Сравнительное исследование эпителио-мезенхимной пластичности соматических клеток человека в условиях 3D культивирования тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Зурина Ирина Михайловна

• Зурина Ирина Михайловна
• кандидат наук
• 2018

Оглавление диссертации кандидат наук Зурина Ирина Михайловна

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность

Цель исследования:

Задачи исследования

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость

Основные положения, выносимые на защиту

Апробация работы

Публикации по теме диссертации

Структура и объем диссертации

Внедрение полученных результатов

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Механизмы ЭМП

1.1.1 Внеклеточные сигналы-индукторы ЭМП

1.1.2 Транскрипционные факторы

1.1.3 МикроРНК

1.1.4 Альтернативный сплайсинг

1.1.5 Разрушение межклеточных контактов и нарушение полярности

1.1.6 Аутофагия

1.2 Эпителио-мезенхимные переходы в патогенезе фиброза

1.2.1 Фиброз почек

1.2.2 Идиопатический легочный фиброз

1.2.3 Фиброз печени

1.2.4 Келоидные рубцы

1.2.5 Фиброзные изменения в сетчатке глаза

1.2.6 Слизистая ротовой полости

1.2.7 Диагностика и терапия фиброза

1.3 ЭМП/МЭП в репрограммировании соматических клеток in vitro

1.4 ЭМП и 3D культивирование

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Культивирование клеток

2.1.1 2D культуры

2.1.2 3D культуры

2.1.3 Вторичноприкрепленные культуры

2.2 Прижизненная цейтраферная (time-lapse) микроскопия

2.3 Математическое моделирование

2.4 Гистология и электронная микроскопия

2.4.1 Фиксация образцов

2.4.2 Гистология - полутонкие срезы

2.4.3 Просвечивающая электронная микроскопия

2.4.4 Растровая электронная микроскопия

2.5 Проточная цитофлуориметрия

2.6 Иммуноцитохимия и лазерная сканирующая конфокальная микроскопия

2.7 Репарация 3D культуры ретинального пигментного эпителия после повреждения наносекундным лазерным скальпелем

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Монослойные культуры

3.1.1 Буккальный эпителий

3.1.2 Ретинальный пигментный эпителий

3.1.3 Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки лимба

3.1.4 Фибробласты собственной пластинки слизистой щеки

3.1.5 Сравнение миграционной активности клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов повреждения монослоя в 2D культуре в тесте «заживление царапины»

3.2 Математическое моделирование для определения оптимальных параметров 3D культивирования клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов

3.2.1 Моделирование процесса сфероидогенеза из клеток эпителиального фенотипа

3.2.2 Моделирование процесса сфероидогенеза из клеток мезенхимного фенотипа

3.2.3 Сравнение результатов моделирования процесса компактизации для

сфероидов из клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов

3.3 3Э Культивирование

3.3.1 Буккальный эпителий

3.3.2 Ретинальный пигментный эпителий

3.3.3 Мультипотентные мезенхимные стромальные клетки лимба

3.3.4 Фибробласты собственной пластинки слизистой щеки

3.4 Анализ пролиферативной активности клеток в 3Э культуре

3.5 Вторичноприкрепленные культуры

3.6 Репарация 3Э культур РПЭ после повреждения наносекундным лазерным скальпелем

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

Список сокращений

2D двумерный (two-dimensional) 3D трехмерный (three-dimensional) БЭ буккальный эпителий ВКМ внеклеточный матрикс ДМСО диметилсульфоксид

иПСК индуцированные плюрипотентные стволовые клетки

ММСК-Л мультипотентные мезенхимные стромальные клетки лимба

МЭП мезенхимо-эпителиальный переход

РПЭ ретинальный пигментный эпителий

ФСПС фибробласты собственной пластинки слизистой

ЭМП эпителио-мезенхимный переход

ЭСК эмбриональные стволовые клетки

ЭТС эмбриональная телячья сыворотка

Akt протеинкиназа В

aPKC атипичная протеинкиназа С (atypic protein kinase C) bHLH основной домен типа спираль-петля-спираль (basic helix-loop-helix) BMP костный морфогенетический белок (Bone Morphogenetic Protein) CD кластер дифференцировки (cluster of differentiation) CRB Crumbs (маркер апикальной стороны эпителиальных клеток) DLG disc large (маркер базо-латеральной стороны эпителиальных клеток) EGF эпидермальный фактор роста (epidermal growth factor) EGFR рецептор эпидермального фактора роста (epidermal growth factor receptor) EpCAM эпителиальная молекула клеточной адгезии (Epithelial cell adhesion molecule)

ERK киназа, регулируемая внеклеточными сигналами (extracellular signalregulated kinase)

ESRP эпителиальная изоформа регуляторных белков сплайсинга (epithelial

splicing regulatory protein) FGF фактор роста фибробластов (fibroblast growth factor) FSP-1 фибробласт-специфический белок (fibroblast-specific factor-1) GEF фактор обмена гуаниновых нуклеотидов (guanine nucleotide exchange factors)

GSK3P киназа гликогенсинтазы 3р (glycogen synthase kinase 3 beta) HGF фактор роста гепатоцитов (hepatocyte growth factor) HIF-1 гипоксия-индуцированный фактор 1 (Hypoxia-induced factor 1) HNF ядерный фактор гепатоцитов (Hepatocyte nuclear factor) Hrs субстрат тирозинкиназы, регулируемой фактором роста гепатоцитов (hepatocyte growth factor-regulated tyrosine kinase substrate)

HSP белок теплового шока (Heat shock protein)

IGF1 инсулин-подобный фактор роста 1 (insulin-like growth factor)

IL интерлейкин

ILK интегрин-зависимая киназа (integrin-linked kinase) JAM-1 адгезивная молекула контактов-1 (junctional adhesion molecule-1) LAP ассоциированный с латентностью пептид (latency-associated peptide) LGL lethal giant larvae (маркер базо-латеральной стороны эпителиальных клеток)

LEF лимфоидный энхансерный фактор (lymphoid enhancer factor) МАРК митоген-активируемая протеинкиназа (mitogen-activated protein kinase) MEK МАРК/ERK киназа miR микроРНК

MMP матриксная металлопротеиназа (matrix metalloproteinase)

МТ1-ММР мембраносвязанная матриксная металлопротеиназа I типа

(membrane type 1-matrix metalloproteinase) mTOR механистическая мишень рапамицина (mechanistic target of rapamycin) NCAM нейральная молекула клеточной адгезии (Neural cell adhesion molecule) NLS последовательность ядерной локализации (nuclear localization sequence) PALS белок, ассоциированный с Lin Seven (protein associated with Lin Seven) PAR partitioning defective (маркер апикальной стороны эпителиальных клеток) PATJ PALS1-ассоциированный белок плотных контактов (PALS1-associated

tight junction protein) PDGF тромбоцитарный фактор роста (platelet-derived growth factor) PI3K фосфоинозитид-3-киназа PKC протеинкиназа С PKD протеинкиназа D

PRC polycomb ингибиторный комплекс (Polycomb Repressive Complex)

RTK рецептор тирозиновых киназ (Receptor tyrosine kinases)

aSMA a-гладкомышечный актин (a-smooth muscle actin)

SMURF1 Е3 убиквитинлигаза

TCF Т-клеточный фактор (T-cell factor)

TGF-P трансформирующий фактор роста P (transforming growth factor в) TGFpR рецептор трансформирующего фактора роста в ZO-1 зона окклюденс-1 (Zonula occludens-1)

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительное исследование эпителио-мезенхимной пластичности соматических клеток человека в условиях 3D культивирования»

Актуальность

Изменение фенотипа эпителиальных клеток и приобретение ими признаков мезенхимных клеток, известное как эпителио-мезенхимный переход (ЭМП), а также обратный процесс - мезенхимо-эпителиальный переход (МЭП) являются неотъемлемой частью как нормальных физиологических процессов (эмбриональное развитие и органогенез, миграция клеток, репарация тканей), так и патологических процессов, таких как фиброз или метастазирование при злокачественных опухолях. Поэтому процессы ЭМП и МЭП являются в настоящее время актуальной темой исследования в научном сообществе. Возможность контролировать данные процессы, поддерживать необходимый баланс между ЭМП и МЭП может стать одним из основных подходов медицины будущего при терапии таких распространенных патологий, как фиброз и, что более важно, метастазирование. Исследование ЭМП и МЭП, однако, осложнено многофакторной регуляцией этих процессов, которая осуществляется на уровне микроокружения, внутриклеточных сигнальных путей и эпигенетики. В настоящее время выделены основные триггеры переключения фенотипа и поведения клеток - транскрипционные факторы ZEB, Snail, Slug, фактор роста TGFp и другие [95]. Но причины, ключевые пусковые факторы, способствующие смещению нормального физиологического процесса в сторону патологического, остаются малоизученными. Одним из наиболее распространенных и актуальных примеров патологической формы регенерации, связанной непосредственно с ЭМП, является фиброз различных тканей и органов. Фиброзирование, по сравнению с нормальной регенерацией, позволяет относительно быстро обеспечить защиту органа от агрессивных внешних условий. При этом либо частично, либо полностью утрачивается функция поврежденного органа. Учитывая активное развитие промышленности, ухудшение окружающей экологической обстановки и злоупотребление табачной и алкогольной

продукцией, в современном обществе непрерывно растет число пациентов с повреждениями внутренних органов различной степени тяжести, сопровождающимися аномальной регенерацией (фиброз печени, легких, сердца, почек и пр.) и даже летальным исходом.

В связи с этим в мировой клинической практике, ведется разработка фармацевтических агентов, направленных на подавление фиброзирования органов. Мишенью данных препаратов, в основном, выступает регуляция синтеза белков внеклеточного матрикса. В последние годы стали также появляться препараты, направленные на регуляцию ЭМП [182]. Общепринятое использование животных моделей in vivo затрагивает биоэтические и экономические вопросы. В связи с этим изучение и тестирование разных препаратов стали проводить in vitro на первичных монослойных культурах клеток или на иммортализованных линиях, так как культуры клеток представляют собой более удобную модель для исследований. Наиболее перспективным рассматривают использование не 2D, а 3D систем культивирования, которые позволяют длительное время сохранять тканеспецифичные свойства клеток [2 , 135].

Таким образом, исследование механизмов обратимых эпителио-мезенхимных переходов соматических клеток человека, выделенных из различных тканей и органов с разным регенеративным потенциалом, в 2D и 3D условиях культивирования является актуальным, научно и практически значимым.

Цель исследования:

изучить клеточные механизмы обратимых эпителио-мезенхимных переходов и сравнить поведение соматических клеток человека на моделях повреждения в условиях 2D и 3D культивирования.

