Генетическая гетерогенность Borrelia spp. Западной Сибири тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Фоменко, Наталия Владимировна

• Фоменко, Наталия Владимировна
• кандидат биологических наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Фоменко, Наталия Владимировна

-Введение

1. Актуальные аспекты изучения иксодовых и аргасовых клещевых боррелиозов; проблемы лабораторной диагностики (обзор литературы)

1.1 Боррелии

1.1.1 Таксономия

1.1.2 Морфология

1.1.3 Организация генома

1.1.4 Белки OspA и Р83/100 боррелий комплекса В. burgdorferi s.l.

1.2 Экология и эпидемиология

1.2.1 Экология боррелий переносимых клещами

1.2.2 Эпидемиология

1.3 Молекулярные механизмы патогенеза

1.4 Патогенез

1.4.1 Иксодовые клещевые боррелиозы

1.4.2 Аргасовые клещевые боррелиозы

1.5 Диагностика боррелиозов

1.5.1 Прямые методы

1.5.2 Серологические методы

2. Экспериментальная часть (материалы и методы)

2.1 Реактивы и материалы

2.1.1 Реактивы

2.1.2 Синтетические олигонуклеотиды

2.1.3 Буферы и основные растворы

2.1.4 Бактериальные штаммы и коньюгаты

2.1.5 Образцы крови больных

2.1.6 Клещи I. persulcatus и образцы крови мелких млекопитающих

2.1.7 Базы данных и программы

2.2 Методы

2.2.1 Изоляция боррелий от таежных клещей на среде BSK-H

2.2.2 Изоляция боррелий на среде BSK-H из крови больных

2.2.3 Выделение нуклеиновых кислот из различных биологических источников

2.2.4 Амплификация фрагментов ДНК

2.2.5 Анализ полиморфизма длин фрагментов рестрикции ПЦР фрагментов (ПДФР)

2.2.6 Подготовка ПЦР-фрагментов для проведения определения нуклеотидных последовательностей

2.2.7 Очистка продуктов реакции секвенирования ДНК

2.2.8 Определение нуклеотидных последовательностей

2.2.9 Филогенетический анализ

2.2.10 Денатурирующий электрофорез белков в SDS-ПААГ

2.2.11 Иммуноблот анализ

2.2.12 Выявление антител в реакции непрямой иммунофлуоресценции (РНИФ)

2.2.13 Статистический анализ

3. Результаты и обсуждение

3.1 Выявление боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в образцах от клещей

I. persulcatus, крови мелких млекопитающих и людей

3.1.1 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови больных, госпитализированных с признаками инфекционных заболеваний и присасыванием клещей в анамнезе

3.1.2 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови мелких млекопитающих

3.1.3 Выявление ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в образцах от клещей I. persulcatus

3.1.4 Изоляция боррелий от клещей I. persulcatus методом культивирования в искусственной среде

3.2 Выявление ДНК В. miyamotoi в образцах из Новосибирской области

3.2.1 Выявление ДНК В. miyamotoi в образцах от клещей I. persulcatus и крови мелких млекопитающих

3.2.2 Выявление ДНК В. miyamotoi в крови лихорадящих больных

3.2.3 Изоляция боррелий из крови лихорадящих больных

3.2.4 Анализ нуклеотидных последовательностей В. miyamotoi

3.3 Установление видовой принадлежности боррелий комплекса

В. burgdorferi s.l.

3.3.1 В. burgdorferi s.l. с типичной последовательностью межгенного спейсера

3.3.2 В, burgdorferi s.l. с нетипичной последовательностью межгенного спейсера

3.4 Молекулярно-генетический анализ генов, кодирующих иммунодоминантные белки OspA и Р83/

3.4.1 Молекулярно-генетический анализ гена ospA

3.4.2 Молекулярно-генетический анализ генар83/

3.5 Сравнительный анализ генов р83/100 и ospA

3.6 Выявление антител к белкам боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в крови людей, заболевших после присасывания клещей

3.6.1 Сравнение выявления ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. и противоборрелиозных антител в крови больных с эритемной формой ИКБ

3.6.2 Сравнение выявления противоборрелиозных антител в крови больных с КЭ и лихорадочными состояниями, развившимися после присасывания клещей!

3.6.3 Иммуноблот анализ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Генетическая гетерогенность Borrelia spp. Западной Сибири»

Иксодовые клещевые боррелиозы (ИКБ) - природно-очаговые трансмиссивные заболевания, занимающие по широте распространения и уровню заболеваемости значительное место среди природно-очаговых инфекций [35, 34]. Сибирский федеральный округ (СФО) занимает третье место по заболеваемости ИКБ среди регионов России, уступая Уральскому и Северо-Западному федеральным округам. С 1992 по 2004 гг. среднегодовой показатель заболеваемости в СФО составил 10,08 на 100 тысяч населения, Новосибирская область занимает пятое место по заболеваемости ИКБ в СФО [63].

