Исследование молекулярной природы семейной гиперхолестеринемии среди жителей Петрозаводска и Санкт-Петербурга тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат биологических наук Комарова, Татьяна Юрьевна

• Комарова, Татьяна Юрьевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Комарова, Татьяна Юрьевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Семейная гиперхолестеринемия. Клиническая характеристика заболевания

1.2 Классификация моногенных гиперхолестеринемий

1.2.1 Рецептор ЛНП

1.2.2 Аполипопротеин В-100 (Аро В-100)

1.2.3 PCSK9

1.2.4 ARH

1.2.5 NPC1L1

1.3 Рецептор ЛНП и ген рецептора ЛНП

1.3.1 Клеточный цикл рецептора ЛНП

1.3.2 Структура гена рецептора ЛНП и кодируемого им белка

1.3.3 Регуляция транскрипции гена рецептора ЛНП

1.3.4 Мутации в гене рецептора ЛНП

1.4 Спектры мутаций в гене рецептора ЛНП в разных популяциях

1.5 Лечение пациентов с гиперхолестеринемией

1.5.1 Ингибиторы ГМГ-КоА редуктазы (статины)

1.5.2 Эзетимиб

1.5.3 Секвестранты желчных кислот

1.5.4 Новые направления в медикаментозной терапии

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1 Пациенты

2.2 Выделение ДНК из замороженной крови

2.3 Молекулярное клонирование

2.3.1 Лигирование

2.3.2 Трансформация Е. coli

2.3.3 Выделение плазмидной ДНК из клеток Е. coli

2.4 Амплификация и анализ ДНК

2.4.1 Полимеразная цепная реакция

2.4.2 Мультиплексная ПЦР

2.4.3 Метод искусственного создания сайта рестрикции с помощью ПЦР

2.4.4 Электрофорез продуктов амплификации ДНК в полиакриламидном геле (ПААГ)

2.4.5 Электрофорез в ПААГ в денатурирующих условиях

2.4.6 Электрофорез ДНК в агарозном геле

2.4.7 Окрашивание образцов ДНК

2.4.8 Гетеродуплексный анализ

2.4.9 БЗСР-анализ

2.4.10 ПДРФ-анализ

2.4.11 Очистка ДНК из агарозного геля

2.4.12 Анализ последовательностей ДНК

2.5 Статистическая обработка данных

3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Общая стратегия исследования

3.2 Обнаруженные мутации в гене рецептора ЛНП

3.2.1 Мутация с. 5 8 О А

3.2.2 Мутация с.195-196тзТ

3.2.3 Мутация с. 192 с1е110Лш8

3.2.4 Мутация с.618 Т>С

3.2.5 Мутация с.925-931ёе17

3.2.6 Мутация с. 1194 С>Т

3.2.7 Мутация с. 1340 С>в

3.2.8 Мутация с. 1532 Т>С

3.2.9 Мутация с.1686ёе18/тзТ

3.2.10 Мутация с. 1936 С>А

3.2.11 Мутация с. 1920 С>Т

3.2.12 Мутация с.2191 с1еЮ

3.3 Обнаруженные полиморфизмы в гене рецептора ЛНП

3.3.1 Полиморфизм с.1171 в>А

3.3.2 Полиморфизм с. 1413 й>А

3.3.3 Полиморфизм с. 1617 ОТ

3.3.4 Полиморфизм с. 1773 С>Т

3.3.5 Полиморфизм с. 1959 ОТ

3.3.6 Полиморфизм с.2232 в>А

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование молекулярной природы семейной гиперхолестеринемии среди жителей Петрозаводска и Санкт-Петербурга»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

Семейная гиперхолестеринемня (СГ) - наследственная патология, приводящая к раннему развитию и тяжелому течению сердечно-сосудистых заболеваний (ССЗ). Сегодня сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной смертности населения в большинстве развитых стран мира, в том числе и в России. Однако показатели смертности от ССЗ среди людей трудоспособного возраста в России являются самыми высокими в Европе и составляют более трети всех смертей [1], причем смертность мужского населения преобладает над смертностью женского населения. В Северо-Западном Федеральном округе смертность мужчин трудоспособного возраста от ССЗ одна из самых высоких по стране и по последним опубликованным данным составляет 47% от общей смертности мужчин за год [1].

Дополнительными факторами риска ССЗ при гиперхолестеринемии являются: артериальная гипертония, ожирение, нарушение углеводного и липидного обмена, а также курение, чрезмерное употребление алкоголя и низкая физическая активность [2]. Некоторые из них можно скорректировать, изменив образ жизни, но не генетическую предрасположенность.

Наиболее частой наследственной причиной ишемической болезни сердца является семейная гиперхолестеринемия, обуславливающая по некоторым данным 5 - 7% всех случаев инфаркта миокарда у пациентов моложе 60 лет [3, 4]. Семейная гиперхолестеринемия - это аутосомно-доминантное заболевание, характеризующееся повышенным уровнем общего холестерина и холестерина липопротеинов низкой плотности в крови. У пациентов с СГ развивается ранний атеросклероз и его основные осложнения в виде ишемической болезни сердца, инфаркта миокарда или мозговых инсультов. Чаще всего причиной СГ является снижение скорости катаболизма ЛНП вследствие количественной

недостаточности или дисфункции их специфического рецептора (OMIM *606945), вызванных мутациями в кодирующем его гене.

Небольшая доля случаев аутосомно-доминантной гиперхолестеринемии обусловлена мутациями в гене АРОВ, приводящими к развитию другого наследственного заболевания - семейного дефекта аполипопротеина В-100 (FDB) [5]. Клинически отличить эти два заболевания достаточно трудно, несмотря на то, что общее течение FDB более мягкое. Частота СГ в большинстве популяций составляет 1:500, а частота FDB в некоторых популяциях Средней Европы- 1:500- 1:700 [5].

На сегодняшний день в мире описано более 1000 мутаций гена рецептора ЛНП [6], причем спектр мутаций сильно отличается в различных популяциях и этнических группах. В гене АРОВ у людей белой расы удалось идентифицировать лишь одну широко распространенную мутацию R3500Q (CGG>CAG, g. 10708 G>A).

Эффективная терапия при этих заболеваниях существует и позволяет значительно снизить риск развития атеросклероза и его тяжелых последствий. Но эффективность лечения во многом зависит от того, насколько рано оно было начато, а все основные клинические проявления СГ и FDB развиваются с возрастом [3]. У детей они могут отсутствовать, и даже уровень общего холестерина может быть в пределах нормы. Наиболее ранняя диагностика возможна только с помощью анализа ДНК, который позволяет определить носителей мутаций в генах рецептора ЛНП и АРОВ и провести консультирование среди родственников пациентов.

Степень разработанности темы

Важным фактором, который влияет на эффективность ДНК-диагностики любого заболевания, является наличие информации о типах мутаций, которые встречаются в изучаемой популяции [7]. Несмотря на то, что за рубежом накоплена огромная информация о мутациях в гене рецептора ЛНП [6], в нашей стране такие исследования проведены в недостаточном объеме. Многие

найденные в России мутации гена рецептора ЛНП являются новыми и за рубежом не обнаружены [8, 9, 10], а исследования молекулярной природы СГ проводили только в крупных городах - Санкт-Петербурге, Москве и Новосибирске и не проводили в республиках с этнически своеобразным составом населения. Эти данные свидетельствует в пользу генетических особенностей российского населения и необходимости изучения генетической структуры СГ в разных регионах России.

Цель исследования:

Сравнительное изучение спектра и частоты встречаемости мутаций генов, обуславливающих развитие наследственной гиперхолестеринемии, в двух крупных городах Северо-Запада России: Санкт-Петербурге и Петрозаводске.

Задачи работы:

1. С помощью автоматизированного флуоресцентного анализа конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов ДНК и прямого секвенирования отдельных экзонов идентифицировать мутации в группе из 110 пациентов с клиническим диагнозом СГ из числа жителей Петрозаводска.

2. Оценить диагностическую значимость обнаруженных мутаций и полиморфизмов в гене рецептора ЛНП.

3. Определить частоту встречаемости мутации 113500(3 в гене аполипопротеина В-100 у пациентов с СГ из Петрозаводска.

4. Провести сравнение спектра и частоты встречаемости мутаций гена рецептора ЛНП среди пациентов с диагнозом СГ в Санкт-Петербурге и в Петрозаводске.

5. Разработать быстрые методы выявления мутаций с помощью рестрикционного анализа для скрининга мутаций в расширенных выборках пациентов с СГ из Санкт-Петербурга, Ленинградской области и из Карелии, а также у родственников пробандов.

Научная новизна полученных результатов

Впервые в России было проведено исследование молекулярной природы наследственной гиперхолестеринемии среди жителей Петрозаводска. В результате исследования в изученной группе из 110 пациентов было обнаружено 12 мутаций и 6 полиморфизмов в гене рецептора ЛНП. Семь мутаций охарактеризованы впервые в мире. Показано, что ¡угутация 113500(3 в гене АРОВ не характерна для населения Петрозаводска. Разнообразие мутаций и уникальность их спектра указывает на отсутствие выраженного эффекта основателя при СГ у жителей Петрозаводска.

Научно-практическая и теоретическая значимость работы

Теоретический интерес представляет своеобразие спектра мутаций гена рецептора ЛНП, охарактеризованного впервые для жителей Петрозаводска, а также наличие лишь одной общей мутации гена среди пациентов с СГ Петрозаводска, Санкт-Петербурга и Финляндии. Среди описанных мутаций и полиморфизмов ДНК пять приводят к сдвигу рамки считывания, шесть - к аминокислотным заменам, один - к нарушению сайта сплайсинга и шесть были признаны нейтральными заменами. Описана частота встречаемости вариантов полиморфных маркеров среди жителей Петрозаводска и проведено сравнение полученных данных с данными по Санкт-Петербургу.