Задачи исследования

1. Выделить первичные культуры соматических клеток человека эпителиального и мезенхимного фенотипов, охарактеризовать их и создать банк клеток.

2. Изучить динамику формирования сфероидов из 2Э культур эпителиальных и мезенхимных клеток.

3. Подобрать оптимальные параметры формирования стандартизованных сфероидов из эпителиальных и мезенхимных соматических клеток с помощью методов математического моделирования.

4. Исследовать строение и ультраструктуру полученных сфероидов из эпителиальных и мезенхимных клеток.

5. Сравнить экспрессию клеточных маркеров и компонентов внеклеточного матрикса, связанных с эпителио-мезенхимным переходом, в сфероидах из клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов.

6. Провести сравнительное исследование реактивации эпителиальных/мезенхимных клеток при помещении сфероидов в адгезивные условия.

7. Изучить поведение клеток эпителиального и мезенхимного фенотипа на 2Э модели «заживление царапины». Изучить роль эпителио-мезенхимной пластичности в репарации сфероидов после повреждения лазерным скальпелем.

Научная новизна

Впервые получена и охарактеризована культура клеток буккального эпителия, отработана методика длительного монослойного культивирования клеток с сохранением характеристик эпителия.

Впервые показано, что соматические клетки как эпителиального, так и мезенхимного фенотипа из разных тканей в условиях 3D культивирования способны формировать дормантные сфероиды.

Получены новые данные о динамике и механизмах образования сфероидов, различиях в ультраструктуре и экспрессии маркеров в сфероидах из эпителиальных и мезенхимных клеток. Впервые показано, что 3D культивирование стимулирует ЭМП/МЭП без дополнительной индукции.

Впервые показано, что клетки, выделенные из тканей с разным регенеративным потенциалом, различаются по эпителио-мезенхимной пластичности в условиях 2D и 3D культивирования.

Впервые показана связь эпителио-мезенхимной пластичности клеток со способностью сфероидов к саморепарации после повреждающего воздействия.

С помощью методов математического моделирования получены новые данные о влиянии разных факторов на формирование сфероидов из эпителиальных и мезенхимных клеток, что позволило оптимизировать процесс получения стандартизованных сфероидов.

Теоретическая и практическая значимость

Комбинирование методов 2D и 3D культивирования позволяет изучать изменения фенотипа клеток и их поведение, процессы репарации, а также исследовать механизмы репаративной и патологической регенерации.

3D культивирование инициирует эпителио-мезенхимные и мезенхимо-эпителиальные переходы, что позволяет получать in vitro жизнеспособные дормантные модули из соматических клеток человека, которые могут быть использованы в качестве уникальной модели для проведения фундаментальных исследований.

3D культивирование клеток буккального эпителия позволяет получать дормантные модули, сохраняющие эпителиальные характеристики. Их использование может найти широкое применение в области регенеративной медицины для репарации тканей и органов с многослойной эпителиальной выстилкой, в том числе и при обширных повреждениях.

Метод математического моделирования позволяет значительно сократить количество опытов и затрачиваемого на них времени, а также планировать процессы сфероидогенеза с целью получения модулей с заданными свойствами для проведения фундаментальных исследований и создания биоэквивалентов, что открывает новые возможности для создания инновационных биомедицинских технологий.

Дальнейшее изучение поведения соматических клеток при 3D культивировании даст возможность найти альтернативные пути управления феногенезом эпителиальных и мезенхимных соматических клеток в обход эмбриогенеза.

Результаты исследования механизмов и динамики формирования сфероидов из эпителиальных и мезенхимных клеток имеют теоретическое и практическое значение, могут быть использованы в фундаментальных исследованиях и лечь в основу разработки инновационных технологий получения донорской совместимой ткани и тканеиженерных конструкций для регенеративной медицины.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Изолированные соматические клетки эпителиального и мезенхимного фенотипов в условиях 3D культивирования способны формировать сфероиды.

2. Эпителио-мезенхимные и мезенхимо-эпителиальные переходы, происходящие в процессе сфероидогенеза, зависят от детерминированности, тканеспецифичности и функциональной активности исходных клеток.

3. Механизм и динамика образования сфероидов из эпителиальных и мезенхимных клеток различаются. Сфероидогенез из эпителиальных клеток протекает за счет взаимодействия клеток с восстановлением плотных и адгезивных межклеточных контактов. Сфероидогенез из мезенхимных клеток

происходит за счет формирования межклеточных контактов и синтеза внеклеточного матрикса.

4. Метод математического моделирования позволяет описать и оптимизировать процесс сфероидогенеза, а также подобрать оптимальные условия для получения стандартизованных сфероидов из соматических клеток разных органов и тканей.

5. Различия в эпителио-мезенхимной пластичности разных типов клеток связаны с регенеративным потенциалом тканей и органов и влияют на способность сфероидов к саморегенерации.

Апробация работы

Основные результаты работы доложены на следующих международных конференциях:

• VII Школа-конференция молодых ученых Института Биологии развития им. Н.К.Кольцова РАН. - Москва, Россия. 29.11-01.12.2012.

• The VI Epithelial-Mesenchymal Transition Meeting. - Аликанте, Испания. - 13-16.11.2013.

• XII Conference High medical technologies in XXI century: The modern achievements in cellular technologies and nanotechnologies. - Бенидорм, Испания. - 19-26.10.2013.

• FEBS EMBO Conference. - Париж, Франция. - 30.08-04.09.2014.

• XXII Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «Ломоносов-2015». - Москва, Россия. - 13-17.04.2015.

• The 6th EMBO meeting. - Бирмингем, Великобритания. - 5-8.09.2015.

• High medical technologies in XXI century. - Бенидорм, Испания. - 2431.10.2015.

• World Conference on Regenerative Medicine. - Лейпциг, Германия. -21-23.10.2015.

• 12th International Congress of Cell Biology. - Прага, Чехия. - 2125.07.2016.

• Clinical proteomics. Postgenome medicine. - Москва. 30.10-01.11. 2017.

• III Национальный конгресс по регенеративной медицине. - Москва,

Россия. - 15-18.11.2017.

Публикации по теме диссертации

По материалам диссертации опубликовано 27 научных работ, в том числе 10 работ в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ, 3 статьи в рецензируемых журналах, входящих в список Web of Science, и 13 тезисов докладов на международных конференциях.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов, их обсуждения, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на 176 страницах машинописного текста, содержит 50 рисунков и 6 таблиц. Список литературы включает 191 источник.

Внедрение полученных результатов

Трехмерные клеточные модули из буккального эпителия, позволяющие в течение длительного времени поддерживать стабильную жизнеспособную популяцию эпителиальных клеток, которая при повторной адгезии формирует многослойные структуры из клеток эпителиального фенотипа, планируется использовать в доклинических и клинических исследованиях по созданию тканеинженерной конструкции для замещения тканей с эпителиальной выстилкой.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Эпителио-мезенхимный переход (ЭМП) - это многоэтапный морфогенетический процесс, в ходе которого эпителиальные клетки теряют характерные для них черты и приобретают свойства и признаки мезенхимных клеток.

Впервые, более 120 лет назад, косвенно описал явление ЭМП испанский врач и гистолог Сантьяго Рамон-и-Кахаль. В разделе пособия, посвященного опухолям, он отметил, что формировать метастазы способны только эпителиальные опухоли, а инвазивность опухолевых клеток, то есть их способность отделяться от первичной опухоли, мигрировать в другие органы и формировать там вторичные очаги, он объяснял тем, что они не связаны с базальной мембраной и не прикреплены к друг другу [177].

Тем не менее, термин ЭМП был введен гораздо позднее, в 1968 году, Элизабет Хей - первой женщиной-президентом Общества биологии развития. Используя в качестве модельного объекта первичную полоску цыпленка, она обнаружила, что эпителиальные клетки могут изменить свой фенотип на мезенхимный, и что данный процесс, имеющий место в эмбриональном развитии, обратим и существует противоположное превращение - мезенхимо-эпителиальный переход (МЭП) [57].

В 2002 году французский онколог Жан Поль Тьери показал, что этот процесс вносит значительный вклад в развитие рака - в результате ЭМП эпителиальные клетки приобретают те свойства мезенхимных клеток, которые необходимы для инвазии и метастазирования [161]. Отличие ЭМП при развитии злокачественных раковых заболеваний, состоит в том, что в данном случае процесс менее упорядочен и скоординирован, чем в эмбриональном развитии. Более того, при раке была показана возможность появления метастабильных клеток, способных в течение длительного периода времени сохранять гибридный эпителио-мезенхимный фенотип [98].

В 2008 году на симпозиуме Международной ассоциации ЭМП была принята классификация, согласно которой выделяют три типа ЭМП. ЭМП первого типа происходит в эмбриогенезе, является одним из основных процессов в морфо- и органогенезе. Самые первые ЭМП происходят в эмбриональном развитии при имплантации и гаструляции. В результате дробления формируется неполярная внутриклеточная масса и полярная трофэктодерма внутри и снаружи эмбриона, соответственно. При имплантации трофобласты приобретают инвазивный фенотип за счет частичного ЭМП, а вневорсиночные трофобласты, которые мигрируют в спиральные артерии, проходят полный ЭМП [21]. Клетки внутриклеточной массы подразделяются на эпибласт и гипобласт, эпителиальные клетки первичной эктодермы (эпибласта) приобретают свойства подвижных мезенхимных клеток и мигрируют в область первичной полоски -происходит гаструляция [77]. Для ЭМП первого типа характерна обратимость, то есть мезенхимные клетки проходят обратный мезенхимо-эпителиальный переход (МЭП), необходимый для формирования вторичного эпителия в закладках органов [77 , 120 , 185].

ЭМП второго типа активируется в ответ на повреждение и воспаление. Если воспаление непродолжительное и постепенно снижается, то ЭМП в отсутствие провоспалительных факторов прекращается, а результатом является полное восстановление поврежденной ткани. В случае сильного повреждения и продолжительного или хронического воспаления длительная индукция ЭМП приводит к избыточному формированию фибробластов и миофибробластов, избыточному синтезу внеклеточного матрикса с нарушенным компонентным составом и, в результате, фиброзу, потере структурной и функциональной целостности тканей и органов. И, наконец, третий тип ЭМП происходит в карциномах (эпителиальных опухолях) и ассоциируется с приобретением опухолевыми клетками подвижности и способности к инвазии и метастазированию [77 , 120 , 185].

