Влияние супериндуктора цитохрома Р4501А1,2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Сибиряк, Дарья Сергеевна

• Сибиряк, Дарья Сергеевна
• кандидат медицинских наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Сибиряк, Дарья Сергеевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ИММУНОТОКСИЧНОСТЬ

2,3,7,8-ТЕТРАХЛ0РДИБЕН30-р-ДИ0КСИНА (ТХДД)

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1 Характеристика объектов исследования.

2.2 Процедура взятия крови, выделение моноонуклеаров периферической крови и получение суспензий лимфоидных органов.

2.3 Культивирование мононуклеаров и оценка их пролиферативной активности и структуры клеточного цикла.

2.4 Оценка апоптоза лимфоцитов.

2.4.1. Морфологический метод оценки апоптоза.

2.4.2. Идентификация клеток с разрывами ДНК (TUNEL-метод).

2.4.3. Оценка активности инициирующих и эффекторных каспаз (Css) .38 2.4.5. Оценка апоптоза методом метахроматического окрашивания акридиновым оранжевым.

2.5 Оценка экспрессии поверхностных антигенов.

2.6. Оценка содержания клеток, экспрессирующих белки-регуляторы апоптоза и интенсивности экспрессии этих белков.

2.7. Определение ЭРОД активности.

2.8 Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на лимфоциты периферической крови здоровых доноров в системе in vitro.

3.1.1. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность, апоптоз, экспрессию Fas-рецептора (CD95) и экспрессию CYP1A1-зависимой ЭРОД активности в культурах лимфоцитов стимулированных смесью митогенов.

3.1.2. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность, апоптоз и экспрессию CYP1A1 активности в культурах стимулированных анти-СОЗ МКА лимфоцитов периферической крови здоровых доноров.

3.1.3. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на экспрессию ассоциированных с апоптозом рецепторов и белков-регуляторов апоптоза в культурах стимулированных антиСЭЗ МКА лимфоцитов периферической крови здоровых доноров.

3.1.4. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на чувствительность стимулированных антиСЭЗ МКА Т лимфоцитов периферической крови здоровых доноров к Fas-индуцированному апоптозу.

3.2. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз в лимфоидных органах крыс.

3.2.1. Влияние ТХДД на структуру клеточного цикла и апоптоз тимоцитов, клеток костного мозга, спленоцитов, лимфоцитов периферической крови и лимфоузлов.

3.2.2. Влияние ТХДД на СопА-индуцированную пролиферацию лимфоцитов в условиях "лимфоузловой" модели.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние супериндуктора цитохрома Р4501А1,2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов»

Актуальность работы

Загрязнение окружающей среды ксенобиотиками является глобальной экологической проблемой, которая стоит в центре внимания исследователей во всех странах мира. Среди техногенных поллютантов наиболее серьезную опасность представляют полихлорированные дибензодиоксины и дибензофураны, объединяемые под названием диоксиноподобные суперэкотоксиканты [Федоров 1993]. Основным и наиболее токсичным представителем этого класса веществ является 2,3,7,8-тетрахлордибензо-/?-диоксин (ТХДД), причем опасность этого соединения зависит не только от его острой токсичности, но и от крайне высокой способности к биоконцентрированию в живых системах, чрезвычайно длительному выведению из организма [Birnbaum et al., 2003]. Источниками ТХДД являются предприятия по переработке отходов, производство хлорорганических гербицидов и другая индустрия, где происходит хлорирование химических соединений, а поступление его в организм осуществляется по т.н. "пищевым путям" [Амирова, Круглов, 1998; Roeder et al., 1998]. Токсическое действие ТХДД на организм млекопитающих включает гепатотоксичность, генотоксичность и канцерогенность, иммунотоксичность, нарушения метаболизма стероидных гормонов, репродуктивной функции и пр. [DeVito, Birnbaum, 1995; Nilsson, Hakansson, 2002; Cole et al., 2003; Dioxines and Health, 2003; Birnbaum, 2000; Birnbaum et al., 2003; Matsumura, 2003]. Иммунная система традиционно считается основной мишенью токсического действия ТХДД. Результаты многочисленных экспериментальных исследований и ряда клинических наблюдений, убедительно аргументируют способность ТХДД вмешиваться в процессы созревания и дифференцировки иммунокомпетентных клеток, реализацию их эффекторных функций, и, как следствие, нарушать антиинфекционную, противовирусную и противоопухолевую резистентность, индуцировать развитие аутоиммунных заболеваний [Pokrovsky et al., 1991; Vinies, 1996; Holladay, 1999; Amirova et al., 1999; Warren et al., 2000; Kerkvliet, 2002; Mimura, Fujii-Kuriyama, 2003].

Считается, что практически все проявления токсического эффекта ТХДД обусловлены его способностью высокоселективно связываться с "химическим сенсором" - арилуглеводородным рецептором (Ah-рецептором), лиганд-активируемым транскрипционным фактором, который относится к суперсемейству ядерных рецепторов и вызывать мощную индукцию изоформ цитохрома Р450 СYP1А1 hCYPIBI [Okeyetal., 1994; Nebert et al., 2004]. В свою очередь, Ah-рецептор-зависимые сигнальные системы тесно сопряжены с регуляцией клеточного цикла, синтезом цитокинов и факторов роста, а индуцируемые ТХДД изоформы цитохрома Р450 CYP1A1 и CYP1B1 участвуют в биотрансформации множества биологически активных молекул, включая стероидные гормоны, ретиноиды, эйкозаноиды и пр. [Сибиряк и соавт., 2003; Hines et al., 2001; Nebert et al., 2001, 2004].

Несмотря на то, что внутриклеточная "мишень" воздействия ТХДД твердо установлена, механизмы развития иммунотоксичности и последствия воздействия высоких доз этого экотоксиканта на иммунную систему человека окончательно не ясны, и в работах, посвященных этой проблеме, представлены весьма противоречивые результаты [Игнатьева, 1997; Курчатова, 1999; Lu, Wu, 1985; Roumak et al., 1992, 1995; Neubert et al., 1991- 2000; Lang et al., 1996; Sibiryak et al., 1998; Belles-Isles et al., 2000]. Существенно, что при изучении влияния ТХДД на лимфоидные клетки в системах in vitro, как правило, используются лимфобластоидные линии клеток, которые отличаются по реактивности и чувствительности к ксенобиотику от лимфоцитов доноров.

Программированная клеточная смерть путем апоптоза рассматривается, в настоящее время, как основной механизм поддержания иммунного гомеостаза, играющих ключевую роль в регуляции численности иммунокомпетентных клеток, их созревания и дифференцировки Т и В клеток, обеспечения адекватной силы и продолжительности иммунного ответа, сохранения аутотолерантности [Ярилин, 1999; Барышников, Шишкин, 2002; Krammer, 2000]. Нарушения апоптоза приводят к развитию иммунопатологии (апоптотического иммунодефицита) [Чередеев, Ковальчук, 1997; Ковальчук, Чередеев, 1999; Cheredeev, Kovalchuk, 1997]. Нарушения механизмов программированной клеточной смерти иммунокомпетентных клеток нередко лежат в основе иммунотоксичности ксенобиотиков [Имельбаева и соавт., 2000; Сибиряк, 2003; Сибиряк и соавт.; 2003]. На сегодняшний день результаты исследований, посвященных влиянию ТХДД на апоптоз лимфоидных и нелимфоидных клеток неоднозначны и нередко диаметрально противоположны - есть сведения об "апоптогенном" действии ТХДД [Kamath et al., 1997; Hossain et al., 1998], о его способности ингибировать программированную клеточную смерть, или отсутствии влияния на этот процесс [Silverstone et al., 2000]. Выяснение характера влияния этого соединения на пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов представляется весьма важным не только для понимания механизмов иммунотоксичности экотоксикантов-индукторов цитохрома Р450, но и роли Ah-рецептор-зависимых сигнальных систем в регуляции реактивности иммунокомпетентных клеток.

Цель исследования:

Оценить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз лимфоцитов периферической крови человека в системе in vitro во взаимосвязи с его специфическим эффектом, и на процессы позитивной и негативной активации клеток в лимфоидных органах экспериментальных животных

Задачи исследования:

1. Изучить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на монооксигеназную активность цитохромаР4501 А1, пролиферативную активность, апоптоз лимфоцитов периферической крови человека при их стимуляции неспецифическими митогенами.

2. Изучить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на монооксигеназную активность цитохрома Р4501А1, пролиферативную активность и апоптоз Т лимфоцитов периферической крови человека при их физиологической стимуляции через Т- клеточный рецептор

3. Изучить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на активационно-индуцированную экспрессию Fas-рецептора и экспрессию белков-регуляторов апоптоза

4. Изучить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на чувствительность Т лимфоцитов периферической крови человека к рецепторно-индуцированному и нерецепторному апоптозу

5. Изучить влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз в лимфоидных органах у крыс

Научная новизна:

Установлено, что ТХДД вызывает индукцию CYP1 А1-зависимой монооксигеназной активности, ингибирует пролиферативную активность и активационный апоптоз лимфоцитов периферической крови человека, стимулированных смесыо мито генов, увеличивает активационно-индуцированную экспрессию Fas-рецептора, причем характер влияния ТХДД на митогенез и апоптоз не зависит от уровня контаминации донора ксенотоксикантом.

Впервые установлено, что ТХДД вызывает индукцию СYP1A1-зависимой монооксигеназной активности, усиливает экспрессию белка CYP1А1, ингибирует пролиферативную активность и активационный апоптоз Т лимфоцитов периферической крови человека стимулированных антиСОЗ МКА, не изменяет активационно-индуцированную экспрессию CD25 и CD95 на CD4+ и CD8+ лимфоцитах, вызывает гипоэкспресию bcl-2 в активированных лимфоцитах. Влияния ТХДД на митогенез лимфоцитов связано не только с индукцией CYP1А1, но и с прямым влиянием на ферментативную активность эффекторных каспаз.