Практическая значимость работы заключается в разработке быстрых методов выявления генетических вариантов с помощью специфических эндонуклеаз рестрикции и гетеродуплексного анализа, которые могут быть применены при диагностике заболевания среди родственников пациентов. Своевременное выявление мутаций позволяет начать лечение на ранних стадиях заболевания и избежать атеросклероза и его осложнений.

Методология и методы исследования

Работа опирается на современную методологию анализа генома человека в норме и при патологии и использует такие общепринятые методы исследования

ДНК как полимеразная цепная реакция, конформационно-чувствительный гель электрофорез, клонирование и секвенирование ДНК, рестрикционный анализ.

Положения, выносимые на защиту

1. Спектр мутаций гена рецептора ЛНП у пациентов с СГ из Петрозаводска отличается от спектра мутаций этого гена в Санкт-Петербурге и других регионах России.

2. У пациентов с СГ из Петрозаводска мутация FsE287:V348X (FH-North Karelia), характерная для восточной Финляндии, встречается редко, а мутация FH-Helsinki, типичная для южной и центральной Финляндии у обследованных пациентов не встречается вовсе.

3. Частоты встречаемости вариантов полиморфных маркеров, характерных как для жителей Санкт-Петербурга, так и для жителей Петрозаводска, существенно отличаются в этих двух городах.

4. Спектр мутаций гена рецептора ЛНП при СГ в Петрозаводске, как и в Санкт-Петербурге, достаточно широкий, мажорные мутации отсутствуют, а эффект основателя в отношении СГ на Северо-Западе России выражен слабо.

5. Мутация R3500Q в гене АРОВ не обнаружена у жителей Петрозаводска.

6. Предпочтительным способом ДНК-диагностики пациентов с СГ на Северо-Западе России является не скрининг экзонов с помощью метода анализа конформационного полиморфизма ДНК, а прямое секвенирование всех кодирующих участков гена рецептора ЛНП и его экзон-интронных границ.

Достоверность и надежность результатов

Основные выводы работы и выносимые на защиту положения являются обоснованными. Это определяется точностью и специфичностью методов секвенирования ДНК и рестрикционного анализа. Результаты, полученные с использованием различных методов генетического анализа (гетеродуплексный анализ, ПДРФ-анализ, SSCP-анализ и секвенирование), согласуются между собой.

Количественные данные отражающие различия в частоте встречаемости вариантов полиморфных маркеров у жителей Петрозаводска и Санкт-Петербурга, обработаны статистически с общепринятым уровнем достоверности 5%.

Апробация работы

Основные материалы диссертации были доложены и обсуждены на 13 международных, всероссийских и региональных конференциях и опубликованы в тезисах материалов 13 конференций. Наиболее важные из них:

• VI Съезд Российского общества медицинских генетиков (14 - 18 мая 2010 г., Ростов-на-Дону.),

• Российский Конгресс с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины - возможное и реальное», посвященный памяти профессора Евгения Иосифовича Шварца (июнь 2010 г., июнь 2012 г., Санкт-Петербург),

• Российский национальный конгресс кардиологов - 2010 (5-7 октября 2010 г., Москва),

• VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010» (24 - 26 ноября 2010 г., Москва),

• The 4th International IMBG Conference for Young Scientists "Molecular Biology: advances and perspectives" ( September, 14 - 17, 2011, Kyiv, Ukraine),

• European Human Genetics Conference 2011 (May, 28- 31, 2011, Amsterdam, Netherlands),

• Всероссийский научно-образовательный форум "Кардиология-2012" (28 февраля - 1 марта 2012 года, Москва),

• V Всероссийская конференция с международным участием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт - основа профилактической медицины в век нанотехнологий»,

• Московский международный форум кардиологов (14-15 июня 2012 г., Москва),

• XVI и XVII Санкт-Петербургская Ассамблея молодых ученых и специалистов,

• Первый международный образовательный форум "Российские дни сердца" (4-6 апреля 2013 г., Москва.).

По теме диссертации, помимо тезисов конференций, опубликовано 3 статьи в российских научных журналах, рекомендуемых ВАК. Исследование проводилось при поддержке грантов РФФИ № 10-04-00563 и № 13-04-00902, а также грантов администрации Санкт-Петербурга для студентов и аспирантов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Комарова, Татьяна Юрьевна

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

Целью данной работы являлось сравнительное изучение спектра и частоты встречаемости мутаций генов, обуславливающих развитие наследственной гиперхолестеринемии в двух крупных городах Северо-Запада России: Санкт-Петербурге и Петрозаводске. Интерес к данному исследованию обусловлен недостаточностью изученности молекулярной природы СГ в России. На сегодняшний день имеется информация по мутациям, вызывающим заболевание, только по мегаполисам: Москве, Санкт-Петербургу и Новосибирску, причем эти данные свидетельствуют о высокой гетерогенности популяции в России. Данные по мутациям в Петрозаводске существенно расширяют уже имеющиеся сведения по стране в связи с большим разнообразием генетических вариантов у жителей Петрозаводска.

В результате проведенного исследования у пациентов с СГ из Петрозаводска было обнаружено 12 мутаций и 6 полиморфизмов в гене рецептора ЛНП. Причем семь мутаций (c,195-196insT, c.192dell0/ins8, с.618 T>G, с.1340 C>G, c.l686del8/insT, c.1936 C>A, c.2191delG) были охарактеризованы впервые в мире, а другие пять (с.58 G>A, с.925-931 del7, сЛ 194 ОТ, с.1532 Т>С, с. 1920 ОТ) описывались ранее в других странах.

Изначально предполагалось, что у жителей Петрозаводска будет выявлено большое количество мутаций, описанных ранее в Санкт-Петербурге, а также, из-за близости финской границы, ожидалось обнаружить мутации FH-Helsinki и FH-North Karelia, специфические для населения восточной Финляндии. Однако единственной общей мутацией, как с Санкт-Петербургом [143], так и с Финляндией [116], оказалась мутация FH-North Karelia, выявленная лишь в одной семье (у двух человек) из Петрозаводска. Как уже описывалось ранее, делеция FH-North Karelia (с.925-93ldei7, FsE308:V369X [Fs E287:V348X]), нарушает рамку считывания при трансляции и приводит к синтезу укороченного и нефункционального рецептора ЛНП. У обоих пациентов с данной мутацией

наблюдались сильно повышенные уровни ХС, что согласуется с накопленными богатыми эпидемиологическими данными в пользу вовлеченности этой мутации в развитие атеросклероза. Примечательно, что среди больных СГ из числа жителей Петрозаводска мы не нашли носителей 1^гутаций G218del, C160G и c.313+lG>A, которые повторно встречались у больных СГ - жителей Санкт-Петербурга [8, 143].

Мутация с.58 G>A (G20R [G(-2)R]) в данной работе была выявлена у одной пациентки из Петрозаводска. Данная мутация выявлялась ранее у пациентов из Франции [82], Новой Зеландии [153], Нидерландов [38], Турции [93] и Австрии [154] и описывалась как значимая для развития заболевания. Причем аминокислотный остаток глицина в сигнальной последовательности белка сохраняется у многих видов животных, таких как шимпанзе, мыши, крысы, кролики и хомячки. Однако в последних публикациях [155] эта нуклеотидная замена рассматривается как полиморфизм. У нашей пациентки, помимо мутации с.58 G>A, была выявлена мутация FH-North Karelia, связь которой с заболеванием установлена давно. Отец пациентки является носителем мутации FH-North Karelia, но не мутации с.58 G>A, а биохимические показатели атеросклероза у отца выражены значительно сильнее, чем у дочери. Вероятно, мутация с.58 G>A была унаследована от матери, которая по имеющимся у нас данным от гиперхолестеринемии не страдает. Однако ДНК матери для исследования не была доступна. Скорее всего, мутация с.58 G>A является нейтральным, непатогенным генетическим вариантом.

Нуклеотидная замена с. 1194 С>Т (I398I [I377I]) не приводит к изменению аминокислотной последовательности белка и является молчащей мутацией. Причем у жителей Петрозаводска она была охарактеризована у четырех неродственных пациентов, таким образом, встречалась чаще, чем остальные мутации. Ранее эта мутация описывалась также в популяции Австрии [154].

Мутация с. 1532 Т>С (L511S [L490S]) ранее была охарактеризована в Италии и получила название FH-Rome-4 [156]. Данный дефект приводит к замене

аминокислотного остатка лейцина на остаток пролина и по данным БШВНпк является патогенным. Мутация локализована в экзоне 10 гена рецептора ЛНП и нарушает аминокислотную последовательность структуры бета-пропеллера домена, гомологичного предшественнику эпидермального фактора роста. Таким образом, мутация может способствовать нарушению связывания рецептора с лигандом. Данная нуклеотидная замена была выявлена у 56-летней пациентки с сильно повышенными липидами плазмы крови, что также свидетельствует в пользу значимости данной мутации. Однако, для однозначного подтверждения этого предположения необходимо исследование влияния данной мутации на функциональную активность белка.

Мутация с. 1920 С>Т (N64014 [И619М]), выявленная у брата с сестрой из Петрозаводска, является молчащей заменой. Данная мутация была описана в Испании [157] и Австрии [154]. Интересно, что соответствующая аминокислотная последовательность белка консервативна и у разных видов животных: шимпанзе, макак резус, собак, мышей, крыс и хомячков.