Рисунок 1.1 Типы эпителио-мезенхимных переходов, согласно общепринятой классификации 2008 года. А - Первый тип ЭМП в первую очередь ассоциирован с имплантацией и гаструляцией, дает начало клеткам мезо- и энтодермы, а также мигрирующим клеткам нервного гребня. Примитивная эктодерма (эпибласт) путем прохождения дает начало первичной мезенхиме, которая позднее может превратиться во вторичный эпителий путем МЭП. Вторичный эпителий также способен проходить ЭМП для формирования соединительных тканей. Б - ЭМП, возникающий в контексте воспалительной реакции, связан с нормальной регенерацией поврежденных тканей и развитием фиброза. В отличие от ЭМП первого типа, ЭМП второго типа происходит в течение длительного времени, что в итоге может привести к разрушению поврежденной ткани в случае хронического воспалительного процесса. В - Клетки опухолей эпителиального происхождения (карцином) могут путем прохождения ЭМП 3 типа приобретать способность к инвазии и метастазированию По Kalluri, Weinberg, 2009

Ещё одним важным процессом, не внесенным в классификацию типов ЭМП, в который важный вклад вносит эпителио-мезенхимная пластичность, а точнее обратный МЭП, - это получение индуцированных плюрипотентных стволовых клеток (иПСК) из соматических клеток в условиях in vitro. Получение иПСК в настоящее время является одной из самых активно развивающихся областей на стыке биологии и медицины.

1.1 Механизмы ЭМП

ЭМП в первую очередь характеризуется тем, что приводит к потере эпителиальными клетками их основных отличительных свойств, а именно: разрушению плотного пласта клеток, который формируется за счет большого количества разнообразных межклеточных контактов (плотных, адгезивных, щелевых, десмосом), потере апико-базальной полярности (и приобретению переднезадней, или планарной, полярности), изменению структуры цитоскелета и нарушению целостности базальной мембраны.

Несмотря на то, что для каждого типа ЭМП существуют свои характерные особенности и специфические пусковые факторы, в целом механизм данного процесса универсален за счет того, что в итоге ряд факторов роста запускает сигнальные каскады, которые активируют определенный пул цитокинов и транскрипционных факторов, которые непосредственно запускают программу ЭМП. Регуляция ЭМП осуществляется на транскрипционном, постранскрипционном, посттрансляционном и эпигенетическом уровне, немалый вклад в регуляцию вносят и некодирующие микроРНК [120].

1.1.1 Внеклеточные сигналы-индукторы ЭМП

TGFfi

TGFp - повсеместно экспрессируемый цитокин, который связывается с клеткой-мишенью через серин/треонин киназные TGFp-рецепторы I (TpRI) и II типа (TpRII). Они формируют на мембране гетеротетрамерный комплекс, после чего происходит фосфорилирование и активация белков Smad2 и Smad3. Smad2 и Smad3 диссоциируют, отщепляясь от комплекса рецепторов, и вместе со Smad4 образуют тримеры Smad белков, которые импортируются в ядро, где, взаимодействуя с транскрипционными факторами, ко-активаторами и ко-репрессорами, обеспечивают регуляцию транскрипции (Рис.1.2) [112 , 183]. Так, TGFp приводит к повышению экспрессии транскрипционных факторов индукторов ЭМП - SNAI1 и SNAI2, ZEB, Twist [95].

Помимо осуществления ЭМП с помощью TGFp по каноническому Smad-опосредованному сигнальному пути, возможны и другие механизмы активации (Рис. 1.2). Так, TGFp индуцирует разнообразные сигнальные каскады через Неподобные ГТФазы (КЬо, Rac и Cdc42), фосфоинозитид-3-киназу (Р13К) или МАР-киназу (МАРК) [29 , 95]. Активность ГТФаз, в частности, обеспечивает реорганизацию цитоскелета и формирование филоподий и ламеллоподий [29 , 179].

Рисунок 1.2. Две ветви (Smad-зависимая и Smad-независимая) TGFP-индуцированных сигнальных путей ЭМП. По Yu et al., 2015

Wnt/ в - катенин

Высоко консервативный Wnt/Fzd сигнальный путь имеет две ветви -каноническую (Р-катенин-зависимую) и неканоническую (Р-катенин-независимую). При активации канонического пути связывание лиганда (Wnt) с рецептором (Frizzled) ингибирует деградацию синтезированного Р-катенина, и эта de novo синтезированная не связанная с Е-кадгерином форма Р-катенина

транслоцируется в ядро, где взаимодействует с транскрипционными факторами семейства TCF/LEF (T-cell factor/lymphoid enhancer factor) [165]. Это приводит к транскрипционной активации генов-мишеней Wnt, к которым в том числе относятся виментин [42] и ZEB1 [143], что в свою очередь приводит к подавлению синтеза белков, необходимых для функционирования контактов характерных для эпителиальных клеток. Кроме того, Wnt ингибирует фосфорилирование транскрипционного фактора SNAI1 и повышает экспрессию гена, кодирующего данный белок [180].

Однако, по последним данным, роль Wnt в регуляции эпителио-мезенхимной пластичности не так однозначна. Показано, что кратковременное воздействие на ЭСК способствует самообновлению клеток, усиливая экспрессию Е-кадгерина. В то же время, длительное воздействие Wnt на клетки приводит к их дифференцировке через каноническую Р-катенин-опосредованную индукцию транскрипционного фактора-индуктора ЭМП - Slug [67].

Факторы роста

В регуляции процесса ЭМП помимо TGFP участвуют и другие факторы роста, такие как фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста гепатоцитов (HGF), эпидермальный фактор роста (EGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и инсулин-подобный фактор роста 1 (IGF1) [95]. Многообразные изоформы FGF через МАР-киназные сигнальные пути участвуют в регуляции экспрессии как мезенхимных (SNAI1, SNAI2, металлопротеиназы, N-кадгерин), так и эпителиальных (Е-кадгерин) маркеров [73 , 95]. HGF индуцирует экспрессию транскрипционных факторов Snail и Twist [51 , 181]. EGF способствует стабилизации Snail за счет ингибирования активности киназы гликогенсинтазы 3р (GSK3P), что косвенно приводит к снижению экспрессии Е-кадгерина [102], способен напрямую индуцировать подавление Е-кадгерина через MEK/ERK сигнальный путь [159], а также способствует усилению подвижности клеток за счет стимуляции секреции матричных металлопротеиназ

ММР-2 и -9 [3]. PDGF осуществляет регуляцию ЭМП через несколько сигнальных путей. Так, при активации механистической мишени рапамицина (mechanistic target of rapamycin) mTOR-опосредованного каскада, происходит подавление экспрессии Е-кадгерина и увеличение количества виментина и нестина, а Notch и Bcl-2 сигнальные каскады регулируют активности различных металлопротеиназ и их ингибиторов [173]. В эмбриональном развитии PDGF при участии PI3K/AKT эффекторного пути контролирует усиление экспрессии N-кадгерина при миграции клеток нервного гребня [7].

1.1.2 Транскрипционные факторы

Регуляция экспрессии генов, а именно подавление экспрессии генов-маркеров эпителиального фенотипа и усиление экспрессии мезенхимных генов, происходит на уровне транскрипционных факторов, которые можно подразделить на три основные группы - SNAIL, TWIST и ZEB (Рис. 1.3).

Рисунок 1.3. Роль основных транскрипционных факторов в регуляции эпителио-мезенхимного перехода. По Lamouille, Xu, Derynck, 2014.

SNAIL

Два белка семейства Snail - SNAI1 и SNAI2 (или Slug) являются одними из основных активаторов программы ЭМП. Это транскрипционные факторы, которые связываются с Е-боксом последовательности ДНК за счет «цинковых пальцев» на С-конце [130].

Основной мишенью SNAI1 и SNAI2 является Е-кадгерин, механизм действия SNAI1 изучен более подробно. После связывания SNAI1 с последовательностью Е-бокса промотерной области гена Е-кадгерина в работу включаются белки группы polycomb, а именно класса Polycomb Repressive Complex 2 (PRC2), в который в том числе входят и эпигенетические регуляторы, которые и обеспечивают подавление транскрипции гена-мишени путем метилирования лизина-27 гистона Н3 [60].

Блокирующая активность SNAI1 не ограничивается подавлением экспрессии Е-кадгерина. Этот фактор также негативно влияет на транскрипцию гена белка плотных контактов окклюдина, действуя по схожему механизму. Кроме того, SNAI1 подавляет трансляцию таких белков плотных контактов как клаудин и ZO-1, а также влияет на сплайсинг катенина p120: происходит подавление его эпителиальной изоформы и увеличивается количество альтернативной изоформы, характерной для клеток мезенхимного фенотипа [68 , 123].

В то же время, за счет работы SNAI1 активируется экспрессия генов белков-маркеров мезенхимных клеток. Так, SNAI1 может стимулировать выработку мезенхимных маркеров - промежуточного филамента виментина, компонента внеклеточного матрикса - фибронектина, и белка адгезивных контактов N-кадгерина. Кроме того, транскрипционные факторы семейства Snail способствуют повышению экспрессии других семейств транскрипционных факторов, индуцирующих ЭМП, - ZEB и Twist (Рис.1.3А) [95].

Активации экспрессии самого SNAI1 способствуют TGFß, Wnt, Notch, простагландин Е2 и факторы роста, работающие с помощью рецепторов

тирозиновых киназ (RTKs) [130]. Кроме того, важным фактором, регулирующим активность SNAI является его локализация в клетке - для функционирования транскрипционный фактор должен находится в ядре. Фосфорилирование Snail такими киназами как протеинкиназа D1 (PKD1) и киназа гликогенсинтазы 3р (GSK3P) запускает экспорт транскрипционного фактора из ядра и его деградацию [117].

ZEB

Члены семейства ZEB представлены двумя белками: ZEB1 (TCF8 или 8EF1) и ZEB2 (ZFXH1B или SMAD взаимодействующий белок 1 (SIP1)). Эти транскрипционные факторы, как и Snail, содержат «цинковые пальцы» и связываются с Е-боксом гена-мишени, таким образом подавляя или активируя его транскрипцию. Работая совместно со Snail, ZEB подавляют экспрессию генов, кодирующих белки, необходимые для функционирования плотных и адгезивных контактов, десмосом, а также белки, обеспечивающие апико-базальную полярность эпителиальных клеток. Однако основной мишенью ZEB, как и в случае Snail, является Е-кадгерин [95 , 130 , 189]. Кроме того, транскрипционные факторы ZEB обеспечивают увеличение экспрессии генов, кодирующих белки-маркеры мезенхимных клеток: фибронектина, витронектина, коллагена, N-кадгерина и различные металлопротеиназы (Рис. 1.3В) [93 , 130].

