Исследование и стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Биляч, Ярослав иванович

• Биляч, Ярослав иванович
• кандидат фармацевтических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Биляч, Ярослав иванович

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИЕ СРЕДСТВА КОРРЕКЦИИ ФИЗИЧЕСКОЙ РАБОТОСПОСОБНОСТИ, РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ДЛЯ ПРИМЕНЕНИЯ В ПРАКТИКЕ, МЕТОДЫ ИХ АНАЛИЗА.

1.1 Характеристика работоспособности и процесса развития утомления.

1.2 Общая характеристика фармакологических средств для коррекции работоспособности.:.

1.3 Методы анализа биологически активных веществ экстракта левзеи.

1.4 Методы анализа глюкозамина сульфата и продуктов его деструкции.

1.5 Методы анализа кальция глицерофосфата и продуктов его деструкции.

1.6 Методы анализа калия оротата.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование и стандартизация лекарственного средства для повышения физической работоспособности»

Актуальность. Проблема повышения физической работоспособности и ускорения протекания восстановительных процессов после физических нагрузок всегда представляла большой интерес для медицинской науки.

В последние годы эта проблема не только не разрешается, но и усугубляется в связи с изменением характера человеческого труда, распространением психоэмоциональных стрессов; вредными воздействиями окружающей среды и интенсификацией производственной деятельности. Это в первую очередь касается лиц, занятых в тех сферах деятельности, где физическая работоспособность является неотъемлемым условием выполнения поставленных задач.

В связи с этим, в фармацевтической и медицинской науке во многих странах продолжаются поиски способов и средств, позволяющих обеспечить высокий уровень физической работоспособности и здоровья в современных условиях жизни. В настоящее время наряду с физическими и медицинскими процедурами для этой цели разрабатываются и внедряются в практику лекарственные средства и биологически активные добавки. Однако многие из них не могут найти широкого применения из-за того, что большинство из них относятся к так называемым "допингам" и запрещены к применению, так как обладают выраженными побочными эффектами. Кроме того, большинство из этих препаратов разработаны за рубежом и не находят применения в нашей стране.

В то же время существует возможность создания лекарственных средств, которые позволяют добиться нужного эффекта и не относятся к "допингу". Такие возможности открывают создание комбинированного лекарственного средства, содержащего нетоксичные, безвредные, некуммулирующие вещества, с достаточно мягким действием, без каких-либо опасностей развития привыкания, и особенно, пристрастия. 5

Ключевое положение в группе лекарственных средств (ЛС), которые не являются допингами и могут быть рекомендованы для повышения физической работоспособности, занимают нестероидные вещества растительного происхождения - представители так называемых фитоэкдизонов, выделяемых из корней левзеи софлоровидной.

Еще одним из ЛС является калия оротат, применяемый в целях профилактики нарушений со стороны миокарда при напряженных физических нагрузках. N

Определенный практический интерес в плане влияния на физическую работоспособность представляет ЛС - кальция глицерофосфат, проявляющий как общеукрепляющее и тонизирующее действие, так и усиливающий анаболические процессы. Включение глюкозамина сульфата в состав комбинированного лекарственного средства оправдано, так как физические нагрузки могут привести к функциональным перегрузкам, травмам и заболеваниям опорно-двигательного аппарата; в решении данной задачи хондропротекторные ЛС занимают ведущее место.

Есть предположение, что сочетание этих компонентов проявит синергизм, благодаря которому возможно достижение необходимого эффекта - повышения физической работоспособности (Р.Д. Сейфулла, 2000). Разработка отечественного комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности позволит в определенной степени решить многие задачи по профилактике и лечению заболеваний, вызванных физическими перегрузками в труде и спорте.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы является обоснование состава и норм качества многокомпонентного лекарственного средства для повышения физической работоспособности.

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

1. На основе изучения сведений по фармакологическому действию лекарственных средств (ЛС) и биологически активных добавок обосновать состав комбинированного лекарственного средства для повышения работоспособности.

2. Изучить специфическую активность предлагаемого ЛС.

3. Осуществить выбор основных критериев качества, необходимых для стандартизации предложенного ЛС.

4. Разработать методики идентификации компонентов ЛС.

5. Предложить методики количественного определения компонентов ЛС и провести их валидационную оценку.

6. Исследовать стабильность данного ЛС с целью обоснования сроков годности.

Научная новизна

На основе изучения ЛС и БАДов, применяемых для повышения физической работоспособности, предложен состав нового лекарственного средства, получившего условное название "Энергодарин". Показана целесообразность включения в состав предлагаемого средства экстракта левзеи, калия оротата, кальция глицерофосфата и глюкозамина сульфата.

На основе анализа известных ЛС данного спектра действия выбраны дозировки ингредиентов, входящих в предложенное лекарственное средство.

Проведено сравнительное фармакологическое изучение действия разрабатываемого ЛС с одной стороны, и результатов монотерапии экстрактом левзеи жидким, калия оротатом, кальция глицерофосфатом и

Анастаном" (БАД содержащего 20-гидроксиэкдистерона) - с другой.

Установлено, что новое комбинированное ЛС повышает физическую работоспособность и ее эффективность в 3 раза по сравнению с 7 монотерапией, компонентами входящими в состав "Энергодарина", что является подтверждением их синергитического действия (увеличивается время плавания животных в тесте "принудительного плавания"). ЛС "Энергодарин" обладает стресспротективной активностью и проявляет анаболическое действие (предупреждает гипертрофию надпочечников, приводит к нарастанию мышечной массы, сокращаются сроки наступления эффекта усиления физической работоспособности). В результате проведенных гематологических и биохимических исследований установлено, что долгосрочный прием ЛС не вызывает изменений в составе крови, препятствует развитию энергодефицита в мышцах животных в условиях физической нагрузки.

Изучены возможности использования различных физико-химических и химических методов для идентификации и количественного определения фитоэкдизонов левзеи сафлоровидной, калия оротата, кальция глицерофосфата, глюкозамина сульфата; проведен выбор методик, позволяющих определять указанные вещества при совместном присутствии; показана возможность их использования для стандартизации указанного лекарственного средства.