Впервые обнаружено, что ТХД Д повышает чувствительность активированных через Т-клеточный рецептор лимфоцитов периферической крови человека к рецепторному (Fas-индуцированному) апоптозу, но снижает их чувствительность к апоптозу, индуцированному нерецепторным сигналом (камптотецином).

Установлено, что ТХДД, при введении в дозе, обеспечивающей основной токсикологический эффект (индукцию CYP1A1), воздействует на органы иммунной системы, характеризующиеся высоким "митотическим" потенциалом (тимус, костный мозг), где проявляет отчетливое антипролиферативное, а в тимусе и апоптогенное действие. В селезенке, лимфатических узлах и периферической крови антипролиферативный эффект отсутствует, однако он проявляется при индукции митогенеза клеток, что сопровождается и параллельным снижением интенсивности активационного апоптоза.

Научно-практическая значимость работы:

Полученные данные способствуют расширению знаний о механизмах иммунотоксического действия ксенобиотиков-индукторов цитохрома Р4501А1, а также механизмах участия Ah-рецептор-зависимых сигнальных систем в регуляции пролиферативной активности и апоптоза иммунокомпетентных клеток.

Внедрение результатов исследования:

Материалы диссертационной работы внедрены в учебный процесс при чтении лекций и проведении практических занятий на кафедре иммунологии ЧелГМА.

Предлагаемые автором методические подходы к оценке пролиферативной активности и апоптоза используются в научной работе отдела иммунологии ГУЗ "Всероссийский центр глазной и пластической хирургии" МЗ РФ.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин нарушает нормальную реактивность лимфоцитов периферической крови человека при их стимуляции лектинами и через Т клеточный рецептор, что выражается в антипролиферативном эффекте, угнетении индуцированного активацией апоптоза и сопровождается относительной гиперэкспрессией Fas рецептора, гипоэкспресией bcl-2, гиперэкспрессией р53. Эти нарушения связаны как с внутриклеточной индукцией цитохрома Р450 CYP1А1, так и с непосредственным влиянием на ферментативную активность эффекторных каспаз.

2. 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин повышает чувствительность активированных Т лимфоцитов периферической крови человека к рецепторно-индуцированному (Fas-индуцированному) апоптозу, но снижает чувствительность к апоптозу, индуцированному нерецепторным сигналом (подавлением активности топоизомеразы I). Повышение чувствительности активированных клеток к рецепторному апоптозу может лежать в основе вызываемого ТХДД иммунодефицита.

3. 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин, при введении крысам в дозе, обеспечивающей индукцию CYP1A1 печени, проявляет антипролиферативное и апоптогенное действие на тимус, антипролиферативное воздействие на костный мозг, а в периферических лимфоидных органах антипролиферативный эффект проявляется лишь при индукции митогенеза клеток.

Апробация работы:

Результаты диссертационной работы доложены на Международном Конгрессе

DIOXIN'2000" (Монтеррей, США, 2000), XI-м Международном Конгрессе иммунологов (Стокгольм, Швеция, 2001), 1-м Съезде иммунологов Урала (Екатеринбург, 1999 г.), 3-м съезде иммунологов Урала (Челябинск, 2003 г.), V Всероссийском Форуме "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге (С.-Пб. 2002 г.), Объединенном иммунологическом Форуме (Екатеринбург, 2004), 19-м Европейском рабочем Совещании по метаболизму лекарств (DMW-2004, Анталья, Турция, 2004).

Публикации:

По материалам диссертационной работы опубликовано 12 работ в центральной печати, из них тезисов докладов на конференциях - 9, статей - 3.

Объем и структура диссертации:

Диссертация изложена на 138 страницах, иллюстрирована 10 таблицами и 27 рисунками. Она состоит из введения, обзора литературы, раздела, отражающего результаты собственных исследований и их обсуждения, заключения и выводов. Список литературы включает 222 источника (17 отечественных и 205 зарубежных).

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Сибиряк, Дарья Сергеевна

выводы

1. Супериндуктор цитохрома Р4501А1 2,3,7,8 - тетрахлордибензо-р-диоксин изменяет нормальную реактивность лимфоцитов, нарушая процессы позитивной и негативной активации, что может лежать в основе вызываемой этим поллютантом иммунологической недостаточности.

2. В культуре мононуклеаров периферической крови человека 2,3,7,8 -тетрахлордибензо-р-диоксин (ТХДД) вызывает индукцию CYP1A1-зависимой этоксирезоруфин-О-деэтилазной активности в лимфоцитах, подавляет индуцированную смесью митогенов (ФГА + MJI) пролиферацию лимфоцитов, снижает интенсивность активационного апоптоза, но не влияет на активационно-индуцированную экспрессию Fas-рецептора. Эффект ТХДД не зависит от уровня контаминации донора экотоксикантом.

3. В культуре мононуклеаров периферической крови человека стимулированных антиСЭЗ моноклональными антителами 2,3,7,8 -тетрахлордибензо-р-диоксин вызывает индукцию этоксирезоруфин-О-деэтилазной активности и экспрессии белка CYP1A1 в лимфоцитах, подавляет пролиферативный ответ Т лимфоцитов на этапе перехода клеток из пресинтетической фазы в G1 фазу клеточного цикла, ингибирует активационный апоптоз. Эти эффекты связаны как с индукцией цитохрома Р450, так и с прямым влиянием на процессинг активационного сигнала (активность Cs3).

4. 2,3,7,8 - тетрахлордибензо-р-диоксин не угнетает активационно-индуцированную экспрессию Fas-рецептора и рецептора к IL-2 на CD4+ и CD8+ Т лимфоцитах (вызывает относительную гиперэкспрессию активационных антигенов).

5. 2,3,7,8 - тетрахлордибензо-р-диоксин снижает экспрессию белка bcl-2 в лимфоцитах и содержание bcl-2+ Т лимфоцитов при их активации, но, несмотря на угнетение апоптоза, вызывает увеличение экспрессии белка р53.

6. 2,3,7,8 - тетрахлордибензо-р-диоксин повышает чувствительность активированных Т лимфоцитов периферической крови к рецепторному (Fas-индуцированному) апоптозу, но снижает чувствительность клеток к апоптогенному действию ингибитора топоизомеразы I камптотецина.

7. У экспериментальных животных 2,3,7,8 - тетрахлордибензо-р-диоксин преимущественно воздействует на лимфоидные органы с высоким митотическим потенциалом, проявляя антипролиферативное и апоптогенное действие (тимус) или антипролиферативное действие (костный мозг). Иммунотоксический эффект ТХДД в периферических лимфоидных органах проявляется при активации клеток.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди созданных человеком техногенных поллютантов, полихлорированные дибензодиоксины и дибензофураны и, в первую, очередь, тетрахлордибензо-р-диоксин считаются наиболее опасными [Федоров, 1993; Galio et al., 1991; Birnbaum et al., 2004]. ТХДД и родственные ему соединения являются высокоселективными лигандами арилуглеводородного (Ah) рецептора - лиганд-активируемого транскрипционного фактора, относящегося к суперсемейству ядерных orphan-рецепторов [Giguere, 1999]. Взаимодействие комплекса Ah-рецептор-лиганд с соответствующим отвечающим мотивом ДНК приводит к активации транскрипции ряда генов, в первую очередь генов изоформ цитохрома Р450- CYP1A1, CYP1А2, СYP1В1. Последствия этой индукции - изменение биотрансформации эндогенных липофильных биорегуляторных молекул, изменения редокс-статуса клеток, изменению активности внутриклеточных сигнальных систем, и транскрипционных факторов [Nebert et al., 2001]. Обнаружено, что AhR может образовывать гетеродимеры с другими регуляторными белками [Ge, Elferink, 1998; Tian et al., 1999]. Именно благодаря вмешательству в интимные механизмы поддержания внутри- и внеклеточного гомеостаза, ТХДД обладает столь широким спектром токсических эффектов - иммунотоксичностью, гепатотоксичностыо, дерматотоксичностью, канцерогенностью, токсическим влиянием на эндокринную систему и пр. Важно, что ТХДД, единожды попав в организм, затем длительно воздействует на биологический объект — период полувыведения это соединения, в зависимости от вида, колеблется от 10 до 20 лет.

Иммунная система (особенно развивающихся организмов) крайне чувствительна к ТХДД. Традиционно считается, что ТХДД вызывает иммуносупрессию. При введении экспериментальным животным ТХДД угнетает гуморальный и клеточный иммунные ответы, антибактериальную и противовирусную резистентность, а у людей, подвергшихся воздействию ТХДД, по данным ряда авторов, снижается антиинфекционная и противоопухолевая резистентность, развиваются аутоиммунные процессы, т.е. формируется вторичная иммунологическая недостаточность [Сибиряк и соавт., 2003]. Несмотря на многочисленные экспериментальные исследования, проводимые в когортах лиц, подвергшихся воздействию высоких концентраций ТХДД, механизмы воздействия ТХДД на иммунную систему остаются малопонятными. Это касается, в частности, влияния ТХДД на ключевые процессы, определяющие реактивность иммунокомпетентных клеток, - их позитивную и негативную активацию, т.е. пролиферацию и апоптоз. Баланс между этими процессами - ключевой принцип функционирования иммунной системы, - созревания и дифференцировки иммунокомпетентных клеток, регуляции силы и продолжительности иммунного ответа, поддержания аутотолерантности [Ярилин, 1996; Чередеев, Ковальчук, 1997; Krammer, 2000].