Среди семи новых мутаций, выявленных в гене рецептора ЛНП у жителей Петрозаводска, четыре мутации (с.195-196тзТ, с.192с!е110/т58, с.1686с1е18/т8Т, с.219ЫеЮ) приводят к изменению кодирующей последовательности рецептора ЛНП на число нуклеотидов, некратное трем. Таким образом, происходит сдвиг рамки считывания при трансляции. Как предсказывает анализ нуклеотидной последовательности рецептора ЛНП, при каждой из этих мутаций происходит преждевременная терминация трансляции и образование рецептора без трансмембранного и цитоплазматического доменов, то есть белка, неспособного связать и интернализовать лиганд - апоВ и апоЕ содержащие липопротеиньт. У всех пациентов - носителей данных мутаций были зафиксированы высокие показатели ХС и ХС ЛНП. Молено утверждать, что именно эти мутации явились причиной развития СГ у пациентов. Все мутации были выявлены в разных семьях. Однако три из перечисленных мутаций (с.192с!е110/т58, с.1686йе18/1пзТ, с.219ЫеЮ) встречались каждая в своей семье повторно. Мутация с.195-196тБТ

была выявлена у одного пациента, родственники которого в исследовании не участвовали.

Однонуклеотидная замена с.618Т>0, приводящая к замене кодона для серина на кодон для аргинина в 3'части экзона 4 (820611 [818511]), была описаиа у одного пациента с тяжелыми проявлениями СГ. Любые замены в этом чрезвычайно консервативном участке, кодирующем лиганд-связывающий домен рецептора, как правило, приводят к развитию тяжелой гиперхолестеринемии. В норме лигандсвязывающие повторы цистеин-богатого домена рецептора ЛНП несут кластеры отрицательно заряженных аминокислот, необходимых для координации ионов кальция и удержания лиганда. Можно предположить, что замена серина, аминокислоты с небольшим полярным радикалом, на аргинин с объемной положительно заряженной боковой цепью в этой области рецептора ЛНП будет вызывать мисфолдинг и дисфункцию рецептора.

Мутации с.1340С>0 (8447С [8426С]) и с. 1936 С>0 (Ь6461 [Ь6251]), также описанные впервые в мире, по данным 81ЛВНпк не являются значимыми. Скорее всего, это справедливо относительно мутации с. 1936 С>0 (Ь6461 [Ь6251]), приводящей к замене аминокислотного остатка лейцина на остаток изолейцина, в связи со сходством этих остатков. Однако мутация с.1340С>0 (8447С [8426С]) приводит к образованию нового остатка цистеина, способного образовывать дополнительные дисульфидные связи в домене, гомологичном предшественнику эпидермального фактора роста, и таким способом влиять на функциональность белка.

Полиморфный сайт с.117Ш>А (А391Т [А370Т]), выявленный у пациентов из Петрозаводска, также известен как БШ I ПДРФ [8, 158]. Вариант А данного полиморфного маркера был найден в разных городах в России [8] и во многих странах мира (Южная Африка [159], Канада [160], Марокко [161], Дания [162]). Несмотря на замену аминокислотного остатка при данном полиморфизме, в разных исследованиях было показано, что он не оказывает влияния на уровень липопротеинов крови [158].

Все остальные полиморфизмы, встречающиеся у жителей Петрозаводска, не приводят к замене аминокислотного остатка в белке. Так полиморфизм с.1413 G>A (R471R [R450R]), являющийся довольно частым вариантом для жителей Петрозаводска, был ранее охарактеризован как BsmA I ПДРФ и встречался в разных странах, в том числе Южной Африке [163], Норвегии [164] и России. Другая молчащая замена с. 1959 ОТ (V653V [V632V]), характерная для жителей Петрозаводска, описана в литературе как Ava II ПДРФ и встречается как в европейских популяциях, так и в популяции Китая [165].

Полиморфный маркер С.1617 0Т (Р539Р [Р518Р]) ранее описывался у жителей Санкт-Петербурга как молчащая мутация, так как был выявлен лишь у одного пациента с СГ. В обследованной группе пациентов из Петрозаводска этот вариант генетической замены встречается значительно чаще.

Особый интерес представляет установление молекулярной природы Msp I ПДРФ в 15-ом экзоне гена рецептора ЛНП. В базах данных он упоминается как замена с.2231 G>A (R744Q [R723Q]). Однако, как показало секвенирование образцов ДНК пациентов из Санкт-Петербурга и Петрозаводска, исчезновение Msp I сайта было связано с заменой с. 2232G>A (R744R [R723R]). Эта замена выявлялась в Санкт-Петербурге со статистически достоверно не отличавшейся частотой, что и в Петрозаводске в данном исследовании.

Полиморфизм с.1773С>Т (N591N [N570N]), характерный для жителей Петрозаводска, также не меняет аминокислотный остаток белка, однако в литературе есть данные, свидетельствующие о его роли в альтернативном сплайсинге мРНК, приводящей к увеличению нонсенс-опосредованной деградации мРНК. Кроме того, при наличии данной замены было продемонстрировано 25% снижение связывания ЛНП, меченных флуоресцентной меткой. Этот полиморфизм был описан как значимая для развития СГ нуклеотидная замена в разных популяциях [166]. Интересно, что в группе пациентов из Петрозаводска для этого полиморфизма не выполняется равновесие Харди-Вайнберга. Высокая частота встречаемости редкого аллеля Т данного

полиморфного маркера среди больных СГ в Петрозаводске, среди больных СГ и особенно в группе контроля в Санкт-Петербурге все же указывает на нейтральный характер этой замены.

Данные по встречаемости в разных странах мира всех генетических вариантов, описанных у жителей Петрозаводска, представлены в таблице 4.1.

По результатам данной работы у пациентов с СГ из Петрозаводска было выявлено 18 различных генетических дефектов гена рецептора ЛНП, пять из которых являются миссенс-мутациями, пять сдвигают рамку считывания и приводят к образованию стоп-кодона в белке, одна мутация нарушает сплайсинг, одна является нейтральной аминокислотной заменой и шесть мутаций являются молчащими. Девять мутаций были оценены как патогенные варианты: с.618 Т>0, с.1340 С>0, с. 1532 0>А, с.192с!е110/т58, с.195_196тзТ, с.925-93Ые17, с.1686с!е18/т8Т, с.219ЫеЮ и с.1773 С>Т. Подобранные в данной работе методы быстрого тестирования этих мутаций позволяют провести поиск соответствующих генетических дефектов в гене рецептора ЛНП среди родственников обследованных пациентов с целыо ранней диагностики болезни и своевременной профилактики осложнений атеросклероза. Однако большое разнообразие встречающихся мутаций и отсутствие в обследованной группе пациентов мажорных вариантов не позволяет применять эти методы для диагностики всего населения Петрозаводска.

Почти полное отсутствие «финских» мутаций у пациентов с СГ из Петрозаводска согласуется с преобладанием славянского, а не карело-финского населения в этом крупном городе. Только одна мутация оказалась общей для пациентов с СГ из Петрозаводска и из Санкт-Петербурга. Частоты встречаемости вариантов двух из шести выявленных полиморфных маркеров (с. 1617 ОТ, с.1773 ОТ) также отличаются в этих двух группах. В целом спектр мутаций гена рецептора ЛНП у пациентов с СГ из Петрозаводска характеризуется большим разнообразием и уникальностью по отношению к спектру мутаций этого гена у пациентов из Санкт-Петербурга и других городов России.

Таблица 4.1 - Встречаемость найденных в Петрозаводске генетических дефектов гена рецептора ЛНП в других популяциях мира

Название мутации Экзон Встречаемость в других-странах

Мпссснс-мутацни

с.58 ОА (02011 [0(-2)Я]) экзон 1 Франция, Австрия, Нидерланды, Новая Зеландия, Турция, Хорватия

с.б18Т>С (820611 [Б185а]) экзон 4В Новая мутация

с. 1340 С>б (Б447С [Б426С)] экзон 9 Новая мутация

с. 1532 в>А (Ь511Б [Ь490Б]) экзон 10В Италия

с. 1936 С>А (Ь6461 [1,6251]) экзон 13 Новая мутация

Мутации сдвига рамки считывания

с. 192с1е110/1пз8 ^865: Э129Х ^844:0108Х]) экзон 3 Новая мутация

с.195_19бтзТ (РвУбб: Б129Х 0^45:0108X1) экзон 3 Новая мутация

с.925-931с!е17 (РбЕ308:У369Х [Р5Е287:У348Х]), РН-ЫоПЬ КагеПа экзон 6 Финляндия, Швеция, США, Россия

с.1686(1с18/т5Т (Рб\У562:Ь568Х [Рэ\У541 :Ь547Х]) экзон 1 1 Новая мутация

с.2191с1сЮ (РэУ731:У736Х [РэУ710:У715Х]) экзон 15 Новая мутация

Мутации, нарушающие сплайсинг

с. 1773 С>Т (N59 Ш [Ы570Ы]) экзон 12 США, Китай, Марокко

Нейтральные мутации/полиморфизмы

с.117Ю>А (А391Т [А370Т]) экзон 8 Южная Африка, Англия, Франция

Молчащие мутации/полиморфизмы

с.11940Т (13981 [13771]) экзон 9 Австрия

с.1413 ОА (1147111 [1145011]) экзон 10А Южная Африка, Норвегия, Россия

с. 1617 ОТ (Р539Р [Р518Р]) экзон 1 1 Марокко, Китай, Россия.