Обоснованы оптимальные условия для определения экстракта левзеи по экдистерону методом ТСХ. Доказана возможность использования спектрофотометрических методик для определения калия оротата (прямой спектрофотометрией), глюкозамина сульфата (по реакции Эльсона-Моргана). Установлена возможность анализа кальция глицерофосфата комплексонометрическим методом при совместном присутствии ингредиентов.

Проведено сравнение методик с использованием внешнего стандарта экдистерона и внутреннего - парацетамола для определения фитоэкдизонов в составе экстракта левзеи методом ВЭЖХ. Разработана методика и найдены оптимальные условия количественного определения фитоэкдизонов в ЛС с использованием внешнего стандарта; предлагаемая методика валидирована 8 по показателям: специфичность, линейность, воспроизводимость и правильность.

Показана возможность использования метода капиллярного электрофореза для качественного и количественного определения ионов калия и кальция в предлагаемом ЛС. Эта методика специфична, чувствительна и правильна.

Впервые изучена стабильность ингредиентов при совместном присутствии. Установлено, что первым деструкции подвергается глюкозамина сульфат. Предложена методика определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата (5-гидроксиметилфурфурола и родственных ему соединений) методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и предлагаемом ЛС гранулах "Энергодарин".

Практическая значимость исследований V

По результатам обоснования состава лекарственного средства для повышения физической работоспособности на кафедре технологии лекарств ГОУ ВПО «Пятигорской государственной фармацевтической академии» разработана технология гранул.

Разработанные методики качественного анализа и количественного определения всех ингредиентов, входящих в состав предложенных гранул, воспроизводимы и доступны для практического использования. Проведенная валидационная оценка показала, что при использовании методик количественного определения всех компонентов соблюдается линейность в области аналитических концентраций. Методики чувствительны, специфичны и правильны. Предложена методика количественного определения продуктов деструкции глюкозамина сульфата методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии, которая использовалась для установления сроков годности ЛС. Установлено, что 9 показатели качества разработанного средства сохраняются в течение двух лет естественного хранения. По результатам проведенных исследований разработан проект ФСП.

Внедрение результатов исследований в практику

Работа входит в состав федерального проекта: "Разработка инновационных ресурсосберегающих технологий и продуктов из нетрадиционных видов сырья" (государственный контракт №6470р/8833 от 11.01.2009).

Разработанные методики качественного и количественного анализа ингредиентов средства апробированы в Пятигорском Филиале ФГУЗ "Центр гигиены и эпидемиологии Ставропольского края" и в ГУЛ РО "Фармацевтический центр" г. Ростов-на-Дону.

Методика определения примеси 5-ГМФ методом мицеллярной электрокинетической капиллярной хроматографии в субстанции глюкозамина сульфата и в предлагаемом средстве апробированы в лаборатории ООО "Люмэкс-Центрум" г. Москва.

Положения, выдвигаемые на защиту:

Обоснование состава ЛС "Энергодарин";

Результаты фармакологических исследований, подтверждающие правильность выбора и соотношения компонентов в составе ЛС "Энергодарин";

Методики качественного и количественного анализа компонентов лекарственного средства "Энергодарин" и их валидационная оценка;

Количественный анализ фитоэкдизонов в экстракте левзеи жидком и лекарственном средстве "Энергодарин" методом ВЭЖХ с использованием внешнего стандарта - парацетамола;

Методика качественного и количественного анализа ионов калия и кальция в составе ЛС методом капиллярного электрофореза;

Методика количественного определения 5-гидрокси-метилфурфурола и родственных ему соединений в субстанции глюкозамина сульфата и ЛС "Энергодарин" методом электрокинетической мицеллярной хроматографии;

Результаты исследования стабильности предлагаемого ЛС и обоснование его сроков годности.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательской работы (НИР) ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава, а таюке в соответствии с соглашением о выполнении НИР между Федеральным агентством по здравоохранению и социальному развитию и ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (№06/1049).

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на региональных конференциях (Пятигорск, 2007 - 2009 гг.), школе-семинаре

Подготовка, управление инновационными научно-техническими проектами и способы коммерциализации научно-технической продукции» (Астрахань,

2008), на XVI Российском национальном конгрессе «ЧЕЛОВЕК И

ЛЕКАРСТВО» (Москва, 2009). Работа финансировалась Фондом содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере в рамках программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса»

11

У.М.Н.И.К. 2009»). Работа награждена дипломом участника "Салон инноваций и инвестиций 2009". По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе в журналах, рекомендованных ВАК, - 1 статья.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 150 страницах текста компьютерного набора и состоит из обзора литературы и 4 главы собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 188 источников, в том числе 53 иностранных; содержит 32 таблицы, 22 рисунка.

Сокращения и обозначения, используемые в диссертации

5-ГМФ - 5-Гидроксиметилфурфурол

АОА - Антиоксидантная активность

БАВ - Биологически активное вещество

БАД - Биологически активная добавка

В1Ш - Время принудительного плавания вэжх - Высокоэффективная жидкостная хроматография кэ - Капиллярный электрофорез

ЛС - Лекарственное средство мэкх - Мицеллярная электрокинетическая хроматография

ПОЛ - Перекисное окисление липидов тех - Тонкослойная хроматография

ФЭС - Фитоэкдистероиды

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Биляч, Ярослав иванович

Общие выводы

1. На основании анализа данных литературы обоснован состав комбинированного лекарственного средства, для повышения физической работоспособности, включающий экстракт левзеи, калия орота, кальция глицерофосфат и глюкозамина сульфат.

2. Новое комбинированное средство в дозе 450 мг/кг приводит к значительному повышению физической работоспособности в 2,5 раза, стресспротективной активности и проявлению анаболического действия по сравнению с препаратами сравнения.

