Индукция гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Петракова, Ольга Сергеевна

• Петракова, Ольга Сергеевна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Петракова, Ольга Сергеевна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1.Клеточные механизмы регенерации печени

1.2.Клеточная терапия патологий печени с использованием донорских гепатоцитов

1.3.Альтернативные источники клеточного материала для клеточной терапии печени

1.3.1. Плюрипотентные клетки: ES и iPS

1.3.2. Постнатальные клетки

1.3.2.1. Стволовые и прогениторные клетки печени

1.3.2.2. ГСК и МСК костного мозга, пуповинной крови, жировой ткани

1.3.2.3. Клетки амниотической жидкости

1.3.2.4. Клетки энтодермального происхождения

1.3.3. Методика прямого перепрограммирования - использование генетических конструкций для перепрограммирования соматических клеток

1.4.Молекулярно-генетические механизмы гепатоцитарной дифференцировки

1.5.Использование деметилирующих агентов для дифференцировки клеток

1.6.Проблемы и перспективы развития клеточной терапии патологий печени

1.7.Строение поднижнечелюстной слюнной железы мыши

1.8.Культивирование клеток слюнной железы

1.9.Культивирование клеток в коллагеновом геле для анализа дифференцировочного потенциала клеток in vitro

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1.Материалы

2.1.1. Животные

2.1.2. Реактивы

2.2.Методы

2.2.1. Выделение и культивирование постнатальных клеток поднижнечелюстной слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши

2.2.2. Приготовление коллагенового геля, культивирование энтодермальных клеток в ЗЭ условиях, контракция коллагенового геля

2.2.3. Приготовление парафиновых срезов коллагенового геля

2.2.4. Иммуноцитохимия и окраска клеток на Б-актин

2.2.5. Определение пролиферативной активности клеток с помощью бром дезоксиуридина

2.2.6. Проточная цитометрия

2.2.7. Выделение тотальной РНК из клеток

2.2.8. ПЦР с обратной транскрипцией для клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши

2.2.9. Электрофорез в агарозном геле

2.2.10. Количественная ПЦР

2.2.11. Анализ профилей экспрессии генов с помощью глубокого секвенирования65

2.2.12. Анализ действия деметилирующих агентов на клетки слюнной железы мыши в сравнении с прогениторными клетками печени

2.2.13. Индукция гепатоцитарной дифференцировки для клеток слюнной железы

2.2.14. Определение уровня синтеза мочевины энтодермальными клетками

2.2.15. Статистическая обработка данных 68 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 69 3.1 .Морфологическая характеристика культур клеток слюнной железы мыши в 20 и

условиях культивирования в сравнении с прогениторными клетками печени

3.2.Определение пролиферативной активности клеток слюнной железы в сравнении с прогениторными клетками печени мыши в 2Т> и ЗЭ условиях

З.З.ОТ-ПЦР для культур клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши в 2D и 3D условиях культивирования

3.4.Иммуноцитохимическая характеристика клеток слюнной железы в сравнении с прогениторными клетками печени

3.5.Исследование транскриптомов культур клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши

3.6.Анализ клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши методом проточной цитометрии

3.7.Воздействие вальпроевой кислоты на клетки слюнной железы и прогениторные клетки печени мыши

3.8.Дифференцировка клеток слюнной железы мыши в гепатоцитарном направлении

3.9.Анализ гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши в 2D условиях

3.9.1. Анализ гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши методом иммуноцитохимии

3.9.2. Анализ гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши методом ПЦР-РВ

3.10. Анализ гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши в 3D условиях

3.10.1. Определение степени контракции коллагенового геля дифференцированными клетками слюнной железы мыши

3.10.2. Определение уровня синтеза мочевины в 3D условиях дифференцированными клетками слюнной железы мыши

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК с

ГСК - гемопоэтические стволовые клетки

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота кДНК - комплементарная дезоксирибонуклеиновая кислота КСЖ - клетки слюнной железы МСК - мезенхимные стволовые клетки ОТ - обратная транскриптаза ОТ-ПЦР - полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией ПКП - прогениторные клетки печени ПФА - параформальдегид ПЦР - полимеразная цепная реакция ПЦР-РВ - полимеразная цепная реакция с детекцией в реальном времени РНК - рибонуклеиновая кислота тотРНК - тотальная рибонуклеиновая кислота

ААТ - alpha-1-antitrypsin AFP - alpha-fetoprotein ALB - albumin

BMP - bone morphogenetic protein BrdU - 5-bromo-2'-deoxyuridine BSA - bovine serum albumin СВР - CREB-binding protein CD - cluster of differentiation Cdx2 - caudal type homeobox

C/EBP - CCAAT-enhancer-binding protein CK - cytokeratin

c-Kit - cell growth factor receptor Kit c-Met - cell met proto-oncogene tyrosine kinase

CYP - cytochrome P450

Cxcr4 - chemokine (C-X-C motif) receptor

4

DAPI - 4',6-diamidino-2-phenylindole Dlk-1 - delta-like 1 homolog DMEM - Dulbecco's Modified Eagle Medium

DMSO - dimethyl sulfoxide

DNAse - deoxyribonuclease

dNTP - deoxyribonucleotide triphosphate

DPBS - Dulbecco's Phosphate-Buffered

Saline

E-cadherin - endothelial cadherin

EGF - epidermal growth factor

EpCAM - epithelial cell adhesion molecule

ES - embryonic Stem cells

FBS - fetal bovine serum

FGF - fibroblast growth factor

Foxa - forkhead box A

G6P - glucose 6-phosphate

GAPDH - glyceraldehyde-3-phosphate

dehydrogenase

Gata4 - GATA binding protein

Gata6 - GATA binding protein 6 G-CSF - granulocyte - colony stimulating factor

GLP-1 - GIDl-like protein

GMP - Good Manufacturing Practice

GSC - goosecoid homeobox

HEPES - 4-(2-hydroxyethyl)-1 -

piperazineethanesulfonic acid

HepParl - hepatocyte paraffin-1

Hesxl - homeobox, ES cell expressed

Hex (Hhex) - hematopoietically expressed

homeobox

Hlf - hepatic leukemia factor HGF - hepatocyte growth factor Hnf - hepatocyte Nuclear Factor ICAM - intercellular adhesion molecule IL - interleukin

iPS - induced Pluripotent Stem cells

KGF - keratinocyte growth factor

ITS - insulin - transferrin - selenium

LIF - leukemia inhibitory factor

Mafa - maf musculoaponeurotic

fibrosarcoma oncogene homolog A

NEFH - neurofilament, heavy polypeptide

NGF - nerve growth factor

Ngn3 - neurogenin

OC-1 -onecut

OSM - oncostatin M

Otx2 - orthodenticle homeobox

PCR - polymerase chain reaction Pdxl - pancreatic and duodenal homeobox

PEPCK - phosphoenolpyruvate

carboxykinase

PI - propidium iodide

Ptfl a - prospero-related homeobox

RNA - ribonucleic acid

RNase - ribonuclease

Sea - stem cell antigen

Sox - SRY-related HMG-box

SP - side population cells

Sppl - secreted phosphoprotein

TAT - tyrosine aminotransferase

Tbx - T-box

TDO - tryptophan 2,3-dioxygenase

Thy-1 - thymocyte differentiation antigen-1

Tjp - tight junction protein

TGF - transforming growth factor

TNF - tumor necrosis factor

VE-cadherin - vascular endothelial

cadherin

VEGER2 - vascular endothelial growth factor receptor 2 VPA - valproic acid WNT - wingless-Int

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Индукция гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы.

Актуальной проблемой современной клеточной биологии является изучение пластичности клеточного фенотипа и возможностей дифференцировки клеток в пределах одного зародышевого листка.

Интерес клеточных биологов к in vitro дифференцировке клеток обусловлен тем, что данный процесс может помочь в решении ряда фундаментальных и прикладных задач, таких как установление гистогенетического родства различных клеточных типов, изучение регуляторных генных путей, in vitro моделирование болезней, тестирование лекарств, получение целевых клеток в достаточном для заместительной клеточной терапии количестве. Понимание молекулярно-генетических механизмов, которые задействованы при дифференцировке в те или иные типы клеток, поможет моделировать процесс перепрограммирования и избежать потенциальных негативных эффектов.

Основными подходами к осуществлению дифференцировки клеток in vitro является использование различных цитокинов и факторов роста, имитирующих процессы, происходящие в эмбриональном развитии или репарации ткани, методика прямого перепрограммирования с использованием специфических генетических конструкций, применение деметилирующих агентов, облегчающих перепрограммирование (Graf, Enver, 2009; Jopling et al., 2011).

Дифференцировка клеток в пределах одного зародышевого листка представляется наиболее перспективной в плане практического применения, так как клеткам одного зародышевого листка не требуется длительных дифференцировочных протоколов, процесс дифференцировки проходит быстрее и эффективнее. Что касается энтодермального зародышевого листка, то на данный момент накопилось достаточно много сведений о дифференцировке клеток печени и поджелудочной железы как in vitro, так и in vivo (Yi et al., 2012). Однако как печень, так и поджелудочная железа являются малодоступным источником

клеток для заместительной клеточной терапии. В то же время сложность терапии органов энтодермального происхождения и недостаток донорских органов обусловливают поиск новых альтернативных источников клеток.

По данным статистики в Российской Федерации количество пациентов с различными хроническими и острыми заболеваниями печени превосходит 200 ООО человек в год. Несмотря на достижения современной медицины, лечение хронических и острых патологий печени с использованием стандартных терапевтических приемов оказывается недостаточным. Смертность при патологиях определенной степени тяжести сохраняется на уровне 80-90%. В связи с недостаточной эффективностью и ограниченными возможностями традиционных методов лечения в настоящее время наряду с пересадкой печени и экстракорпоральной детоксикацией разрабатываются методики заместительной клеточной терапии. Несмотря на некоторые успехи, полученные в опытах на лабораторных животных, безопасный и достаточно эффективный подход еще не найден (Zaret, Grompe, 2008). Основной задачей является поиск легкодоступных клеток, способных с достаточной эффективностью дифференцироваться в гепатоцитарном направлении.

Поднижнечелюстная слюнная железа имеет смешанное эктодермально-энтодермальное происхождение (Okumura et al., 2003; Larsen et al., 2010). Между ацинусом и начальной частью гранулярного протока слюнной железы мыши располагается ниша, содержащая факультативные прогениторные клетки (Van Keymeulen et al., 2011; Okumura et al., 2012), имеющие энтодермальное происхождение (Tsuji, Nagai, 1993). Доступность клеточного материала слюнной железы делает этот источник клеток перспективным для дальнейшего изучения (Шубникова, Погодина, 2000; Baek et al., 2012). На данный момент накоплено достаточно сведений, касающихся культивирования in vitro клеток слюнной железы, выделенных у человека и различных животных. При культивировании in vitro клетки поднижнечелюстной слюнной железы активно пролиферируют и способны проходить значительное число пассажей (Гвазава с соавт., 2011).