с. 1920 ОТ (Ж40Ы [N61914]) экзон 13 Испания, Австрия

с. 1959 ОТ (У653У [У632У]) экзон 13 Нидерланды, США, Россия

с.2232 ОА (1174411 [Я72311]) экзон 15 Россия

выводы

1. Впервые было проведено исследование молекулярной природы семейной гиперхолестеринемии у жителей Петрозаводска. Всего у пациентов с СГ из этого города описано 12 мутаций и 6 полиморфизмов в гене рецептора ЛНП. Семь мутаций охарактеризованы впервые в мире.

2. Мутационный спектр гена рецептора ЛНП у пациентов с СГ из Петрозаводска и из Санкт-Петербурга существенно отличается: на сегодняшний день выявлена только одна мутация, общая для этих двух городов.

3. Все полиморфные сайты, выявленные среди больных СГ из Петрозаводска, встречались также и в Санкт-Петербурге, однако частоты вариантов полиморфных маркеров отличаются в изученных группах.

4. У пациентов с СГ из Петрозаводска практически отсутствуют мутации, характерные для популяции Финляндии, что согласуется с преобладанием славянского, а не карело-финского населения в Петрозаводске.

5. Мутация К3500(2 в гене АРОВ не характерна для населения Петрозаводска, также как и для населения Санкт-Петербурга.

6. Спектр мутаций гена рецептора ЛНП при СГ в Петрозаводске, как и в Санкт-Петербурге, достаточно широкий, мажорные мутации отсутствуют, а эффект основателя в отношении СГ на Северо-Западе России выражен слабо.

7. Наиболее эффективным способом ДНК-диагностики пациентов с СГ на Северо-Западе России является прямое секвенирование всех кодирующих участков гена рецептора ЛНП и его экзон-интронных границ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Как следует из основной части данной диссертационной работы, впервые была обследована группа больных с СГ, проживающих в городе Петрозаводске (Республика Карелия). Работа позволяет сделать два наиболее важных практических заключения. Первое состоит в том, что мутация в гене АРОВ 113500С), характерная для стран Средней Европы, чрезвычайно редка или вовсе не встречается у пациентов с СГ в Карелии. Это означает, что при поиске генетических дефектов при СГ в Карелии, также как и в Петербурге, следует сосредоточиться на поиске мутаций в гене рецептора ЛНП, а не в гене АРОВ. Второе практически важное заключение состоит в том, что в Петрозаводске -городе со смешанным населением, не обнаруживается мажорных мутаций в гене рецептора ЛНП или мутаций, привязанных к отдельным экзонам гена. Следовательно, лучшим методом для ДНК-диагностики СГ в Карелии является прямое секвенирование всех экзонов гена рецептора ЛНП и экзон-интронных стыков, а не сканирование отдельных экзонов этого гена. Чрезвычайно интересным представляется осуществить поиск мутаций в гене рецептора ЛНП в малых городах и поселках Карелии с сохранившимся этническим составом населения. Логическим продолжением исследований станет изучение спектра мутаций рецептора ЛНП в неизученных районах Северо-Запада России: Мурманской, Новгородской и Псковской областях.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Комарова, Татьяна Юрьевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Анализ смертности от сердечно-сосудистых заболеваний в 12 регионах Российской Федерации, участвующих в исследовании «Эпидемиология сердечно-сосудистых заболеваний в различных регионах России» / С. А. Шальнова, А. О. Конради, Ю. А. Карпов [и др.] // Российский кардиологический журнал. - 2012. - № 5 (97) - С. 6 - 11.

2. Ford, Е. S. Proportion of the decline in cardiovascular mortality disease due to prevention versus treatment: public health versus clinical care / E. S. Ford, S. Capewell // Annu. Rev. Public Health. - 2011. - Vol. 32. - P. 5 - 22.

3. Кухарчук, В. В. Семейная гиперхолестеринемия: современные аспекты диагностики, профилактики и терапия/ В. В. Кухарчук, П. П. Малышев,

A. Н. Мешков // Кардиология. - 2009. - Том 49, № 1 - С. 76 - 83.

4. Prevalence of familial hypercholesterolemia among young north Karelian patients with coronary heart disease: a study based on diagnosis by polymerase chain reaction / U. M. Koivisto, L. Hamalainen, M. R. Taskinen [et al.] // J. Lipid. Res. - 1993 - Vol. 34 - P. 269 - 277.

5. Мандельштам, М.Ю. Моногенные гиперхолестеринемии: новые гены, новые мишени для лечения / М. Ю. Мандельштам, В. Б. Васильев // Генетика. - 2008. - Т. 44, № 10.-С. 1309- 1316.

6. Dedoussis, V. Z. G. LDL-Receptor Mutations in Europe / V. Z. G Dedoussis, H. Schmidt, J. Genschel // Hum. Mutat. - 2004. - Vol. 24 - P. 443 - 459.

7. Мандельштам, M. Ю. Диагностика семейной гиперхолестеринемии в России: достижения и проблемы / М. Ю. Мандельштам, Ф. М. Захарова,

B. И. Голубков [и др.] // Молекулярно-биологические технологии в медицинской практике / Под. ред. А. Б. Масленников. - Новосибирск: «Альфа Виста», 2004. - Вып. 6. - С. 9 - 23.

8. Семейная гиперхолестеринемия в Санкт-Петербурге: разнообразие мутаций свидетельствует об отсутствии выраженного эффекта основателя /

Ф. М. Захарова, Ю. А. Татищева, В. И. Голубков [и др.] // Генетика. - 2007. -Т. 43, №9.-С. 1255- 1262.

9. Мешков, А. Н. Мутации гена рецептора липопротеинов низкой плотности у пациентов с клиническим диагнозом семейной гиперхолестеринемии / А. Н. Мешков, Д. В. Стамбольский, С. Р. Крапивнер [и др.] // Кардиология. - 2004. - Т. 44, № 9. -С. 58-61.

10. Воевода, М. И. Спектр мутаций гена рецептора липопротеинов низкой плотности в Российской популяции / М. И. Воевода, И. В. Куликов, Е. В. Шахтшнейдер [и др.] // Генетика. - 2008 - Т. 44, № 10 - С. 1374 - 1378.

11. Fredrickson, D. S. A system for phenotyping hypercholesterolemia / D. S. Fredrickson, R. S. Lees//Circulation. - 1965. - Vol. 31, №3-P. 321 - 327.

12. Goldstein, J. L. Familial hypercholesterolaemia/ J.L.Goldstein, H. H. Hobbs, M. S. Brown // The metabolic and molecular basis of inherited disease. Vol. III. / Eds. C. R. Scriver, A. L. Beaudet, W. S. Sly, D. Valle, N. Y. McGraw Hill. -2001.-P. 2863-2914.

13. Случай семейной гиперхолестеринемии, вызванный новой мутацией p. FsS65:D129X в гене рецептора липопротеинов низкой плотности человека / В. А. Корнева, Т. Ю. Кузнецова, Т. Ю. Комарова [и др.] // Кардиология. -2013.-№5-С. 50- 54.

14. Familial hypercholesterolemia and coronary heart disease: a HuGE association review / M. A. Austin, С. M. Hutter, R. L. Zimmern, S. E. Humphries // J. Epidemiol. - 2004, Vol. 160, № 5, P. 421 - 429.

15. Slack, J. Risks of ischaemic heart-disease in familial hyperlipoproteinaemic states /J. Slack//Lancet. - 1969.-Vol. 2-P.1380- 1382.

16. Coronary artery disease in 116 kindred with familial type II hyperlipoproteinemia / N. J. Stone, R. I. Levy, D. S. Fredrickson, J. Verter // Circulation. - 1974. -Vol. 49. - P. 476 - 484.

17. Development of coronary heart disease in familial hypercholesterolemia / H. Mabuchi, J. Koizumi, M. Shimizu, R. Takeda // Circulation. - 1989. - Vol.79. -P. 225-232.

18. Heterozygous familial hypercholesterolemia. Relationship between plasma lipids, lipoproteins, clinical manifestations and ischaemic heart disease in men and women / C. Gagne, S. Moorjani, D. Brun [et al.] // Atherosclerosis. - 1979. Vol. 34-P. 13-24.

19. Beaumont, V. Ischaemic disease in men and women with familial hypercholesterolaemia and xanthomatosis. A comparative study of genetic and environmental factors in 274 heterozygous cases / V. Beaumont, B. Jacotot, J. L. Beaumont // Atherosclerosis. - 1976. - Vol. 24 - P. 441 - 50.

20. Heiberg, A. The inheritance of hyperlipoproteinaemia with xanthomatosis. A study of 132 kindreds / A. Heiberg, K. Berg // Clin. Genet. - 1976. - Vol. 9 -P. 203-33.

21. Familial Hypercholesterolemias: Prevalence, genetics, diagnosis and screening recommendations from the National Lipid Association Expert Panel on Familial Hypercholesterolemia / P. N. Hopkins, P. P. Toth, С. M. Ballantyne, D. J. Rader // J. Clin. Lipid. - 2011. - Vol. 5, № 3S - P. 9 - 17.

22. Familial-combined hyperlipidaemia in very young myocardial infarction survivors (< 40 years of age) / F. Wiesbauer, H. Blessberger, D. Azar [et al.] // Eur. Heart J. - 2009 - Vol. 30 (9). - P. 1073 - 1079.