Одним из ключевых регуляторов экспрессии Zeb является Snail1, и регуляция эта может осуществляться несколькими путями (Рис. 1.4). Во-первых, Snail1 подавляет активность одного из основных блокаторов Zeb1 на посттранскрипционном уровне - микроРНК miR-200. Во-вторых, Snail1 обеспечивает стабильность белка Zebl, ингибируя деятельность специфичной убиквитин лигазы. И, наконец, непосредственно активирует транскрипцию Zeb, в том числе и при взаимодействии с Twist 1 [27].

miR200 X Ets1 Twist

i I \J

Стабильность Стабильность Транскрипция мРНК белка гена

Zeb1

Рисунок 1.4 Схема разных путей регуляции экспрессии ZEB1 с участием транскрипционного фактора Snail.

Twist

Twistl и Twist2 являются транскрипционными факторами с основным доменом типа спираль-петля-спираль (basic helix-loop-helix - bHLH) и взаимодействуют с участком ДНК гена-мишени в виде гомо- или гетеродимера. Они подавляют экспрессию генов, кодирующих Е-кадгерин, ZO-1, Crumbs3, плакофилин и инициируют экспрессию N-кадгерина (Рис. 1.3Б) [95 , 189]. Один из основных путей регуляции экспрессии генов Twist является сигнальный путь, индуцированный гипоксией, в результате которого транскрипционный гипоксия-индуцированный фактор 1 (HIF-1) напрямую активирует экспрессию Twist [189].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Зурина Ирина Михайловна, 2018 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Кошелева Н.В., Ильина И.В., Зурина И.М, Роскова А.Е., Горкун А.А., Овчинников А.В., Агранат М.Б, Сабурина И.Н. Создание модели репарации клеточных сфероидов на основе микрохирургии наносекундным лазерным скальпелем // Патогенез. - 2016. - V. 14. - № 1. - P. 34-41.

2. Сабурина И.Н, Репин В.С. ЗD-культивирование: от отдельных клеток к регенерационной ткани (к вопросу о феномене эпителио-мезенхимальной пластичности) // Гены и клетки. - 2010. - V. 5. - № 2. - С. 75-86.

3. Ahmed N., Maines-Bandiera S., Quinn M. A., Unger W. G., Dedhar S., Auersperg N. Molecular pathways regulating EGF-induced epithelio-mesenchymal transition in human ovarian surface epithelium // American Journal of Physiology-Cell Physiology.

- 2006. - V. 290. - № 6. - P. C1532-C1542.

4. Arakeri G., Patil S. G., Aljabab A. S., Lin K. P., Merkx M., Gao S., Brennan P. A. Oral submucous fibrosis: an update on pathophysiology of malignant transformation // Journal of Oral Pathology & Medicine. - 2017. - V. 46. - P. 413-417.

5. Arakeri G., Rai K. K., Hunasgi S., Merkx M., Gao S., Brennan P. A. Oral submucous fibrosis: an update on current theories of pathogenesis // Journal of Oral Pathology & Medicine. - 2017. - V. 46. - P. 406-412.

6. Asthana A., Kisaalita W. S. Is time an extra dimension in 3D cell culture? // Drug discovery today. - 2016. - V. 21. - № 3. - P. 395-399.

7. Bahm I., Barriga E. H., Frolov A., Theveneau E., Frankel P., Mayor R. PDGF controls contact inhibition of locomotion by regulating N-cadherin during neural crest migration // DevelopmenV. - 2017. - P. dev. 147926.

8. Balda M. S., Matter K. Tight junctions at a glance // Journal of cell science. - 2008.

- V. 121. - № 22. - P. 3677-3682.

9. Berrier A. L., Yamada K. M. Cell-matrix adhesion // Journal of cellular physiology.

- 2007. - V. 213. - № 3. - P. 565-573.

10. Bhargava S., Patterson J. M., Inman R. D., MacNeil S., Chapple P. R. Tissue-engineered buccal mucosa urethroplasty—clinical outcomes // European urology. -2008. - V. 53. - № 6. - P. 1263-1271.

11. Biamonti G., Bonomi S., Gallo S., Ghigna P. Making alternative splicing decisions during epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) // Cellular and Molecular Life Sciences. - 2012. - V. 69. - № 15. - P. 2515-2526.

12. Bodnar R. J., Satish L., Yates P. P., Wells A. Pericytes: A newly recognized player in wound healing // Wound Repair and Regeneration. - 2016. - V. 24. - №2 2. - P. 204214.

13. Borthwick L. A., Wynn V. A., Fisher A. J. Cytokine mediated tissue fibrosis // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Basis of Disease. - 2013. - V. 1832.

- № 7. - P. 1049-1060.

14. Boutet A., De Frutos P. A., Maxwell P. H., Mayol M. J., Romero J., Nieto M. A. Snail activation disrupts tissue homeostasis and induces fibrosis in the adult kidney // The EMBO journal. - 2006. - V. 25. - № 23. - P. 5603-5613.

15. Brabletz V. MiR-34 and SNAIL: another double-negative feedback loop controlling cellular plasticity/EMT governed by p53 // Cell Cycle. - 2012. - V. 11. -№ 2. - P. 215-215.

16. Brown A. P., Fiore V. F., Sulchek V. A., Barker V. H. Physical and chemical microenvironmental cues orthogonally control the degree and duration of fibrosis-associated epithelial-to-mesenchymal transitions // The Journal of pathology. - 2013.

- V. 229. - № 1. - P. 25-35.

17. Caiazzo M., Okawa Y., Ranga A., Piersigilli A., Tabata Y., Lutolf M. P. Defined three-dimensional microenvironments boost induction of pluripotency // Nature materials. - 2016. - V. 15. - № 3. - P. 344.

18. Chang V. V., Hughes-Fulford M. Monolayer and spheroid culture of human liver hepatocellular carcinoma cell line cells demonstrate distinct global gene expression patterns and functional phenotypes // Tissue Engineering Part A. - 2008. - V. 15. - № 3. - P. 559-567.

19. Chang Y. P., Tsai P. H., Lai Y. L., Yu P. P., Chi W. Y., Li J. J., Chang W. W. Arecoline-induced myofibroblast transdifferentiation from human buccal mucosal fibroblasts is mediated by ZEB1 // Journal of cellular and molecular medicine. - 2014.

- V. 18. - № 4. - P. 698-708.

20. Chen J. L., David J., Cook-Spaeth D., Casey S., Cohen D., Selvendiran K., Bekaii-Saab V., Hays J. L. Autophagy Induction Results in Enhanced Anoikis Resistance in Models of Peritoneal Disease // Molecular Cancer Research. - 2017. - V. 15. - №2 1. -P. 26-34.

21. Chen V., You Y., Jiang H., Wang Z. Z. Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT): A Biological Process in the Development, Stem Cell Differentiation and Tumorigenesis // Journal of cellular physiology. - 2017. - V. 232. - P. 3261-3272.

22. Chen X., Xiao W., Wang W., Luo L., Ye S., Liu Y. The complex interplay between ERK1/2, TGFp/Smad, and Jagged/Notch signaling pathways in the regulation of epithelial-mesenchymal transition in retinal pigment epithelium cells // PLoS One. -2014. - V. 9. - № 5. - P. e96365.

23. Cho Y. H., Han K. M., Kim D., Lee J., Lee S. H., Choi K. W., Kim J., Han Y. M. Autophagy Regulates Homeostasis of Pluripotency-Associated Proteins in hESCs // Stem Cells. - 2014. - V. 32. - № 2. - P. 424-435.

24. Choi B., Park K. S., Kim J. H., Ko K. W., Kim J. S., Han D. K., Lee S. H. Stiffness of Hydrogels Regulates Cellular Reprogramming Efficiency Through Mesenchymal-to-Epithelial Transition and Stemness Markers // Macromolecular bioscience. - 2016.

- V. 16. - № 2. - P. 199-206.

25. Chu A. S., Diaz R., Hui J. J., Yanger K., Zong Y., Alpini G., Stanger B. Z., Wells R. G. Lineage tracing demonstrates no evidence of cholangiocyte epithelial-to-mesenchymal transition in murine models of hepatic fibrosis // Hepatology. - 2011. -V. 53. - № 5. - P. 1685-1695.

26. Collins N. L., Reginato M. J., Paulus J. K., Sgroi D. P., LaBaer J., Brugge J. S. G1/S cell cycle arrest provides anoikis resistance through Erk-mediated Bim

suppression // Molecular and cellular biology. - 2005. - V. 25. - № 12. - P. 52825291.

27. Dave N., Guaita-Esteruelas S., Gutarra S., Frias A., Beltran M., Peiro S., de Herreros A. G. Functional cooperation between Snail1 and twist in the regulation of ZEB1 expression during epithelial to mesenchymal transition // Journal of Biological Chemistry. - 2011. - V. 286. - № 14. - P. 12024-12032.

28. de Beco S., Gueudry P., Amblard F., Coscoy S. Endocytosis is required for E-cadherin redistribution at mature adherens junctions // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2009. - V. 106. - № 17. - P. 7010-7015.

29. Derynck R., Muthusamy B. P., Saeteurn K. Y. Signaling pathway cooperation in TGF-P-induced epithelial-mesenchymal transition // Current opinion in cell biology. -2014. - V. 31. - P. 56-66.

30. Downing V. L., Soto J., Morez P., Houssin V., Fritz A., Yuan F., Chu J., Patel S., Schaffer D. V., Li S. Biophysical regulation of epigenetic state and cell reprogramming // Nature materials. - 2013. - V. 12. - № 12. - P. 1154.

31. Dvir-Ginzberg M., Gamlieli-Bonshtein I., Agbaria R., Cohen S. Liver tissue engineering within alginate scaffolds: effects of cell-seeding density on hepatocyte viability, morphology, and function // Tissue engineering. - 2003. - V. 9. - № 4. - P. 757-766.

32. Elsum I. A., Martin P., Humbert P. O. Scribble regulates an EMT polarity pathway through modulation of MAPK-ERK signaling to mediate junction formation // J Cell Sci. - 2013. - V. 126. - № 17. - P. 3990-3999.

33. Falke L. L., Gholizadeh S., Goldschmeding R., Kok R. J., Nguyen V. Q. Diverse origins of the myofibroblast [mdash] implications for kidney fibrosis // Nature Reviews Nephrology. - 2015. - V. 11. - № 4. - P. 233-244.

34. Feist R. M., King J. L., Morris R., Witherspoon P. D., Guidry P. Myofibroblast and extracellular matrix origins in proliferative vitreoretinopathy // Graefe's Archive for Clinical and Experimental Ophthalmology. - 2014. - V. 252. - № 2. - P. 347-357.

35. Fragiadaki M., Mason R. M. Epithelial-mesenchymal transition in renal fibrosis-evidence for and against // International journal of experimental pathology. - 2011. -V. 92. - № 3. - P. 143-150.

36. Frangogiannis N. G. Fibroblast—Extracellular Matrix Interactions in Tissue Fibrosis // Current pathobiology reports. - 2016. - V. 4. - № 1. - P. 11-18.

