Значение взаимодействия между рецепторами эстрогенов и белком Snail1 в развитии гормональной резистентности рака молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат наук Андреева, Ольга Евгеньевна

• Андреева, Ольга Евгеньевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Андреева, Ольга Евгеньевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Гормональная резистентность РМЖ. Причины и следствия

1.1.1. Роль эстрогенов в опухолевой прогрессии

1.1.2. Современные представления о механизме действия эстрогенов на клетки-мишени. Рецепторы эстрогенеов

1.1.3. Геномный и негеномный эффекты эстрогенов

1.1.4. Основные механизмы утраты гормональной зависимости

1.1.5. Нарушение экспрессии РЭ и мутации в функциональных активационных доменах РЭ

1.1.6. Нарушение баланса между белками-активаторами и белками-супрессорами РЭ и их взаимодействия с РЭ

1.1.7. Селективные модуляторы рецепторов эстрогенов

1.1.8. Причины развития гормональной резистентности РМЖ

1.2. Эпителиально-мезенхимальный переход: общие представления; его значение при развитии РМЖ

1.2.1. ЭМП в эволюции и развитии

1.2.2. Частичный ЭМП в онтогенезе и патогенезе

1.2.3. Первый этап ЭМП: подавление Е-кадхерина

1.2.4. Белки суперсемейства Snail и негативная регуляция Е-кадхерина

1.2.5. Snail 1: трансрепрессорная функция

1.2.6. Snaill: транс-активаторная функция

1.2.7. Регуляция активности и стабильности Snail 1

1.2.8. Регуляция Slug и Smuc

1.2.9. Регуляция экспрессии Snaill

1.2.10. Подавление Е-кадхерина - причина активации Snaill

1.2.11. Регуляция экспрессии и стабильности Snaill при ЭМП

1.2.12. ЭМП в эпителиальных опухолях

1.2.13. Выживаемость неопластических клеток и ЭМП

1.3. Роль Snaill в прогрессии РМЖ

1.3.1. ЭМП в развитии молочной железы

1.3.2. Участие ЭМП в прогрессии некоторых типов РМЖ

• I J -

1.3.3. Взаимная регуляция РЭ и Snaill. Snaill подавляет РЭ

1.3.4. РЭ подавляет Snaill

1.3.5. Роль РЭ в регуляции транскрипции Е-кадхерина

1.3.6. Возможные сценарии ЭМП в гормон-резистентных клетках

1.4. Заключение

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Клеточные культуры. Получение сублинии MCF-7/LS

1

2.2. Транзиторная трансфекция экспрессионных и репортерных векторных конструкций. Определение активности репортерных генов

2.3. Гибридизация и трансфекция коротких интерферирующих РНК

2.4. Получение клеточных экстрактов и SDS-электрофорез в полиакриламидном геле

2.5. Иммуноблоттинг

2.6. Определение скорости роста клеток. МТТ-тест

2.7. Определение уровня апоптоза

2.8. Статистическая обработка результатов

2.9. Список использованных реактивов. Оборудование и приборы

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Экспрессия и активность Snail 1 в клетках эстрогензависимых и резистентных линий РМЖ

3.1.1.Экспрессия Snail 1 в клетках эстрогензависимых и резистентных линий РМЖ

3.1.2. Трансрепрессорная активность Snail 1 в клетках MCF-7, MCF-7/LS и HBL-100

3.1.3. Сравнительный анализ экспрессии Е- и N-кадхерина в клетках MCF-7, MCF-7/LS и HBL100

3.1.4. Анализ трансрепрессорной активности Snail 1 в линиях ВТ-474 и MDA-МВ-231

3.2. Исследование влияния Snail 1 на активность аппарата рецептора эстрогенов. Роль Snail 1 в регуляции роста и выживаемости клеток эстрогеннезависимых опухолей молочной железы

3.2.1. Роль Snaill в регуляции РЭ. Содержание и транскрипционная активность РЭ при гиперэспрессии Snaill

3.2.2. Содержание и транскрипционная активность РЭ при подавлении Snaill

3.2.3. Влияние Snaill на чувствительность клеток РМЖ к тамоксифену

3.2.4. Влияние Snaill на чувствительность клёток к доксорубицину

3.3. Пути регуляции Snaill при развитии гормональной резистентности

3.3.1. Влияние эстрадиола и РЭ на трансрепрессорную активность Snail 1 и экспрессию Е-кадхерина

3.3.2. Влияние NF-kB на трансрепрессорную активность Snail 1 и экспрессию Е-кадхерина

3.3.3. Влияние NF-kB на активность РЭ, чувствительность к тамоксифену и доксорубицину

3.4. Изучение возможных подходов к подавлению ЭМП и увеличению гормональной зависимости клеток резистентного рака молочной железы

3.4.1. Влияние комбинированного подавления NF-kB и Snail 1 на чувствительность клеток к тамоксифену

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1. Экспрессия и активность Snaill в различных линиях РМЖ

4.2. Snaill и РЭ

4.3. Snaill и гормональная резистентность

4.4. Влияние Snaill на выживаемость клеток

4.5. Регуляция Snaill в клетках РМЖ

4.6. Роль NF-kB в регуляции Snaill

4.7. NF-kB и гормональная резистентность

4.8. Подавление Snaill и NF-kB: потенциальная стратегия таргетной терапии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

4.4. Влияние Snail 1 на выживаемость клеток

4.5. Регуляция Snail 1 в клетках РМЖ

4.6. Роль NF-kB в регуляции Snail 1

4.7. NF-kB и гормональная резистентность

4.8. Подавление Snail 1 и NF-kB: потенциальная стратегия таргетной терапии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

AF1, AF2 - первый и второй домены рецептора эстрогенов, обладающие активационной функцией

Akt/PKB - протеинкиназа В

АР-1 - транскрипционный фактор, белок-активатор транскрипции

bHLH - семейство транскрипционных факторов, организованных по принципу helix-loop-helix ■

Bid - проапоптотический белок из семейства Вс12 (ВНЗ interacting-domain death agonist)

Bcl-2 - семейство проапоптотических факторов (B-cell lymphoma 2)

Cadherins (calcium adhesion proteins) - семейство белков кадхеринов (N, E и P-кадхерины)

DTT - дитиотриэтол

E2 - 17(3-эстрадиол

EGF, EGFR - эпидермальный фактор роста и его рецептор Egrl - early growth response 1 gene protein ERE - эстрогенчувствительные элементы

j i

ERK 1, ERK2 - МАР-киназы (Mitogen-activated protein kinases) FBXL14 - ЕЗ-убиквитин-лигаза FGF - фактор роста фибробластов

GSK-3P -серин-треониновая киназа гликогенсинтазы (Glycogen synthase kinase) HDACs - гистоновые деацетилазы (Histone deacetylase)

HER2 (Neu, ErbB2, CD340 - тирозиновая протеинкиназа семейства рецептора эпидермального фактора роста EGFR/ErbB

HGF - фактор роста гепатоцитов (hepartocyte growth factor)

IDC - инвазивная протоковая крцинома (invasive ductal carcinoma)

IGF-I, IGFR -инсулиноподобный фактор роста I и его рецептор ;

IkBa - ингибитор NF-kB из семейства 1кВ

ILC - инфильтрирующая протоковая карцинома (infiltrating lobular carcinoma)

МТТ - 3-[4,5-диметилтиазол-2-ил]-2,5-дифенилтетразолия бромид.

NcoR - ко-репрессор ядерного рецептора (nuclear receptor corepressor)

NF-kB - ядерный фактор каппа В, транскрипционный фактор (nuclear factor kappa В)

i

NP40 - нонилфеноксиполиэтоксиэтанол

ONPG - О-нитрофенил-Ь-Б-галактропиранозидаза

pCAF - белковый фактор-коактиватор транскрипции (РЗОО/СВР-associated factor) , i

PDGF, PDGFR - фактор роста тромбоцитов (Platelet-derived growth factor) и его рецептор

PI3K - фосфатидилинозит-3-киназа (Phosphatidylinositol-3-kinase) PMSF - фенилметилсульфонилфторид Рра - белки из группы partner of paired PR - рецепторы прогестеронов

PTEN - фосфатаза, дефосфорилирующая 3-ОН фосфоинозитиды

SABF1 - тракнскрипционный фактор (Scaffold attachment factor В1)

SBE - SMAD-респонсивный элемент (SMAD-binding element)

SERM - селективные модуляторы рецепторов эстрогенов (Selective estrogen receptor modulators)

siRNA - короткая интерферирующая РНК (Short interfering RNA)

SP1 - транскрипционный фактор из семейства Sp/KLF (Specificity protein/ kriippel-like factor)

SRC - коактиватор стероидного рецептора (Steroid receptor coactivator)

STAT - сигнальные трансдукторы и активаторы транскрипции (Signal transducers and activators of transcription) .

TEMED - N, N, N', N', - тетраметилэтилендиамин

TGF-p - трансформирующий ростовой фактор бета (Transforming growth factor beta)

TNFa, TNFR1 - фактор некроза опухоли альфа и его рецептор

TP А - 12-О-тетрадеканоидфорбол-13-ацетат

VEGF, VEGFR - фактор роста эндотелия сосудов и его рецептор

РМЖ - рак молочной железы

РЭ а, РЭр - рецепторы эстрогенов а,(3

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Значение взаимодействия между рецепторами эстрогенов и белком Snail1 в развитии гормональной резистентности рака молочной железы»

ВВЕДЕНИЕ

Несмотря на прогресс в разработке новых методов диагностики и лечения опухолей молочной железы, рак молочной железы (РМЖ) остается одним из основных онкологических заболеваний у женщин.

При лечении РМЖ основные терапевтические стратегии подразумевают применение цитотоксических, иммунотерапевтических и (анти)гормональных агентов. Эти соединения широко используются в адъювантной и неоадъювантной терапии, а также при химиотерапии метастазирующих опухолей.

Важной особенностью РМЖ является повышенная вероятность рецидива даже на ранней стадии болезни и при исходно благоприятных прогнозах. Причиной рецидива, как правило, является развитие химио- и гормональной резистентности в сочетании с активным метастазированием опухолевых

I

клеток [1].

Резистентность к гормонам и антигормональным препаратам (в частности, тамоскифену) развивается при нарушении регуляции какого-либо этапа передачи сигналов от рецепторов эстрогенов (РЭ).

