Исследование молекулярных механизмов дерегуляции супрессора опухолевого роста PDCD4 в опухолевых клетках тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.03, кандидат наук Вихрева, Полина Никитична

• Вихрева, Полина Никитична
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Вихрева, Полина Никитична

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список'использованных сокращений

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

3. ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ ДЛЯ ЗАЩИТЫ

4. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4.1. Ген и белок Рс1сё4

4.1.1. Ген и транскрипт Рс1сё4

4.1.2. Структура белка Р <1сс14

4.1.3. Молекулярные механизмы действия Рёсс14

4.2. Регуляция активности Рёсё4

4.2.1. Регуляция транскрипции Рс1сс14

4.2.2. Регуляция трансляции Рёсё4

4.2.3. Регуляция стабильности белка Рёсё4

4.2.4. Внутриклеточная локализация Рс1сс14

4.2.5. Регуляция активности Рс1сс14

4.3. Характер экспрессии Рёсё4

4.4. Функции Рёсё4

4.4.1. Рёсё4, апоптоз и контроль пролиферации клеток

4.4.2. Влияние Рёсё4 на клеточный цикл

4.5. Рёсё4 и неопластическая трансформация

4.5.1. Рс1с(14 и онкогенез: причинно следственная связь

4.5.2. Прогностическое значение Рс1сс14

4.5.3. Р(1сс14 и супрессия роста опухолевых клеток

4.5.4. Ангиогенез

4.5.5. Рс1сс14 и прогрессия опухоли

4.5.6. Рс1сс14 и хеморезистенция

4.5.7. Рёсё4 как интегральный маркер про-онкогенных изменений

4.6. Заключение

5. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

5.1. Реактивы

5.2. Культуры клеток, реагенты и трансфекция

5.3. Вестерн-блот анализ и антитела

5.4. Выделение РНК и ПЦР в реальном времени

5.5. Ферменты

5.5.1. Гидролиз ДНК с помощью эндонуклеаз рестрикции

5.5.2. Обработка фрагментов ДНК фрагментом Кленова

5.5.3. Лигирование фрагментов ДНК

5.6. Получение плазмидных конструкций

5.6.1. Бактериальные штаммы, среды, реактивы, антибиотики

5.6.2. Приготовление компетентных клеток Е. coli

5.6.3. Трансформация клеток Е. coli

5.6.4. Секвенирование ДНК

5.6.5. Выделение плазмидной ДНК из клеток Е. coli

5.6.6. Электрофорез ДНК в агарозном геле

5.6.7. Очистка фрагментов ДНК

5.6.8. Полимеразная цепная реакция

5.6.9. Клонирование продуктов ПЦР

5.6.10. Получение плазмидных конструкций

5.7. Двойной люциферазный анализ

5.8. Статистическая обработка результатов

6. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

6.1. Анализ экспрессии Pdcd4 в клетках меланомы человека

6.1.1. Уровень белка Pdcd4 в клетках меланомы и нормальных меланоцитах

6.1.2. Роль Akt и MEK/ERK сигнальных путей в супрессии Pdcd4 в клетках меланомы

6.2. Анализ уровней белка и транскрипта Pdcd4 в клетках линий рака легких

6.3. Роль Akt/mTOR/S6Kl-сигнального пути в супрессии Pdcd4 в опухолевых клетках рака легких

6.4. Роль протеинкиназы GSK3ß в регуляции экспрессии супрессора опухолевого роста Pdcd4 в клетках линии рака легких

6.5. Вклад протеолитической деградации белка Pdcd4 в супрессию Pdcd4 в клетках опухолей легких

6.6. Влияние ингибиторов Akt/mTOR/S6Kl-сигнального пути рапамицина и LY29002 на уровень транскрипта Pdcd4

6.7. Вклад микроРНК miR-21 и miR-183 в рапамицин-зависимую супрессию Pdcd4 в опухолевых клетках линии рака легких

6.8. mTOR-зависимая супрессия активности промотора гена Pdcd4 в клетках линии рака легких

6.8.1. Способность ингибитора тТ(Ж рапамицина оказывать действие на активность промоторной области гена Рс1сс14

6.8.2. Картирование минимального фрагмента промотора гена Рс1сй4, ответственного за влияние АЙ-сигнального пути на транскрипционную активность промотора гена Рс1сс14

6.8.3. Анализ участков связывания потенциальных транскрипционных факторов с делеционным мутантом промотора гена Рс1сс14

6.8.4. Анализ активности репортерного гена под контролем делеционного мутанта минимального фрагмента промотора гена Рс1сс14, опосредующего эффект рапамицина

89

7. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

6. ВЫВОДЫ

ЛИЧНЫЙ ВКЛАД АВТОРА

БЛАГОДАРНОСТИ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Список использованных сокращений

а.о. аминокислотный остаток

АТФ аденозинтрифосфат

ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота

ДСН-ПААГ додецилсульфат натрия-полиакриамидный гель-электрофорез

кДа килодальтон

кДНК комплементарная ДНК

мРНК матричная РНК

НМКРЛ немелкоклеточный рак легкого

HT нуклеотиды

НТО нетранслируемая область

ОМЛ острая миелоидная лейкемия

п.н. пары нуклеотидов

ПЦР полимеразная цепная реакция

РНК рибонуклеиновая кислота

т.п.н. тысяч пар нуклеотидов

ЭДТА этилендиаминтетраацетат

Akt протеинкиназа В

АР-1 транскрипционный фактор АР-1 (активирующий белок-1)

ATRA полностью транс-ретиноевая кислота (all trans retinoic acid)

DMEM среда Игла, модифицированная Дюльбекко (Dulbecco's Modified Eagle Medium)

ERK киназы, активируемые внеклеточным сигналом (extracellular signal regulated kinases)

FOX транскрипционные факторы семейства forkhead box

НЕМ нормальные человеческие меланоциты (Human epidermal melanocyte)

IL интерлейкин

JNK киназа, фосфорилирующая N-концевой активаторный домен c-Jun (c-Jun N-terminal kinase)

LB среда Лурия Бертани (Luria Bertani medium)

LPS липополисахариды (бактериальный эндотоксин)

МАРК митоген-активируемая протеинкиназа (Mitogen-Activated Protein Kinase)

mTOR протеинкиназа серин-треониновой специфичности/«мишень рапамицина у млекопитающих» (mammalian target of rapamycin)

NES сигнал ядерного экспорта (Nuclear export sequence)

NF-кВ ядерный фактор кВ (nuclear factor кВ)

NLS сигнал ядерной локализации (Nuclear localization sequence)

PARP поли(АДФ-рибоза)-полимераза

PBS фосфатно-солевой буфер (Phosphate buffered saline)

PCI пробелок конвертазы 1 (proprotein convertase 1)

Pdcd4 Programmed cell death

PI3K фосфатидилинозитол-3-киназа (Phosphomositide-3-kinase)

PRMT5 белок аргинин метилтрансфераза 5 (¡protein arginine methyltransferase 5)

S6K1 рибосомная S6 киназа

SRSF3 серин/аргинин-богатый фактор сплайсинга 3 (Serine/arginine-nch splising factor 3)

TNF фактор некроза опухолей (Tumor Necrosis Factor)

TOR протеинкиназа серин-треониновой специфичности/«мишень рапамицина» (target of rapamycin)

TPA (12-0-тетра-деканоилфорбол-13-ацетат)/ PMA (4-форбол-12-миристат-13-ацетат) - опухолевый индуктор

TRAIL TNF-related apoptosis-inducing ligand

YB-1 Y-box связывающий белок

ZBP-89 zinc-finger-binding protein

PTRCP белок, содержащий повторные участки бета-трансдуцина (beta-trancducin repeat-containing protein)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование молекулярных механизмов дерегуляции супрессора опухолевого роста PDCD4 в опухолевых клетках»

1. ВВЕДЕНИЕ

Одной из главных причин смертности в мире остаются онкологические заболевания. Природа каждой раковой опухоли с молекулярной точки зрения всегда уникальна. Возникновение и прогрессия опухоли определяется многочисленными и разнообразными факторами и процессами, среди которых, однако, общепринятым является представление об онкогенах и генах-супрессоров опухолевого роста, играющих противоположные роли в процессе опухолевой трансформации. Протоонкогены кодируют белки, изменение активности которых приводит к опухолевой трансформации клетки. Гены-супрессоры опухолевого роста, напротив, кодируют белки, которые ингибируют процессы трансформации. Дерегуляция супрессоров опухолевого роста играет одну из ключевых ролей в процессах возникновения и прогрессии опухолей. Более того, восстановление функций супрессоров опухолевого роста в ряде случаев может приводить к ингибированию опухолевых характеристик, таких как пролиферативная активность, инвазивность и других, и, в конечном результате, к гибели опухолевых клеток. Изменения уровня экспрессии или мутации супрессоров опухолевого роста в процессе злокачественной трансформации клеток могут служить диагностическими (так как являются характерными чертами именно опухолевых клеток) и прогностическими (так как могут коррелировать с дальнейшим его течением) маркерами опухолей. Дерегуляция супрессоров опухолевого роста также может коррелировать с чувствительностью опухолевых клеток к различным анти-неопластическим препаратам. Понимание молекулярных механизмов функционирования супрессоров опухолевого роста необходимо для выявления способов восстановления их активности, создания рациональных способов диагностики онкологических заболеваний, выбора оптимальной стратегии лечения, а так же для создания препаратов, характеризующиеся высокой эффективностью и специфичностью воздействия, тем самым, способствуя расширению спектра методов борьбы с онкологическими заболеваниями.

В настоящее время известно большое количество генов и кодируемых ими белков, обладающих свойствами супрессоров опухолевого роста. Несмотря на общность в способности ингибировать возникновение и прогрессию опухолей, механизмы действия супрессоров опухолевого роста чрезвычайно разнообразны. Объектом настоящего исследования является один из супрессоров опухолевого роста, Programmed Cell Death 4 (Pdcd4). Опухолевые клетки различного происхождения часто характеризуются сниженным, вплоть до полной потери, уровнем белка Pdcd4. На сегодняшний день известно, что в основе снижения уровня белка Pdcd4 лежат: усиленная деградация белка,

его сниженная продукция и/или деградация кодирующей белок мРНК. Активация этих процессов обусловлена повышенной активностью проонкогенных процессов. При этом, как показали проведенные ранее исследования, потеря Рс1сс14 способствует прогрессии опухоли. Все это делает исследование свойств, функций и механизмов дерегуляции Рёсё4 в опухолевых клетках актуальной задачей, решение которой позволит глубже понять молекулярные процессы, определяющие прогрессию опухолей, и выделить критические мишени для воздействия на опухолевые клетки. Повышенный интерес к белку Рёсё4 также определяется потенциальной возможностью его использования в диагностических и прогностических целях и, в перспективе, использовать Рёсс14 в качестве молекулярной мишени для лечения онкологических заболеваний.

