis.
2. Микрофлора, выделенная при остром течении отита, была представлена преимущественно монокультурами (56,1 %), тогда как при хроническом течении процесса в 80 % случаев регистрировали бактериальные и бактериально-грибковые ассоциации. Наличие ассоциаций микроорганизмов свидетельствует о хронизации процесса и может быть использовано для дифференциальной диагностики наружных отитов.
3. Установлена более высокая резистентность к широкому кругу используемых в клинической практике антимикробных препаратов у штаммов, выделенных в монокультуре при разных формах течения наружного отита, а также у микроорганизмов, выделенных при остром течении процесса, что необходимо учитывать при выборе препаратов для эмпирической терапии собак с данной патологией.
4. Грибы рода Malassezia, выделенные при наружных отитах, характеризуются выраженными вирулентными и персистентными свойствами. Определен биопрофиль грибов, выделенных при разном течении наружного отита, и установлено, что грибы, выделенные при хроническом течении заболевания, характеризовались более высокими значениями антигемоглобиновой активности и антицитокиновой активности в отношении ИЛ-4. Полученные результаты могут быть использованы для оценки течения инфекционного процесса.
5. Проведенные исследования позволили выявить зависимость характера течения заболевания от биологических свойств бактериальных патогенов. Стафилококки, обладающие антикарнозиновой активностью и антицитокиновой
активностью в отношении ИЛ-4, и энтеробактерии, обладающие антилизоцим-ной активностью, определяли возможность развития рецидивов.
6. Анализ распространенности персистентных свойств у микроорганизмов, выделенных в ассоциациях у больных наружным отитом собак, показал высокие значения антигемоглобиновой активности у грибов рода Malassezia и антикарнозиновой активности у стафилококков по сравнению со штаммами, выделенными в монокультуре.
7. Выявлено преимущественное повышение персистентных свойств стафилококков и грибов в условиях их межмикробных взаимодействий in vitro. Полученные данные можно рассматривать как один из механизмов, способствующих формированию патобиоценоза, на фоне которого возникает заболевание.
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
При терапии Ма/ш'яегш-отитов в качестве препарата выбора предлагается кетоконазол. При выделении стафилококков - левофлоксацин и гентамицин, энтеробактерий - имипенем, ампициллин/сульбактам; псевдомонад - карбапе-немы, цефаперазон, ципрофлоксацин, тикарциллин/клавуланат.
Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе, при проведении лекционных и лабораторно-практических занятий по курсу «Ветеринарная микробиология и микология».
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
АЛА - антилизоцимная активность
АКрА - антикарнозиновая активность
АнтиНЬА - антигемоглобиновая активность
АИА - антиинтерфероновая активность
АДА - антицитокиновая активность
АОА - антиоксидантная активность
БПО - способность к биопленкообразованию
ИФН-у - интерферон - у
ИЛ-8 - интерлейкин - 8
ИЛ-4 - интерлейкин - 4
КБ - коэффициент биопленкообразования
БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ УКАЗАТЕЛЬ
1. Антигемоглобиновая активность энтерококков / Е. А. Щуплова [и др.] // Вестник Оренбургского государственного университета. - 2014. - № 13(174).-С. 139-142.
2. Алгоритм прогнозирования реконвалесцентного сальмонеллезного бактерионосительства / И. Н. Чайникова [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 4. - С. 113-116.
3. Андрющенко, С. В. Гомологи гена периплазматического ингибитора лизоцима РИС и их роль в антилизоцимной активности энтеробактерий / С. В. Андрющенко, И. Б:. Перунова, О. В. Бухарин // Микробиология. - 2014. - Т. 83.-№3.-С. 302-311.
4. Антицитокиновая активность микроорганизмов / О. В. Бухарин [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2011. - № 4.-С. 56-61.
5. Арзуманян, В. Г. Оценка эффективности мирамистина in vitro на культурах клинически значимых дрожжевых грибов / В. Г. Арзуманян, И. М. Кириченко // Успехи медицинской микологии. - 2005. - Т. 6. - С. 180-182.
6. Ассоциативный симбиоз / О. В.Бухарин [и др.]. - Екатеринбург : УрО РАН. - 2007. - 264 с.
7. Бала, С. С. Биологические свойства микрофлоры, выделенной из молока коров с клинической и субклинической формами мастита / С. С. Бала // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. - 2010. - Т. 4.-№28-1.-С. 287-289.
8. Бала, С. С. Факторы персистенции микрофлоры при маститах коров : дис. ... канд. биол. наук : 16.00.03 / Бала Сергей Сергеевич. - Оренбург, 2007. -136 с.
9. Биологическое значение антикарнозиновой активности бактерий / О. В. Бухарин [и др.]// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2000. - № 4. - С. 56-59.
10. Биргер, М. О. Справочник по микробиологическим и вирусологическим методам исследования / М. О. Биргер. - М.: Медицина, 1982. - 464 с.
11. Богданова, Т. В. Морфолого-физиологические характеристики дрожжевых организмов / Т. В. Богданова, Н. П. Блинов // Проблемы медицинской микологии. -2011. - Т. 13. -№ 1. - С. 3-13.
12. Богомолова, Т. С. Морфобиологические свойства и патогенность Candida albicans : автореф. дис. ... канд. биол. наук / Богомолова Т. С. - Ленинград, 1990.-24 с.
13. Бондаренко, В. И. Вирулентность и антибиотикорезистентность эшерихий, выделенных от человека / В. И. Бондаренко, А. И. Ференц // Микробиологический журнал. - 1990. - Т. 52. - № 3. - С. 66-69.
14. Бондаренко, В. М. Антилизоцимный фактор Klebsiella pneumoniae: природа, биологические функции и генетический контроль / В. М. Бондаренко, В. Г. Петровская, А. Л. Яблочков // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1994. - № 1. - С. 22.
15. Брокерхоф, К. Липолитические ферменты / К. Брокерхоф, Р. Джен-сон. - М. : Мир, 1978. - 234 с.
