Генетическое своеобразие локуса рецептора липопротеинов низкой плотности в Санкт-Петербургской популяции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Захарова, Фаина Михайловна

• Захарова, Фаина Михайловна
• кандидат биологических наук
• 2001

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Захарова, Фаина Михайловна

Содержание.

Список сокращений.

Введение.

1. Обзор литературы.

1.1 Клиническая и биохимическая характеристика СГ.

1.1.1 Метаболизм холестерина.

1.1.2 Семейная гиперхолестеринемия.

1.2 Рецептор ЛНП - ключевой белок в метаболизме холестерина.

1.2.1 Клеточный цикл рецептора ЛНП.

1.2.2 Структура гена и мРНК рецептора ЛНП.

1.2.3 Структура рецептора ЛНП.

1.3 Классификация мутаций в гене рецептора ЛНП.

1.4 Изучение нейтральной вариабельности гена рецептора ЛНП.

1.5 Методы тестирования функциональной активности рецептора ЛНП.

1.6 Проблема в изучении связи генотип-фенотип при СГ.

2. Материалы и методы.

2.1 Пациенты.

2.2 Выделение ДНК из свежей и замороженной крови.

2.3 Полимеразная цепная реакция.

2.4 Анализ амплификата электрофорезом в ПААГ.

2.6 Гетеродуплексный анализ.

2.7 SSCP-анализ.

2.8 Секвенирование ДНК.

- 2.9 Рестрикционный анализ.

2.10 Статистические методы, использованные в работе.

3. Результаты.

3.1 Поиск мутаций и полиморфизмов в гене рецептора ЛНП.

3.1.1 Поиск мутаций в гене рецептора ЛНП.

3.1.2 Идентификация полиморфизмов в гене рецептора ЛНП.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ГЛ - гиперлипидемия

ГМГ-КоА - З-гидрокси-З-метилглугарил-кофермент А

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ЛВП - липопротеины высокой плотности

ЛНП - липопротеины низкой плотности

ЛОВП - липопротеины очень высокой плотности

ЛОНП - липопротеины очень низкой плотности

ПААГ - полиакриламидный гель

ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов

ПСА - персульфат аммония

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СГ - семейная гиперхолестеринемия

ТЕМЕД - тетраметилэтилендиамин

ФРЭ - фактор роста эпидермиса

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ЭПР - эндоплазматический ретикулум

SNP - однонуклеотидные замены (single nucleotide polymorphism)

SRE - регуляторный элемент синтеза стеринов (sterol regulatory element)

SREBP - белок, связывающийся с регуляторным элементом синтеза стеринов (sterol regulatory element binding protein)

SSCP-анализ - анализ конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов (single strand conformation polymorphism) ТВЕ - трис-боратный буфер

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Генетическое своеобразие локуса рецептора липопротеинов низкой плотности в Санкт-Петербургской популяции»

Актуальность проблемы.

Изучение вариабельности генома человека является одной из актуальных проблем молекулярной генетики. Подтверждением этого служит осуществление таких проектов, как программы "Геном человека" и "Разнообразие генома человека". Появление и быстрое развитие качественно нового раздела медицинской науки -молекулярной медицины (Горбунова и Баранов, 1997) способствовало созданию национальных банков данных мутационных повреждений, связанных с различными наследственными заболеваниями. Одновременно не менее интенсивно ведутся исследования в области изучения различных вариантов генетического полиморфизма, что имеет значение для характеристики отдельных народов или популяций, для сравнения групп пациентов с наличием или отсутствием отдельных заболеваний с целью идентификации генетических факторов риска.

Атеросклероз входит в число наиболее часто встречающихся мультифакторных заболеваний (Климов и Никульчева, 1999), то есть в его развитие вносят вклад, как факторы внешней среды, так и наследственная предрасположенность. Последняя особенно значительна при формах, рассматриваемых как моногенные заболевания. Одним из наиболее распространенных моногенных заболеваний, ведущих к атеросклеротическому поражению сосудов и последующим инфарктам миокарда, является семейная гиперхолестеринемия (Brown and Goldstein, 1986).

Семейная гиперхолестеринемия (СГ) - аутосомно-доминантное заболевание, причиной которого является снижение скорости катаболизма ЛНП вследствие количественной недостаточности или дисфункции их специфического рецептора, вызываемых мутациями в кодирующем его гене. Частота гетерозиготной формы в большинстве этнических популяций составляет 1 случай на 500 человек (Brown and Goldstein, 1986). Возникающие в гене рецептора мутации могут приводить к фенотипическим проявлениям различной степени тяжести. Так, у пациентов, имеющих одну копию мутантного гена рецептора ЛНП, наблюдается заметно повышенный уровень холестерина в крови с момента рождения. С возрастом он увеличивается до 250 - 500 мг/дл, и уже в 30 - 40 лет у этих пациентов появляются симптомы ишемической болезни сердца (ИБС). В США и Западной Европе около 5% людей, перенесших инфаркт миокарда в возрасте до 60 лет, больны СГ (Goldstein et al., 1973). В отличие от гетерозиготной, гомозиготная форма встречается редко (1 больной на 1000000 новорожденных). У гомозигот уровень холестерина в крови достигает 500 -1200 мг/дл, вследствие чего уже в первые двадцать лет жизни инфаркты миокарда нередко являются причиной их смерти.