Данная работа посвящена исследованию молекулярных механизмов, ответственных за супрессию Рс1сс14 в клетках рака легких и меланомы. Несмотря на то, что есть литературные данные свидетельствующие о возможной роли белка Рёсё4 как фактора, препятствующего развитию и прогрессии рака кожи, меланома, являющаяся наиболее агрессивным видом рака кожи, остается неизученной в отношении изменения уровня экспрессии Рёсё4. Что касается опухолей легкого, то для них снижение уровня транскрипта Рс1сс14 является значимым прогностическим фактором, и опухоли легкого рассматриваются как одна из перспективных мишеней для генной терапии с использованием Рс1сс14. Однако молекулярные механизмы дерегуляции Рс1сс14 в клетках рака легкого остаются неизученными.

2. ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Целью работы являлось исследование молекулярных механизмов, ответственных за супрессию РёссМ в клетках рака легких и меланомы.

Для достижения указанной цели были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Исследовать характер продукции белка Рс1сс14 в клетках меланом человека по сравнению с нормальными меланоцитами.

2. Исследовать характер экспрессии Рёсё4 в клетках рака легких по сравнению с клетками нормального бронхиального эпителия.

3. Установить вклад протеолитической деградации белка в супрессию Рс1сс14 в клетках рака легких.

4. Исследовать роль протеинкиназы вБКЗР в регуляции экспрессии супрессора опухолевого роста Рс1сс14 в клетках рака легких.

5. Исследовать роль микроРНК в рапамицин-зависимой регуляции транскрипта Рс1сс14 в клетках рака легких.

6. Исследовать тТСЖ-зависимое ингибирование активности промотора гена Рёсс14 в клетках линий рака легких.

ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫДВИГАЕМЫЕ ДЛЯ ЗАЩИТЫ

1. Уровень супрессора опухолевого роста Рёсё4 снижен в -25% исследованных меланом. Снижение уровня супрессора опухолевого роста в клетках меланом частично опосредовано активностью Ак^сигнального пути.

2. Уровень супрессора опухолевого роста Рёсё4 значительно понижен во всех восьми исследованных клеточных линий рака легких. Изменение уровня белка Рёсё4 не коррелирует с аналогичными изменениями в уровне транскрипта Р(1сс14.

3. Активность протеинкиназы вЗКЗр необходима для поддержания уровня Рёсё4 в клетках рака легких.

4. Протеолитическая деградация не является единственным молекулярным механизмом снижения уровня супрессора опухолевого роста Рс1сс14 в клетках рака легкого, опосредованного активацией Ак1:-сигнального пути.

5. МикроРНК, в частности, микроРНК тШ-21 и т1Я-183, сайты узнавания которых находятся в З'-нетранслируемой области транскрипта Рс1сс14, не опосредуют рапамицин-зависимую супрессию транскрипта Рс1сс14 в клетках линии Са1и-1.

6. Активация АЙ-сигнального пути приводит к опосредованной сигнальным комплексом тТСЖС! супрессии транскрипции с промотора гена Рс1сс14.

4. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

4.1. Ген и белок Pdcd4

4.1.1. Ген и транскрипт Pdcd4

Впервые Pdcd4 {Programmed cell death-4) был изолирован как транскрипт Н731, продуктом которого является ядерный антиген пролиферирующих клеток Рг-28 [1—3]. Позже он же был изолирован как транскрипт, присутствие которого в мышиных кератиноцитах (клетки линии JB6) ингибировало их неопластическую трансформацию [4]. Другой группой исследователей он был описан как МА-3 - транскрипт, индукция которого, как показали последующие исследования, наблюдалась при апоптозе в исследованных клеточных линиях [5]. Вскоре после этого Ониши и Кизаки опубликовали гомологичную кодирующую последовательность, названную TIS - транскрипт (topoisomerase inhibitor suppressed gene), супрессия которого наблюдалась при обработке клеток лимфомы RVC ингибитором топоизомеразы камптотецином [4,6,7]. В последующие годы еще несколькими независимыми группами исследователей были идентифицированы человеческий (197/15а), куриный (Pdcd4) и крысиный (DUG) ортологи [8]. Транскрипт 197/15а дифференциально регулируется интерлейкинами 2, 12 и 15 в NK- и Т-клетках [9]. Уровень транскрипта DUG значительно увеличивался в клетках крысиной инсулиномы INS-1, претерпевающих апоптотическую гибель [10]. Поскольку в ряде модельных систем экспрессия гена была сопряжена с индукцией апоптотического процесса, этот ген получил официальное название Pdcd4 (Programmed cell death-4).

Ген Pdcd4 мыши имеет длину приблизительно 21 т.п.н. включает 11 экзонов и присутствует в единичной копии [11]. Анализ 5'-фланкирующего участка гена показал наличие основных консенсусных последовательностей корового промотора - TATA и СААТ-боксов в позициях -21 и -81, соответственно [11]. В клетках линии COS-1 при помощи люциферазного анализа было показано, что функциональный участок промотора, содержащий эти два элемента, является транскрипционно активным. Чувствительность к камптотецину, ингибитору топоизомеразы I, была ассоциирована с участком промотора от [-132/+160] и обуславливает супрессию транскрипции гена Pdcd4 при воздействии на клетки ингибиторами топоизомераз. Более того, в промоторной области был идентифицирован потенциальный участок связывания транскрипционных факторов NFkB (в позиции от -488 до -470), NF1 [-326/-314], и два сайта связывания С/ЕВР [-424/-416] и [-254/-246]. Но остается неясным, функционируют ли эти последовательности при транскрипции.

вариант 1

нт 1 244-ORF-1653 __3591

1 ^шшшшшшш»^ 1

287l\370 вариант 2

1 Цшшшшшшшшш^ |

нт 1 361-ORF-1737 3675

Б ао 1 15

164

275 327

Ё

тацшш

МАЗ™

.»».»„ЛУ.

440 469

изоформа 1

шшияя

изоформа 2

Рис. 1. Схематическое изображение транскриптов Pdcd4 и изоформ 1 и 2 белка Pdcd4. (А) Открытые рамки считывания (ORF) вариантов 1 и 2 транскрипта показаны штриховкой. Альтернативный экзон, присутствующий в варианте 2 транскрипта, показан черным цветом. Начала и концы открытых рамок считывания и положение альтернативного экзона в варианте 2 транскрипта приведены в нуклеотидах (нт). (Б) Показаны положения МАЗ-доменов в изоформах 1 и 2 белка Pdcd4. N-концевые области белков, различающиеся в изоформах 1 и 2, показаны черным цветом. Положения МАЗ-доменов приведены в аминокислотных остатках (ао).

Ген Pdcd4 человека картирован в локусе 10q24 [12], состоит из 12 экзонов и составляет около 28 т.п.н. Кроме транскрипта размером в 3591 п.н. (GeneBank Асс. NM 014456), кодирующего изоформу 1 белка Pdcd4 из 469 аминокислот (а.о.), существует альтернативно сплайсированный транскрипт Pdcd4 длиной 3675 п.н., кодирующий изоформу 2 (GeneBank Асс. NM_ 145341). Инсерция дополнительного экзона между экзонами 2 и 3 в транскрипте, кодирующем изоформу 2, сдвигает рамку считывания, что приводит к инициации трансляции с AUG-кодона, находящегося в альтернативном экзоне, и синтезу белка из 458 аминокислот, практически полностью идентичного изоформе 1 за исключением N-концевой области полипептидной цепи (Рис. 1). В настоящее время функциональные различия между двумя изоформами Pdcd4 неизвестны.

4.1.2. Структура белка Pdcd4

Белок Pdcd4 (изоформа 1) состоит из 469 а.о. Белковая молекула Pdcd4 имеет характерное строение и состоит из доменов, определяющих способность к узнаванию и связыванию с РНК и белками-партнерами. Полипептидная цепь включает два основных домена на N- и С- концах и два консервативных а-спиральных МА-3 домена [10,13] (Рис. 2).

МА-3 домен является высококонсервативным. Он присутствует в факторах инициации трансляции eIF4G человека и eIF(iso)4F растений, а также в изоформе eIF4G

DAP-5/NAT-l/p97, но отсутствует в белке eIF4G дрожжей [14,15]. МА-3 домен в факторе eIF4G необходим для его взаимодействия с АТФ-зависимой РНК-хеликазой eIF4A, которая необходима для инициации трансляции и релаксации вторичных структур в 5'-нетранслируемых областях (НТО) [16]. И действительно, методами коиммунопреципитации, дрожжевой двугибридной системой, конфокальной иммунофлуоресцентной микроскопии было показано взаимодействие между Pdcd4 и eIF4A, и на основании такого взаимодействия был предложен механизм Pdcd4-3aBncHMoft репрессии трансляции [10,17]. Механизм состоит в том, что Pdcd4 за счет МА-3 домена связывается с eIF4A и тем самым препятствует связыванию eIF4A с eIF4G и eIF4E. Таким образом, Pdcd4 не дает сформироваться комплексу eIF4F и тем самым блокирует трансляцию. В подтверждение предложенного механизма было показано, что хеликазная активность eIF4A ингибируется дозозависимым способом рекомбинантным белком Pdcd4, тем самым, репрессируя кэп-зависимую трансляцию [17].

Мутации в МА-3 домене белка Pdcd4 приводили к полной потере способности Pdcd4 связывать eIF4A и, как результат, ингибировать трансляцию, что указывает на критичную роль МА-3 доменов Pdcd4 в процессе подавления трансляции [16].