1

К основным причинам потери гормональной чувствительности относятся следующие:

- уменьшение уровня РЭ при прогрессии опухоли. Как правило, снижение РЭ сопровождается компенсаторной активацией митогенных сигнальных белков (ЕОБЯ, егЬВ2/НЕЯ2 и др.), что в свою очередь позволяет использовать ингибиторы БОРЫ для подавления роста РЭ-негативных опухолей;

- нарушение баланса между белками-активаторами и репрессорами РЭ, снижение относительной концентрации белков-активаторов, либо снижение сродства РЭ к этим факторам; ,

- активация митогенных сигнальных путей, идущих в обход РЭ (EGFR, PI3K, NF-kB) и поддерживающих тем самым рост РМЖ в отсутствие эстрогенов [2]. Результаты некоторых последних работ свидетельствуют о том,

I

что определенную роль в развитии гормональной резистентности может играть эпителиально-мезенхимальный переход (ЭМП) опухолевых клеток [3].

В норме этот процесс служит для закладки тканей и органов в гистогенезе, участвует в заживлении ран, опухолевая трансформация клеток часто

сопровождается появлением признаков мезенхимального фенотипа, что во

1

многом стимулирует прогрессию опухолей. В клетках РМЖ появление ряда особенностей, характерных для ЭМП, не только способствует метастазированию, но и может сопровождаться снижением гормональной зависимости.

' S

I

Повышение инвазивности и приобретение клетками способности мигрировать в окружающие ткани при формировании метастазов связано с потерей экспрессии Е-кадхерина и нарушениями межклеточных контактов [4]. Е-кадхерин - компонент межклеточной адгезии, относящийся к

I »

эпителиальным маркерам, при подавлении экспрессии которого происходит активация ЭМП.

Исследование клинических образцов опухолей молочной железы позволяет проанализировать связь между экспрессией ряда эпителиальных и

мезенхимальных маркеров и экспрессией рецептора эстрргенов, а также

i

сопоставить эти параметры с прогностическими факторами, степенью дифференцировки и инвазивностью опухолей. В целом, результаты таких исследований показали, что гиперэкспрессия мезенхимальных маркеров Snail 1 и N-кадхерина коррелирует с низким уровнем дифференцировки, метастазами опухоли в лимфоузлы и плохим прогнозом, и более характерна для РЭ-негативных опухолей [5]. Эти данные свидетельствуют о потенциальной важности снижения уровня Е-кадхерина и гиперэкспрессии N-кадхерина и

Snail 1 в развитии РМЖ и связи содержания этих белков с агрессивностью и 1 i инвазивностью опухоли.

Уровень экспрессии мезенхимальных маркеров (Snail 1 и N-кадхерина) может стать важным прогностическим фактором в случае инвазивных опухолей молочной железы, а также служить одним из дополнительных критериев чувствительности РМЖ к химио- и гормональной терапии.

По данным литературы, Snail 1 является одним из репрессоров РЭ, при этом данные о влиянии РЭ на его активность весьма противоречивы. Некоторые исследователи предполагают, что Snail 1 находится под негативным контролем со стороны рецептора эстрогенов (РЭ), в других публикациях приводятся сведения о РЭ-опосредованной активации Snail 1. В итоге, несмотря на интерес к этой проблеме и большое количество работ, посвященных ее изучению, однозначных ответов на ряд ключевых вопросов о

роли ЭМП в канцерогенезе РМЖ и в развитии гормональной резистентности

s

нет.

Цели и задачи исследования.

Целью данной работы явилось изучение роли сигнального пути Snail 1 в развитии гормональной резистентности и поддержании эстрогеннезависимого роста клеток рака молочной железы человека.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследование активности Snail 1-сигнального пути в клетках РМЖ при развитии гормональной резистентности:

I

• сравнительный анализ экспрессии Snail 1, Е-кадхерина и N-кадхерина в клетках гормончувствительных и резистентных линий РМЖ;

• определение транс-репрессорной активности Snail 1 и исследование предполагаемой корреляции между активностью Snail 1-сигнального пути и гормональной зависимостью клеток.

2. Изучение участия Snail 1 в негативной регуляции рецепторов эстрогенов:

• определение влияния Snail 1 на транскрипционную активность и экспрессию РЭ в клетках РМЖ;

• определение уровня гормональной чувствительности клеток РМЖ при

i

гиперэкспрессии /подавлении Snail 1;

3. Исследование механизма регуляции Snaill при развитии гормональной резистентности:

• изучение влияния РЭ на активность Snaill в клетках РМЖ;

• определение роли NF-kB в позитивной регуляции Snaill;

• исследование влияния NF-kB на активность РЭ и уровень гормональной чувствительности клеток РМЖ.

4. Изучение возможных подходов к подавлению ЭМП и увеличению гормональной зависимости клеток резистентного рака молочной железы.

Научная новизна работы.

В настоящей работе впервые был проведен сравнительный анализ изменений экспрессии Snail 1 и некоторых из эффекторов/регуляторов Snail 1 (Е-кадхерина, РЭ, NF-kB) при развитии гормональной резистентности в

клетках РМЖ; исследован механизм взаимодействия между компонентами

)

Snail 1-сигнального пути и гормональным аппаратом клетки. Продемонстрировано повышение экспрессии и активности Snail 1 по мере снижения экспрессии и функциональной активности рецептора эстрогенов в клетках рака молочной железы.

Установлено, что активность рецептора эстрогенов находится под

I

негативным контролем со стороны Snail 1. Подавление Snail 1 с помощью РНК-интерференции приводит к заметному усилению гормональной зависимости клеток, что позволяет рассматривать Snail 1 как один из факторов, определяющих развитие гормональной резистентности клеток. Получены доказательства участия NF-kB-сигнального пути в поддержании высокого уровня Snail 1 в резистентных клетках, а также в негативной регуляции аппарата рецептора эстрогенов.

В целом, полученные данные позволяют рассматривать NF-kB и Snail 1 в

качестве перспективных объектов таргетной терапии резистентных форм рака

i

молочной железы, подавление активности которых может как частично восстановить чувствительность опухолевых клеток к гормонам, так и увеличить чувствительность опухолей к химиопрепаратам.

Научно-практическая значимость. <

Исследования носят экспериментальный характер и направлены на изучение природы сигнальных путей, поддерживающих эстрогеннезависимый рост клеток рака молочной железы. Представленные данные демонстрируют, что развитие гормональной резистентности РЭ-положительных опухолей

может сопровождаться активацией сигнальных путей эпителиально-мезенхимального перехода. Показано, что ключевой активатор ЭМП - Snail 1 -негативно регулирует активность рецепторов эстрогенов. Подавление Snail 1 приводит к повышению экспрессии рецептора эстрогенов, которое сопровождается частичным восстановлением гормональной зависимости увеличением чувствительности клеток к действию тамоксифена. Установлено значение транскрипционного фактора NF-kB в негативной регуляции РЭ и в параллельной активации Snail 1. Полученные результаты подтверждают перспективность использования Snail 1 и NF-kB в качестве мишеней таргетной терапии РМЖ, в том числе для лечения агрессивных гормоннезависимых опухолей молочной железы.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Гормональная резистентность РМЖ. Причины и следствия.

1.1.1. Роль эстрогенов в опухолевой прогрессии

Стероидные гормоны относятся к одному из основных классов гормональных соединений, синтезируются в клетках всех видов позвоночных животных и многих видов беспозвоночных, и проявляют способность контролировать ряд фундаментальных процессов жизнедеятельности многоклеточного организма. Стероидным гормонам группы эстрогенов (в которую входит 17-Р-эстрадиол), принадлежит особая роль не только в онтогенезе, но и в патогенезе.

Функции белков и сигнальных путей, регулируемых рецепторами эстрогенов, определяют направленность биологических эффектов эстрадиола, его несомненное стимулирующее влияние на процесс клеточного размножения. Известно, что эндогенные и экзогенные эстрогены не только стимулируют размножение нормальных эпителиальных клеток, но и способствуют развитию новообразований [6].

Один из механизмов канцерогенного действия эстрогенов основан на том, что увеличение числа клеточных делений повышает вероятность случайных генетических повреждений. При определенном стечении обстоятельств возникающие мутации приводят к формированию условий для инициации и последующего прогрессирования процесса. Необходимо отметить, что влияние эстрогенов не ограничивается нормальными клетками: во многих случаях чувствительность к регулирующему действию эстрогенов сохраняется и трансформированных клетках [7].

В то же время промоторный тип гормонального канцерогенеза не является единственно возможным и, очевидно, существует так называемый

генотоксический вариант, связанный с действием метаболитов эстрогенов, направленным на регуляцию транскрипции генов.

Показано, что снижение концентрации стероидных гормонов путем ингибирования их синтеза или замещения их антагонистами (антиэстрогенами), блокирующими передачу сигнала на одном из этапов, ингибирует как промоторное, так и генотоксическое действие эстрогенов, что во многих случаях способствует снижению скорости пролиферации клеток РМЖ и стимулирует в них апоптоз [8].

Основным фактором, снижающим эффективность. этого подхода, является потеря чувствительности опухолевых клеток к гормонам и антигормональным препаратам. В ряде случаев опухоль изначально не проявляет зависимости от эстрогенов. Более того, уровень гормональной зависимости может существенно снижаться по мере проведения терапии стероидами (глюкокортикодами, антиэстрогенами или анти-андрогенами), приводя в итоге к формированию гормоннезависимых форм.

Приобретение злокачественными опухолями молочной железы способности к эстрогеннезависимому росту ограничивает возможность использования антиэстрогеновых препаратов для лечения этого заболевания. Изучение роли стероидных гормонов в злокачественной трансформации клеток молочной железы и выявление механизмов возникновения резистентности являются основными задачами решение которых необходимо для разработки комплексных терапевтических подходов к лечению РМЖ

1.1.2. Современные представления о механизме действия эстрогенов на клетки-мишени. Рецепторы эстрогенов.

I

Эстрогеновые рецепторы присутствуют в ядре и на поверхности клеточной мембраны, однако наибольшая их концентрация наблюдается в

цитозоле. После взаимодействия с лигандом - стероидным гормоном, способным проникать через плазматическую мембрану клеток, благодаря своей липофильности, внутриклеточные рецепторы претерпевают конформационные изменения. Таким образом, становится возможной их транслокация в ядро и взаимодействие с участниками некоторых сигнальных путей. Функциональная активность рецептора эстрогенов организована в соответствии с этой моделью.

В клетках обнаружено два типа рецепторов эстрогенов: РЭа (продукт гена £57?/) и РЭ(3 (продукт гена £57?2). Сравнительный анализ последовательностей РЭа и (3 показал значительную степень гомологии; различия между ними в большей степени касаются распределения рецепторов в тканях и сродства к лигандам. (см. рис. 1).