16. Брудастов, Ю. А. Биологическое значение антикомплементарной активности бактерий / Ю. А. Брудастов, Д. Г. Дерябин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 1994. - Приложение. - С. 27-32.
17. Брудастов, Ю. А. Антикомплементарная активность бактерий : дис. ... канд. мед. наук : 03.00.07 / Брудастов Юрий Авенирович. - Челябинск, 1992. -21с.
18. Бухарин, О. В. Персистенция патогенных бактерий / О. В. Бухарин. - М. : Медицина, 1999. - 365 с.
19. Бухарин, О. В. Антигемоглобиновая активность бактерий при взаимодействии с эритроцитами и ее роль в патогенезе анемии при инфекции / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов, Е. А. Щуплова // Гематология и трансфузиология. -2011.-№ 1.-С. 3-6.
20. Бухарин, О. В. Антимикробный белок тромбоцитов / О. В. Бухарин, В. А. Черешнев, К. Г. Сулейманов. - Екатеринбург : УрО РАН, 2000. - 200 с.
21. Бухарин, О. В. Лизоцим и его роль в биологии и медицине / О. В. Бухарин, Н. В. Васильев. - Томск : Издательство Томского университета, 1974. - 207 с.
22. Бухарин, О. В. Микробные ингибиторы лизоцима / О. В. Бухарин, А. В. Валышев // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. -2006.-№4.-С. 8-13.
23. Бухарин, О. В. Скрининг плазмид у бактерий рода Bacillus, обладающих антилизоцимной активностью / О. В. Бухарин, Д. А. Кириллов, В. А. Кириллов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2006.-№ 1.- С. 3-6.
24. Валышев, А. В. Роль лактоферрина в противоинфекционной защите / А. В. Валышев, И. В. Валышева, О. В. Бухарин // Успехи современной биологии. - 2011. -№ 2. - С. 135-144.
25. Валышева, И. В. Антилактоферриновая активность микроорганизмов : дис. ... канд. биол. наук : 03.00.07 / Валышева Ирина Викторовна. - Оренбург, 2005. - .140 с.
26. Вахитов, Т. Я. Регуляторные функции бактериальных экзометабо-литов на внутрипопуляционном и межвидовом уровнях : автореф. дис. ... докт. биол. наук : 03.00.23 / Вахитов Тимур Яшэрович. - Санкт-Петербург, 2007. - 40 с.
27. Взаимное влияние на факторы персистенции условно - патогенных микроорганизмов и бактерий рода Lactobacillus sp., входящих в состав ветеринарных пробиотиков / О. А. Капустина [и др.] // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. - 2012. - № 2. - С. 1-9.
28. Видовая характеристика и факторы персистенции облигатно-анаэробных микроорганизмов кишечной микробиоты человека [Электронный ресурс] / А. В. Савастеева [и др.] // Бюллетень Оренбургского научного центра УрО РАН. - 2013. - № 3. - Режим доступа:
www.elmag.uran.ru:9673/magazine/Numbers/2013-3/Articles/Savasteeva-soavt(2013-3).pdf
29. Видовой состав и биологические свойства микроорганизмов, выделенных от животных при гнойно-воспалительных заболеваниях [Электронный ресурс] / С. А. Пензурова [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 6. - Режим доступа: www.science-education.ru/106-7891.
30. Влияние лекарственных растений на антилизоцимную активность микроорганизмов / О. В. Бухарин [и др.] // Антибиотики и химиотерапия. -2003.-№5.-С. 11-14.
31. Вознесенский, Н. А. Биопленки - терапевтическая мишень при хронических инфекциях / Н. А. Вознесенский // Атмосфера. Пульмонология и аллергология. - 2008. - № 3. - С: 43-34.
32. Воробьев, А. А. Мир микробов / А. А. Воробьев, А. Л. Гинцбург, В. М. Бондаренко // Вестник РАМН. - 2000. - № 11. - С. 11-14.
33. Галиуллина, Л. Ф. Влияние тромбодефенсинов сельскохозяйственных животных на биологические свойства микроорганизмов : дис. ... канд. биол. наук : 06.02.02 / Галиуллина Ленара Фаильевна. - Уфа, 2013. - 119 с.
34. Гандыбин, Е. А. Прогнозирование течения и местное лечение венозных трофических язв нижних конечностей : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 14.00.27; 03.00.07 / Гандыбин Евгений Александрович. - Оренбург, 2009. - 23 с.
35. Гейдебрехт, О. В. Взаимосвязь галотолерантности дрожжей рода Malassezia с наличием внешней липидной оболочки / О. В. Гейдебрехт, О. В. Шелемех, В. Г. Арзуманян // Успехи медицинской микологии. - М. : Национальная академия микологии. - 2003. - Т. 1. - С. 19.
36. Генетическая детерминация киллерной активности у Malassezia spp. / В. Г. Арзуманян [и др.] // Проблемы медицинской микологии. - 2010. - Т. 12. - № 2. - С. 60-61.
37. Грибы рода Malassezia в заболеваниях животных : клинические формы, диагностика, терапия / Р. С. Овчинников, М. Г. Маноян, А. Г. Гайнул-лина, А. Н. Панин // Vetpharma. - 2013. - № 3. - С. 37-52.
38. Гриценко, В. А. Роль персистентных свойств микроорганизмов в патогенезе эндогенных инфекций / В. А. Гриценко, Ю. Б. Иванов // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2009. - № 4. - С. 66-71.
39. Долгушина, В. Ф. Инфекционная патология влагалища / В. Ф. Долгушина, И. И. Долгушин // Генитальные инфекции и патология шейки матки (клинические лекции) / Под ред. В. Н. Прилепской, Е. Б. Рудаковой. - Омск: ИПЦОмГМА, 2004. - С 144-152.
40. Дымова, В. В. Характеристика механизмов биологической активности тромбодефенсинов продуктивных животных : дис. ... канд. биол. наук : 06.02.02 / Дымова Вероника Викторовна. - Уфа, 2013. - 116 с.
