Исследование на доклиническом уровне иммуносупрессивных эффектов флавоноидов корня солодки. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат медицинских наук Албегова, Диана Заурбековна

• Албегова, Диана Заурбековна
• кандидат медицинских наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Албегова, Диана Заурбековна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1Л' Иммуносупрессивнаятерапия: перспективы-развития

I -2. Флавоноиды как потенциальный источник для изыскания но- 15 вых лекарственных средств

1.2.1. Флавоноиды - структурно-разнообразные полифенолы расте- 15 ний

1.2.2. Флавоноиды ре1улируют транскрипцию генов, влияя на ак- 18 тивность внутриклеточных сигнальных молекул

1.2.3. Фармакология флавоноидов: существующие лекарственные 23 препараты, проблемная фармакокинетика

•2.4. Единство и борьба противоположных фактов: флавоноиды иммуностимуляторы или иммуносупрессанты? 1 -2.4.1. Флавоноиды и механизмы врожденного иммунитета

1.2.4.2. Флавоноиды и адаптивный иммунный ответ

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Поэтапная схема постановки экспериментов

2.2. Лабораторные животные

2.3. Тестируемый агент и его стандартизация

2.4. Выделение лимфоцитов из периферической крови человека 39 -.5. Приготовление суспензии клеток лимфоидных органов

2.6. Иммуномагнитная сепарация

2.7. Определение действующих концентраций активирующих агентов (митогенов) "

2.8. Оценка пролиферации лимфоцитов, индуцированной различными митогенами

2.9: Оценка «раннего» апоптоза и некроза

2.10. Оценка «позднего» апотоза

2.11. Модель контактной чувствительности

2.12.^ Адоптивный перенос контактной чувствительности

2.13. ' Оценка уровня секреторных цитокинов

2.14. Статистическая обработка результатов

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Влияние ФКС на ростовые характеристики (пролиферация, апоптоз) активированных лимфоцитов

3.1.1. Оценка .влияния- ФКС на пролиферацию митоген-активированных МНК in vitro

3.1.2. Влияние предобработки ФКС in vivo на митоген-стимулированную пролиферациию МНК мышей ex vivo

3.1.3. Влияния ФКС на «поздний» апоптоз митоген-активированных МНК

3.1.4. Изучение влияния ФКС ни секрецию цитокинов активированными МНК

3.2. Изучение эффективности ФКС в реакции КЧ

3-2.1. Влияние ФКС на развитие отека уха у мышей в реакции КЧ

3.2.2. Влияние ФКС на пролиферативную активность и абсолютное количество МНК регионарных лимфоузлов в модели КЧ

3.2.3. Влияние введения ФКС на ранних сроках после ДНФБ-сенсибилизации на секрецию цитокинов МНК регионарных лимфоузлов

3.3. Изучение механизмов иммуносупрессивного эффекта ФКС в реакции контактной чувствительности

3.3.1. Влияние ФКС на функциональную активность лимфоцитов-эффекторов в реакции КЧ

3.3.1.1. Оценка проапоптогенного эффекта ФКС по отношению к лимфоцитам-эффекторам КЧ

3.3.1.2. Влияния ФКС на способность спленоцитов, сенсибилизированных ДНФБ мышей, адоптивно переносить КЧ

3.3.1.3. Влияние ФКС на способность Т- лимфоцитов ДНФБ-сенсибилизированных мышей адоптивнопереносить КЧ

3.3.1.4. Влияние ФКС на способность субпопуляций Т-лимфоцитов адоптивно переносить КЧ

3.3.1.5. Влияние ФКС на адоптивный перенос КЧ комбинацией CD4+-и CD8+-лимфоцитов.

Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование на доклиническом уровне иммуносупрессивных эффектов флавоноидов корня солодки.»

Актуальность темы исследования

Переходисследований^; медицине намолекулярный* уровень» привел к; накоплению? в последние: десятилетия? многочисленных данных, позволивших детально описать патогенез целого ряда заболеваний. Важнейшим достижением данного; этапа исследований; стало выявление и характеристика молекул, появление которых либо1 сопутствует патологическому процессу, либо" играет ведущую роль в его возникновении (молекулярные маркеры заболевания и/или «патологические молекулы»). Принципиальное изменение ситуации произошло в связи с завершением интенсивных исследований в иммунологии, биотехнологии и молекулярной биологии. В результате развития^ этих областей сформировалась унифицированная; идеология, так называемой, прицельной или мишень-направленной терапии. В связи с этим поиск новых таргетных; лекарственных средств, способных селективно корригировать ключевые звеньям патогенеза того или иного заболевания приобретает все болыиуюактуальность.

Одним из перспективных направлений1 в этой области являетсяфаз-работка менее токсичных и более специфичных иммуносупрессивных лекарственных средств. В настоящее время в качестве иммуносупрессантов г широко используются цитостатики, глюкокортикостероиды и ингибиторы, кальциневрина. Цитотоксические противоопухолевые препараты (иммуно-, супрессанты первого поколения) неизбирательно воздействуют на любые клетки, находящиеся в процессе деления. Этим объясняется наличие у этого класса лекарственных препаратов большого числа побочных эффектов;. Внедрение ингибиторов кальциневрина; (циклоспорин А, такролимус) явилось, важным шагом в направлении создания; более избирательных: препаратов, однако побочные эффекты этого класса лекарственных средств все еще значительны. В-тоже время идеальный иммуносупрессант должен обладать избирательным действием на отдельные субпопуляции лимфоцитов, не вызывая повреждения как других клеток организма, так и клонов? лимфоцитов, осуществляющих реакции противоинфекционного и противоопухолевого иммунитета. Иначе говоря, действие препарата должно быть направлено преимущественно на АГ-специфические клетки, принимающие участие в реакциях приобретенного иммунитета. В настоящее время на роль идеального иммуносупрессанта< претендуют моноклональ-ные антитела (МАТ), ингибиторы внутриклеточных сигнальных молекул и так называемые «переключатели иммунного ответа».