23. Scientific Steering Committee on behalf of the Simon Broome Register group. Mortality in treated heterozygous familial hypercholesterolaemia: implications for clinical management // Atherosclerosis. - 1999. - Vol. 142. - P. 105 - 112.

24. Мандельштам, M. Ю. Молекулярно-Генетические исследования семейной гиперхолестеринемии и моногенной предрасположенности к раку молочной железы в Санкт-Петербурге// дис. ...д-ра биол. наук. : 03.00.04 / Мандельштам Михаил Юрьевич - СПб, 2005. - 241 с.

25. Goldstein, J. L. Molecular medicine. The cholesterol quartet / J. L. Goldstein, M. S. Brown // Science. - 2001. - Vol. 292. - P. 1310 - 1312.

26. Burnett, J. R. Common and rare gene variants affecting plasma LDL cholesterol / J. R. Burnett, A. J. Hooper // Clin. Biochem. Rev. - 2008. - Vol. 29. - P. 11 - 25.

27. The UMD-LDLR Database: additions to the software and 490 new entries to the database / L. Villeger, M. Abifadel, D. Allard [et al.] // Human Mutat. - 2002. -Vol. 20.-P. 81-87.

28. Familial defective apolipoprotein B-100: a mutation of apolipoprotein B that causes hypercholesterolemia / T. L. Innerarity, R. W. Mahley, K. H. Weisgraber [et al.] // J. Lipid. Res. - 1990. - Vol.31. - P. 1337 - 1349.

29. Vega, G. L. In vivo evidence for reduced binding of low density lipoproteins to receptors as a cause of primary moderate hypercholesterolemia / G. L. Vega, S. M. Grundy//J. Clin. Invest.- 1986.-Vol. 78, №5.-P. 1410-1414.

30. Human liver apolipoprotein B-100 cDNA: complete nucleic acid and derived amino acid sequence / S. W. Law, S. M. Grant, K. Higuchi [et al.] // Proc. Nat. Acad. Sci. - 1986. - Vol. 83. - P. 8142 - 8146.

31. Complete cDNA and derived protein sequence of human apolipoprotein B-100 / T. J. Knott, S. C. Wallis, L. M. Powell [et al.] // Nucleic Acids Res. - 1986. -Vol. 14.-P. 7501 -7503.

32. Olofsson, S. - O. Apolipoproteins A-I and B: biosynthesis, role in the development of atherosclerosis and targets for intervention against cardiovascular disease / S. - O. Olofsson, O. Wiklund, J. Boren // Vase. Health Risk Manag. -2007. - Vol. 3(4) - P. 491 - 502.

33. Association between a specific apolipoprotein B mutation and familial defective apolipoprotein B-100 / L. F. Soria, E. H. Ludwig, H. R. Clarke [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1989. - Vol. 86. - P. 587 - 591.

34. Miserez, A. R. Familial defective apolipoprotein B-100: a mutation emerged in the mesolithic ancestors of Celtic peoples? / A. R. Miserez, P. Y. Muller // Atherosclerosis. - 2000. - Vol. 148. - P. 433 - 436.

35. Rauh, G. Familial defective apolipoprotein B-100: a common cause of primary hypercholesterolemia / G. Rauh, C. Keller, H. Schuster [et al.] // Clin. Invest. -1992. - Vol. 70, № 1. - P. 77 - 84.

36. Estimation of the age of the ancestral arginine3500-to-glutamine mutation in human apoB-100 / N. B. Myant, S. A. Forbes, I. N. M. Day, J. Gallaghers // Genomics. - 1997. - Vol. 45. - P. 78 - 87.

37. Tai, D. Y. Identification and haplotype analysis of apolipoprotein B-100 Arg3500~>Trp mutation in hyperlipidemic Chinese / D. Y. Tai, J. P. Pan, G. J. Lee-Chen // Clin. Chem. - 1998. - Vol. 44 - P. 1659 - 1665.

38. Fouchier, S. W. Update of the molecular basis of familial hypercholesterolemia in The Netherlands / S W. Fouchier, J. J. Kastelein, J. C. Defesche // Hum. Mutat. -2005.-Vol. 26.-P. 550- 556.

39. Independent mutations at codon 3500 of the apolipoprotein B gene are associated with hyperlipidemia / D. Gaffney, J. M. Reid, I. M. Cameron [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1995. - Vol. 15 - P. 1025 - 1029.

40. The molecular mechanism for the genetic disorder familial defective apolipoprotein B100 / J. Boren, U. Ekstrom, B. Agren [et al.] // J. Biol. Chem. -2001.-Vol. 276-P. 9214-9218.

41. A new but frequent mutation of apoB-100-apoB His3543Tyr / M. Soufi,

A. M. Sattler, W. Maerz [et al.] // Atherosclerosis. - 2004. - Vol. 174 - P. 11-16.

42. Familial ligand-defective apolipoprotein B-100: detection, biochemical features and haplotype analysis of the R3531C mutation in the UK / P. R. Wenham,

B. G. Henderson, M. D. Penney [et al.] //Atherosclerosis. - 1997. - Vol. 129. -P. 185- 192.

43. Mutations in PCSK9 cause autosomal dominant hypercholesterolemia / M. Abifadel, M. Varret, J. - P. Rabes [et al.] // Nature Genet. - 2003. - Vol. 34. -P. 154- 156.

44. The secretory proprotein convertase neural apoptosis-regulated convertase 1 (NARC-1): liver regeneration and neuronal differentiation / N. G. Seidah,

S. Benjannet, L. Wickham [et al.] // Proc. Nat. Acad. Sei. - 2003. - Vol. 100. -P. 928-933.

45. Secreted proprotein convertase subtilisin/kexin-type 9 downregulates low-density lipoprotein receptor through receptor-mediated endocytosis / Y. W. Qian, R. J. Schmidt, Y. Zhang [et al.] //J. Lipid. Res. -2007. - Vol. 48. - P. 1488 -

1498.

46. Binding of proprotein convertase subtilisin/kexin type 9 to epidermal growth factor-like repeat A of low density lipoprotein receptor decreases receptor recycling and increases degradation / D.W. Zhang, T. A. Lagace, R. Garuti [et al.] // J. Biol. Chem. - 2007. - Vol. 282. - P. 18602 - 18612.

47. Horton, J. D. Molecular biology of PCSK9: its role in LDL metabolism / J. D. Horton, J. C. Cohen, H. H. Hobbs // Trends. Biochem. Sei. - 2007. -Vol. 32. - P.71 - 77.

48. Lambert, G. Unravelling the functional significance of PCSK9 / G. Lambert // Curr. Opin. Lipidol. - 2007. - Vol. 18. - P. 304 - 309.

49. Additive effect of mutations in LDLR and PCSK9 genes on the phenotype of familial hypercholesterolemia / L. Pisciotta, C. Priore Oliva, A. B. Cefalu [et al.] // Atherosclerosis.- 2006. - Vol. 186. - P. 433 - 440.

50. Soutar, A. K. Autosomal recessive hypercholesterolemia / A. K. Soutar, R. P. Naoumova //Semin. Vase. Med. - 2004. - Vol.4 - P. 241 - 248.

51. Autosomal recessive hypercholesterolemia caused by mutations in a putative LDL receptor adaptor protein / C. K. Garcia, K. Wilund, M. Area [et al.] // Science.-2001.-Vol. 292.-P. 1394- 1398.

52. The modular adaptor protein autosomal recessive hypercholesterolemia (ARH) promotes low density lipoprotein receptor clustering into clathrin-coated pits / R. Garuti, C. Jones, W. P. Li [et al.] //J. Biol. Chem. - 2005. - Vol. 280 -P. 40996-41004.

53. Area, M. Low density lipoprotein receptor mutations in a selected population of individuals with moderate hypercholesterolemia / M. Area, E. Jokinen // Atherosclerosis. - 1998. - Vol. 136. - P. 187 - 194.

54. Soutar, A. K Genetics, clinical phenotype, and molecular cell biology of autosomal recessive hypercholesterolemia / A. K. Soutar, R. P. Naoumova, L. M. Traub // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2003. - Vol. 23, № 11. -P. 1963 - 1970.

55. Niemann-Pick CI Like 1 protein is critical for intestinal cholesterol absorption / S. W. Altmann, H. R. Davis, L. Zhu [et al.] // Science. - 2004. - Vol. 303. -P. 1201 - 1204.

56. Molecular characterization of the NPC1L1 variants identified from vcolesterol low absorbers / L. - J. Wang, J. Wang, N. Li [et al.] // J. Biol. Chem. - 2011. -Vol. 286(9). - P. 7397 - 7408.

57. Davis, H. R. Zetia: Inhibition of Niemann-Pick CI Like 1 (NPC1L1) to Reduce Intestinal Cholesterol Absorption and Treat Hyperlipidemia / H. R. Davis, E. P. Veltri // J. Atheroscler. Thromb. - 2007. - Vol. 14 - P. 99 - 108.

58. Sweeney, M. E. Ezetimibe: an update on the mechanism of action, pharmacokinetics and recent clinical trials / M. E. Sweeney, R. R. Johnson // Expert. Opin. Drug. Metab. Toxicol. - 2007. - Vol. 3, № 3. - P. 441 - 450.

59. Brown, M. S. Familial hypercholesterolemia: defective binding of lipoproteins to cultured fibroblasts associated with impaired regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryl coenzyme A reductase activity / M. S. Brown, J. L. Goldstein // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1974. - Vol. 71, № 3. - P. 788 - 792.