РЭа

вариабельный домен |

нншнн

ДНК-связывающнй домен

шарнирный домен

I

-251

Б

лиганд-связывающии домен

I

549 1 595

1 РЭ? 148 214 3( )4 50 0 5

, А/В с Б Е Б

530

АЯ-1

лиганд-независимая активация

АР-2

лиганд-зависимая активация

Рисунок 1. Доменная организация рецепторов эстрогенов. Описание см. в тексте. Адапттировано из [9]

РЭа в основном экспрессируется в гипоталамусе, в клетках эндометрия и стромы яичников, а также в эпителиальных клетках молочной железы; РЭ Р обычно обнаруживается в клетках печени, мозга, легких, простаты, а

также в костных и сердечных тканях. мРНК рецепторов эстрогенов может подвергаться альтернативному сплайсингу, что обуславливает существование нескольких изоформ РЭ внутри каждого типа [10].

В состав молекул обоих типов рецепторов эстрогенов входит стандартный для ядерных рецепторов набор функциональных доменов:

1. Вариабельный домен А/В.

В состав N-концевого вариабельного домена А/В входит субдомен AFI, который выполняет функцию лиганд-независимой активации и принимает участие в большом количестве белок-белковых.взаимодействий. При сравнительном анализе трансактивационной способности AFI двух типов рецепторов эстрогенов было выявлено, что в линиях, экспрессирующих P3ß эта функция практически отсутствует, на её фоне значительной активности в случае РЭа.

I

2. ДНК-связывающий домен С.

Данный домен консервативен и представлен двумя нестандартными субдоменами типа «цинковых пальцев», которые отличаются от классического варианта по вторичной и третичной структуре (поскольку атом цинка в их составе взаимодействует с четырьмя цистеиновыми остатками и не взаимодействует с гистидиновыми).

3. Шарнирный домен D.

Этот домен принимает участие в ядерном транспорте молекулы РЭ

4. Лиганд-связывающий домен E/F. '

Он располагается в С-концевой части молекулы РЭ, и содержит сайт связывания лиганда, сигнал ядерной локализации и участки, отвечающие за димеризацию и взаимодействие с шаперонами. Данный домен отвечает за лиганд-зависимую активаторную функцию AF2 рецепторов эстрогенов.

Благодаря С-концевым взаимодействям, рецепторы способны к

образованию гомо- и гетеродимеров, этот процесс сопровождает их

!

активацию. Неактивные молекулы, как правило, присутствуют в цитозоле в виде комплексов с шаперонами (heat shock proteins) hsp90 и hsp56 [10].

Лиганд-независимая активация AFI сопровождается

фосфорилированием специфических сериновых остатков в последовательности РЭ. Повышение уровня фосфорилирования стероидных рецепторов при индукции специфических протеинкиназ или угнетении фосфатаз значительно повышает функциональную активность РЭ в качестве позитивного регулятора транскрипции [11].

При ' лиганд-зависимой активации AF2 молекула рецептора претерпевает конформационные изменения и подвергается дополнительному фосфорилированию [12]. В некоторых случаях фосфорилирование рецептора может частично воспроизводить действие гормона [13].

После связывания с респонсивными последовательностями ДНК рецептор вновь подвергается фосфорилированию ДНК-зависимой киназой; это повышает аффинность связывания РЭ с транскрипционными кофакторами [12].

i

Конформационные изменения в участках AFI и AF2 являются основными точками регуляции транс-активаторной функции комплекса РЭ-лиганд, поскольку они определяют степень сродства ДНК-связывающего домена к регуляторной последовательности (ERE, estrogen response element)

I

гена-мишени [14]. Эти последовательности, расположенные в промоторных участках генов, представляют собой консервативные палиндромные консенсусы вида:

5"-GGTCAnnnTGACC-3' (п - произвольный нуклеотид)

20

Аффинное сиквенс-специфическое связывание с ERE может осуществиться только активированной, димерной молекулой РЭ, связанной с лигандом. Взаимодействие РЭ с ДНК в области ERE сгибает ДНК в области большой бороздки (под углом 56 градусов) и меняет эффективность взаимодействия основных транскрипционных факторов с данным участком гена [15].

ERE были обнаружены в составе генов митогенных каскадов (с-шус, cyclin D1 и др.), факторов роста и их рецепторов (эпидермального и инсулиноподобного факторов роста), а также множества других генов [16].

1.1.3. Геномный и негеномный эффекты эстрогенов

Эффекты рецепторов эстрогенов делятся по принципу их реализации на геномные и негеномные.

I

В основе геномного эффекта РЭ лежит специфичное взаимодействие рецептора с эстрогенреспонсивными элементами ДНК; оно дополняется способностью рецептора неспецифично связываться с сайтами АР-1 и SP 1 [17]; Взаимодействие РЭ с этими участками характеризуется меньшей аффинностью, однако оно способствует их связыванию другими факторами транскрипции.

Взаимодействие с лигандом также необходимо для осуществления негеномного эффекта эстрогенов; в результате соответствующего изменения конформации РЭ обретает способность присоединять внутриклеточные сигнальные белки и регулировать их уже на посттрансляционном уровене [18].

Показано, что РЭ может образовывать комплексы с такими белками как PI3K, Akt, p90rsk, ERK1, ERK2, р38, IGF1-R, src и др, - принимая участие в регуляции основных митогенных и апоптических сигнальных путей клетки [14].

1.1.4. Основные механизмы утраты гормональной зависимости

После установления роли РЭ в передаче сигнала от гормона определение его содержания стало основным методом диагностики гормональной зависимости опухолей молочной железы Действительно, снижение концентрации ЕЯ в опухолевых клетках ниже определенного уровня с высокой вероятностью свидетельствует о гормональной резистентности таких опухолей [2, 19, 20]

Другие эксперименты показали, что во многих случаях снижение гормональной зависимости опухолей молочной железы не сопровождается потерей специфических рецепторов эстрогенов [21-24]. Так,

многочисленные данные свидетельствуют, что значительная часть опухолей

\

молочной железы, несмотря на высокий уровень экспрессии специфических рецепторов, не чувствительна к гормонотерапии [25, 26]

Сбой гормональной регуляции, как правило, происходит на одном из ключевых этапах передачи сигнала от эстрогенов. Основные причины

потери гормональной чувствительности перечислены ниже.

»

1.1.5. Нарушение экспрессии РЭ и мутации в функциональных аюпивационных доменах РЭ.

Анализ последовательностей генов ЕБЯ 1 и Е8Я2 в линиях клеток

I

первичного рака молочной железы позволяет выявить присутствие в клетках РЭ-положительных линий дефектных эстрогеновых рецепторов, которые не способны связываться с ДНК или лигандом. Так, была продемонстрирована связь полиморфизма в 325 кодоне ЕБШ с наследственной склонностью к возникновению РМЖ. Генетическое

I

картирование показало, что этот кодон находится в области 4 экзона ЕБШ, который соответствует участку гормонсвязывающего домена Е в молекуле

РЭ. Вероятно, эта мутация ведет к нарушению связывания лиганда и, таким образом, способствует возникновению гормональной резистентности [24].

Однако, несмотря на значительное количество исследований, направленных на выявление корреляции между наличием точечных мутаций в генах Е8Я1 {Е8112) и продукцией дефектных белков РЭ, было выявлено относительно небольшое число повторяющихся точечных мутаций в определенных кодонах.

С другой стороны, нарушение экспрессии рецепторов может быть связано с явлением альтернативного сплайсинга мРНК ЕЖ-генов. Различные варианты мРНК РЭа и РЭ(3 обнаруживаются как в нормальных, так и в трансформированных тканях. Известно, что в номальных тканях экспрессируется по меньшей мере 3 изоформы РЭа и 5 изоформ, РЭр. Соотношение количеств изоформ каждого рецептора тканеспецифично, и в норме более-менее постоянно для одного типа ткани. В то же время, при исследовании клеток РМЖ было отмечено увеличение уровня экспрессии нестандартных изоформ рецепторов. Соответственно, в этих тканях синтезируется большее количество дефектных белков, у которых отсутствуют необходимые функциональные домены, что способствует возникновению гормональной резистентности даже при условии их коэкспрессии с рецептором дикого типа [2, 24].

1.1.6. Нарушение баланса между белками-активаторами и

белками-супрессорами РЭ и их взаимодействия с РЭ

I

Регуляторные белки взаимодействуют с активированным РЭ и могут значительно изменять трансактивационные способности комплекса. В соответствии с выполняемой функцией они могут быть отнесены либо к коактиваторам, либо к корепрессорам РЭ.

По многочисленным данным, активность и количественное соотношение регуляторных белков обоих классов оказывают существенное влияние на транскрипцию РЭ-респонсивных генов [2].

I

За связывание регуляторных белков отвечает участок домена АР2. Таким образом, лиганд-зависимая активация транскрипции требует лиганд-зависимого присоединения белка-коактиватора.

К белкам-коактиваторам РЭ относятся представители семейства р160 (8ЯС-1, ТО2 или ОШР-2 и А1В1), гистоновые ацетилазы: СВР, рЗОО, а также рЗОО/СВР-ассоциированный фактор, рСАР\ Эти белки обладают специфической гистон-ацетилтрансферазной активностью, и, вызывая соответствующие конформационные изменения ДНК, активируют транскрипцию генов [27, 28].

I

Механизм действия этих белков изучен не до конца, однако известно, что они также необходимы для стабилизации транскрипционного комплекса на промоторных участках, привлекаются к ним последовательно: сначала рЗОО, затем СВР и рСАР. Коактиваторы препятствуют

' ' I

преждевременной диссоциации РЭ от респонсивного участка ДНК и играют важную роль в процессах инициации и элонгации транскрипции [27, 29].

Интересно, что связывание рецепторов с антагонистами эстрогенов (тамоксифеном и др.) во многих случаях препятствует ассоциации

рецепторов с белками-активаторами. Вероятно, это объясняется влиянием

1

антагонистов на конформацию РЭ, поскольку связанный с антагонистом рецептор не может присоединить гормон, и участок, необходимый для связывания белка-коактиватора, остается скрытым [23].

Сравнительно недавно было установлено, что функцией активаторов РЭ могут обладать некоторые из ферментов, ответственные за белковую деградацию, в частности - ЕЗ-убиквитин-протеин лигаза [30]. Уровень

экспрессии белков-активаторов может существенно влиять на

, i чувствительность опухолей к гормонотерапии.