41. Ермоленко, Е. И. Взаимодействие Candida albicans и Lactobacillus plantarum in vitro / E. И. Ермоленко, С. X. Ждан-Пушкина, A. H. Суворов // Проблемы медицинской микологии. - 2004. - Т. 6. - № 2. - С. 49-54.
42. Ершов, П. П. Этиологическая значимость дрожжевых грибов рода Malassezia при кожных заболеваниях животных : дис. ... канд. вет. наук : 16.00.03 / Ершов Петр Петрович. - М., 2008. - 165 с.
43. Зверев, А. Ф. Характеристика Staphylococcus aureus, выделенных от бактерионосителей и разработка способа их санации : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.02.03 / Зверев Александр Федорович. - Оренбург, 2013. - 24 с.
44. Иванова, Е. В. Биологические особенности бифидобактерий и их взаимодействие с микросимбионтами кишечной микрофлоры человека : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.02.03 / Иванова Елена Валерьевна. - Оренбург, 2010.- 128 с.
45. Ивченко, О. В. Диагностика малассезиозов животных : дис. ... канд. вет. наук : 06.02.02 / Ивченко Олеся Валерьевна. - М., 2010.- 152 с.
46. Изикаев, В. М. Некоторые биологические свойства монокультур и сокультивируемых вариаций бактерий рода Enterobacter и Staphylococcus
aureus и особенности их действия на перитонеальные макрофаги мышей : авто-реф. дис. ... канд. мед. наук : 03.02.03, 14.03.09 / Изикаев Венер Миниварисо-вич. - Челябинск, 2013. - 22 с.
47. Исайкина, Е. Ю. Морфофункциональные изменения в организме коров под действием лазерного излучения при субклиническом мастите : дис. ... канд. биол. наук : 06.00.02 / Исайкина Елена Юрьевна. - Оренбург, 2004. - 141 с.
48. Капустина, О. А. Видовая характеристика и факторы персистенции грибов рода Candida, выделенных из разных биотопов при инфекционно-воспалительных заболеваниях и дисбиозе кишечника / О. А. Капустина, И. Н. Чайникова, О. J1. Карташова // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2012: - № 4*. - С. 37—41.
49. Капустина, О. А. Характеристика грибов рода Candida как ассоци-антов в микробиоценозах тела человека : дис. ... канд. биол. наук : 03.02.03 / Капустина Ольга Александровна. - Оренбург, 2013. - 154 с.
50. Карташова, О. JI. Диагностика скрытых форм мастита у коров / О. JI. Карташова, С. Б. Киргизова, Е. Ю. Исайкина // Ветеринария. - 2004. - № 10. - С. 32-34.
51. Классификация лектинов как универсальных регуляторных молекул биологических систем / В. М. Лахтин [и др.] // Вестник РАМН. - 2009. - № 3. -С. 36-43.
52. Клиническая эффективность и безопасность тербинафина в лечении отрубевидного лишая / Л. П. Котрехова [и др.] // Клиническая дерматология и венерология. - 2007. - № 3. - С. 35-38.
53. Кострюкова, Н. Н. Молекулярно-биологические основы патогенно-сти гонококков и особенности иммунного ответа / Н. Н. Кострюкова, В. А. Бе-хало // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 1.-С. 105-112.
54. Кулько, А. Б. Исследование чувствительности к противогрибковым препаратам клинических штаммов Candida krusei, выделенных от больных ту-
беркулезом легких / А.Б. Кулько // Антибиотики и химиотерапия. - 2008. - Т. 53.-№ 11/12.-С. 22-24.
55. Лакин, Г. Ф. Биометрия / Г. Ф. Лакин. - М. : Высшая школа, 1990. -
352 с.
56. Лактоферрин из нейтрофилов собаки : выделение, физико-химические и антимикробные свойства / М. Н. Берлов [и др.] // Биохимия. -2007. - Т. 72(4). - С. 551-559.
57. Мальцев, С. В. Что такое биопленка / С. В. Мальцев, Г. Ш. Мансурова // Практическая медицина. - 2011. - № 5 (53). - С. 7-10.
58. Митрохин, С. Д. Современные антифунгальные препараты в терапии нозокомиальных грибковых инфекций у онкологических больных / С. Д. Митрохин, А. А. Соколов // Антибйотики и химиотерапия. - 2011. -1\56. - №1. - С. 29-34.
59. МУК 4.2.1890-04; Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам / Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. - 2004. - Т. 6. - № 4. - С. 306-359.
60. Ожован, И. М. Киллерные токсины дрожжей рода Malassezia / И. М. Ожован, В. Г. Арзуманян // Успехи медицинской микологии. - М. : Национальная академия микологии. - 2003. - Т. 1. - С. 41—42.
61. Особенности взаимодействия бактерий с эритроцитами и их роль в развитии инфекционной анемии / О. В. Бухарин [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. - № 4. - С. 25-28.
62. Перунова, Н. Б. Генетические детерминанты секретируемых ингибиторов лизоцима и антилизоцимный фенотип энтеробактерий / Н. Б. Перунова, С. В. Андрющенко, О. В. Бухарин // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -2012. - № 6. - С. 8-12.
63. Печеркина, С. А. О влиянии интерферона на стафилококки / С. А. Печеркина, Л. И. Малеева, И. В. Щицина // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. -1982. - № 2. - С.54-56.
64. Плешакова, В. И. Бактериоценоз наружного слухового прохода у
собак при отитах в условиях мегаполиса / В. И. Плешакова, Т. И. Лоренгель, Ж. Г. Мачалова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2014. - № 5. -С. 60-65.
65. Потехина, Л. П. Антикарнозиновая активность стафилококков : ав-тореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.02.03 / Потехина Лидия Петровна. - Оренбург, 2010.-22 с.
66. Практикум по микробиологии / под ред. А. И. Нетрусова. - М. : Академия, 2005. - 608 с.
67. Рищук, С. В. Факторы персйстенции сальмонелл при их внутриклеточном паразитировании : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.00.07 / Рищук Сергей Владимирович. - Челябинск, 1993. - 27 с.
68. Роль факторов персистенции и вирулентности при микроэкологических изменениях в организме человека / Б. Я. Усвяцов [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. - 2006. - № 4. - С. 58-61.