60. Purification of the low density lipoprotein receptor, an acidic glycoprotein of 164,000 molecular weight / W.J.Schneider, U. Beisiegel, J.L.Goldstein, M. S. Brown // J. Biol. Chem. - 1982. - Vol. 257, № 5. - P. 2664 - 2673.

61. The human LDL receptor: cysteine-rich protein with multiple Alu sequences in its mRNA / T. Yamamoto, C. G. Davis, M. S. Brown, [et al] // Cell. - 1984. -Vol. 39, № l.-P. 27-38.

62. The LDL receptor: a mosaic of exons shared with different proteins / Т. C. Siidhof, J. L. Goldstein, M. S. Brown, D. W. Russell // Science. - 1985. -Vol. 228, №4701.-P. 815-822.

63. Goldstein, J. L. History of discovery: the LDL receptor / J. L. Goldstein, M. S. Brown // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 2009. - Vol. 29, № 4. -P. 431 -438.

64. Monensin interrupts the recycling of low density lipoprotein receptors in human fibroblasts / S. K. Basu, J. L. Goldstein, R. G. W. Anderson, M. S. Brown // Cell. - 1981. - Vol. 24. - P. 493 - 502.

65. Brown, M. S. Recycling receptors: The round-trip itinerary of migrant membrane proteins / M. S. Brown, R. G. W. Anderson, J. L. Goldstein // Cell. - 1983. -Vol. 32-P. 663-667.

66. Goldstein, J. L. The LDL receptor and the regulation of cellular cholesterol metablism / J. L. Goldstein, M. S. Brown // J. Cell. Sci. - 1985. - Suppl. № 3. -P. 131 - 137.

67. Brown, M. S. A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis / M. S. Brown, J. L. Goldstein // Science. - 1986. - Vol. 232, № 4746. - P. 3447.

68. Климов, A. H. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения / А. Н. Климов, Н. Г. Никульчева. - СПб: Питер, 1999. -512 с.

69. Innerarity, Т. L. Lipoprotein-receptor interactions / Т. L. Innerarity, R. Е. Pitas, R. W. Mahley // Methods Enzymol. - 1986 - Vol. 129 - P. 542 - 565.

70. Human genes involved in cholesterol metabolism: chromosomal mapping of the loci for the low density lipoprotein receptor and 3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase with cDNA probes / V. Lindgren, L. Luskey, D. W. Russell, U. Francke // Proceed. Natl. Acad. Sci. USA - 1985. - Vol. 82. -P. 8567-8571.

71. The delta > 15 kb deletion French Canadian founder mutation in familial hypercholesterolemia: rapid polymerase chain reaction-based diagnostic assay

and prevalence in Quebec / L. R. Simard, J. Viel, M. Lambert [et al.] // Clin. Genet. - 2004. - Vol. 65, № 3. - P. 202 - 208.

72. Structure of the LDL receptor extracellular domain at endosomal pH / G. Rudenko, L. Henry, K. Henderson [et al.] // Science. - 2002. - Vol. 298. -P. 2353 -2358.

73. Acid-dependent ligand dissociation and recycling of LDL receptor mediated by growth factor homology region / C. G. Davis, J. L. Goldstein, T. C. Südhof [et al] //Nature. - 1987a.-Vol. 326, № 6115.-P. 760-765.

74. Rudenko, G. The low-density lipoprotein receptor: ligands, debates and lore / G. Rudenko, J. Deisenhofer // Curr. Opin. Struct. Biol. - 2003. - Vol. 13. -P. 683 -689.

75. Koivisto, P. V. Deletion of exon 15 of the LDL receptor gene is associated with a mild form of familial hypercholesterolemia. FH-Espoo / P. V. Koivisto, U. M Koivisto, P. T. Kovanen [et al.] // Arterioscler. Thromb. - 1993. - Vol. 13, № 11.-P. 1680- 1688.

76. SREBP-1, a membrane-bound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis / X. Wang, R. Sato, M. R. Briggs [et al.] // Cell. - 1994 - Vol.77 -P. 53 - 62.

77. Horton, J. D. SREBPs: activators of the complete program of cholesterol and fatty acid synthesis in the liver / J. D. Horton, J. L. Goldstein, M. S. Brown // J. Clin. Invest. - 2002. - Vol. 109, № 9.-P. 1125 - 1131.

78. Lipoproteins, cholesterol homeostasis and cardiac health / T. F. Daniels, K. M. Killinger, J. J. Michal [et al.] // Int. J. Biol. Sei. - 2009. - Vol. 5. -P. 474 _ 478.

79. The LDL receptor locus in familial hypercholesterolemia: mutational analysis of a membrane protein / H. H. Hobbs, D. W. Russell, M. S. Brown, J. L. Goldstein // Annu. Rev. Genet. - 1990. - Vol. 24. - P. 133 - 170.

80. Software and database for the analysis of mutations in the human LDL receptor gene / M. Varret, J. - P. Rabes, G. Collod-Beroud [et al.] // Nucleic Acids Res. -1997-Vol. 25-P. 172- 180.

81. A functional mutation in the LDLR promoter (-139C>G) in a patient with familial hypercholesterolemia /A. Smith, F. Ahmed, D. Nair [et. al] // Eur. J. Hum. Genet. -2007.-Vol. 15.-P. 1186 - 1189.

82. Intronic mutations outside of Alu-repeat-rich domains of the LDL receptor gene are a cause of familial hypercholesterolemia / S. Amsellem, D. Briffaut, A. Carrie [et al.]//Hum. Genet. - 2002. - Vol. 111. - P. 501 - 510.

83. FH-Pyrgos: a novel mutation in the promoter (-45delT) of the low-density lipoprotein receptor gene associated with familial hypercholesterolemia / G. V. Z Dedoussis, C. Pitsavos, D. Kelberman [et al.] // Clin. Genet. - 2003. -Vol. 64.-P. 414-419.

84. Analysis of LDLR mRNA in patients with familial hypercholesterolemia revealed a novel mutation in intron 14, which activates a cryptic splice site / M. A. Kulseth, K. E. Berge, M. P. Bogsrud, T. P. Leren // J. Hum. Genet. -2010,- Vol. 55.-P. 676-680.

85. Hobbs, H. H. Molecular genetics of the LDL receptor gene in familial hypercholesterolemia / H. H. Hobbs, M. S. Brown, J. L. Goldstein // Hum. Mutat. - 1992.-Vol. l.-P. 445-466.

86. Mutational analysis of the ligand binding domain of the low density lipoprotein receptor / V. Esser, L. E. Limbird, M. S. Brown [et al.] // J. Biol. Chem. - 1988. -Vol. 263, № 26. - P. 13282 - 13290.

87. First cysteine-rich repeat in ligand-binding domain of low density lipoprotein receptor binds Ca2+ and monoclonal antibodies, but not lipoproteins / I. R. van Driel, J. L. Goldstein, T. C. Sudhof, M. S. Brown // J. Biol. Chem. -1987. - Vol. 262, № 36. - P. 17443 - 17449.

88. Analysis of a recycling-impaired mutant of low density lipoprotein receptor in familial hypercholesterolemia / Y. Miyake, S. Tajima, T. Funahashi, A. Yamamoto // J. Biol. Chem. - 1989. - Vol. 264, № 28. - P. 16584 - 16590.

89. The J.D. mutation in familial hypercholesterolemia: aminoacid substitution in cytoplasmic domain impedes internalisation of LDL receptors / C. G. Davis, M. ALehrman, D. W. Russell D.W. [et al.] // Cell. - 1986. - Vol. 45, № 1. -P. 15-24.

90. A World Wide Web site for low-density lipoprotein receptor gene mutations in familial hypercholesterolemia: sequence-based, tabular, and direct submission data handling / D. J. Wilson, M. Gahan, L. Haddad [et al.] // Am. J. Cardiol. -1998. - Vol. 81.-P. 1509- 1511.

91. LDLR Database (second edition): new additions to the database and the software, and results of the first molecular analysis / M. Varret, J. - P. Rabes, R. Thiart [et al.] // Nucleic Acids Res. - 1998. - Vol. 26. - P. 248 - 252.

92. Identification of a novel LDLR mutation (c.261_262invGA, p.Trp87X): Importance of specifying DNA and protein mutations /D. Ng, E. Spaulding, J. C. Mulikin, L. G. Biesecker // Atherosclerosis. -2010. - Vol. 211. - P. 397398.

93. The molecular basis of familial hypercholesterolaemia in Turkish patients / M. M. Sozen, R. Whittall, C. Oner, A. Tokatli [et al.] // Atherosclerosis. - 2005. -Vol. 180. - P. 63-71.

94. Identification of recurrent and novel mutations in exon 4 of the LDL receptor gene in patients with familial hypercholesterolemia in the United Kingdom / V. Gudnason, L. King-Underwood, M. Seed [et al.] // Arterioscler. Thromb. -1993.-Vol. 13, № l.-P. 56-63.

95. Screening for mutations in exon 4 of the LDL receptor gene in Thai subjects with primary hypercholesterolemia: detection of a novel mutation D151Y by PCR-CFLP / K. U. Pongrapeeporn, V. Sutthikhum, A. Likidlilid A. [et al.] // J. Med. Assoc. Thai. - 2000. - Vol. 83, Suppl. 2. - P. 66 - 73.

96. Mutation in LDL receptor: Alu-Alu recombination deletes exons encoding transmembrane and cytoplasmic domains / M. A. Lehrman, W. J. Schneider, T. C. Südhof[etal.]// Science. - 1985. -Vol. 427, № 4683. - P. 140- 146.