Клетки слюнной железы человека и некоторых животных (мышь, крыса, свинья) в культуре позитивны по цитокератину 19 и, зачастую, по альфа-фетопротеину (Okumura et al., 2003; Hisatomi et al., 2004, Sato et al., 2007). При определенных условиях культивирования клетки приобретают способность синтезировать глюкагон, альбумин или инсулин. Клетки слюнной железы выполняют в организме не только экзокринную, но и эндокринную функции. Эндокринная функция слюнных желез обеспечивается синтезом целого ряда биологически активных веществ (инсулина, фактора роста нервов, фактора роста эпителия, тимоциттрансформирующего фактора и др.) (Нечаева, Бродский, 1973; Бабаева, Шубникова, 1979), что также может давать вклад в репарацию дефектов.

Таким образом, клетки поднижнечелюстной слюнной железы являются легко доступным источником энтодермальных эпителиальных клеток во взрослом организме. Однако на данный момент отсутствуют подробные сведения об экспрессии ключевых регуляторных генов в клетках слюнной железы и молекулярно-генетических механизмах, ответственных за дифференцировку этих клеток, не разработаны оптимальные дифференцировочные протоколы.

Все изложенное выше определило цель и задачи исследования.

Цель работы:

Изучить способность протоковых клеток поднижнечелюстной слюнной железы мыши к дифференцировке в гепатоцитарном направлении in vitro для исследования фенотипической пластичности клеток в пределах энтодермального зародышевого листка.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методы культивирования клеток поднижнечелюстной слюнной железы и прогениторных клеток печени мыши и провести сравнительную характеристику культуры клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени.

2. Провести сравнительный анализ культур клеток слюнной железы и прогениторных клеток печени по экспрессии ключевых для гепатоцитарной

дифференцировки регуляторных факторов и маркеров методами ПЦР-РВ и анализом профилей экспрессии генов глубоким секвенированием в масштабах целого транскриптома.

3. Разработать программу дифференцировки культуры клеток слюнной железы мыши в гепатоцитарном направлении. Проанализировать степень гепатоцитарной дифференцировки клеток слюнной железы мыши методами ПЦР-РВ и иммуноцитохимии, а также определить функциональную активность полученных клеток в сравнении с прогениторными клетками печени в 3D условиях культивирования.

4. Изучить влияние деметилирующих агентов на экспрессию ключевых для гепатоцитарной дифференцировки регуляторных генов и маркеров. Проанализировать влияние деметилирующих агентов на гепатоцитарную дифференцировку клеток слюнной железы.

Научная новизна работы.

Впервые поведен сравнительный анализ экспрессии регуляторных генов и маркеров культуры клеток поднижнечелюстной слюнной железы и печени мыши, детально исследована экспрессия генов, характерных для протоковых клеток слюнной железы, проанализировано около 29000 мРНК транскриптов. Впервые обнаружена экспрессия маркера адгезии эпителиальных клеток ЕрСАМ в клетках слюнной железы.

Показано, что клетки поднижнечелюстной слюнной железы имеют значительное сходство с другими типами энтодермальных клеток, экспрессируют ряд маркеров прогениторных клеток (ЕрСАМ, CD90, CD 133, Sca-1, c-Kit), а также маркеры, характерные для клеток печени ALB, AFP, СК19 и c-Met. Культура клеток поднижнечелюстной слюнной железы экспрессирует мРНК ранних маркеров энтодермы Hnf-Sa и Sox9.

После дифференцировки клетки слюнной железы, подобно гепатоцитам, приобретают способность к синтезу мочевины. Вальпроевая кислота, являющаяся

деметилирующим агентом, способна увеличить специфичность и эффективность гепатоцитарной дифференцировки клеток поднижнечелюстной слюнной железы.

Практическая значимость.

Результаты, полученные в данном исследовании, могут быть использованы для оптимизации протоколов дифференцировки энтодермальных клеток из предшественников, для выяснения гистогенетического родства энтодермальных клеток и для уточнения их происхождения. Полученные результаты делают возможным разработку принципиально новых методов получения энтодермальных клеток для регенеративной медицины.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Постнатальные клетки поднижнечелюстной слюнной железы мыши являются близкими по своему происхождению с клетками печени и поджелудочной железы и, таким образом, обладают значительным потенциалом к дифференцировке в пределах энтодермального зародышевого листка.

2. Дифференцировка клеток слюнной железы в гепатоцитарном направлении позволяет получить клетки, способные к восполнению некоторых функций гепатоцитов.

3. Деметилирующие агенты способны облегчать перепрограммирование клеток и увеличивать эффективность дифференцировочных протоколов.

Апробация диссертации.

Материалы диссертации доложены и обсуждены на:

1. Конференции молодых ученых ИБР РАН, 13-17 декабря 2011 г., Москва. Петракова О.С., Черниогло Е.С., Васильев A.B., Терских В.В. Изучение возможностей трансдифференцировки клеток энтодермы. Онтогенез, 2012, 43(4), 242-243.

2. IV Всероссийской научной школе-конференции «Стволовые клетки и регенеративная медицина». МГУ им. М.В. Ломоносова, ФФМ, Москва, 24 октября 2011 г. Васильев A.B., Роговая О.С., Давыдова Д.А., Петракова О.С., Терских В.В. Феномен пластичности стволовых клеток.

3. III Конференции «Биология стволовых клеток: фундаментальные аспекты», ИБР РАН, Москва, 7 июня 2011 г. Васильев A.B., Роговая О.С., Петракова О.С., Давыдова Д.А., Киселева Е.В., Гвазава И.Г., Дашинимаев Э.Б. Пластичность стволовых клеток - границы и возможности. Сборник тезисов конференции, 2011, 26-28

4. Конференции молодых ученых ИБР РАН, 16-17 декабря 2010 г., Москва. Петракова О.С., Черниогло Е.С., Васильев A.B. Сравнительная характеристика энтодермальных клеток в условиях in vitro. Онтогенез, 2011, 42(5), 329.

Работа выполнена в лаборатории проблем клеточной пролиферации Федерального государственного бюджетного учреждения науки «Института биологии развития имени Н.К. Кольцова» Российской академии наук.

Работа поддержана грантом РФФИ (проект 11-04-12061-офи-М-2011).

По теме диссертации опубликованы 2 статьи, в которых Петракова О.С. является первым автором. Обе статьи опубликованы в журнале, рекомендованном экспертным советом ВАК по биологии для опубликования результатов исследований по кандидатским и докторским диссертациям. Две статьи приняты к печати, приняты положительные решения о выдаче двух патентов РФ.

По материалам диссертационной работы опубликованы следующие статьи:

1. Петракова О.С., Черниогло Е.С., Терских В.В., Калистратова E.H., Васильев A.B. (2012). Использование клеточных технологий в лечении патологий печени. Acta Naturae, 3(14), 81-96.

2. Петракова О.С., Ашапкин В.В., Воротеляк Е.А., Брагин Е.Ю., Штратникова В.Ю., Черниогло Е.С., Суханов Ю.В., Терских В.В., Васильев A.B. (2012). Влияние ЗО-условий культивирования на дифференцировку энтодермальных клеток. Acta Naturae, 4(15), 48-58.

Приняты к печати статьи:

1. Petrakova O.S., Terskikh V.V., Chernioglo E.S., Vorotelyak E.A., Ashapkin V.V., Bragin E.Y., Shtratnikova V.Y., Gvazava I.G., Sukhanov Y.V.,

Vasiliev A.V. (2013). Salivary gland cells as candidates for cell-based therapy of liver disorders. Comparative transcriptomic analysis of salivary gland and liver cells. Cellular Reprogramming.

2. Петракова O.C., Гвазава И.Г., Ашапкин B.B., Штратникова В.Ю., Терских В.В., Суханов Ю.В., Васильев A.B. (2013). Влияние вальпроевой кислоты на фенотипическую пластичность клеток слюнной железы. Доклады Академии Наук.

Приняты положительные решения о выдаче патентов:

1. Положительное решение о выдаче патента заявки на полезную модель №2012158224/15 (091712) от 01.04.2013 г. «Клеточный имплантат для лечения заболеваний печени и поджелудочной железы». Петракова О.С., Гвазава И.Г., Васильев A.B., Терских В.В., Суханов Ю.В.

2. Положительное решение о выдаче патента заявки на изобретение №2012140913/10 (065980) от 13.05.2013 г. «Способ получения клеток для заместительной клеточной терапии патологий печени». Петракова О.С., Кирпичников М.П., Ашапкин В.В., Суханов Ю.В., Васильев A.B., Терских В.В., Супруненко Е.А.

Подана заявка на патент: 1. Заявка на изобретение № 2012147531/10 (076318) «Клеточный продукт для лечения и коррекции печеночной недостаточности» от 08.11.2012. Петракова О.С., Васильев A.B., Терских В.В. Суханов Ю. В.

Объём и структура диссертации.

Диссертационная работа изложена на 145 страницах машинописного текста и состоит из введения, 3 глав (обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение), заключения, выводов и списка литературы из 195 источников (12 отечественных и 183 зарубежных авторов). Работа иллюстрирована 23 рисунками и 10 таблицами.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Клеточные механизмы регенерации печени

Печень обладает чрезвычайно высокими способностями к восстановлению даже после резекции большей ее части. Эти свойства обусловлены наличием сложной регенерационной системы (рис. 1), основными компонентами которой являются: способность дифференцированных гепатоцитов к пролиферации и продукции зрелых гепатоцитов, а также способность к дифференцировке в холангиоциты (М1с11а1орои1о8 ег а1, 2005); регенерация из тканевого резерва стволовых клеток; репарация кроветворными клетками посредством слияния миелоидных клеток с поврежденными гепатоцитами и/или дифференцировкой мезенхимных стволовых клеток костного мозга в гепатоцитоподобные клетки (Урываева, 2009; Сош§Наго ег ей., 2010).

^транедифференцнровк^ I

Рис. 1. Основные пути клеточной регенерации постнатальной печени (Урываева, 2009;

Сош§Наго ег а1, 2010). Схема гипотетична.