N-конец С-конец

NLS NES NES NLS

469

МА-3 m МА-Зс

Sei67"7'-76 Sei457

Рис. 2. Структура белка Pdcd4. Возможные сайты ядерной локализации (NLS) отмечены красным; сигналы ядерного экспорта (NES) зеленым; стрелками указаны сайты фосфорилирования; два консервативных МА-3 домена обозначены сиреневым цветом; РНК-связывающий сайт обозначен голубым цветом; участок богатый аргинином отмечен желтым (адаптировано из [18]).

В последующие годы методом ЯМР-спектроскопии была определена структура С-концевого МА-3 домена (МА-Зс) молекулы белка Pdcd4 [19,20]. Было показано, что МА-3 домен Pdcd4 эффективно конкурирует с eIF4G за взаимодействие с eIF4A. Pdcd4 обладает схожей или даже большей аффинностью связывыания с eIF4A, чем eIF4G, и такое связывание является достаточным для ингибирования инициации трансляции. Методом ЯМР-спектроскопии была также определена структура второго, МА-3 домена (МА-Зш), находящегося ближе к N-концу [21]. Домен МА-Зш структурно и функционально схож с МА-Зс и оба они действуют синергично. Оба МА-3 домена Pdcd4 необходимы для высокоаффинного связывания с eIF4A. Однако регуляция трансляции белком Pdcd4 может быть еще более сложной, так как было показано, что Pdcd4 может напрямую

взаимодействовать с eIF4G, и к тому же обладает еще и РНК-связывающей активностью [22].

Интересно отметить, что гомологи Pdcd4 присутствуют и у низших эукариот, и у растений, но не у дрожжей. Pdcd4 в высших растения уникален тем, что состоит из четырех МА-3 доменов [23].

N-концевая часть домена Pdcd4, как было показано in vitro, обладает способностью связываться с РНК [22]. РНК-связывающий участок белка сильно гидрофилен и содержит протяженные участки основных а.о. Анализ РНК-связывающей активности участка N-концевого домена показал, что существуют две области, богатые остатками аргинина и лизина, с центрами, расположенными вокруг аминокислот 63 и 103 [24]. Эти участки, обозначенные как RBM1 и RBM2, демонстрируют значительную консервативность среди позвоночных, и даже между гомологами Pdcd4 сильно отдаленных видов, таких как S. domuncula, D. melanogaster, X. laevis, D. rerio, M. musculus и H. sapiens. Мутантный анализ показал, что для связывания РНК и Pdcd4 in vivo необходимы оба кластера. Аминокислотные остатки аргинина в позиции 73 и 110, фланкированные остатками глицина и представляющие собой канонические сайты метилирования, играют роль в изменении активности Pdcd4 [25].

Аминокислотная последовательность Pdcd4 содержит множество сайтов фосфорилирования. Фосфорилирование Pdcd4 впервые было продемонстрировано в клетках линии HeLa, но функциональная значимость этого выявленного факта некоторое время оставалась неясной [26]. Позднее было показано, что протеинкиназа Akt/протеинкиназа В специфически фосфорилирует Pdcd4 по серину-67 и серину-457 [27]. Такое фосфорилирование индуцирует два эффекта, первый - ядерную транслокацию Pdcd4, и второй - снижение его способности функционировать как ингибитор АР-1 (активаторный белок 1)-зависимой транскрипции. В дополнение к этому было показано, что в ответ на воздействие митогенов на клетку Pdcd4 быстро фосфорилируется по серину-67 протеинкиназой S6K1 (S6 киназа 1) и затем подвергается убиквитинилированию убиквитин-лигазой SCF (ßTRCP) с последующей деградацией. Нельзя исключить, что такой механизм деградации Pdcd4 в ответ на действие митогенов может привести к эффективному синтезу белка и к последующему росту клеток [28]. Эти данные были подтверждены исследованиями уровня белка Pdcd4 после обработки клеток опухолевым индуктором РМА (4-форбол-12-миристат-13-ацетат) [29]. Отмеченное количественное уменьшение Pdcd4, как было продемонстрировано, является результатом усиления его деградации в протеасомах. Такая деградация опосредована как активацией Akt и S6K1, так и MEK-ERK-сигнального пути [29].

4.1.3. Молекулярные механизмы действия Р(1с(14

Экспрессия Р(1сй4 может оказывать существенное влияние на возникновение и прогрессию опухолей. Каковы молекулярные основы этого феномена?

Выявление факта активности Рс1сс14 как супрессора опухолевого роста в модели клеток ДВ6 [4] послужило отправной точкой для исследования молекулярных путей, которые приводят к супрессии онкогенной трансформации клеток. Так как активация АР-1- и ОТкВ-зависимых транскрипционных активностей, а так же активация орнитин декарбоксилазы являются критическими событиями при неопластической транформации клеток Ш6, была исследована возможность того, что Рёсё4 супрессирует неопластическую трансформацию за счет влияния на эти мишени.

Было показано, что экспрессия А/сс/^ вызывала существенное ингибирование АР-1-зависимой транскрипционной активности, в то время как влияние на ОТкВ-зависимую транскрипцию и активность орнитин декарбоксилазы было незначительным или отсутствовало [30]. Таким образом, мишенью для Рёсё4 является АР-1-зависимая транскрипционная активность. При этом повышенная экспрессия компонентов транскрипционного фактора АР-1 не отменяла Рс1сс14-зависимое ингибирование АР-1-зависимой транскрипции, и авторами не было показано прямого взаимодействия Рёс<14 с компонентами комплекса АР-1. Это позволило им сделать предположение о непосредственном действии Р(1сс14 на факторы, ответственные за трансактивацию АР-1 [30]. Экспрессия Рс1сс14 в тканях легких у мышей, трансгенных по гену люциферазы под контролем АР-1-зависимого промотора, вызывала существенное ингибирование экспрессии репортерного гена [31], а также сопровождалась усилением апоптотической клеточной гибелью и снижением пролиферативной активности клеток [31,32]. Кроме того, ингибирование экспрессии Рс1с<14 при помощи коротких шпилечных РНК в клетках карциномы кишечника линии НТ29 приводило к повышению инвазивных свойств клеток, что предположительно было опосредовано активацией АР-1-зависимой транскрипции [33]. Таким образом, результаты многочисленных экспериментов убедительно демонстрируют, что в клетках Рс1сс14 действует как ингибитор АР-1-зависимой транскрипции, и эта функция Рс1сс14 непосредственно связана с его активностью как супрессора опухолевого роста.

Каким образом Рёсс14 ингибирует АР-1-зависимую транскрипцию в клетках? Было установлено, что Рс1сс14-зависимое ингибирование активности АР-1 непосредственно связано с его способностью ингибировать трансляцию, и мутация 0418А, приводящая к невозможности взаимодействия Рс1сс14 с е!Р4А, также отменяла и ингибирующее действие

Рс1сё4 на АР-1-зависимую транскрипцию [17]. Однако детальная связь между влиянием Рёсё4 на АР-1-зависимую транскрипцию и его способностью ингибировать трансляцию, как и исчерпывающий молекулярный механизм влияния Рёсс14 на активность АР-1, остаются неизвестными.

В других исследованиях было установлено, что эффект Рс1сс14 на АР-1-зависимую транскрипцию определяется прямым взаимодействием Рёсё4 с с-1ип компонентом АР-1, в результате чего блокируется фосфорилирование с-1ип протеинкиназой ЖК [34]. Кроме того, Рёсс14 предотвращает взаимодействие с-1ип с его ко-активатором рЗОО, что также негативно влияет на трансактивационный потенциал транскрипционного фактора [34]. Наконец, Вонг и его коллеги показали, что супрессия транскрипта Рйсй4 приводит к увеличению уровня белка с-1ип в клетке, тем самым способствуя активации АР-1-зависимой транскрипции [33]. Очевидные различия и даже противоречия в экспериментальных данных могут определяться существованием альтернативных механизмов влияния Рёсё4 на АР-1 -зависимую транскрипцию, реализация которых может зависеть от типа клеток. Косвенно это подтверждается способностью мутированных версий Рс1сс14, характеризующихся преимущественно цитоплазматической или ядерной локализацией, эффективно ингибировать АР-1-зависимую транскрипцию. В случае с мутантом Рс1с(14, локализованном в ядре клетки, его влияние на активность АР-1 через непосредственное ингибирование процесса трансляции исключена, что предполагает существование других альтернативных механизмов ингибирования [27].

Рис. 3. Схема регуляции Рс1сс14 за счет существования обратной связи между АР-1 и Р<1сс14 при участии тьЯ-И. -р снижение экспрессии; \ увеличение экспрессии,; Рс1сс14 - транскрипт; Рс1сс14 - белок.

Опубликованные новые данные указывают на то, что в клетках гепатоклеточной карциномы активация АР-1 может напрямую активировать транскрипцию микроРНК 21, для которой, в свою очередь, мРНК Р(1сс14 является одной из мишеней [35]. Таким образом, показано существование обратной связи между АР-1 и Рс1сс14 при участии аш7?-2/ (Рис. 3). Помимо этого, выявлен еще один молекулярный механизм, в котором ингибирование тШ-21 в клетках гепатоклеточной карциномы приводит к повышению уровня опухолевого супрессора РТЕЫ [36]. Ченг и соавторы показали, что потеря РТЕИ

РТЕИ Н

т1Я-21

Рс/сФ 1 *

АЫ-1 Рёсс14-1 АР-1

приводит к активации Akt, таким образом PTEN является регулятором Akt-сигнального пути [37]. В то же время PTEN является мишенью miR-21 и, действуя на него, miR-21 приводит к активации Akt-сигнального пути [38,39]. Таким образом, miR-21 приводит к супрессии не только Pdcd4, но и к супрессии PTEN, что в свою очередь приводит к активации Akt-сигнального пути и тем самым еще больше усиливает супрессию Pdcd4.