Изучение полиморфизма гена рецептора ЛНП и классификация природных мутаций, находящихся в этом локусе, стали возможными после клонирования в 1984 году кДНК(Уатато1;о et al., 1984), а в 1985 году и хромосомного гена рецептора ЛНП (Sudhof et al., 1985). К настоящему моменту известно более 600 различных мутантных аллелей гена рецептора ЛНП (http://www.umd.necker.fr/LDLR/HomePage.html) и большое количество нейтральных полиморфизмов этого гена. Интерес к структуре гена рецептора и его мутантным формам объясняется интенсивным развитием в последнее время прямых и косвенных методов ДНК-диагностики, после проведения, которой возможно назначение специфической терапии СГ.

К настоящему моменту спектр мутаций гена рецептора ЛНП интенсивно изучается в Европе, Северной Америке и в Японии. Большинство известных мутаций гена рецептора ЛНП описано именно в этих странах. Однако у разных народов и этнических групп спектр мутаций сильно отличается, поэтому невозможно использовать данные, полученные в одной стране, для диагностики СГ в других странах. Изучение встречаемости отдельных мутаций и полиморфизмов у разных народов позволяет рационально планировать стратегию диагностики СГ в каждой конкретной стране.

Первые исследования локуса рецептора ЛЕИ у больных СГ в России были начаты в отделе молекулярной генетики НИИЭМ РАМН (Mandelshtam et al., 1993). Однако спектр мутаций и полиморфизмов гена рецептора ЛНП в Российской популяции изучен до сих пор крайне неполно (Mandelshtam et al., 1998; Chakir et al., 1997, 1998; Крапивнер и др., 2001). Отсутствие данных о спектре мутаций в Российской популяции и частоте встречаемости мутаций и полиморфизмов ограничивает возможность проведения ДНК-диагностики для выявления больных СГ и генетического консультирования в их семьях.

Таким образом, актуальность данного исследования определяется слабой изученностью спектра мутаций и полиморфизмов в гене рецептора ЛНП в Российской популяции. Требуются новые данные, чтобы разработать рациональную стратегию диагностики СГ - тяжелого наследственного заболевания, а также определить специфику Российской популяции в отношении спектра мутаций и встречаемости полиморфизмов гена рецептора ЛНП путем сравнения ее с другими популяциями Европы.

Цели и задачи исследования.

Целью данного исследования являлось изучение молекулярной вариабельности гена рецептора ЛНП у больных с СГ в Санкт-Петербурге. Задачи исследования включали:

1. Создать коллекции ДНК больных с СГ, гиперлипидемией типа II без клинической картины СГ и контрольной группы.

2. С помощью метода анализа конформационного полиморфизма однонитевых фрагментов ДНК осуществить поиск нуклеотидных вариаций с последующим их секвенированием в экзонах 1-3, 5-9, 11-15 гена рецептора ЛНП у больных СГ в Санкт-Петербурге.

3. Разработать экспресс-методы выявления идентифицированных мутаций и полиморфизмов, и провести анализ наследования обнаруженных мутаций в семьях пробандов.

4. Сравнить частоты встречаемости аллелей SfaN IПДРФ, Stu IПДРФ, Hinc IIПДРФ, Ava II ПДРФ, Msp I ПДРФ в выборках больных с СГ, спорадическими случаями гиперлипидемии и в контрольной группе Санкт-Петербурга. Сопоставить полученные данные с частотами аллелей этих ПДРФ, определенных для групп СГ и здоровых лиц в других Европейских популяциях.

Научная новизна полученных результатов.

В результате проведенного исследования выявлены пять мутаций (С74Х, Н229Н, Е397Х, G571E, T705I) в гене рецептора ЛНП у больных с СГ, причем две из них (Н229Н и G571E) являются новыми. Мутация С74Х, описанная ранее в Корее и

Японии, впервые была обнаружена нами в Европе (в Санкт-Петербурге). Впервые в Северо-западном регионе проведено изучение ряда характерных для нашей популяции генетических полиморфизмов и исследованы частоты их встречаемости. Показано генетическое своеобразие локуса рецептора ЛНП в Санкт-Петербургской популяции.

Научно-практическая и теоретическая значимость работы.

Теоретический интерес представляют описанные впервые в гене рецептора мутации у пациентов с СГ. Мутации Н229Н, Е397Х, G571E уникальны и характерны только для Российской популяции, мутации С74Х и T705I впервые обнаружены в России. Впервые в Санкт-Петербурге обнаружены четыре полиморфизма длин рестрикционных фрагментов (SfaN I ПДРФ, Stu I ПДРФ, Hitic II ПДРФ, Ava IIПДРФ, Msp I ПДРФ), определена частота встречаемости аллелей полиморфизмов в исследуемой выборке и проведено сравнение полученных данных с частотами аллелей этих же полиморфизмов в Европе. Показано, что аллели Hinc II ПДРФ, Msp I ПДРФ и Ava II ПДРФ встречаются с одинаковой частотой в группе с СГ и в группе контроля, а аллели с сайтом SfaN I ПДРФ и без сайта Stu I ПДРФ встречались чаще в группе контроля, чем в группе с СГ.