37. Gabbiani G., Majno G. Dupuytren's contracture: fibroblast contraction?: An ultrastructural study // The American journal of pathology. - 1972. - V. 66. - № 1. -P. 131.

38. Gage P. J., Rhoades W., Prucka S. K., Hjalt V. Fate maps of neural crest and mesoderm in the mammalian eye // Investigative Ophthalmology & Visual Science. -2005. - V. 46. - № 11. - P. 4200-4208.

39. Galvagni F., Lentucci P., Neri F., Dettori D., De Clemente P., Orlandini M., Anselmi F., Rapelli S., Grillo M., Borghi S. Snai1 Promotes ESC Exit from the Pluripotency by Direct Repression of Self-Renewal Genes // Stem Cells. - 2015. - V. 33. - № 3. - P. 742-750.

40. Ghavami S., Cunnington R., Gupta S., Yeganeh B., Filomeno K., Freed D., Chen S., Klonisch V., Halayko A., Ambrose E. Autophagy is a regulator of TGF-P1-induced fibrogenesis in primary human atrial myofibroblasts // Cell death & disease. - 2015. -V. 6. - № 3. - P. e1696.

41. Gialeli P., Theocharis A. D., Karamanos N. K. Roles of matrix metalloproteinases in cancer progression and their pharmacological targeting // The FEBS journal. - 2011. - V. 278. - № 1. - P. 16-27.

42. Gilles P., Polette M., Mestdagt M., Nawrocki-Raby B., Ruggeri P., Birembaut P., Foidart J.-M. Transactivation of vimentin by P-catenin in human breast cancer cells // Cancer research. - 2003. - V. 63. - № 10. - P. 2658-2664.

43. Glicklis R., Shapiro L., Agbaria R., Merchuk J. P., Cohen S. Hepatocyte behavior within three-dimensional porous alginate scaffolds // Biotechnology and bioengineering. - 2000. - V. 67. - № 3. - P. 344-353.

44. Glim J. E., Egmond M., Niessen F. B., Everts V., Beelen R. H. Detrimental dermal wound healing: what can we learn from the oral mucosa? // Wound Repair and Regeneration. - 2013. - V. 21. - № 5. - P. 648-660.

45. Gottardi P. J., Gumbiner B. M. Adhesion signaling: how P-catenin interacts with its partners // Current biology. - 2001. - V. 11. - № 19. - P. R792-R794.

46. Grande M. V., Sanchez-Laorden B., Lopez-Blau P., De Frutos P. A., Boutet A., Arévalo M., Rowe R. G., Weiss S. J., Lopez-Novoa J. M., Nieto M. A. Snail1-induced partial epithelial-to-mesenchymal transition drives renal fibrosis in mice and can be targeted to reverse established disease // Nature medicine. - 2015. - V. 21. - № 9. - P. 989-997.

47. Grassi G., Di Caprio G., Santangelo L., Fimia G., Cozzolino A., Komatsu M., Ippolito G., Tripodi M., Alonzi V. Autophagy regulates hepatocyte identity and epithelial-to-mesenchymal and mesenchymal-to-epithelial transitions promoting Snail degradation // Cell death & disease. - 2015. - V. 6. - № 9. - P. e1880.

48. Gregory P. A., Bert A. G., Paterson E. L., Barry S. P., Tsykin A., Farshid G., Vadas M. A., Khew-Goodall Y., Goodall G. J. The miR-200 family and miR-205 regulate epithelial to mesenchymal transition by targeting ZEB1 and SIP1 // Nature cell biology. - 2008. - V. 10. - № 5. - P. 593-601.

49. Gressner O. A., Rizk M. S., Kovalenko E., Weiskirchen R., Gressner A. M. Changing the pathogenetic roadmap of liver fibrosis? Where did it start; where will it go? // Journal of gastroenterology and hepatology. - 2008. - V. 23. - № 7pt1. - P. 1024-1035.

50. Gressner O. A., Weiskirchen R., Gressner A. M. Evolving concepts of liver fibrogenesis provide new diagnostic and therapeutic options // Comparative hepatology. - 2007. - V. 6. - № 1. - P. 7.

51. Grotegut S., von Schweinitz D., Christofori G., Lehembre F. Hepatocyte growth factor induces cell scattering through MAPK/Egr-1-mediated upregulation of Snail // The EMBO journal. - 2006. - V. 25. - № 15. - P. 3534-3545.

52. Guo J., Wang Y., Sachs F., Meng F. Actin stress in cell reprogramming // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2014. - V. 111. - № 49. - P. E5252-E5261.

53. Gupta S. S., Zeglinski M. R., Rattan S. G., Landry N. M., Ghavami S., Wigle J. V., Klonisch V., Halayko A. J., Dixon I. M. Inhibition of autophagy inhibits the conversion of cardiac fibroblasts to cardiac myofibroblasts // OncotargeV. - 2016. -V. 7. - № 48. - P. 78516-78531.

54. Hahn J. M., Glaser K., McFarland K. L., Aronow B. J., Boyce S. V., Supp D. M. Keloid-derived keratinocytes exhibit an abnormal gene expression profile consistent with a distinct causal role in keloid pathology // Wound Repair and Regeneration. -2013. - V. 21. - № 4. - P. 530-544.

55. Hahn J. M., McFarland K. L., Combs K. A., Supp D. M. Partial epithelialmesenchymal transition in keloid scars: regulation of keloid keratinocyte gene expression by transforming growth factor-ß1 // Burns & trauma. - 2016. - V. 4. - № 1. - P. 30.

56. Halaoui R., McCaffrey L. Rewiring cell polarity signaling in cancer // Oncogene. - 2015. - V. 34. - № 8. - P. 939-950.

57. Hay E. D. Organization and fine structure of epithelium and mesenchyme in the developing chick embryo // Epithelial-mesenchymal interactions. - 1968. - V. 2. - P. 31-35.

58. Haynes J., Srivastava J., Madson N., Wittmann V., Barber D. L. Dynamic actin remodeling during epithelial-mesenchymal transition depends on increased moesin expression // Molecular biology of the cell. - 2011. - V. 22. - № 24. - P. 4750-4764.

59. Heller M., Frerick-Ochs E., Bauer H.-K., Schiegnitz E., Flesch D., Brieger J., Stein R., Al-Nawas B., Brochhausen P., Thüroff J. Tissue engineered pre-vascularized buccal mucosa equivalents utilizing a primary triculture of epithelial cells, endothelial cells and fibroblasts // Biomaterials. - 2016. - V. 77. - P. 207-215.

60. Herranz N., Pasini D., Diaz V. M., Franci P., Gutierrez A., Dave N., Escriva M., Hernandez-Munoz I., Di Croce L., Helin K. Polycomb complex 2 is required for E-

Cadherin repression by the Snaill transcription factor // Molecular and cellular biology.

- 2008. - V. 28. - № 15. - P. 4772-4781.

61. Hertig A., Flier S., Kalluri R. Contribution of epithelial plasticity to renal transplantation-associated fibrosis // Transplantation proceedings. -- V. 42 --Elsevier, 2010. -- P. S7-S12.

62. Hertig A., Verine J., Mougenot B., Jouanneau P., Ouali N., Sebe P., Glotz D., Ancel P. Y., Rondeau E., Xu-Dubois Y. P. Risk factors for early epithelial to mesenchymal transition in renal grafts // American Journal of Transplantation. - 2006.

- V. 6. - № 12. - P. 2937-2946.

63. Hobbs R. P., Amargo E. V., Somasundaram A., Simpson P. L., Prakriya M., Denning M. F., Green K. J. The calcium ATPase SERCA2 regulates desmoplakin dynamics and intercellular adhesive strength through modulation of PKCa signaling // The FASEB Journal. - 2011. - V. 25. - № 3. - P. 990-1001.

64. Horejs P.-M. Basement membrane fragments in the context of the epithelial-to-mesenchymal transition // European journal of cell biology. - 2016. - V. 95. - № 11.

- p. 427-440.

65. Horiguchi K., Sakamoto K., Koinuma D., Semba K., Inoue A., Inoue S., Fujii H., Yamaguchi A., Miyazawa K., Miyazono K. TGF-ß drives epithelial-mesenchymal transition through 5EF1-mediated downregulation of ESRP // Oncogene. - 2012. - V. 31. - № 26. - P. 3190-3201.

66. Huang S., Susztak K. Epithelial plasticity versus EMT in kidney fibrosis // Trends in molecular medicine. - 2016. - V. 22. - № 1. - P. 4-6.

67. Huang V. S., Li L., Moalim-Nour L., Jia D., Bai J., Yao Z., Bennett S. A., Figeys D., Wang L. A Regulatory Network Involving ß-Catenin, e-Cadherin, PI3k/Akt, and Slug Balances Self-Renewal and Differentiation of Human Pluripotent Stem Cells In Response to Wnt Signaling // Stem cells. - 2015. - V. 33. - № 5. - P. 1419-1433.

68. Ikenouchi J., Matsuda M., Furuse M., Tsukita S. Regulation of tight junctions during the epithelium-mesenchyme transition: direct repression of the gene expression

of claudins/occludin by Snail // Journal of cell science. - 2003. - V. 116. - № 10. - P. 1959-1967.

69. Ilmarinen V., Laine J., Juuti-Uusitalo K., Numminen J., Seppanen-Suuronen R., Uusitalo H., Skottman H. Towards a defined, serum-and feeder-free culture of stratified human oral mucosal epithelium for ocular surface reconstruction // Acta ophthalmologics - 2013. - V. 91. - № 8. - P. 744-750.

70. Ishikawa K., Kannan R., Hinton D. R. Molecular mechanisms of subretinal fibrosis in age-related macular degeneration // Experimental eye research. - 2016. - V. 142. - P. 19-25.

71. Iwano M., Plieth D., Danoff V. M., Xue P., Okada H., Neilson E. G. Evidence that fibroblasts derive from epithelium during tissue fibrosis // The Journal of clinical investigation. - 2002. - V. 110. - № 3. - P. 341-350.

72. Jiang B., Yan L., Miao Z., Li E., Wong K. H., Xu R.-H. Spheroidal formation preserves human stem cells for prolonged time under ambient conditions for facile storage and transportation // Biomaterials. - 2017. - V. 133. - P. 275-286.

73. Jing Q., Wang Y., Liu H., Deng X., Jiang L., Liu R., Song H., Li J. FGFs: crucial factors that regulate tumour initiation and progression // Cell proliferation. - 2016. -V. 49. - № 4. - P. 438-447.

74. Johnson J. L., Najor N. A., Green K. J. Desmosomes: regulators of cellular signaling and adhesion in epidermal health and disease // Cold Spring Harbor perspectives in medicine. - 2014. - V. 4. - № 11. - P. a015297.