Возбудители ИКБ — спирохеты комплекса Borrelia burgdorferi sensu lato (s.l.), -передаются человеку клещами рода Ixodes [203, 224]. Помимо боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в клещах рода Ixodes выявлены боррелии Borrelia miyamotoi, генетически относимые к клещевым возвратным лихорадкам [166]. Встречаемость В. miyamotoi на территории России на сегодняшний день пе изучена. Клещи рода Ixodes являются основными переносчиками не только боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., но также и вируса клещевого энцефалита (ВКЭ). Ареалы распространения ИКБ и клещевого энцефалита в значительной степени совпадают, что обуславливает развитие смешанной инфекции, которая в Новосибирской области выявляется в 13,5% от общего числа заболевших клещевым энцефалитом [21].

ИКБ протекают в острой, а чаще в хронической форме, и представляют серьезную опасность для здоровья человека, поскольку проявляются в виде множественных органных повреждений [1, 6-8, 144, 224, 301]. Боррелиоз поддается терапии антибиотиками на ранней стадии заболевания, при переходе в хроническую стадию лечение становится более длительным и сложным, поэтому актуальной проблемой является своевременная диагностика этого заболевания [1, 23, 68, 152, 303].

Наличие мигрирующей эритемы при ИКБ является достаточным критерием для постановки диагноза, диагностика безэритемных форм зачастую затруднена. Данные о сроках формирования иммунного ответа и о динамике титра противоборрелиозных антител противоречивы. До настоящего времени в литературе обсуждается вопрос о том, когда в крови больных при различных формах ИКБ выявляются диагностически значимые титры антител. Вопрос о приемлемости метода ПЦР для выявления ДНК в крови больных ИКБ не однозначен, все чаще говориться о возможности применения ПЦР для диагностики ИКБ [63, 205, 249, 303]. Однако четкого представления о сроках и целесообразности применения данного метода нет.

Для идентификации боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. применяются лабораторные методы: фенотипические, серологические и молекулярно-генетические [23, 29, 122, 196, 205, 224, 249, 271, 301, 302]. Наиболее распространены серологические методы, основанные на определении антител к антигенам возбудителя, поэтому изучению поверхностных белков боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. уделяется особое внимание. У больных ИКБ наблюдаются отличия в реагировании сывороточных антител с белками разных видов боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. [110]. В связи с такой высокой вариабельностью изучение структуры и свойств иммунодомипантных белков имеет большое значение для разработки эффективных средств, как диагностики, так и вакцинопро фил актики.

Анализ клиники ИКБ в различных регионах России указывает на преобладание неврологической симптоматики [6, 7], в тоже время принято считать, что вид Borrelia garinii связан с неврологическими проявлениями ИКБ [249]. Однако в большинстве проводимых в настоящее время работ по изучению генетической гетерогенности и патогенных свойств В. garinii западносибирские штаммы не используются. Изучение В. garinii в основном проводится с использованием штаммов, изолированных в Европе от клещей I. ricinus и больных заболевших ИКБ, в результате присасывания клещей I. ricinus. За рамками рассмотрения остается большая генетическая подгруппа вида В. garinii — NT29, переносимая только клещами Ixodespersulcatus [203, 213, 224].

Таким образом, большое значение имеет изучение региональных особенностей видового состава, генетической гетерогенности, структуры и свойств иммунодоминантных белков видов боррелий, циркулирующих на данной территории, и принимающих участие в патогенезе.

Целью работы являлось изучение генетической гетерогенности спирохет рода Borrelia, переносимых клещами Ixodespersulcatiis Западной Сибири. Для достижения поставленной цели были поставлены следующие задачи.

1. Выявить региональные особенности видового состава и встречаемости боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в клещах I. persulcatus и мелких млекопитающих, а также в крови больных иксодовыми клещевыми боррелиозами.

2. Оценить выявляемость и генетическую гетерогенность боррелий вида В. miyamotoi в клещах I. persulcatus и мелких млекопитающих. Провести выявление В. miyamotoi в крови больных, госпитализированных с признаками инфекционных заболеваний и присасыванием клещей в анамнезе.

3. Провести молекулярно-генетический анализ генов, кодирующих иммунодомннантные белки Р83/100 и OspA. Оценить возможность определения видовой принадлежности боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. по последовательностям гена р83/100. Изучить возможные корреляции определения видовой принадлежности западносибирских изолятов по последовательностям генов р83/100 и ospA.

4. Провести сравнительный анализ выявления ДНК и антител к белкам боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. у больных иксодовыми клещевыми боррелиозами, клещевым энцефалитом и с лихорадочными состояниями и присасыванием клещей в анамнезе.