Представители другой группы регуляторных белков, - корепрессоры, -при образовании комплексов с РЭ вызывают существенное снижение его активности. Как правило, присутствие эстрогенов препятствует связыванию белков-корепрессоров с рецептором.

В отличие от белков-активаторов, которые взаимодействуют преимущественно с эстроген-связанным рецептором, репрессоры образуют комплексы либо со свободным рецептором, либо с рецептором, связанным с антиэстрогенами [31, 14]. Известно несколько семейств белков-репрессоров, среди которых наиболее полно охарактеризованы белки NcoR (nuclear receptor corepressor) и SMRT (silencing mediator for retinoid and thyroid hormone receptor) [32-34].

О механизме действия этих соединений известно немного. По данным ряда авторов, репрессорный эффект перечисленных белков реализуется, во всяком случае частично, через активацию гистоновой деацетилазы: деацетилирование гистонов приводит к формированию неактивной, нуклеосомной структуры хроматина в участках связывания рецепторного комплекса'[35].

i

Об этом также свидетельствует усиление трансактивационной активности РЭ в присутствии эстрадиола на фоне подавления экспрессии NcoR короткими интерферирующими РНК [35].

Таким образом, эффективность действия регуляторных белков, а также баланс между белками-активаторами и супрессорами можно рассматривать как один из важнейших факторов, определяющих уровень активации рецепторов гормонов, а в конечном итоге - и степень гормональной зависимости опухоли.

1. 1. 7. Селективные модуляторы рецепторов эстрогенов

Вскоре после открытия белков-активаторов и супрессоров рецепторов эстрогенов было обнаружено, что эффективность и направленность действия препаратов антиэстрогенов в значительной степени зависит от спектра белков-регуляторов, экспрессируемых в клетках-мишенях [36].

Так, нестероидные антиэстрогены, к которым относят производные трифенилэтилена (тамоксифен) и бензотиофена (ралоксифен), в большинстве тканей являются антагонистами эстрогенов, но в некоторых клетках и при определенных условиях могут проявлять частичную активность агонистов эстрогенов [37].

В связи с двойственным действием такие препараты были выделены в отдельную группу SERM - селективные модуляторы рецепторов эстрогенов [35].

Различные препараты SERM вызывают определенные изменения конформации РЭ, которые могут сказываться на функциональной активности комплекса РЭ - лиганд. Установлено, что в зависимости от вида белка-регулятора связывание препарата группы SERM с рецептором может приводить к стимуляции или подавлению активности рецептора [38].

Классическим примером является тамоксифен. Связывание с рецептором белков-репрессоров, NcoR или SMR.T, определяет действие тамоксифена только как антагониста эстрогенов. В то же время, присутствие в комплексе с рецептором белка-активатора, L7/SPA (L7 switch protein for antagonist), резко усиливает активность тамоксифена как агониста эстрогенов [39, 40].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Андреева, Ольга Евгеньевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Haq, R Inhibition of apoptotic signaling pathways in cancer cells as a mechanism of chemotherapy resistance / R. Haq, B. Zanke // Cancer Metastasis Rev.- 1998.-VoI. 17, № 2 - P.233-239.

2. Elledge, R. M. Oestrogen receptors and breast cancer / R. M. Elledge, C. K. Osborne //BMJ- 1997.-Vol. 314, № 7098 - P. 1843-1844.

3. Polyak, K. Transitions between epithelial and mesenchymal states: acquisition of malignant and stem cell traits / K. Polyak, R. A. Weinberg // Nat Rev Cancer.- 2009.-Vol. 9, № 4 - P.265-273.

4. Birchmeier, W. Cadherin expression in carcinomas: role in the formation of cell junctions and the prevention of invasiveness / W. Birchmeier, J. Behrens // Biochim Biophys Acta.- 1994.-Vol. 1198, № 1 - P. 11-26.

5. ElMoneim, H. M. Expression of E-cadherin, N-cadherin and snail and their correlation with clinicopathological variants: an immunohistochemical study of 132 invasive ductal breast carcinomas in Egypt / H. M. ElMoneim, N. M. Zaghloul // Clinics (Sao Paulo).- 2011.-Vol. 66, № 10 - P.1765-1771.

6. Anstead, G. M. The estradiol pharmacophore: ligand structure-

j

estrogen receptor binding affinity relationships and a model for the receptor binding site / G. M. Anstead, K. E. Carlson, J. A. Katzenellenbogen // Steroids-1997.-Vol. 62, № 3 - P.268-303.

7. Molecular mechanism and clinical implications of endocrine therapy resistance in breast cancer / G. Arpino, C. De Angelis, M. Giuliano, et

al. // Oncology.- 2009.-Vol. 77 Suppl 1, № P.23-37.

8. Берштейн, JI. M. Молекулярные механизмы резистентности к тамоксифену / JI. М. Берштейн, Р. Сантен // Вопросы онкологии - 2002.-Т. 48, № 1 - С. 17-23.

9. Kumar, R The structure of the nuclear hormone receptors / R. Kumar, E. B. Thompson // Steroids.- 1999.-Vol. 64, № 5 - P.310-319.

10. Single-chain estrogen receptors (ERs) reveal that the ERalpha/beta heterodimer emulates functions of the ERalpha dimer in genomic estrogen signaling pathways / X. Li, J. Huang, P. Yi, et al. // Mol Cell Biol.- 2004.-Vol. 24, № 17-P.7681-7694.

11. Differential regulation of human progesterone receptor A and В form-mediated trans-activation by phosphorylation / S. M. Kazmi, V. Visconti, R. K. Plante, et al. // Endocrinology.- 1993.-Vol. 133, № 3 - P.1230-1238.

i

12. Hormone-induced progesterone receptor phosphorylation consists of sequential DNA-independent and DNA-dependent stages: analysis with zinc finger mutants and the progesterone antagonist ZK98299 / G. S. Takimoto, D. M. Tasset, A. C. Eppert, К. B. Horwitz // Proc Natl Acad Sci U S A - 1992.-Vol. 89, № 7 - P.3050-3054.

13. Aronica, S. M. Stimulation of estrogen receptor-mediated transcription and alteration in the phosphorylation state of the rat uterine estrogen receptor by estrogen, cyclic adenosine monophosphate, and insulin-like growth factor-I / S. M. Aronica, B. S. Katzenellenbogen // Mol Endocrinol. - 1993.-Vol. 7, № 6 - P.743-752.

14. Rollerova, E. Intracellular estrogen receptors, their characterization and function (Review) / E. Rollerova, M. Urbancikova // Endocr Regul - 2000.-Vol. 34, № 4 - P.203-218.

15. Dickson, R. B. Estrogenic regulation of growth and polypeptide growth factor secretion in human breast carcinoma / R. B. Dickson, M. E. Lippman // Endocr Rev.- 1987.-Vol. 8, № 1 - P.29-43.

16. Lingham, R. B. Estrogen regulation of epidermal growth factor receptor messenger ribonucleic acid / R. B. Lingham, G. M. Stancel, D. S. LooseMitchell // Mol Endocrinol.- 1988.-Vol. 2, № 3 - P.230-235.

17. Красильников, M. А. Участие фосфатидилинозит-3-киназы в регуляции дифференциальной чувствительностии клеток меланомы к противоопухолевым агентам. Модель развития гормональной резистентности опухолевых клеток / М. А. Красильников, Е. В. Лузай, А. М. Щербаков // Биохимия - 2004.-Т. 69, № 3 - С. 10.

18. Modulation of epidermal growth factor receptor in endocrine-

resistant, oestrogen receptor-positive breast cancer / R. I. Nicholson, I. R.

Hutcheson, M. E. Harper, et al. // Endocr Relat Cancer - 2001.-Vol. 8, № 3 -

P.175-182. :

122

19. Endocrine therapy resistance can be associated with high estrogen receptor alpha (ERalpha) expression and reduced ERalpha phosphorylation in breast cancer models / B. Kuske, C. Naughton, K. Moore, et al. // Endocr Relat Cancer.- 2006.-Vol. 13, № 4 - P.l 121-1133.

20. Masood, S. Use of monoclonal antibody for assessment of estrogen and progesterone receptors in malignant effusions / S. Masood // Diagn Cytopathol— 1992.-Vol. 8, № 2 - P.161-166.

i

21. Pattern of hormone receptor status of secondary contralateral breast cancers in patients receiving adjuvant tamoxifen / T. Bachleitner-Hofmann, B. Pichler-Gebhard, M. Rudas, et al. // Clin Cancer Res.- 2002.-Vol. 8, № 11 -P.3427-3432.

22. MCF7/LCC9: an antiestrogen-resistant MCF-7 variant in which acquired resistance to the steroidal antiestrogen ICI 182,780 confers an early cross-resistance to the nonsteroidal antiestrogen tamoxifen / N. Brunner, B. Boysen, S. Jirus, et al. // Cancer Res.- 1997.-Vol. 57, № 16 - P.3486-3493.

23. Molecular changes in tamoxifen-resistant breast cancer: relationship between estrogen receptor, HER-2, and p38 mitogen-activated protein kinase / M. C. Gutierrez, S. Detre, S. Johnston, et al. // J Clin Oncol.- 2005.-Vol. 23, № 11 -P.2469-2476.

24. Changes in estrogen receptor, progesterone receptor, and pS2 expression in tamoxifen-resistant human breast cancer / S. R. Johnston, G. Saccani-Jotti, I. E. Smith, et al. // Cancer Res.- 1995.-Vol. 55, № 15 - P.3331-3338.

25. Measurement of steroid hormone receptors in breast cancer patients on tamoxifen / C. A. Encarnación, D. R. Ciocca, W. L. McGuire, et al. // Breast Cancer Res Treat.- 1993.-Vol. 26, № 3 - P.237-246. ;

26. Семиглазов, В. Ф. Современные подходы к гормонтерапии рака молочной железы как отражение патогенеза заболевания / В. Ф. Семиглазов // Вопросы онкологии - 2001.-Vol. 47, № Р.4.

27. Bannister, A. J. The СВР co-activator is a histone acetyltransferase / A. J. Bannister, T. Kouzarides. //Nature.- 1996.-Vol. 384, № 6610 - P.641-643.

28. The transcriptional coactivators p300 and СВР are histone acetyltransferases / V. V. Ogryzko, R. L. Schiltz, V. Russanova, et al. // Cell-1996.-Vol. 87, № 5 - P.953-959.

29. The role of СВР in estrogen receptor cross-talk with nuclear factor-kappaB in HepG2 cells / D. C. Harnish, M. S. Scicchitano, S. J. Adelman, et al. // Endocrinology.- 2000,-Vol. 141, № 9 - P.3403-3411.