97. Exon-Alu recombination deletes 5 kilobases from the low density lipoprotein receptor gene, producing a null phenotype in familial hypercholesterolemia / M. A. Lehrman, D. W. Rüssel, J. L. Goldstein, M. S. Brown // Proceed. Natl. Acad. Sei. USA. - 1986. - Vol. 83, № 11. - P. 3679 - 3683.

98. Alu-Alu recombination deletes splice acceptor sites and produces secreted low density lipoprotein receptor in a subject with familial hypercholesterolemia / M. A. Lehrman, D. W. Rüssel, J. L. Goldstein, M. S. Brown // J. Biol. Chem. -1987. - Vol. 262, № 7. - P. 3354 - 3361.

99. Unequal crossing-over between two alu-repetititve DNA sequences in the low-density-lipoprotein receptor gene. A possible mechanism for the defect in a patient with familial hypercholesterolaemia / B. Horsthemke, V. Beisiegel, A. Dunning [et al.] // Eur. J. Biochem. - 1987. - Vol. 164. - P. 77 - 81.

100. Duplication of seven exons in LDL receptor gene caused by Alu-Alu recombination in a subject with familial hypercholesterolemia / M. A. Lehrman, J. L. Goldstein, D. W. Russell, M. S. Brown // Cell. - 1987. - Vol. 48, № 5. -P. 827-835.

101. Identification of a novel mutation in exon 13 of LDL receptor gene causing familial hypercholesterolemia in two Spanish families / A. Cenarro, H. K. Jenset,

E. Casao [et al.] // Biochem. Biophys. Acta. - 1996. - Vol. 1396. - P. 1 - 4.

102. Two novel mutations in the LDL receptor gene: common causes of familial hypercholesterolemia in a Spanish population / A. Cenarro, H. K. Jenset,

F. Civeira // Clin. Genet. - 1996. - Vol. 49. - P. 180 - 185.

103. Mutation analysis in 36 unrelated Spanish subjects with familial hypercholesterolemia: identification of 3 novel mutations in the LDL receptor gene / P. Mozas, A. Cenarro, F. Civeira [et al.] // Hum. Mutat. - 2000. - Vol. 15, № 5. - P. 483 - 484.

104. Genetic diagnosis of familial hypercholesterolemia in a South European outbreed population: influence of low-density lipoprotein (LDL) receptor gene mutations on treatment response to simvastatin in total, LDL, and high-density lipoprotein cholesterol / F. J. Chaves, J. T. Real, A. B. Garcia-Garcia // J. Clin. Endocrinol. Metab. - 2001. -Vol. 86. - P. 4926 - 4932.

105. Large rearrangements of the LDL receptor gene and lipid profile in a FFI Spanish population / F. J. Chaves, J. T. Real, A. B. Garcia-Garcia // Eur. J. Clin. Invest. -2001.- Vol. 31. - P.309 - 317.

106. Familial hypercholesterolaemia in Portugal / M.Bourbon, A. C. Alves, A. M. Medeiros [et al.] // Atherosclerosis. - 2008. - Vol.196. - P. 633 - 642.

107. Analysis of LDL receptor gene mutations in Italian patients with homozygous familial hypercholesterolemia /S. Bertolini, S. Cassanelli, R. Garuti [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1999. - Vol. 19. - P. 408 - 418.

108. Analysis of low density lipoprotein receptor gene mutations and microsatellite haplotypes in Greek FH heterozygous children: six independent ancestors account for 60% of probands / J. Traeger-Synodinos, N. Mavroidis, E. Kanavakis [et al.] // Hum. Genet. - 1998. - Vol. 102. - P. 343 - 347.

109. Characterization and geographic distribution of the low density lipoprotein receptor (LDLR) gene mutations in northwestern Greece / G. Miltiadous, M. Elisaf, H. Bairaktari [et al.] // Hum. Mutât. - 2001. - Vol. 17. - P. 432 - 433.

110. Molecular characterization of familial hypercholesterolemia in German and Greek patients / G. V. Dedoussis, J. Genschel, B. Bochow [et al.] // Hum. Mutât. - 2004. - Vol. 23. - P. 285 - 286.

111. Geographical clustering of low density lipoprotein receptor gene mutations (C292X; Q363X; D365E & C660X) in Cyprus / S. L. Xenophontos, A. Pierides, K. Demetriou [et al.] // Hum. Mutât. - 2000. - Vol.5 - P. 380.

112. Genetic causes of familial hypercholesterolaemia in patients in the UK: relation to plasma lipid levels and coronary heart disease risk / S. E. Humphries,

R. A. Whittall, C. S. Hubbart [et al.] // J. Med. Genet. - 2006. - Vol.43. - P. 943 -949.

113. Identification of a deletion in the LDL receptor gene. A Finnish type of mutation / K. Aalto-Setälä, H. Gylling, T. Miettinen, K. Kontula // FEBS Letters. - 1988. -Vol. 230, № 1-2.-P. 31-34.

114. Finnish type of low density lipoprotein receptor gene mutation (FH-Helsinki) deletes exons encoding the carboxy-terminal part of the receptor and creates an internalization-defective phenotype / K. Aalto-Setälä, E. Helve, P. T. Kovanen, K. Kontula //J. Clin. Invest. - 1989. -V. 84, № 2. - P. 499 - 505.

115. Новые мутации гена рецептора липопротеинов низкой плотности у пациентов с семейной гиперхолестеринемией из Петрозаводска / Т. Ю. Комарова, А. С. Головина, Н. А. Грудинина [и др.] // Генетика. — 2013. - Т. 49, № 6. - С 772-776.

116. The familial hypercholesterolemia (FH)-North Karelia mutation of the low density lipoprotein receptor gene deletes seven nucleotides of exon 6 and is a common cause of FH in Finland / U. - M. Koivisto, H. Turtola, K. Aalto-Setälä [et al.] // J. Clin. Invest - 1992. - V. 90, № 1. - P. 219 - 228.

117. Molecular genetics of familial hypercholesterolaemia: common and rare mutations of the low density lipoprotein receptor gene / K. Kontula, U. M. Koivisto, P. Koivisto, H. Turtola // Annals of Medicine. 1992. - Vol. 24, №5.-P. 363-367.

118. Familial hypercholesterolemia in Finland: common, rare and mild mutations of the LDL receptor gene and their clinical consequences. Finnish FH group / A. F. Vuorio, K. Aalto-Setälä, U. - M. Koivisto [et al.] // Ann. Med. - 2001. -Vol. 33.-P. 410-421.

119. Molecular genetics of familial hypercholesterolemia in Norway / T. P. Leren, S. Tonstad, К. E. Gundersen [et al.] // J. Intern. Med. - 1997. - Vol. 241. -P. 185- 194.

120. Phenotypic consequences of a deletion of exons 2 and 3 of the LDL receptor gene / O. K. R0dningen, S. Tonstad, J. D. Medh et al. // J. Lipid Res. - 1999. - Vol. 40. -P. 213 -220.

121. Jensen, H. K. The molecular genetic basis and diagnosis of familial hypercholesterolemia in Denmark / H. K. Jensen // Dan. Med. Bull. - 2002. -Vol. 49.-P. 318-345.

122. Genetic characterization of Swedish patients with familial hypercholesterolemia: a heterogeneous pattern of mutations in the LDL receptor gene / S. Lind, E. Rystedt, M. Eriksson [et al.] // Atherosclerosis. - 2002. - Vol. 163. - P. 399 -407.

123. Identification of recurrent and novel mutations in the LDL receptor gene in German patients with familial hypercholesterolemia / M. S. Nauck, W. Koster, K. Dorfer [et al.] // Hum. Mutat. - 2001. - Vol. 18. - P. 165 - 166.

124. Schmidt, H. Familial hypercholesterolemia in Austria reflects the multi-ethnic origin of our country / H. Schmidt, G. M. Kostner // Atherosclerosis. - 2000. -Vol. 148.-P. 431 -432.

125. Spectrum of low density lipoprotein receptor mutations in Czech hypercholesterolemic patients / V. Kuhrova, H. Francova, P. Zapletalova [et al.] // Hum Mutat. - 2002. - Vol. 19, № 1. - P. 80.

126. Low-density lipoprotein receptor gene mutation analysis and clinical correlation in Belgian hypercholesterolaemics / L. F. Van Gaal, A. V. Peeters, C. E. De Block//Mol. Cell Probes.-2001.-Vol. 15.-P. 329-336.

127. High prevalence of a novel mutation in the exon 4 of the low-density lipoprotein receptor gene causing familial hypercholesterolemia in Belgium / O. Descamps, J. C. Hondekijn, P. Van Acker [et al.] / Clin. Genet. - 1997. - Vol. 51. -P. 303 - 308.

128. Impact of genetic defects on atherosclerosis in patients suspected of familial hypercholesterolaemia / O. S. Descamps, J. P. Gilbeau, X. Leysen [et al.] // Eur. J. Clin. Invest. - 2003. - Vol. - 33. - P. 1 - 9.

129. Analysis of sequence variations in low-density lipoprotein receptor gene among Malaysian patients with familial hypercholesterolemia / A. - K. Alyaa, K. Z. Mohd, S. - M. Mohd [et al.] // BMC Med Genet. - 2011. - Vol. 12, № 40.

130. The molecular basis of familial hypercholesterolemia in The Netherlands / S. W. Fouchier, J. C. Defesche, M. W. Umans-Eckenhausen, J. P Kastelein // Hum. Genet. - 2001. - Vol. 109, № 6. - P. 602 - 615.