69. Семенов, А. В. Характеристика антагонистической активности бактерий при межмикробных взаимодействиях : автореф. дис. ... канд. биол. наук : 03.00.07 / Семенов Александр Васильевич. - Оренбург, 2009. - 22 с.
70. Сергеев, А. Ю. Факторы резистентности и иммунитет при грибковых инфекциях кожи и слизистых оболочек / А. Ю.Сергеев, Ю. В. Сергеев // Иммунопатология, аллергология, инфектология. - 2004. - № 1. - С. 6-14.
71. Симбиоз и его роль в инфекции / О. В. Бухарин [и др.]. - Екатеринбург : УрО РАН, 2011. - 299 с.
72. Синтез и изучение влияние производных имидазола на параметры роста и морфологические характеристики грибов рода Candida / О. Н. Нечаева [и др.] // Вестник Самарского государственного университета. Естественнонаучная серия. - 2004.'-№ 2. - С. 131-138.
73. Синтез лизоцима и его инактивация микроорганизмами, выделенными от больных с различными нозологическими формами / О. В. Бойко [и др.] // Современные проблемы науки и образования. - 2014. - № 3. - Режим доступа : http://www.science-education.ru/pdf720 1 4/3/155 .pdf.
74. Современные проблемы биологии грибов рода Malassezia / Н. С. Бачурская [и др.] // Вестник Оренбургского государственного университета. -2007. -№ 12.-С. 8-17.
75. Соколов, В. Ю. Антиинтерфероновая активность микроорганизмов / В. Ю. Соколов // Персистенция бактерий / Под ред. О.В. Бухарина. - Куйбышев, 1990.-С. 83-93.
76. Способ определения антигемоглобиновой активности микроорганизмов / О. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов, Е. А. Ханина // Патент РФ на изобретение № 2262705. Бюл. № 29 от 20.10.2005.
77. Способ определения антииммуноглобулиновой активности микроорганизмов / О. В. Бухарин [и др.] // Патент РФ на изобретение № 2236465. Бюл. № 26 от 20.09.2004.
78. Стадников; А. А. Бактериальная инактивация гемоглобина как один из механизмов формирования иммунодефицита / А. А. Стадников, Е. А. Ханина, Б. Я. Усвяцов // Иммунология Урала. - 2006. - № 1(5). - С. 175.
79. Сурикова, Е. В. Факторы персистенции клебсиелл : автореф. дис. ... канд. мед. наук : 03.00.07 / Сурикова Евгения Васильевна. - Челябинск, 1992. -22 с.
80: Усвяцов, Б. Я. Лизоцимная и антилизоцимная активность патогенных кокков : дис. ...докт. мед. наук : 03.00.07 / Усвяцов Борис Яковлевич. -Оренбург, 1986.-328 с.
81. Фадеев, С. Б. Хирургическая инфекция мягких тканей второго уровня, особенности этиотропной терапии : дис. ... докт. мед. наук : 14.01.17; 03.02.03 / Фадеев Сергей Борисович. - Оренбург, 2010. - 299 с.
82. Фенотипическая' характеристика стафилококков и местный иммунитет при бактерионосительстве / О. Л. Карташова [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2009. - № 4. - С. 99-102.
83. Феофилова, Е. П. Межклеточные взаимодействия в микробных популяциях как основа современной биотехнологии / Е. П. Феофилова // Успехи медицинской микологии. - 2005. - Т. 5. - С. 231-232.
84. Ханина, Е. А. Антигемоглобиновая активность микроорганизмов: автореф. дис. ... канд. биол. наук: 03.00.07 / Ханина Елена Алексеевна. - Оренбург, 2006. - 23 с.
85. Характеристика свойств, определяющих персистенцию моно- и ассоциированных культур условно патогенных энтеробактерий / 3. Г. Габидуллин [и др.] // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. - 2006. -№ 4. - С. 62-64.
86. Черников, Д. А. Клинико-микробиологическое обоснование применение споробактерина в комплексной терапии холангита : автореф. дис. ... канд. биол. наук : 14-.00.27; 03.00.07 / Черников Дмитрий Александрович. -Оренбург, 2009. 24 с: * ' '
87. Чернова, О. JI. Особенности микрофлоры и содержание лизоцима в молоке при мастите коров / O.JI. Чернова // Ветеринария. - 2001. - № 4. - С. 32.
88. Чернова, О. JI. Персистенция стафилококков как модель системы «паразит-хозяин» : автореф. дис: ... докт. биол. наук : 03.00.07 / Чернова Ольга Львовна. - Пермь, 2000. - 42 с.
89. Шевяков М.А. Кандидоз слизистых оболочек пищеварительного тракта (лекция) / М. А. Шевяков // Проблемы медицинской микологии. - 2000. -Т. 2.-№2.-С. 6-10.
90. Шейда, Е. В. Антимикробные свойства тромбоцитарного катионно-го белка сельскохозяйственных животных : автореф. дис. ... канд. биол. наук : 06.02.02 / Шейда Елена Владимировна. - Уфа, 2010. - 22 с.
91. Шелемех, О. В. Антагонистическая активность дрожжей рода Malassezia по отношению к Candida albicans / О. В. Шелемех, В. Г. Арзуманян // Успехи медицинской микологии. - М. : Национальная академия микологии. -2003. - Т. 1. -С. 50-51.
92. Шкиль, Н. Н. Оценка факторов персистенции микроорганизмов / Н. Н. Шкиль // Ветершгарная патология. - 2003. - № 2. - С.41-42.
93. Экология микроорганизмов человека / О. В. Бухарин [и др.]. - Екатеринбург : УрО РАН, 2006. - 476 с.
94. Этиология поверхностных кандидозов и резистентность их возбудителей / В. А. Горбунов [и др.] // Успехи медицинской микологии. - 2003. -Т.1.-С. 12-13.
95. Яшин, А. Я. Инжекционно-проточная система с амперометриче-ским детектором для селективного определения антиоксидантов в пищевых продуктах и напитках // Российский химический журнал. - 2008. - Т. 52. - № 2. -С. 130-135.