30. A family of proteins structurally and functionally related to the E6-

1 !

AP ubiquitin-protein ligase / J. M. Huibregtse, M. Scheffner, S. Beaudenon, P. M. Howley // Proc Natl Acad Sci U S A.- 1995.-Vol. 92, № 7 - P.2563-2567.

31. Nuclear hormone receptor coregulators in action: diversity for shared tasks / D. Robyr, A. P. Wolffe, W. Wahli // Mol Endocrinol.- 2000.-Vol. 14, № 3

1

- P.329-347.

32. Modulation of aromatase expression in human breast tissue / S. Chen, D. Zhou, C. Yang, et al. // J Steroid Biochem Mol Biol.- 2001.-Vol. 79, № 1-5 - P.35-40.

33. Ligand-independent repression by the thyroid hormone receptor mediated by a nuclear receptor co-repressor / A. J. Horlein, A. M. Naar, T. Heinzel, et al. //Nature.- 1995.-Vol. 377, № 6548 - P.397-404.

34. Two receptor interacting domains in the nuclear hormone receptor

corepressor RIP13/N-CoR / W. Seol, M. J. Mahon, Y. K. Lee,' D. D. Moore //

i

Mol Endocrinol.- 1996.-Vol. 10, № 12 - P.1646-1655.

35. Jenster, G. Coactivators and corepressors as mediators of nuclear receptor function: an update / G. Jenster // Mol Cell Endocrinol - 1998.-Vol. 143, № 1-2 - P. 1-7.

36. Красильников, M. А. Современные подходы к изучению механизма эстрогеннезависимого роста опухолей молочной железы / М. А. Красильников // Вопросы онкологии.- 2004. - Т.50, № 4 - С.399-405.

37. Activation function-1 domain of estrogen receptor regulates the agonistic and antagonistic actions of tamoxifen / S. Glaros, S., N. Atanaskova, C. Zhao, et al. // Mol Endocrinol.- 2006.-Vol. 20, № 5 - P.996-1008.

38. Jordan, V. C. Molecular mechanisms of antiestrogen action in breast cancer / V. C. Jordan // Breast Cancer Res Treat - 1994.-Vol. 31, № 1 - P.41-52.

39. Cosman, F. Selective estrogen receptor modulators: clinical spectrum / F. Cosman, R. Lindsay // Endocr Rev.- 1999.-Vol. 20, № 3 - P.418-434.

40. The partial agonist activity of antagonist-occupied steroid receptors is controlled by a novel hinge domain-binding coactivator L7/SPA and the corepressors N-CoR or SMRT / T. A. Jackson, J. K. Richer, D. L. Bain, et al. // Mol Endocrinol.- 1997.-Vol. 11, № 6 - P.693-705.

41. Mechanisms of tamoxifen resistance: increased estrogen receptor-HER2/neu cross-talk in ER/HER2-positive breast cancer / J. Shou, S. Massarweh, C. K. Osborne, et al. // J Natl Cancer Inst.- 2004.-Vol. 96, № 12 - P.926-935.

42. Biological correlation between HER-2/neu and proliferative activity in human breast cancer / S. Tommasi, A. Paradiso, A. Mangia, et al. // Anticancer Res.- 1991.-Vol. 11, № 4 - P. 1395-1400.

43. Azim, H. A. Simultaneous targeting of estrogen receptor and HER2

t

in breast cancer / H. A. Azim, M. J. Piccart. // Expert Rev Anticancer Ther.-.-Vol. 10, № 8 - P.1255-1263.

44. McKay, L. I. Molecular control of immune/inflammatory responses: interactions between nuclear factor-kappa B and steroid receptor-signaling pathways / L. I. McKay, J. A. Cidlowski // Endocr Rev - 1999.-Vol. 20, № 4 -P.435-459.

45. Cancer statistics, 2003 / A. Jemal, T. Murray, A. Samuels, et al. // CA Cancer J Clin.- 2003.-Vol. 53, № 1 - P.5-26. '

46. Estrogen inhibits phorbol ester-induced I kappa B alpha transcription and protein degradation / W. H. Sun, E. T. Keller, B. S. Stebler, W. B. Ershler // Biochem Biophys Res Commun- 1998.-Vol. 244, № 3 - P.691-695.

47. Straub, R. H. The complex role of estrogens in inflammation / R. H. Straub // Endoer Rev.- 2007.-Vol. 28, № 5 - P.521-574.

48. Hinck, L. Key stages in mammary gland development: the mammary end bud as a motile organ / L. Hinck, G. B. Silberstein // Breast Cancer Res-2005.-Vol. 7, № 6 - P.245-251.

49. The epithelial-mesenchymal transition generates cells with properties of stem cells / S. A. Mani, W. Guo, M. J. Liao, et al. // Cell.- 2008.-Vol. 133, № 4 - P.704-715.

50. Micalizzi, D. S. Epithelial-mesenchymal transition in cancer: parallels between normal development and tumor progression / D. S. Micalizzi, S. M. Farabaugh, H. L. Ford // J Mammary Gland Biol Neoplasia.-.-Vol. 15, № 2 -P.l 17-134.

51. Generation of breast cancer stem cells through epithelialmesenchymal transition / A. P. Morel, M. Lievre, C. Thomas, et al. //PLoS One-2008.-Vol. 3, № 8 - P.e2888.

52. A causal role for E-cadherin in the transition from adenoma to carcinoma / A. K. Perl, P. Wilgenbus, U. Dahl, et al. // Nature.- 1998.-Vol. 392, №6672-P. 190-193.

53. E-cadherin-mediated cell-cell adhesion prevents invasiveness of human carcinoma cells /U. H. Frixen, J. Behrens, M. Sachs, et al. // J Cell Biol-1991.-Vol. 113, № 1 -P.173-185.

54. Ohkubo, T. The transcription factor Snail downregulates the tight junction components independently of E-cadherin downregulation / T. Ohkubo, M. Ozawa // J Cell Sei.- 2004.-Vol. 117, № Pt 9 - P. 1675-1685.

55. E-cadherin controls beta-catenin and NF-kappaB transcriptional activity in mesenchymal gene expression / G. Solanas, M. Porta-de-la-Riva, C. Agusti, et al. // J Cell Sei.- 2008.-Vol. 121, № Pt 13 - P.2224-2234.

56. Progression of carcinoma cells is associated with alterations in chromatin structure and factor binding at the E-cadherin promoter in vivo / G. Hennig, J. Behrens, M. Truss, et al. // Oncogene.- 1995.-Vol. 11, № 3 - P.475-484.

57. Mechanisms identified in the transcriptional control of epithelial

t

gene expression / G. Hennig, O. Lowrick, W. Birchmeier, J. Behrens // J Biol Chem.- 1996.-Vol. 271, № 1 - P.595-602.

58. Le, T. L. Recycling of E-cadherin: a potential mechanism for regulating Cadherin dynamics / T. L. Le, A. S. Yap, J. L. Stow // J Cell Biol-1999,-Vol. 146, № 1 -P.219-232.

59. Kamei, T. Mechanisms of cell adhesion and migration / T. Kamei, T.

Matozaki, Y. Takai // Gan To Kagaku Ryoho.- 1999.-Vol. 26, № 9 - P. 1359-

i

60. Kinch, M. S. Tyrosine phosphorylation regulates the adhesions of ras-transformed breast epithelia / M. S. Kinch, G. J. Clark, C. J. Der, K. Burridge //J Cell Biol.- 1995.-Vol. 130, № 2 - P.461-471.

61. Cell adhesion molecule LI disrupts E-cadherin-containing adherens junctions and increases scattering and motility of MCF7 breast carcinoma cells / M. Shtutman, E. Levina, P. Ohouo, et al. // Cancer Res - 2006.-Vol. 66, № 23 -P.l 1370-11380.

62. The transcription factor snail is a repressor of E-cadherin gene expression in epithelial tumour cells / E. Batlle, E. Sancho, C. Franci, et al. // Nat Cell Biol.- 2000,-Vol. 2, № 2 - P.84-89.

63. The transcription factor snail controls epithelial-mesenchymal transitions by repressing E-cadherin expression / A. Cano, M. A. Perez-Moreno, I. Rodrigo, et al. // Nat Cell Biol.- 2000.-Vol. 2, № 2 - P.76-83.

64. A new role for E12/E47 in the repression of E-cadherin expression and epithelial-mesenchymal transitions / M. A. Perez-Moreno, A. Locascio, I. Rodrigo, et al. // J Biol Chem.- 2001.-Vol. 276, № 29 - P.27424-27431.

65. Kruppel-like factor 8 induces epithelial to mesenchymal transition

i

and epithelial cell invasion / X. Wang, M. Zheng, G. Liu, et al. // Cancer Res.-2007.-Vol. 67, № 15 - P.7184-7193.

66. Ellenberger, T. Crystal structure of transcription factor E47: E-box recognition by a basic region helix-loop-helix dimer / T. Ellenberger, D. Fass, M. Arnaud, S. C. Harrison // Genes Dev.- 1994.-Vol. 8, № 8 - P.970-980.

67. Vandewalle, C. The role of the ZEB family of transcription factors in development and disease / C. Vandewalle, F. Van Roy, G. Berx // Cell Mol Life Sci.- 2009.-Vol. 66, № 5 - P.773-787.

68. DeltaEFl is a transcriptional repressor of E-cadherin and regulates epithelial plasticity in breast cancer cells / A. Eger, K. Aigner, S. Sonderegger, et al. // Oncogene.- 2005.-Vol. 24, № 14 - P.2375-2385.

69. SIP1/ZEB2 induces EMT by repressing genes of different epithelial cell-cell junctions / C. Vandewalle, J. Comijn, B. De Craene, et al. // Nucleic Acids Res.- 2005.-Vol. 33, № 20 - P.6566-6578.

70. Nieto, M. A. The snail superfamily of zinc-finger transcription factors / A. M. Nieto // Nat Rev Mol Cell Biol.- 2002.-Vol. 3, № 3 - P. 155-166.

71. The transcription factor Slug represses E-cadherin expression and induces epithelial to mesenchymal transitions: a comparison with Snail and E47 repressors / V. Bolos, H. Peinado, M. A. Perez-Moreno, et al. // J Cell Sci-2003.-Vol. 116, № Pt 3 - P.499-511.

72. Peinado, H. Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progression: an alliance against the epithelial phenotype? / H. Peinado, D. Olmeda, A. Cano // Nat Rev Cancer.- 2007.-Vol. 7, № 6 - P.415-428.