Вещества растительного происхождения всегда являлись интересным источником для создания новых лекарственных средств. Пристальное внимание исследователей в последнее время уделяется изучению флаво-ноидов — большой группы полифенольных соединений, присутствующих практически во всех высших растениях. Результаты многочисленных исследований демонстрируют, что эти вещества обладают широким диапазоном активностей, проявляя противовоспалительные, иммунотропные, антиканцерогенные и другие эффекты [3, 27, 28, 68, 77, 121]. Изучение механизмов действия флавоноидов на молекулярном уровне показывает, что некоторые их классы (изофлавоны, халконы) способны эффективно инги-бировать фосфорилирование, а как следствие и активацию, ключевых молекул сигнальных путей в животных клетках. Ряд работ свидетельствуют об иммуностимулирующем действии некоторых флавоноидов в моделях ш vivo [101, 116]. Несмотря на многочисленные исследования иммунотроп-ных эффектов флавоноидов, на сегодняшний день отсутствует единая концепция, объясняющая их механизмы действия.

В связи с этим актуальным является изучение механизмов иммуно-тропной активности флавоноидов и экспериментальное обоснование их фармакологической эффективности в моделях на животных.

Цель и задачи исследования

Целью исследования являлось, изучение на доклиническом уровне иммунооупрессивных эффектов флавоноидов корня солодкй (ФКС).

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи::

1. Изучить влияние ФКС на индуцированную пролиферацию и оценить проапоптогенный эффект данного препарата по отношению к мито-ген-активированным человеческим и мышиным мононуклеарным клеткам.

2. Оценить влияние ФКС на продукцию цитокинов активированными мононуклеарными клетками мышей.

3. Изучить эффективность ФКС в реакции контактной чувствительности^ индуцированной 2,4-динитрофторбензолом у мышей.

4. Исследовать влияние ФКС на пролиферативный ответ и функциональную активность иммунокомпетентных клеток на ранних сроках после сенсибилизации 2,4-динитрофторбензолом.

5. Изучить влияние ФКС на функциональную активность лимфоцитов-эффекторов в реакции контактной чувствительности.

Научная новизна

Впервые было проведено исследование фармакодинамических эффектов флавоноидной фракции экстракта корня солодки в моделях, рекомендованных для доклинического изучения новых фармакологических веществ с иммунотропной активностью.

Впервые был продемонстрирован антипролиферативный эффект ФКС in vitro в отношении митоген-активированных человеческих и мышиных I

Т-лимфоцитов. Было доказано, что антипролиферативный эффект ФКС не связан с индукцией апоптоза, но обусловлен модулирующим действием на продукцию цитокинов: наблюдается подавление секреции ИЛ-2 и ИФНу, и повышение уровня ИЛ-6 и ИЛ-17.

Впервые было показано, что ФКС ингибируют развитие реакции контактной чувствительности, индуцированной 2,4-динитрофторбензолом у мышей.

Впервые было показано, что внутривенное введение ФКС нафанних сроках после сенсибилизации 2,4-динитрофторбензолом приводит к снижению, как абсолютного числа клеток регионарных лимфоузлов, так и подавлению пролиферативного ответа их в системе in vitro. Это коррелирует с изменением цитокинового баланса: наблюдается уменьшение секреции ИЛ-2, ИФНу и ИЛ-4 и увеличение продукции ИЛ-10 и ИЛ-17 клетками регионарных лимфоузлов, что может свидетельствовать о способности фла-воноидов солодки переключать Thl/Th2 иммунные ответы в процессе развития контактной чувствительности на формирование Th 17-лимфоцитов.

Впервые показано, что на поздних сроках после ДНФБ-сенси-билизации, обработка ФКС суммарной фракции спленоцитов, а также выделенных из нее с помощью иммуномагнитной сепарации Т-клеток, приводит к блокаде адоптивного переноса реакции контактной чувствительности несенсибилизированным сингенным мышам-реципиентам.

Впервые было показано, что блокирующий эффект ФКС не наблюдается в случае обработки CD8+ лимфоцитов-эффекторов, выделенных из спленоцитов сенсибилизированных животных. Воспроизведение блокирующего эффекта ФКС, происходит только после обработки CD4+-популяции и последующего ее адоптивного переноса совместно с CD8-эффекторами несенсибилизированным мышам-реципиентам.

Практическая значимость

Совокупность полученных в работе данных углубляет фундаментальные представления о механизмах развития иммунного ответа.

Растительное происхождение, большое количество ранее установленных биологических эффектов, а также выявленные принципиально новые механизмы действия флавоноидов корня солодки открывают перспективу их дальнейшего изучения в качестве иммуносупрессивных лекарственных препаратов.

В работе подобран, комплекс методов, позволяющих оценивать им-мунотропную активность и эффективность новых фармакологических агентов.

Публикация и апробация работы

Материалы диссертации были представлены на Всероссийской научной конференции «Молекулярно-генетические основы функционирования цитокиновой сети в норме и патологии» (Новосибирск, 2010), Национальной конференции: «Аллергология и клиническая иммунология -практическому здравоохранению» (Москва, 2010), 2nd European Congress of Immunology: "Immunity for Life, Immunology for Health" (Berlin, Germany, 2009), V World Congress of Immunopathology and Respiratory Allergy (Tel Aviv, Israel, 2009), VI Georgian Congress of Allergology and Immunology, VI International Congress "Health and Drug" (Tbilisi - Tskhaltubo, Georgia, 2010), III World Asthma & COPD Forum, World Forum of Pediatrics (Dubai, UAE, 2010).