Было показано, что в клетках рака простаты белок Pdcd4 взаимодействует с транскрипционным фактором Twist 1 и тем самым отрицательно регулирует мишень Twist 1, белок YB-1 (Y-box связывающий белок) [40]. Pdcd4 взаимодействует с ДНК связывающим доменом Twistl, и тем самым ингибирует его ДНК связывающую способность и экспрессию белка YB-1. Показано, что транскрипционный фактор Twistl является компонентом нескольких сигнальных путей, которые контролируют клеточный рост, апоптоз, дифференциацию и превращение дифференцированных эпителиальных клеток в мезенхимальные, обладающих повышенной миграционной активностью [41]. Белок YB-1, в свою очередь, играет одну из ключевых ролей в пролиферации и химиотерапевтической устойчивости раковых клеток [42]. Повышенное содержание YB-1 в опухолях молочной железы коррелирует с потерей Е-кадгерина и является признаком высокой вероятности метастазирования и плохого прогноза лечения [43,44]. Таким образом, за счет взаимодействия с Twistl, Pdcd4 негативно регулирует экспрессию белка YB-1, который вовлечен в процесс злокачественного роста клеток и приобретения опухолевыми клетками устойчивости к химиотерапии.

Известен еще один пример, когда Pdcd4 действует за счет прямого взаимодействия с транскрипционным фактором. Так, было показано, что в клетках мультиформной глиобластомы линий U251 и LN229, которые стабильно сверхэкспрессируют Pdcd4, происходит ингибирование NF-кВ-зависимой активации транскрипции [45]. Авторы показали, что сверхэкспрессия Pdcd4 препятствует локализации белка р65 в ядре за счет непосредственного взаимодействия Pdcd4 с белком р65 в цитоплазме, а для активации NF-кВ-зависимой транскрипции необходима аккумуляция всех субъединиц фактора NF-кВ в ядре. Таким образом, Pdcd4-peгyлиpyeмaя доступность белка р65 в ядре является лимитирующим фактором для генов-мишеней NF-кВ, в частности тех, которые определяют инвазивные свойства клеток.

Как упоминалось выше, Pdcd4 способен взаимодействовать с eIF4A, что приводит к ингибированию хеликазной активности последнего [10,16]. Кроме того, Pdcd4 также способен взаимодействовать с eIF4G и предотвращать его связывание с eIF4A [17]. Оба эти взаимодействия препятствуют формированию комплекса eIF4A с eIF4G и, как следствие, приводят к ингибированию хеликазной активности eIF4A и ингибированию

е1Р4А-зависимой трансляции с транскриптов с высокоструктурированными 5'-нетранслируемыми областями (Рис. 4) [16]. Следует отметить, что высокоструктурированные 5'-НТО характерны для транскриптов, кодирующих факторы роста, протоонкогены, и белки, необходимые для клеточного роста [46]. Рс1сс14-зависимое ингибирование трансляции с этих транскриптов может являться одним из механистических объяснений свойств Рёсс14 как супрессора опухолевого роста.

Рис. 4. Механизм ингибирования трансляции за счет связывания Pdcd4 с eIF4A и

Далее, Бом и его коллеги обнаружили, что Pdcd4 с помощью N-концевого домена может взаимодействовать с молекулами РНК. Авторы предположили, что благодаря этой активности Pdcd4 может участвовать в регуляции ядерного метаболизма РНК, а так же транспорта или процессинга РНК [22]. В подтверждение этого механизма трансляционной супресии при помощи белка Pdcd4 были выявлены некоторые мРНК мишени Pdcd4. Так, мРНК р53 является первой обнаруженной физиологической мишенью для Pdcd4 [47]. Показано, что Pdcd4 связывается мРНК р53 in vivo и супрессирует трансляцию с неё. Эффект ингибирования трансляции зависит от способности Pdcd4 связываться с eIF4A и опосредован 5'-НТО мРНК р53, которая формирует стабильные шпилечные структуры. Показано, что обработка клеток ДНК-повреждающимим агентами (УФ или ингибитор топоизомераз - этопозид) понижает экспрессию Pdcd4. Это указывает на то, что трансляционная супрессия при помощи Pdcd4 играет роль в поддержании низкого уровня р53 в неповрежденных клетках, и эта супрессия отменяется низким уровнем Pdcd4 после повреждения ДНК.

Так же в качестве трансляционной мишени для Pdcd4 была идентифицирована протоонкогенная мРНК гена c-myb [48]. Показано, что Pdcd4 супрессирует трансляцию

Pdcd4

eIF4G.

мРНК c-myb независимо от 5'-НТО, а супрессия зависит от взаимодействия с последовательностью, локализованной в кодирующем участке с-туЪ. N-концевой РНК-связывающий домен Pdcd4 опосредует связывание Pdcd4 со вторичной структурой РНК, которая формируется Pdcd4-3aBHCHMbiM элементом в мРНК c-myb, что, по-видимому, указывает на то, что Pdcd4 узнает не конкретную последовательность мРНК, а скорее непосредственно вторичную структуру, образованную этой РНК. Недавно было показано, что мРНК протоонкогена A-myb так же является мишенью для трансляционной супрессии Pdcd4 [49]. Трансляционная супрессия в данном случае так же зависит от РНК-связывающего домена на N-конце Pdcd4 и от последовательности, локализованной внутри кодирующей последовательности мРНК A-myb. Полученные данные указывают на то, что Pdcd4 вызывает ингибирование трансляции только тогда, когда непосредственно происходит процесс трансляции с мРНК-мишени c-myb и A-myb. Таким образом, выявлен новый механизм при котором Pdcd4 супрессирует трансляцию, ингибируя фазу элонгации.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Вихрева, Полина Никитична, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Matsuhashi S. et al. Preparation of monoclonal antibodies against nuclear antigens in a DNA affinity purified protein fraction from chick embryo extract // Jpn J Exp Med. 1989/08/01 ed. 1989. Vol. 59, № 4. P. 139-147.

2. Matsuhashi S., Watanabe T., Hori K. An antigen expressed in proliferating cells at late Gl-S phase // Exp Cell Res. 1987/06/01 ed. 1987. Vol. 170, № 2. P. 351-362.

3. Yoshinaga H. et al. Novel human PDCD4 (H731) gene expressed in proliferative cells is expressed in the small duct epithelial cells of the breast as revealed by an anti-H731 antibody// Pathol Int. 2000/01/13 ed. 1999. Vol. 49, № 12. P. 1067-1077.

4. Cmarik J.L. et al. Differentially expressed protein Pdcd4 inhibits tumor promoter-induced neoplastic transformation // Proc Natl Acad Sci USA. 1999/11/26 ed. 1999. Vol. 96, № 24. P. 14037-14042.

5. Shibahara K. et al. Isolation of a novel mouse gene MA-3 that is induced upon programmed cell death // Gene. 1995/12/12 ed. 1995. Vol. 166, № 2. P. 297-301.

6. Nieves-Alicea R. et al. Programmed cell death 4 inhibits breast cancer cell invasion by increasing tissue inhibitor of metalloproteinases-2 expression // Breast Cancer Res Treat. 2008/04/04 ed. 2009. Vol. 114, № 2. P. 203-209.

7. Onishi Y., Kizaki H. Molecular cloning of the genes suppressed in RVC lymphoma cells by topoisomerase inhibitors. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. Vol. 228, № l.P. 7-13.

8. Schlichter U. et al. Identification of the myb-inducible promoter of the chicken Pdcd4 gene // Biochim Biophys Acta. 2001/07/27 ed. 2001. Vol. 1520, № 1. P. 99-104.

9. Azzoni L. et al. Differential transcriptional regulation of CD161 and a novel gene, 197/15a, by IL-2, IL-15, and IL-12 in NK and T cells // J Immunol. 1998/10/06 ed. 1998. Vol. 161, №7. P. 3493-3500.

10. Goke A. et al. DUG is a novel homologue of translation initiation factor 4G that binds eIF4A // Biochem Biophys Res Commun. 2002/09/11 ed. 2002. Vol. 297, № 1. P. 78-82.

11. Onishi Y., Hashimoto S., Kizaki H. Cloning of the TIS gene suppressed by topoisomerase inhibitors. // Gene. 1998. Vol. 215, № 2. P. 453-459.

12. Soejima H. et al. Assignment of the programmed cell death 4 gene (PDCD4) to human chromosome band 10q24 by in situ hybridization // Cytogenet Cell Genet. 2000/01/21 ed. 1999. Vol. 87, № 1-2. P. 113-114.

13. Kang M.J. et al. Up-regulation of PDCD4 in senescent human diploid fibroblasts // Biochem Biophys Res Commun. 2002/06/11 ed. 2002. Vol. 293, № 1. P. 617-621.

14. Aravind L., Koonin E. V. Eukaryote-specific domains in translation initiation factors: implications for translation regulation and evolution of the translation system // Genome Res. 2000/08/25 ed. 2000. Vol. 10, № 8. P. 1172-1184.

15. Ponting С.P. Novel eIF4G domain homologues linking mRNA translation with nonsensemediated mRNA decay // Trends Biochem Sei. 2000/09/06 ed. 2000. Vol. 25, № 9. P. 423^26.

16. Yang H.S. et al. A novel function of the MA-3 domains in transformation and translation suppressor Pdcd4 is essential for its binding to eukaryotic translation initiation factor 4A // Mol Cell Biol. 2004/04/15 ed. 2004. Vol. 24, № 9. P. 3894-3906.

17. Yang H.S. et al. The transformation suppressor Pdcd4 is a novel eukaryotic translation initiation factor 4A binding protein that inhibits translation // Mol Cell Biol. 2002/12/17 ed. 2003. Vol. 23, № 1. P. 26-37.

18. Lankat-Buttgereit В., Goke R., Göke R. The tumour suppressor Pdcd4: recent advances in the elucidation of function and regulation // Biol Cell. 2009/04/10 ed. 2009. Vol. 101, № 6. P. 309-317.

19. Waters L.C. et al. Structure of the C-terminal MA-3 domain of the tumour suppressor protein Pdcd4 and characterization of its interaction with eIF4A // Oncogene. 2007/02/22 ed. 2007. Vol. 26, № 34. P. 4941-4950.

20. LaRonde-LeBlanc N. et al. Structural basis for inhibition of translation by the tumor suppressor Pdcd4. // Mol. Cell. Biol. 2006/10/25 ed. 2007. Vol. 27, № 1. P. 147-156.

21. Suzuki C. et al. PDCD4 inhibits translation initiation by binding to eIF4A using both its MA3 domains // Proc Natl Acad Sei USA. 2008/02/26 ed. 2008. Vol. 105, № 9. P. 32743279.