Публикации и апробация работы. Материалам диссертации опубликованы в 12 статьях н 14 тезисах докладов. Результаты работы представлены на Российских и международных конференциях: «Ежегодная научно-практическая конференция невропатологов и инфекционистов», Новосибирск, 2004; "'Актуальные вопросы современной медицины", Новосибирск, 2004; «Фундаментальные науки медицине», Новосибирск, 2005, 2006, 2008; «Современная ситуация и перспективы борьбы с клещевыми инфекциями в XXI веке», Томск, 2006; IX International Jena Symposium on Tick-borne Diseases (formerly IPS) «Climate change and tick-borne diseases». Йена, Германия, 2007; Russian-Great Britain workshop of young scientists «Emerging Diseases: Tick-transmitted and influenza», Новосибирск, 2007; «Актуальные вопросы региональной инфекционной патологии», Иркутск, 2007; «Биотехнология в Казахстане: Проблемы и перспективы инновацнонного развития», Алматы, Казахстан, 2008.

Основные положения, выносимые на защиту:

Структура популяции боррелий в природных очагах иксодовых клещевых боррелиозов Западной Сибири гетерогенна. Помимо широко распространенных видов высока вероятность выявления боррелий с нетипичной организацией генома как в переносчиках, так и в резервуарных хозяевах. В. garinii подгруппы NT29 - основной этиологический агент ИКБ в Западной Сибири.

Таежные клещи в Западной Сибири участвуют в поддержании циркуляции В. miyamotoi. В одном природном очаге возможна циркуляция не только боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., но и В. miyamotoi.

Гены иммунодоминантных белков Р83/100 и OspA В. garinii Западной Сибири высоко гетерогенны. Группы, выделенные на основании анализа нуклеотидных последовательностей геновр83/100 и ospA, соотносятся между собой.

Метод ПЦР, наряду с иммунологическими методами анализа, применим на ранней стадии диагностики ИКБ.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитированной литературы. Работа изложена на 147 страницах, содержит 25 рисунков и 18 таблиц. Библиография включает 305 литературных источников

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Фоменко, Наталия Владимировна

выводы

1. Показано, что помимо широко распространенных генетических вариантов двух видов комплекса В. burgdorferi s.l. - В. garinii и В. afzelii на территории Западной Сибири циркулируют боррелии с нетипичной структурой межгенного спейсера 5S-23S рРНК. На основании анализа генов 16S рРНК и ospA они отнесены к виду В. garinii. Продемонстрировано, что виды В. garinii и В. afzelii - этиологические агенты иксодовых клещевых боррелиозов в Новосибирской области, при этом независимо от формы протекания заболевания В. garinii подгруппы NT29 выявлена достоверно чаще (р<0,05).

2. В таежных клещах, отловленных в Новосибирской и Свердловской областях, впервые выявлены боррелии группы клещевых возвратных лихорадок — В. miyamotoi. Анализ генов 16S рРНК и рбб показал, что западносибирские изоляты В. miyamotoi относятся к генетическому варианту, изолированному ранее в Японии. ДНК В. miyamotoi выявлена в крови больных, госпитализированных с острыми лихорадочными состояниями и присасыванием клещей в анамнезе. Впервые из крови больных получены первичные изоляты В. miyamotoi, которые при дальнейшем культивировании не сохраняли способность к росту.

3. Впервые определена нуклеотидная последовательность гена р83/100 изолятов В. garinii подгруппы NT29. Показана возможность использования последовательности гена р83/100 для определения видовой принадлежности представителей трех патогенных видов комплекса В. burgdorferi s.l. Для вида В. garinii показана высокая гетерогенность генов р83/100 и ospA, установлено наличие корреляции между кластерами, выделенными для этих генов. Впервые продемонстрировано наличие не только гомологичной рекомбинации, но и латерального переноса плазмиды 1р54, кодирующей ген ospA для западносибирских изолятов вида В. garinii.

4. Показано, что на стадии раннего ИКБ метод ПЦР применим в комплексной диагностике заболевания наряду с иммунологическими методами анализа. Использование ПЦР для детекции ДНК в крови на поздних стадиях и при хроническом течении заболевания нецелесообразно. Показано, что на ранних сроках заболевания противоборрелиозные антитела в диагностически значимых титрах выявляются как у больных с диагнозом клещевой энцефалит, так и с острыми лихорадочными заболеваниями и не подтвердившимся КЭ, причем антитела с титрами 1:160 и выше достоверно чаще (р<0,01) выявляются у больных с лихорадочными заболеваниями.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Представленная работа является комплексным исследованием выявления спирохет рода Borrelia в клещах Ixodes persidcatus, крови мелких млекопитающих и людей, пострадавших в результате присасывания таежных клещей. Существенно дополнены представления о структуре популяций боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. в очагах иксодового клещевого боррелиоза (ИКБ) в Новосибирской области. Показано, что наряду с часто встречаемыми генетическими вариантами В. garinii и В. afzelii на данной территории циркулируют боррелии с мало распространенными или ранее неизвестными генетическими вариантами последовательностей межгенного спейсера 5S-23 S рРНК. Нами установлено, что возбудителями иксодовых клещевых боррелиозов в Новосибирской области являются виды В. garinii и В. afzelii, однако независимо от формы ИКБ у больных достоверно чаще (р<0,05) выявляется В. garinii подгруппы NT29.