Работа апробирована на совместном заседании кафедры фармакологии педиатрического факультета, кафедры иммунологии МБФ и отдела I иммунологии ГОУ ВПО Российский государственный медицинский университет Росздрава. По материалам диссертации опубликовано 15 печатных работ, в том числе в изданиях рекомендованных ВАК РФ - 8.

Внедрение результатов исследования

Результаты диссертации внедрены, в учебный процесс на кафедре фармакологии ГОУ ВПО Севоро-Осетинской государственной медицинской академии Минздравсоцразвития.

Разработанные в диссертации модели и методы используются в экспериментальной работе кафедры и отдела иммунологии ГОУ ВПО Российского государственного медицинского университета Росздрава и отдела молекулярной и экспериментальной гематологии, онкологии и иммунологии ФГУ ФНКЦ детской гематологии, онкологии и иммунологии Росздрава.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, раздела собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, включающего работы отечественных и зарубежных авторов. Работа иллюстрирована 25 рисунками и содержит 9 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Фармакология, клиническая фармакология», Албегова, Диана Заурбековна

выводы

1. Флавоноиды корня солодки in vitro дозозависимо угнетают пролиферацию мононуклеарных клеток человека и мышей, индуцированную I

Т-клеточными митогенами.

2. Исследование механизмов антипролиферативного действия» флаво-ноидов солодки на модели КонА-стимулированных лимфоцитов мышей, показывает, что они не связаны с индукцией апоптоза, но сопровождаются изменением баланса Т-хелперных цитокинов: флавоноиды корня солодки подавляют секрецию ИЛ-2 и ИФНу, и увеличивают уровень ИЛ-6 и ИЛ-17, что может свидетельствовать о переключении Thl иммунного ответа в направлении Thl7.

3. Парентеральное введение флавоноидов корня солодки на ранних сроках после сенсибилизации 2,4-динитрофторбензолом, подавляет реакцию контактной чувствительности у мышей, что сопровождается до-зозависимым уменьшением абсолютного числа клеток регионарных лимфоузлов за счет снижения их пролиферативного ответа.

4. Снижение пролиферативного ответа клеток регионарных лимфоузлов, как и в случае митоген-стимулированной пролиферации in vitro, сопровождается изменением цитокинового баланса: наблюдается уменьшение секреции ИЛ-2, ИФНу и ИЛ-4 и увеличение продукции ИЛ-10' и ИЛ-17 клетками регионарных лимфоузлов, что может свидетельствовать о переключении Thl и Th2 иммунных ответов в процессе развития контактной чувствительности на формирование ТЫ7-лимфоцитов.

5. На поздних сроках от начала сенсибилизации 2,4-динитрофторбензолом, после завершения фазы пролиферации и миграции зрелых эффект оров из регионарных лимфоузлов, обработка флавоноидами корня солодки суммарной фракции спленоцитов, а также выделенных из нее с помощью иммуномагнитной сепарации Т-клеток, приводит к блокаде адоптивного переноса реакции контактной чувствительности несенсибилизированным мышам-реципиентам.

6. Блокирующий эффект флавоноидов солодки не наблюдается в случае обработки основной эффекторной популяции, отвечающей за адоптивный перенос контактной чувствительности - СВ8+ клеток. Воспроизведение блокирующего эффекта флавоноидов корня солодки, происходит только после обработки СВ4+ популяции и последующего ее адоптивного переноса совместно с СБ8+ эффекторами несенсибилизированным мышам-реципиентам.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Албегова, Диана Заурбековна, 2011 год

1. Батурин А.К., Тутельян В .А., Мартинчик Э.А. Флавоноиды: содержание в пищевых продуктах, уровень потребления, биодоступность // Вопросы питания 2004. - №4. - С. 43-48.

2. Денисова С.Б., Карачурина Л.Т., Муринов Ю.И., Хайруллина В.Р. Антиоксидантное и гепатозащитное действие флавоноидов корня солодки. II Всероссийская конференция Химия и технология растительных веществ: Сборник материалов. 2002. - С. 67-68.

3. Зенков К.Н., Меньщикова Е.Б., Ткачев В.О. Некоторые принципы и механизмы редокс-регуляции // Кислород и антиоксиданты. 2009. -Vol. 1.-Р. 3-64.I

4. Корулькин Д.Ю., Абилов Ж.А., Музычкина P.A., Толстиков Г.А. Рос. акад. наук, Сиб. отд, Новосиб. ин-т органической химии. — Новосибирск: Академическое издательство «Гео». 2007. - 232с.

5. Кравченко JI.B., Морозов C.B., Авреньева Л.И., и др. Оценка антиокIсндантной и антитоксической эффективности природного флавонои-да дигидрокверцетина // Токсикол. вестн. 2005. - №1. - С. 14-20.1

6. Кренски А., Штром Т., Блюстоун Дж. Иммуномодуляторы: иммуно-депрессанты, иммуностимуляторы и средства, вызывающие иммунологическую толерантность // Клиническая фармакология по Гудману и Гилману. Москва. - 2006. - С. 1126-1143.

7. Лазарева Д.Н., Плечев В.В., Моругова Т.В., Самигуллина Л.И. Растения, стимулирующие иммунитет // Уфа: Изд. «Башкортостан» -2005.-96с.

8. Ларина H.A., Неклюкова М.Б., Потапенко А .Я. и др. Успехи клйни^еской иммунологии и аллергологии. 2001. - 2. - С. 277-286.