3. Предложены качественные реакции для идентификации калия оротата, кальция глицерофосфата, глюкозамина сульфата в составе ЛС "Энергодарин". В экстракте левзеи предложено идентифицировать основной компонент - экдистерон методом ТСХ.

4. Теоретически обоснованы и экспериментально разработаны специфичные, надежные методики количественного определения ингредиентов предлагаемого лекарственного средства на основе химического и физико-химического методов. Количественное определение калия оротата и глюкозамина сульфата предложено проводить при помощи спектрофотометрии, кальция глицерофосфат — комплексонометрически. Наиболее эффективным методом количественного анализа фитоэкдизонов экстракта левзеи в составе лекарственного средства является метод ВЭЖХ с использованием внутреннего стандарта - парацетамола. Использование метода капиллярного электрофореза при качественном и количественном анализе калия оротата и кальция глицерофосфата позволяет проводить анализ при их совместном присутствии в одной пробе и уменьшить время

анализа. Все используемые методики валидны (специфичны, линейны, воспроизводимы и правильны).

5. Предложена методика определения допустимых примесей, 5-ГМФ и родственных ему соединений методом МЭКХ в субстанции

глюкозамина сульфата и предлагаемом лекарственном средстве, методика специфична, линейна и воспроизводима.

6. Проведено изучение стабильности компонентов в предлагаемом лекарственном средстве. Установлен срок его хранения в естественных условиях (2 года).

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Биляч, Ярослав иванович, 2009 год

1. Азизов, А.П. О механизме действия адаптогенов и комплексных препаратов на систему свертывания крови спортсменов /А.П. Азизов //Вест, спорт, медицины. - 1997. - №2. - С.8.

2. Азизов, А.П. Влияние настойки левзеи и леветона на гуморальный иммунитет спортсменов / А.П.Азизов, Р.Д. Сейфулла, А.В.Чубарова // Эксперим. и клинич. фармакология. -1997. - №6. - С. 47-48.

3. Азизов, А.П. Влияние элеутерококка, элтона, левзеи и леветона на систему свертывания крови при физической нагрузке у спортсменов /А.П. Азизов //Экперим. и клинич. фармакология. - 1997. - №5.- С. 58-60.

4. Алексеев, В.В. Методика определения работоспособности мелких животных: (материалы к макро- микроскопической анатомии) / В.В. Алексеев, В.И. Безъязычный // Сб. науч. тр. Харьковского гос. пед. инта. - Харьков, 1979. - Вып. 88. - С. 31-33.

5. Анализ лекарственных прописей, содержащих глюкозамина гидрохлорид и полисахариды / В.А. Компанцев и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (51; 1996; Пятигорск): материалы. - Пятигорск, 1996. - С.92.

6. Арзамасцев, А.П. Валидация аналитических методов / А.П. Арзамасцев, Н.П. Садчикова, Ю.Я. Харитонов // Фармация. - 2006. - Т. 55, №4. - С. 8-12.

7. Аронов, Г.Е. Иммунологическая реактивность при различных режимах физических нагрузок / Г.Е. Аронов, Н.И. Иванова - Киев: Здоровье, 1987.-84 с.

8. Ахрем, A.A. Экдистероиды: Химия и биологическая активность / A.A. Ахрем, В.В. Ковганко. - Минск: Наука и техника, 1989. - С.327.

9. Багмет, К.В. Исследование применения комплексов восстановительных средств при подготовке юных баскетболистов с большими тренировочными нагрузками: автореф. дис. канд. пед. наук:13.00.14 / Багмет Константин Владимирович. -М., 1996. - 24 с.

10. Богданова, Т.Б. Влияние сочетанного применения тонизирующего и гепатопротекторного фитосборов на физическую работоспособность спортсменов / Т.Б. Богданова, И.Р. Болданова // Теория и практика физической культуры. -2000. - №7. - С. 49-51.

11. Борисова. И.Г. Действие антиоксидантов на физическуюработоспособность и перекисное окисление липидов в организме / И.Г.129

12. Борисова, Р.Д. Сейфулла, А.И. Журавлев // Фармакология и токсикология. - 1989. - Т. 55, №4. - С. 89-92.

13. Брехман, И.И. Адаптогены растительного происхождения -фармакологические средства повышения работоспособности и сопротивляемости организма / И.И. Брехман // Фармакология, двиг. активности. - 1969. - Т. 55, №4. - С. 9-26.

14. Буланов, Ю.Б. Спортивная медицина / Ю.Б. Буланов. - М.: ГУПТО ТОТ, 2007.-317 с.

15. Вергейчик, E.H. Обнаружение продуктов деструкции D-глюкозамина гидрохлорида / E.H. Вергейчик, Д.В. Компанцев // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы. - Пятигорск, 1999.-С. 73.

16. Взаимосвязь антиоксидантной активности и физической работоспособности у спортсменов под влиянием комплексных адаптогенов растительного происхождения / Р.Д.Сейфулла и др. // Казанский мед. журн. - 1997. - №3. - С. 183-185.

17. Виру, А.А, Гормоны и спортивная работоспособность. / A.A. Виру, П.К. Кырге. - М.: Физкультура и спорт, 1983. - 158 с.

18. Влияние антиоксидантов Элтона и леветона на физическую работоспособность спортсменов / А.П. Азизов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1998. - Т.61, №1. - С. 60-62.

19. Влияние экдистерона на биосинтез белков и нуклеиновых кислот в органах мышей / И.Н.Тодоров и др. // Хим-фармац. журн. — 2000. -Т.34,№9. - С.3-5.

20. Волков, Н.И. Биологически активные пищевые добавки в специализированном питании спортсменов / Н.И. Волков, В.И. Олейников. - 3-е изд. - М.: ФиС: СпортАкадемПресс, 2005. - 79 с.

21. Волкова, Л.И. Биологическая активность оксиметилфурфурола / Л.И. Волкова // Хим.-фармац. журн. - 1991. - №5. - С.14 - 17.

22. Володин, В.В. Содержание 20-гидроксиэкдизона в различных экдистероид содержащих лекарственных препаратах / В.В. Володин, Н.П. Тимофеев, H.A. Колегова // Международное совещание по фитоэкдистероидам. - Сыктывкар, 1996. - С.138.