73. Snail blocks the cell cycle and confers resistance to cell death / S. Vega, A. V. Morales, O. H. Ocana, et al. // Genes Dev.- 2004.-Vol. 18, № 10 -P.l131-1143.

74. Repression of PTEN phosphatase by Snail 1 transcriptional factor during gamma radiation-induced apoptosis / M. Escriva, S. Peiro, N. Herranz, et al. // Mol Cell Biol.- 2008.-Vol. 28, № 5 - P. 1528-1540.

75. Kajita, M. Aberrant expression of the transcription factors snail and slug alters the response to genotoxic stress / M. Kajita, K. N. McClinic, P. A. Wade // Mol Cell Biol.- 2004.-Vol. 24, № 17 - P.7559-7566.

76. Snail family regulation and epithelial mesenchymal transitions in

, f breast cancer progression / A. G. de Herreros, S. Peiro, M. Nassour, P. Savagner

// J Mammary Gland Biol Neoplasia.- 2010.-Vol. 15, № 2 - P. 135-147.

77. Peinado, H. Snail mediates E-cadherin repression by the recruitment of the Sin3A/histone deacetylase 1 (HDAC1)/HDAC2 complex / H. Peinado, E. Ballestar, M. Esteller, A. Cano // Mol Cell Biol.- 2004.-Vol. 24, № 1 - P.306-319.

78. Polycomb complex 2 is required for E-cadherin repression by the

' i Snail 1 transcription factor / N. Herranz, D. Pasini, V. M. Diaz, et al. // Mol Cell

Biol.-2008.-Vol. 28, № 15 - P.4772-4781.

79. Ajuba LIM proteins are snail/slug corepressors required for neural crest development in Xenopus / E. M. Langer, Y. Feng, H. Zhaoyuan, et al. // Dev Cell.- 2008,-Vol. 14, № 3 - P.424-436.

80. Nibu, Y. Interaction of short-range repressors with Drosophila CtBP in the embryo / Y. Nibu, H. Zhang, M. Levine // Science.- 1998.-Vol. 280, № 5360 - P.101-104.

81. A SNAIL1-SMAD3/4 transcriptional repressor complex promotes TGF-beta mediated epithelial-mesenchymal transition / T. Vincent, E. P. Neve, J. R. Johnson, et al. // Nat Cell Biol.- 2009.-Vol. 11, № 8 - P.943-950.

82. Phosphorylation regulates the subcellular location and activity of the snail transcriptional repressor / D. Domínguez, B. Montserrat-Sentis, A. Virgos-Soler, et al. // Mol Cell Biol.- 2003.-Vol. 23, № 14 - P.5078-5089.

83. Dual regulation of Snail by GSK-3beta-mediated phosphorylation in control of epithelial-mesenchymal transition / B. P. Zhou, J. Deng, W. Xia, et al. //Nat Cell Biol.- 2004.-Vol. 6, № 10 - P.931-940.

84. Wu, Y. Small C-terminal domain phosphatase enhances snail activity through dephosphorylation / Y. Wu, B. M. Evers, B. P. Zhou // J Biol Chem-2009.-Vol. 284, № 1 - P.640-648.

85. Phosphorylation of serine 11 and serine 92 as new positive regulators of human Snail 1 function: potential involvement of casein Icinase-2 and the cAMP-activated kinase protein kinase A / M. R. MacPherson, P. Molina, S. Souchelnytskyi, et al. // Mol Biol Cell.- 2010.-Vol. 21, № 2 - P.244-253.

86. Pakl phosphorylation of snail, a master regulator, of epithelial-to-mesenchyme transition, modulates snail's subcellular localization and functions / Z. Yang, S. Rayala, D. Nguyen, et al. // Cancer Res.- 2005.-Vol. 65, № 8 -P.3179-3184.

87. A molecular role for lysyl oxidase-like 2 enzyme in snail regulation and tumor progression / H. Peinado, M. Del Carmen Iglesias-de la Cruz, D. Olmeda, et al. // EMBO J.- 2005.-Vol. 24, № 19 - P.3446-3458.

88. The hypoxia-controlled FBXL14 ubiquitin ligase targets SNAIL1 for proteasome degradation / R. Vinas-Castells, M. Beltran, G. Vails, et al. // J Biol Chem.- 2010.-Vol. 285, № 6 - P.3794-3805.

89. A Wnt-Axin2-GSK3beta cascade regulates Snail 1 activity in breast cancer cells / J. I. Yook, X. Y. Li, I. Ota, et al. // Nat Cell Biol.- 2006.-Vol. 8, № 12 - P.1398-1406.

90. Radiation-induced proliferation of the human A431 squamous carcinoma cells is dependent on EGFR tyrosine phosphorylation / R. K. SchmidtUllrich, R. B. Mikkelsen, P. Dent, et al. // Oncogene.- 1997.-Vol. 15, № 10 -P.l 191-1197.

91. Savagner, P. Epithelio-mesenchymal transition and cutaneous wound healing / P. Savagner, V. Arnoux // Bull Acad Natl Med - 2009.-Vol. 193, № 9 -P.1981-1991; discussion 1992.

92. A signaling pathway involving TGF-beta2 and snail in hair follicle morphogenesis / C. Jamora, P. Lee, P. Kocieniewski, et al. // PLoS Biol - 2005,-Vol. 3, № 1 -P.ell.

93. Regulation of Snail transcription during epithelial to mesenchymal transition of tumor cells / M. J. Barbera, I. Puig, D. Dominguez, et al. // Oncogene.-2004.-Vol. 23, № 44 - P.7345-7354.

94. Glycogen synthase kinase-3 is an endogenous inhibitor of Snail transcription: implications for the epithelial-mesenchymal transition / R. E. Bachelder, S. O. Yoon, C. Franci, et al. // J Cell Biol.- 2005.-Vol. 168, № 1 -P.29-33.

95. Activation of NF-kappaB by Akt upregulates Snail expression and induces epithelium mesenchyme transition / S. Julien, I. Puig, E. Caretti, et al. // Oncogene.-2007.-Vol. 26, № 53 - P.7445-7456.

96. SPARC represses E-cadherin and induces mesenchymal transition during melanoma development / G. Robert, C. Gaggioli, O. Bailet, et al. // Cancer Res.-2006.-Vol. 66, № 15 - P.7516-7523.

97. Genetic profiling of epithelial cells expressing E-cadherin repressors

t i

reveals a distinct role for Snail, Slug, and E47 factors in epithelial-mesenchymal transition / G. Moreno-Bueno, E. Cubillo, D. Sarrio, et al. // Cancer Res - 2006.-Vol. 66, № 19 - P.9543-9556.

i

98. Sakai, D. Cooperative action of Sox9, Snail2 and PKA signaling in early neural crest development / D. Sakai, T. Suzuki, N. Osumi, Y. Wakamatsu // Development.- 2006.-Vol. 133, № 7 - P.1323-1333.

99. Snail 1 transcriptional repressor binds to its own promoter and

j

controls its expression / S. Peiro, M. Escriva, I. Puig, et al. //Nucleic Acids Res-2006.-Vol. 34, № 7 - P.2077-2084.

100. Freeman, M. Feedback control of intercellular signalling in

1

development / M. Freeman // Nature.- 2000.-Vol. 408, № 6810 - P.313-319.

101. A 3' enhancer controls snail expression in melanoma cells / M. B. Palmer, P. Majumder, M. R. Green, et al. // Cancer Res - 2007.-Vol. 67, № 13 -P.6113-6120.

102. Autoregulation of E-cadherin expression by cadherin-cadherin interactions: the roles of beta-catenin signaling, Slug, and MAPK / M. Conacci-Sorrell, I. Simcha, T. Ben-Yedidia, et al. // J Cell Biol.- 2003.-Vol. 163, № 4 -P.847-857.

103. Slug antagonizes p53-mediated apoptosis of hematopoietic progenitors by repressing puma / W. S. Wu, S. Heinrichs, D. Xu, et al. // Cell-2005.-Vol. 123, № 4 - P.641-653.

104. Human Slug is a repressor that localizes to sites of active transcription / K. Hemavathy, S. C. Guru, J. Harris, et al. // Mol Cell Biol — 2000.-Vol. 20, № 14 - P.5087-5095.

105. Vernon, A. E. Slug stability is dynamically regulated during neural crest development by the F-box protein Ppa / A. E. Vernon, C. LaBonne // Development.-2006.-Vol. 133, № 17 - P.3359-3370.

106. Erk5 controls Slug expression and keratinocyte activation during wound healing / V. Arnoux, M. Nassour, A. L'Helgoualc'h, et al. // Mol Biol Cell.-2008.-Vol. 19, № 11 - P.473 8-4749.

107. Epidermal growth factor-related peptides and their receptors in

1

human malignancies / D. S. Salomon, R. Brandt, F. Ciardiello, N. Normanno // CritRev Oncol Hematol - 1995.-Vol. 19, № 3 - P.183-232.

108. Src and Ras are involved in separate pathways in epithelial cell scattering / B. Boyer, S. Roche, M. Denoyelle, J. P. Thiery // EMBO J.- 1997.-Vol. 16, № 19 - P.5904-5913.

109. Downregulation of caveolin-1 function by EGF leads to the loss of E-cadherin, increased transcriptional activity of beta-catenin, and enhanced tumor cell invasion / Z. Lu, S. Ghosh, Z. Wang, T. Hunter // Cancer Cell - 2003 .-Vol. 4, № 6 - P.499-515.

110. Hepatocyte growth factor induces cell scattering through MAPK/Egr-1-mediated upregulation of Snail / S. Grotegut, D. von Schweinitz, G. Christofori, F. Lehembre // EMBO J.- 2006.-Vol. 25, № 15 - P.3534-3545.

111. HMGA2 and Smads co-regulate SNAIL 1 expression during induction of epithelial-to-mesenchymal transition / S. Thuault, E. J. Tan, H. Peinado, et al. // J Biol Chem.- 2008.-Vol. 283, № 48 - P.33437-33446.

112. Snail induction of epithelial to mesenchymal transition in tumor cells is accompanied by MUC1 repression and ZEB1 expression / S. Guaita, I. Puig, C. Franci, et al. // J Biol Chem.- 2002.-Vol. 277, № 42 - P.39209-39216.

113. Vitamin D(3) promotes the differentiation of colon carcinoma cells by the induction of E-cadherin and the inhibition of beta-catenin signaling / H. G. Palmer, J. M. Gonzalez-Sancho, J. Espada, et al. // J Cell Biol - 2001.-Vol. 154, № 2 - P.369-387.