В отношении антипролиферативного эффекта ТХДД у исследователей сложилось достаточно единодушное мнение. Напротив, о характере влияния этого соединения на апоптоз клеток существуют полярные точки зрения, - ряд авторов описывает апоптогенный эффект ТХДД, другие - антиапоптогенный. Это связано, в частности, с использованием различных экспериментальных моделей, а характер влияния ТХДД на различные клетки может быть неодинаков. Так, описано, что ТХДД вызывает апоптоз клеток лимфобластоидных линий. Характер влияния ТХДД на лимфоциты периферической крови в условиях их физиологической стимуляции остается неизвестен. Сложность интерпретации результатов заключается еще и в том, что одни и те же рецепторы и сигнальные системы ответственны и за проведение апоптогенного стимула, и за проведение сигнала к митогенезу.

В первой серии экспериментов была использована традиционная модельная система, которая используется для оценки митогенеза и ииндуцибельности CYP1А1 в лимфоцитах-стимуляция клеток смесью митогенов (ФГА + MJT). ТХДЦ во всех экспериментах использовали в конечной концентрации 10 пМ, которая стандартно применяется в экспериментах in vitro и не оказывает прямого токсического действия на клетки. Обнаруженный в эксперименте характер реагирования лимфоцитов периферической крови здоровых доноров не отличался от результатов, описываемых другими исследователями - экспрессия CYP1A1-зависимой ЭРОД активности в покоящихся клетках была низкой, но нарастала при митогенезе клеток. При стимуляции митогенами нарастала активационно-индуцированная экспрессия Fas-рецептора и интенсивность активационного апоптоза. ТХДД мало влиял на покоящиеся клетки, но вызвал мощную индукцию CYP1A1, угнетал митогенез и активационный апоптоз, но активационно-индуцированная экспрессия Fas-рецептора оставалась неизменной. Причем характер изменения показателей митогенеза, ииндуцибельности CYP1A1 не зависел от уровня фоновой контаминации организма ТХДД, которую оценивали с помощью высокоэффективной хромато-масс спектрометрии.

Аналогичные результаты были получены и при анализе влияния ТХДД на митогенез периферических Т лимфоцитов при их физиологической активации через TCR с помощью анти CD3 МКА. Как и в первой серии экспериментов, ТХДД вызывал массивную индукцию CYP1А1, тестируемую по специфической ЭРОД активности, что сопровождалось резким увеличением содержания белка CYP1A1 в лимфоцитах. ТХДД мало изменял функциональное состояние нестимулированных лимфоцитов, снижая жизнеспособность клеток в культуре, и одновременно вызывая тенденцию к усилению их пролиферативной активности и, соответственно, активационного апоптоза. Этот эффект был нестабилен, воспроизводим не у всех доноров и ни один из использованных методических подходов не позволил получить статистически значимых различий.

Напротив, в культурах стимулированных антиСЭЗ МКА Т лимфоцитов, ТХДД проявлял отчетливое антипролиферативное действие, что было установлено как при использовании традиционного радиометрического метода, так и при анализе клеточного цикла с помощью проточной цитофлюорометрии. В клетках, подвергнутых воздействию диоксина нарастало содержание GO клеток и значимо снижалось содержание клеток, находящихся в G1 фазе клеточного цикла и митотически активных клеток. Это свидетельсвовало о том, что ТХДД действует уже на этапе перехода из пресинтетической фазы цикла. Наряду с ингибицией митогенеза, ТХДД вызывал угнетение интенсивности апоптоза, причем статистически достоверные различия были получены при оценке апоптоза методами, идентифицирующими апоптоз на этапе реализации эффекторных механизмов (интернуклеосомная деградация ДНК, выявляемая TUNEL-методом, метахроматическое окрашивание акридиновым оранжевым). При оценке терминальных фаз апоптоза (морфологическая оценка при окрашивании Hoechst 33342 и цитофлюорометрия окрашенных йодистым пропидием клеток) достоверных отличий получено не было. Одной из причин этого может быть то, что в использованной культуре мононуклеаров присутствуют фагоцитирующие клетки, поглощающие образующиеся апоптосомы. Кроме того, при окрашивании клеток йодистым пропидием, в анализируемый регион неизбежно попадают некротические клетки, число которых в присутствии ТХДД (судя по окрашиванию трипановым синим) статистически значимо нарастает. Последний факт не противоречив. Дисбаланс или арест клеточного цикла приводит к значительным нарушениям морфологии и биохимизма клеток, нарушению проницаемости клеточной мембран, вторичному некрозу или гибели, характер которой сложно идентифицируется [Shinohara, Nakano, 1993; Catchpoole, Stewart, 1993; Ueda et al., 1995; Vermes et al., 1997]. Кроме того, в литературе описана интернуклеосомная деградация клеток без последующей фрагментации ДНК и других признаков апоптоза [Schwart L. et al., 1993; Ueda et al., 1995; Zamai et al., 1996].

Анализ механизмов реализации апоптоза - внутриклеточной активности инициирующих и эффекторных Css показал, что митогенез лимфоцитов закономерно сопровождается повышением активности инициирующей Cs 8 и суммарной активности эффекторных Css 3, 7, 10, но не инициирующей Cs 9. Повышение активности Cs8 и Css 3,7,10 в митотически активных клетках связано не только с процессами апоптоза (судя по спектру активации Css - рецепторного). Наблюдения последних лет, свидетельствуют, что процессинг Cs3 необходим для митогенеза клетки, а блокада Cs3 ингибитором Z-VAD приводит к ингибированию митогенеза [Newton, Strasser, 2003].

ТХДД существенно снижал степень активации Cs8 и Cs3 в митотически активных лимфоцитах. Добавление в культуру антагониста Ah-рецептора ?-нафтофлавона резко угнетало диоксиновую индукцию CYP1A1, полностью восстанавливало митогенез, но активность Cs3 восстанавливалась не полностью. Это закономерно, поскольку в следующем опыте был получен неожиданный факт, - прямое ингибиторное влияние ТХДД на активность Cs3. Судя по полученным данным, угнетение апоптоза, наблюдаемое в культурах, содержащих ТХДД, связано с антипролиферативным эффектом ксенотоксиканта, который, в свою очередь, связан как с внутриклеточной "сверхиндукцией CYP1A1", так и с нарушением "митотической" функции каскада Css. Для активационного апоптоза при лигировании TCR, как и при воздействии любого митогена, необходим не только "первичный сигнал", но и сопряженная активация митоген-активируемых киназ и циклин-зависимых киназ. обеспечивающих полноценную параллельную реализацию не только митогенеза, но и программы апоптоза [Costas et al., 1996; Cottrez et al., 1997; Harvey et al., 1998; Yahata et al., 1999; Zhu et al., 1999]. Ko-инкубация активированных митогенами клеток с агентами, нарушающими нормальное прохождение клеточного цикла, приводит не только к увеличению содержания некротических клеток, но снижению интенсивности апоптотической гибели [Fenech et al., 2000], что и наблюдалось в наших экспериментах. Существенно, что при анализе клеточного цикла было выявлена преимущественная ингибиция диоксином апоптоза в GO > G1 фазе, т.е. в момент "выбора клеткой" программы активации. Все это свидетельствует о глубоком нарушении процессов, лежащих в основе нормального реагирования лимфоцита на активирующий стимул, что необходимо для адекватной реактивности специфических механизмов иммунорезистентности.

Как и в случае стимуляции лимфоцитов смесью митогенов, ТХДД не только не вызывал угнетения активационно-индуцированной экспрессии Fas-рецептора на активированных антиСОЗ МКА Т клетках, но более того, прослеживалась тенденция к ее усилению. Это было характерно и для популяции CD4+ Т хелперов, и для CD8+ цитотоксических Т лимфоцитов. В равной мере это касалось и экспрессии другого активационного антигена - рецептора к IL2. Таким образом, можно полагать, что ТХДД, несмотря на угнетение митогенеза, вызывал неадекватно высокую экспрессию активационных антигенов на мембране лимфоцитов. Этот факт хорошо согласуется с "активированным типом" иммунного статуса у лиц, характеризующихся высоким уровнем контаминации ТХДД [Курчатова, 1996], а также с результатами, полученными при иммунотропных эффектов другого индуктора цитохрома Р450 - бенз[а]пирена [Mudzinski, 1993]. Анализируя влияние ТХДД на экспрессию основных белков регуляторов апоптоза было обнаружено, что ТХДД вызывает гипоэкспрессию антиапоптогенного белка bcl-2 и снижает содержание лимфоцитов, экспрессирующих этот белок, причем этот эффект устраняется а-нафтофлавоном. Это неудивительно, поскольку bcl-2 и цитохром Р450 играют оппозитную роль в регуляции оксидантного статуса клетки [Dmitriev, 2000; Hildeman et al., 2003]. В то же время, несмотря на ингибицию апоптоза, ТХДД вызывал гиперэкспрессию р53. Этот факт не противоречив, так как р53 не обязательно индуцирует апоптоз, но способен блокировать циклин-зависимые киназы и вызывать лишь арест клеточного цикла [Agarwal et al., 1998].

Наиболее существенным представляется то, что вызываемые ТХДД нарушения пролиферативного ответа лимфоцитов, экспрессии рецепторного аппарата и белков регуляторов апоптоза приводят к изменению ответа клетки на апоптогенный сигнал. ТХДД резко усиливал апоптоз активированных Т лимфоцитов, индуцированный полуагонистическими aimiFas МКА, т.е. апоптоз инициируемый физиологическим сигналом через Fas-рецептор. Этот эффект был связан с индукцией CYP1A1, поскольку ингибировался а-нафтофлавоном. По нашему мнению, существенное значение в повышении чувствительности к рецепторному апоптозу имеет гипоэкспрессия bcl-2. Напротив, при индукции нерецепторного апоптоза ингибитором топоизомеразы I кампотецином, ТХДД ингибировал апоптоз. Это связано с антипролиферативный эффектом ТХДД -вещества, блокирующие митотический цикл при переходе из G0 в G1 фазу и ингибиторы циклин-зависимых киназ снижают чувствительность клеток к ингибиторам топоизомеразы [Park et al., 1997] .