9. Меджитов Р., Джаневей Ч. Врожденный иммунитет // Казанский медицинский журнал. 2004. - Т. 85. - №3. - С. 161-167.

10. Хаитов P.M., Пинегин Б.В. Основные принципы иммуномодулирую-щей терапии // Аллергия, астма и клин, иммун. 2000. - № 1. - С. 9-16.

11. Шульпекова Ю.О. Флавоноиды расторопши пятнистой в лечении заболеваний печени // Русск. мед. журн. 2004. - Т. 12, №5. - С. 248-250.

12. Akiyama T., Ishida J., Nakawaga S., et al. Genistein, a specific inhibitir of tyrosine-specific protein kinases // J. Biol. Chem. 1987. - Vol. 262. - P. 5592-5595.

13. Aktas O., Prozorovski T., Smorodchenko A et al. Green tea epigallocate-chin-3-gallate mediates T cellular NF-kB inhibition and exerts neuroprotection in autoimmune encephalomyelitis // J. Immunol. 2004. - Vol. 173(9).-P. 5794-5800.

14. Atluru D., Jackson T.M., Atluru S. Genistein, a selective protein tyrosine kinase inhibitor, inhibits interleukin-2 and leukotriene B4 production from human mononuclear cells // Clin. Immunol. Immunopathol. 1991. -Vol.59.-P. 379-387.

15. Atluru S., Atluru D. Evidence that genistein, a protein-tyrosine kinase inhibitor, inhibits CD 28 monoclonal-antibody-stimulated human T cell proliferation // Transplantation. 1991. - Vol.51. - P. 448-450.

16. Beecher G.R. 'Overview of Dietary Flavonoids: Nomenclature, Occurrence and Intake' // J. Nutr. 2003. - Vol. 133. - P. 3248-3254.

17. Beretz A., Anton R., Cazenave J.P. The effects of flavonoids on cyclic nucleotide phosphodiesterases // Plant Flavonoids in Biology and Medicine: Biochemical, Pharmacological and Structure-Activity Relationships. 1986.-P. 281-296.

18. Boege F., Straub T., Kehr A. et al. Selected novel flavones inhibit the DNA binding or the DNA religation step of eukaryotic topoisomerase I // J. Biol. Chem. 1996. - Vol. 271(4). P. 2262-2270.

19. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow // Stand. J. Clin. Lab. Invest. Vol. 21 (Supp. 97). - 1968.

20. Campbell M-A., Sefton C.M. Protein tyrosine phosphorylation is inducedtin murine B lymphocytes in response to stimulation with antiimmunoglobulin // EMBO J. 1990. - Vol. 9. - P. 2125-2131.

21. Cavani A. Immune regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis and contact sensitization // Chem. Immunol. Allergy. 2008. - Vol. 94. — P. 93-100.

22. Cavani A., De Luca A. Allergic contact dermatitis: novel mechanisms and therapeutic perspectives // Curr. Drug. Metab. 2010. - Vol. 11(3). - P. 228-233.

23. Chang C.L., Zhang L.J., Chen R.Y., et al. Antioxidant and antiinflammatory phenylpropanoid derivatives from Calamus quiquesetiner-viiis // J. Nat. Prod.-2010.-Vol. 73(9).-P. 1227-1231.

24. Chauhan PS, Satti NK, Suri KA, et al. Stimulatory effects of Cuminum cyminum and flavonoid glycoside on Cyclosporine-A and restraint stress induced immune-suppression in Swiss albino mice // Chem. Biol. Interact. 2010. - Vol. 185(1). - P. 66-72.

25. Chen M., Gu H., Ye Y., et al. Protective effécts of hesperidin against oxidative stress of tert-butyl hydroperoxide in human hepatocytes // Food Chem. Toxicol. 2010. -Vol. 48(10). - P. 2980-2987.

26. Chen S.R., Xu X.Z., Wang Y.Hi,, et all Icariin;derivative inhibits inflammation, through suppression of p38 mitogen-activatedi protein kinase and nuclear factor-kappaB pathways // Biol: Pharm: Bull: — 2010. Vol. 33(8).-P. 1307-1313.

27. Cockcroft S. Phosphatidylinositol metabolism in mast cells and neutro^ phils // Cell Calcium. 1982. - Vol. 3. - P. 337-349.

28. Cumella J.C., Faden H., Middleton E. Selective activity of plant flavono-ids on neutrophil chemiluminescence. (CL) // J. Allergy Clin. Immunol. -1987.-Vol. 77.-P. 131.

29. Dangles O., Dufour C., Flavonoid-protein binging processes and their potential impact on human health. P. 67-83. In: Recent advances in polyphenol research. - Vol. 1. - ed. F. Daayf, V. Lattanzio, Wiléy-Blackwell: - 2008.

30. DáValos A, de la Peña G, Sánchez-Martín CC, et al. Effects of red grape juice polyphenols in NADPH oxidase subunit expression* in human neutrophils and mononuclear blood cells // Br. J. Nutr. 2009. - Vol. 102(8). P. 1125-1135.

31. De Whalley C.V., Rankin S.M. Flavonoids inhibit the oxidative modification of low density lipoproteins by macrophages // Biochem. Pharmacol. -1990.-Vol. 39 (11).-P. 1743-1750.

32. Dijsselbloem N, Goriely S, Albarani V. et al. A critical.role for p-53 in the control of NF-KB-dependent gene expression in TNF-a-stimulated dendritic cells exposed to genistein // J. Immunol. 2007. Vol. 178. — P. 5048-5057.

33. Donfack J.H., Simo C.C., Ngameni B., et al. Antihepatotoxic and antioxidant activities of methanol extract and isolated compounds from Ficus chla-mydocarpa // Nat. Prod. Commun.-2010.-Vol. 5(10).-P. 1607-1612.