23. Володина, С.О. Экдистероидсодержащие растения: Ресурсы и биотехнологическое использование: автореф. дис. канд. биол. наук: 03.00.23 / Володина Светлана Олеговна. - Сыктывкар, 2006. - 20с.

24. ГОСТ 29032-91 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения оксиметилфурфурола. - Введ. 1991. - 17.06. - М.: Изд-во стандартов, 1991. - 9 с.

25. ГОСТ 7482-96 Глицерин. Правила приемки и методы испытаний. -Введ. 1996. - 19.08. - М.: Изд-во стандартов, 1996. - 37 с.

26. Губарева, Л.И. Экологический стресс / Л.И. Губарева. - СПб; Ставрополь: Лань; Ставропольсервисшкола, 2001. - 448 с.

27. Дегтярева, Е. А. Перспективы использования биологических активных препаратов в спортивной медицине / Е. А. Дегтярева. — М., 2000. - 59 с.

28. Действие экстрактов левзей сафлоровидной на биосинтез РНК и белков в органах мыши / И.Н. Тодоров и др. // Хим-фармац. журн. - 2000. -Т.34, №9. - С.24-29.

29. Дембо, А.Г. Врачебный контроль в спорте / А.Г. Дембо. - М.: Медицина, 1988.-288 с.

30. Дидур, М.Д. Недопинговые фармакологические средства спортивной медицины. Пособие для врачей спортивной медицины и студентов факультетов спортивной медицины. / М.Д. Дидур - СПб: СПбГМУ им. Акад. И.П.Павлова, 2002. - 44с.

31. Држевецкая, И. А. Тирокальцитониновая активность и уровень кальция в плазме при мышечной деятельности/ И.А. Држевецкая, H.H. Лиманский // Физиол. Журн. СССР. им. Сеченова - 1978. - Т. 66, №10. - С. 14981500.

32. Дубилей, П.В. Восстановление функциональных расстройств опорно-двигательного аппарата у спортсменов / П. В. Дубил ей, 3. В. Уразаева.I

33. Казань: Казанский ун-т, 1989. - С. 116-124.

34. Дубровский, В.И. Спортивная медицина: учеб. для студ. вузов.-М.:Владос, 1999.-480с.

35. Иванов, В.И. Питательные и стимулирующие свойства рапонтика сафлоровидного в силосованном и искусственно высушенном виде / В.И. Иванов // ВНИИ кормов: сб. науч. тр.- М., 1987. - Вып.37.- С. 165177.

36. Иванченко, В.П. Применение восстановительных средств в подготовке боксеров (юниоры) при высокой температуре внешней среды: автореф. дис. канд.пед.наук: 13.00.04/Иванченко Владимир Петрович - М., 1996. -22 с.

37. Клинико-экспериментальное обоснование применения новых природных адаптогенов по В.П.Филатову / Е.П. Сотникова и др.// Актуальные проблемы клинической фармакологии(2;1998 Винница): материалы.-Винница, 1998.- С. 128.

38. Количественное определение ингредиентов в многокомпонентных таблетках противоартрозного действия для ветеринарии / Д.В. Компанцев и др. // Аграрная наука. - 2007. - №10. - С. 29-31.

39. Комарова, Н.В. Практическое руководство по использованию систем капиллярного электрофореза «КАПЕЛЬ» / Н.В. Комарова, Я. С. Каменцев - СПб.: Веда, 2006. - 212с.

40. Компанцев, В.А. Аминогликаны. Методы получения, исследование и медицинское применение (Монография) / В.А. Компанцев, И.И. Самокиш // Хим.-фармац. пр-во. Обзор, информ. - М.: НИИСЭНТИ, 1994.-Вып. 6.-28 с.

41. Компанцева, Е.В. Глюкозамин, использование в медицине и ветеринарии, методы анализа / Е.В. Компанцева, Д.В. Компанцев. -Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2007. - 160 с.

42. Корж, А. А. Остеопороз: клиника, диагностика, профилактика и лечение А. А.Корж, Н. В. Дедух, С. Д. Шевченко // Харьков, мед. журн.— 1997.— №1.— С. 21-24.

43. Кузин, В.В. Система восстановления и повышения спортивной работоспособности. / В.В. Кузин, А.П. Лаптев - М., РГАФК, 1999. - 31 с.

44. Кузнецов, А.П. Определение посторонних примесей в суппозиториях, содержащих глюкозамина гидрохлорид и диклофенак /А. П. Кузнецов, Д.В. Компанцев, Е.В. Компанцева // Вопросы биологич. мед. и фармац. химии. - 2006. - №4. - С. 17 - 20.

45. Куракина, И.О. Экдистен - тонизирующее средство в таблетках по 0,005 г / И.О. Куракина, В.М. Булаев // Новые лекарственные препараты. -1990.-Вып. 6.- С. 16-18.

46. Курмуков, А.Г. Противовоспалительные свойства экдистерона/ А.Г. Курмуков, В.Н. Сыров // Мед. журн. Узбекистана. - 1988. - Вып. 10. -С.68-70.

47. Лаптев, А.П. Применение гигиенических и восстановительных средств для укрепления здоровья и повышения спортивной работоспособности / А. П. Лаптев. - М., 2004. - 40 с.

48. Лекарства и Б АД в спорте. Практическое руководство для спортивных врачей, тренеров и спортсменов / Р.Д. Сейфулла и др. — М.: Литтерра, 2003.—320 с.

49. Лекарственные средства: 4000 препаратов, свойства, применение, противопоказания. Справочник /под ред. М.А. Клюева. - М.; Гомель: РИД, 1995. -С.704.

50. Мешковский, А.П. Испытания стабильности и установление сроков годности лекарственных препаратов / А.П. Мешковский // Аптека. -2000.-№15.-С. 15.