)

114. The transcriptional repressor Snail promotes mammary tumor recurrence / S. E. Moody, D. Perez, T. C. Pan, et al. // Cancer Cell - 2005.-Vol. 8, №3 -P. 197-209.

115. Twist, a master regulator of morphogenesis, plays an essential role in tumor metastasis / J. Yang, S. A. Mani, J. L. Donaher, et al. // Cell.- 2004.-Vol. 117, № 7 - P.927-939.

116. Stabilization of snail by NF-kappaB is required for inflammation-induced cell migration and invasion / Y. Wu, J. Deng, P. G. Rychahou, et al. // Cancer Cell.- 2009.-Vol. 15, № 5 - P.416-428.

117. Opinion: migrating cancer stem cells - an integrated concept of

i

malignant tumour progression / T. Brabletz, A. Jung, S. Spaderna, et al. // Nat Rev Cancer.- 2005.-Vol. 5, № 9 - P.744-749.

118. Snail and slug mediate radioresistance and chemoresistance by

antagonizing p53-mediated apoptosis and acquiring a stem-like phenotype in

■ i

ovarian cancer cells /N. K. Kurrey, S. P. Jalgaonkar, A. V. Joglekar, et al. // Stem Cells.- 2009.-Vol. 27, № 9 - P.2059-2068.

119. Mesenchymal stem cells within tumour stroma promote breast cancer metastasis / A. E. Karnoub, A. B. Dash, A. P. Vo, et al. /1 Nature - 2007.-Vol. 449, № 7162 - P.557-563.

120. Snail 1 protein in the stroma as a new putative prognosis marker for colon tumours / C. Franci, M. Gallen, F. Alameda, et al. // PLoS One - 2009.-Vol. 4, № 5 - P.e5595. !

137

121. Somatic inactivation of E-cadherin and p53 in mice leads to metastatic lobular mammary carcinoma through induction of anoikis resistance and angiogenesis / P. W. Derksen, X. Liu, F. Saridin, et al. // Cancer Cell - 2006.-Vol. 10, № 5 - P.437-449.

122. Differential loss of E-cadherin expression in infiltrating ductal and lobular breast carcinomas / R. Moll, M. Mitze, U. H. Frixen, W. Birchmeier // Am J Pathol.- 1993.-Vol. 143, № 6 - P.1731-1742.

123. Wu, Y. TNF-alpha/NF-kappaB/Snail pathway in cancer cell migration and invasion / Y. Wu, B. P. Zhou // Br J Cancer .-.-Vol. 102, № 4 -P.639-644.

124. Down-regulation of SNAIL suppresses MIN mouse tumorigenesis: modulation of apoptosis, proliferation, and fractal dimension / H. K. Roy, P. Iversen, J. Hart, et al. // Mol Cancer Ther.- 2004.-Vol. 3, № 9 - P. 1159-1165.

125. Slug, a highly conserved zinc finger transcriptional repressor, protects hematopoietic progenitor cells from radiation-induced apoptosis in vivo / A. Inoue, M. G. Seidel, W. Wu, et al. // Cancer Cell.- 2002.-Vol. 2, № 4 - P.279-288.

126. Cancer development induced by graded expression of Snail in mice / P. A. Perez-Mancera, M. Perez-Caro, I. Gonzalez-Herrero, et al. // Hum Mol Genet.- 2005.-Vol. 14, № 22 - P.3449-3461.

127. Wu, Y. Snail: More than EMT / Y. Wu, B. P. Zhou // Cell Adh Migr.-2010.-Vol. 4, № 2 - P.199-203.

128. Cancer metastasis is accelerated through immunosuppression during Snail-induced EMT of cancer cells / C. Kudo-Saito, H. Shirako, T. Takeuchi, Y. Kawakami // Cancer Cell.- 2009.-Vol. 15, № 3 - P. 195-206.

129. MicroRNA-200c mitigates invasiveness and restores sensitivity to microtubule-targeting chemotherapeutic agents / D. R. Cochrane, N. S. Spoelstra, E. N. Howe, et al. // Mol Cancer Ther.- 2009.-Vol. 8, № 5 - P. 1055-1066.

130. Chemoresistance to paclitaxel induces epithelial-mesenchymal transition and enhances metastatic potential for epithelial ovarian carcinoma cells / H. Kajiyama, K. Shibata, M. Terauchi, et al. // Int J Oncol.- 2007.-Vol. 31, № 2 - P.277-283.

131. Twistl-mediated adriamycin-induced epithelial-mesenchymal

transition relates to multidrug resistance and invasive potential in breast cancer

i

cells / Q. Q. Li, J. D. Xu, W. J. Wang, et al. // Clin Cancer Res - 2009.-Vol. 15, № 8 - P.2657-2665.

132. Epithelial-mesenchymal transitions in development and disease / J. P. Thiery, H. Acloque, R. Y. Huang, M. A. Nieto // Cell.- 2009.-Vol. 139, № 5 -P.871-890.

133. Kouros-Mehr, H. Candidate regulators of mammary branching morphogenesis identified by genome-wide transcript analysis / H. Kouros-Mehr, Z. Werb // Dev Dyn.- 2006.-Vol. 235, № 12 - P.3404-3412.

134. Genetic alterations in urinary bladder carcinosarcoma: evidence of a common clonal origin / S. Halachmi, A. M. DeMarzo, N. H. Chow, et al. // Eur Urol.- 2000.-Vol. 37, № 3 - P.350-357.

135. Requirement of the Akt/beta-catenin pathway for uterine carcinosarcoma genesis, modulating E-cadherin expression through the transactivation of slug / M. Saegusa, M. Hashimura, T. Kuwata, I. Okayasu // Am J Pathol.- 2009.-Vol. 174, № 6 - P.2107-2115.

136. Molecular portraits of human breast tumours / C. M. Perou, T. Sorlie, M. B. Eisen, et al. // Nature.- 2000.-Vol. 406, № 6797 - P.747-752.

137. Gene expression patterns of breast carcinomas distinguish tumor subclasses with clinical implications / T. Sorlie, C. M. Perou, R. Tibshirani, et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 2001.-Vol. 98, № 19 - P.10869-10874.

138. Dontu, G. Breast cancer, stem/progenitor cells and the estrogen receptor / G. Dontu, D. El-Ashry, M. S. Wicha // Trends Endocrinol Metab-2004.-Vol. 15, № 5 - P. 193-197.

139. A positive role for Myc in TGFbeta-induced Snail transcription and epithelial-to-mesenchymal transition / A. P. Smith, A. Verrecchia, G. Faga, et al. // Oncogene.- 2009.-Vol. 28, № 3 - P.422-430.

140. The basal-like breast carcinoma phenotype is regulated by SLUG gene expression / G. Storci, P. Sansone, D. Trere, et al. // J Pathol - 2008.-Vol. 214, № 1 - P.25-37.

141. Epithelial-mesenchymal transition in breast cancer relates to the basal-like phenotype / D. Sarrio, S. M. Rodriguez-Pinilla, D. Hardisson, et al. // Cancer Res.- 2008.-Vol. 68, № 4 - P.989-997.

142. Nakshatri, H. Breast cancer stem cells and intrinsic subtypes: controversies rage on / H. Nakshatri, E. F. Srour, S. Badve // Curr Stem Cell Res Ther.- 2009.-Vol. 4, № 1 - P.50-60.

143. A novel lung metastasis signature links Wnt signaling with cancer cell self-renewal and epithelial-mesenchymal transition in basal-like breast cancer / T. A. DiMeo, K. Anderson, P. Phadke, et al. // Cancer Res - 2009.-Vol. 69, № 13 - P.5364-5373.

144. Induction of EMT by twist proteins as a collateral effect of tumor-promoting inactivation of premature senescence / S. Ansieau, J. Bastid, A. Doreau, et al. // Cancer Cell.- 2008.-Vol. 14, № 1 - P.79-89.

145. Proceedings of the Third International Conference on Recent Advances and Future Directions in Endocrine Manipulation of Breast Cancer: conference summary statement / S. E. Come, A. U. Buzdar, C. L. Arteaga, et al. // Clin Cancer Res.- 2004.-Vol. 10, № 1 Pt 2 - P.327S-330S.

146. Expression of Snail protein in tumor-stroma interface / C. Franci, M. Takkunen, N. Dave, et al. // Oncogene.- 2006.-Vol. 25, № 37 - P.5134-5144.

147. Dhasarathy, A. The transcription factor snail mediates epithelial to mesenchymal transitions by repression of estrogen receptor-alpha / A.

Dhasarathy, M. Kajita, P. A. Wade // Mol Endocrinol.- 2007.-Vol. 21, № 12 -P.2907-2918.

148. Down-regulation of promoter 1.3 activity of the human aromatase gene in breast tissue by zinc-finger protein, snail (SnaH) / T. Okubo, T. K. Truong, B. Yu, et al. // Cancer Res.- 2001.-Vol. 61, № 4 - P.1338-1346.

149. Aromatase activity in normal breast and breast tumor tissues: in vivo and in vitro studies / V. H. James, J. M. McNeill, L. C. Lai, et al. // Steroids-1987.-Vol. 50, № 1-3 - P.269-279.

150. Prevention and treatment of breast cancer by suppressing aromatase activity and expression / S. Chen, D. Zhou, T. Okubo, et al. // Ann N Y Acad Sci.-2002.-Vol. 963, № P.229-238.

151. MTA3, a Mi-2/NuRD complex subunit, regulates an invasive growth pathway in breast cancer / N. Fujita, D. L. Jaye, M. Kajita, et al. // Cell - 2003.-Vol. 113, № 2 - P.207-219.

152. Hormonal regulation of metastasis-associated protein 3 transcription in breast cancer cells / N. Fujita, M. Kajita, P. Taysavang, P. A. Wade // Mol Endocrinol.-2004.-Vol. 18, № 12 - P.2937-2949.

153. Levenson, A. S. MCF-7: the first hormone-responsive breast cancer cell line / A. S. Levenson, V. C. Jordan // Cancer Res - 1997.-Vol. 57, № 15 -P.3071-3078.

154. Androgen formation and metabolism in the pulmonary epithelial cell line A549: expression of 17beta-hydroxysteroid dehydrogenase type 5 and 3alpha-hydroxysteroid dehydrogenase type 3 / P. R. Provost, C. H. Blomquist, C. Godin, et al. // Endocrinology.- 2000.-Vol. 141, № 8 - P.2786-2794.