\

самообновление

Гепатоциты являются дифференцированными клетками с разной плоидностью. Во взрослой печени гепатоциты находятся в основном в состоянии

покоя (фаза СО клеточного цикла). При возникновении необходимости в регенерации, гепатоциты начинают в слабой степени дедифференцироваться, пролиферировать и воспроизводить дифференцированные гепатоциты. Более того, после повреждения клеток желчных протоков в печени крысы, гепатоциты проявляли некоторую фенотипическую пластичность и были способны к дифференцировке в холангиоциты (М1сИа1орои1о8 ег а1., 2005). Показано также, что в период постнатального роста популяция гепатоцитов увеличивается без участия стволовых клеток (БаЬеуа, БЬайт^:, 2003). В эмбриональном и раннем постнатальном периоде гепатоциты делятся обычным митозом, затем возникает процесс митотической полиплоидизации, в результате которого не только увеличивается число гепатоцитов, но и возрастает их плоидность. В первом цикле после репликации ДНК не происходит цитотомии, в результате чего возникает двуядерный гепатоцит. В следующем митотическом цикле после удвоения ДНК деление ядер происходит синхронно, хромосомы объединяются в одну митотическую пластинку и возникают две одноядерные тетраплоидные клетки. Далее происходит чередование этих двух циклов с постепенно возрастающей степенью плоидности гепатоцитов (Урываева, 1979). Для обеспечения постнатального роста печени изначально диплоидные гепатоциты претерпевают всего 5-6 полиплоидизирующих митозов. Однако, при необходимости массовой регенерации (например, после резекции, при обширных токсических или инфекционных воздействиях и др.), митозы без цитокинеза временно исключаются, и деление клеток происходит по стандартному пути. Это предохраняет клетки печени от излишне высокой полиплоидизации. Основными факторами, регулирующими пролиферацию гепатоцитов при регенерации, являются 1Ь-6, ТЫР-а, секретируемые кроветворными клетками и клетками Купфера, НОБ, секретируемый звездчатыми клетками. Эти факторы инициируют переход гепатоцитов из в0 в в1 стадию. ТСР-)3 подавляет вступление гепатоцитов в митоз после завершении регенерации. Для репликации и поддержания жизнедеятельности гепатоцитов важны факторы роста: НвБ, УЕОБ,

FGF1, FGF2, секретируемые эндотелиальными клетками (Roskams, 2006; Atta, 2010). Основные молекулярные механизмы, обеспечивающие пролиферацию гепатоцитов, отображены на Рисунке 2.

TNF-a [

С-

"Л

Клетки Купфера

Гепатоцит

Выживание и пролиферация

Звездчатые клетки

Синусоидальная эндотелиальная клетка

Рис. 2. Молекулярные механизмы поддержания популяции гепатоцитов и инициации их пролиферации (Atta, 2010).

Стволовые клетки печени играют значительную роль в процессе регенерации в случаях, когда популяция гепатоцитов не способна восстановить поврежденную печень (при резекции критической части органа, обширных токсических, инфекционных и др. повреждениях). В постнатальной печени существует ряд стволовых клеток, иерархические взаимоотношения которых до сих пор обсуждаются (М1сЬа1орои1о8 ег а1., 2007). Основными предшественниками гепатоцитов и холангиоцитов являются овальные клетки. Обычно этим термином обозначают популяцию клеток, обладающих бипотентным потенциалом

дифференцировки, имеющих небольшие размеры (около 10 мкм), высокое ядерно-цитоплазматическое отношение. Предположительно овальные клетки происходят из каналов Геринга, которые, по мнению некоторых авторов, целиком состоят из стволовых клеток (Thorgeirsson et al., 2004). Овальные клетки экспрессируют альбумин, альфа-фетопротеин, цитокератин 19, специфический поверхностный маркер OV6 (А6 у мыши), эмбриональный маркер Delta-like/Pref-1 (Dlk-1), характерный также для гепатобластов (Jensen et al, 2004). Помимо этого, овальные клетки экспрессируют маркеры стволовых клеток: c-Kit, Sca-1, нестин, CD90 (Thy-1). По всей видимости, популяция данных клеток является гетерогенной и может содержать клетки разного происхождения. Часть клеток несет маркеры CD45, c-Kit, CD90, альбумин. Возможно, эти клетки являются кроветворными стволовыми клетками, проникающими в печень из циркулирующей крови (Corcelle et al., 2006).

В целом популяция истинно овальных клеток, экспрессирующая маркеры OV6 и цитокератин 19, является мало дифференцированной популяцией прогениторных клеток печени. Предположительно во взрослой печени имеется компартмент менее дифференцированных клеток, являющихся изначальными стволовыми клетками постнатальной печени.

В одной из работ была получена популяция стволовых клеток, экспрессирующих маркер адгезии эпителиальных клеток ЕрСАМ (Schmelzer et al., 2007). Данные клетки являются предшественниками гепатобластов в эмбриональной печени, в постнатальной печени они локализуются в каналах Геринга. Клетки были названы гепатическими стволовыми клетками ЕрСАМ+ (hHpSCs). Гепатические клетки экспрессируют также NCAM, c-Kit, CD 133/1, CD44H, цитокератин 19, являются слабо позитивными по альбумину. Данные клетки не экспрессируют альфа-фетопротеин, CD45, маркеры зрелых гепатоцитов (цитохромы Р450, молекулы межклеточной адгезии ICAM 1, трансферрин).

Эмбриональный период:

/'"ГЪпатическая^ стволовая

JKMTftgL ЕрСАМ, NCAM, c-Kit, CD133/1, CD44H, СК19, ALB+/-. Claud in 3, 7, Hedgehog

I

Генатобласт

/■ iiiTifiiaTiiig »г ibtth .m-nHfniiiiTit

Dlk-1, RTIA-OX18, 1С AM-1, AFP, ALB,

CKI7, CK19

\

Эмбриональный гепатоцит

ALB.CKli CYP P450 3A13,' G6P,

Эмбриональный : холангиоцит '

^s^c^jg^ttai^^i'^^^^ • г-"-'-'-***

CK7, CK9, С Kl'), CYPp450 7Al

c-iviei. 1-ЛЯ11 ! Постнатальный период: 1

1 ^ Гепатическая " ^ стволовая J клетка ЕрСАМ, NCAM, c-Kit, CD133/1. CD44H, CKI9, ALB+/-, Claud in 3, 7, Hedgehog

> ^____i _T ^ _ Овальные j f клетки J ^ f

Гепатоцит

ALB.CK18, CYP P450 3AI3, G6P, c-Met, l-AAT

Dlk-1, OV-6, CK19, c-Kit, Sca-1. Thy-1, AFP, ALB

Регенерация:

Холангиоцит

CK7, CK9, CK 19, CYPP450 7A1

Гепатоцит

'Холангиоцит

ALB, CK18. CYPP450 ЗА 13, G6P, с-Met, l-AAT

CK7, CK9, CK 19, CYPP450 7A1

Рис. 3. Основные типы клеток печени (Урываева,

При индукции

дифференцировки in vitro клетки приобретали

способность к синтезу альфа-фетопротеина и ICAM 1. При

трансплантации гепатических клеток

мышам NOD/SCID

наблюдалась экспрессия белков, характерных для зрелых гепатоцитов

(альбумин, трансферрин). Авторы предположили, что данные клетки являются стволовыми клетками эмбриональной и постнатальной печени и, возможно, могут быть предшественниками овальных клеток

(Schmelzer et al., 2007; Schmelzer, Reid, 2009). В целом, основные типы клеток печени отображены на Рисунке 3.

2009; Zaret, 2008; Behbahan

et al., 2011). Схема гипотетична.

Стволовые клетки костного мозга также могут вносить вклад в регенерацию печени. Как известно, печень является кроветворным органом в эмбриональном и раннем постнатальном периоде. Во взрослом состоянии часть популяции овальных клеток печени представлена кроветворными клетками, позитивными по CD34, CD45, CD133, и при некоторых патологических процессах печень может стать органом экстрамедуллярного гемопоэза.

Показано, что через 6 месяцев после трансплантации костного мозга от самцов летально облученным самкам мыши, 1-2% гепатоцитов несли метку Y-хромосомы. Данные гепатоциты экспрессировали альбумин и могли быть как диплоидными, так и полиплоидными (Theise et al., 2000). При исследовании биопсии печени шести пациенток, получивших трансплантацию кроветворных клеток из периферической крови доноров-мужчин, Y-хромосома выявлялась среди гепатоцитов с частотой от 0 до 7% (Korbling et al., 2002).

Было сделано предположение, что стволовые кроветворные клетки обладают способностью к дифференцировке в гепатоцитарном направлении, однако в ряде работ было показано, что кроветворные клетки способны сливаться с гепатоцитами реципиента, предупреждая их гибель и стимулируя регенерацию (Wang et al., 2003). Показано также, что с гепатоцитами сливаются клетки миелоцитарной линии, гранулоциты и моноциты-макрофаги (Camargo et al., 2004). Относительный вклад клеточной дифференцировки и клеточного слияния в процесс репарации печени стволовыми кроветворными клетками на данный момент обсуждается. Вероятно, в организме существуют оба эти процесса.

1.2. Клеточная терапия патологий печени с использованием донорских гепатоцитов

Методика трансплантации гепатоцитов может помочь стабилизировать состояние пациентов, ожидающих трансплантацию печени. Как известно, наиболее эффективный метод терапии некоторых особо тяжелых патологий печени включает трансплантацию донорской печени или ее части. Однако

существенный недостаток донорских органов удлиняет период ожидания донорской печени. В связи с этим, трансплантация выделенных из донорской печени гепатоцитов становится перспективным направлением клеточной терапии патологий печени (Fitzpatrick et al., 2009). К преимуществам данного метода относят возможность использования как только что выделенных клеток, так и клеток после длительного криохранения. Донорские клетки могут компенсировать патологии, обусловленные генетическими нарушениями, а также служить векторами для генной терапии. Трансплантация гепатоцитов менее инвазивная процедура и практически не несет рисков отторжения. Кроме того, при трансплантации гепатоцитов нет необходимости удалять печень пациента, что может привести к регенерации собственного органа со временем, например, в случае острой печеночной недостаточности.