Полученные результаты весьма важны для интерпретации механизмов развития вторичной иммунологической недостаточности, вызываемой ТХДД. Гиперреактивность рецепторных механизмов апоптоза, а следовательно и активационно-индуцированной клеточной смерти которая реализуется по Fasзависимому механизму [Sharma et al., 1999], может приводить к угнетению клональной экспансии Т лимфоцитов и усилению их делеции в ответ на антигенный стимул и формированию иммунологической недостаточности. Полученные нами в модельной системе активированных Т лимфоцитов результаты хорошо согласуются с данными других исследователей - иммуносупрессивный эффект ТХДД не идентифицировался у мышей, дефектных по системе Fas/FasL [Camacho et al., 2001; Dearstyne, Kerkliet, 2002].

Отечественный иммунофармаколог И.Е. Ковалев предположил, что иммунная система и ферментная система биотрансформации ксенобиотиков тесно взаимосвязаны, и образуют единую систему иммуно-химического гомеостаза организма [Ковалев и соавт.,1994]., В самом деле, цитохром Р450 является "химическим сенсором", контролирующим функционирование клеток иммунной системы в окружающей среде низкомолекулярных химических соединений [Сибиряк и соавт., 2003]. С этих позиций антипролиферативное действие ТХДД и повышенную реактивность на апоптогенный сигнал можно рассматривать как адаптивную, защитную реакцию клеток в условиях сверхиндукции цитохрома Р450.

Нет ясности в вопросе о влиянии ТХДД на пролиферативную активность и апоптоз в лимфоидных органах [Carlstedt-Duke, 1979; Carver et al., 1994; Kamath et al., 1997; Staples et al., 1998; Silverstone et al., 2000]. Так, к примеру, несмотря на то, что атрофия тимуса является основным биоиндикатором токсического влияния ТХДД, механизмы ее развития остаются непонятными. В экспериментах на крысах WAG/Rij ТХДД вводили однократно в дозе, обеспечивающей мощную индукцию цитохрома Р4501А1, что было документировано резким увеличением ЭРОД активности в микросомах печени. На 4 сутки оценивали пролиферативную активность и апоптоз в лимфоидных органах, используя метод метахроматического окрашивания клеток акридиновым оранжевым с последующей проточной цитофлюорометрией. Полученные результаты свидетельствовали о преобладающем воздействии ТХДД на лимфоидные ткани, характеризующиеся "митотическим" потенциалом. В тимусе ксенотоксикант проявляет отчетливое антипролиферативное и апоптогенное действие, в костном мозге — антипролиферативный эффект, во периферических лимфоидных органах (селезенка, лимфоузлы и периферическая кровь) - не влияет на пролиферативную активность и апоптоз клеток. Судя по полученным данным, механизмы атрофии тимуса при воздействии ТХДД мало связаны с апоптогенным влиянием на тимоциты (корреляция между массой органа и интенсивностью апоптоза отсутствует), но в большей степени зависят от ингибирующего влияния соединения на пролиферативную активность тимоцитов. В периферической крови ТХДД не вызывает существенных изменений субпопуляционной структуры лимфоцитов (содержания CD3+CD4+ и CD3+CD8+ лимфоцитов). В то же время, ТХДД ингибировал пролиферативный ответ лимфоузловых лимфоцитов (и активационный апоптоз) в условиях индукции митогенеза (в лимфоузловой модельной системе in situ), что, однако, не сопровождалось угнетением активационно-индуцированной экспрессии CD25 на CD3+ Т лимфоцитах. Судя по результатам, активированные клетки наиболее чувствительны к воздействию экотоксиканта, что подтверждают результаты исследователей, использовавших другие методические подходы [Pryputniewicz et al., 1998; Liebke et al., 2001].

Таким образом, супериндуктор цитохрома Р4501А1 ТХДД, изменяет реактивность иммунокомпетентных клеток и адекватный баланс между позитивной и негативной их активацией. Угнетая пролиферативный ответ лимфоцитов и интенсивность активационного апоптоза, ТХДД увеличивает интенсивность рецепторного апоптоза, что может быть связано с нарушением рецепции апоптогенного сигнала, механизмов регуляции апоптоза. Причем, эти эффекты связаны не только с внутриклеточной индукцией цитохрома Р450, но и с прямым влиянием на процессинг апоптогенного сигнала.

В следующей серии экспериментов была осуществлена оценка влияния ТХДД на пролиферативную активность и апоптоз клеток лимфоидных органов при однократном введении токсиканта в дозе, обеспечивающей основной его эффект - массивную индукцию цитохрома Р450 CYP1A1. Последнее было документировано анализом ЭРОД активности в микросомах печени. Эти исследования показали, что мишенью воздействия ТХДД являются лимфоидные органы с высоким митотическим потенциалом, - тимус и костный мозг. В тимусе ТХДД проявлял и антипролиферативный (увеличивал содержание тимоцитов, находящихся в пресинтетической фазе клеточного цикла, снижал содержание G1-тимоцитов и митотически активных клеток), и апоптогенный эффекты. Последнее возможно связано с тем, что гибель тимоцитов в процессе селекции осуществляется, в том числе и по механизму Fas-зависимого апоптоза [Ярилин, 1999; Sharma et al., 1999]. В костном мозге ТХДД проявлял только антипролиферативное действие. Интересно, что, несмотря на угнетение пролиферативной активности клеток первичных лимфоиджных органов, существенного нарушения количественных показателей гемограммы и субпопуляционной структуры Т лимфоцитов периферической крови в данные сроки наблюдения (4-е сутки после введения ТХДД) мы не выявили, что можно обяснить мобилизацией компенсаторных механизмов. Клетки периферических лимфоидных органов были резистентны к воздействию экотоксиканта, однако, при активации клеток (введение митогена КонА в регионарный лимфоузел), ТХДД, как и в системе in vitro, проявлял иммунотоксический эффект, угнетая митогенный ответ лимфоцитов.

Иммунная система является индикаторной системой экологического неблагополучия, наиболее чутко реагирующей на воздействие неблагоприятных факторов [Черешнев, 2004]. В первую очередь это касается техногенных ксенобиотиков-поллютантов, число которых постоянно возрастает. Механизмы формирования экологически обусловленных иммунодефицитных состояний (ЭОВИДС) зависят с одной стороны от специфической биологической активности соединения, с другой, - от последствий взаимодействия этого соединения с "химическим сенсором" - системой цитохром Р450-зависимых монооксигеназ. В настоящее время предполагают, что основная мишень действия ТХДД, - Ah-R и контролируемые этим транскрипционным фактором гены (в первую очередь CYP1A1), являются основной системой, контролирующей внутриклеточныфй сигналлинг при клеточном стрессе [Nebert et al., 2001; Matsumura, 2003]. Вскрытие этих механизмов позволит глубже понять патогенез формирования индуцированной ксенобиотиками иммунологической недостаточности, а следовательно будет в значительной мере способствовать разработке адекватных мер профилактики и терапии

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Сибиряк, Дарья Сергеевна, 2005 год

1. Амирова З.К., Круглов Э.А. Ситуация с диоксинами в республике Башкортостан. Уфа: РЕАКТИВ, 1998. - 115 с.

2. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Иммунологические проблемы апоптоза. М.: Эдиториал УРСС, 2002. - 320 с.

3. Иванова О.В., Кожухаров Г.Н., Порошенко Г.Г. Диоксины и туберкулез / / Туберкулез и экология. 1995. - № 4. - С. 72 - 75.

4. Игнатьева Л.П.Гигиеническая оценка и разработка критериев опасности диоксинов в окружающей среде //Автореф.докт. биол. наук. Иркутск, 1997.

5. Имельбаева Э.А., Теплова С.Н., Камилов Ф.Х., Ахметова Б.Х. Иммунотропные эффекты феноксигербицидов. Из-во Башкирского ун-та, Уфа, 2000.- 116 с.

6. Ковальчук Л.П., Чередеев А.Н. Апоптогенные механизмы возникновения иммунодефицитных состояний // Журн. Микробиологии. 1999. - № 5. - С. 47 -52.

7. Курчатова Н.Н. Иммунологические нарушения улице высоким уровнем контаминации 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксином и родственными соединениями//Автореф. дисс. . канд. биол. наук Челябинск, 1999.

8. Найт С. Анализ пролиферации лимфоцитов // В кн.: Лимфоциты. Методы. Ред. Дж. Клаус. М., МИР, 1990. - С.286 - 286 - 309.

9. Самойлина Н.Л. Морфологический метод оценки бластной трансформации лимфоцитов в культуре // Лабораторное дело. 1970. - № 8. - С. 455-463.

10. Сибиряк С.В. Активационно-индуцированный апоптоз, как механизм иммунорегуляции. Воздействие эндогенных и экзогенных факторов //

11. Иммунология Урала. 2003. - № 1. - С. 10 - 11.

12. Сибиряк С.В., Вахитов В.А., Курчатова Н.Н. Цитохром Р450 и иммунная система: факты, гипотезы, перспективы. Уфа: ГИЛЕМ, 2003. - 211 с.

13. Трахтенберг И.М., Сова Р.Е., Шефтель В.О., Оникиенко Ф.А. Проблемы нормы в токсикологию М.: Медицина, 1991. - 208 с.

14. Федоров Л.А. Диоксины, как экологическая опасность: ретроспектива и перспективы — М., Наука, 1993. -300 с.

15. Чередеев А.Н., Ковальчук Л.В. Апоптоз, как важный этап оценки иммунной системы по патогенетическому принципу // Клин. лаб. диагностика. -1997.-№7.-С. 31 -34.

16. Черешнев В.А. Иммунитет человека и общества. — Изд. 2-е, доп. Екатеринбург: УрО РАН, 2004. 316 с.