51. Мирзаев, Ю.Р. Влияние фитоэкдистероидов на половую активность крыс-самцов / Ю.Р. Мирзаев, В.Н. Сыров // Докл. АН УзССР. - 1992. -Вып.З. - С.47-49.

52. Мирзоев, О. М. Применение восстановительных средств в спорте / О.М. Мирзоев. - М.: Спортакадемпресс, 2000. - 204 с.

53. Мохан, Р. Биохимия мышечной деятельности. / Р. Мохан, М. Глессон, П.Л. Гринхафф. - Киев: Олимп, лит., 2001. - 295 с.

54. ОСТ 91500.05.001-00. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения.- Введ.2000.-01.03.-М.: Изд-во стандартов, 2000.-36с. ^

55. Платонова, В.Н. Допинг и эргогенные средства в спорте / В.Н. Платонова-Киев: Олимп, лит., 2003. -576 с.

56. Подрушняк, Е. П. Остеопороз — проблема века / Е. П. Подрушняк.— Симферополь: Одиссей, 1997.— 108 с.

57. Португалов, С.Н. Сравнение анаболизирующего действия недопинговых препаратов растительного происхождения: экдистена, леветона и "Прайм плас" / С.Н. Португалов, В.В. Панюшкин, Т.Ф. Абрамова // Теория и практика физ. культуры. - 1996. - Т.9. - С.47-49.

58. Пути деструкции глюкозы (Обзор) / A.B. Титова и др. // Фармация. -1988. - Т. 37, №4. - С.84 - 88.

59. Разработка нормативной документации на новый лекарственный препарат - глюкозамина гидрохлорид / В.А. Компанцев и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 7 Рос. нац. конгр 10-14 апр. 2001 г. - М., 2000. - С. 611.

60. Разработка технологии и качественного анализа лекарственного средства «Спорт-АКТИВ» / Я.И Биляч и др. // Башкир, хим. журн. -2009. - Т. 16, № 3. - С.166-170.

61. Ратнер, А.Б. МОК и борьба с допингом в спорте на современном этапе / А.Б. Ратнер //Теория и практика физ. культуры. - 2001. - №7.- С. 9-12.

62. Розенблатб В.В. Утомление/ В.В. Розенблат // Руководство по физиологии труда. - М., 1983. - С.227-250.

63. Рудаков, А.Г. Особенности изучения и применения лекарственных средств в спортивной медицине: автореф. дис. д-ра. пед. наук: 14.00.33 / А.Г. Рудаков. - М., 1990 -- 38 с.

64. Руководство ICH «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1). Международная конференция по гармонизациитехнических требований к регистрации медицинских лекарственных средств // Фармация. - 2008. - №4. - С. 3-10.

65. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П.Фисенко.-М.; 2000. —378 с.i

66. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М., Медицина, 2005. -832 с.

67. Руководство Р.4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - Введ. 2003. — 30.06.-М., 2003.-С. 1-4.

68. Садек, П. Растворители для ВЭЖХ: пер. с англ. / П. Садек. - М.: БИНОМ. Лаб. знаний, 2006. - 704 с.

69. Сапрыкин, Л.В. Динамическое модифицирование в практике ВЭЖХ / В.Л. Сапрыкин // Химический анализ. - 2005. - №1. - С.20-36. Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.anchem.ru/chemanalysis/2005/020-036.asp. - Загл. с экрана.

70. Сборник методических рекомендаций по стандартизации лекарственных средств / Научный центр экспертизы средств мед. применения. - М.: Изд. дом Пеликан, 2006. - 392 с.

71. Сейфулла, Р.Д. Адаптогены и физическая работоспособность / Р.Д. Сейфулла - М.: ОК РФ, 1997. - 62 с.

72. Сейфулла, Р.Д. Спортивная фармакология / Р.Д. Сейфулла. - М.: Спорт-Фарма Пресс, 1999. - С.120.

73. Сейфулла, Р.Д. Спортивная фармакология. Справочник. / Р.Д.Сейфулла. - М.: Моск. правда, 1999. - 117 с.

74. Сейфулла, Р.Д. Фармакологическая коррекция факторов, лимитирующих работоспособность человека / Р.Д. Сейфулла // Эксперим. и клин, фармакология. - 1998. - №1.- С. 4-9.

75. Селочник, Л.И., Фотоэлектроколориметрическое определение концентрации кальция в плазме или сыворотке с применением ЭДТА и мурексида / Л.И. Селочник, А.И.Брискин, Е.Е. Антонова // Хим-фармац. журн. - 1978. - Т. 12, №10. - С. 138-140.

76. ЮЗ.Сернов, Л. Н. Элементы экспериментальной фармакологии. / Л. Н. Сернов, В. В. Гацура - М., 2000. - 352 с.

77. Система капиллярного электрофореза. Основа метода. Аппаратура. Примеры использования систем капиллярного электрофореза «Капель-103, -104, -105». - СПб: Петрополис, 2001. - 65с.

78. Скальный, A.B. Питание в спорте: макро- и микроэлементы / A.B. Скальный, З.Г. Орджоникидзе, А.Н. Катулин. - М.: Городец, 2005. - 143 с.фармацевтической продукции: сб. науч. тр.- Пятигорск, 2004.- Вып. 59.-С. 234-235.

79. Разработка нормативной документации на новый лекарственный препарат - глюкозамина гидрохлорид / В.А. Компанцев и др. // Человек и лекарство: тез. докл. 7 Рос. нац. конгр 10-14 апр. 2001 г. - М., 2000. - С. 611.

80. Разработка технологии и качественного анализа лекарственного средства «Спорт-АКТИВ» / Я.И Биляч и др. // Башкир, хим. журн. -2009. - Т. 16, № 3. - С. 166-170.

81. Ратнер, А.Б. МОК и борьба с допингом в спорте на современном этапе / А.Б. Ратнер //Теория и практика физ. культуры. - 2001. - №7.- С. 9-12.

82. Розенблатб В.В. Утомление/ В.В. Розенблат // Руководство по физиологии труда. - М., 1983. - С.227-250.