Методика трансплантации гепатоцитов на данный момент включает ряд стандартных процедур, разработанных по требованиям GMP (Pareja et al., 2010). Источником гепатоцитов может быть донорская печень, не подходящая для трансплантации из-за жировой дистрофии, занимающей более 40-50% органа, затяжной ишемии, механического повреждения донорской печени, разрывов капсулы, не подходящей группы крови, либо повреждения кровеносных сосудов и желчных протоков (Bilir et al., 2000; Muraca et al., 2002; Alexandrova et al., 2005). В редких случаях для трансплантации может быть использована печень плода (Habibullah et al., 1994). Источником клеток может быть печень от доноров с остановкой сердца, печень с атеросклерозом или фиброзом. Стандартная процедура выделения гепатоцитов включает перфузию печени, ферментативную обработку для разрушения межклеточного вещества, промывку полученной клеточной суспензии. Жизнеспособность выделенных гепатоцитов обычно составляет около 70-90% с выходом 1-17x106 клеток из 1 г ткани (для клинического применения рекомендуется использовать гепатоциты с жизнеспособностью не менее 60%). Затем полученные клетки охлаждают до +4°С и как можно скорее ресуспендируют в растворе для инфузии для

непосредственного введения, либо в растворе для заморозки в случае последующего криохранения (Donato et al., 2005; Gomez-Lechon et al., 2008). Метаболические характеристики выделенных гепатоцитов проверяют по активности цитохромов Р450 (CYP1A2, CYP2A6, CYP3A4, CYP2C9 и CYP2E1) и по способности к синтезу мочевины (Donato et al., 2008).

Трансплантацию гепатоцитов, как правило, проводят через портальную вену, селезеночную вену или внутрибрюшинную трубку. При введении в брюшную полость, поджелудочную железу либо непосредственно в паренхиму печени наблюдается худшая выживаемость введенных клеток. Наилучшим способом трансплантации считается введение через портальную вену, однако при осуществлении данной процедуры требуется контролировать давление в портальной вене во избежание ее блокировки (Baccarini et al., 2005; Sokal, 2006). Введение гепатоцитов в селезенку чаще применяют при хронических заболеваниях печени, когда фиброз печени препятствует приживлению вводимых клеток. Необходимое для трансплантации количество клеток зависит от природы

о

патологии и составляет около 5-10% от теоретической массы печени (2-4x10 клеток на 1 кг веса тела), однако введенное количество клеток за одну процедуру не должно превышать 1% от количества гепатоцитов пациента. Печень взрослого человека содержит около 2,8х10п гепатоцитов, таким образом, за одну трансплантацию рекомендуется вводить 2-4x109 донорских клеток (Selden et al., 2004). По некоторым наблюдениям, для терапии хронических заболеваний количество клеток может быть меньше. Для терапии наследственных патологий напротив, необходимо увеличение числа трансплантируемых клеток. Устойчивый терапевтический эффект достигается в течение 4-8 недель после трансплантации и поддерживается 6-9 месяцев.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Петракова, Ольга Сергеевна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Бабаева А.Г., Шубникова Е.А. (1979). Структура, функция и адаптивный рост слюнных желез. М.: Изд-во МГУ, 192.

2. Воротеляк Е.А., Леонова О.Г., Шинин В.В., Васильев A.B., Терских В.В. (1999). Рост эпидермальных кератиноцитов человека на коллагеновом геле. Доклады Академии Наук, 369(5), 695-697.

3. Гвазава И.Г., Васильев A.B., Балан О.В., Терских В.В. (2011). Клетки подчелюстной слюнной железы мыши в культуре in vitro. Цитология, 53(2), 129134.

4. Гумерова A.A., Шафигуллина А.К., Трондин A.A., Газизов И.М., Андреева Д.И., Калигин М.С., Ризванов A.A., Киясов А.П. (2011). Звёздчатые клетки печени стимулируют дифференцировку мезенхимальных стволовых клеток костного мозга крысы в гепатоциты in vitro. Клеточная трансплантология и тканевая инженерия, VI(4), 1-10.

5. Давыдова Д.А., Воротеляк Е.А., Смирнова Ю.А., Зиновьева Р.Д., Романов Ю.А., Кабаева Н.В., Терских В.В., Васильев A.B. (2009). Характеристика фенотипа клеток из амниотической жидкости человека. Acta Naturae, 2, 112-119.

6. Давыдова Д.А., Воротеляк Е.А., Брагина Е.Е., Терских В.В., Васильев A.B. (2011). Культивирование стволовых клеток амниотической жидкости человека в трехмерном коллагеновом матриксе. Цитология, 53(4), 325-331.

7. Давыдова Д.А. (2010). Стволовые клетки в амниотической жидкости человека. Известия РАН. Сер. биол., 5, 517-526.

8. Нечаева Н.В., Бродский В.Я. (1973). Кинетика синтеза и выделения белка в ритмически работающих клетках околоушной слюнной железы. Цитология, 15(1), 52-59.

9. Урываева И.В. (1979). Полиплоидизирующие митозы и биологический смысл полиплоидии в клетках печени. Цитология, 21, 1427-1437.

10. Урываева И.В. (2009). Стволовые клетки в регенерации печени. М: Изд-во Медицина. Биология стволовых клеток и клеточные технологии, 2, 211252.

11. Шинин В.В., Черная О.Г., Терских В.В. (2002). Пролиферация первичных кератиноцитов человека в процессе цистогенеза в культуре. Онтогенез, 33 (3), 176-181.

12. Шубникова Е.А., Погодина J1.C. (2000). Компенсаторная функция слюнных подчелюстных желез при диабете и возможность ее стимуляции изопротеренолом. Онтогенез, 6, 476-480.

13. Agarwal S., Holton K.L., Lanza R. (2008). Efficient differentiation of functional hepatocytes from human embryonic stem cells. Stem Cells, 26, 1117-1127.

14. Alexandrova K., Griesel C., Barthold M., Heuft H.G., Ott M., Winkler M., Schrem H., Manns M.P., Bredehorn Т., Net M., Vidal M.M., Kafert-Kasting S., Arseniev L. (2005). Large-scale isolation of human hepatocytes for therapeutic application. Cell Transplant., 14, 845-853.

15. Allis C.D., Berger S.L., Cote J., Dent S., Jenuwien Т., Kouzarides Т., Pillus L., Reinberg D., Shi Y., Shiekhattar R., Shilatifard A., Workman J., Zhang Y. (2007). New nomenclature for chromatin-modifying enzymes. Cell, 131(4), 633-636.

16. Amano O., Mizobe K., Bando Y., Sakiyama K. (2012). Anatomy and histology of rodent and human major salivary glands. Acta Histochem. Cytochem., 45(5), 241-250.

17. Atta H.M. (2010). Gene therapy for liver regeneration: Experimental studies and prospects for clinical trials. World J. Gastroenterol., 16(32), 4019-4030.

18. Aurich I., Mueller L.P., Aurich H., Luetzkendorf J., Tisljar K., Dollinger M.M., Schormann W., Walldorf J., Hengstler J.G., Fleig W.E., Christ B. (2007). Functional integration of hepatocytes derived from human mesenchymal stem cells into mouse livers. Gut, 56, 405-415.

19. Baccarini U., Adani G.L., Sanna A., Avellini C., Sainz-Barriga M., Lorenzin D., Montanaro D., Gasparini D., Risaliti A., Donini A., Bresadola F. (2005).

Portal vein trombosis after intraportal hepatocytes transplantation in a liver transplant recipient. Transpl Int., 18, 750-754.

20. Baek H, Noh Y.H., Lee J.H., Yeon S.I, Jeong J., Kwon H. (2012). Autonomous isolation, long-term culture and differentiation potential of adult salivary gland-derived stem/progenitor cells. J. Tissue Eng. Regen. Med., DOI: 10.1002/term.l572

21. Behbahan I.S, Duan Y, Lam A, Khoobyari S, Ma X, Ahuja T.P, Zern M.A. (2011). New Approaches in the Differentiation of Human Embryonic Stem Cells and Induced Pluripotent Stem Cells toward Hepatocytes. Stem Cell Rev. and Rep., 7, 748-759.

22. Bilir B.M, Guinette D, Karrer F, Kumpe D.A, Krysl J, Stephens J, McGavran L, Ostrowska A, Durham J. (2000). Hepatocyte transplantation in acute liver failure. Liver Transpl., 6, 32-40.

23. Brulport M, Schormann W, Bauer A, Brulport M, Schormann W, Bauer A, Hermes M, Eisner C, Hammersen F.J, Beerheide W, Spitkovsky D, Hàrtig W, Nussler A, Horn L.C, Edelmann J, Pelz-Ackermann O, Petersen J, Kamprad M, Mach M, Lupp A, Zulewski H, Hengstler J.G. (2007). Fate of extrahepatic human stem and precursor cells after transplantation into mouse livers. Hepatology, 46, 861870.

24. Cai J, Zhao Y, Liu Y, Ye F, Song Z, Qin H, Meng S, Chen Y, Zhou R, Song X, Guo Y, Ding M, Deng H. (2007). Directed differentiation of human embryonic stem cells into functional hepatic cells. Hepatology, 45, 1229-1239.

25. Camargo F.D, Finegold M, Goodell M.A. (2004). Hematopoietic myelomonocytic cells are the major source of hepatocyte fusion partners. J. Clin. Invest., 113(9), 1266-1270.

26. Chamberlain J, Yamagami T, Colletti E, Theise N.D, Desai J, Frias A, Pixley J, Zanjani E.D, Porada C.D, Almeida-Porada G. (2007). Efficient generation of human hepatocytes by the intrahepatic delivery of clonal human mesenchymal stem cells in fetal sheep. Hepatology, 46, 1935-1945.

27. Chang L.Z., Chang T.M. (2006) Coencapsulation of hepatocytes and bone marrow cells: in vitro and in vivo studies. Biotechnol. Annu. Rev., 12, 137-151.

28. Chermnykh E.S., Vorotelyak E.A., Gnedeva K.Y., Moldaver M.V., Yegorov Y.E., Vasiliev A.V., Terskikh V.V. (2010). Dermal papilla cells induce keratinocyte tubulogenesis in culture. Histochem. Cell Biol., 133, 567-576.

29. Conigliaro A., Brenner D.A., Kisseleva T. (2010). Hepatic progenitors for liver disease: current position. Stem Cells and Cloning: Advances and Applications, 3, 39-47.

30. Corcelle V., Stieger B., Gjinovci A., Wollheim C.B., Gauthier B.R. (2006). Characterization of two distinct liver progenitor cell subpopulations of hematopoietic and hepatic origins. Exp. Cell Res., 312(15), 2826-2836.

31. Dabeva M.D., Hwang S.G., Vasa S.R., Hurston E., Novikoff P.M., Hixson D.C., Gupta S., Shafritz D.A. (1997). Differentiation of pancreatic epithelial progenitor cells into hepatocytes following transplantation into rat liver. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 94(14), 7356-7361.

32. Dabeva M.D., Shafritz D.A. (2003). Hepatic stem cells and liver repopulation. Semin. Liver Dis., 23(4), 349-362.

33. Dagher I., Boudechiche L., Branger J., Coulomb-Lhermine A., Parouchev A., Sentilhes L., Lin T., Groyer-Picard M.T., Vons C., Hadchouel M., Pariente D., Andreoletti M., Franco D., Weber A. (2006). Efficient hepatocyte engraftment in a nonhuman primate model after partial portal vein embolization. Transplantation, 82, 1067-1073.