96. A new family of lysozyme inhibitors contributing to lysozyme tolerance in gram-negative bacteria / L. Callewaert [et al.] // PLoS Pathog. - 2008. - Vol. 4. -№3.-P. 1-9.
97. Aetiology of canine otitis externa: a retrospective study of 100 cases / M. N. Saridomichelakis [et al.] // Vet. Dermatol. - 2007. - Vol. 18. - № 5. - P. 341-347.
98. Akerstedt, J. Malassezia pachydermatis with special reference to canine skin disease / J. Akerstedt, I. Vollset // Br. Vet. J. - 1996. - Vol. 152. - № 3. - P. 269-281.
99. An azole-resistant isolate of Malassezia pachydermatis / M. Nijima [et al.] // Vet. Microbiol. - 2011. - Vol. 149. - № 1-2. - P. 288-290.
100. Antibacterial activity of pepsin-derived bovine hemoglobin fragment / R. Froidevaux [et al.] // FEBS Letters. - 2001. - Vol. 491. - № 1-2. - P. 159-163.
101. Antibiogram patterns of microbes isolated from otitis externa of dogs / K. S. Kumar [et al.] // Veterinary & Animal Sciences. - 2010. - Vol. 6. - № 3. - P. 145-147.
102. Antifungal activities of tacrolimus and azole agents against the eleven currently accepted Malassezia species / T. Sugita [et al.] // Journal of Clinical Microbiology. - 2005. - Vol. 43. - №. 6. - P. 2824-2829.
103. Antifungal agent susceptibilities and interpretation of Malassezia pachydermatis and Candida parapsilosis isolated from dogs with and without seborrheic dermatitis skin / C. Yurayart [et al.] // Med. Mycol. - 2013. - Vol. 51. - № 7.-P. 721-730.
104. Antifungal susceptibility of Malassezia furfur, Malassezia sympodialis and Malassezia globosa to azole drugs and amphotericin B evaluated using a broth microdilution method / F. D. Rojas [et al.] // Med. Mycol. - 2014. - Vol. 52. - № 6. -P. 641-646.
105. Ashbee, H. R. Immunology of diseases associated with Malassezia species / H. R Ashbee, E. G. Evans // Clin. Microbiol. Rev. - 2002. - Vol. 15. - №. 1. -P. 21-57.
106. Bensignor, E. Comparison of an antifungal agent with a mixture of antifungal, antibiotic and corticosteroid agents for the treatment of Malassezia species otitis in dogs / E. Bensignor, E. Grárídemangé // Vet. Ree. - 2006. - Vol. 158. - № 6. -P. 193-195. '
107. Biofilm development by clinical isolates of Malassezia pachydermatis / F. T. Cannizzo [et al.] // Med. Mycol. - 2007. - Vol. 45. - № 4. - P. 357-361.
108. Biofilm formation in Malassezia pachydermatis strains isolated from dogs decreases susceptibility to ketoconazole and itraconazole // A. Jerzsele [et al.] // Acta Vet. Hung. - 2014. - Vol. 62. - № 4. - P. 473-480.
109. Biofilm formation of Malassezia pachydermatis from dogs / L. A. Figueredo [et al.] / Vet. Microbiol. - 2012. - Vol. 160. - № 1-2. - P. 126-131.
110. Bond, R Malassezia pachydermatis: colonisation and infection of canine skin / R Bond. - London : University of London, 1996. - 215 p.
111. Bornand, V. Bacteriology and mycology of otitis externa in dogs / V. Bornand // Schweizer Archiv fur Tierheilkunde. - 1992. - Vol. 134. - № 7. - P. 341348.
112. Breitwieser, F. Results of bacteriologic and mycologic investigations of otitis media in dogs / F. Breitwieser // Tierarztliche Praxis. - 1997. - Vol. 25. - № 3. - P. 257-260.
113. Cafarcia, C. Association between phospholipase production by Malassezia pachydermatis and skin lesions / C. Cafarcia, D. Otrarito // Journal of Clinical Microbiology. - 2004. - Vol. 42. - № 10. - P. 4868^1869.
114. Characteristics of Staphylococcus intermedius isolates from diseased and healthy dogs / A. Sasaki [et al.] // J. Vet. Med. Sci. - 2005. - Vol. 67. - № 1. - P. 103-106.
115. Chiavassa, E. In vitro antifungal susceptibility of Malassezia pachydermatis strains isolated from dogs with chronic and acute otitis externa / E. Chiavassa, P. Tizzani, A. Peano // Mycopathologia. - 2014. - Vol. 178. - № 3-4. - P. 315-319.
116. Colombini, S. Microbial flora and antimicrobial susceptibility patterns from dogs with otitis media / S. Colombini, S. R. Merchant, G. Hosgood // Vet. Dermatol. - 2000. - Vol. 11. - № 4. - P. 235-239.
117. Comparative study of the microbial profile from bilateral canine otitis externa / L. C. Oliveira [et al.] // Can. Vet. J. - 2008. - Vol. 49. - № 8. - P. 785-788.
118. Corynebacterium spp. in dogs and cats with otitis externa and/or media: a retrospective study / K. Henneveld [et al.] // J. Am. Anim. Hosp. Assoc. - 2012. -Vol. 48. - № 5. - P. 320-326.
119. Coryneform bacteria associated with canine otitis externa / B. Aalbaek [et al.] // Vet. Microbiol. - 2010. - Vol. 145. - № 3-4. - P. 292-298.
120. Coutinho, S. D. Malassezia pachydermatis: enzymes production in isolates from external ear canalof dogs with and without otitis / S. D. Coutinho // Arq. Bras. Med. Vet. Zootec. - 2005. - Vol. 38. - № 1. - P. 73-76.
121. Coutinho, S. D.! Proteinase, phospholipase, hyaluronidase and chon-droitin-sulphatase production by Malassezia pachydermatis / S. D. Coutinho, C. R. Paula // Med. Mycol. - 2000. - Vol. 38. - № 1. - P. 73-76.