75. Jolly M. K., Jia D., Boareto M., Mani S. A., Pienta K. J., Ben-Jacob E., Levine H. Coupling the modules of EMT and sternness: A tunable 'sternness window'model // OncotargeV. - 2015. - V. 6. - № 28. - P. 25161-25174.

76. Kaida M., Cao F., Skumatz P. M., Irving P. E., Burke J. M. Time at confluence for human RPE cells: effects on the adherens junction and in vitro wound closure // Investigative ophthalmology & visual science. - 2000. - V. 41. - № 10. - P. 32153224.

77. Kalluri R., Weinberg R. A. The basics of epithelial-mesenchymal transition // The Journal of clinical investigation. - 2009. - V. 119. - № 6. - P. 1420-1428.

78. Kasai H., Allen J. V., Mason R. M., Kamimura V., Zhang Z. TGF-ß1 induces human alveolar epithelial to mesenchymal cell transition (EMT) // Respiratory research. - 2005. - V. 6. - № 1. - P. 56.

79. Kashyap A., Zimmerman V., Ergül N., Bosserhoff A., Hartman U., Alla V., Bataille F., Galle P., Strand S., Strand D. The human Lgl polarity gene, Hugl-2, induces MET and suppresses Snail tumorigenesis // Oncogene. - 2013. - V. 32. - № 11. - P. 1396-1407.

80. Khew-Goodall Y., Goodall G. J. Myc-modulated miR-9 makes more metastases // Nature Cell Biology. - 2010. - V. 12. - № 3. - P. 209-211.

81. Khursheed M., Bashyam M. D. Apico-basal polarity complex and cancer // Journal of biosciences. - 2014. - V. 39. - № 1. - P. 145-155.

82. Kim H. Y., Jackson V. R., Davidson L. A. On the role of mechanics in driving mesenchymal-to-epithelial transitions // Seminars in cell & developmental biology. -V. 67 --Elsevier, 2017. -- P. 113-122.

83. Kim K. K., Kugler M. P., Wolters P. J., Robillard L., Galvez M. G., Brumwell A. N., Sheppard D., Chapman H. A. Alveolar epithelial cell mesenchymal transition develops in vivo during pulmonary fibrosis and is regulated by the extracellular matrix // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2006. - V. 103. - № 35. - P. 13180-13185.

84. Kim M.-H., Kino-oka M. Maintenance of an undifferentiated state of human induced pluripotent stem cells through migration-dependent regulation of the balance between cell-cell and cell-substrate interactions // Journal of bioscience and bioengineering. - 2015. - V. 119. - № 6. - P. 617-622.

85. Kim Y., Kugler M. P., Wei Y., Kim K. K., Li X., Brumwell A. N., Chapman H. A. Integrin a3ß1-dependent ß-catenin phosphorylation links epithelial Smad signaling to cell contacts // J Cell Biol. - 2009. - V. 184. - № 2. - P. 309-322.

86. Koenig A., Mueller P., Hasel P., Adler G., Menke A. Collagen type I induces disruption of E-cadherin-mediated cell-cell contacts and promotes proliferation of pancreatic carcinoma cells // Cancer research. - 2006. - V. 66. - № 9. - P. 4662-4671.

87. Kosheleva N., Ilina I., Kozhina K., Zurina I., Roskova A., Gorkun A., Ovchinnikov A., Agranat M., Morozov S., Saburina I. Cellular model based on laser microsurgery of cell spheroids to study the repair process // Russian Journal of Developmental Biology. - 2017. - V. 48. - № 1. - P. 56-64.

88. Kosheleva N., Ilina I., Zurina I., Roskova A., Gorkun A., Ovchinnikov A., Agranat M., Saburina I. Laser-based technique for controlled damage of mesenchymal cell spheroids: a first step in studying reparation in vitro // Biology open. - 2016. - V. 5. -№ 7. - P. 993-1000.

89. Kourtidis A., Ngok S. P., Anastasiadis P. Z. p120 catenin: an essential regulator of cadherin stability, adhesion-induced signaling, and cancer progression // Progress in molecular biology and translational science. - 2013. - V. 116. - P. 409-432.

90. Kovacic B., Rosner M., Schipany K., Ionce L., Hengstschläger M. Clinical impact of studying epithelial-mesenchymal plasticity in pluripotent stem cells // European journal of clinical investigation. - 2015. - V. 45. - № 4. - P. 415-422.

91. Kumarswamy R., Mudduluru G., Ceppi P., Muppala S., Kozlowski M., Niklinski J., Papotti M., Allgayer H. MicroRNA-30a inhibits epithelial-to-mesenchymal transition by targeting Snail and is downregulated in non-small cell lung cancer // International journal of cancer. - 2012. - V. 130. - № 9. - P. 2044-2053.

92. Kural M. H., Billiar K. L. Regulating tension in three-dimensional culture environments // Experimental cell research. - 2013. - V. 319. - № 16. - P. 2447-2459.

93. Lamouille S., Derynck R. Emergence of the phosphoinositide 3-kinase-Akt-mammalian target of rapamycin axis in transforming growth factor-ß-induced epithelial-mesenchymal transition // Cells Tissues Organs. - 2011. - V. 193. - № 1-2. - P. 8-22.

94. Lamouille S., Subramanyam D., Blelloch R., Derynck R. Regulation of epithelial-mesenchymal and mesenchymal-epithelial transitions by microRNAs // Current opinion in cell biology. - 2013. - V. 25. - № 2. - P. 200-207.

95. Lamouille S., Xu J., Derynck R. Molecular mechanisms of epithelialmesenchymal transition // Nature reviews. Molecular cell biology. - 2014. - V. 15. -№ 3. - P. 178-196.

96. Larjava H., Wiebe P., Gallant-Behm P., Hart D. A., Heino J., Hakkinen L. Exploring scarless healing of oral soft tissues // J Can Dent AssoP. - 2011. - V. 77. -P. b18.

97. Ledo N., Susztak K., Palmer M. B. Cell Phenotype Transitions in Renal Fibrosis // Current Pathobiology Reports. - 2016. - V. 4. - № 1. - P. 19-25.

98. Lee J. M., Dedhar S., Kalluri R., Thompson E. W. The epithelial-mesenchymal transition: new insights in signaling, development, and disease // J Cell biol. - 2006. -V. 172. - № 7. - P. 973-981.

99. Li M., Luan F., Zhao Y., Hao H., Zhou Y., Han W., Fu X. Epithelial-mesenchymal transition: An emerging target in tissue fibrosis // Experimental Biology and Medicine.

- 2016. - V. 241. - № 1. - P. 1-13.

100. Liu H., Wang X., Liu S., Li H., Yuan X., Feng B., Bai H., Zhao B., Chu Y., Li H. Effects and mechanism of miR-23b on glucose-mediated epithelial-to-mesenchymal transition in diabetic nephropathy // The international journal of biochemistry & cell biology. - 2016. - V. 70. - P. 149-160.

101. Liu Y., Yin J., Abou-Kheir W., Hynes P., Casey O., Fang L., Yi M., Stephens R., Seng V., Sheppard-Tillman H. MiR-1 and miR-200 inhibit EMT via Slug-dependent and tumorigenesis via Slug-independent mechanisms // Oncogene. - 2013.

- V. 32. - № 3. - P. 296-306.

102. Liu Z.-P., Chen X.-h., Song H.-x., Wang H.-s., Zhang G., Wang H., Chen D.-y., Fang R., Liu H., Cai S.-h. Snail regulated by PKC/GSK-3ß pathway is crucial for EGF-induced epithelial-mesenchymal transition (EMT) of cancer cells // Cell and tissue research. - 2014. - V. 358. - № 2. - P. 491-502.

103. Lovisa S., LeBleu V. S., Tampe B., Sugimoto H., Vadnagara K., Carstens J. L., Wu P.-P., Hagos Y., Burckhardt B. P., Pentcheva-Hoang V. Epithelial-to-mesenchymal transition induces cell cycle arrest and parenchymal damage in renal fibrosis // Nature medicine. - 2015. - V. 21. - № 9. - P. 998-1009.

104. Lugli A., Iezzi G., Hostettler I., Muraro M., Mele V., Tornillo L., Carafa V., Spagnoli G., Terracciano L., Zlobec I. Prognostic impact of the expression of putative cancer stem cell markers CD133, CD166, CD44s, EpCAM, and ALDH1 in colorectal cancer // British journal of cancer. - 2010. - V. 103. - № 3. - P. 382-390.

105. Mak K., Manji A., Gallant-Behm P., Wiebe P., Hart D. A., Larjava H., Häkkinen L. Scarless healing of oral mucosa is characterized by faster resolution of inflammation and control of myofibroblast action compared to skin wounds in the red Duroc pig model // Journal of dermatological science. - 2009. - V. 56. - № 3. - P. 168-180.

106. Mamuya F. A., Duncan M. K. aV integrins and TGF-ß-induced EMT: a circle of regulation // Journal of cellular and molecular medicine. - 2012. - V. 16. - № 3. - P. 445-455.

107. Martowicz A., Rainer J., Lelong J., Spizzo G., Gastl G., Untergasser G. EpCAM overexpression prolongs proliferative capacity of primary human breast epithelial cells and supports hyperplastic growth // Molecular cancer. - 2013. - V. 12. - № 1. - P. 56.

108. McCaffrey L. M., Macara I. G. Epithelial organization, cell polarity and tumorigenesis // Trends in cell biology. - 2011. - V. 21. - № 12. - P. 727-735.

109. McGuire J. K., Li Q., Parks W. P. Matrilysin (matrix metalloproteinase-7) mediates E-cadherin ectodomain shedding in injured lung epithelium // The American journal of pathology. - 2003. - V. 162. - № 6. - P. 1831-1843.

110. Medici D. Endothelial-mesenchymal transition in regenerative medicine // Stem cells international. - 2016. - V. 2016. doi:10.1155/2016/6962801

111. Meng Z., Fu X., Chen X., Zeng S., Tian Y., Jove R., Xu R., Huang W. miR-194 is a marker of hepatic epithelial cells and suppresses metastasis of liver cancer cells in mice // Hepatology. - 2010. - V. 52. - № 6. - P. 2148-2157.

112. Micalizzi D. S., Farabaugh S. M., Ford H. L. Epithelial-mesenchymal transition in cancer: parallels between normal development and tumor progression // Journal of mammary gland biology and neoplasia. - 2010. - V. 15. - № 2. - P. 117-134.

113. Michalczyk A., Varigos G., Smith L., Ackland M. L. Fresh and cultured buccal cells as a source of mRNA and protein for molecular analysis // Biotechniques. - 2004.

- V. 37. - № 2. - P. 262-269.