22. Böhm M. et al. The transformation suppressor protein Pdcd4 shuttles between nucleus and cytoplasm and binds RNA // Oncogene. 2003/08/02 ed. 2003. Vol. 22, № 31. P. 49054910.

23. Cheng S., Liu R., Gallie D.R. The unique evolution of the programmed cell death 4 protein in plants. // BMC Evol. Biol. 2013. Vol. 13. P. 199.

24. Wedeken L. et al. Association of Tumor Suppressor Protein Pdcd4 With Ribosomes Is Mediated by Protein-Protein and Protein-RNA Interactions. // Genes Cancer. 2010. Vol. 1, №3. P. 293-301.

25. Powers M. a et al. Protein arginine methyltransferase 5 accelerates tumor growth by arginine methylation of the tumor suppressor programmed cell death 4. // Cancer Res. 2011. Vol. 71, № 16. P. 5579-5587.

26. Yoshinaga, H., S. Matsuhashi, J. Ahaneku, Z. Masaki K.H. Expression and identification of H731 gene product in HeLa cells. // Res. Commun. Biochem. Cell Mol. Biol. 1997. Vol. 1. P. 121-131.

27. Palamarchuk A. et al. Akt phosphorylates and regulates Pdcd4 tumor suppressor protein // Cancer Res. 2005/12/17 ed. 2005. Vol. 65, № 24. P. 11282-11286.

28. Dorrello N.V. et al. S6K1- and betaTRCP-mediated degradation of PDCD4 promotes protein translation and cell growth // Science (80-, ). 2006/10/21 ed. 2006. Vol. 314, № 5798. P. 467-471.

29.

30.

31.

32.

33.

34.

35.

36,

37,

38

39

40

41

42

Schmid T. et al. Translation inhibitor Pdcd4 is targeted for degradation during tumor promotion // Cancer Res. 2008/02/26 ed. 2008. Vol. 68, № 5. P. 1254-1260.

Yang H.S. et al. A novel transformation suppressor, Pdcd4, inhibits AP-1 transactivation but not NF-kappaB or ODC transactivation // Oncogene. 2001/04/21 ed. 2001. Vol. 20, № 6. P. 669-676.

Hwang S.K. et al. Aerosol-delivered programmed cell death 4 enhanced apoptosis, controlled cell cycle and suppressed AP-1 activity in the lungs of AP-1 luciferase reporter mice // Gene Ther. 2007/07/06 ed. 2007. Vol. 14, № 18. P. 1353-1361.

Jin H. et al. Aerosol delivery of urocanic acid-modified chitosan/programmed cell death 4 complex regulated apoptosis, cell cycle, and angiogenesis in lungs of K-ras null mice // Mol Cancer Ther. 2006/05/02 ed. 2006. Vol. 5, № 4. P. 1041-1049.

Wang Q., Sun Z., Yang H.-S.S. Downregulation of tumor suppressor Pdcd4 promotes invasion and activates both beta-catenin/Tcf and AP-1-dependent transcription in colon carcinoma cells // Oncogene. 2007/09/11 ed. 2008. Vol. 27, № 11. P. 1527-1535.

Bitomsky N., Bohm M., Klempnauer K.H. Transformation suppressor protein Pdcd4 interferes with JNK-mediated phosphorylation of c-Jun and recruitment of the coactivator p300 by c-Jun // Oncogene. 2004/08/31 ed. 2004. Vol. 23, № 45. P. 7484-7493.

Zhu Q. et al. miR-21 promotes migration and invasion by the miR-21-PDCD4-AP-l feedback loop in human hepatocellular carcinoma. // Oncol. Rep. 2012. Vol. 27, № 5. P. 1660-1668.

Meng F. et al. MicroRNA-21 regulates expression of the PTEN tumor suppressor gene in human hepatocellular cancer. // Gastroenterology. Elsevier, 2007. Vol. 133, № 2. P. 647658.

Chen Z. et al. Crucial role of p53-dependent cellular senescence in suppression of Pten-deficient tumorigenesis. // Nature. 2005. Vol. 436, № 7051. P. 725-730.

Yuan T.L., Cantley L.C. PI3K pathway alterations in cancer: variations on a theme. // Oncogene. 2008. Vol. 27, № 41. P. 5497-5510.

Yan-Nan B. et al. MicroRNA-21 accelerates hepatocyte proliferation in vitro via PI3K/Akt signaling by targeting PTEN. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2013.

Shiota M. et al. Programmed cell death protein 4 down-regulates Y-box binding protein-1 expression via a direct interaction with Twist 1 to suppress cancer cell growth // Cancer Res. 2009/03/26 ed. 2009. Vol. 69, № 7. P. 3148-3156.

Cheng G.Z., Zhang W., Wang L.-H. Regulation of cancer cell survival, migration, and invasion by Twist: AKT2 comes to interplay. // Cancer Res. 2008. Vol. 68, № 4. P. 957960.

Kuwano M. et al. The role of nuclear Y-box binding protein 1 as a global marker in drug resistance // Mol. Cancer Ther. 2004. Vol. 3, № 11. P. 1485-1492.

43.

44.

45.

46.

47.

48.

49.

50

51

52

53

54

55

56

57

Evdokimova V. et al. Translational activation of snail 1 and other developmentally regulated transcription factors by YB-1 promotes an epithelial-mesenchymal transition. // Cancer Cell. 2009. Vol. 15, № 5. P. 402^115.

Matsumoto K., Bay B.-H. Significance of the Y-box proteins in human cancers. // J. Mol. Genet. Med. 2005. Vol. 1,№ 1. P. 11-17.

Hwang S.-K. et al. Tumor suppressor PDCD4 inhibits NF-KB-dependent transcription in human glioblastoma cells by direct interaction with p65. // Carcinogenesis. 2014.

Van der Velden A.W., Thomas A. A. The role of the 5' untranslated region of an mRNA in translation regulation during development. // Int. J. Biochem. Cell Biol. 1999. Vol. 31, № 1. P. 87-106.

Wedeken L. et al. Tumor suppressor protein Pdcd4 inhibits translation of p53 mRNA. // J. Biol. Chem. 2011. Vol. 286, № 50. P. 42855^12862.

Singh P. et al. Pdcd4 directly binds the coding region of c-myb mRNA and suppresses its translation. // Oncogene. 2011. Vol. 30, № 49. P. 4864-4873.

Biyanee A. et al. A novel mechanism for the control of translation of specific mRNAs by tumor suppressor protein Pdcd4: inhibition of translation elongation. // Oncogene. 2014.

Liwak U. et al. Tumor suppressor PDCD4 represses internal ribosome entry site-mediated translation of antiapoptotic proteins and is regulated by S6 kinase 2. // Mol. Cell. Biol. 2012. Vol. 32, № 10. P. 1818-1829.

Scott F.L. et al. XIAP inhibits caspase-3 and -7 using two binding sites: evolutionarily conserved mechanism of IAPs. // EMBO J. 2005. Vol. 24, № 3. P. 645-655.

Harada H., Grant S. Apoptosis regulators. // Rev. Clin. Exp. Hematol. 2003. Vol. 7, № 2. P. 117-138.

Frenzel A. et al. Bcl2 family proteins in carcinogenesis and the treatment of cancer. // Apoptosis. 2009. Vol. 14, № 4. P. 584-596.

Leupold J.H. et al. Tumor suppressor Pdcd4 inhibits invasion/intravasation and regulates urokinase receptor (u-PAR) gene expression via Sp-transcription factors // Oncogene. 2007/02/14 ed. 2007. Vol. 26, № 31. P. 4550^1562.

Goke R. et al. Programmed cell death protein 4 suppresses CDKl/cdc2 via induction of p21(Wafl/Cipl) // Am J Physiol Cell Physiol. 2004/08/20 ed. 2004. Vol. 287, № 6. P. C1541-6.

Bitomsky N. et al. siRNA-mediated knockdown of Pdcd4 expression causes upregulation of p21(Wafl/Cipl) expression // Oncogene. 2008/04/23 ed. 2008. Vol. 27, № 35. P. 4820-4829.

Lankat-Buttgereit B. et al. The action of Pdcd4 may be cell type specific: evidence that reduction of dUTPase levels might contribute to its tumor suppressor activity in Bon-1 cells // Apoptosis. 2007/10/24 ed. 2008. Vol. 13, № 1. P. 157-164.

58.

59.

60.

61.

62.

63.

64.

65

66

67

68

69

70

71

Kumar N. et al. Tumor suppressor protein Pdcd4 interacts with Daxx and modulates the stability of Daxx and the Hipk2-dependent phosphorylation of p53 at serine 46. // Oncogenesis. Nature Publishing Group, 2013. Vol. 2, № 1. P. e37.

Gao F. et al. PDCD4 gene silencing in gliomas is associated with 5'CpG island methylation and unfavourable prognosis // J Cell Mol Med. 2008/09/17 ed. 2009. Vol. 13, № 10. P. 4257^1267.

Fan H. et al. DNA methyltransferase 1 knockdown induces silenced CDH1 gene reexpression by demethylation of methylated CpG in hepatocellular carcinoma cell line SMMC-7721 // Eur J Gastroenterol Hepatol. 2007/12/01 ed. 2007. Vol. 19, № 11. P. 952961.

Wen Y.H. et al. Alterations in the expression of PDCD4 in ductal carcinoma of the breast // Oncol Rep. 2007/11/06 ed. 2007. Vol. 18, № 6. P. 1387-1393.

Qiu X. et al. HBx-mediated miR-21 upregulation represses tumor-suppressor function of PDCD4 in hepatocellular carcinoma. // Oncogene. 2013. Vol. 32, № 27. P. 3296-3305.

Frankel L.B. et al. Programmed cell death 4 (PDCD4) is an important functional target of the microRNA miR-21 in breast cancer cells // J Biol Chem. 2007/11/10 ed. 2008. Vol. 283, № 2. P. 1026-1033.

Hammond S.M. MicroRNAs as oncogenes // Curr Opin Genet Dev. 2005/12/20 ed. 2006. Vol. 16, № 1. P. 4-9.

Esquela-Kerscher A., Slack F.J. Oncomirs - microRNAs with a role in cancer // Nat Rev Cancer. 2006/03/25 ed. 2006. Vol. 6, № 4. P. 259-269.