Практическая ценность работы заключается в разработке методов быстрой детекции с помощью специфических эндонуклеаз идентифицированных нами мутаций. Выявление данных мутаций с помощью экспресс диагностики может быть использовано для генетического консультирования и своевременного лечения больных СГ. Так, своевременное использование лекарственных препаратов (например, статинов) позволяет значительно снизить у больных СГ риск развития атеросклероза и предотвратить у них развитие тяжелых форм ИБС.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Захарова, Фаина Михайловна

5. ВЫВОДЫ.

1. Впервые в Санкт-Петербургской популяции больных СГ идентифицированы четыре мутации в гене рецептора ЛНП: С74Х, Н229Н, G571E, Т705Т. Мутации Н229Н и G571E не были ранее описаны ни в одной популяции мира, мутация С74Х впервые обнаружена в Европе, а мутация T705I впервые обнаружена в России.

2. В семье с мутацией Е397Х показана косегрегация данной мутации и гиперхолестеринемии у 7 родственников из 11.

3. Широко распространенная в Финской популяции мутация FH-North Karelia не обнаруживается в нашей выборке из Санкт-Петербурга.

4. Санкт-Петербургская популяция полиморфна по многим позициям гена рецептора ЛПП. Среди больных СГ, ГЛ и группе контроля были обнаружены 5 полиморфизмов: сЛ 17 С/Т, с.1171 G/A, с.1773 Т/С, с.1959 С/Т, с.2231 G/A.

5. Достоверное различие частот аллелей Hinc II (с. 1773), Ava II (с.1959 С/Т) и Msp I (с.2231 G/A) ПДРФ между группами СГ, ГЛ и группой контроля обнаружено не было. Показано статистически значимое преобладание аллеля Т для SfaNI (с. 117 С/Т) ПДРФ и аллеля G для Stu 1 (1171 G/A) ПДРФ в группе с СГ по сравнению с группой контроля в изученной выборке из Санкт-Петербургской популяции.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Захарова, Фаина Михайловна, 2001 год

1. Айала Ф., Кайгер Дж. (1988) Современная генетика. т.З (в Зх томах) "Мир",1. Москва.

2. Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. (2000) Геном человека игены предрасположенности. (Введение в предиктивную медицину.) "Интермедика", Санкт-Петербург.

3. Бышевский А. Ш, Терсенов О. А. (1994) Биохимия для врача. "Уральскийрабочий", Екатеринбург.

4. Глотов Н.В., Животовский Л.А., Хованов Н.В., Хромов-Борисов Н.Н. (1982)

5. Биометрия. "Ленинградский университет", Ленинград.

6. Горбунова В.Н., Баранов B.C. (1997) Введение в молекулярную диагностику игенотерапию наследственных заболеваний. "Специальная литература", Санкт-Петербург.

7. Добрецов Г.Е., Спирин М.М., Форстер Х.Г. (1982) Поверхность липопротеидовнизкой плотности плазмы крови человека: площадь, занимаемая белками и липидами. Биохимия 47 (1): 47-54.

8. Климов А.Н, Никульчева Н.Г. (1999) Обмен липидов и липопротеидов и егонарушения. "Питер", Санкт-Петербург.

9. Крапивнер С.Р., Малышев П.П., Полтараус А.Б. и др. (2001) Случай семейнойгиперхолестеринемии, вызванной новой мутацией D461Y в гене рецептора липопротеинов низкой плотности. Кардиология 41: 92-94.

10. Липовецкий Б.М. (2000) Клиническая липидология. "Наука", Санкт-Петербург.

11. Мандельштам М.Ю., Липовецкий Б.М., Шварцман А.Л., Гайцхоки B.C. (1995)

12. Молекулярная гетерогенность семейной гиперхолестеринемии в популяции жителей Санкт-Петербурга. Генетика человека 31(4): 521-527. П.Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Д. (1984) Методы генной инженерии. Молекулярное клонирование. "Мир", Москва

13. Тюрин Ю.Н., Макаров А.А. (1998) Статистический анализ данных на компьютере.

14. Под редакцией В.Э. Фигурнова. "ИнфраМ", Москва.

15. Фогель Ф., Мотульский А. (1990) Генетика человека. "Мир", Москва.

16. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р., Леман И. (1984) Основы биохимии. "Мир" Москва.

17. Alberts b., Bray D., Lewis J., Raff M., Roberts K., Watson J.D. (1989) Molecular biology of the cell. Garland Publishing, Inc. New York London.

18. Antonarakis S.E. and Nomenclature Working Group (1998) Recommendation for a nomenclature system for human gene mutations. Hum. Mutat. 11: 1-3.

19. BaileyJ.M. (1973) in Atherogenisis: initiating factors. Ciba foundation symposium, Elsevier, Amsterdam 12: 63-92.

20. Bell G.I., Karam J.H., Rutter W.J. (1981) Polymorphic DNA region adjacent to the 5'-end of the human insulin gene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 78, 5759-5763.