34. Egger M., Beer A.G., Theurl M. et al. Monocyte migration: a novel effect and signaling pathways of catestatin // Eur. J. Pharmacol. 2008. - Vol. 598(1-3).-P. 104-111.

35. Felle H.H., Kondorosi E., Kondorosi A., Schultze M. How alfalfa root hairs discriminate between Nod factors and oligochitin elicitors // Plant Physiol. 2000. - Vol. 124(3).-P. 1373-1380.

36. Ferrandiz M.L., Alcaraz M.J. Anti-inflammatory activity and inhibition of arachidonic acid metabolism by flavonoids // Agents Actions 1991. Vol. 32.-P. 283-288.

37. Ferrandiz M.L., Nair A.G., Alcaraz M.J. Inhibition of sheep platelet ara-chjdonate metabolism by flavonoids from Spanish and Indian medicinal herbs // Pharmazie. 1990. - Vol. 45. - P. 206-208.

38. Fisher R.F., Long S.R. Rhizobium-plant signal exchange // Nature. -1992. -Vol. 357.-P. 655-660.

39. Formica J.V., Regelson W. Review of the biology of quercetin and related bioflavonoids // Food Chem. Toxicol. 1995. - Vol. 33. - P. 1061 -1080.

40. Fuleihan R., Spertini R., Geha R.S., Chatila T. Role of protein kinase activation in the induction of B cell adhesion by MHC class II ligands // J. Immunol.- 1992.-Vol. 149.-P. 1853-1858.

41. Funakoshi-Tago M., Tago K., Nishizawa C., et al. Licovhalcone A is a potent inhibitir of TEL-Jac2-mediated transformation through the specific inhibition of Stat3 activation // Biochem. Pharmacol. 2008. - Vol. 76(12).-P. 1681-1693.

42. Gamet-Payrastre L., Manenti S., Gratacap M.P., et al. Flavonoids and the inhibition of PKC and PI» 3-kinase // Gen. Pharmacol. 1999. - Vol. 32(3).-P. 279-286.

43. Gober M.D., Gaspari A.A. Allergic contact dermatitis // Curr. Dir. Autoimmun. 2008. - Vol. 10. - P. 1-26.

44. Gold M.R., Law D.A., DeFranco A.L. Stimulation of protein tyrosine phosphorylation by the B-lymphocyte antigen receptor // Nature (London). 1990. - Vol. 345. - P. 810-813.

45. Gorbachev A.V., Fairchild R.L. Regulatory role of CD4+ T cells during the development of contact hypersensitivity responses // Immunol. Res. — 2001. Vol. 24.-P. 69-77.

46. Grabbe S., Schwarz T. Immunoregulatory mechanisms involved in elicita-tion of allergic contact hypersensitivity // Immunol. Today. 1998. - Vol. 19.-P. 37-44.

47. Gschwendt M., Horn F., Kittstein W., Marks F. Inhibition of the calcium-and phospholipid-dependent protein kinase activity from mouse brain cy-tosol by quercetin // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983. - Vol. 117.-P. 444-447.

48. Harada T., Arii M., Tsuji R.F. et al. Soy isoflavone aglycone modulates expression of cell surface antigens in vitro and in vivo. Biosci. Biotech-nol. Biochem. 2007. - Vol. 71(7). - P. 1769-1772.

49. Henkels K.M., Frondorf K., Gonzalez-Mejia M.E., et al. IL-8-induced neutrophil chemotaxis is mediated by Janus kinase 3 (JAK3) // FEBS Lett.-2011.-Vol. 585(1).-P. 159-166.

50. Hirao K., Yumoto H., Nakanishi T. et al. Tea catechins reduce inflammatory reactions via mitogen-activated protein kinase pathways in toll-likeireceptor 2 ligand-stimulated dental pulp cells // Life Sci. 2010. — Vol. 86(17-18).-P. 654-660.

51. Hollman P.C., Katan M.B. Absorption, metabolism and health effects of dietary flavonoids in man // Biomed. Pharmother. 1997. - Vol. 51. — P. 305-310.

52. Homung R.L., Young H.A., Urba W.J., Wiltrout R.N. Immunomodulation of natural killer cell activity by flavone acetic acid: Occurrence via induction of interferon alpha/beta // J. Natl. Cancer Inst. 1988b. - Vol. 80. -P. 1226-1231.

53. Hu H, Liu S, Yang Y, et al. In Rhizobium leguminosarum NodD represses its own transcription by competing with RNA polymerase for binding sites //Nucleic Acids Res. 2000. - Vol. 28(14). - P. 2784-2793.

54. Iwamura C., Shinoda K., Yoshimura M, et al. Naringenin chalcone suppresses allergic asthma by inhibiting the type-2 function of CD4 T cells // Allergology international. 2010. - Vol. 59. - P. 67-73.

55. Jin S., Zhang Q.Y., Kang X.M., et al. Daidzein induces MCF-7 breast cancer cell apoptosis via the mitochondrial pathway // Ann Oncol. 2010. -Vol. 21(2).-P. 263-268.

56. Kanazawa M., Satomi Y., Mizutani Y., et al. Isoliquiritigenin inhibits thegrowth of prostate cancer // Eur. Urol. 2003. - Vol. 43(5). - P. 580-586.i

57. Kang H.K., Ecklung D., Liu M., Datta S.K. Apigenin, a non-mutagenic dietary flavonoid, suppresses lupus by inhibiting autoantigen presentationfor expansion of autoreactive Thl and Thl7 cells // Arthritis Res. Ther. -2009.-Vol. 11(2).-P. 59.