17. Чумаков В.П. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью // Биохимия 2000. - т. 65, № 1. - С. 34 - 47.

18. Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах // Иммунология. 1996. - № 6. - С. 10-23.

19. Adachi J., Mori Y., Matsui S., Tomonari Matsuda T. Comparison of Gene Expression Patterns between 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and a Natural Arylhydrocarbon Receptor Ligand, Indirubin // Toxicological Sciences 2004. - Vol. 80.-P. 161-169.

20. Alam A., Cohen L., Aouad S., Sekaly R.-P. Early activation of caspases during T lymphocyte stimulation results in selective substrate in nonapoptotic cells // J.Exp. Med. 1999. - Vol. 190. - P. 1879 - 1890.

21. Amirova Z., Sibiryak S., Kruglov E. Remote consequences of PCDD/s exposure in subcohort of highly exposed workers of phenoxyherbicide production in the city of Ufa // Organohal. Сотр. 1999. - Vol. 44. - P. 357 - 361.

22. Ashkenazi A., Dixit V. Death receptors: signalling and modulatuion // Science.- 1998.-Vol. 281.-P. 1305 1308.

23. Balzer W., Pluschke P. Secondary formation of PCDD/DFs during thermal stabilization of sewage sluge // Chemosphere. 1994. - Vol. 29 - P. 1889 - 1901.

24. Bauer M., Vogt M., Los M. et al. Role of reactive oxygen intermediates in activation-induced CD95 (APO-l/Fas) ligand expression // J. Biol. Chem. 1998. -Vol. 273. - P. 8045 - 8055.

25. Belle-Isles M., Bilrha H., Moreau В., Ayotte P., Roy R. Immunological effects in newborn from saint-Lawrens river population exposed to POPs and heavy metals // Organohal. Сотр. 2000. - Vol.48. - P.227 - 230.

26. Birnbaum L. Health effects of dioxins: people are animals? And vice-versa! //Organohal. Сотр.-2000.-Vol. 49.-P. 101-103.

27. Birnbaum L., Tuomisto J. Non-carcinogenic effects of TCDD in animals // Food Addit Contam. 2000. - Vol. 17. - P. 275-288.

28. Birnbaum L., Staskal D., Diliberto J. Health effects of polybrominated dibenzo-p-dioxins (PBDDs) and dibenzofurans (PBDFs) // Environ. Int. -2003. Vol. 29.-P. 855 -860.

29. Birnbaum, L. S. Developmental effects of dioxins // Environ. Health Perspect.- 1995. Vol. 103(Suppl. 7). - P.89.

30. BoverhofD., Tam E., Harney A., Crawford R., Kaminski N., Zacharewski T. 2,3,7,8-Tetrachlordibenzo-p-dioxin Induces Suppressor of Cytokine Signaling-2 in Murine B-cells // Molecular Pharmacology Fast Forward. 2004.

31. Boyum A. Separation of leucocytes from blood and bone marrow// Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1968. - Vol. 267. - P. 95 - 99.

32. Budd R. Death receptor couple to both cell proliferation nd apoptosis // J. Clin. Invest.-2002.-Vol. 109.-P. 437-442.

33. Burcheil S., Luster M. Signalling by environmental polycyclic aromatic hydrocarbons in human lymphocytes // Clin. Immunol. 2001. - Vol. 98. - P. 2 - 10.

34. Camacho I., Hassuneh M., Nagarkatti M., Nagarkatti P. Enhanced activation-induced cell death as a mechanism of 2378-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD)-induced immunotoxicity in peripheral T cells // Toxicology. 2001. - Vol. 165. - P. 51 -63.

35. Camacho I., Nagarkatti M., Nagarkatti P. Evidence for Induction of Apoptosis in T Cells from Murine Fetal Thymus following Perinatal Exposure to 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p- dioxin (TCDD) // Toxicological Sciences. 2004. - Vol. 78. -P. 96- 106.

36. Carkstedt-Duke J. Tissue distribution of the receptor for 2378-tetrachlordibenzo-p-dioxine in the rat // Cancer. Res. 1979. - Vol. 39. - P. 3172 -3188.

37. Carver L., Hogenesch J., Bradfield C. Tissue expression of the rat Ah-receptor and ARNT mRNAs // Nucleic acid Res. 1994. - Vol. 22. - P. 3038 - 3044.

38. Carver L., Hogenesch J., Bradfield C. Tissue expression of the rat Ah-receptor and ARNT mRNAs // Nucleic Acids Res. 1994. - Vol.22. - P.3038 - 3050.

39. Catchpoole D., Stewart B. Etoposide-induced cytotoxicity in two human T-cells leukemic lines: delayed loss of membrane permeability rather than DNA fragmentation as an indicator of programmed cell death // Cancer. Res. 1993. - Vol. 53.-P. 4287-4296.

40. Cheredeev A., Kovalchuk L. Pathgenetic principle of immune systemevzluation in human: Positive and negative activation // Rus. J. Immunol. 1997. -Vol. 2. - P. 85 - 90.

41. Cole P., Trichopoulos D., Pastides H. et al. Dioxin and cancer: a critical review //Regul. Toxicol. Pharmacol. 2003. - Vol. 38. - P.378 - 388.

42. Cole P., Trichopoulos D., Pastides H., Starr T. et al. Dioxin and cancer: a critical review // Regul. Toxicol.Pharmacol. 2003. - Vol. 38. - P.378 - 388.

43. Cottrez F., Manca F., Dalgleish A. et al. Promong of human CD4+ antigen-specific T cells to undergo apoptosis by HIV-infected monocytes. A two-step mechanism involving the gpl20 molecule // J. Clin. Invest. 1997. - Vol. 99. - P. 257 - 266.

44. Cryns V., Yuan J, Proteases to die for //Genes Dev. 1998. - Vol. 12. - P. 1551 - 1570.

45. Darzynkiewicz Z. Simultaneous analysis of cellular RNA and DNA content // Meth. Cell Biol. 1994. - Vol. 41. - P. 401 - 420.

46. Darzynkiewicz Z., Li X., Gong J., Traganos J. Methods for analysis of apoptosis by flow cytometry // In.: Manual of Clinical Laboratory Immunology, Eds. N. Roes et al. ASM PRESS, Washington, 1997. - P. 334 - 345.

47. De Heer C, De Waal E., Schuurman H., Vos J. et al. The intrathymic target cell for the thymotoxic action of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin // Exp. Clin. Immunogenet. - 1994. - Vol. 11. - P. 86-93.

48. De Waal E., Schuurman H., Van Loveren H. et al. Differential effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin, bis(tri-n-butyltin) oxide and cyclosporine on thymus histophysiology // Crit. Rev. Toxicol. 1997. - Vol. 27(4). - P. 381 - 430.

49. Dearstyne E., Kerkvliet N. Mechnism of2378-tetrachlorodibenzo-p-dioxine (TCDD)-induced decrease in anti-CD3-activated CD4(+) T cells: the roles of apoptosis, Fas, and TNF//Toxicology.-2002.-Vol. 170.-P. 139-151.

50. Denison M., Whitlock J. Xenobiotic-induced transcription of cytochrome P450 genes//J. Biol. Chem. 1995. - Vol. 270.-P. 18175- 18178.

51. DeVito M, Birnbaum L.Dioxins: model chemicals for assessing receptor-mediated toxicity // Toxicology. 1995. - Vol.102. - P.115 - 23.

52. Dhein J., Walczak H., Baumier C. et al. Autocrine T-cell suicide mediated by APO-l/Fas/CD95 //Nature. 1995. - Vol. 373. - P. 438 - 441.

53. Dickson L., Buzik S. Health risks of «dioxins»: a review of environmental and toxicological considerations //Vet. Hum. Toxicol. 1993. - Vol.35. - P. 68 - 77.

54. Schecter A., Gasiewicz Th., Hoboken NJ. Dioxines and Health // Ed. John Wiley & Sons. 2003. - P. 952.

55. Doi Т., Takahashi Т., Taguchi O., Azuma Т., Obata Y. NF-kappa В RelA-deficient lymphocytes: normal development of T cells and В cells, impaired production of IgA and IgGl and reduced proliferative responses // J Exp Med. 1997. - Vol. 185. -P. 953-961.

56. Dong L., Ma Q., Whitlock J, Jr. Down-regulation of Major Histocompatibility Complex Q1 bGene Expression by 2,3,7,8 Tetrachlorodibenzo-p-dioxin // The journal of biological chemistry. - 1997. - Vol. 272, No. 47. - P. 29614-29619.

57. Fenech M., Crott J., Turner J., Brown S. Necrosis, apoptosis, cytostasis and

58. DNA damage in human lymphocytes measured aimultneously within the cytokinesis-block micronuleous assay: description of the method and results for hydrogen peroxide //Mutagenesis.-2000.-Vol. 14.-P. 605-612.

59. Fernandez-Salguero, P. M., J. M. Ward, J. P. Sundberg, and F. J. Gonzalez. Lesions of aryl-hydrocarbon receptor-deficient mice // Vet. Pathol. 1997. - Vol.34. -P.605.

60. Fernandez-Salguero P., Pineau P., Hilbert D., McPhail Т., Lee S., Kimura S., Nebert D., Rudikoff S., Ward J., Gonzalez F. Immune system impairment and hepatic fibrosis in mice lacking the dioxin-bindingAh receptor// Science. 1995. - Vol. 268. - P. 722.

61. Fiedler H. Sources of PCDD/PCDF and impact on the environment // Chemosphere. 1996. - Vol. 32. - P. 55 - 70.

62. Fisher M., Nagarkatti M., Nagarkatti P. Combined Screening of Thymocytes Using Apoptosis-Specific cDNA Array and Promoter Analysis Yields Novel Gene Targets Mediating TCDD-Induced Toxicity //Toxicol. Sci. -2004. Vol. 78. - P.l 16 -124.