34. Dannenberg L.O., Edenberg H.J. (2006). Epigenetics of gene expression in human hepatoma cells: expression profiling the response to inhibition of DNA methylation and histone deacetylation. BMC Genomics, 7, 181.

35. Delo D.M., De Coppi P., Bartsch G.Jr., Atala A. (2006). Amniotic Fluid and Placental Stem Cells. Methods in Enzymology, 419, 426-438.

36. De Kock J., Vanhaecke T., Rogiers V., Snykers S. (2008). Chromatin remodelling, a novel strategy to expedite the hepatic differentiation of adult bone marrow stem cells in vitro. AATEX, 14, 605-611.

37. Denny P.C., Denny P.A. (1999). Dynamics of parenchymal cell division, differentiation, and apoptosis in the young adult female mouse submandibular gland. AnatRec., 254(3), 408-417.

38. Dhawan A., Mitry R.R., Hughes R.D., Lehec S., Terry C., Bansal S., Arya R., Wade J.J., Verma A., Heaton N.D., Rela M., Mieli-Vergani G. (2004). Hepatocyte transplantation for inherited factor VII deficiency. Transplantation, 78, 1812-1814.

39. Di Bonzo L.V., Ferrero I., Cravanzola C., Mareschi K., Rustichell D., Novo E., Sanavio F., Cannito S., Zamara E., Bertero M., Davit A., Francica S., Novelli F., Colombatto S., Fagioli F., Parola M. (2008). Human mesenchymal stem cells as a two-edged sword in hepatic regenerative medicine: engraftment and hepatocyte differentiation versus profibrogenic potential. Gut, 57, 223-231.

40. Donato M.T., Serralta A., Jimenez N., Perez G., Castell J.V., Mir J., Gômez-Lechôn M.J. (2005). Liver grafts preserved in Celsior solution as source of hepatocytes for drug metabolism studies: Comparison with surgical liver biopsies. Drug Metab. Dispos., 33, 108-114.

41. Donato M.T., Lahoz A., Montera S., Bonora A., Pareja E., Mir J., Castell J.V., Gômez-Lechôn M.J. (2008). A functional assessment of the quality of human hepatocyte preparations for cell transplantation. Cell Transplantation, 17, 1211-1219.

42. Dong X.J., Zhang G.R., Zhou Q.J., Pan R.L., Chen Y., Xiang L.X., Shao J.Z. (2009). Direct hepatic differentiation of mouse embryonic stem cells induced by valproic acid and cytokines. World J. Gastroenterol., 15(41), 5165-5175.

43. Dong X., Pan R., Zhang H., Yang C., Shao J., Xiang L. (2013). Modification of histone acetylation facilitates hepatic differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells. PLoS One, DOI: 10.1371/journal.pone.0063405.

44. Drukker M., Katchman H., Katz G., Even-Tov Friedman S., Shezen E., Hornstein E., Mandelboim O., Reisner Y., Benvenisty N. (2006). Human embryonic

stem cells and their differentiated derivatives are less susceptible to immune rejection than adult cells. Stem Cells, 24, 221-229.

45. Eggenschwiler R, Loya K, Sgodda M, André F, Cantz T. (2011). Hepatic differentiation of murine disease-specific induced pluripotent stem cells allows disease modelling in vitro. Stem Cells Int., DOI: 10.4061/2011/924782.

46. Emanuele S, Lauricella M, Carlisi D, Vassallo B, D'Anneo A, Di Fazio P, Vento R, Tesoriere G. (2007). S AHA induces apoptosis in hepatoma cells and synergistically interacts with the proteasome inhibitor Bortezomib. Apoptosis, 12, 13271338.

47. Farooq M, Sulochana K.N, Pan X, To J, Sheng D, Gong Z, Ge R. (2008). Histone deacetylase 3 (hdac3) is specifically required for liver development in zebrafish. Dev. Biol, 317(1), 336-353.

48. Fitzpatrick E, Mitry R.R, Dhawan A. (2009). Human hepatocyte transplantation: state of the art. Blackwell Publishing Ltd Journal of Internal Medicine, 266, 339-357.

49. Gaia S, Smedile A, Omede P, Olivero A, Sanavio F, Balzola F, Ottobrelli A, Abate M.L, Marzano A, Rizzetto M, Tarella C. (2006). Feasibility and safety of G-CSF administration to induce bone marrow-derived cells mobilization in patients with end stage liver disease. J. Hepatol., 45, 13-19.

50. Glozak M.A, Seto E. (2007). Histone deacetylases and cancer. Oncogene, 26(37), 5420-5432.

51. Gomez-Lechon M.J, Lahoz A, Jimenez N, Bonora A, Castell J.V, Donato M.T. (2008). Evaluation of drug-metabolising and functional competence of human hepatocytes incubatedunder hypothermia in different media for clinical infusion. Cell Transplantation, 17, 887-897.

52. Gordon M.Y, Levicar N, Pai M, Bachellier P, Dimarakis I, Al-Allaf F, M'Hamdi H, Thalji T, Welsh J.P, Marley S.B, Davies J, Dazzi F, Marelli-Berg F, Tait P, Playford R, Jiao L, Jensen S, Nicholls J.P, Ayav A, Nohandani M, Farzaneh F, Gaken J, Dodge R, Alison M, Apperley J.F, Lechler R, Habib N.A. (2006).

Characterization and clinical application of human CD34 + stem / progenitor cell populations mobilized into the blood by granulocyte colonystimulating factor. Stem Cells; 24, 1822-1830.

53. Graf T., Enver T. (2009). Forcing cells to change lineages. Nature, 462(7273), 587-594.

54. Háárá O., Koivisto T., Miettinen P.J. (2009). EGF-receptor regulates salivary gland branching morphogenesis by supporting proliferation and maturation of epithelial cells and survival of mesenchymal cells. Differentiation, 77(3), 298-306.

55. Habibullah C.M., Syed I.H., Qamar A., Taher-Uz Z. (1994). Human fetal hepatocyte transplantation in patients with fulminant hepatic failure. Transplantation, 58, 951.

56. Hay D.C., Fletcher J., Payne C., Terrace J.D., Gallagher R.C., Snoeys J., Black J.R., Wojtacha D., Samuel K., Hannoun Z., Pryde A., Filippi C., Currie I.S., Forbes S.J., Ross J.A., Newsome P.N., Iredale J.P. (2008a). Highly efficient differentiation of hESCs to functional hepatic endoderm requires Activin A and Wnt3a signaling. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 105(34), 12301-12306.

57. Hay D.C., Zhao D., Fletcher J., Hewitt Z.A., McLean D., Urruticoechea-Uriguen A., Black J.R., Elcombe C., Ross J.A., Wolf R., Cui W. (2008b). Efficient differentiation of hepatocytes from human embryonic stem cells exhibiting markers recapitulating liver development in vivo. Stem Cells, 26, 894-902.

58. He Z.P., Tan W.Q., Tang Y.F., Zhang H.J., Feng M.F. (2004). Activation, isolation, identification and in vitro proliferation of oval cells from adult rat livers. Cell Prolif., 37(2), 177-187.

59. Henkens T., Vinken M., Lukaszuk A., Tourwer D., Vanhaecke T., Rogiers V. (2008). Differential effects of hydroxamate histone deacetylase inhibitors on cellular functionality and gap junctions in primary cultures of mitogen-stimulated hepatocytes. Toxicol. Lett., 178, 37-43.

60. Hick A.C., van Eyll J.M., Cordi S., Forez C., Passante L., Kohara H., Nagasawa T., Vanderhaeghen P., Courtoy P.J., Rousseau G.G., Lemaigre F.P., Pierreux

C.E. (2009). Mechanism of primitive duct formation in the pancreas and submandibular glands: a role for SDF-1. BMC Dev. Biol, DOI: 10.1186/1471-213X-9-66.

61. Hisatomi Y, Okumura K, Nakamura K, Matsumoto S, Satoh A, Nagano K, Yamamoto T, Endo F. (2004). Flow Cytometric Isolation of Endodermal Progenitors From Mouse Salivary Gland Differentiate Into Hepatic and Pancreatic Lineages. Hepatology, 39(3), 667-675.

62. Horslen S.P, McCowan T.C, Goertzen T.C, Warkentin P.I, Cai H.B, Strom S.C, Fox I.J. (2003). Isolated hepatocyte transplantation in an infant with a severe urea cycle disorder. Pediatrics, 111, 1262-1267.

63. Horslen S.P, Fox I.J. (2004). Hepatocyte transplantation. Transplantation, 77, 1481-1486.

64. Houlihan D.D, Newsome P.N. (2008). Critical review of clinical trials of bone marrow stem cells in liver disease. Gastroenterology, 135, 438-450.

65. Huang P, He Z, Ji S, Sun H, Xiang D, Liu C, Hu Y, Wang X, Hui L. (2011). Induction of functional hepatocyte-like cells from mouse fibroblasts by defined factors. Nature, 475, 386-389.

66. Hussain S.Z, Strom S.C, Kirby M.R, Burns S, Langemeijer S, Ueda T, Hsieh M, Tisdale J.F. (2005). Side Population Cells Derived from Adult Human Liver Generate Hepatocyte-like Cells In vitro. DigDis Sci., 50(10), 1755-1763.

67. Hwang S, Hong H.N, Kim H.S, Park S.R, Won Y.J, Choi S.T, Choi D, Lee S.G. (2012). Hepatogenic differentiation of mesenchymal stem cells in a rat model of thioacetamide-induced liver cirrhosis. Cell Biol Int., 36(3), 279-288.

68. Ianez R.F, Buim M.E, Coutinho-Camillo C.M, Schultz R, Soares F.A, Lourenco S.V. (2010). Human salivary gland morphogenesis: myoepithelial cell maturation assessed by immunohistochemical markers. Histopathology, 57, 410-417.

69. Ikari T, Hiraki A, Seki K, Sugiura T, Matsumoto K, Shirasuna K. (2003). Involvement of hepatocyte growth factor in branching morphogenesis of murine salivary gland. Dev. Dyn., 228(2), 173-184.

70. Inamura M., Kawabata K., Takayama K., Tashiro K., Sakurai F., Katayama K., Toyoda M., Akutsu H., Miyagawa Y., Okita H., Kiyokawa N., Umezawa A., Hayakawa T., Fume M.K., Mizuguchi H. (2011). Efficient Generation of Hepatoblasts From Human ES Cells and iPS Cells by Transient Overexpression of Homeobox Gene HEX. Molecular Therapy, 19(2), 400-407.