21. Bieri S., Djordjevic J.T., Daly N.L., Smith R., Kroon P. A. (1995) Disulfide bridges of a cysteine-rich repeat of the LDL receptor ligand-binding domain. Biochemistry 34: 13059-13065.

22. Bieri S., Atkins A.R., Lee H.T. (1998) Folding, calcium binding, and structural characterization of a concatemer of the first and second ligand-binding modules of the low-density lipoprotein receptor. Biochemistry 37(31): 10994-1002.

23. Brown M.S., Goldstein J.L. (1974) Familial hypercholesterolemia: defective binding oflipoproteins to culture fibroblasts associated with impaired regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryi coenzyme A reductase. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 71: 788-792.

24. Brown M.S., Goldstein J.L. (1976) Analysis of a mutant strain of human fibroblasts with adefect in the internalization of receptor-bound low density lipoprotein. Cell 9: 663-674.

25. Brown M.S., Goldstein J.L. (1984) How LDL receptors influence cholesterol andatherosclerosis. Sci. Am. 251: 58-66.

26. Brown M.S., Goldstein J.L. (1986) A receptor-mediated pathway for cholesterolhomeostasis. Science 232: 34-47.

27. Brown M.S., Goldstein J.L. (1997) The SREBP pathway:regulation of cholesterolmetabolism by proteolysis of a membrane-bound transcription factor. Cell 89: 331-340.

28. Cavanaugh J.A., Easteal S. (1991) A Haelll polymorphism in the 3' untranslated region ofthe low density lipoprotein receptor (LDLR) gene. Nucleic Acids Res. 19(23): 6663.

29. Chae JJ, Park YB, Kim SH, Hong SS, Song GJ, Han KH, Namkoong Y, Kim HS, Lee CC.1997) Am. J. Hum. Genet. 61: SA409.

30. Chakir Kh., Skobeleva N.A., Shevtsov S.P., Konstantinov V.O., Denisenko A.D.,

31. Schwartz E.I. (1997) Two novel Slavic point mutations in the low-density lipoprotein receptor gene in patients with familial hyperholesterolemia from St. Petersburg Mol Genet. Metabol. 63 : 31-34.

32. Chakir Kh., Mandelshtam MJu., Shevtsov S.P., Golubkov V.I., Skobeleva N.A. Schur

33. Chappell D.A., Medh J.D. (1998) Receptor-mediated mechanisms of lipoprotein remnantcatabolism. Prog. Lipid Res. 37 (6): 393-422.

34. Chaves FJ, Puig О, Garcia-Sogo M, Real J, Gil JV, Ascaso J, Carmena R, Armengod ME.1996) Seven DNA polymorphisms in the LDL receptor gene: application to the study of familial hypercholesterolemia in Spain. Clin. Genet. 50 (1): 28-35.

35. Chen W.-J., Goldstein Y.L., Brown M.S. (1990) NPXY, a sequence often found incytoplasmic tails is required for coated pitmediated internalisation of the LDL receptor. Biochemistry 265:3116-3123.

36. Cummings R.D., Komfied S., Schneider W.J., Hobgood K.K., Tolleshaug H., Brown M.S.,

37. Goldstein J.L. (1983) Biosynthesis of the N- and O-linked oligosaccharides of the low density lipoprotein receptor. J. Biol. Chem. 258: 15261-15273.

38. Cuthbert J.A., Lipsky P.E. (1989) Identification of low density lipoproteins receptorabnormalities by assaying functional receptors of proliferating lymphocytes. Arteriosclerosis Supl. 1 9:1-43 1-49.

39. Daga A, Mattioni T, Balestreri R, Coviello DA, Corte G, Bertolini S. (1990) Use of three

40. DNA polymorphisms of the LDL receptor gene in the diagnosis of familial hypercholesterolemia. Hum. Genet. 84(5): 412-416.

41. Daly N.L., Scanlon M.J., Djordjevic J.T., Kroon P.A., Smith R. (1995) Three-dimensionalstructure of the cysteine-rich repeat from the low-density lipoprotein receptor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92: 6334-6338.

42. Davis C.G., Goldstein Y.L., Sudhof T.C., Anderson R.G.W., Russell D.W., Brown M.S.1987) Acid-dependent ligand dissociation and recycling of LDL receptor mediated by growth factor homology region. Nature 326: 760-765.

43. Deiana L., Garuti R., Pes G.M., Carru C., Errigo A., Rolleri M., Pisciotta L., Masturzo P.,

44. Duncan E.A., Brown M.S., Goldstein Y.L., Sakai J. (1997) Cleavage site for sterolregulated protease localized to a Leu-Ser bond in lumenal loop of sterol regulatory element binding protein-2. J. Biol. Chem. 272: 12778-12785.

45. Ericsson J., Jackson S.M., Lee B.C., Edwards PA. (1996) Sterol regulatory elementbinding protein binds to a cis element in the promoter of the famesyl diphosphate synthasegene. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 93: 5175-5185.

46. Esser V., Limbird L.E., Brown M.S., Goldstein Y.L., Russell D.W. (1988) Mutationanalysis of the ligand binding domain of the low-density lipoprotein receptor. J. Biol. Chem. 263: 13282-13290.