63. Frumkin H. Agent Orange and Cancer: an overview for clinicans //CA Cancer J. Clin. 2003. - Vol. 53. - P. 245 - 253.

64. Funseth E., IlbackN. Effects of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin on blood and spleen natural killer (NK) cell activity in the mouse // Toxicol. Lett. - 1992. - Vol. 60.-P. 247-256.

65. Gains H., Andersson L., Biberfeld G. A new method for measuring lymphoproliferation at the single-cell level in whole blood cultures by flow cytometry //J. Immunol. Meth.- 1996.-Vol. 195.-P. 63-72.

66. Galio M., Scheuplein R., Heijden K. Biological basis for risk to dioxins and related compounds//Lab. Press. 1991.-Vol. 16.-P. 501 -515.

67. Gass H., Lbder K., Sbnderhauf W., Wilken M. Comparison of dioxins and related compounds in the emission during the start-up procedures at a municipal waste incinerator // Organohal. Сотр. 2004. - Vol. 66. - P.935 - 940.

68. Ge N., Elferink C. A direct interaction between the aryl hydrocarbon receptor and retinoblastoma protein. Linking dioxin signaling to the cell cycle // J. Biol. Chem.- 1998. Vol. 273. - P. 22708 - 22713.

69. GermolecD., Henry E.,MaronpotR.etal. Induction of CYP1A1 andACDH-3 in lymphoid tissues from Fisher 344 rats exposued to 2,3,7,8-TCDD // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1996. - Vol. 137. - P. 57 - 66.

70. Gonzalez F., Fernandez-Salguero P. The aryl hydrocarbon receptor: studiesusing the AHR-null mice // Drug. Metab. Dispos. 1998. - Vol. 26. - P. 1194 - 1198.

71. Gurtoo H., Bejba N., Minorada J.Gurtoo H., Hayner N., Parker N. et al. Properties, inducibility and an improved method of analysis of aryl hydroxylase in cultured human lymphocytes // Cancer Res. 1975. - Vol. 35. - P. 1235 - 1243.

72. Gurtoo H., Hayner N., Parker N. Aryl hydroxylase in cultured lymphoid cells from normal and leukemia patients // Proc. Am. Assoc. Cancer. Res. 1976. - Vol. 17. -P.93 - 97.

73. Halperin W., Vogt R., Sweeney M., Shopp G., Fingerhut M., Petersen M. Immunological markers among workers exposed to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin // Occup Environ Med. 1998. - Vol.55. - P. 742 - 749.

74. Harvey K., Blomquist J., Ucker D. Commitnment and effector phases of the physiological cell death pathway elucidated with respect to Bcl-2, caspase and cyclin-dependent kinase // Mol. Cell. Biol. 1998. - Vol. 18. - P. 2912 - 2922.

75. Hasler J., Estabrook E., Murray M. Human cytochromes P450 // Mol. Aspects Med.-2000.-Vol. 20.-P. 1-137.

76. Heath-Pagliuso Sh., Rebecca M., Milici A., Giese S. Trypthophan metabolites, indole-3-pyruvic acid, DL-3-indoleactic acid, L-kinurenine, and kynurenic acid activate Ah receptor signal transdaction // Organohal. Сотр. 2000. - Vol.49. - P. 289 - 293.

77. Hildeman D., Mitchell Th., Kappler J., Marrack Ph. T cell apoptosis and reactive oxygen species // J. Clin. Invest. 2003. - Vol. 111. - P. 575 -581.

78. Hines R., Luo Z., Cresteil Т., Ding X., Prough R., Fitzpatrick J., Ripp S., Falkner K., Ge N.-L., Levine A., Elferink C. Molecular regulation involving endogenous factors // Drug Met. And Disp. 2001. - Vol. 29. - P. 623 - 633.

79. Hoffman R., Stehr-Green P., Webb K. et al. Health effects of long-term exposure to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin // JAMA- 1986. - Vol. 255 - 2031 -2038

80. Holladay S. Prenatal immunotoxicant exposure and postnatal autoimmune disease // Environ. Health Perspect. 1999. - Vol.107. - Suppl 5. - P. 687-91.

81. Holsapple M., Snyder N., Wood S., Morris D.A review of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced changes in imunocompetence: 1991 update // Toxicology. -1991.-Vol.69.-P. 219-255.

82. Hossain A., Tsuchiya Sh., Masayoshi M. et al. The Ah Receptor is not involved in 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin-mediated apoptosis in human leukemic T cell lines//J. Biol. Chem. - 1998.-Vol. 273.-P. 19853- 19858.

83. Jennings A., Wild G., Ward J., Ward A. Immunological abnormalities 17 years after accidental exposure to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin // Br. J. Ind. Med. - 1988. - Vol. 45. - P. 701 - 704.

84. Kamath S., Rubin E. Interaction of calcium with microsomes: a modified method for the rapid isolation of rat liver microsomes // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - Vol. 49. - P. 52 - 59.

85. Kamath, А. В., H. Xu H., P. S. Nagarkatti P. S., M. Nagarkatti M. Evidence for the induction of apoptosis in thymocytes by 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin in vivo // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 1997. - Vol.142. - P. 367.

86. Kellermann G., Luyten-Kellermann M., Shaw G. Genetic variation of arylhydrocarbon hydroxylase in human lymphocytes // Amer. J. hum. Gen. 1973. — Vol. 25.-P. 327-331.

87. Kennedy N., Kataoka Т., Tschopp J., Budd R. Caspase activation is required for T cell proliferation//J. Exp. Med. 1999.-Vol. 190.-P. 1891 - 1895.

88. Kerkvliet N. Recent advances in understanding the mechanisms of TCDD immunotoxicity // Int.Immunopharmacol. — 2002. — Vol. 2(2-3). P. 277 - 291.

89. Kerkvliet N.,Baecher-Steppan L., Shepherd D. et al.Inhibition of TC-1 cytokine production, effector cytotoxic T lymphocyte development and alloantibody production by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p- dioxin //J.Immunol. 1996. - Vol. 157. - P. 2310-2319.

90. Kim D., Gazourian L, Quadri SA, Romieu-Mourez R, Sherr DH, and Sonenshein G. The RelANF-kappaB subunit and the aryl hydrocarbon receptor (AhR) cooperate to transactivate the C-Myc promoter in mammary cells // Oncogene. — 2000. -Vol. 19.-P. 5498-5506.

91. Kissel J., Robarge G.//Chemosphere. 1988. - Vol.17 - P.2017 - 2027.

92. Kociba R., Schwetz B. Toxicity of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) // Drug Metab. Rev.-1982. - Vol. 13. - P.387-406.

93. Kolluri S., WeissC.,KoffA., GoEttlicherM.p27Kipl induction and inhibitionof proliferation by the intracellular Ah receptor in developing thymus and hepatoma cells//Genes Dev.- 1999.-Vol. 13.-P. 1742-1753.

94. Krammer P, CD95's deadly mission in the immune system // Nature. 2000. -Vol.407.-P. 789-800.

95. Kremer J., Gleichmann E., Esser C. Thymic stroma exposed to arylhydrocarbon receptor-binding xenobiotics fails to support proliferation of early thymocytes but induces differentiation // J. Immunol. 1994, - Vol. 154. - P. 2778 — 2801.

96. Kurl, R. N., M. Abraham M., Olnes M. J. Early effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) on rat thymocytes in vitro // Toxicology — 1993. -Vol. 77.-P. 103.

97. Lai, Z. W., T. Pineau, and C. Esser. Identification of dioxin-responsive elements (DREs) in the 5 regions of putative dioxin-inducible genes // Chem. Biol. Interact. 1996. Vol. 100. - P. 97.

98. Laiosa M., Wyman A., Murante F., Fiore N. et al. Cell proliferation arrest within intrathymic lymphocyte progenitor cells causes thymic atrophy mediated by the aryl hydrocarbon receptor// J.Immunol. 2003. - Vol. 171. - P. 4582 - 4591.

99. Landi M., Clark G., Gosma G. et al. Susceptibility markers and TCDD toxicity: Abstr. 2-nd Ann. Meet. Int. Genet. Epidemiol. Soc., New Orlean, Oct. 1993 //Genet. Epidemiol.- 1993.-Vol. 10.-P. 357.

100. Landi M-T., Bertazzi P., Baccarelli A., Consonni D. et al. TCDD-mediated alterations in the AhR-dependent pathway in Seveso, Italy, 20 years after the accident

101. Carcinogenesis. 2003. - Vol. 24. - P. 673 - 680.

102. Lang D., Becker S., Devlin R., Koren H. 2378-TCDD induces cytochrome P450 enzyme activity but not proliferation or phenotypical changes in human peripheral blood lymphocytes //Toxicol. Lett. 1996. - Vol. 88. - P. 317 -325.

103. Laupeze В., Amiot L., Sparfel L., Le Ferrec E. et al.Polycyclic Aromatic Hydrocarbons Affect Functional Differentiation and Maturation of Human Monocyte-Derived Dendritic Cells //J. Immunol.- 2002. Vol. 168. - P. 2652 - 2658.

104. Lavin A., Hahn D., Gasiewicz T. Expression of functional aromatic hydrocarbon nucklear translocator proteins in murin bone marrow stromal cells // Arch. Biochem. Biophys. 1998. - Vol. 352. - P. 9 - 18.

105. Lenardo M., Boehme S., Chen L. et al. Autocrine feedback death and the regulation of mature T lymphocyte antigen response // Int. Rev. Immunol. 1995. — Vol. 13.-P. 115-134.

106. Li P., Nijhawan D., Budihardjo I. et al. Cytochrome С and dATP-dependent formation ofApaf-l/caspase 9 complex initiates an apoptotic protease cascade // Cell. 1997. - Vol. 91. - P. 479 - 489.