Croce C.M., Calin G.A. miRNAs, cancer, and stem cell division // Cell. 2005/07/13 ed. 2005. Vol. 122, № LP. 6-7.

Meng F. et al. Involvement of human micro-RNA in growth and response to chemotherapy in human cholangiocarcinoma cell lines // Gastroenterology. 2006/06/10 ed. 2006. Vol. 130, № 7. P. 2113-2129.

Wang M. et al. Downregulation of microRNA-182 inhibits cell growth and invasion by targeting programmed cell death 4 in human lung adenocarcinoma cells. // Tumour Biol. 2013.

Wang Y.-Q. et al. MicroRNA-182 promotes cell growth, invasion, and chemoresistance by targeting programmed cell death 4 (PDCD4) in human ovarian carcinomas. // J. Cell. Biochem. 2013. Vol. 114, № 7. P. 1464-1473.

Liu X. et al. MicroRNA-499-5p promotes cellular invasion and tumor metastasis in colorectal cancer by targeting F0X04 and PDCD4. // Carcinogenesis. 2011. Vol. 32, № 12. P. 1798-1805.

Li J. et al. miR-183 inhibits TGF-betal-induced apoptosis by downregulation of PDCD4 expression in human hepatocellular carcinoma cells. // BMC Cancer. 2010. Vol. 10. P. 354.

72. Zhu S. et al. MicroRNA-21 targets the tumor suppressor gene tropomyosin 1 (TPM1) // J Biol Chem. 2007/03/17 ed. 2007. Vol. 282, № 19. P. 14328-14336.

73. Asangani I.A. et al. MicroRNA-21 (miR-21) post-transcriptionally downregulates tumor suppressor Pdcd4 and stimulates invasion, intravasation and metastasis in colorectal cancer//Oncogene. 2007/10/31 ed. 2008. Vol. 27, № 15. P. 2128-2136.

74. Lu Z. et al. MicroRNA-21 promotes cell transformation by targeting the programmed cell death 4 gene // Oncogene. 2008/04/01 ed. 2008. Vol. 27, № 31. P. 4373^379.

75. Zhu S. et al. MicroRNA-21 targets tumor suppressor genes in invasion and metastasis // Cell Res. 2008/02/14 ed. 2008. Vol. 18, № 3. P. 350-359.

76. Filipowicz W., Bhattacharyya S.N., Sonenberg N. Mechanisms of post-transcriptional regulation by microRNAs: are the answers in sight? // Nat Rev Genet. 2008/01/17 ed. 2008. Vol. 9, № 2. P. 102-114.

77. Meijer H.A. et al. Translational Repression and eIF4A2 Activity Are Critical for MicroRNA-Mediated Gene Regulation // Science (80-. ). 2013. Vol. 340, № 6128. P. 8285.

78. Wang J. et al. miR-499 protects cardiomyocytes from H 20 2-induced apoptosis via its effects on Pdcd4 and Pacs2. // RNA Biol. 2014. Vol. 11, № 4.

79. Li H., Xu H., Shen H. microRNA-106a modulates cisplatin sensitivity by targeting PDCD4 in human ovarian cancer cells. // Oncol. Lett. 2014. Vol. 7, № 1. P. 183-188.

80. Kim J. et al. Splicing factor SRSF3 represses the translation of programmed cell death 4 mRNA by associating with the 5'-UTR region. // Cell Death Differ. Nature Publishing Group, 2014. Vol. 21, № 3. P. 481^190.

81. Tang Y. et al. Downregulation of splicing factor SRSF3 induces p53p, an alternatively spliced isoform of p53 that promotes cellular senescence. // Oncogene. 2013. Vol. 32, № 22. P. 2792-2798.

82. . He X. et al. Knockdown of splicing factor SRp20 causes apoptosis in ovarian cancer cells

and its expression is associated with malignancy of epithelial ovarian cancer. // Oncogene. 2011. Vol. 30, №3. P. 356-365.

83. Piekielko-Witkowska A. et al. Disturbed expression of splicing factors in renal cancer affects alternative splicing of apoptosis regulators, oncogenes, and tumor suppressors. // PLoS One. 2010. Vol. 5, № 10. P. el3690.

84. Mudduluru G. et al. Loss of programmed cell death 4 expression marks adenoma-carcinoma transition, correlates inversely with phosphorylated protein kinase B, and is an independent prognostic factor in resected colorectal cancer // Cancer. 2007/09/13 ed.

2007. Vol. 110, № 8. P. 1697-1707.

85. Carayol N. et al. Suppression of programmed cell death 4 (PDCD4) protein expression by BCR-ABL-regulated engagement of the mTOR/p70 S6 kinase pathway. // J. Biol. Chem.

2008. Vol. 283, № 13. P. 8601-8610.

86.

87.

88.

89.

90.

91.

92.

93.

94,

95,

96

97

98

99

Matsuhashi S. et al. Control of a tumor suppressor PDCD4: Degradation mechanisms of the protein in hepatocellular carcinoma cells. // Cell. Signal. 2014. Vol. 26, № 3. P. 603610.

Schmid T. et al. Inflammation-induced loss of Pdcd4 is mediated by phosphorylation-dependent degradation // Carcinogenesis. 2011/07/21 ed. 2011. Vol. 32, № 10. P. 14271433.

Karin M. The IkappaB kinase - a bridge between inflammation and cancer // Cell Res. 2008/02/28 ed. 2008. Vol. 18, № 3. P. 334-342.

Cheng Y. et al. MicroRNA-21 protects against the H(2)0(2)-induced injury on cardiac myocytes via its target gene PDCD4. // J. Mol. Cell. Cardiol. 2009. Vol. 47, № 1. P. 5-14.

Sheedy F.J. et al. Negative regulation of TLR4 via targeting of the proinflammatory tumor suppressor PDCD4 by the microRNA miR-21 // Nat Immunol. 2009/12/01 ed. Nature Publishing Group, 2010. Vol. 11, № 2. P. 141-147.

Allgayer H. Pdcd4, a colon cancer prognostic that is regulated by a microRNA // Crit Rev Oncol Hematol. 2009/10/20 ed. 2010. Vol. 73, № 3. P. 185-191.

Talotta F. et al. An autoregulatory loop mediated by miR-21 and PDCD4 controls the AP-1 activity in RAS transformation // Oncogene. 2008/10/14 ed. 2009. Vol. 28, № 1. P. 7384.

Lankat-Buttgereit B., Goke R., Goke R. Programmed cell death protein 4 (pdcd4): a novel target for antineoplastic therapy? // Biol Cell. 2003/11/25 ed. 2003. Vol. 95, № 8. P. 515519.

Goke R. et al. Programmed cell death protein 4 (PDCD4) acts as a tumor suppressor in neuroendocrine tumor cells // Ann N Y Acad Sci. 2004/05/22 ed. 2004. Vol. 1014, № 1. P. 220-221.

Matsuhashi S. et al. Expression patterns of programmed cell death 4 protein in normal human skin and some representative skin lesions // Exp Dermatol. 2007/02/09 ed. 2007. Vol. 16, №3. P. 179-184.

Zhang H. et al. Involvement of programmed cell death 4 in transforming growth factor-betal-induced apoptosis in human hepatocellular carcinoma // Oncogene. 2006/05/10 ed. 2006. Vol. 25, №45. P. 6101-6112.

Ozpolat B. et al. Programmed cell death-4 tumor suppressor protein contributes to retinoic acid-induced terminal granulocytic differentiation of human myeloid leukemia cells // Mol Cancer Res. 2007/01/30 ed. 2007. Vol. 5, № 1. P. 95-108.

Afonja O. et al. Induction of PDCD4 tumor suppressor gene expression by RAR agonists, antiestrogen and HER-2/neu antagonist in breast cancer cells. Evidence for a role in apoptosis // Oncogene. 2004/09/14 ed. 2004. Vol. 23, № 49. P. 8135-8145.

Woodard J. et al. Statin-dependent suppression of the Akt/mammalian target of rapamycin signaling cascade and programmed cell death 4 up-regulation in renal cell carcinoma // Clin Cancer Res. 2008/07/17 ed. 2008. Vol. 14, № 14. P. 4640^1649.

100.

101.

102.

103.

104.

105,

106,

107,

108

109

110

111

112

113

114

Nakashima M. et al. Regulation of tumor suppressor PDCD4 by novel protein kinase C isoforms. // Biochim. Biophys. Acta. 2010. Vol. 1803, № 9. P. 1020-1027.

Nishizuka Y. The role of protein kinase C in cell surface signal transduction and tumour promotion // Nature. 1984/04/19 ed. 1984. Vol. 308, № 5961. P. 693-698.

Keranen L.M., Dutil E.M., Newton A.C. Protein kinase C is regulated in vivo by three functionally distinct phosphorylations // Curr Biol. 1995/12/01 ed. 1995. Vol. 5, № 12. P. 1394-1403.

Jansen A.P., Camalier C.E., Colburn N.H. Epidermal expression of the translation inhibitor programmed cell death 4 suppresses tumorigenesis // Cancer Res. 2005/07/19 ed. 2005. Vol. 65, № 14. P. 6034-6041.

Fay M.M. et al. Enhanced Arginine Methylation of Programmed Cell Death 4 during Nutrient Deprivation Promotes Tumor Cell Viability. // J. Biol. Chem. 2014.

Jurisicova A. et al. Expression and regulation of genes associated with cell death during murine preimplantation embryo development. // Mol. Reprod. Dev. 1998. Vol. 51, № 3. P. 243-253.

Gao F. et al. Frequent loss of PDCD4 expression in human glioma: possible role in the tumorigenesis of glioma // Oncol Rep. 2006/12/05 ed. 2007. Vol. 17, № 1. P. 123-128.

Difilippantonio S. et al. Gene expression profiles in human non-small and small-cell lung cancers // Eur J Cancer. 2003/08/23 ed. 2003. Vol. 39, № 13. P. 1936-1947.

Kalinichenko S. V et al. Pdcd4 protein and mRNA level alterations do not correlate in human lung tumors // Lung Cancer. 2008/05/07 ed. 2008. Vol. 62, № 2. P. 173-180.

Chen Y. et al. Loss of PDCD4 expression in human lung cancer correlates with tumour progression and prognosis. // J. Pathol. 2003. Vol. 200, № 5. P. 640-646.