47. Fredrickson D., Lees R. (1965) A system for phenotyping hypercholesterolemia.1. Circulation 31: 321-327.

48. Fredrickson D.S., Levy R.I. (1972) in The Metabolic Basis of Inherited Disease. McGraw1. Hill, New York.

49. Friedlander Y, Berry EM, Eisenberg S, Stein Y, Leitersdorf E. (1995) Plasma lipids andlipoproteins response to a dietary challenge: analysis of four candidate genes. Clin. Genet. 47(1): 1-12,

50. Funke H, Klug J, Frossard P, Coleman R, Assmann G. (1986) Pst I RFLP closed to the

51. L receptor gene. Nucl. Acids Res. 44 (19): 7820.

52. Geisel J., Weisshaar В., Oette K., Mechtel M., Dorfler W. (1987) Double Msp I RELP inthe human LDL-receptor gene. Nucleic Acids Res. 15:3943.

53. Geisel J, Weisshaar B, Oette K, Doerfler W. (1988) A new ApaLI restriction fragmentlength polymorphism in the low-density lipoprotein receptor gene. J. Clin. Chem. Clin. Biochem. 26: 429-433.

54. Glavac D., Dean M. (1993) Optimization of the single-strand conformationalpolymorphism (SSCP) technique for detection of point mutation. Hum. Mutat. 2 :404-414.

55. Goldstein J.L., Brown M.S. (1973) Familial hypercholesterolemia: identification of a defectin the regulation of 3-hydroxy-3-methylglutaryi coenzyme A reductase activity associated with overproduction of cholesterol. Proc. Nat. Acad. Sci. 70: 2804-2808.

56. Goldstein Y.L., Schrott H.G., Hazzard W.R., Bierman E.L., Motulsky A.G. (1973)

57. Hyperlipidemia in coronary heart disease. II. Genetic analysis of lipid levels in 176 families and delineation of a new inherited disorder, combined hyperlipidemia. J. Clin. Invest. 52: 544-568.

58. Goldstein J.L., Dana S.E., Brown M.S. (1975a) Genetic heterogeneity in familialhypercholesterolemia: evidence for two different mutations affecting functions of low-density lipoprotein receptor. Proc. Nat. Acad. Sci. USA 72(3): 1092-1096.

59. Goldstein J.L., Basu S.K., Brunschede G.Y., Brown M.S. (1976) Release of low densitylipoprotein from its cell surface receptor by sulfated glycosaminoglycans. Cell 7(1): 8595.

60. Goldstein J.L., Brown M.S. (1977) The low-density lipoprotein pathway and its relation toatherosclerosis. Ann. Rev. Biochem. 46: 897-930.

61. Goldstein Y.L., Brown M.S. (1989) Familial hypercholesteremia. In: The Metabolic Basisof Inherited Diseases. Eds. S.R. Scriver, A.L. Beaudet, W.S. Sly, D. Valle, N.Y. McGraw Hill, 6th. Edn., 1215-1250.

62. Goldstein Y.L., Brown M.S. (1990) Regulation of the mevalonate pathway. Nature 343:425.430.

63. Guan G., Jiang G., Koch R.L., Shechter I. (1995) Molecular cloning and functionalanalysis of the promoter of the human squalene synthase gene. J. Biol. Chem. 270: 2195821965.

64. Hegele RA, Emi M, Nakamura Y, Lalouel JM, White R. (1986) A Stu I RFLPs upstreamof the low density lipoprotein receptor (LDLR) gene. Nucleic Acids Res. 4: 1786.

65. Hegele RA, Emi M, Nakamura Y, Lalouel JM, White R. (1988) RFLPs upstream of thelow density lipoprotein receptor (LDLR) gene. Nucleic Acids Res., 16 (14): 7214.

66. Hegele RA, Emi M, Nakamura Y, Lalouel JM, White R. (1989) Three RFLPs upstream ofthe low density lipoprotein receptor (LDLR) gene. Nucleic Acids Res. 17 (1): 470.

67. Hegele R.A., Plaetke R., Lalouel J.-M. (1990) Linkage disequilibrium between DNAmarkers at of the low-density lipoprotein receptor gene. Genetic Epidemol 7: 69-81.

68. Hobbs H.H., Esser V., Russell D.W. (1987) Avail polymorphism in the human LDLreceptor gene. Nucleic Acids Res. 15 (1): 379-382.

69. Hobbs H.H., Leitrsdorf E., Goldstein Y.L., Brown M.S., Russell D.W. (1988) Multiplecrm-mutations in familial hypercholesterolemia: Evidence for 13 alleles, including four deletions. J. Clin. Invest 81: 909-917.

70. Hobbs H.H., Russell D.W., Brown M.S., Goldstein Y.L. (1990) The LDL receptor locusand familial hypercholesteromia: Mutational analysis of a membrane protein. Annu. Rev. Genet. 24: 133-170.

71. Hobbs H.H., Brown M.S., Goldstein J.L. (1992) Molecular genetics of the LDL receptorgene in familial hypercholesterolemia. Hum. Mutat. 1: 445-466.

72. Howell B.W., Herz J. (2001) The LDL receptor gene family: signaling functions duringdevelopment. Curr. Opin. Nevrobiol. 11: 74-81.