58. Kehren J., Desvignes C., Krasteva M., et al: Cytotoxicity is mandatory for CD8(+) T cell-mediated contact hypersensitivity // J. Exp. Med. 1999. -Vol.1 89,-№5.-P. 779-786.

59. Kim Y., Narayanan S., Chang K.O. Inhibition of influenza virus replication by plant-derived isoquercetin // Antiviral Res. 2010. - Vol. 88(2). -P. 227-235.

60. Kim Y.J., Ко H., Park J.S., et al. Dimethyl cardamonin inhibits lipopolysac-charide-induced inflammatory factors through blocking NF-kappaB p65* activation // Int. Immunopharmacol. 2010. - Vol. 10(9). - P. 1127-1134.

61. Koretzky G.A., Picus I., Thomas M.L., Weiss A. Tyrosine phosphatase CI}45 is essential for coupling T-cell antigen receptor to the phosphatidyl inositol pathway // Nature (London). 1990. - Vol. 346. - P. 63-66.

62. Kwon H.J., Kim H.H., Ryu Y.B., et al. In vitro anti-rotavirus activity of polyphenol compounds isolated from the roots of Glycyrrhiza uralensis // Bioorg. Med. Chem. 2010. - Vol. 18(21). -P. 7668-7674.

63. Lamoke F., Labazi M., Montemari A. Trans-Chalcone prevents VEGF expression and retinal neovascularization in the ischemic retina // Exp. Eye Res.-2011.

64. Landolfi R., Nower R.L., Steiner M. Modification of platelet function and arachidonic acid metabolism by bioflavonoids. Structure-activity relationships // Biochem. Pharmacol. 1984. - Vol. 33. - P. 1525-1530.i

65. Lang D.R., Racker E. Effects of quercetin on Fl inhibitor or mitochondrial ATPase and energy-linked reactions in submitochondrial particles // Bio-chim. Biophys. Acta. 1974. - Vol. 333. - P. 180-186.

66. Lang I., Deak G.Y., Nekam K., et al. Hepatoprotective and immunomodulatory effects of antioxidant therapy // Acta. Med. Hung. 1988. - Vol.45.-P. 287-295.i

67. Lanni C., Becker E.L. Inhibition of neutrophil phospholipase A2 by p-bromophenylacyl bromide, nordihydroguaiaretic acid, 5,8,11,14-eicosatetrayenoic acid and quercetin // Int. Arch. Allergy Appl. Immunol. 1985. - Vol. 76. - P. 214-217.

68. Ledbetter J.A., Schieven G.L., Uckun G.M., Imboden J.B. CD45 cross-linking regulates phospholipase C activation and tyrosine phosphorylation of specific substrates in CD3/Ti stimulated T cells // J. Immunol. 1991. -Vol. 146.-P. 1577-1583.

69. Lee J.K., Kim S.Y., Kim Y.S., et al. Suppression of the TRIF-dependent signaling pathway of Toll-like receptors by luteolin // Biochem. Pharmacol 2009. - Vol. 77(8). - P. 1391-1400.

70. Lee K.M., Lee K.W., Jung S.K. et al. Kaempferol inhibits UVB-induced CQX-2 expression by suppressing Src kinase activity // Biochem. Pharmacol. 2010. - Vol. 80(12). - P. 2042-2049.

71. Lee T-P., Matteliano M.L., Middleton E. Effect of quercetin on human polymorphonuclear leucocyte lysosomal enzyme release and phospholipids metabolism // Life Sei. 1982. - Vol. 31. - P. 2765-2774.

72. Li R.R., Pang L.L., Du Q., et al. Apigenin inhibits allergen-induced airway inflammation and switches immune response in a murine model of asthma // Immunopharmacol. Immunotoxicol. 2010. - Vol. 32(3). - P. 364-370.

73. Long G.D., DeChatelet L.R., O'Flaherty J.T., et al. Effects of quercetin on magnesium-dependent adenosine triphosphatase and the metabolism ofhuman polymorphonuckear leucocytes // Blood. 1981. - Vol. 57. - P.561.566.

74. Lu J., Wang J.S., Kong L.Y. Anti-inflammatory effects of Huang-Lian-Jie-Du decoction, its two fractions and four typical compounds // J. Eth-nopharmacol. 2011.

75. Maggiolini M., Statti G., Vivacqua A., et al. Estrogenic and antiproliferative activities of isoliquiritigenin in MCF7 breast cancer cells // J. Steroid Biochem. Mol. Biol. 2002. - Vol. 82 (4-5). - P. 315-322.

76. Manach C., Morand C., Demigne C., et al. Bioavailability of rutin and quercetin in rats // FEBS Lett. 1997. - Vol. 409. - P. 12-16.

77. McGeachy M.J., Bak-Jensen K.S., Chen Y., Tato C.M., et al. TGF-betatand IL-6 drive the production of IL-17 and IL-10 by T cells and restrain T(H)-17 cell-mediated pathology. Nat. Immunol. 2007. - Vol. 8(12). -P. 1390-1397.

78. Melgarejo E., Medina M.A., Sanchez-Jimenez F., Urdiales J.L. Epigallo-catechin gallat reduces human monocyte mobility and adhesion in vitro // Br. J. Pharmacol. 2009. - Vol. 158(7).-P. 1705-1712.

79. Milencovich M:, Arsenovic-Ranin N., Stojic-Vukanic Z., et al. Quercetinameliorates experimental autoimmune myocarditis in rats // J Pharmi

80. Pharmaceut Sei. 2010. - Vol. 13(3). - P. 311-319.

81. Morishima C., Shuhart M.C., Wang C.C. et al. Silymarin inhibits in vitro T-cell proliferation and cytokine production in hepatitis C virus infection // Gastroenterology. Vol. 138(2). - P. 671-681.