Установление видовой принадлежности 78 изолятов боррелий, полученных от клещей I. persulcatus, отловленных в Свердловской, Новосибирской, Томской области, а также Селенгинском аймаке (Монголия) показало, что от таежных клещей отловленных на всех рассмотренных территориях изоляцией на среде BSK-H, выявляются боррелии двух видов: В. garinii и В. afzelii. Вид В. garinii представлен двумя генетическими подгруппами: NT29 и 20047, вид В. afzelii также представлен двумя подгруппами: VS461 и NT28. На основании анализа генов 16S рРНК и ospA установлена видовая принадлежность изолятов с нетипичной структурой межгенного спейсера 5S-23S рРНК, все они отнесены к виду В. garinii.

К началу выполнения настоящей работы было определено лишь двенадцать полных нуклеотидных последовательности гена р83/100 для изолятов боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., полученных от I. ricinus и I. scapularis. В данной работе определено 55 полных нуклеотидных последовательностей генар83/100 трех патогенных видов комплекса В. burgdorferi s.l. Определение последовательности гена р83/100 для изолятов В. garinii подгруппы NT29 и В. garinii с нетипичной структурой межгеиного спейсера 5S-23S рРНК проведено впервые. Результаты сравнительного и филогенетического анализов подтвердили возможность использования гена р83/100 для определения видовой принадлежности представителей трех патогенных видов комплекса В. burgdorferi s.l. Анализ последовательностей боррелий вида В. garinii подтвердил гетерогенность гена р83/100 и выделение групп внутри вида, однако полного соответствия с группами, выделяемыми при анализе межгенного спейсера 5S-23S рРНК, не обнаружено. Для нуклеотидных последовательностей представителей вида В. afzelii отмечена высокая степень гомологии. Поскольку наиболее вариабельный участок кодирует область белка, включающую антигенные детерминанты, при использовании белка Р83/100 в диагностических целях необходимо учитывать возможные отличия его иммунореактивных свойств. Данные, полученные в этой работе, могут быть использованы для получения рекомбинантных белков Р83/100, применимых для средств диагностики и вакцинопрофилактики ИКБ.

В ходе исследования направленного на изучение генетической гетерогенности поверхностных иммунодоминантных белков боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., проведено определение и анализ 48 полных нуклеотидных последовательностей гена ospA западносибирских изолятов. Показано, что западносибирские изоляты В. garinii отличаются большой генетической гетерогенностью гена ospA. Основные различия рассмотренных генетических вариантов гена ospA выявлены на участках, кодирующих антигенные детерминанты белка OspA. Белок OspA является основным поверхностным белком боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., его используют для создания вакцины против боррелиоза [92]. Ранее говорилось о том, что иммунизация белком OspA одного штамма не предохраняет от заражения гетерогенным штаммом боррелий [103]. Полученные результаты также подтверждают, что ни одна моноштаммовая вакцина не может обладать надежным защитным эффектом при столь выраженной гетерогенности популяции боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., циркулирующих на территории Западной Сибири.

Мы провели сравнительный анализ последовательностей генов ospA и р83/100 для 27 изолятов В. garinii из Западной Сибири и Монголии, для сравнения были использованы последовательности семи штаммов боррелий, приведенных в GenBank. Проведение сравнительного анализа кластеров, выделенных при анализе гена р83/100 с субкластерами, выделенными при анализе гена ospA, показано их совпадение (табл. 16). Изоляты, образующие I и II субкластеры гена ospA, попадают во второй кластер, выделенный при анализе гена р83/100, а изоляты III и IV субкластера - в первый. Мы применили ранее предложенный метод построения и сравнительного анализа дендрограмм филогенетического сходства не только на основании полной нуклеотидной последовательности генов, но и с использованием последовательностей, соответствующих 5'- и Зл- половин гена. Основываясь на полученных результатах, впервые продемонстрировано наличие не только гомологичной рекомбинации, но и латерального переноса плазмиды 1р54, кодирующей ген ospA. Одновременно гомологичная рекомбинация и перенос плазмиды присутствует у 48% западносибирских изолятов вида В. garinii. Выявление и анализ изменений, происходящих в результате мутаций, рекомбинаций и переноса генов, особенно важно в связи с потенциальной возможностью появления новых и модификации существующих антигенных детерминант.

В ходе настоящей работы было проведено выявление противоборрелиозных антител в крови больных пострадавших в результате присасывания таежных клещей, а также проведено сравнение выявления антител и ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. Противоборрелиозные антитела выявлены на ранних сроках заболевания как у больных с эритемной формой ИКБ, так и у больных с хроническим течением ИКБ, а также у больных с КЭ. Кроме того, антитела в диагностически значимых титрах выявлены у больных с лихорадочными состояниями. Мы провели сравнение выявления антител у больных с диагнозами эритемная форма ИКБ, КЭ и у больных с лихорадочными состояниями, которым не был поставлен диагноз, связанный с присасыванием клеща. В трех рассмотренных группах значения титров противоборрелиозных антител отличаются, антитела с титрами 1:160 и выше у больных с эритемной формой ИКБ выявлены в 5,0+2,8%, у больных с КЭ - в 6,2+2,5%, а у больных с лихорадочными состояниями — в 16,8+2,5% случаев. Показано, что в группе больных с лихорадочными состояниями, достоверно чаще (р<0,01) выявляются антитела в титрах 1:160 и выше, в то время как для больных с КЭ преобладающими являются титры антител 1:80.