73. Hirayama Т., Yamaki E., Hata A., Tsuji M., Hashimoto K., Yamamoto M., Emi M. (1998;

74. Five familial hypercholesterolemic kindreds in Japan with novel mutations of the LDL receptor gene. J. Hum Genet. 43(4): 250-254.

75. Hua X., Yokoyama C., Wu J., Briggs M.R., Brown M.S., Goldstein Y.L., Wang X. (1993)

76. SREBP-2, a second basic-helix-loop-helix-leucine zipper protein that stimulates transcription by binding to a sterol regulatory element. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 11603-11607.

77. Hua X., Sakai J., Brown M.S., Goldstein Y.L., (1996) Regulated cleavage of sterolregulatory element binding proteins (SREBPs) requires sequences on both sides of the endoplasmic reticulum membrane. J. Biol. Chem. 271: 10379-10384.

78. Humphries S.E., Horathemke В., Seed M., Delattre S., Clavey V. (1985) A common DNApolymorphism of the low-density lipoprotein (LDL) receptor gene and its use in diagnosis. Lancet. 8436: 1003-1005.

79. Humphries S., King-Underwood L., Gudnason V., Seed M., Delattre S., Clavey V.,

80. Innerarity T.L., Pitas R.E., Mahley R.W. (1986) Lipoprotein-receptor interactions. Meth.

81. Enzymol. Eds. Albers J.J. et al. Academic Press. 129: 542-565.

82. Kass DH, Batzer MA, Deininger PL. (1995) A new restriction-site polymorphism in exon18 of the low density lipoprotein receptor (LDLR) gene. Hum. Genet. 95: 363-364.

83. Khachadurian A.K. (1964) The inheritance of essential familial hypercholesterolemia. Am.1. J. Med. 37: 402-407.

84. Kottler M, Lagarde JP, Dahan K, Zekraoui L, Raisonnier A. (1998) A new informative

85. Alw 26 I polymorphism in exon 10 of the human low densitylipoprotein receptor gene. Application to prenatal diagnosis. Hum. Mutat. 11 (6): 483.

86. Kotze M.J., Retief A.E., Brink P.A., Weich H.F.H. (1986) A DNA polymorphism in thehuman low-density lipoprotein receptor gene. S. Afr. Med. J. 70: 77-79.

87. Kotze M.J., Langenhoven E., Retief A.E. (1989a) Improved visualization of the BstEII

88. RFLP of the human LDL receptor gene by codigestion. S. Afr. Med. J. 23: 10067.

89. Kotze M.J., Langenhoven E., Retief A.E. (19896) Haplotypes identified by 10 DNArestriction fragment lenth polymorphisms at the human low density lipoprotein receptor gene locus. J.Med. Genet. 26: 255-259.

90. Kotze M.J., Langenhoven E., Dietzsch E., Retief A.E. (1987) A RFLP associated with thelow density lipoprotein receptor gene. Nucleic Acids Res. 15 (1): 376.

91. Kotze MJ, De Villiers WJS, Steyn K, Kriek JA, Marais AD, Langenhoven E, Herbert JS,

92. Graadt van Roggen JF, van der Westhuyzen DR, Coetzee GA. (1993) Phenotypic variation among familial hypercholesterolemics heterozygous for either one of two Afrikaner founder LDL receptor mutations. Arterioscler Thromb. 13: 1460-1468.

93. Koivisto U.-M., Turtola H., Aalto-Setala K., Top В., Frants R.R., Kovanen P.T., Syvanen

94. A.-C., Kontula. K. (1992) The familial hypercholesterolemia (FH) North Karelia mutation of the low density lipoprotein receptor gene deletes seven nucleotides of exon 6 and is common cause ofFH in Finland. J. Clin. Invest. 90: 219-228.

95. Kunkel L.M., Kirby D R., Boyer S.H., Borgaonkar D.S., Wachtel S.S., Miller O.J., Breg

96. R., Jones H.W., Rary J.M. (1977) Analyses of human Y-chromosome-specific reiterated

97. DNA in chromosome variants. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 1245-1249.

98. Leitersdorf E., Hobbs H.H. (1987) Human LDL receptor gene: two ApaLI RFLPs. Nucleic1. Acids Res. 15 (6): 2782.

99. Leitersdorf E., Hobbs H. (1988a) Human LDL receptor gene: Hinc II polymorphismdetected by gene amplification. Nucleic Acids Res. 16: 7215-7220.

100. Leitersdorf E., Hobbs H.H., Fourie A.M., Jacobs M.,van der Westhyuzen D R., Coetzee

101. G.A. (1988b) Deletion in the first cysteine-rich repeat of the low-density lipoprotein receptor impairs its transport but not lipoprotein binding in fibroblasts from subject with familial hypercholesteremia. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 85: 7912-7916.

102. Leitersdorf В., Chakravarti A., Hobbs H.H. (1989a) Polymorphic DNA haplotypes at the

103. L receptor locus. Amer. J. Hum. Genet. 44 (3): 409-421.

104. Leitersdorf E., van der Westhyuzen D.R., Coetzee G.A, Hobbs H.H. (1989b) Twocommon low density lipoprotein receptor gene mutations causing familial hypercholesterolemia in Afrikaners. J. Clin. Invest. 84: 954-961.