122. Crespo, M. Occurence of Malassezia spp. in the external ear canal of dogs and cats with and without otitis externa / M. Crespo, M. Abarca, F. Cabanes // Med. Mycol. - 2002. - Vol. 40. - № 2. - P. 115-121.
123. Dubuis, Ch. Cross-species gacA-controlled induction of antibiosis in pseudomonads / Ch. Dubuis, D. Haas // Appl. Environ. Microbiol. - 2007. - Vol. 73. -№21.-P. 650-654.
124. Edmund, J. R. Causes of otitis externa / J. R. Edmund // Small Animal Practice. - 2004. - Vol. 34. - № 2. - P.459^68.
125. Effects of beta-thujaplicin on anti-Malassezia pachydermatis remedy for canine otitis externa / Y. Nakano [et al.] // J. Vet. Med. Sci. - 2005. - Vol. 67. - № 12.-P. 1243-1247.
126. Faergemann, J. Atopic Dermatitis and Fungi / J. Faergemann // Clinical Microbiology Reviews. - 2002. - Vol. 15. - № 4. - P. 545-563.
127. Figueredo, L. A. Antifungal susceptibility of Malassezia pachydermatis biofilm / L. A. Figueredo, C. Cafarchia, D. Otranto / Med. Mycol. - 2013. - Vol. 51. -№ 8.-P. 863-867.
128. Genetic variability and phospholipase production of Malassezia pachydermatis isolated from dógs with diverse grades of skin lesions / M. L. Machado [et al.] // Med Mycol. - 2010. - Vol! 48. - № 6. - P. 889-892.
129. Hancock, R. E. The role of antimicrobial peptides in animal defenses / R. E. Hancock, M. G. Scott // PNAS. - 2000. - Vol. 97. - № 16. - P. 8856-8861.
130. In vitro activity of an ear rinse containing tromethamine, EDTA, benzyl alcohol and 0,1 % ketoconazole on Malassezia organisms from dogs with otitis externa / L. K. Cole [et al.] // Vet. Dermatol. - 2007. - Vol. 18. - № 2. - P. 115-119.
131. In vitro activity of ketoconazole, itraconazole and terbinafine against Malassezia strains isolated from neonates / B. Sancak [et al.] // Mikrobiyoloji bulteni. - 2005. - Vol. 39.-№ 3. - P. 301-308.
132. In vitro and in vivo activity of a killer peptide against Malassezia pachydermatis causing otitis in dogs / C. Cafarchia [et al.] // Med Mycol. - 2014. -Vol. 52.-№4.-P. 350-355.
133. In vitro and in vivo evaluation of a potentiated miconazole aural solution in chronic Malassezia otitis externa in dogs / P. Hensel [et al.] // Vet. Dermatol. -2009. - Vol. 20. - № 5-6. - P. 429-434.
134. In vitro antifungal activity of topical and systemic antifungal drugs against Malassezia species / A. J. Carrillo-Muñoz [et al.] // Mycoses. - 2013. - Vol. 56.-№5.-P. 571-575.
135. In vitro antifungal susceptibility of Malassezia furfur from bloodstream infections / R. Iatta [et al.] // J. Med. Microbiol. - 2014. - Vol. 63. - № 11. - P. 1467-1473.
136. In vitro antifungal susceptibility of Malassezia pachydermatis from dogs with and without skin lesions / C. Cafarchia [et al.] // Vet. Microbiol. - 2012. - № 155. -№2-4. -P. 395-398.
137. In vitro growth versus inhibition of growth of Malassezia pachydermatis in the presence of the antibacterial drug gentamicin / E. Buommino [et al.] // J. Med. Microbiol. - 2015. - Vol. 64. - № 2. - P. 180-184.
138. In vitro modulation of keratinocyte-derived interleukin-1 alpha (IL-1 alpha) and peripheral blood mononuclear cell-derived IL-1 beta release in response to cutaneous commensal microorgansisms / C. E. Walters [et al.] // Infect. Immun. -1995. - Vol. 63. - № 4. - P. 1223-1228.
139. In vitro susceptibility of Malassezia pachydermatis isolates from canine skin with atopic dermatitis to ketoconazole and itraconazole in East Asia / S. Watanabe [et al.] // J. Vet. Med. Sei. - 2014. - Vol. 76. - № 4. - P. 579-581.
140. In vitro susceptibility of the seven Malassezia species to ketoconazole, voriconazole, itraconazole and terbinafine // A. K. Gupta [et al.] // The British journal of dermatology. - 2000. - Vol. 142. - № 4. - P. 758-765.
141. Inhibitory effect of azelaic acid on neutrophil functions : a possible cause for its efficacy in treating pathogenetically unrelated diseases / H. Akamatsu [et al.] // Arch. Dermatol. - 1991. - Vol. 283. -№ 3. - P. 162-166.
142. Isolation and identification of microorganisms present in 53 dogs suffering otitis externa // G. Fernandez [et al.] // Revista Cientifica. - 2006. - Vol. 16. - № l.-P 23-30.
143. Kantarcioglu, S. Malassezia species : Taxonomy, mycology, immunology, pathogenesis, distribution and related infections, laboratory diagnosis, antifungal susceptibility / S. Kantarcioglu, A. Yucel // J. Med. - 2005. - Vol. 36. - № 3. - P. 134-154.
144. Karagozov, I. Vaginal ecosystem / I. Karagozov, E. Shopova, P. Andreeva // Akush. Ginekol. - 2004. - Vol. 43. - P. 34-43.
145. Keane, K. A. Slime-producing Staphylococcus species in canine pyoderma / K. A. Keane, D. J. Taylor // Veterinary Record. - 1992. - Vol. 130. - № 4.-P. 75.
146. Kesavan, S. The effect of lipid extraction on the immunomodulatory activity of Malassezia species in vitro / S. Kesavan, K. T. Holland, E. Ingham // Med. Mycol. - 2000. - Vol. 38. - № 3. - P. 239-247.