Поскольку основным патогномоничным признаком ИКБ принято считать мигрирующую эритему, сравнение выявления ДНК боррелий и противоборрелиозных антител проведено на прпмере анализа результатов, полученных при обследовании больных с эритемной формой ИКБ. При сравнении результатов отмечено, что с увеличением времени, прошедшего после присасывания клеща, количество проб, в которых детектируются антитела, увеличивается, а число проб, положительных в ПЦР, уменьшается. На пятой неделе после укуса число проб, в которых выявлена ДНК, достоверно меньше (р<0,05), чем число проб, в которых определены положительные титры антител. Кроме того, показано, что ДНК боррелий достоверно реже (р<0,05) выявляется в пробах с титрами антител 1:80 и выше. Подобная корреляция выявления ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s.l. методом ПЦР и определения противоборрелиозных антител IgG также показана в работах Кондрушика и Хмелевской с соавторами [131, 220].

Таким образом, на стадии раннего ИКБ до начала лечения метод ПЦР применим в комплексной диагностике заболевания наряду с иммунологическими методами анализа. Использование метода ПЦР для детекции ДНК боррелий в крови на поздних стадиях и при хроническом течении заболевания нецелесообразно.

Особый интерес представляют исследования, направленные на выявление В. miyamotoi в клещах-переносчиках, мелких млекопитающих и у больных, пострадавших в результате присасывания таежных клещей. В данной работе впервые в клещах I. persulcatus, отловленных на территории Новосибирской и Свердловской областей, обнаружены боррелии В. miyamotoi, генетически относимые к группе клещевых возвратных лихорадок. Сравнительный анализ показал, что в таежных клещах ДНК В. miyamotoi выявляется значительно реже, чем ДНК боррелий комплекса В. burgdorferi s. 1. Полученные результаты согласуются с результатами выявления В. miyamotoi в других иксодовых клещах и наиболее близки результатам, полученным в Германии при исследовании клещей I. ricinus.

Обнаружение В. miyamotoi в таежных клещах ставит вопрос о возможном инфицировании людей. Хотя патогенные свойства В. miyamotoi на сегодняшний день не изучены, детекция данного вида в клещах I. persulcatus дает основание предположить возможность попадания возбудителя человеку. Исследования, направленные на выявление В. miyamotoi в крови больных с лихорадочными состояниями и присасыванием клещей в анамнезе позволили выявить ДНК в 10,3+2,3%, а в 3,1+1,8% случаях - первичные изоляты В. miyamotoi, не способные к дальнейшему росту. Детекция В. miyamotoi в крови больных, может говорить о потенциальной патогенности данного вида боррелий. Однако для подтверждения патогенности В. miyamotoi необходимо проведение широкомасштабных исследований.

Мы также провели выявление антител с применением корпускулярного антигена, приготовленного на основе штамма 1р-21 вида В. afzelii, у больных, в крови которых выявлена ДНК В. miyamotoi. При использовании поливалентного копыогата выявлены антитела с титрами 1:40 в 33,3+11,0% случаев. Отсутствие диагностически значимых титров антител может быть объяснено как ранними сроками после присасывания клеща, так и генетической гетерогенностью В. afzelii и В. miyamotoi. Таким образом, для изучения иммунного ответа В. miyamotoi необходимо использовать штаммы или изоляты В. miyamotoi.

Полученные результаты еще раз подтверждают, что для повышения чувствительности методов детекции антител к белкам боррелий комплекса В. burgdorferi s.I. целесообразно использовать штаммы, эпидемически значимые для данной территории. Проведенное исследование показало, что на изучаемой территории циркулируют два вида боррелий комплекса В. burgdorferi s.l., представленные не только несколькими генетическими группами, но и множеством генетических вариантов, отличающихся по набору иммунодоминантных белков. Основываясь на полученных результатах, можно сделать вывод, что необходимо разрабатывать и применять многокомпонентные диагностические средства, опираясь именно на генетическую гетерогенность иммунодоминантных белков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Фоменко, Наталия Владимировна, 2008 год

1. Ананьева Л.П. Иксодовые клещевые боррелнозы (Лаймская болезнь). Экология, клиническая картина и этиология / Л.П. Ананьева // Тер. арх. — 2000. №5. — С.72-78.

2. Ананьева Л.П. Определение антиборрелиозных антител методом иммуноблоттинга при боррелиозе Лайма / Л.П. Ананьева, Е.Е. Студепцов, Э. Левин // Клин. лаб. диагп. 2002. - №6. - С. 45-47.