71. Jang Y.Y., Collector M.I., Baylin S.B., Diehl A.M., Sharkis S.J. (2004). Hematopoietic stem cells convert into liver cells within days without fusion. Nat. Cell Biol., 6, 532-539.

72. Jensen C.H., Jauho E.I., Santoni-Rugiu E., Holmskov U., Teisner B., Tygstrup N., Bisgaard H.C. (2004). Transit-amplifying ductular (oval) cells and their hepatocytic progeny are characterized by a novel and distinctive expression of delta-like protein/preadipocyte factor 1/fetal antigen 1 .Am. J. Pathol., 164(4), 1347-1359.

73. Jopling C., Boue S., Belmonte J.C.I. (2011). Dedifferentiation, transdifferentiation and reprogramming: Three routes to regeneration. Nature Reviews Molecular Cell Biology, 12(2), 79-89.

74. Joraku A., Sullivan C.A., Yoo J., Atala A. (2007). In-vitro reconstitution of three-dimensional human salivary gland tissue structures. Differentiation, 75(4), 318324.

75. Katsumoto K., Kume S. (2011). Endoderm and mesoderm reciprocal signaling mediated by CXCL12 and CXCR4 regulates the migration of angioblasts and establishes the pancreatic fate. Development, 138(10), 1947-1955.

76. Khan A.A., Parveen N., Mahaboob V.S., Rajendraprasad A., Ravindraprakash H.R., Venkateswarlu J., Rao P., Pande G., Narusu M.L., Khaja M.N., Pramila R., Habeeb A., Habibullah C.M. (2008). Treatment of Crigler-Najjar syndrome type 1 by hepatic progenitor cell transplantation: a simple procedure for management of hyperbilirubinemia. Transplant. Proc., 40, 1148-1150.

77. Khan A.A., Parveen N., Mahaboob V.S., Rajendraprasad A., Ravindraprakash H.R., Venkateswarlu J., Rao S.G., Narusu M.L., Khaja M.N., Pramila R., Habeeb A., Habibullah C.M. (2008). Safety and efficacy of autologous bone marrow

stem cell transplantation through hepatic artery for the treatment of chronic liver failure: a preliminary study. Transplant Proc., 40(4), 1140-1144.

78. Kheolamai P, Dickson A.J. (2009). Liver-enriched transcription factors are critical for the expression of hepatocyte marker genes in mES-derived hepatocyte-lineage cells. BMC Molecular Biology, 10, 35.

79. Kim Y.J, Kwon H.J, Shinozaki N, Hashimoto S, Shimono M, Cho S.W, Jung H.S. (2008). Comparative analysis of ABCG2-expressing and label-retaining cells in mouse submandibular gland. Cell Tissue Res, 334(1), 47-53.

80. Kôrbling M, Katz R.L, Khanna A, Ruifrok A.C, Rondon G, Albitar M, Champlin R.E, Estrov Z. (2002). Hepatocytes and epithelial cells of donor origin in recipients of peripheral-blood stem cells. N. Engl. J. Med, 346(10), 738-746.

81. Kosone T, Takagi H, Horiguchi N, Kakizaki S, Sato K, Watanabe Y, Mori M. (2008). Transforming growth factor-alpha accelerates hepatocyte repopulation after hepatocyte transplantation. J. Gastroenterol. Hepatol., 23, 260-266.

82. Kumaran V, Joseph B, Benten D, Gupta S. (2005). Integrin and extracellular matrix interactions regulate engraftment of transplanted hepatocytes in the rat liver. Gastroenterology, 129, 1643-1653.

83. Kuo T.K, Hung S.P, Chuang C.H, Chen C.T, Shih Y.R, Fang S.C, Yang V.W, Lee O.K. (2008). Stem cell therapy for liver disease: parameters governing the success of using bone marrow mesenchymal stem cells. Gastroenterology, 134: 2111-2121.

84. Kyrmizi, I, Hatzis P, Katrakili N, Tronche F, Gonzalez F.J, Talianidis I. (2006). Plasticity and expanding complexity of the hepatic transcription factor network during liver development. Genes Dev., 20, 2293-2305.

85. Lange C, Bassler P, Lioznov M.V, Bruns H, Kluth D, Zander A.R, Fiegel H.C. (2005). Hepatocytic gene expression in cultured rat mesenchymal stem cells. Transplant. Proc., 37, 276-279.

86. Larsen M., Yamada K.M., Musselmann K. (2010). Systems analysis of salivary gland development and disease. Wiley Interdiscip. Rev. Syst. Biol. Med., 2(6), 670-682.

87. Lavon N., Yanuka O., Benvenisty N. (2004). Differentiation and isolation of hepatic-like cells from human embryonic stem cells. Differentiation, 72, 230-238.

88. Lazarevich N.L. (2000). Molecular Mechanisms of Alpha-Fetoprotein Gene Expression. Biochemistry, 65(1), 117-133.

89. Le Blanc K., Ringden O. (2007). Immunomodulation by mesenchymal stem cells and clinical experience. J. Intern. Med., 262, 509-525.

90. LeCouter J., Moritz D.R., Li B., Phillips G.L., Liang X.H., Gerber H.P., Hillan K.J., Ferrara N. (2003). Angiogenesis-independent endothelial protection of liver: role of VEGFR-1. Science, 299, 890-893.

91. Lee C.S., Friedman J.R., Fulmer J.T., Kaestner K.H. (2005). The initiation of liver development is dependent on Foxa transcription factors. Nature, 435(7044), 944-947.

92. Lee K.W., Lee J.H., Shin S.W., Kim S.J., Joh J.W., Lee D.H., Kim J.W., Park H.Y., Lee S.Y., Lee H.H., Park J.W., Kim S.Y., Yoon H.H., Jung D.H., Choe Y.H., Lee S.K. (2007). Hepatocyte transplantation for glycogen storage disease type lb. Cell Transplant., 16, 629-637.

93. Lehner F., Kulik U., Klempnauer J., Borlak J. (2010). Mapping of liver-enriched transcription factors in the human intestine. World J. Gastroenterol., 16(31), 3919-3927.

94. Levicar N., Pai M., Habib N.A., Tait P., Jiao L.R., Marley S.B., Davis J., Dazzi F., Smadja C., Jensen S.L., Nicholls J.P., Apperley J.F., Gordon M.Y. (2008). Long-term clinical results of autologous infusion of mobilized adult bone marrow derived CD34+ cells in patients with chronic liver disease. Cell Prolif, 41(1), 115-125.

95. Li X.N., Shu Q., Su J.M., Perlaky L., Blaney S.M., Lau C.C. (2005). Valproic acid induces growth arrest, apoptosis, and senescence in medulloblastomas by

increasing histone hyperacetylation and regulating expression of p21Cipl, CDK4, and CMYC. Mol. Cancer Ther., 4(12), 1912-1922.

96. Liu J, Liu Y., Wang H, Hao H., Han Q, Shen J, Shi J., Li C., Mu Y, Han W. (2013). Direct differentiation of hepatic stem-like WB cells into insulin-producing cells using small molecules. Sci. Rep., 3, 1185.

97. Louren^o S.V, Coutinho-Camillo C.M, Buim M.E, Uyekita S.H, Soares F.A. (2007). Human salivary gland branching morphogenesis: morphological localization of claudins and its parallel relation with developmental stages revealed by expression of cytoskeleton and secretion markers. Histochem. Cell Biol., 128(4), 361369.

98. Lyra A.C, Soares M.B, da Silva L.F, Fortes M.F, Silva A.G, Mota A.C, Oliveira S.A, Braga E.L, de Carvalho W.A, Genser B, dos Santos R.R, Lyra L.G.

(2007). Feasibility and safety of autologous bone marrow mononuclear cell transplantation in patients with advanced chronic liver disease. World J. Gastroenterol., 13, 1067-1073.

99. Lysy P.A, Najimi M, Stephenne X, Bourgois A, Smets F, Sokal E.M.

(2008). Liver cell transplantation for Crigler-Najjar syndrome type I: update and perspectives. World J. Gastroenterol., 14, 3464-3470.

100. Margagliotti S, Clotman F, Pierreux C.E, Beaudry J.B, Jacquemin P, Rousseau G.G, Lemaigre F.P. (2007). The Onecut transcription factors Hnf-6/OC-l and OC-2 regulate early liver expansion by controlling hepatoblast migration. Developmental Biology, 311 (2), 579-589.

101. Matsumoto S, Okumura K, Ogata A, Hisatomi Y, Sato A, Hattori K, Matsumoto M, Kaji Y, Takahashi M, Yamamoto T, Nakamura K, Endo F. (2007). Isolation of Tissue Progenitor Cells from Duct-Ligated Salivary Glands of Swine. Cloning and Stem Cells, 9, 176-190.

102. McLin V.A, Rankin S.A, Zorn A.M. (2007). Repression of Wnt/beta-catenin signaling in the anterior endoderm is essential for liver and pancreas development. Development, 134(12), 2207-2217.

103. Michalopoulos G.K., Barua L., Bowen W.C. (2005). Transdifferentiation of rat hepatocytes into biliary cells after bile duct ligation and toxic biliary injury. Hepatology, 41(3), 535-544.

104. Michalopoulos G.K. (2007). Liver Regeneration. J. Cell Physiol., 213(2), 286-300.

105. Mitry R.R., Dhawan A., Hughes R.D., Bansal S., Lehec S., Terry C., Heaton N.D., Karani J.B., Mieli-Vergani G., Rela M. (2004). One liver, three recipients: segment IV from split-liver procedures as a source of hepatocytes for cell transplantation. Transplantation, 77, 1614-1616.

106. Mitsui R., Fujita-Yoshigaki J., Narita T., Matsuki-Fukushima M,. Satoh K., Qi B., Guo M.Y., Katsumata-Kato O., Sugiya H. (2010). Maintenance of paracellular barrier function by insulin-like growth factor-I in submandibular gland cells. Arch. Oral. Biol., 55(12), 963-969.

107. Mizumoto H., Aoki K., Nakazawa K., Ijima H., Funatsu K., Kajiwara T. (2008). Hepatic differentiation of embryonic stem cells in HF/organoid culture. Transplant. Proc., 40(2), 611-613.

108. Mohamadnejad M., Namiri M., Bagheri M., Hashemi S.M., Ghanaati H., Zare Mehijardi N., Kazemi Ashtiani S., Malekzadeh R., Baharvand H. (2007). Phase 1 human trial of autologous bone marrow-hematopoietic stem cell transplantation in patients with decompensated cirrhosis. World J. Gastroenterol., 13,3359-3363.