131. Molecular genetic analysis of familial hypercholesterolemia: spectrum and regional difference of LDL receptor gene mutations in Japanese population / W. Yu, A. Nohara, T. Higashikata [et al.] // Atherosclerosis. - 2002. - Vol. 165. -P. 335-342.

132. Mutations in Japanese subjects with primary hyperlipidemia - results from the Research Committee of the Ministry of Health and Welfare of Japan since 1996 ~ / T. Maruyama, S. Yamashita, Y. Matsuzawa [et al.] // J. Atheroscler. Thromb. -2004. - Vol.11,№3.-P. 131-145.

133. Deletion in the gene for the low-density-lipoprotein receptor in a majority of French Canadians with familial hypercholesterolemia / H. H. Hobbs, M. S. Brown, D. W. Russell [et al.] //N. Engl. J. Med. - 1987. - Vol. 317, № 12. -P. 734-737.

134. Identification of a second "French Canadian" LDL receptor gene deletion and development of a rapid method to detect both deletions / Y. H. Ma, C. Betard, M. Roy [et al.] // Clin. Genet. - 1989. - Vol. 36, № 4. - P. 219 - 228.

135. Marais, A. D. Familial hypercholesterolemia in South Africa / A. D. Marais, J. C. Firth, D. J. Blom // Semin. Vase. Med. - 2004. - Vol. 4, № 1. - P. 93 - 95.

136. Leitersdorf, E. Two common low density lipoprotein receptor gene mutations cause familial hypercholesterolemia in Afrikaners / E. Leitersdorf, D. R. van der Westhuyzen, G. A. Coetzee, H. H. Hobbs // J. Clin. Invest. - 1989. -Vol. 84, №3.-P. 954-961.

137. Simultaneous detection of multiple familial hypercholesterolemia mutations facilitates an improved diagnostic service in South african patients at high risk of

cardiovascular disease / M. J. Kotze, G. Kriegshauser, R. Thiart [et al] // Mol. Diagn. - 2003. - Vol.7, № 3 - 4. - P. 169 - 174.

138. An exon 4 mutation identified in the majority of South African familial hypercholesterolaemics /М. J. Kotze, L. Warnich, E. Langenhoven [et al.] // J. Med. Genet. - 1990. - Vol. 27, № 5. - P. 298 - 302.

139. A nonsense mutation in the LDL receptor gene leads to familial hypercholesterolemia in the Druze sect / D. Landsberger, V. Meiner, A. Reshef [et al.] // Am. J. Hum. Genet. - 1992. - Vol. 50. - P. 427 - 433.

140. A common Lithuanian mutation causing familial hypercholesterolemia in Ashkenazi Jews / V. Meiner, D. Landsberger, N. Berkman [et al.] // Am. J. Hum. Genet. -1991.- Vol. 49. - P. 443 - 449.

141. Molecular genetics of familial hypercholesterolemia in Israel / A. Reshef, H. Nissen, L. Triger [et al.] // Hum.Genet. - 1996. - Vol. 98. - P. 581 - 586.

142. Gudnason, V. Common founder mutation in the LDL receptor gene causing familial hypercholesterolemia in the Icelandic population / V. Gudnason, G. Sigurdsson, H. Nissen, S. E. Humphries // Hum. Mutat. - 1997. - Vol. 10. -P. 36-44.

143. Familial hypercholesterolemia in St.-Petersburg: the known and novel mutations found in the low density lipoprotein receptor gene in Russia / F. M. Zakharova, D. Damgaard, M. Y. Mandelshtam [et al.] // BMC Med. Genet. - 2005. - № 6.

144. Диагностика и коррекция нарушений липидного обмена с целью профилактики и лечения атеросклероза. Российские рекомендации. V пересмотр // Атеросклероз и дислипеидемии. - 2012. - № 4 (9). - С. 5 - 52.

145. Parhofer, К. G. Mipomersen: evidence-based review of its potential in the treatment of homozygous and severe heterozygous familial hypercholesterolemia / K. G. Parhofer // Core Evid. - 2012. - Vol. 7. - P. 29 - 38.

146. Kunkel, L. M. Analyses of human Y-chromosome-specific reiterated DNA in chromosome variants / L. M. Kunkel, D. R. Kirby, S. H. Boyer [et al.] // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. - 1977. - Vol. 74. - P. 1245 - 1249.

147. Bell, G. I. Polymorphic DNA region adjacent to the 5'-end of the human insulin gene / G. I. Bell, J. H. Karam, W. J. Rutter // Proc. Natl. Acad. Sci. - 1981. -Vol. 78.-P. 5759-5763.

148. High sensitivity of the single-strand conformation polymorphism method for detecting sequence variations in the low-density lipoprotein receptor gene validated by DNA sequencing /Ii. K. Jensen, L. G. Jensen, P. S. Hansen [et al.] // -Clin. Chem. - 1996. - V. 42, № 8 (Pt.l). - P. 1140- 1146.

149. Detection of the apoB-3500 mutation (glutamine for arginine) by gene amplification and cleavage with Mspl / P. S. Plansen, N. Rudiger, A. Tybjaerg-Hansen [et al.] // J. Lipid Res. - 1991. - Vol. 32, № 7. - P. 1229 - 1233.

150. Остерман, JT. А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование / Л. А. Остерман - Москва: Наука, 1981.-С. 131 - 135.

151. Айала, Ф. Современная генетика: в 3-х т. Т 3/ Ф. Айала, Дж. Кайгер; пер. с англ.-М.: Мир, 1988.-335 с.

152. Захарова, Ф. М. Генетическое своеобразие локуса рецептора липопротеинов низкой плотности в Санкт-Петербургской популяции// дис. ...канд. биол. наук: 03.00.04 / Захарова Фаина Михайловна - СПб, 2001 .- 119 с.

153. Laurie, A. D. Genetic screening of patients with familial hypercholesterolaemia (FH): a New Zealand perspective / A. D. Laurie, R. S. Scott, P. M. George // Atheroscler. Suppl. - 2004. - Vol. 5, №5. - P. 13 - 15.

154. Diagnosis of families with familial hypercholesterolaemia and/or Apo B-100 defect by means of DNA analysis of LDL-receptor gene mutations / K. Widhalm, A. Dirisamer, A. Lindemayr, G. Kostner // J. Inherit. Metab. Dis. - 2007. -Vol. 30, №2. -P. 239-247.

155. Mutation detection in Croatian patients with familial hypercholesterolemia / I. Pecin, R. Whittall, M. Futema [et al.] // Ann. Hum. Genet. - 2013. - Vol. 77, № l.-P. 22-30.

156. Familial hypercholesterolemia due to defects in the gene encoding the LDL receptor. Mutations occurring in Italy and their analysis /Edited by A. Cantafora, F. Prestinaci, I. Blotta // Rapporti ISTISAN. - 2006. - Vol. 06/23. - 90 p. [Article in Italian]

157. Molecular characterization of familial hypercholesterolemia in Spain: identification of 39 novel and 77 recurrent mutations in LDLR / P. Mozas, S. Castillo, D. Tejedor [et al.] // Hum. Mutat. - 2004. -Vol. 24, № 2. - P. 187.

158. The A370T variant (StuI polymorphism) in the LDL receptor gene is not associated with plasma lipid levels or cardiovascular risk in UK men / J. R. Vieira, R. A. Whittall, J. A. Cooper [et al.] // Ann. Hum. Genet. - 2006. -Vol. 70, Pt. 6. - P. 697 - 704.

159. The identification of two low-density lipoprotein receptor gene mutations in South African familial hypercholesterolaemia / M. J. Kotze, E. Langenhoven, L. Warnich [et al.] // S. Afr. Med. J. - 1989. - Vol. 76, № 8. - P. 399 - 401.

160. Low density lipoprotein receptor (LDLR) gene mutations in Canadian subjects with familial hypercholesterolemia, but not of French descent / J. Wang, E. Huff, L. Janecka, R. A. Hegele // Hum. Mutat. - 2001. - Vol. 18, № 4. - P. 359.

161. Familial hypercholesterolemia in Morocco: first report of mutations in the LDL receptor gene / M. El Messal, K. Ait Chihab, R. Chater // J. Hum. Genet. - 2003. Vol. 48, №4. P. 199-203.

162. Molecular genetic analysis of 1053 Danish individuals with clinical signs of familial hypercholesterolemia / K. Brusgaard, P. Jordan, H. Hansen [et al.] // Clin. Genet. - 2006. - Vol. 69, № 3. - P. 277 - 83.

163. Detection of a frequent polymorphism in exon 10 of the low-density lipoprotein receptor gene / L. Warnich, M. J. Kotze, E. Langenhoven [et al.] // Hum.Genet. -1992.-Vol. 89, №3.-P. 362.

164. Screening for point mutations in exon 10 of the low density lipoprotein receptor gene by analysis of single-strand conformation polymorphisms: detection of a

nonsense mutation — FH469—»Stop / T. P. Leren, K. Solberg, O. K. R.0dningen [et al.] //Hum. Genet. - 1993. Vol. 92. - P. 6 - 10.

165. Mutations in the low-density lipoprotein receptor gene in Chinese familial hypercholesterolemia patients / Y. T. Mak, C. P. Pang, B. Tomlinson B [et al.] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1998. - Vol. 18, № 10. - P. 1600 - 1605.

166. A common polymorphism in the LDL receptor gene has multiple effects on LDL receptor function / F. Gao, H. E. Ihn, M. W. Medina, R. M. Krauss // Hum. Mol. Genet.-2013.-Vol. 22, №7. -P. 1424- 1431.