114. Mise N., Savai R., Yu H., Schwarz J., Kaminski N., Eickelberg O. Zyxin is a transforming growth factor-p (TGF-P)/Smad3 target gene that regulates lung cancer cell motility via integrin a5pi // Journal of Biological Chemistry. - 2012. - V. 287. -№ 37. - P. 31393-31405.

115. Moes M., Le Bechec A., Crespo I., Laurini P., Halavatyi A., Vetter G., Del Sol A., Friederich E. A novel network integrating a miRNA-203/SNAI1 feedback loop which regulates epithelial to mesenchymal transition // PloS one. - 2012. - V. 7. - № 4. - P. e35440. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0035440

116. Morescalchi F., Duse S., Gambicorti E., Romano M. R., Costagliola P., Semeraro F. Proliferative vitreoretinopathy after eye injuries: an overexpression of growth factors and cytokines leading to a retinal keloid // Mediators of inflammation. - 2013.

- V. 2013. doi: 10.1155/2013/269787

117. Muqbil I., Wu J., Aboukameel A., Mohammad R. M., Azmi A. S. Snail nuclear transport: the gateways regulating epithelial-to-mesenchymal transition? // Seminars in cancer biology. - 2014. - V. 27. - P. 39-45.

118. Niessen P. M. Tight junctions/adherens junctions: basic structure and function // Journal of Investigative Dermatology. - 2007. - V. 127. - № 11. - P. 2525-2532.

119. Nieto M. A. The ins and outs of the epithelial to mesenchymal transition in health and disease // Annual review of cell and developmental biology. - 2011. - V. 27. - P. 347-376.

120. Nieto M. A. Epithelial plasticity: a common theme in embryonic and cancer cells // Science. - 2013. - V. 342. - № 6159. - P. 1234850. DOI: 10.1126/science.1234850

121. O'Connor J. W., Gomez E. W. Biomechanics of TGFß-induced epithelialmesenchymal transition: implications for fibrosis and cancer // Clinical and translational medicine. - 2014. - V. 3. - № 1. - P. 23. https://doi.org/10.1186/2001-1326-3-23

122. Obradovic V., Hidalgo I. J. In vitro models for investigations of buccal drug permeation and metabolism // Drug Absorption Studies. - 2008. - P. 167-181.

123. Ohkubo V., Ozawa M. The transcription factor Snail downregulates the tight junction components independently of E-cadherin downregulation // Journal of cell science. - 2004. - V. 117. - № 9. - P. 1675-1685.

124. Omenetti A., Porrello A., Jung Y., Yang L., Popov Y., Choi S. S., Witek R. P., Alpini G., Venter J., Vandongen H. M. Hedgehog signaling regulates epithelialmesenchymal transition during biliary fibrosis in rodents and humans // The Journal of clinical investigation. - 2008. - V. 118. - № 10. - P. 3331-3342.

125. Ozdamar B., Bose R., Barrios-Rodiles M., Wang H.-R., Zhang Y., Wrana J. L. Regulation of the polarity protein Par6 by TGFß receptors controls epithelial cell plasticity // Science. - 2005. - V. 307. - № 5715. - P. 1603-1609.

126. Page H., Flood P., Reynaud E. G. Three-dimensional tissue cultures: current trends and beyond // Cell and tissue research. - 2013. - V. 352. - № 1. - P. 123-131.

127. Palacios F., Tushir J. S., Fujita Y., D'Souza-Schorey P. Lysosomal targeting of E-cadherin: a unique mechanism for the down-regulation of cell-cell adhesion during epithelial to mesenchymal transitions // Molecular and cellular biology. - 2005. - V. 25. - № 1. - P. 389-402.

128. Pang M., Wang H., Rao P., Zhao Y., Xie J., Cao Q., Wang Y., Wang Y. M., Lee V. W., Alexander S. I. Autophagy links ß-catenin and Smad signaling to promote epithelial-mesenchymal transition via upregulation of integrin linked kinase // The international journal of biochemistry & cell biology. - 2016. - V. 76. - P. 123-134.

129. Park A.-M., Kanai K., Itoh V., Sato V., Tsukui V., Inagaki Y., Selman M., Matsushima K., Yoshie O. Heat shock protein 27 plays a pivotal role in myofibroblast

differentiation and in the development of bleomycin-induced pulmonary fibrosis // PloS one. - 2016. - V. 11. - № 2. - P. e0148998.

130. Peinado H., Olmeda D., Cano A. Snail, Zeb and bHLH factors in tumour progression: an alliance against the epithelial phenotype? // Nature reviews. Cancer. -2007. - V. 7. - № 6. - P. 415-428.

131. Por E. D., Greene W. A., Burke V. A., Wang H.-P. Trichostatin A inhibits retinal pigmented epithelium activation in an in vitro model of proliferative vitreoretinopathy // Journal of Ocular Pharmacology and Therapeutics. - 2016. - V. 32. - №2 7. - P. 415424.

132. Radisky D. P., Levy D. D., Littlepage L. E., Liu H., Nelson P. M., Fata J. E., Leake D., Godden E. L., Albertson D. G., Nieto M. A. Rac1b and reactive oxygen species mediate MMP-3-induced EMT and genomic instability // Nature. - 2005. - V. 436. - № 7047. - P. 123-127.

133. Rajalalitha P., Vali S. Molecular pathogenesis of oral submucous fibrosis-a collagen metabolic disorder // Journal of oral pathology & medicine. - 2005. - V. 34. - № 6. - P. 321-328.

134. Rayner K. J., Hennessy E. J. Extracellular communication via microRNA: lipid particles have a new message // Journal of lipid research. - 2013. - V. 54. - № 5. - P. 1174-1181.

135. Repin V., Saburina I., Kosheleva N., Gorkun A., Zurina I., Kubatiev A. 3D-technology of the formation and maintenance of single dormant microspheres from 2000 human somatic cells and their reactivation in vitro // Bulletin of experimental biology and medicine. - 2014. - V. 158. - № 1. - P. 137-144.

136. Reynolds E. S. The use of lead citrate at high pH as an electron-opaque stain in electron microscopy // The Journal of cell biology. - 1963. - V. 17. - № 1. - P. 208.

137. Robertson H., Kirby J. A., Yip W. W., Jones D. E., Burt A. D. Biliary epithelial-mesenchymal transition in posttransplantation recurrence of primary biliary cirrhosis // Hepatology. - 2007. - V. 45. - № 4. - P. 977-981.

138. Roczniak-Ferguson A., Reynolds A. B. Regulation of p120-catenin nucleocytoplasmic shuttling activity // Journal of cell science. - 2003. - V. 116. - № 20. - P. 4201-4212.

139. Rygiel K. A., Robertson H., Marshall H. L., Pekalski M., Zhao L., Booth V. A., Jones D. E., Burt A. D., Kirby J. A. Epithelial-mesenchymal transition contributes to portal tract fibrogenesis during human chronic liver disease // Laboratory investigation. - 2008. - V. 88. - № 2. - P. 112-123.

140. Saika S., Kono-Saika S., Tanaka V., Yamanaka O., Ohnishi Y., Sato M., Muragaki Y., Ooshima A., Yoo J., Flanders K. P. Smad3 is required for dedifferentiation of retinal pigment epithelium following retinal detachment in mice // Laboratory investigation. - 2004. - V. 84. - № 10. - P. 1245-1258.

141. Saika S., Yamanaka O., Nishikawa-Ishida I., Kitano A., Flanders K. P., Okada Y., Ohnishi Y., Nakajima Y., Ikeda K. Effect of Smad7 Gene Overexpression on Transforming Growth Factor ß-Induced Retinal Pigment Fibrosis in a Proliferative Vitreoretinopathy Mouse Model // Archives of Ophthalmology. - 2007. - V. 125. - № 5. - P. 647-654.

142. Samavarchi-Tehrani P., Golipour A., David L., Sung H.-k., Beyer V. A., Datti A., Woltjen K., Nagy A., Wrana J. L. Functional genomics reveals a BMP-driven mesenchymal-to-epithelial transition in the initiation of somatic cell reprogramming // Cell stem cell. - 2010. - V. 7. - № 1. - P. 64-77.

143. Sánchez-Tilló E., de Barrios O., Siles L., Cuatrecasas M., Castells A., Postigo A. ß-catenin/TCF4 complex induces the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT)-activator ZEB1 to regulate tumor invasiveness // Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2011. - V. 108. - № 48. - P. 19204-19209.

144. Sarrazy V., Billet F., Micallef L., Coulomb B., Desmouliere A. Mechanisms of pathological scarring: role of myofibroblasts and current developments // Wound Repair and Regeneration. - 2011. - V. 19. - № s1. - P. s10-s15.

145. Scholten D., Österreicher P. H., Scholten A., Iwaisako K., Gu G., Brenner D. A., Kisseleva V. Genetic labeling does not detect epithelial-to-mesenchymal transition of

cholangiocytes in liver fibrosis in mice // Gastroenterology. - 2010. - V. 139. - № 3.

- P. 987-998.

146. Schrementi M. E., Ferreira A. M., Zender P., DiPietro L. A. Site-specific production of TGF-ß in oral mucosal and cutaneous wounds // Wound Repair and Regeneration. - 2008. - V. 16. - № 1. - P. 80-86.

147. Sheppard D. Integrin-mediated activation of latent transforming growth factor ß // Cancer and Metastasis Reviews. - 2005. - V. 24. - № 3. - P. 395-402.

148. Sicklick J. K., Choi S. S., Bustamante M., McCall S. J., Pérez E. H., Huang J., Li Y.-X., Rojkind M., Diehl A. M. Evidence for epithelial-mesenchymal transitions in adult liver cells // American Journal of Physiology-Gastrointestinal and Liver Physiology. - 2006. - V. 291. - № 4. - P. G575-G583.

149. Siemens H., Jackstadt R., Hünten S., Kaller M., Menssen A., Götz U., Hermeking H. miR-34 and SNAIL form a double-negative feedback loop to regulate epithelialmesenchymal transitions // Cell cycle. - 2011. - V. 10. - № 24. - P. 4256-4271.

150. Song Y., Zhao F., Wang Z., Liu Z., Chiang Y., Xu Y., Gao P., Xu H. Inverse association between miR-194 expression and tumor invasion in gastric cancer // Annals of surgical oncology. - 2012. - V. 19. - № 3. - P. 509-517.

151. Stockinger A., Eger A., Wolf J., Beug H., Foisner R. E-cadherin regulates cell growth by modulating proliferation-dependent ß-catenin transcriptional activity // The Journal of cell biology. - 2001. - V. 154. - № 6. - P. 1185-1196.