3. Ананьина Ю.В., Кореиберг Э.И. Вакцины против ИКБ: итоги исследования и перспективы создания / Ю.В. Ананьина, Э.И. Коренберг // Клещевые боррелиозы: Матер, науч.-практ. конф. Ижевск, 2002. С. 55-59.

4. Болезнь Лайма в Северо-Западном регионе России / Ю.В. Лобзин, B.C. Антонов, С.С. Козлов и др. // Журн. Инф. Патол. 1996. - №3. - С. 32-34.

5. Взаимоотношения компонентов паразитарных систем иксодовых клещевых боррелиозов на юге Западной Сибири / Н.Н. Ливанова, А.К. Добротворский, В.В. Панов и др. // Снб. экол. журнал. 2003. - №5. - С. 581-590.

6. Воробьёва Н.Н. Иксодовые клещевые боррелиозы / Н.Н. Воробьева // Росс. мед. журн. 2000. - №6. - С. 33-38.

7. Воробьева Н.Н. Клиника, лечение и профилактика иксодовых клещевых боррелиозов / Н.Н. Воробьева-П.: Урал-Пресс, 1998. — 136 с.

8. Воробьева Н.Н. Клинические варианты иксодовых клещевых боррелиозов в остром периоде заболевания / II.H. Воробьева, О.Н. Сумливая // Мед. паразитол. — 2003. -№4. С. 3-7.

9. Выявление новых клинических форм клещевых инфекций в Красноярском крае / С.А. Шетекаури, И.А. Ольховский, Н.М. Марьина и др. // Неврол. журн. 2005. -№3. - С. 10-13.

10. Генетические варианты Borrelia afzelii одного из возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов / И.А. Фадеева, В.В. Нефедова, Э.И. Коренберг и др. // Мол. ген. вирусол. - 2005. - №3. - С. 18-22.

11. Генетическая гетерогенность Borrelia garinii в природном очаге Среднего Урала / В.В. Нефедова, Э.И. Коренберг, Н.Б. Горелова и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. -2007. -№3. С. 139-143.

12. Генетическая характеристика патогенных для человека боррелий, изолированных от клещей Ixodes trianguliceps Bir. и Ixodes pavlovskyi Pom. / В.В. Нефедова, Э.И. Коренберг, И.А. Фадеева и др. // Мед. паразитол. 2005. - №2. - С. 9-12.

13. Гусев М.В., Минеева Л.А. Микробиология / М.В. Гусев, Л.А. Минеева. М.: Изд-во МГУ, 1985.-376 с.

14. Дифференциальная экспресс-диагностика и экстренная специфическая профилактика трансмиссивных клещевых инфекций в городе Иркутске / И.В. Козлова, В.И. Злобин, М.М. Верхозипа и др. // Бюллет. сиб. мед. 2006. - №5 Приложение 1.-С. 154-160.

15. Заболеваемость клещевым возвратным тифом в Намангане / З.И. Абидов, И.С. Васильева, Н.Р. Рахимов и др. // Мед. паразитол. 1993. -№1. - С. 32-35.

16. Зараженность иксодовых клещей боррелнями в Челябинской области / В.Н. Тарасов Э.В. Ульянченко, О.Н. Кондрашова и др. // Мед. паразитол. 2000. - №4. - С. 48.

17. Зараженность клещей Ixodes persulcatus возбудителями болезни Лайма и клещевого энцефалита одновременно / Э.И. Коренберг, С.В. Щербаков, Г.Г. Баннова и др. // Паразитол. 1990. - №2. - С. 102-105.

18. Злобин В. И. Горин О. 3. Клещевой энцефалит: Этиология, эпидемиология и профилактика в Сибири / В.И. Злобин, О. 3. Горин — Н.: Наука. Сиб. изд. Фирма РАН, 1996.- 177 с.

19. Избранные вопросы состояния клеточных факторов резистентности при клещевых природно-очаговых микст-инфекциях / Н.П. Пирогова, М.Р. Карпова, В.В. Новицкий и др. // Бюллет. сиб. мед. 2006. №5.Приложение 1. — С. 144-153.

20. Изоляция п генотипировапие Borrelia burgdorferi sensu lato из клещей в Республике Монголии / М.А. Хаснатипов, Г.А. Данчинова, С.И. Беликов // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, 2004.-№1.- 197-201.

21. Иерусалимский А.П. Клещевой энцефалит / А.П. Иерусалимский; Руководство для врачей. Н.: Гос. мед. акад. МЗ РФ, 2001. - 360 с.

22. Иммунологический гуморальный ответ у больных Лаймской болезнью / И.А. Скрипникова, Л.П. Ананьева, В.Г. Барскова и др. // Тер. арх. 1995. - №11. - С. 5356.

23. Клиника и течение безэритемной формы иксодовых клещевых боррелиозов / Н.Н. Воробьёва, Г.М. Волегова, А. Бурылов и др. // Мед. паразитол. 1995. - №3. - С. 12-15.

24. Клинико-лабораторная характеристика иксодового клещевого боррелиоза в Прибайкалье / Л.И. Черногор, Е.В. Арбатская, Г.А. Данчинова и др. // Журн. микробиол. эппдемиол. 2005. — №6. - С. 60-62.