Zhang Y. et al. Transcriptional profiling of Epstein-Barr virus (EBV) genes and host cellular genes in nasal NK/T-cell lymphoma and chronic active EBV infection // Br J Cancer. 2006/02/02 ed. 2006. Vol. 94, № 4. P. 599-608.

Schlichter U. et al. The chicken Pdcd4 gene is regulated by v-Myb // Oncogene. 2001/04/21 ed. 2001. Vol. 20, № 2. P. 231-239.

Appl H., Klempnauer K.H. Targeted disruption of c-myb in the chicken pre B-cell line DT40 // Oncogene. 2002/06/26 ed. 2002. Vol. 21, № 19. P. 3076-3081.

Ramsay R.G., Gonda T.J. MYB function in normal and cancer cells. // Nat. Rev. Cancer. Nature Publishing Group, 2008. Vol. 8, № 7. P. 523-534.

Wang J., Zhang Y. [Expression of programmed cell death 4 protein is closely correlated with laryngeal squamous cell carcinomas] // Lin Chung Er Bi Yan Hou Tou Jing Wai Ke ZaZhi. 2011/09/29 ed. 2011. Vol. 25, № 12. P. 539-541.

115.

116.

117.

118.

119.

120.

121.

122.

123

124

125

126

127

128

Yang H.S. et al. Tumorigenesis suppressor Pdcd4 down-regulates mitogen-activated protein kinase kinase kinase kinase 1 expression to suppress colon carcinoma cell invasion // Mol Cell Biol. 2006/02/02 ed. 2006. Vol. 26, № 4. P. 1297-1306.

Jansen A.P. et al. Characterization of programmed cell death 4 in multiple human cancers reveals a novel enhancer of drug sensitivity // Mol Cancer Ther. 2004/02/27 ed. 2004. Vol. 3, № 2. P. 103-110.

Pardali K., Moustakas A. Actions of TGF-beta as tumor suppressor and pro-metastatic factor in human cancer. // Biochim. Biophys. Acta. 2007. Vol. 1775, № l.P. 21-62.

Davis B.N. et al. SMAD proteins control DROSHA-mediated microRNA maturation // Nature. 2008/06/13 ed. 2008. Vol. 454, № 7200. P. 56-61.

Yu Y. et al. MicroRNA-21 induces sternness by downregulating transforming growth factor beta receptor 2 (TGF|3R2) in colon cancer cells. // Carcinogenesis. 2012. Vol. 33, № 1. P. 68-76.

Wang W. et al. Programmed cell death 4 (PDCD4) mediates the sensitivity of gastric cancer cells to TRAIL-induced apoptosis by down-regulation of FLIP expression. // Exp. Cell Res. 2010. Vol. 316, № 15. P. 2456-2464.

Ashkenazi A. et al. Safety and antitumor activity of recombinant soluble Apo2 ligand. // J. Clin. Invest. 1999. Vol. 104, № 2. P. 155-162.

Eto K. et al. Loss of programmed cell death 4 induces apoptosis by promoting the translation of procaspase-3 mRNA // Cell Death Differ. 2011/10/01 ed. 2012. Vol. 19, № 4. P. 573-581.

Wang X., Patenode C., Roizman B. US3 protein kinase of HSV-1 cycles between the cytoplasm and nucleus and interacts with programmed cell death protein 4 (PDCD4) to block apoptosis // Proc Natl Acad Sci USA. 2011/08/17 ed. 2011. Vol. 108, № 35. P. 14632-14636.

Yang H.-S. et al. Pdcd4 suppresses tumor phenotype in JB6 cells by inhibiting AP-1 transactivation. // Oncogene. 2003. Vol. 22, № 24. P. 3712-3720.

Hsu T.C. et al. Activator protein 1 (AP-1)- and nuclear factor kappaB (NF-kappaB)-dependent transcriptional events in carcinogenesis. // Free Radic. Biol. Med. 2000. Vol. 28, №9. P. 1338-1348.

Hilliard A. et al. Translational regulation of autoimmune inflammation and lymphoma genesis by programmed cell death 4 // J Immunol. 2006/11/23 ed. 2006. Vol. 177, № 11. P. 8095-8102.

Reis P.P. et al. Programmed cell death 4 loss increases tumor cell invasion and is regulated by miR-21 in oral squamous cell carcinoma. // Mol. Cancer. 2010. Vol. 9. P. 238.

Wei N.A. et al. Loss of Programmed cell death 4 (Pdcd4) associates with the progression of ovarian cancer. // Mol. Cancer. 2009. Vol. 8. P. 70.

129.

130.

131.

132.

133.

134.

135.

136.

137,

138,

139

140

141

142

Wolfe A.L. et al. RNA G-quadruplexes cause eIF4A-dependent oncogene translation in cancer // Nature. Nature Publishing Group, 2014.

Bugaut A., Balasubramanian S. 5'-UTR RNA G-quadruplexes: translation regulation and targeting. // Nucleic Acids Res. 2012. Vol. 40, № 11. P. 4727-4741.

Boussemart L. et al. eIF4F is a nexus of resistance to anti-BRAF and anti-MEK cancer therapies // Nature. Nature Publishing Group, a division of Macmillan Publishers Limited. All Rights Reserved., 2014. Vol. advance on.

Dimova I., Popivanov G., Djonov V. Angiogenesis in cancer - general pathways and their therapeutic implications. // J. BUON. Vol. 19, № 1. P. 15-21.

Krug S. et al. Knock-down of Pdcd4 stimulates angiogenesis via up-regulation of angiopoietin-2. // Biochim. Biophys. Acta. 2012/02/01 ed. 2012. Vol. 1823, № 4. P. 789799.

Bergsland E.K. Vascular endothelial growth factor as a therapeutic target in cancer. // Am. J. Health. Syst. Pharm. 2004. Vol. 61, № 21 Suppl 5. P. S4-11.

Folkman J. Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease. // Nat. Med. 1995. Vol. 1,№ 1. P. 27-31.

Sandler A.B., Johnson D.H., Herbst R.S. Anti-vascular endothelial growth factor monoclonals in non-small cell lung cancer. // Clin. Cancer Res. 2004. Vol. 10, № 12 Pt 2. P. 4258s-4262s.

Cox G. et al. Angiogenesis and non-small cell lung cancer. // Lung Cancer. 2000. Vol. 27, №2. P. 81-100.

Lankat-Buttgereit B. et al. Pdcd4 inhibits growth of tumor cells by suppression of carbonic anhydrase type II // Mol Cell Endocrinol. 2004/04/06 ed. 2004. Vol. 214, № 1-2. P. 149-153.

Supuran C.T. Carbonic anhydrases: novel therapeutic applications for inhibitors and activators. // Nat. Rev. Drug Discov. Nature Publishing Group, 2008. Vol. 7, Jf« 2. P. 168— 181.

Lankat-Buttgereit B. et al. Knockdown of Pdcd4 results in induction of proprotein convertase 1/3 and potent secretion of chromogranin A and secretogranin II in a neuroendocrine cell line // Biol Cell. 2008/06/14 ed. 2008. Vol. 100, № 12. P. 703-715.

Allgayer H. Molecular regulation of an invasion-related molecule—options for tumour staging and clinical strategies // Eur J Cancer. 2006/04/18 ed. 2006. Vol. 42, № 7. P. 811819.

Heiss M.M. et al. Individual development and uPA-receptor expression of disseminated tumour cells in bone marrow: a reference to early systemic disease in solid cancer // Nat Med. 1995/10/01 ed. 1995. Vol. 1, № 10. P. 1035-1039.

143.

144.

145.

146.

147.

148

149

150

151

152

153

154

155

156

157

Janicke F. et al. Urokinase (uPA) and its inhibitor PAI-1 are strong and independent prognostic factors in node-negative breast cancer // Breast Cancer Res Treat. 1993/01/01 ed. 1993. Vol. 24, № 3. P. 195-208.

Pedersen H. et al. Urokinase and plasminogen activator inhibitor type 1 in pulmonary adenocarcinoma//Cancer Res. 1994/01/01 ed. 1994. Vol. 54, № 1. P. 120-123.

Ganesh S. et al. Urokinase receptor and colorectal cancer survival // Lancet. 1994/08/06 ed. 1994. Vol. 344, № 8919. P. 401^102.

González-Villasana V. et al. Programmed cell death 4 inhibits leptin-induced breast cancer cell invasion. // Oncol. Rep. 2012. Vol. 27, № 3. P. 861-866.

Jin X. et al. Frizzled 4 regulates sternness and invasiveness of migrating glioma cells established by serial intracranial transplantation // Cancer Res. 2011/03/03 ed. 2011. Vol. 71, №8. P. 3066-3075.

Reya T., Clevers H. Wnt signalling in stem cells and cancer. // Nature. 2005. Vol. 434, № 7035. P. 843-850.

Ramachandran I. et al. Wnt inhibitory factor 1 induces apoptosis and inhibits cervical cancer growth, invasion and angiogenesis in vivo. // Oncogene. 2012. Vol. 31, № 22. P. 2725-2737.

Kónigshoff M., Eickelberg O. WNT signaling in lung disease: a failure or a regeneration signal? //Am. J. Respir. Cell Mol. Biol. 2010. Vol. 42, № 1. P. 21-31.

Ben-Neriah Y. et al. The chronic myelogenous leukemia-specific P210 protein is the product of the bcr/abl hybrid gene // Science (80-, ). 1986/07/11 ed. 1986. Vol. 233, № 4760. P. 212-214.

Daley G.Q., Van Etten R.A., Baltimore D. Induction of chronic myelogenous leukemia in mice by the P210bcr/abl gene of the Philadelphia chromosome // Science (80-. ). 1990/02/16 ed. 1990. Vol. 247, № 4944. P. 824-830.

Mauro M.J. et al. STI571: a paradigm of new agents for cancer therapeutics // J Clin Oncol. 2002/01/05 ed. 2002. Vol. 20, № 1. P. 325-334.

Deininger M., Buchdunger E., Druker B.J. The development of imatinib as a therapeutic agent for chronic myeloid leukemia // Blood. 2004/12/25 ed. 2005. Vol. 105, № 7. P. 2640-2653.