82. Namgoong S.Y., Son K.H., Chang H.W., et al. Effects of naturally occurring flavonoids on mitogen-induced lymphocyte proliferation and mixed lymphocyte culture // Life Sei. 1993. - Vol. 54. - P. 313-320.

83. Nishizuka Y. Protein kinase and lipid signaling for sustained cellular responses // FASEB J. 1995. - Vol. 9. - P. 484-496.

84. Notoya M, Tsukamoto Y, Nishimura H, et al. Quercetin, a flavonoid, inhibits the proliferation, differentiation, and mineralization of osteoblasts in vitro // Eur. J. Pharmacol. 2004. Vol. 485(1-3). - P. 89-96.

85. Nworu C.S., Esimone C.O., Tenbusch M., et al. Adjuvant properties of AcFl, an immunostimulant fraction of Alchornea cordifolia extract // Immunol. Invest. 2010. - Vol. 39(2). - P. 132-158.

86. Okamoto I, Iwaki K, Koya-Miyata S. The flavonoid Kaempferol suptpresses the graft-versus-host reaction by inhibiting type 1 cytokine production and CD8+ T cell engraftment // Clinical Immunol. 2002. -Vol. 103(2).-P. 132-144.

87. Ono K., Nakane H. Mechanisms of inhibition of various cellular DNA and RNA polymerases by several flavonoids // J. Biochem. 1990. - Vol. 108.-P. 609-613.

88. Park J.H., Lim H.J., Lee K.S., et al. Anti-proliferative effect of licochal-cone A on vascular smooth muscle cells // Biol. Pharm. Bull. 2008.

89. Vol. 31(11).-P. 1996-2000.

90. Park S.J., Youn H.S. Suppression of homodimerization of toll-like receptor 4 by isoliquiritigenin // Phytochemistry. 2010. - Vol. 71(14-15). - P. 1736-1740.

91. Patel M.D., Samelson L.E., Klausner R.D. Multiple kinases and signal transduction: Phosphorylation of the T cell antigen receptor complex // J. Biol. Chem.- 1987. -Vol. 262.-P. 5831-5838.

92. Paust S., Lu L., McCarty N., Cantor H. Engagement of B7 on effector T cells by regulatory T cells prevents autoimmune disease. // Proc. Nat. Acad. Sci.-2004.-Vol. 101.-№28.-P. 10398-10403.

93. Perret X., Staehelin C., Broughton W.J. Molecular basis of symbioticipromiscuity // Microbiol. Mol. Biol. Rev. 2000. - Vol. 64. - P. 180-201.

94. Polster J., Dithmar H., Walter F. Are histones the targets for flavan-3-ols (catechins) in nuclei? // Biol. Chem. 2003. - Vol. 384(7). - P. 997-1006.

95. Rao YK, Fang SH, Tzeng JM. Inhibitory effects of the flavonoids isolated from Waltheria indica on the production of NO, TNF-a and IL-12 in activated macrophages // Biol. Pharm. Bull. 2005. - Vol. 28(5). - P. 912-915.

96. Rogers J.C., Williams D.L. Kaempferol inhibits myosin light chain kinase //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1989. - Vol. 164. - P. 419-425.

97. Roy C.K., Das A.K. Comparative evaluation of different extracts of leaves of Psidium guajava Linn, for hepatoprotective activity // Pak. J. Pharm. Sci. 2010. - Vol. 23(1). - P. 15-20.

98. Ruckstuhl M., Landry Y. Inhibition of lung cyclic AMP- and cyclic GMP-phosphodiesterases by flavonoids and other chromone-like compounds // Biochem. Pharmacol. 1981. - Vol. 30. - P. 697-702.i

99. Sakagami H, Takeda M., Sugaya K., et al. Stimulation by epigallocate-chin gallate of interleukin-1 production by human peripheral blood mononuclear cells // Anticancer Res. 1995. - Vol. 15. - P. 971-974.

100. Sakai T., Furoku S., Nakamoto M., et al. The soy isoflavone equol enhances antigen-specific IgE production in ovalbumin-immunized BALB/c mice // J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2010. - Vol. 56. - P. 72-76.

101. Samelson L.E., Patel M.D., Weissman A.M., et al. Antigen activation of murine T cells Induces tyrosine phosphorylation of a polypeptide associated with the cell antigen receptor // Cell. 1986. - Vol. 46. - P. 1083-1090.

102. Saslowslcy D.E., Warek U., Winkel B.S. Nuclear localization of flavonoid enzymes in Arabidopsis // J. Biol. Chem. 2005. - Vol. 280(25) - P. 23735-23740.

103. Schlutze M., Kondorosi A. Regulation of symbiotic root nodule development // Ann. Rev. Genet. 1998. - Vol. 32. - P. 33-57.

104. Schroeter H., Boyd C., Spencer J.P., Williams R.J., et al. MAPK signaling in neurodegeneration: influences of flavonoids and of nitric oxide // Neurobiol. Aging.-2002.-Vol. 23(5).-P. 861-880.t

105. Singh R.P., Deep G., Chittezhath M., et al. Effect of silibinin on;the growth and progression of primary lung tumors in mice // J. Natl. Cancer Inst. 2006. - Vol. 98 (12). - P. 846-855.

106. Sookkongwaree K, Geitmann M, Roengsumran S, et al. Inhibition of viral proteases by Zingiberaceae extracts and flavones isolated from Kaempfe-ria parviflora // Pharmazie. 2006. - Vol. 61(8). - P. 717-721.

107. Tamir S., Eizenberg M., Somjen D., et al. Estrogenic and antiproliferative properties of glabridin from licorice in human breast cancer cells // Cancer Res. 2000. - Vol. 60(20). - P. 5704-5709.