147. Kétoconazole: activité in vitro sur Pityrosporum. Efficacité dans la pityrosporose expérimentale du cobaye et dans le pityriasis capitis humain / J. Van Cutsem [et al.] // Bull. Soc. Fr. Mycol. Med. - 1988. - Vol. 17. - № 2. - P. 283-294.
148. Kiss, G. Characteristics of Malassezia pachydermatis strains isolated from canine otitis externa / G. Kiss, S. Radvanyi, G. Szigeti // Mycoses. - 1996. -Vol. 39. - № 7-8. - P. 93-95.
149. Kiss, G. New combination for the therapy of canine otitis externa. Microbiology of otitis externa // G. Kiss, S. Radványi, G. Szigeti // J. Small Anim. Pract. - 1997. - Vol. 38. - № 2. - P. 51-56.
150. Kumar, A. Prevalence of Malassezia pachydermatis and other organisms in healthy and infected dogs ears / A. Kumar, K. Singh, A. Sharma // Israel journal of Vet. Med. - 2002. - Vol. 57. - № 4. - P. 37-40.
151. Lehner, G. Reproducibility of ear cytology in dogs with otitis externa / G. Lehner, C. S. Louis, R. S. Mueller // Vet. Rec. - 2010. - Vol. 167. - № 1. - P. 2326.
152. Linek, M. Otitis externa and media in the dog and cat / M. Linek // Tierarztl Prax Ausg K Kleintiere Heimtiere. - 2011. - Vol. 39. - № 6. - P. 451-463.
153. Lipoperoxidase activity of Pityrosporum: characterisation of by-products and possible role in pityriasis versicolor / C. de Luca [et al.] // Exp. Dermatol. - 1996. -Vol. 5.-№ 1,-P. 49-56.
154. Losson, B. Pityrosporum canis and otitis externa of the dog and cat: its role and importance in relation to other constituents of the bacterial fungal and para-
sitic flora // B. Losson, A. Benakhla // Annales de Medecine Veterinaire. - 1980. -Vol. 124. - №. 6. - P. 435-442.
155. Lowell, S. H. The role of bacterial enzymes in inducing inflammation in the middle ear cavity / S. H. Lowell, S. K. Juhn // Otolaryngol. Head Neck. Surg. -1979. - Vol. 87. - № 6. - P. 859-870.
156. Lyskova, P. Identification and antimicrobial susceptibility of bacteria and yeasts isolated from healthy dogs and dogs with otitis externa // P. Lyskova, M. Vydrzalova, J. Mazurova // J. Vet. Med. A Physiol. Pathol. Clin. Med. - 2007. - Vol. 54.-№ 10. -P.559-563.
157. Machowinski, A. Pityriacitrin - a potent UV filter produced by Malassezia furfur and its effect on human skin microflora / A. Machowinski, H. J. Kramer, W. Hort // Mycoses. - 2006. - Vol. 49. - № 5. - P. 388-392.
158. Malassezia and the skin : science and clinical practice / T. Boekhout [et al.]. - Berlin : Springer-Verlag, 2010. - 313 p.
159. Malassezia furfur in a case of onychomycosis : colonizer or etiologic agent / A. Chowdhaiy, H. Randhawa, S. Sharma, M. Brandt // Med. Mycol. - 2005. -Vol. 43. -№ 1. - P. 87-90.
160. Malassezia pachydermatis in dogs with external otitis from Monterrey, Nuevo Leon, Mexico / J. J. Hernandez-Escareno [et al.] / African Journal of Microbiology Research. - 2012. - Vol. 6. - № 10. - P. 2443-2448.
161. Malassezia pachydermatis isolated from normal and diseased external ear canals in dogs: a comparative analysis / M. D. Girao [et al.] / Vet. J. - 2006. -Vol. 172. -№ '3. - P. 544-548.
162. Malassezin, a novel agonist of the aryl hydrocarbon receptor from the yeast Malassezia furfur, induces apoptosis in primary human melanocytes / H. J. Krämer [et al.] // Chembiochem. - 2005. - Vol. 6. - № 5. - P. 860-865.
163. Mancianti, F. Extracellular enzymatic activity of Malassezia spp. isolates / F. Mancianti, A. Rum, S. Nardoni // Mycopathologia. - 2001. - Vol. 149. - № 3. -P. 131-135.
164. Mann, W. The pathogenesis of otitis externa / W. Mann, U. Goebel, T. Sanabria de Isele // HNO. - 1983. - Vol. 31. - № 2. - P. 49-52.
165. Mason, I. S. A review of the biology of canine skin with respect to the commensals Staphylococcus intermedius, Demodex canis and Malassezia pachydermatis / I. S. Mason, K. V. Mason, D. H. Lloyd // Vet. Derm. - 1996. - Vol. 7. -№ 3. - P. 119-132.
166. Müller, E. Microbiological results of ear swabs from dogs and cats // E. Müller, A. Heusinger // Tierarztliche Praxis. - 1994. - Vol. 22. - № 1. - P. 80-84.
167. O"Toole, G. Biofilm formation as microbial development / G. O" Toole, H. B. Kaplan, R. Kolter // Annu. Rev. Microbiol. - 2000. - Vol. 54. - P. 49-79.
168. Occurrence and population size of Malassezia spp. in the external ear canal of dogs and cats both healthy and with otitis / C. Cafarchia [et al.] // Mycopathologia. - 2005. - Vol. 1'60. - № 2. - P. 143-149.
169. Ojo, M. O. Pathogenic aerobic bacteria and fungi isolated from stray dogs in Trinidad / M. O. Ojo // Revue D'elevage et de Medecine Veterinaire des Pays Tropicaux. 1994. - Vol. 47. - № 2. - P. 179-181.
170. Otitis externa in dogs: bacteriological and mycological study / D. Hajsig [et al.] // Veterinarski Arhiv. - 1980. - Vol. 50. - № 4. - P. 159-164.
171. Petrov, V. Malassezia pachydermatis - etiology and clinical findings in canine external otitis - therapeutic approaches / V. Petrov, G. Mihaylov / Trakia Journal of Sciences. - 2008. - Vol. 6. - Suppl. 1. - P. 123-126.