83. Рудаков, А.Г. Особенности изучения и применения лекарственных средств в спортивной медицине: автореф. дис. д-ра. пед. наук: 14.00.33 / А.Г. Рудаков. - М., 1990 - 38 с.

84. Руководство ICH «Валидация аналитических методик. Содержание и методология» Q2(R1). Международная конференция по гармонизациитехнических требований к регистрации медицинских лекарственных средств // Фармация. - 2008. - №4. - С. 3-10.

85. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П.Фисенко.-М.; 2000. -378 с.

86. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. Р.У. Хабриева. - 2-е изд., перераб. и доп. - М., Медицина, 2005. -832 с.

87. Руководство Р.4.1.1672-03 Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. - Введ. 2003. — 30.06.-М., 2003.-С. 1-4.

88. Садек, П. Растворители для ВЭЖХ: пер. с англ. / П. Садек. - М.: БИНОМ. Лаб. знаний, 2006. - 704 с.

89. Сапрыкин, Л.В. Динамическое модифицирование в практике ВЭЖХ / В.Л. Сапрыкин // Химический анализ. — 2005. - №1. - С.20-36. Электронный ресурс. - Режим доступа: http://www.anchem.ru/chemanalysis/2005/020-036.asp. - Загл. с экрана.

90. Сборник методических рекомендаций по стандартизации лекарственных средств / Научный центр экспертизы средств мед. применения. — М.: Изд. дом Пеликан, 2006. - 392 с.

91. Сейфулла, Р.Д. Адаптогены и физическая работоспособность / Р.Д. Сейфулла - М.: ОК РФ, 1997. - 62 с.

92. Сейфулла, Р.Д. Допинговый монстр / Р.Д.Сейфулла, И.А.Анкудинова

93. М.: ВИНИТИ; «Принт-экспресс», 1996. - 223 с.140

94. Сейфулла, Р.Д. Научно-методические рекомендации о применении новых комбинированных адаптогенов растительного происхождения в спортивной медицине: метод, рекомендации / Р.Д. Сейфулла. - М.: ВНИИФК, 1998. - С.28.

95. Сейфулла, Р.Д. Спортивная фармакология / Р.Д. Сейфулла. - М.: Спорт-Фарма Пресс, 1999. - С. 120.

96. Сейфулла, Р.Д. Спортивная фармакология. Справочник. / Р.Д.Сейфулла. - М.: Моск. правда, 1999. - 117 с.

97. Сейфулла, Р.Д. Фармакологическая коррекция факторов, лимитирующих работоспособность человека / Р.Д. Сейфулла // Эксперим. и клин, фармакология. - 1998. - №1.- С. 4-9.

98. Селочник, Л.И., Фотоэлектроколориметрическое определение концентрации кальция в плазме или сыворотке с применением ЭДТА и мурексида / Л.И. Селочник, А.И.Брискин, Е.Е. Антонова // Хим-фармац. журн. - 1978. - Т. 12, №10. - С. 138-140.

99. ЮЗ.Сернов, Л. Н. Элементы экспериментальной фармакологии. / Л. Н. Сернов, В. В. Гацура - М., 2000. - 352 с.

100. Система капиллярного электрофореза. Основа метода. Аппаратура. Примеры использования систем капиллярного электрофореза «Капель-103, -104, -105». - СПб: Петрополис, 2001. - 65с.

101. Скальный, A.B. Питание в спорте: макро- и микроэлементы / A.B. Скальный, З.Г. Орджоникидзе, А.Н. Катулин. - М.: Городец, 2005. - 143 с.

102. Юб.Смычков, В.Ф. Повышение устойчивости организма к неблагоприятным условиям под влиянием некоторых растительных препаратов / В.Ф. Смычков // Человек и лекарство: тез. докл. 3 Рос. нац. конгр 12-16 апр. 1996 г. - М., 1996. - С. 287

103. Соколов, С.Я. Фитотерапия и фитофармакология: Рук. для врачей / С.Я.Соколов. - М.: МИА, 2000. - С.976.

104. Сорока, Н.Ф. Остеопороз: практическое руководство для врачей / Н.Ф. Сорока. —Минск, 1997.— 96 с.

105. Сравнительное изучение анаболизирующего действия препаратов растительного происхожде-ния экдистена, леветона и "Прайм-Ппас" / P.M. Гаджиева и др. // Эксперим. и клинич. фармакология. - 1995. -№.5. -С.46-48.

106. Стандартизация сахарного колера по содержанию 5-гидрокси-метилфурфурола / И.Г. Зенкевич и др. // Хим.-фармац. журн. - 2002. -№1. - С. 50-53.

107. Сыров, В.Н. Влияние экдистерона на содержание бел-ка, гликогена и жира в печени, сердце и мышце белых крыс / В.Н. Сыров, М.И. Айзиков, А.Г. Курмуков // Док. АН УзССР. - 1975. - Вып. 8. - С.37-38.

108. Терешкина, О.И. Новые аспекты контроля и стандартизации растворов глюкозы для инъекций: автореф. дис.канд. фармац. наук: 15.00.02 / Терешкина О.И. - М., 1990. - 24 с.

109. Тимофеев Н.П., Анаболический эффект малых доз препаратов рапонтика / Н. П. Тимофеев, A.A. Ивановский // Международное совещание по фитоэкдистероидам. - Сыктывкар, 1996. - С.133.142

110. Тимофеев, Н. П. Разработка новых фармпрепаратов из левзеи сафлоровидной («Биоинфузин» и «БЦЛ.ФИТО») / Н.П. Тимофеев // Инновационные технологии и продукты, сб. тр. - Новосибирск, 2000. -Вып.4.- С.26-36.

111. Тимофеев, Н.П. Исследования по экдистероидам: Использование в медицине, Интернет-ресурсы, источники и биологическая активность / Н. П. Тимофеев // Биомедиц. Химия. - 2004. - Т.50 (Прил. 1). - С. 133152.

112. Тимофеев, Н.П. Фитоэкдистероиды: Фармакологическое использование и активность (Обзор). / Н. П. Тимофеев // Мед. науки. — 2005. - Т.4, №10. - С.26-66.