108. Taylor A., Verhagen J., Blaser K., et al. Mechanisms of immune suppression by interleukin-10 and transforming growth factor-(3: the role of T regulatory cells // Immunology. 2006. - Vol. 117. - №4. - P. 443-442.

109. Trevillyan J.M., Lu Y., Atluru D., et al. Differential inhibition of T cell receptor signal transduction and early activation events by a selective inhibitor of protein-tyrosine kinase // J. Immunol. 1990. - Vol. 145. - P. 3223-3230.

110. Tripathi Y.B., Pandey N., Tripathi D., Tripathi P. Oily fraction of Seme-carpus anacardium Linn nuts involves protein kinase C activation for its pro-inflammatory response // Indian J. Exp. Biol. 2010. - Vol. 48(12). -P. 1204-1209.

111. Vcrmerris W., Nicholson R. Isolation and identification of phenolic compounds. In: Phenolic Compound Biochemistry. Springer, the Netherlands. -2006.-P. 152-153.

112. Vicentini F.T., He T., Shao Y., et al. Quercetin inhibits UV irradiation-induced inflammatory cytokine production in primary human keratino-cytes by supressing NF-kB pathway // J. Dermatol. Sci. 2011. - Vol. 61(3).-P. 162-168.

113. Vocanson M, Hennino A., Rozieres A., et al. Effector and regulatory mechanisms in allergic contact dermatitis // Allergy. 2009. -Vol. 64.t12.-P. 1699-1714.

114. Waldmann T.A. Immunotherapy: past, present and future // Nat. Med. -2003. Vol. 9(3). - P. 269-277.

115. Wang J., Zhang Q., Jin S., et al. Genistein modulates immune responses in collagen-induced rheumatoid arthritis model // Maturitas. 2008. -Vol. 59(4).-P. 405-412.

116. Wang J.F., Yin G.F., Zhou X.J., et al. Anti-inflammatory flavonolignans from Hydrocarpus anthelminthica seeds // J. Asian Nat. Prod. Res. -2011.-Vol. 13(1).-P. 80-83.

117. Wang Y., Raffoul J.J., Che M., et al. Prostate cancer treatment is enihanced by genistein in vitro and in vivo in a syngeneic orthotopic tumor model // Radiat. Res. 2006. - Vol. 89(9). - P. 950-954.

118. Watanabe H., Unger M., Tuvel B. et al. Contact hypersensitivity: The mechanism of immune responses and T cell balance // J. Interferon Cytokine Res. 2002. - Vol. 22. - P. 407-412.

119. Wu J-H, Wang Y-R, Huang W-Y, Tan R-X. Anti-priliferative and pro-apoptotic effects of tectorigenin on hepatic stellate cells // World J. Gastroenterol. 2010. - Vol. 16(31). - P. 3911-3918.

120. Xavier C.R., Silva A.C., Schwingel L.C. Improvement of genistein content in solid genistein/ß-cyclodextrin complexes // Quirn. Nova. 2010. — Vol. 33(3). -P. 587-590.

121. Xie Y.C., Dong X.W., Wu X.M., et al. Inhibitory effects of flavonoids extracted from licorice on lipopolysaccharide-induced acute pulmonary inflammation in mice // Int. Immunopharmacol. 2009. — Vol. 9(2). - P. 194-200.

122. Xue X., Qu X.J., Yang Y., et al. Baicalin attenuates focal cerebral ischemic reperfusion injury through inhibition of nuclear factor kB p65 activation // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2010. - Vol. 403(3-4). - P. 398-404.

123. Yamanashi Y., Kakiuchi T., Milizuguchi J., et al. Association of B cell antigen receptor with protein tyrosine kinase // Lyn. -Science (Wash.

124. DC).- 1991.-Vol. 251.-P. 192-194.i

125. Yang F., Villiers W.J., McClain C.J., Varilek G.W. Green tea polyphenols block endotoxin-induced tumor necrosis factor production and lethality in a murine model // J. Nutri. - 1998. - Vol. 128. - P. 2334-2340.

126. Yang X., Zhao X., Phelps M.A. et al. A novel liposomal formulation of flavopiridol // Int. J. Pharm. 2009. - Vol. 365(1-2). - P. 170-174.

127. Yook H.S., Kim K.H., Park J.E., Shin H.J. Antioxidative and antiviral properties of flowering cherry fruit (Prunus serrulata L. var. spontanea) // Am J. Clin. Med. 2010. - Vol. 38(5). - P. 937-948.

128. Yu C.S., Lai K.C., Yang J.S. Quercetin inhibited murine leukemia WEHI-3 cells in vivo and promoted immune response // Phytother. Res. 2010. -Vol. 24(2).-P. 163-168.

129. Zen K., Reaves T.A., Soto I., Liu Y. Response to genistein: assaying the activation status and Chemotaxis efficacy of isolated neutrophils // J. Immunol. Methods. 2006. - Vol. 309(1-2). - P. 86-98.

130. Zeng S., Luo G.Q., Liu D.Y. The Chemotaxis effect of ampelopsin on the immunocytes // Zhong Yao Cai. 2006. - Vol. 29(3). - P. 260-262.

131. Zhou P., Gross S., Liu J.PI., et al. Flavokawain B, the hepatotoxic constituent from kava root, induces GSH-sensitive oxidative stress through modulation of IKK/NF-kappaB and MAPK signaling pathways // FASEB

132. J. 2010. - Vol. 24(12). - P. 4722-4732.i

133. Zunino S.J., Storms D.H. Resveratrol alters proliferative responses and apoptosis in human activated B lymphocytes in vitro // J. Nutr. 2009.1. Vol. 139.-P. 1603-1608.