109. Muraca M., Gerunda G., Neri D., Vilei M.T., Granato A., Feltracco P., Meroni M., Giron G., Burlina A.B. (2002). Hepatocyte transplantation as a treatment for glycogen storage disease type la. Lancet., 359, 317-318.

110. Murry C.E., Keller G. (2008). Differentiation of embryonic stem cells to clinically relevant populations: lessons from embryonic development. Cell, 132(4), 661680.

111. Nagaki M., Moriwaki H. (2008). Transcription factor Hnf and hepatocyte differentiation. Hepatology Research, 38, 961-969.

112. Nakamura N, Saeki K, Mitsumoto M, Matsuyama S, Nishio M, Saeki K, Hasegawa M, Miyagawa Y, Ohkita H, Kiyokawa N, Toyoda M, Akutsu H, Umezawa A, Yuo A. (2012). Feeder-free and serum-free production of hepatocytes, cholangiocytes, and their proliferating progenitors from human pluripotent stem cells: application to liver-specific functional and cytotoxic assays. Cell. Reprogram., 14(2), 171-185.

113. Oertel M, Shafritz D.A. (2008). Stem cells, cell transplantation and liver repopulation. Biochim. Biophys. Acta., 1782(2), 61-74.

114. Okazaki I, Ninomiya Y, Kyuichi T, Friedman S.I. (2003). Extracellular Matrix and The Liver. Approach to Gene Therapy. Elsevier Science, 491 P.

115. Okumura K, Nakamura K, Hisatomi Y, Nagano K, Tanaka Y, Terada K, Sugiyama T, Umeyama K, Matsumoto K, Yamamoto T, Endo F. (2003). Salivary gland progenitor cells induced by duct ligation differentiate into hepatic and pancreatic lineages. Hepatology, 38, 104-113.

116. Okumura K, Shinohara M, Endo F. (2012). Capability of Tissue Stem Cells to Organize into Salivary Rudiments: Stem Cells International, DOI: 10.1155/2012/502136.

117. Pareja Eugenia, Amparo Martínez, Miriam Cortés, Ana Bonora, Angel Moya, Fernando Sanjuán, M. José Gómez-Lechón, and José Mira. (2010). Hepatic cell transplantation. Technical and methodological aspects. Cirugía Española, 87(3), 139147.

118. Patel N.V, Rebustini I.T, Hoffman M.P. (2006). Salivary gland branching morphogenesis. Differentiation, 74, 349-364.

119. Perin L, Sedrakyan S, Da Sacco S, De Filippo R. (2008). Characterization of human amniotic fluid stem cells and their pluripotential capability. Methods in cell biology, Burlington Elsevier Acad. Press., 86, 85-99.

120. Perucca E. (2002). Pharmacological and therapeutic properties of valproate: a summary after 35 years of clinical experience. CNS Drugs, 16, 695-714.

121. Petersen B.E., Bowen W.C., Patrene K.D., Mars W.M., Sullivan A.K., Murase N., Boggs S.S., Greenberger J.S., Goff J.P. (1999). Bone marrow as a potential source of hepatic oval cells. Science, 284, 1168-1170.

122. Pournasr B., Mohamadnejad M., Bagheri M., Aghdami N., Shahsavani M., Malekzadeh R., Baharvand H. (2011). In vitro differentiation of human bone marrow mesenchymal stem cells into hepatocyte-like cells. Arch. Iran. Med., 14(4), 244-249.

123. Prusa A.R., Marton E., Rosner M., Bernaschek G., Hengstschlager M. (2003). Oct4-expressing cells in human amniotic fluid: a new source for stem cell research? Hum. Reprod., 18, 1489-1493.

124. Rambhatla L., Chiu C.P., Kundu P., Peng Y., Carpenter M.K. (2003). Generation of hepatocyte-like cells from human embryonic stem cells. Cell Transplant., 12(1), 1-11.

125. Rausa F.M., Tan Y., Costa R.H. (2003). Association between Hepatocyte Nuclear Factor 6 (Hnf-6) and FoxA2 DNA Binding Domains Stimulates FoxA2 Transcriptional Activity but Inhibits Hnf-6 DNA Binding. Molecular and Cellular Biology, 23(2), 437-449.

126. Reddy J.K., Rao M.S., Yeldandi A.V., Tan X.D., Dwivedi R.S. (1991). Pancreatic hepatocytes. An in vivo model for cell lineage in pancreas of adult rat. Dig. Dis. ScL, 36(4), 502-509.

127. Rice K.L., Hormaeche I., Licht J.D. (2007). Epigenetic regulation of normal and malignant hematopoiesis. Oncogene, 26(47), 6697-6714.

128. Romanenko V.G., Nakamoto T., Catalán M.A., Gonzalez-Begne M., Schwartz G.J., Jaramillo Y., Sepúlveda F.V., Figueroa C.D., Melvin J.E. (2008). Clcn2 encodes the hyperpolarization-activated chloride channel in the ducts of mouse salivary glands. Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol., 295(5), G1058-G1067.

129. Roskams T. (2006). Different types of liver progenitor cells and their niches. J. Hepatol., 45(1), 1-4.

130. Rowzee A.M., Perez-Riveros P.J., Zheng C., Krygowski S., Baum B.J., Cawley N.X. (2013). Expression and secretion of human proinsulin-B10 from mouse

salivary glands: implications for the treatment of type I diabetes mellitus. PLoS One, DOI: 10.137 l/journal.pone.0059222.

131. Ryan J.M, Barry F.P, Murphy J.M, Mahon B.P. (2005). Mesenchymal stem cells avoid allogeneic rejection. J. Inflamm., 2, 8.

132. Sagias F.G, Mitry R.R, Hughes R.D, Lehec S.C, Patel A.G, Rela M, Mieli-Vergani G, Heaton N.D, Dhawan A. (2010). N-acetylcysteine improves the viability of human hepatocytes isolated from severely steatotic donor liver tissue. Cell Transplant., 19(11), 1487-1492.

133. Sato A, Okumura K, Matsumoto S, Hattori K, Hattori S, Shinohara M, Endo F. (2007). Isolation, tissue localization, and cellular characterization of progenitors derived from adult human salivary glands. Cloning Stem Cells, 9(2), 191205.

134. Schmelzer E, Zhang L, Bruce A, Wauthier E, Ludlow J, Yao H, Moss N, Melhem A, McClelland R, Turner W, Kulik M, Sherwood S, Tallheden T, Cheng N, Furth M.E, Reid L.M. (2007). Human hepatic stem cells from fetal and postnatal donors. JEM The Rockefeller University Press, 204(8), 1973-1987.

135. Schmelzer E, Reid L.M. (2009). Human Telomerase Activity, Telomerase and Telomeric Template Expression in Hepatic Stem Cells and in Livers from Fetal and Postnatal Donors. Eur. J. Gastroenterol. Hepatol., 21(10), 1191-1198.

136. Schwarz S, Rotter N. (2012). Human salivary gland stem cells: isolation, propagation, and characterization. Methods Mol. Biol., 879, 403-442.

137. Sekiya S, Suzuki A. (2011). Direct conversion of mouse fibroblasts to hepatocyte-like cells by defined factors. Nature, 475(7356), 390-393.

138. Selden C, Hodgson H. (2004). Cellular therapies for liver replacement. Transpl. Immunol., 12, 273-288.

139. Seo M.J, Suh S.Y, Bae Y.C, Jung J.S. (2005). Differentiation of human adipose stromal cells into hepatic lineage in vitro and in vivo. Biochem. Biophys. Res. Commun., 328, 258-264.

140. Sgodda M., Aurich H., Kleist S., Aurich I., KoËnig S., Dollinger M.M., Fleig W.E., Christ B. (2007). Hepatocyte differentiation of mesenchymal stem cells from rat peritoneal adipose tissue in vitro and in vivo. Exp. Cell Res., 313, 2875-2886.

141. Shapiro A.M., Lakey J.R., Ryan E.A., Korbutt G.S., Toth E., Warnock G.L., Kneteman N.M., Rajotte R.V. (2000). Islet transplantation in seven patients with type 1 diabetes mellitus using a glucocorticoid-free immunosuppressive regimen. N. Engl. J. Med., 343, 230-238.

142. Slack J.M. (2007). Metaplasia and transdifferentiation: from pure biology to the clinic. Nat. Rev. Mol. Cell Biol., 8(5), 369-378.

143. Smets F., Najimi M., Sokal E.M. (2008). Cell transplantation in the treatment of liver diseases. Pediatr. Transplant., 12, 6-13.

144. Snykers S., Vanhaecke T., De Becker A., Papeleu P., Vinken M., Van Riet I., Rogiers V. (2007). Chromdi atin remodeling agent trichostatin A: a key-factor in the hepatic differentiation of human mesenchymal stem cells derived of adult bone marrow. BMC Dev. Biol., 2(7) 24.

145. Snykers S., Henkens T., De Rop E., Vinken M., Fraczek J., De Kock J., De Prins E., Geerts A., Rogiers V., Vanhaecke T. (2009). Role of epigenetics in liver-specific gene transcription, hepatocyte differentiation and stem cell reprogrammation. Journal of Hepatology, 51,187-211.

146. Sokal E.M. (2006). Liver transplantation for inborn errors of liver metabolism. J. Inherit. Metab. Dis., 29, 426-430.

147. Soto-Gutierrez A, Navarro-Alvarez N., Rivas-Carrillo J.D., Chen Y., Yamatsuji T., Tanaka N., Kobayashi N. (2006). Differentiation of human embryonic stem cells to hepatocytes using deleted variant of HGF and poly-amino-urethane-coated nonwoven polytetrafluoroethylene fabric. Cell Transplant., 15(4), 335-341.

148. Soto-Gutierrez A., Navarro-Alvarez N., Caballero-Corbalan J., Tanaka N., Kobayashi N. (2008). Endoderm induction for hepatic and pancreatic differentiation of ES cells. Acta Med. Okayama., 62(2), 63-68.

149. Stock P, Staege M.S., Mueller L.P, Sgodda M, Voelker A, Volkmer I, Lutzkendorf J, Christ B. (2008). Hepatocytes derived from adult stem cells. Transplant. Proc., 40, 620-623.

150. Stresemann C, Lyko F. (2008). Modes of action of the DNA methyltransferase inhibitors azacytidine and decitabine. Int. J. Cancer, 123(1), 8-13.

151. Su N, Thiaville M.M, Awad K, Gjymishka A, Brant J.O, Yang T.P, Kilberg M.S. (2009). Protein or amino acid deprivation differentially regulates the hepatic forkhead box protein A (FOXA) genes through an activating transcription factor-4-independent pathway. Hepatology, 50(1), 282-290.