105. Leitresdorf E., Tobin E.J., Davignon J., Hobbs H.H. (1990) Common low-densitylipoprotein receptor mutations in the French Canadian population. J. Clin. Invest. 85: 1014-1023.

106. Leren TP, Solberg K, Rosby O, Rodningen OK, Tonstad S, Ose L, Berg K. (1992) A newpolymorphism in exon 11 of the LDL receptor gene in healthy people and in familial hypercholesterolemia subjects. Clin. Genet. 42 (5): 224-228.

107. Leren TP, Solberg K, Rodningen OK, Tonstad S, Ose L. (1994) Two founder mutations inthe LDL receptor gene in Norwegian familial hypercholes-terolemia subjects. Atherosclerosis. 111:175-182.

108. Lehrman M.A., Goldstein Y.L., Brown M.S., Russel D.W., Schneider W.J. (1985)1.ternalisation-defective LDL receptors produced by genes with nonsense and frameshifit mutations that truncate the cytoplasmic domain. Cell 41: 735-743.

109. Lombardi P., Sijbrands E.J., Kamerling S., Leuven J.A., Havekes L.M. (1997) The T705Imutation of the low density lipoprotein receptor gene (FH Paris-9) does not cause familial hypercholesterolemia. Hum. Genet. 99: 106-107.

110. Ma Y., Betard C., Roy M., Davignon J., Kessling A.M. (1989) Identification of a second " French Canadian" LDL receptor gene deletion and development of a rapid method to detect both deletions. Clin. Genet. 36: 219-228.

111. Mandelshtam M.Ju., Chakir Kh., Shevtsov S.P. et. al. (1998) Prevalence of Lithuanian mutation among St.Petersburg Jews with familial hypercholesterolemia. Hum. Mutat. 12: 255-258.

112. Mandelshtam M.Ju., Lipovetskyi B.M., Schwartzman A.L., Gaitskhoki V.S. (1993) A novel deletion in the low density lipoprotein receptor gene in a patient with familial hypercholesterolemia from Petersburg. Hum. Mutat. 2 (4): 256- 260.

113. MarkofF A., Savov A., Vladimirov V., Bogdanova N., Kremensky I., Ganav V. (1997) Ortimization of single-strand conformational polymorphism analysis in the presence of polyethylene glycol. Clin. Chem. 43: 30-33.

114. Mehta K.D., Chen W.J., Goldstein Y.L., Brown M.S. (1991) The low density lipoprotein receptor in Xenopus laevis: I. Five domains that resemble the human receptor. J. Biol. Chem. 266: 10406-10414.

115. Miener V., Landsberger D., Berkman N., Reshef A., Segal P., Seftel H.C., van der Westhyuzen D.R., Jeenah M.S., Coetzee G.A., Leitersdorf E. (1991) A common Lithuanian mutation causing familial hypercholesterolemia. Am. J. Hum. Genet. 49: 443449.

116. Moorjani S., Roy m., Gagne C., Davignon j, Brun D., Toussaint m., Lambert m., Campeau L., Blaichman S., Lupien P. (1989) Homozygous familial hypercholesterolemia among French Canadians in Quebec Province. Arteriosclerosis 9: 211-216.

117. Muller C. (1938) Xantomata, hypercholesterolemia, angina pectoris. Acta Med. Scand. 89: 75-84.

118. Mutt V. (1986) The Nobel Prize for physiology or medicine. In: «The Nobel Prize 1985»,

119. Stockholm, Almqvist & Wiksell Int., The Nobel Foundation, 23-24

120. Nissen H, Hansen AB, Jensen HK. (1995) A frequent Hhal polymorphism in intron 9 of the low density lipoprotein receptor gene detected by the denaturing gradient gel electrophoresis technique. Clin. Genet. 48 (4): 221-222

121. Orita M., Suzuki Y., Sekiya Т., and Hayashi K. (1990) Rapid sensitive detection of point mutation and DNA polymorphisms using the polimerase chain reaction. Genomics 5: 874879.

122. Peeters AV, Van Gaal LF, Kotze MJ (1995) A rare silent G to T mutation in exon 4 of the human low density lipoprotein receptor gene. Clin. Genet. 47(2): 101-102.

123. Pimstone S.N., Sun X-M., Souich C., Frohlich J.J.,' Hayden M.R., Soutar A.K. (1998) Phenotypic Variation in Heterozygous Familial Hypercholesterolemia. Arterioscler Thromb Vase Biol. 18: 309-315.

124. Reshef A., Nissen H., Triger L., Hensen T.S., Eliav O., Schurr D., Safadi R., Gare M., Leitersdorf E. (1996) Molecular genetics of familial hypercholesterolemia in Israel. Hum. Genet. 98: 581-586.

125. Russell D.W., Goldstein Y.L., Brown M.S. (1989) Different combinations of cystein-rich repeats mediate binding of low density lipoprotein receptor to two different proteins. J. Biol Chem. 264: 21682-21688.

126. Sakai J., Duncan E.A., Rawson R.B., Hua X., Brown M.S., Goldstein J.L. (1996) Sterol-regulated release of SREBP-2 from cell membranes requires two sequential cleavages? One within a transmembrane segment. Cell 85: 1037-1046.