113. Трофименко, Э.М. Количественное определение фурфурола / Э.М. Трофименко, Н.И. Крикова // Актуальные вопросы фармации. — Ставрополь, 1974. - Вып. 2. - С. 176 - 177.

114. Фармакологическая коррекция утомления / Ю.Г. Бобков и др. -М.Медицина, 1984. - 208 с.

115. Фармакологическое изучение соединений различной химической структуры, повышающих неспецифическую активность организма / H.A.

116. Богачев и др. // Физиологически активные вещества - медицине: тез.докл. V Всесоюз. съезда фармакологов. - Ереван, 1982. - С. 46.

117. Фрумина, Н. С. Аналитическая химия кальция / Н. С. Фрумина, Е.С. Кручкова, С.П. Муштакова. - М.: Наука, 1974. - 252 с.

118. Химико-фармакологическое исследование корней левзеи саф-лоровидной / A.C. Саратиков и др. // Изв. Сиб. отд-ния АН СССР. Сер. биолог, наук. - 1970. -Т.2, №10. - С.88-95.

119. Хроматоспектрофотометрический метод определения экдистерона в растительном сырье / М.Р.Якубова и др. // Химия природ, соед. - 1978. - № 5. - С. 737-740.

120. Цыбизов, Г.Г. Гуморальная регуляция гомеостаза кальция и фосфата при физических нагрузках / Г.Г. Цыбизов // Физиол. Журнал СССР. -1979. - Т. 65, №10. - С. 1539-1542.

121. Шубик, В.М. Иммунитет и здоровье спортсмена / В.М. Шубик, М.Я.Левин. - М.: Физкультура и спорт, 1985. - 175 с.

122. Эпштейн, H.A. Оценка предела количественного определения с учетом требований к воспроизводимости результатов анализа / H.A. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. - 2002. - Т. 36, №11. - С. 52-54.

123. Эпштейн, H.A. Оценка пригодности (валидация) ВЭЖХ методик в фармацевтической анализе (обзор) / H.A. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. - 2004. - Т.38, № 4. - С 40-56.

124. Эпштейн, H.A. Тест фармацевтической совместимости лекарственных и вспомогательных веществ в разрабатываемых лекарственных формахзаданного состава / Н.А. Эпштейн // Хим.-фармац. журн. - 1995. - Т. 29, №3. - С. 51-53.

125. A colorimetric determination of orotic acid /Т. A. Adachi et al. // Vitaminology. - 1963. - Vol.9 - P. 217.

126. Antireactive properties of glucosamine sulfate / I. Setnikar et al. II Arzneim.-Forsch. Drug Res. - 1991. - Vol. 41, №2. - P. 32-34.

127. Automated determination of orotic acid, uracil and pseudouridine in urine by highperformance liquid chromatography with column switching / S Ohba et al. // J. Chromatogr. - 1991. - Vol.568 - P. 325-32.

128. Automated screening system for purine and pyrimidine metabolism disorders using high-performance liquid chromatography IS. Sumi et al. //J. Chromatogr. - 1995. - Vol.672 - P. 233.

129. Bathori, M. Phytoecdysteroids - from isolation to their effects on humans / M Bathori, Z.Pongracz // Curr Med Chem. - 2005. - Vol.12, N.2. - P. 153172.

130. Bauer, P.J. Affinity and stoechiometry of calcium binding by arsenazo III. / P.J. Bauer// Anal. Biochem. - 1981. - Vol.61 - P. 110.

131. Bellinger, J. F. Rapid column-chromatographic measurement of orotic acid / Bellinger J. F. 11 Clin. Chem. - 1971. - N. 17 - P. 1132.

132. Biasolotto, J. New look at anabolic diet / J.Biasolotto //Ironman. - 1997. -Vol.8 - P. 94

133. Brusilow, S.W. Simple method of measurement of orotic acid and orotidine in urine / S.W. Brusilow, E. Huaser //J. Chromatogr. - 1989. - Vol.493 - P. 388-91.

134. Capillary electrophoresis for detection of inherited disorders of purine and pyrimidine metabolism /T. Adam et al.// Clin. Chem. - 1999. - Vol.45 - P. 2086.

135. Capillary zone electrophoresis of orotic acid in urine with on-line isotachophoresis sample pretreatment and diode array detection /M. Dankovar et al. //J. Chromatogr. - 2001. - Vol.143 - P. 916

136. Chronic fatigue syndrom, fibromyalgia and chemical sensitivite overlapping disoders / G. Ziem et al. // Arch. Intern. Med. - 1995. - Vol.155. - P.1913

137. Colgan, M. Optimum sports nutrition / M. Colgan. - NewYork: Advanced Research Press, 1993. - 562 p.

138. Dawson-Hughes, B. Calcium supplementation and bone loss: a review of controlled clinical trial / B.Dawson-Hughes // Am.J.Clin.Nutr. - 1991. -Vol.54. - P.274-280.

139. Determination of 20-hydroxyecdysone content by thin-layer chromatography and micellar electrokinetic chromatography / M.Bathori et al. // J. Chromatogr. - 1998. - Vol.48, N.l/2. - P. 145-148.

140. Determination of orotic acid in urine / N. Seiler et al. // J. Chromatogr.B -1994. - Vol.87-P. 653

141. Determination of urinary orotic acid and uracil by capillary zone electrophoresis /C. Salerno et al. // J. Chromatogr. B. - 1999. - Vol.175 - P. 734.

142. Dinan, L. Chromatographic procedures for the isolation of plant steroids / L. Dinan, J.Harmatha, R.Lafont // J. Chromatogr. A. - 2001. - Vol.935, N.l/2. -P. 105-23.

143. Ecdysteroids from roots of Leuzea carthamoides / J.Pis et al. // Phytochemistry. - 1994. - Vol.37, N.3. - P. 707-711.