152. Strutz F., Okada H., Lo P. W., Danoff V., Carone R. L., Tomaszewski J. E., Neilson E. G. Identification and characterization of a fibroblast marker: FSP1 // The Journal of cell biology. - 1995. - V. 130. - № 2. - P. 393-405.

153. Subramanian M., Rao S. R., Thacker P., Chatterj ee S., Karunagaran D. MiR-29b Downregulates Canonical Wnt Signaling by Suppressing Coactivators of ß-Catenin in Human Colorectal Cancer Cells // Journal of cellular biochemistry. - 2014. - V. 115.

- № 11. - P. 1974-1984.

154. Takeichi M. Self-organization of animal tissues: cadherin-mediated processes // Developmental cell. - 2011. - V. 21. - № 1. - P. 24-26.

155. Tamiya S., Kaplan H. J. Role of epithelial-mesenchymal transition in proliferative vitreoretinopathy // Experimental eye research. - 2016. - V. 142. - P. 2631.

156. Tamiya S., Liu L., Kaplan H. J. Epithelial-mesenchymal transition and proliferation of retinal pigment epithelial cells initiated upon loss of cell-cell contact // Investigative ophthalmology & visual science. - 2010. - V. 51. - №2 5. - P. 2755-2763.

157. Tang O., Chen X., Shen S., Hahn M., Pollock P. A. miRNA-200b represses transforming growth factor beta1-induced EMT and fibronectin expression in kidney proximal tubular cells // American Journal of Physiology-Renal Physiology. - 2013. https://doi.org/10.1152/ajprenal.00302.2012

158. Tanjore H., Xu X. P., Polosukhin V. V., Degryse A. L., Li B., Han W., Sherrill V. P., Plieth D., Neilson E. G., Blackwell V. S. Contribution of epithelial-derived fibroblasts to bleomycin-induced lung fibrosis // American journal of respiratory and critical care medicine. - 2009. - V. 180. - № 7. - P. 657-665.

159. Tashiro E., Henmi S., Odake H., Ino S., Imoto M. Involvement of the MEK/ERK pathway in EGF-induced E-cadherin down-regulation // Biochemical and biophysical research communications. - 2016. - V. 477. - № 4. - P. 801-806.

160. Taura K., Miura K., Iwaisako K., Österreicher P. H., Kodama Y., Penz-Österreicher M., Brenner D. A. Hepatocytes do not undergo epithelial-mesenchymal transition in liver fibrosis in mice // Hepatology. - 2010. - V. 51. - № 3. - P. 10271036.

161. Thiery J. P. Epithelial-mesenchymal transitions in tumour progression // Nature reviews. Cancer. - 2002. - V. 2. - № 6. - P. 442.

162. Unternaehrer J. J., Zhao R., Kim K., Cesana M., Powers J. V., Ratanasirintrawoot S., Onder V., Shibue V., Weinberg R. A., Daley G. Q. The epithelial-mesenchymal transition factor SNAIL paradoxically enhances reprogramming // Stem cell reports. -2014. - V. 3. - № 5. - P. 691-698.

163. Utsunomiya H., Tilakaratne W. M., Oshiro K., Maruyama S., Suzuki M., Ida-Yonemochi H., Cheng J., Saku V. Extracellular matrix remodeling in oral submucous

fibrosis: its stage-specific modes revealed by immunohistochemistry and in situ hybridization // Journal of oral pathology & medicine. - 2005. - V. 34. - № 8. - P. 498-507.

164. Vandewalle P., Comijn J., De Craene B., Vermassen P., Bruyneel E., Andersen H., Tulchinsky E., Van Roy F., Berx G. SIP1/ZEB2 induces EMT by repressing genes of different epithelial cell-cell junctions // Nucleic acids research. - 2005. - V. 33. -№ 20. - P. 6566-6578.

165. Vincan E., Barker N. The upstream components of the Wnt signalling pathway in the dynamic EMT and MET associated with colorectal cancer progression // Clinical & experimental metastasis. - 2008. - V. 25. - № 6. - P. 657-663.

166. Vlahakis A., Debnath J. The Interconnections between Autophagy and Integrin-Mediated Cell Adhesion // Journal of molecular biology. - 2016. - V. 429. - P. 515530.

167. Wang B., Koh P., Winbanks P., Coughlan M. V., McClelland A., Watson A., Jandeleit-Dahm K., Burns W. P., Thomas M. P., Cooper M. E. miR-200a prevents renal fibrogenesis through repression of TGF-02 expression // diabetes. - 2011. - V. 60. -№ 1. - P. 280-287.

168. Wang Q., Margolis B. Apical junctional complexes and cell polarity // Kidney international. - 2007. - V. 72. - № 12. - P. 1448-1458.

169. Warzecha P. P., Carstens R. P. Complex changes in alternative pre-mRNA splicing play a central role in the epithelial-to-mesenchymal transition (EMT) // Seminars in cancer biology. -2012. - V. 22 - P. 417-427.

170. Warzecha P. P., Jiang P., Amirikian K., Dittmar K. A., Lu H., Shen S., Guo W., Xing Y., Carstens R. P. An ESRP-regulated splicing programme is abrogated during the epithelial-mesenchymal transition // The EMBO journal. - 2010. - V. 29. - № 19. - P. 3286-3300.

171. Wettstein G., Bellaye P.-S., Kolb M., Hammann A., Crestani B., Soler P., Marchal-Somme J., Hazoume A., Gauldie J., Gunther A. Inhibition of HSP27 blocks

fibrosis development and EMT features by promoting Snail degradation // The FASEB Journal. - 2013. - V. 27. - № 4. - P. 1549-1560.

172. Wong S. Y., Soto J., Li S. Biophysical regulation of cell reprogramming // Current Opinion in Chemical Engineering. - 2017. - V. 15. - P. 95-101.

173. Wu Q., Hou X., Xia J., Qian X., Miele L., Sarkar F. H., Wang Z. Emerging roles of PDGF-D in EMT progression during tumorigenesis // Cancer treatment reviews. -

2013. - V. 39. - № 6. - P. 640-646.

174. Wu Y., Li Y., Zhang H., Huang Y., Zhao P., Tang Y., Qiu X., Ying Y., Li W., Ni S. Autophagy and mTORC1 regulate the stochastic phase of somatic cell reprogramming // Nature cell biology. - 2015. - V. 17. - № 6. - P. 715-725.

175. Xiao W., Chen X., Liu X., Luo L., Ye S., Liu Y. Trichostatin A, a histone deacetylase inhibitor, suppresses proliferation and epithelial-mesenchymal transition in retinal pigment epithelium cells // Journal of cellular and molecular medicine. -

2014. - V. 18. - № 4. - P. 646-655.

176. Xu X., Wan X., Geng J., Li F., Wang P., Dai H. Kinase inhibitors fail to induce mesenchymal-epithelial transition in fibroblasts from fibrotic lung tissue // International journal of molecular medicine. - 2013. - V. 32. - № 2. - P. 430-438.

177. y Cajal S. R. Manual de anatomia patológica general. Impr. y Libr. de Nicolás Moya, 1909. - 495 p.

178. Yan L., Cao R., Wang L., Liu Y., Pan B., Yin Y., Lv X., Zhuang Q., Sun X., Xiao R. Epithelial-mesenchymal transition in keloid tissues and TGF-pi-induced hair follicle outer root sheath keratinocytes // Wound Repair and Regeneration. - 2015. -V. 23. - № 4. - P. 601-610.

179. Yilmaz M., Christofori G. EMT, the cytoskeleton, and cancer cell invasion // Cancer and Metastasis Reviews. - 2009. - V. 28. - № 1-2. - P. 15-33.

180. Yook J. I., Li X.-Y., Ota I., Fearon E. R., Weiss S. J. Wnt-dependent regulation of the E-cadherin repressor snail // Journal of Biological Chemistry. - 2005. - V. 280. - № 12. - P. 11740-11748.

181. Yoshida K., Choisunirachon N., Saito V., Matsumoto K., Saeki K., Mochizuki M., Nishimura R., Sasaki N., Nakagawa V. Hepatocyte growth factor-induced up-regulation of Twist drives epithelial-mesenchymal transition in a canine mammary tumour cell line // Research in veterinary science. - 2014. - V. 97. - № 3. - P. 521526.

182. Yoshinaga V., Uwabe K., Naito S., Higashino K., Nakano V., Numata Y., Kihara A. AM251 Suppresses Epithelial-Mesenchymal Transition of Renal Tubular Epithelial Cells // PloS one. - 2016. - V. 11. - № 12. - P. e0167848.

183. Yu H., Shen Y., Hong J., Xia Q., Zhou F., Liu X. The contribution of TGF-ß in Epithelial-Mesenchymal Transition (EMT): Down-regulation of E-cadherin via snail // Neoplasma. - 2015. - V. 62. - № 1. - P. 1-15.

184. Zaravinos A. The regulatory role of microRNAs in EMT and cancer // Journal of oncology. - 2015. - V. 2015. doi:10.1155/2015/865816

185. Zeisberg M., Neilson E. G. Biomarkers for epithelial-mesenchymal transitions // The Journal of clinical investigation. - 2009. - V. 119. - № 6. - P. 1429-1437.

186. Zhang J., Zhang H., Liu J., Tu X., Zang Y., Zhu J., Chen J., Dong L., Zhang J. miR-30 inhibits TGF-ß1-induced epithelial-to-mesenchymal transition in hepatocyte by targeting Snail1 // Biochemical and biophysical research communications. - 2012.

- V. 417. - № 3. - P. 1100-1105.

187. Zhang Q., Xu M., Cai X., Qu Y., Li Z., Lu L. Myofibroblasts transformation of rat hepatic stellate cells: the role of Notch signaling and epithelial-mesenchymal transition regulation // Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2015. - V. 19. - № 21. - P. 4130-4138.

188. Zhang X., Hu M.-G., Pan K., Li P.-H., Liu R. 3D Spheroid Culture Enhances the Expression of Antifibrotic Factors in Human Adipose-Derived MSCs and Improves Their Therapeutic Effects on Hepatic Fibrosis // Stem cells international. - 2016. - V. 2016. doi: 10.1155/2016/4626073

189. Zheng H., Kang Y. Multilayer control of the EMT master regulators // Oncogene.

- 2014. - V. 33. - № 14. - P. 1755-1763.

190. Zou X.-Z., Liu V., Gong Z.-P., Hu P.-P., Zhang Z. MicroRNAs-mediated epithelial-mesenchymal transition in fibrotic diseases // European journal of pharmacology. - 2017. - V. 796. - P. 190-206.

191. Zsiros V., Katz S., Doczi N., Kiss A. L. Autophagy is the key process in the reestablishment of the epitheloid phenotype during mesenchymal-epithelial transition (MET) // Experimental cell research. - 2017. - V. 352. - № 2. - P. 382-392.