155. The role of IKK in constitutive activation of NF-kappaB transcription factor in prostate carcinoma cells / A. V. Gasparian, Y. J. Yao, D. Kowalczyk, et al.// J Cell Sei.- 2002.-Vol. 115,№Pt 1 -P.141-151.

i

156. Bollag, D.M. Protein methods./ D. M. Bollag, S'. J. Edelstein. -Wiley-Liss., - 1991.

157. Westermeier R. Electrophoresis in practice : a guide to methods and applications of DNA and protein separations/ R. Westermeier, N. Barnes. -Wiley-VCH, 2001.

158. Flow cytometric detection of apoptosis: comparison of the assays of in situ DNA degradation and chromatin changes / M. A. Hotz, J. Gong, F. Traganos, Z. Darzynkiewicz // Cytometry - 1994.-Vol. 15, № 3 - P.237-244.

159. MTT assays allow quick and reliable measurement of the response of human tumour cells to photodynamic therapy / J. L. Merlin, S. Azzi, D. Lignon, et al. // Eur J Cancer.- 1992.-Vol. 28A, № 8-9 - P. 1452-1458.

160. Estrogen-mediated down-regulation of E-cadherin in breast cancer cells / S. Oesterreich, W. Deng, S. Jiang, et al. // Cancer Res - 2003.-Vol. 63, № 17 - P.5203-5208.

161. Insulin-like growth factor-I receptor signaling in tamoxifen-resistant breast cancer: a supporting role to the epidermal growth factor receptor / J. M. Knowlden, I. R. Hutcheson, D. Barrow, et al. // Endocrinology - 2005.-Vol. 146, № 11 -P.4609-4618.

162. Growth factor signalling networks in breast cancer and resistance to endocrine agents: new therapeutic strategies / R. I. Nicholson, I. R. Hutcheson, D. Britton, et al. // J Steroid Biochem Mol Biol.- 2005.-Vol. 93, № 2-5 - P.257-262.

163. FGFR1 amplification drives endocrine therapy resistance and is a therapeutic target in breast cancer / N. Turner, A. Pearson, R. Sharpe, et al. // Cancer Res.- 2010.-Vol. 70, № 5 - P.2085-2094.

164. Choi, J. Transforming growth factor-betal represses E-cadherin production via slug expression in lens epithelial cells / J. Choi, S. Y. Park, C. K. Joo // Invest Ophthalmol Vis Sci.- 2007.-Vol. 48, № 6 - P.2708-2718.

165. Zavadil, J. TGF-beta and epithelial-to-mesenchymal transitions / J. Zavadil, E. P. Bottinger // Oncogene.- 2005.-Vol. 24, № 37 - P.5764-5774.

166. Regulation of vimentin by SIP1 in human epithelial breast tumor cells / S. Bindels, M. Mestdagt, C. Vandewalle, et al. // Oncogene - 2006.-Vol. 25, № 36 - P.4975-4985.

167. CD44+/CD24- breast cancer cells exhibit enhanced invasive properties: an early step necessary for metastasis / C. Sheridan, H. Kishimoto, R. K. Fuchs, et al. // Breast Cancer Res - 2006.-Vol. 8, № 5 - P.R59.

168. Tamoxifen resistance in MCF7 cells promotes EMT-like behaviour and involves modulation of beta-catenin phosphorylation / S. Hiscox, W. G. Jiang, K. Obermeier, et al. // Int J Cancer.- 2006.-Vol. 118, № 2 - P.290-301.

169 Bodine, P. V. Suppression of ligand-dependent estrogen receptor activity by bone-resorbing cytokines in human osteoblasts / P. V. Bodine, H. A. Harris, B. S. Komm // Endocrinology.- 1999.-Vol. 140, № 6 - P.2439-2451.

170. Identification of proteins within the nuclear factor-kappa B transcriptional complex including estrogen receptor-alpha / I. Feldman, G. M. Feldman, C. Mobarak, et al. // Am J Obstet Gynecol.- 2007.-Vol. 196, № 4 -P.394 e391-311; discussion 394 e311-393.

171. Transrepression of estrogen receptor beta signaling by nuclear factor-kappab in ovarian granulosa cells / S. Chu, Y. Nishi, T. Yanase, et al. // Mol Endocrinol.-2004.-Vol. 18, № 8 - P. 1919-1928.

172. RelB NF-kappaB represses estrogen receptor alpha expression via induction of the zinc finger protein Blimp 1 / X. Wang, K. Belguise, C. F. O'Neill, et al. // Mol Cell Biol.- 2009.-Vol. 29, № 14 - P.3832-3844.

173. Nuclear NF-kappaB/p65 expression and response to neoadjuvant chemotherapy in breast cancer / R. L. Jones, F. Rojo, R. A'Hern, et al. // J Clin Pathol.- 201 l.-Vol. 64, № 2 - P.130-135.

174. Crossroads of estrogen receptor and NF-kappaB signaling / D. K. Biswas, S. Singh, Q. Shi, et al. // Sei STKE-2005.-Vol. 2005, № 288 - P.pe27.

175. Wang, X. Induction of the RelB NF-kappaB subunit by the cytomegalovirus IE1 protein is mediated via Jun kinase and c-Jun/Fra-2 AP-1 complexes / X. Wang, G. E. Sonenshein // J Virol.- 2005.-Vol. 79, № 1 - P.95-105.

176. Direct interaction between estrogen receptor alpha and NF-kappaB in the nucleus of living cells / M. E. Quaedackers, C. E. van den Brink, P. T. van der Saag, L. G. Tertoolen // Mol Cell Endocrinol - 2007.-Vol. 273, № 1-2 - P.42-50.

177. Distinct roles of unliganded and liganded estrogen receptors in transcriptional repression / A. Cvoro, C. Tzagarakis-Foster, D. Tatomer, et al. // Mol Cell.- 2006.-Vol. 21, № 4 - P.555-564.

178. CBP Is a dosage-dependent regulator of nuclear factor-kappaB suppression by the estrogen receptor / K. W. Nettles, G. Gil, J. Nowak, et al. // Mol Endocrinol.- 2008.-Vol. 22, № 2 - P.263-272.

179. NF-kappaB suppression provokes the sensitization of hormone-resistant breast cancer cells to estrogen apoptosis / Y. S. Lobanova, A. M. Scherbakov, V. A. Shatskaya, et al. // Mol Cell Biochem - 2009.-Vol. 324, № 1-2 - P.65-71.

180. Cyclic, proteasome-mediated turnover of unliganded and liganded ERalpha on responsive promoters is an integral feature of estrogen signaling / G. Reid, M. R. Hubner, R. Metivier, et al. // Mol Cell.- 2003.-Vol. 11, № 3 - P.695-707.

181. A natural antisense transcript regulates Zeb2/Sipl gene expression during Snail 1-induced epithelial-mesenchymal transition / M. Beitran, I. Puig, C. Pena, et al. // Genes Dev.- 2008.-Vol. 22, № 6 - P.756-769.

182. Toh, Y. The role of the MTA family and their encoded proteins in human cancers: molecular functions and clinical implications / Y. Toh, G. L. Nicolson // Clin Exp Metastasis - 2009.-Vol. 26, № 3 - P.215-227.

183. Estrogen regulates Snail and Slug in the down-regulation of E-cadherin and induces metastatic potential of ovarian cancer cells through estrogen receptor alpha / S. H. Park, L. W. Cheung, A. S. Wong, P. C. Leung // Mol Endocrinol.- 2008,-Vol. 22, № 9 - P.2085-2098.

184. Planas-Silva, M. D. Estrogen promotes reversible epithelial-to-mesenchymal-like transition and collective motility in MCF-7 breast cancer cells / M. D. Planas-Silva, P. K. Waltz // J Steroid Biochem Mol Biol.- 2007.-Vol. 104, № 1-2-P.l 1-21.

185. NF-kappaB is essential for epithelial-mesenchymal transition and metastasis in a model of breast cancer progression / M. A. Huber, N. Azoitei, B. Baumann, et al. // J Clin Invest.- 2004.-Vol. 114, № 4 - P.569-581.

186. Wajant, H. Tumor necrosis factor signaling / H. Wajant, K. Pfizenmaier, P. Scheurich // Cell Death Differ.- 2003.-Vol. 10, № 1 - P.45-65

187. Reciprocal antagonism between estrogen receptor and NF-kappaB activity in vivo / M. J. Evans, A. Eckert, K. Lai, et al. // Circ Res - 2001.-Vol. 89, № 9 - P.823-830.

188. NF-kappa B activation in human breast cancer specimens and its role in cell proliferation and apoptosis / D. K. Biswas, Q. Shi, S. Baily, et al. // Proc Natl Acad Sci U S A - 2004.-Vol. 101, № 27 - P.10137-10142.

189. Uray, I. P. Chemoprevention of hormone receptor-negative breast cancer: new approaches needed / I. P. Uray, P. H. Brown // Recent Results Cancer Res.-.-Vol. 188, № P.147-162.

190. Davies, E. New therapeutic approaches in breast cancer / E. Davies, S. Hiscox // Maturitas.-.- Vol. 68, № 2 - P.121-128.

191. Haagenson K.K. The role of MAP kinases and MAP kinase phosphatase-1 in resistance to breast cancer treatment / K. K. Haagenson, G. S. Wu // Cancer Metastasis Rev-.-Vol. 29.-P. 143-149

192. Musgrove, E. A Biological determinants of endocrine resistance in breast cancer / E. A. Musgrove, R. L. Sutherland. // Nat Rev Cancer - 2009.-Vol. 9,№9-P.631-643.

193. Lundgren, K. Hypoxia, Snail and incomplete epithelial-mesenchymal transition in breast cancer / K. Lundgren, B. Nordenskjold, G. Landberg. // Br J Cancer.-2009.-Vol. 101, № 10 - P.1769-1781.

194. A developmentally regulated inducer of EMT, LBX1, contributes to breast cancer progression / M. Yu, G. A. Smolen, J. Zhang, et al. // Genes Dev-2009.-Vol. 23, № 15 - P.1737-1742.

195. Involvement of Pin 1 induction in epithelial-mesenchymal transition of tamoxifen-resistant breast cancer cells / M. R. Kim, H. K. Choi, K. B. Cho, et al. // Cancer Sei.- 2009.-Vol. 100, № 10 - P. 1834-1841.

196. TNFalpha up-regulates SLUG via the NF-kappaB/HIFl alpha axis, which imparts breast cancer cells with a stem cell-like phenotype / G. Storci, P. Sansone, S. Mari, et al. // J Cell Physiol.-.-Vol. 225, № 3 . p.682-691.