Lydon N.B., Druker B.J. Lessons learned from the development of imatinib // Leuk Res. 2004/03/24 ed. 2004. Vol. 28 Suppl 1. P. S29-38.

Druker B.J. Imatinib as a paradigm of targeted therapies // Adv Cancer Res. 2004/08/26 ed. 2004. Vol. 91. P. 1-30.

Burgess M.R., Sawyers C.L. Treating imatinib-resistant leukemia: the next generation targeted therapies // ScientificWorldJournal. 2006/08/15 ed. 2006. Vol. 6. P. 918-930.

158.

159.

160.

161.

162,

163,

164

165

166

167

168

169

170

171

172

O'Hare T. et al. In vitro activity of Bcr-Abl inhibitors AMN107 and BMS-354825 against clinically relevant imatinib-resistant Abl kinase domain mutants // Cancer Res. 2005/06/03 ed. 2005. Vol. 65, № 11. P. 4500-4505.

Ly C. et al. Bcr-Abl kinase modulates the translation regulators ribosomal protein S6 and 4E-BP1 in chronic myelogenous leukemia cells via the mammalian target of rapamycin // Cancer Res. 2003/10/03 ed. 2003. Vol. 63, № 18. P. 5716-5722.

Mohi M.G. et al. Combination of rapamycin and protein tyrosine kinase (PTK) inhibitors for the treatment of leukemias caused by oncogenic PTKs // Proc Natl Acad Sci USA. 2004/02/21 ed. 2004. Vol. 101, №9. P. 3130-3135.

Parmar S. et al. Differential regulation of the p70 S6 kinase pathway by interferon alpha (IFNalpha) and imatinib mesylate (STI571) in chronic myelogenous leukemia cells // Blood. 2005/03/26 ed. 2005. Vol. 106, № 7. P. 2436-2443.

Prabhu S. et al. A novel mechanism for Bcr-Abl action: Bcr-Abl-mediated induction of the eIF4F translation initiation complex and mRNA translation // Oncogene. 2006/08/29 ed. 2007. Vol. 26, № 8. P. 1188-1200.

Ren W. et al. miR-21 modulates chemosensitivity of tongue squamous cell carcinoma cells to cisplatin by targeting PDCD4. // Mol Cell Biochem. 2014. Vol. 390, № 1-2. P. 253-262.

Dou X. et al. PDCD4 as a predictor of sensitivity to neoadjuvant chemoradiotherapy in locally advanced rectal cancer patients. // Asian Pac J Cancer Prev. 2014. Vol. 15, № 2. P. 825-830.

Schilsky R.L. et al. Development and use of integral assays in clinical trials. // Clin. Cancer Res. 2012. Vol. 18, №6. P. 1540-1546.

Mankoff D.A., Pryma D.A., Clark A.S. Molecular imaging biomarkers for oncology clinical trials. // J. Nucl. Med. 2014. Vol. 55, № 4. P. 525-528.

Dittrich C. The changing world of drug development // Chinese Clin. Oncol. 2014. Vol. 3, №2. P. 1-5.

Mikhailova I.N. et al. [Melanoma cell lines as the basis for antitumor vaccine preparation], // Vestn. Ross. Akad. Med. Nauk. 2005. № 7. P. 37—40.

Mikhaylova I.N. et al. Cancer/testis genes expression in human melanoma cell lines. // Melanoma Res. 2008. Vol. 18, № 5. P. 303-313.

BerezhnoT A.E. et al. [HLA-E molecule induction on the surface of tumor cells protects them from cytotoxic lymphocytes]. // Vopr. Onkol. 2009. Vol. 55, № 2. P. 224-229.

MacKie R.M., Hauschild A., Eggermont A.M.M. Epidemiology of invasive cutaneous melanoma. // Ann. Oncol. 2009. Vol. 20 Suppl 6. P. vil-7.

Siegel R. et al. Cancer treatment and survivorship statistics, 2012 // CA Cancer J Clin. 2012/06/16 ed. 2012. Vol. 62, № 4. P. 220-241.

173.

174.

175.

176.

177.

178.

179.

180,

181,

182,

183,

184

185

186

187

188

Wang D. et al. Distinct roles of different fragments of PDCD4 in regulating the metastatic behavior of B16 melanoma cells // Int. J. Oncol. Spandidos Publications, 2013. Vol. 42, № 5. P.1725-1733.

Oncomine™, Compendia Bioscience, Ann Arbor, MI [Online], URL: www.oncomine.org.

Riker A.I. et al. The gene expression profiles of primary and metastatic melanoma yields a transition point of tumor progression and metastasis. // BMC Med. Genomics. 2008. Vol. LP. 13.

Haqq C. et al. The gene expression signatures of melanoma progression. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2005. Vol. 102, № 17. P. 6092-6097.

Vidwans S.J. et al. A melanoma molecular disease model. // PLoS One. 2011. Vol. 6, № 3. P. el8257.

Bis S., Tsao H. Melanoma genetics: the other side. // Clin. Dermatol. 2013. Vol. 31, № 2. P. 148-155.

Vikhreva P.N. et al. [Pdcd4 tumor suppressor: properties, functions, and their application to oncology] // Mol Gen Mikrobiol Virusol. 2010/06/15 ed. 2010. № 2. P. 3-11.

Allen K.E., Weiss G.J. Resistance may not be futile: microRNA biomarkers for chemoresistance and potential therapeutics. // Mol. Cancer Ther. 2010. Vol. 9, 12. P. 3126-3136.

Howell P.M. et al. MicroRNA in Melanoma. // Ochsner J. 2010. Vol. 10, № 2. P. 83-92.

Dhawan P. et al. Constitutive Activation of Akt/Protein Kinase B in Melanoma Leads to Up-Regulation of Nuclear Factor-{kappa} B and Tumor Progression // Cancer Res. 2002. Vol. 62, № 24. P. 7335-7342.

Madhunapantula S. V, Robertson G.P. Therapeutic Implications of Targeting AKT Signaling in Melanoma. // Enzyme Res. 2011. Vol. 2011. P. 327923.

Robertson G.P. Functional and therapeutic significance of Akt deregulation in malignant melanoma. // Cancer Metastasis Rev. 2005. Vol. 24, № 2. P. 273-285.

Wei Z.-T. et al. PDCD4 inhibits the malignant phenotype of ovarian cancer cells. // Cancer Sci. 2009. Vol. 100, № 8. P. 1408-1413.

Hwang S.-K. et al. Decreased level of PDCD4 (programmed cell death 4) protein activated cell proliferation in the lung of A/J mouse. // J. Aerosol Med. Pulm. Drug Deliv. 2010. Vol. 23, № 5. P. 285-293.

Gaur A.B. et al. Downregulation of Pdcd4 by mir-21 facilitates glioblastoma proliferation in vivo.//Neuro. Oncol. 2011. Vol. 13, №6. P. 580-590.

Fruman D.A., Rommel C. PI3K and cancer: lessons, challenges and opportunities. // Nat. Rev. Drug Discov. Nature Publishing Group, 2014. Vol. 13, № 2. P. 140-156.

189.

190.

191.

192.

193.

194.

195.

196,

197,

198,

199

200

201

202

203

Wong K.-K., Engelman J.A., Cantley L.C. Targeting the PI3K signaling pathway in cancer. // Curr. Opin. Genet. Dev. 2010. Vol. 20, № 1. P. 87-90.

Meier F. et al. Combined targeting of MAPK and AKT signalling pathways is a promising strategy for melanoma treatment. // Br. J. Dermatol. 2007. Vol. 156, № 6. P. 1204-1213.

Miyashita K. et al. An emerging strategy for cancer treatment targeting aberrant glycogen synthase kinase 3 beta. // Anticancer. Agents Med. Chem. 2009. Vol. 9, № 10. P. 11141122.

Guan P. et al. Meta-analysis of human lung cancer microRNA expression profiling studies comparing cancer tissues with normal tissues. // J. Exp. Clin. Cancer Res. 2012. Vol. 31. P. 54.

Lan H. et al. [Overexpression of miR-21 promotes proliferation and reduces apoptosis in non-small cell lung cancer], // Zhonghua Zhong Liu Za Zhi. 2011. Vol. 33, № 10. P. 742746.

Esteller M. CpG island hypermethylation and tumor suppressor genes: a booming present, a brighter future. // Oncogene. 2002. Vol. 21, № 35. P. 5427-5440.

Leupold J.H. et al. Promoter cloning and characterization of the human programmed cell death protein 4 (pdcd4) gene: evidence for ZBP-89 and Sp-binding motifs as essential Pdcd4 regulators. // Biosci. Rep. Portland Press Ltd., 2012. Vol. 32, № 3. P. 281-297.

Wolfrum C. et al. Insulin regulates the activity of forkhead transcription factor Hnf-3beta/Foxa-2 by Akt-mediated phosphorylation and nuclear/cytosolic localization. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 2003. Vol. 100, № 20. P. 11624-11629.

Xie Q., Chen J., Yuan Z. Post-translational regulation of FOXO. // Acta Biochim. Biophys. Sin. (Shanghai). 2012. Vol. 44, № 11. P. 897-901.

Biilow M.H. et al. The Drosophila FoxA ortholog Fork head regulates growth and gene expression downstream of Target of rapamycin. // PLoS One. 2010. Vol. 5, № 12. P. el 5171.

Sheaffer K.L., Updike D.L., Mango S.E. The Target of Rapamycin pathway antagonizes pha-4/FoxA to control development and aging. // Curr. Biol. 2008. Vol. 18, № 18. P. 1355-1364.

Belham C., Wu S., Avruch J. Intracellular signalling: PDK1—a kinase at the hub of things. // Curr. Biol. 1999. Vol. 9, № 3. P. R93-6.

Olson C.M. et al. The insulin receptor cellular IRES confers resistance to eIF4A inhibition. // Elife. 2013. Vol. 2. P. e00542.

Lalmansingh A.S. et al. Multiple modes of chromatin remodeling by Forkhead box proteins. // Biochim. Biophys. Acta. 2012. Vol. 1819, № 7. P. 707-715.

Laplante M., Sabatini D.M. Regulation of mTORCl and its impact on gene expression at a glance. // J. Cell Sci. 2013. Vol. 126, № Pt 8. P. 1713-1719.