107. Li Q., Tanaka S., Kisenge R. et al. Activation-induced T cell death occurs at G1A phase of the cell cycle //Eur. J. Immunol. 2000. - Vol. 30. - P. 3329 - 3337.

108. Liebke R., Copeland G., Daniels M., Lambert A. et al. Suppression of allergic immune responses to house dust mite (HDM) in rats exposed to 2,3,7,8-TCDD // Toxicol.Science. -2001. Vol. 62-P. 71-79.

109. Luebke R., Copeland C., Andrews D. Effects of aging on resistance to

110. Trichinella spiralis infection in rodents exposed to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin //Toxicology. Vol. 136.- 1999.-P. 15-26.

111. Lundberg K., Dencker L., Grenvik K. 2378-tetrachlordibenzo-p-dioxin (TCDD) inhibits the activation of antigen-specific T-cells in mice // Int. J. Immunopharmacol.jj 1992. Vol. 14. - P. 699 - 705.

112. Lundberg K., Grenvik K., Goldschmidt Т., Klareskog L. et al. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) alters intrathymic T-cell development in mice // Chem. Biol. Interact. 1990. - Vol. 74. - P. 179.

113. MatoY., Suzuki N., Kadokami K., Katatani N. et al. Human exposure to PCDDs, PCDFs, and dioxin like PCBs in Japan, 2001// Organohal. Сотр. 2004. -Vol. 66. -P.2457 -2451.

114. Matsumura F. On the significance of the role of cellular stress response reactions in the toxic actions of dioxin //Biochem. Pharmacol. 2003. - Vol.66. - P.527 -540.

115. Mei-Lin M., Jyh-Wei S., Wu-Chiang C., Yueliand L. the immunologic evaluation of the Yu-Cheng children // Organohal. Сотр. 1996. - Vol.30. - P.360 -365.

116. Mimura J., Y Fujii-Kuriyama. Functional role of AhR in the expression of toxic effects by TCDD // Biochim. Biophys. Acta. 2003. - Vol.1619. - P. 263 - 268.

117. Miossec C., Dutilleul V., Fassy F., Diu-Hercend A. Evidence for CPP32 activation in the absence of apoptosis during T lymphocyte stimulation // J. Biol. Chem. 1997. - Vol. 272. - P. 13459 - 13462.

118. Mitchell К., Lawrence В. Exposure to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) Renders Influenza Virus-Specific CD8+ T Cells Hyporesponsive to Antigen / / Toxicol. Sci. - 2003. - Vol. 74. - P. 74-84.

119. Mukerjee D. Health impact of polychlorinated dibenzo-p-dioxins: a critical review // J. Air Waste Manag. Assoc. 1998. - Vol.48. - P. 157-165.

120. Nagayama J. Effects of lactational exposure to chlorinated dioxins and related chemicals on linphocyte subpopulations and thyroid functions in Japanes babies // Organohal. Сотр. 1996. - vol. 30. - P. 228 - 233.

121. Nebert D., Dalton Т., Okey A., Gonzalez F. Role of Aryl Hydrocarbon Receptor-mediated Induction of the CYP1 Enzymes in Environmental Toxicity and Cancer //J. Biol. Chem. 2004. - Vol. 279. - P.23847 - 23850.

122. Nebert D., Roe A., Dieter M., Solis W. Role of aromatic hydrocarbon receptor and Ah gene battery in the oxidative stress response, cell cycle control, and apoptosis / /Biochem. Pharmacol. 2000. - Vol. 59.-P. 65- 85.

123. Neubert R., Golor G.Maskow L., Helge H. Evaluation of possible effects of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin and other congeners on lymphocyte receptors in Callithrix jacchus and man //Exp. Clin. Immunogenet. - 1994. Vol.11. - P.l 19 - 127.

124. Newton K., Strasser A. Caspases signal not only apoptosis but also antigen-induced activation in cells of immune system // Genes Dev. 2003. - Vol. 17. - P. 819 -825.

125. Nicholson D., Ali A., Thornberry N., Vailancourt J. et al. Identification and inhibition of the ICE/CED-3 protease necessary for mammalian apoptosis // Nature. -1995.-Vol. 376.-P. 37-43.

126. Nilsson С., Hakansson H.The retinoid signaling system—a target in dioxin toxicity // Crit. Rev. Toxicol. 2002. - Vol 32. - P. 211 - 232.

127. Nohara K., Fujimaki H., Tsukumo S., Inouye K., Sone H., Tohyama, C. Effects of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) on T cellderived cytokine production in ovalbumin (OVA)-immunized C57B1/6 mice // Toxicology. - 2002. -Vol.172.-P.49-58.

128. Okey A., Riddick D., Harper P. The Ah receptor: mediator of the toxicity of 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and related compounds // Toxicol Lett. - 1994.-Vol.70.-P. 1-22.

129. Ott M., Zober A., Germann C. Laboratory results for selected target organs in 138 individuals occupationally exposed to TCDD // Chemosphere. 1994. - Vol. 29(9-11).-P. 2423 -2437.

130. Park D., Morris E., Greene L., GellerH. Gl/S cell cycle blockers and inhibitors of cyclin-dependent kinases suppress camptothecin-induced neuronal apoptosis // J. Neurosci.- 1997.-Vol. 17.-P. 1256- 1270.

131. Peter M., Ehret A., Berndt C., Krammer P. AIDS and the death receptors // Br. Med. Bull. 1997. - Vol. 53. - P. 604 - 616.

132. Pohl R., Fouts J. A rapid method for assaying the metabolism of 7-ethoxyresorufine by microsomal subcellular fractions // Anal. Biochem. 1980. - Vol. 107.-P. 150- 155.

133. Pokrovsky A., Cherykh A., Yastrebova O., Tsyrlov I. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-P-dioxin as a possible activator of HIV infection // Biochem Biophys Res Commun. 1991. - Vol. 179. - P. 46-51.

134. Prell R., Oughton J., Kerkvliet N. Effect of 2,3,7,8 tetrachlordibenzo-p-dioxin on anti-CD3-induced changes in T-cell subsets and cytokines production // Int. J. Immopharmacol. - 1995. - Vol. 17. - P. 951 - 961.

135. Richardson, V. M., M. J. Santostefano, and L. S. Birnbaum. Daily cycle of bHLH-PAS proteins, Ah receptor and Arnt, in multiple tissues of female Sprague-Dawley rats // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998. - Vol. 252. - P.225.

136. Rier Sh., Сое С., Lemieus A., Martin D. et al. Increased TNF-a production by periphqral blood leucocytes from TCDD-exposed Resus monkey // Toxicol. Sci. -2001.-Vol. 60.-P. 327-337.

137. Rier Sh., Foster W.Environmental Dioxins and Endometriosis //Toxicol. Sci. -2002.-Vol. 70. P.161-170

138. Roeder R., Garber M., Schelling G. Assesment of Dioxins in Food from animal origins // J. Amin. Sci. 1998. - Vol. 76. - P. 142 - 151.

139. Ross P., de Swart R., van der Vliet H. et al. // Impaired cellular immune response in rats exposed perinatally to Baltic Sea herring oil or 2,3,7,8-TCDD // Arch Toxicol. 1997.-Vol.71.-P.563 - 574.

140. Roumak V., Poznyacov S., An N., Kim Ch. Epidemiological and laboratory studies on health consequences of agent orange in the South Vietnam // Organohal. Сотр. 1992. - Vol. 10. - P. 275 - 278.

141. RubyC., LeidM., KerkvlietN. 2,3,7,8-tetrachlordibenzodioxines suppresses tumor necrosis factor-1 and CD-40- induced activation ofNFkB in dendritic cells: p 50homodimer activation is not affected // Mol Pharmacol. 2002. - Vol. 62. - P.722 -728.

142. Ryan J., Masuda Y. // Proc. 9th Intern. Symp. on chlorinated dioxins and related compounds. Toronto, 1989. Rep. TOX 06; Abstracts of 11th intern. Symp. On chlorinated and related compounds. Triangle Park, 1991.

143. Safe S. Modulation of gene expression and endocrine response pathways by 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related compounds // Pharmacol. Ther. - 1995. -Vol.67.-P.247-281.

144. Safe, S. H. Annu. Rev. Pharmacol. 1986. - Toxicol. - Vol. 26. - P. 371—399.

145. Savouret J.-F., Antenos M., Quesne M., JingXu J. et al. 7-Ketocholesterol Is an Endogenous Modulator for the Arylhydrocarbon Receptor //J. Biol. Chem. 2001. -Vol. 276.-P. 3054-3059.

146. Scaffidi C., Fulda S., Srinivasan A. et al. Two CD95 (APO-l/Fas) signalling pathways//The EMBO J.- 1998.-Vol. 17.-P. 1675- 1687.

147. Scaffidi C., Schmitz I., Zha J. et al. Differential modulation of apoptosis sensitivity in CD95 type I and type II cells // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 22532-22538.

148. Schmidt, J. V., G. H. Su, J. K. Reddy, M. C. Simon, and C. A. Bradfield. Characterization of a murine Ahr null allele: involvement of the Ah receptor in hepatic growth and development // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. - Vol. 93. - P. 6731.

149. Schuurman H-J, Van Loveren H, Rozing J, Vos JG. Chemicals trophic for the thymus: risk for immunodeficiency and autoimmunity // Int. J. Immunopharmacol. -DeWaal EJ 1992.-Vol.14. P. 369 - 375.

150. Schwartz L., Smith S., Jones M., Osborne L. Do all programmed cell death occur via apoptosis // Proc. Natl. Acad. Sci. 1993. - Vol. 90. - P. 980 - 984.

151. Sha W. Regulation of immune responses by NF-kappa B/Rel transcription factor // J. Exp. Med. 1998. - Vol. 187. - P. 143 - 146.