172. Phospholipase and proteinase production by Malassezia pachydermatis isolated in dogs with and without otitis / G. Ortiz [et al.] // Rev. Iberoam. Micol. -2013.-Vol. 30.-№4.-P. 235-238.
173. Pityriarubins, novel highly selective inhibitors of respiratory burst from cultures of the yeast Malassezia furfur: comparison with the bisindolylmaleimidearcyriarubin A / H. J. Krämer [et al.] // Chembiochem. - 2005. -Vol. 6. - № 12. - P. 2290-2297.
174. Prevalence of genes for enterotoxins, toxic shock syndrome toxin 1 and exfoliative toxin among clinical isolates of Staphylococcus pseudintermedius from
canine origin / J. W. Yoon [et al.] // Veterinary Dermatology. - 2009. - Vol. 21. - № 5. _P. 484-489.
175. Production of virulence factors by Staphylococcus intermedius isolates from cases of canine pyoderma and healthy carriers / R. P. Allaker [et al.] // Microbial Ecology in Health & Disease. - 1991. - Vol, 4. - № 3. - P. 169-173.
176. Pseudomonas aeruginosa from canine otitis externa exhibit a quorum sensing deficiency / E. A. Tron [et al.] // Clin. Diagn. Lab. Immunol. - 2001. - Vol. 8. -№ 3. - P. 632-636.
177. Richardson, M. D. Enhanced phagocytosis and intracellular killing of Pityrosporum ovale by human neutrophils after expsoure to ketoconazole is correlated to changes of the yeast cell surface / M. D. Richardson, G. S. Shankland // Mycoses. - 1991. -Vol. 34.-№ 1-2.-P. 29-33.
178. Rincon, S. A modified Christensen's urea and CLSI broth microdilution method for testing susceptibilities of six Malassezia species to voriconazole, itraconazole and ketoconazole /'SI Rincon, M. Cepero de Garcia, A. Espinel-Ingroff // Journal of Clinical Microbiology. - 2006. - Vol. 44. - №. 9. - P. 3429-3431.
179. Rosychuk, R. A. Management of otitis externa / R. A. Rosychuk // Vet. Clin. North Am Small Anim. Pract. - 1994. - Vol. 24. - № 5. - P. 921-952.
180. Schmidt, A. In vitro activity of climbazole, clotrimazole and silver-sulphadiazine against isolates of Malassezia pachydermatis / A. Schmidt // Zentralbl. Veterinarmed. B. - 1997. - Vol. 44. - № 4. - P. 193-197.
181. Seborrhoeic dermatitis and Pityrosporum {Malassezia) folliculitis: characterization of inflammatory cells and mediators in the skin by immunohistochemis-try / J. Faergemann [et al.] // British Journal of Dermatology. - 2001. - Vol. 144. - № 3.-P. 549-556'.
182. Sochorova, R. Bifonazol cream, solution and shampoo in dermatological practice / R: Sochorova // Derma. - 2002. - № 2. - URL: http://www.sav.sk/journals/dermayderma202.htm.
183. Species distribution and antimicrobial susceptibility of staphylococci isolated from canine otitis externa / B. Penna [et al.] // Vet. Dermatol. - 2010. - Vol. 21. -№ 3. - P. 292-296.
184. Studdert, V. P. A clinical trial of a topical preparation of miconazole, polymyxin and prednisolone in the treatment of otitis externa in dogs / V. P. Studdert, K. L. Hughes // Aust. Vet. J. - 1991. - Vol. 68. - № 6. - P. 193-195.
185. Susceptibility variation of Malassezia pachydermatis to antifungal agents according to isolate source / C. B. Weiler [et al.] I I Braz. J. Microbiol. - 2013. - Vol. 44. - № 1. - P. 174-178.
186. The effects of Malassezia on pro-inflammatory cytokine production by human peripheral blood mononuclear cells in vitro / S. Kesavan [et al.] // Med. Mycol. - 1998.'-Vol. 36.-№2.-P. 97-106.
187. The lipolytic enzymes activities of Malassezia species / W. Juntachai [et al.] // Med. Mycol. - 2009. - Vol. 47. - № 5. - P. 477^184.
188. Turkyilmaz, S.'Determination of some virulence factors in Staphylococcus spp. isolated from various clinical samples / S. Turkyilmaz, O. Kaya // Turk. J. Vet. Anim. Sci. - 2006. - Vol. 30. - P. 127-132.
189. Uchida, Y. Cliniko-microbiological study of the normal and otitic external ear canals in dogs and cats / Y. Uchida, T. Nakade., K. Kitazawa / Jpn. J. Vet. Sci. - 1990.-Vol. 52.-№2.-P. 414-417.
190. Weary, P. E. Pityrosporum ovale: Observations on some aspects of host parasite interrelationship / P. E. Weary // Arch. Derm. - 1968. - Vol. 98. - № 4. - P. 408-422.
191. Yamashita, K. Isolation and characterization of staphylococci from external auditory meatus of dogs with or without otitis externa with special reference to Staphylococcus schleiferi subsp. coagulans isolates / K. Yamashita. A. Shimizu, J. Kawano // J. Vet. Med. Sci. - 2005. - Vol. 67. - № 3. - P. 263-268.
192. Yang, Y. L. Virulence factors of Candida species / Y. L. Yang // J. Microbial Immunol Infect. - 2003. - Vol. 36. - P. 223-228.
193. Zamankhan, M. H. Identification and antimicrobial susceptibility patterns of bacteria causing otitis externa in dogs / M. H. Zamankhan, S. Jamshidi, S. Zahraei // Vet. Res. Comm. - 2010. - Vol. 34. - № 5. - P. 435^144.
Обратите внимание, представленные выше научные тексты размещены для ознакомления и получены посредством распознавания оригинальных текстов диссертаций (OCR). В связи с чем, в них могут содержаться ошибки, связанные с несовершенством алгоритмов распознавания. В PDF файлах диссертаций и авторефератов, которые мы доставляем, подобных ошибок нет.