127. Sanger FNicklen S., Coulson A.R. (1977) DNA sequencing with chain-terminating inhibitors. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74: 5463-5467.

128. Saint-Jore B, Loux N, Junien C, Boileau C. (1993) Two new polymorphisms in the coding sequence of the LDL receptor (LDLR) gene. Hum. Genet. 91(5): 511-512.

129. Schuster H, Stiefenhofer B, Wolfram G, Keller C, Humphries S, Huber A, Zollner N. (1989) Four DNA polymorphisms in the LDL-receptor gene and their use in diagnosis of familial hypercholesterolemia. Hum. Genet. 82 (1): 69-72.

130. Schuster H, Rauh G, Gerl C, Keller C, Wolfram G, Zollner N. (1991) Use of DNA haplotype analysis in diagnosis of familial hypercholesterolaemia in 31 German families. J. Med. Genet. 28 (12): 865-870.

131. Slack J. (1979) Inheritance of familial hypercholesterolemia. Atheroscler. Rev. 5, 35-66.

132. Soutar A.K. (1991) A polymorphism in exon 2 of the human LDL-receptor gene (LDLR). Nucleic Acids Res., 19 (15): 4314.

133. Smith J.R., Osborne T.F., Goldstein Y.L., Brown M.S. (1990) Identification of nucleotides responsible for enhancer activity of sterol regulatory element in iow-density lipoprotein receptor gene. Biol. Chem. 265: 2306-2310.

134. Steyn LT, Pretorius A, Brink PA, Bester AJ. (1987) RFLPs for the human LDL receptor gene (LDLR): BstEII. Nucleic Acids Res. 15 (11): 4702.

135. Sudhof T.C., Goldstein Y.L., Brown M.S., Russell D.W. (1985) The LDL receptor gene: a mosaic of exone shared with different proteine. Science, 228: 815-822.

136. Tatisheva Yu.A., Zakharova F.M. (2001) Study of the mutations causing familial hypercholesterolemia in St.-Petersburg. 10-th International Congress on Human Genetics, May, 15-19, 2001, Vena, Austria, p.278.

137. Taylor R, Jeenah M, Seed M, Humphries S. (1988) Four DNA polymorphisms in the LDL receptor gene: their genetic relationship and use in the study of variation at the LDLreceptor locus. J. Med. Genet. 25 (10): 653-659.

138. Varret M., Rabes J.-P., Collod-Beroud G., Junien C, Boileau C„ Beroud C. (1997) Software and database for the analysis of mutations in the human LDL receptor gene. Nucleic Acids Res. 25: 172-180.

139. Wang X., Briggs M.R., Hua X., Yomoyama C., Goldstein J.L., Brown M.S. (1993) Nuclear protein that binds sterol regulatory element of LDL receptor promoter: II. Purification and characterization. J. Biol. Chem. 268: 14497-14504.

140. Wang X., Sato R., Briggs M.R., Brown M.S., Hua X., Goldstein J.L. (1994) SREBP-1, a membrane-bound transcription factor released by sterol-regulated proteolysis. Cell 77: 5362.

141. Warnich L, Kotze MJ, Langenhoven E, Retief AE. (1992) Detection of a frequent polymorphism in exon 10 of the low-density lipoprotein receptor gene. Hum. Genet. 89 (3): 362.

142. Willnow Т.Е. (1999) The low-density lipoprotein receptor gene family: multiple roles in lipid metabolism. J. Mol Med. 77: 306-315.

143. Zee RY, Schrader AP, Robinson BG, Griffiths LR, Morris BJ. (1995) Association of HincII RFLP of low density lipoprotein receptor gene with obesity in essential hypertensives. Clin. Genet. Al (3): 118-121.

144. Zouhair F.S., Yurachek E.C. (1993) rapid fluorometric assay of LDL receptor activity by Dil-labeled LDL.y. Lipid Res. 34: 325-330.

145. Zuliani G, Hobbs HH. (1990) Dinucleotide repeat polymorphism at the 3' end of the LDL receptor gene. Nucleic Acids Res. 18 (14): 4300.

146. Yamakawa K, Okafuji T, Iwamura Y, Russell DW, Hamaguchi H. (1987) TaqI polymorphism in the human LDL-receptor gene. Nucl. Acid Res., 15 (18): 7639.

147. Yamamoto Т., Davis C.G., Brown M.S., Schneirder W.J., Casey M.L., Goldstein J.L., Russel D.W. (1984) The human LDL receptor: a cysteine-rich protein with multiple Alu sequences in its mRNA. Cell 39: 27-38.

148. Yamamoto Т., Bishop R.W., Brown M.S., Goldstein Y.L., Russel D.W. (1986) Deletion in cysteine-rich region of LDL receptor impairs transport to cell surface in WHHL rabbit. Science 232: 1230-1237.

149. Yokoyama C., Wang X., Briggs M.R., Admon A., Wu J., Hua X., Goldstein J.L., Brown M.S. (1993) SREBP-1, a basic helix-loop-helix leucine zipper protein that controls transcription of the LDL receptor gene. Cell 75: 187-197.