25. Клинические варианты Лайм-боррелиоза в Кемеровской области / Л.Н. Кравчук, Э.И. Коренберг, М.И. Калинин и др. // Мед. паразитол. 1993. - № 1. - С. 29-31.

26. Клинические проявление Лайм-боррелиоза на Среднем Урале и их ассоциации с геновидами Borrelia burgdorferi / О.М. Лесняк, О.Ю. Истомина, Ш. Рипкема и др.// Тер. арх, 1997,-№5.-С. 9-12.

27. Клинические проявления и дифференциальный диагноз иксодовых клещевых боррелиозов / Л.В. Лукашова, А.В. Лепехин, Н.Г. Жукова и др. // Бюллет. сиб. мед — 2006. №5. Приложение 1. - С. 99-105.

28. Клинико-серологическое изучение болезни Лайма на Северо-Западе СССР / Л.П. Ананьева. Э.И. Коренберг, И.А. Скрипникова и др. // Мед. Паразитол. 1990. -№6. -С. 28-31.

29. Клиническая характеристика клещевого энцефалита при его сочетании с Лайм-боррелиозом / М.Л. Амосов, О.М. Лесняк, Р.Г. Образцова и др. // Вопросы вирусол. 2000.-№3,-С. 25-28.

30. Комплексная экстренная диагностика и специфическая профилактика природно-очаговых трансмиссивных клещевых инфекций в г. Иркутске / И.В. Козлова, М.М. Верхозина, М.А. Хаснатинов и др. // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН 2004. - №1. -С. 134-139.

31. Колчанова Л.П. Спонтанная зараженность клещей боррелиями и степень их индивидуальной инфицированности в различных ландшафтных подзопах Тюменской области / Л.П. Колчанова// Мед. Паразитол. 1997. — №1. - С. 49-50.

32. Коренберг Э.И. Данные по распространению болезни Лайма в СССР / Э.И. Коренберг, С.В. Щербаков, В.Н. Крючечников // Мед. паразитол. — 1987. — №1. — С. 71-73.

33. Коренберг Э.И. Иксодовые клещевые боррелиозы как группа заболеваний человека и главные итога ее изучения в России / Э.И.Коренберг // Журнал инф. патол. — 1997.-№2-3.-С. 22-24.

34. Коренберг Э.И. Инфекции группы Лайм боррелиоза иксодовые клещевые боррелиозы в России / Э.И.Коренберг // Мед. паразитол. — 1996. - №3. - С. 14-18.

35. Коренберг Э.И. Микст-инфекции, передающиеся иксодовыми клещами: современное состояние проблемы / Э.И. Коренберг // Успехи, совр. биол. — 2003. -№5.-С. 455-486.

36. Коренберг Э. И. Насонова В.А. Методические указания по эпидемиологии, диагностике, клинике и профилактике болезни Лайма / Э. И. Коренберг, В.А. Насонова М.: Наука, 1991. - 84 с.

37. Коренберг Э.И. Основные черты природной очаговоеiи иксодовых клещевых боррелиозов России / Э.И. Коренберг, Н.Б. Горелова, Ю.В. Ковалевский // Паразитол. -2002. -№3. С. 177-191.

38. Коренберг Э.И., Первые итоги и задачи изучения болезни Лайма в СССР / Э.И. Коренберг, В.Н. Крючечников, Ю.В. Ковалевский // Вестник АН СССР. — 1990. — №6.-С. 52-57.

39. Коренберг Э.И. Таксономия, филогенетические связи и области формообразования спирохет рода Borrelia, передающиеся иксодовыми клещами / Э.И. Коренберг // Успехи, совр. биол. 1996. - №116. - С. 389-406.

40. Лабораторная диагностика весеннее-летних инфекций в Екатеринбурге в эпидемический сезон клещевого энцефалита / В.Г. Мельников, Е.А. Андреева, Л.В. Власова и др.// Клин. лаб. дпагн. 1998. -№7. - С. 21-23.

41. Лесняк О.М. Лайм-боррелиоз / О.М. Лесняк Е.: Уральск, гос. мед. акад, 1999. -125 с.

42. Лесняк О.М. О классификации Лайм-боррелиоза (Лаймской болезни) / О.М. Лесняк, Е.С. Беликов // Тер. арх. 1995. -№11. - С. 49-51.

43. Мандракова Н.В. Некоторые аспекты иммунопатогенеза острых иксодовых боррелиозов в Приморском крае / Н.В. Мандракова, Е.А. Мадич // Дальнев. журн. инф. патол. 2007. - №11. - С. 90-97.

44. Матущенко А.А., Рудакова С.А. Природные очаги болезни Лайма в отдельных ландшафтных зонах Западной Сибири / А.А. Матущенко, С.А. Рудакова // Проблемы клещевых боррелиозов. М.: Наука, 1993. - С. 133-136.