152. Suzuki A, Sekiya S, Buscher D, Izpisua Belmonte J.C, Taniguchi H. (2008). Tbx3 controls the fate of hepatic progenitor cells in liver development by suppressing p 19ARF expression. Development, 135(9), 1589-1595.

153. Swales N, Martens G.A, Bonne S, Heremans Y, Borup R, Van de Casteele M, Ling Z, Pipeleers D, Ravassard P, Nielsen F, Ferrer J, Heimberg H. (2012). Plasticity of adult human pancreatic duct cells by neurogenin3-mediated reprogramming. PLoS One, 7(5), DOI: 10.1371/journal.pone.0037055.

154. Takahashi K, Yamanaka S. (2006). Induction of pluripotent stem cells from mouse embryonic and adult fibroblast cultures by defined factors. Cell, 126, 663676.

155. Theise N.D, Nimmakayalu M, Gardner R, Illei P.B, Morgan G, Teperman L, Henegariu O, Krause D.S. (2000). Liver from bone marrow in humans. Hepatology, 32, 11-16.

156. Theise N.D, Badve S, Saxena R, Henegariu O, Sell S, Crawford J.M, Krause D.S. (2000). Derivation of hepatocytes from bone marrow cells in mice after radiation-induced myeloablation. Hepatology, 31(1), 235-240.

157. Thorgeirsson S.S, Factor V.M, Grisham J.W. (2004). Early Activation and expansion of hepatic stem cells. Lanza R, ed. Handbook of Stem Cells, Burlington, MA Elsevier Academic Press, 497-512.

158. Tosh D., Shen C.N., Slack J.M. (2002). Differentiated properties of hepatocytes induced from pancreatic cells. Hepatology, 36, 534-543.

159. Trzpis M., McLaughlin P.M., de Leij L.M., Harmsen M.C. (2007). Epithelial cell adhesion molecule: more than a carcinoma marker and adhesion molecule. Am. J. Pathol., 171(2), 386-395.

160. Tsuji T., Nagai N. (1993). Production of alpha-fetoprotein by human submandibular gland. Int. J. Dev. Biol, 17, 497-498.

161. Tucker AS. (2007). Salivary gland development. Cell Dev. Biol., 18(2), 237-244.

162. Tsai M.S., Hwang S.M., Tsai Y.L., Cheng F.C., Lee J.L., Chang Y.J. (2006). Clonal amniotic fluid-derived stem cells express characteristics of both mesenchymal and neural stem cells. Biol. Reprod., 74, 545-551.

163. Turner B.M. (2005). Reading signals on the nucleosome with a new nomenclature for modified histones. Nat. Struct. Mol. Biol., 12(2), 110-112.

164. Turner R., Lozoya O., Wang Y., Cardinale V., Gaudio E., Alpini G., Mendel G., Wauthier E., Barbier C., Alvaro D., Reid L.M. (2011). Human hepatic stem cell and maturational liver lineage biology. Hepatology, 53(3), 1035-1045.

165. Van Keymeulen A., Rocha A.S., Ousset M., Beck B., Bouvencourt G., Rock J., Sharma N., Dekoninck S., Blanpain C. (2011). Distinct stem cells contribute to mammary gland development and maintenance. Nature, 479(7372), 189-193.

166. Vanhaecke T., Henkens T., Kass G.E., Rogiers V. (2004). Effect of the histone deacetylase inhibitor trichostatin A on spontaneous apoptosis in various types of adult rat hepatocyte cultures. Biochem. Pharmacol., 68, 753-760.

167. Vierbuchen T., Ostermeier A., Pang Z.P., Kokubu Y., Siidhof T.C., Wernig M. (2010). Direct conversion of fibroblasts to functional neurons by defined factors. Nature, 463(7284), 1035-1041.

168. Vinken M., Henkens T., Vanhaecke T., Papeleu P., Geerts A., Van Rossen E., Chipman J.K., Meda P., Rogiers V. (2006). Trichostatin A enhances gap junctional

intercellular communication in primary cultures of adult rat hepatocytes. Toxicol. Sci., 91(2), 484-492.

169. Walker J.L., Menko A.S., Khalil S., Rebustini I., Hoffman M.P., Kreidberg J.A., Kukuruzinska M.A. (2008). Diverse roles of E-cadherin in the morphogenesis of the submandibular gland: insights into the formation of acinar and ductal structures. Dev. Dyn., 237(11), 3128-3141.

170. Walkup M.H., Gerber D.A. (2006). Hepatic Stem Cells: In Search of. Stem Cells, 24, 1833-1840.

171. Wang X., Willenbring H., Akkari Y., Torimaru Y., Foster M., Al-Dhalimy M., Lagasse E., Finegold M., Olson S., Grompe M. (2003). Cell fusion is the principal source of bone-marrow-derived hepatocytes. Nature, 422(6934), 897-901.

172. Wang P., Liu T., Cong M., Wu X., Bai Y., Yin C., An W., Wang B., Jia J., You H. (2009). Expression of extracellular matrix genes in cultured hepatic oval cells: an origin of hepatic stellate cells through transforming growth factor beta? Liver Int., 29(4), 575-584.

173. Weiss T.S., Lichtenauer M., Kirchner S., Stock P.,Aurich H., Christ B., Brockhoff G, Kunz-Schughart L.A., Jauch K.W., Schlitt H.J., Thasler W.E. (2008). Hepatic progenitor cells from adult human livers for cell transplantation. Gut, 57, 11291138.

174. Wesolowska A., Olszewski W.L., Durlik M. (2003). Transplantation of hepatocytes: elimination of recipient natural killer cells with irradiation and bone marrow reconstitution prevent early graft dysfunction. Transplant. Proc., 35, 23582360.

175. Wu X.B., Tao R. (2012). Hepatocyte differentiation of mesenchymal stem cells. Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int., 11(4), 360-371.

176. Yabaluri N., Bashyam M.D. (2010). Hormonal regulation of gluconeogenic gene transcription in the liver. J. Biosci., 35, 473-484.

177. Yamashita Y., Shimada M., Harimoto N., Rikimaru T., Shirabe K., Tanaka S., Sugimachi K. (2003). Histone deacetylase inhibitor trichostatin Ainduces cell-cycle

arrest/apoptosis and hepatocyte differentiation in human hepatoma cells. Int. J. Cancer, 103, 572-576.

178. Yang T.L, Young T.H. (2009). Chitosan cooperates with mesenchyme-derived factors in regulating salivary gland epithelial morphogenesis. J. Cell. Mol. Med., 13(9A), 2853-2863.

179. Yang X.J, Seto E. (2007). HATs and HDACs: from structure, function and regulation to novel strategies for therapy and prevention. Oncogene, 26(37), 5310-5318.

180. Yi F, Liu G.H, Izpisua Belmonte J.C. (2012). Rejuvenating liver and pancreas through cell transdifferentiation. Cell Research, 22, 616-619.

181. You J, Shin D.S, Patel D, Gao Y, Revzin A. (2013). Multilayered Heparin Hydrogel Microwells for Cultivation of Primary Hepatocytes. Adv. Healthc. Mater., DOI: 10.1002/adhm.201300054.

182. Chun Y.S, Chaudhari P, Jang Y.Y. (2010). Applications of Patient-Specific Induced Pluripotent Stem Cells; Focused on Disease Modeling, Drug Screening and Therapeutic Potentials for Liver Disease. Int. J. Biol. Sci., 6(7), 796-805.

183. Zaret, K.S. (2008). Genetic programming of liver and pancreas progenitors: lessons for stem-cell differentiation. Nature Rev. Genet., 9, 329-340.

184. Zaret K.S, Grompe M. (2008). Generation and regeneration of cells of the liver and pancreas. Science, 322(5907), 1490-1494.

185. Zhang Q.Y, Dunbar D, Kaminsky L.S. (2003). Characterization of mouse small intestinal cytochrome P450 expression. Drug Metab. Dispos., 31(11), 1346-1351.

186. Zhang P, Baxter J, Vinod K, Tulenko T.N, Dimuzio P. (2009). Endothelial differentiation of amniotic fluid-derived stem cells: synergism of biochemical and shear force stimuli. Stem Cells Develop., 18, 1299-1308.

187. Zhang L, Ye J.S, Decot V, Stoltz J.F, de Isla N. (2012). Research on stem cells as candidates to be differentiated into hepatocytes. Biomed. Mater. Eng., 22(1-3), 105-111.

188. Zhang Y, Jalili R.B, Warnock G.L, Ao Z, Marzban L, Ghahary A. (2012). Three-dimensional scaffolds reduce islet amyloid formation and enhance

survival and function of cultured human islets. The American Journal of Pathology, 181(4), 1296-1305.

189. Zheng Y.B, Gao Z.L, Xie C, Zhu H.P, Peng L, Chen J.H, Chong Y.T. (2008). Characterization of hepatogenic differentiation of mesenchymal stem cells from human amniotic fluid and human bone marrow: a comparative study. Cell Biol. Int., 32, 1439-1448.

190. Zhu C, Coombe D.R, Zheng M.H, Yeoh G.C, Li L. (2012). Liver progenitor cell interactions with the extracellular matrix. J. Tissue Eng. Regen. Med., DOI: 10.1002/term.l470.

191. Song Z, Cai J, Liu Y, Zhao D, Yong J, Duo S, Song X, Guo Y, Zhao Y, Qin H, Yin X, Wu C, Che J, Lu S, Ding M, Deng H. (2009). Efficient generation of hepatocyte-like cells from human induced pluripotent stem cells. Cell Research, 19, 1233-1242.

192. Zhou Q, Brown J, Kanarek A, Rajagopal J, Melton D.A. (2008). In vivo reprogramming of adult pancreatic exocrine cells to beta-cells. Nature, 455(7213), 627632.

193. Zhu W.G, Otterson G.A. (2003). The interaction of histone deacetylase inhibitors and DNA methyltransferase inhibitors in the treatment of human cancer cells. Curr. Med. Chem. Anticancer Agents, 3(3), 187-199.

194. Zong Y, Panikkar A, Xu J, Antoniou A, Raynaud P, Lemaigre F, Stanger B.Z. (2009). Notch signaling controls liver development by regulating biliary differentiation. Development, 136, 1727-1739.

195. Zulewski H, Abraham E.J, Gerlach M.J, Daniel P.B, Moritz W, Muller B, Vallejo M, Thomas M.K, Habener J.F. (2001). Multipotential nestin-positive stem cells isolated from adult pancreatic islets differentiate ex vivo into pancreatic endocrine, exocrine, and hepatic phenotypes. Diabetes, 50, 521-533.