144. Effects of alkalosis on skeletal-muscle metabolism and performance during exercise / LL. Spriet et al. // Am. J. Physiol. - 1986. - Vol.251. - P. 833

145. Ekblad, F. Determination of chitin in fungi and mucorizal roots by an improuved HPLC analysis of glucosamine / F. Ekblad, N. Nasholm // Plant and Soil. - 1996. - Vol. 178, № 1. - P. 29-35.

146. Friedmann, H.C. Purification and properties of dihydroorotic dehydrogenase /H.C.Friedmann, B. Vennesland// J. Biol. Chem. - 1958. - Vol.233, N.12. - P. 1398.

147. Ghosh, D. Extraction and monitoring of phytoecdysteroids through HPLC./ D.Ghosh, K.S. Laddha // J. of Chromatog. Science. - 2006. - Vol.44, N.l. -P. 22-26.

148. Glasgow, A.M. A new method for measuring urinary orotic acid / A.M.Glasgow // Am. J. Clin. Pathol. - 1982. - Vol.77 - P. 452.

149. Harris, M.L. Conditions affecting the colorimetry of orotic acid and orotidine in urine /M.L. Harris, V.G. Oberholzer// Clin. Chem. - 1983. -Vol.26-P. 473.

150. Hayek-Ouassini, M. Separation of N- carbamoyl aspartate and L-dihydroorotate from serum by high-performance liquid chromatography with fluorimetric detection / M.Hayek-Ouassini, J.Henseling, M.Lffler //Chromatographia - 2002. Vol.55 P.411-5.

151. High-performance liquid chromatographic determination of orotic acid as its methyl derivative in human urine / A Fioravanti et al. // J. Chromatogr. B Biomed Sci Appl. - 1997. - Vol.703, N.l/2. - P. 263-6.

152. High-performance Liquid Chromatography Analysis of Four Leuzea carthamoides Flavonoids / Petr Stodulka et al. //J.of Chromatogr. Science. -2008. - Vol.46, N.2. - P. 162-164,

153. HPLC screening of plant extracts for ecdysteroids / Bathori M. et al. //J. of High Resolution Chromatogr. and Chromatogr. Communications. - 1986. -N.9. - P. 539-541.

154. In vivo chondroprotection and metabolic synergy of glucosamine and chondroitin sulfate / L. Lippiello ef al. 11 Clin. Orthop. - 2000. - №381. - P. 229-240.

155. Kolegova, N.A. Determination of ecdysteroids by reversed-phase highperformance liquid chromatography using eluent systems with electron-donor additives/ N.A Kolegova, V.V. Volodin // J. of Analyt. Chem. - 1999. -Vol.54, N. 12.-P. 1139-1141.

156. Kren, J. The green tea preparation "Maralan" from Leuzeae carthamoides // J.Kren, L.Opletal, M.Sovova. - Proceedings of the CADISO (Section A). -Pharmaceutical Faculty of KU, Hradec Kralove, 1992. - P. 112-113

157. Lafont, R.D. The Ecdisone Handbook. / R.D. Lafont, I.D. Wilson -Nottingam, 1992.- P.392

158. Mass spec-trometry for analysis of purine and pyrimidine compounds /K. Lemr // Adv. Exp. Med. Biol. - 2000. - Vol.486 - P. 399.

159. Matkovic, V. Calcium Balance During Human Growth: Evidence for Threshold Behavior / V. Matkovic, R.P. Heaney // Am. J. Clin. Nutr. - 1992. -Vol. 55 -P.992-996.

160. Micellar capillary electrophoresis of the ecdysteroids / P. Davis et al. //Chromatogr. - 1993. - Vol.37, N.l/2. - P. 37-42.

161. Muijselaar, P.G. Application of the retention index concept in micellar electrokinetic capillary chromatography / P.G. Muijselaar, H.A. Claessens, C.A. Cramers // Anal. chem. - 1994. - Vol. 66. - P.635-644.

162. Navratil, J.D. Lygand-exchenge chromatography of aminoshugars / J.D. Navratil, E. Murgia, H.F. Walton // Anal. Chem. - 1975. - Vol. 47. - P. 122 -125.

163. Phytoecdysteroid analysis by high-performance liquid chromatography-thermospray mass spectrometry/ M-P.Marco et al. // J. of Chromatogr. — 1993. - Vol.641 - P. 81-87.

164. Quantification of orotic acid in dried filter-paper urine samples by stable isotope dilution /MT. McCann ef al.// Clin. Chem.- 1995. - Vol.41. - P.739-43.

165. Role of calcium intake in modulating age-related increases in parathyroid function and bone resorption/ W.R. McKane et al. // J.Clin. Endocrinol. Metab.- 1996.- Vol. 81 - P.1699-1703.

166. Role ofpreparative rotation planar chromatography in the isolation of ecdysteroids /H. Kalasz //J. Liq. Chrom. - 2006. - Vol.29 - P. 2095-2109

167. Rosenbloom, F. M. An enzymatic spectrophotometric method for determination of orotic acid / F. M. Rosenbloom, J. E. Seegmiller //J. Lab. Clin. Med. - 1963. - Vol.63, N.12. - P. 492

168. Sheth Raj, D. Bone health in pediatric epilepsy / D.Sheth Raj // Epilepsy and Behavior. - 2004. -Vol.5, N2. - P. 30-35.

169. Spectrophotometric Determination of Glucosamine and Its Analogous Amino Sugars with o-Hydroxyhydroquinonephthalein and Palladium (II) / T.Yamaguchi et al. // Analytical sciences. - 2004. - Vol. 20. - P. 387.

170. Two-dimensional thin-layer chromatography for the screening of disorders of purine and pyrimidine metabolism /A.H. van Gennip et al. // Clin. Chim. Acta.-1978. -Vol.3 - P. 86

171. Wessely, S. The epidemiology of chronic fatigue syndrome / S.Wessely // Epid. Rev. - 1995. - Vol.17. - P.139-151.

172. Williams, M.H. Nutrition for fitness and sport / M.H.Williams. - Boston: WCB / McGraw -Hill, 1995. - 464 p.