45. Оберт А.С. Иксодовые клещевые боррелиозы (нозогеографические и медико-экологические аспекты) / А.С.Оберт, В.Н.Дроздов, С.А.Рудакова // Новосибирск.-Наука, 2001,- 110 с.

46. Оптимизация серологической диагностики Лайм-боррелиоза / В.В. Базарный, Корнкова М.Ю., Волкова Л.И. и др. // Клин. лаб. диагн. 2003. - №12. - С. 49-50.

47. Особенности поражения периферической нервной системы при Лайм-боррелиозе в эндемичном районе России / Н.С. Баранова, О.М. Лесняк, Р.Г.Образцова и др. // Терапевт. Архив. 1997. - №5. - С. 20-25.

48. Оценка возможностей лабораторной диагностики трансмиссивных заболеваний в Красноярском крае / С.А. Шетекаури, И.А. Ольховский, Н.М. Марьина и др. // Сиб. мед. журнал. 2004. - №5. - С. 33-36.

49. Первый случай гранулоцитарного эрлихиоза на Дальнем Востоке Российской Федерации / Ю.Н. Сидельников, О.Ю. Медянников, Л.И. Иванов и др. // Клин, мед -2003,-№8.-С. 67-68.

50. Переносчики и возбудители трансмиссивных клещевых инфекций на юге Восточной Сибири и севере Монголии / Г.А. Данчинова, М.А. Хаснатинов, О.В. Сунцова и др. // Бюллетень ВСИЦ СО РАМН. 2004. - №1. - С. 107-112.

51. Плохинский Н.А. Биометрия / Н.А. Плохинский Н.: Сиб. отд. АН СССР, 1961. -364 с.

52. Полиморфизм клинических проявлений при болезни Лайма / Е.П. Деконенко, К.Г. Уманский, Л.В. Куприянова и др. // Клин, медицина. 1991. - №4. - С. 68-70.

53. Получение рекомбинантных белков OspC и фрагмента FlaB (f-FlaB) ЗападноСибирских изолятов Borrelia garinii NT29 и исследование их иммунохимическихсвойств / B.C. Караваев, И.Д. Иванов, А.В. Рябченко и др. // Мол. генетика. 2008. — №1. — С. 18-22.

54. Покровский В.И., Лобан К.М. Руководство по инфекционным болезням / В.И. Покровский, К.М. Лобан. М.: Изд-во МГУ, 1986. - 211 с.

55. Различия в аминокислотной последовательности поверхностно-экспонированного белка Р66 у различных изолятов Borrelia afzelii / А.В. Морозов, Э.И. Коренберг, И. А. Фадеева и др. // Мол. Генетика. 2008. -№1. - С. 38-41.

56. Разнообразие паразитарных систем с участием мелких млекопитающих и Ixodes persulcatus Schuelze на Северном Урале / Н.Н. Ливанова, В.А. Рар, С.Г. Ливанов и др. // Сиб. экол. журн. 2005. - №6. - С. 1079-1084.

57. Резервуарные хозяева и переносчики боррелий-возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов в России / Э.И. Коренберг, Н.Б. Горелова, Д. Постик и др. // Журн. микробиол. эпидемиол. 1997. - №6. - С. 36-38.

58. Роль мелких млекопитающих в циркуляции боррелий в природных очагах клещевого боррелиоза на Юго-Западе Сибири / А.А. Матущенко, B.C. Венедиктов, В.В. Якименко и др. // Журн. инф. патол. 1997. - №2-3. - С. 37-39.

59. Рудакова С.А. Новые данные о генотипировании возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов в Азиатской части России и Казахстане / С.А. Рудакова, Н.В. Рудаков, Н.К. Токаревич // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2002. - №4. - С. 99101.

60. Рудакова С.А. Иксодовые клещевые боррелиозы в сочетанных природных очагах трансмиссивных инфекций Западной Сибири: Автореф. дис. докт. мед. наук: 14.00.30 / НИИПИ Омск. 2007. - 40 с.

61. Рудакова С.А. Иксодовые клещевые боррелиозы в сочетанных природных очагах Западной Сибири / С.А. Рудакова // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН. 2007. - №3. - С. 151-155.

62. Скрипникова И.А. Результаты клинико-серологического обследования 60 пациентов с болезнью Лайма / Скрипникова И.А., Ананьева Л.П., Барскова В.Г. // Тер. Арх. 1992. - №5. С. - 93-98.

63. Семенов В.А. Клиническая характеристика смешанной энцефалитно-боррелцозной инфекции у взрослых в кемеровской области / В.А. Семенов // Вестник ВолГМУ. -2005.-№2.-С. 64-66.

64. Сравнительный анализ методов лабораторной диагностики болезни Лайма на ранней стадии инфекции / М.И. Курдина, Л.П. Ананьева, Л.А. Макаренко // Клин, лаб. диагн. 2003. - №4. С. 45-46.

65. Сравнительное изучение результатов серологической диагностики Лайм-боррелпоза в реакции непрямой иммунофлюоресценции и иммуноферментпом70.