152. Sha W., Liou H., Tuomanen E., Baltimore D. Targeted disruption of the P50 subunit of NF-kappa В leads to multifocal defects in immune responses// Cell. 1995. -Vol. 80.-P. 321 -330.

153. Shinohara K., Nakano H.Interphase dath and reproductive death in X-irradiated MOLT-4 cells//Rad. Res. 1993.-Vol. 135.-P. 197-203.

154. Silverstone A., Lai Z.-W., Laiosa M. et al. Dioxin causes thymic athropy by inhibiting entry into cell cycle in the earliest thymic lymphocyte developmental stage / / Organohal. Сотр. 2000. - Vol. 49. - P. 58 -61.

155. South P., Kathleen Egan S., Troxell Т., P. Bolger M. Dietary PCDD/PCDF Exposure Estimates for the U.S. Population // Organohal. Сотр. 2004. - Vol. 66. -P.2729-22731.

156. Staples J., Murante F., Fiore N. et al. Thymic alterations induced by 2378tetrachlorodibenzo-p-dioxin are strictly dependent on aryl hydrocarbon receptor activation in hemopoietic cells // J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 3844 - 3854.

157. Staples J., Murante F., FioreN., GasiewiczT.et al. Thymic Alterations Induced by 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-/?-Dioxin Are Strictly Dependent on Aryl Hydrocarbon Receptor Activation in Hemopoietic Cells//J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 3844 -3854.

158. Sulentic C., Holsapple H., Kaminski N. Aryl hydrocarbon rceptor dependent suppression by 2378-TCDD of IgM secretion in activated B-cells //Mol. Pharmacol. -Vol. 53.-P. 623-629.

159. Suskind R., Hertzberg V. Human health effects of 2,4,5 -T and its toxic contaminants //JAMA. 1984. -Vol. 251. -P. 157- 159.

160. Svensson C., Lundberg K.Immune-Specific Up-Regulation ofAdseverin Gene Expression by 2,3,7,8 Tetrachlorodibenzo-p-dioxin // Mol. Pharmacol. -2001.- Vol.60. -P. 135- 160.

161. Swanson S., Rappe C., Malstroem J., Kringstad K. Emissin of PCDDs and PCDFs from the pulp industry //Chemosphere. 1988. - Vol. 17. - P. 681 - 690.

162. Taylor M., Lucier G., Mahler J., Thompson M. et al. Inhibition of acute TCDD toxicity by treatment with anti-tumor necrosis factor antibody or dexamethasone // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1992. - Vol.117. - P. 126-132.

163. Taylor S. Environmental chloracne: update and overview //Ann. N.Y. Acad. Sci. 1979. -Vol.320. -P. 295-307.

164. Thompson C., McCoy Z., Lampert J., Andries M. et al. Relationships among

165. Benzo(a)pyren metabolism, benzo(a)pyren-diol-epoxide: DNA adduct formation, and sister chromatid exchange in human lymphocytes from smokers and nonsmokers // Cancer Res. 1989. - Vol. 49. - P. 6503 - 6511.

166. Thurmond Т., Gasiewicz A. A single dose of 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo-p-dioxin produces a time- and dose-dependent alteration in the murine bone marrow B-lymphocyte maturation profile //Toxicol. Sci. 2000. - Vol.58. - P.88 - 95.

167. Thurmond Т., Saples J., Silverstone A., Gasiewicz T. The aryl hydrocarbon receptor has a role in the in vivo maturation of murine bone marrow b-lymphocytes and their response to 2,3,7,8 TCDD //Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2000. - Vol. 165. -P. 222-236.

168. Tian Y., Ke S., Denison M., Rabson A., Gallo M. Ah receptor and NF-kappaB interactions, a potential mechanism for dioxin toxicity // J. Biol. Chem. 1999. - Vol. 274.-P. 510-515.

169. Tsyrlov I., PokrovskyA. Stimulatory effect of the CYP1 Al inducer 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo-p-dioxin on the reproduction of HIV-1 in human lymphoid cell culture// Xenobiotica. 1993.-Vol. 23 -P.457-467.

170. Ueda N., Walker P., Hsu S-M., Shan S. Activation of 15-kDa endonuclease in hypoxia/reoxygenation injury without morphological features of apoptosis // Proc.

171. Natl. Acad. Sci. 1995. - Vol. 92. - P. 7202 - 7206.

172. Van Parijs L., Biuckians A., Abbas A. Functional roles of Fas and bcl-2 regulated apoptosis of T lymphocytes // J. Immunol. 1998. - Vol. 160. - P. 2065 -2071.

173. Vermes I., Haanen C., Richel D. et al. Apoptosis and secondary necrosis of lymphocytes in culture //Acta Haematol. 1997. - Vol. 98. - P. 8 - 13.

174. Vermont-Desroches C., Cattin M. H., Wijdenes J. CD95 Workshop: Different monoclonal antibody valency required to induce apoptosis in SKW6.4 cells // In: Leucocyte typing VI: Eds. T. Kishimoto et al. N.Y. - London, 1996. - P. 806 -809.

175. Visez N., Baillet Ch.l, Sawerysyn J. P. Formation of polychlorinated dibenzodioxins, benzenes and phenols from thermal degradation of 2-chlorophenol promoted by CuC12 // Organohal. Сотр. - 2004. - Vol. 66. - P. 1062 - 1070.

176. Vorderstrasse В., Erica A. Dearstyne E., Kerkvliet N. Influence of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin on the Antigen-Presenting Activity of Dendritic Cells // Toxicol. Sci.-2003.-Vol. 72.-P. 103-112.

177. Vorderstrasse В., Kerkvliet N. 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin affects the number and function of murine splenic dendritic cells and their expression of accessory molecules // Toxicol. Appl. Pharmacol. - 2001. - Vol. 171. - P.l 17 - 125.

178. Vos J., Loveren H. Markers for immunotoxic effects in rodents and man // Toxicol. Lett. 1995. - Vol. 82-83. - P. 385 - 394.

179. Watanabe S., Kitamura K., Nagahashi N. Effects of dioxins on human health: a review//J. Epidemiol. 1999. - Vol.9. - P. 1-13.

180. Wen Y., Chen-Chin H. Middle abnormalities in Yucheng Children // Dioxin'94. 1994. - Vol.21. - P. 501 - 505.

181. Whitlock, J. P., Jr., S. T. Okino, L. Dong, H. P. Ко, R. Clarke-Katzenberg, Q. Ma, and H. Li. Cytochromes P450 5: induction of cytochrome P4501A1: a model for analyzing mammalian gene transcription // FASEB J. 1996. - Vol. 10. - P. 809.

182. Wilhelm S., Wagner H., Hacker G. Activation of caspase-3-like enzymes in non-apoptotic T cells // Eur. J. Immunol. 1998. - Vol. 28. - P. 891 - 900.

183. Wolf В., Green D. Suicidal Tendencies: apoptoticcell death by caspase family proteinases // J, Biol. Chem. 1999. - Vol. 274. - P. 20049 - 20052.

184. Wood, S. C., and Holsapple, M. P. (1993). Direct suppression of superantigeninduced IgM secretion in human lymphocytes by 2,3,7,8 TCDD // Toxicol.Appl. Pharmacol. - 1993. - Vol. 122. - P. 308 - 313.

185. Wu L., D'Amico A., Winkel K., Suter M., Lo D., Shortman K. RelB is essential for the development of myeloid-related CD8alpha-dendritic cells but not of lymphoidrelated CD8 alpha-dendritic cells // Immunity. 1998. - Vol.9. - P. 839 - 847.

186. Yahata Т., Abe N., Yahata C.et al. The essential role of phorbol ester-sensitive protein kinase С isoforms in activation-induced cell death of TH1 cells // Eur. J. Immunol. 1999.-Vol. 29. -P. 727-732.

187. Yamaguchi K., Near R., Matulka R., Shneider A. et alActivation of the aryl hydrocarbon receptor/transcription factor and bone marrow stromal cell-dependent preB cell apoptosis // J. Immunol. 1997. -Vol. 158. - P. 2165 - 2173

188. Yao Y., Hoffer A., Chang C., Puga A. Dioxin activates HIV-1 gene expression by an oxidative stress pathway requiring a functional cytochrome P450 CYP1A1 enzyme //Environ Health Perspect. 1995. - Vol. 103(4). - P. 366 - 371.

189. Yin X., Oltavi Z., Veis-Novak D. et al. Bcl-2 gene family and the regulation of programmed cell death // Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 1994. - Vol. 59. -P. 387-400.

190. Yonehara S., Nakamachi Y. Workshop panel report // Leucocyte typing VI: White cell differentiation antigens. Part 9. Cytokine receptors, Eds. T. Kishimoto et al. N.Y. London, 1996. - P. 804 -806.

191. Yoshino Т., Kondo E., Cao L. et al. Inverse expression of bcl-2 protein and Fas antigen in lymphoblasts in peripheral lymph nodes and activated peripheral blood T-and B-lymphocytes// Blood. 1994. -Vol. 83.-P. 185- 187.

192. Younglai E., Alison C. Foster H. Environmental and occupational factors affecting fertility and IVF success // Hum. Reprod. Update 2005. - Vol. П.- P.43 - 57.

193. Zamai L., Falcieri E., Marheftka G., Vitale M. Supravital exposure to propidium iodide identifies apoptotic cells in the absence of nucleosomal DNA fragmentation // Cytometry . 1996. - Vol. 23. - P. 303 - 311.

194. Zhang J., Cado D., Chen A. et al. Fas-mediated apoptosis and activation-induced T-cell proliferation are defective in mice lacking FADD/Mortl // Nature. —1998. Vol. 392. - P. 296 - 300.

195. Zhu L., Yu X., Akatsuka Y. et al., Role of mitogen-activated protein kinases in activation-induced apoptosis of T cells // Immunol. 1999. - Vol. 97. - P. 26 - 35.