Геновидовая характеристика возбудителя клещевого боррелиоза на территории Иркутской области тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат биологических наук Хаснатинов, Максим Анатольевич

• Хаснатинов, Максим Анатольевич
• кандидат биологических наук
• 0

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Хаснатинов, Максим Анатольевич

I. ВВЕДЕНИЕ.

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Клещевой боррелиоз: этиология, структура природных очагов, эпидемиологическая хактернстнка.

1.1. Этиология.

1.2. Структура природных очагов КБ.

1.3. Особенности эпидемиологии клещевого боррелиоза.

1.4. Клинические проявления клещевого боррелиоза.

Глава 2. Методы обнаружения и идентификации возбудителя клещевого боррелиоза.

2.1. Методы фенотипирования, используемые в типировании боррелий.

2.2. Генетические методы типирования боррелий.

III. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 3. Материалы и методы.

3.1. Материалы.

3.2. Методы.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Глава 4. Анализ гена белка флагеллина.

4.1. Выбор фрагмента для анализа.

4.2. Отработка ПЦР.

4.3. ПЦР-анализ клещей и наработка специфичных фрагментов ДНК боррелий.

4.4. ПДРФ-анализ амплифицированных фрагментов.

Глава 5. Анализ гена 16S рибосомальной РНК.

5.1. Выбор фрагмента для анализа.

5.2. Отработка ПЦР.

5.3. ПЦР-анализ клещей и наработка специфичных фрагментов ДНК боррелий.

5.4. Секвнирование и филогенетический анализ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Геновидовая характеристика возбудителя клещевого боррелиоза на территории Иркутской области»

Клещевой боррелиоз (КБ) (синонимы: Лайм-боррелиоз, иксодовые клещевые боррелиозы, боррелиоз Лайма, болезнь Лайма) - это группа инфекционных трансмиссивных природноочаговых заболеваний, вызываемых спирохетами из рода Borrelia, относящимися к комплексу В. burgdorferi sensu lato. Человеку возбудитель передается главным образом при укусе иксодовых клещей. Клинически заболевание протекает с преимущественным поражением кожи, нервной системы, опорно-двигательного аппарата, сердца и характеризуется склонностью к хроническому, а также латентному течению. По уровню заболеваемости и тяжести клинического течения КБ представляет собой одну из актуальных проблем современной инфекционной патологии.

Актуальность проблемы.

В настоящее время по различиям в структуре генома выделяют 11 геновидов боррелий комплекса В. burgdorferi sensu lato - В. burgdorferi sensu stricto, В. garinii, В. afzelii, В. japonica, В. sinica, В. andersonii, В. valaisiana, В. lusitaniae, В. tanukii, В. turdi, В. bissettii (Baranton G., 1992; Nakao M., 1992; Fukunaga M., 19961; Le Fleche A., 1997; Postic D., 1998). Доказано, что три из них (В. burgdorferi sensu stricto, В. afzelii и В. garinii) патогенны для человека. Остальные 8 геновидов либо не вызывают заболевания, либо их патогенность достоверно не установлена (Strle F., 1997; van Dam А. P., 1993; Baranton G., 1992).

Каждый из трех патогенных геновидов возбудителя имеет специфические клинические проявления (Hubalek Z., 1997; Cimmino М., 1998; van Dam А. P., 1993), кроме того, во многих случаях имеет место одновременное инфицирование двумя или более геновидами боррелий (Коренберг Э.И., 1996), при этом инфекция может затрагивать целые системы органов. Это осложняет диагностику КБ по клиническим признакам.

Белковый (антигенный) спектр боррелий весьма вариабелен и может различаться не только у боррелий разных геновидов, но и среди изолятов одного геновида (Barbour A.G., 1985). Многие антигенные детерминанты внешней оболочки сходны с таковыми у боррелий других геновидов и даже некоторых бактерий из других родов. Этим объясняется возможность перекреста в иммунологических реакциях (Magnarelli L.A., 1995; Magnarelli L.A., 1990). Генетическая информация о большинстве антигенов находится в плазмидах, поэтому, потеря отдельных плазмид, например, при длительной персистенции боррелий в организме человека, обязательно влечет за собой и изменение структуры поверхностных антигенов, а значит и иммунного ответа. Все это осложняет серодиагностику КБ (Barbour A.G., 1985; Schwan, Т. G., 1988).

Генодиагностика КБ с помощью полимеразной цепной реакции теоретически позволяет обнаруживать единичные клетки возбудителя. Она основана на гибридизации олигонуклеотидов-затравок (праймеров) с мишенью - последовательностью нуклеотидов, специфичной для генома детектируемого микроорганизма. У разных геновидов боррелий, а иногда и у разных штаммов одного геновида, одни и те же фрагменты генома часто имеют различную структуру. При несоответствии мишени и праймера чувствительность ПЦР резко падает (Лобзин Ю.В., 2000). Для того, чтобы разработать ПЦР-диагностикум с достаточной чувствительностью, необходима информация о генетическом (прежде всего геновидовом) разнообразии боррелий на каждой эндемичной по КБ территории. Кроме того, такие данные позволят судить о том, какие клинические проявления КБ могут встречаться в данном регионе и на что надо обращать особое внимание при первичном приеме больных в медицинских учреждениях.

На территории России проведена существенная работа по выяснению геновидового разнообразия боррелий. Так, Э.И. Коренберг с соавторами (Коренберг Э.И., 1997; Горелова Н.Б., 1996) исследовали 327 изолятов боррелий из Ленинградской, Ярославской, Курганской, Пермской, Свердловской, Тюменской, Новосибирской, Сахалинской областей, Ставропольского, Алтайского, Красноярского Приморского, и Хабаровского краев. Известны работы по Среднему Уралу (Lesnyak О, 1998) и Российскому Дальнему Востоку (Sato Y., 1996; Masuzawa Т., 1997).

Упомянутые выше работы выявили, что на территории России циркулирует 4 геновида боррелий - В. afzelii, В. garinii, В. valaisiana и В. lusitaniae. Недавно в Северо-Западных регионах России были обнаружены боррелии геновида В. burgdorferi sensu stricto (Masuzava Т., 2001; Gorelova N. В, 2001).

В Прибайкалье клещевой боррелиоз известен с 1991 г. (Ананьева Л.П., 1991) а планомерное изучение циркуляции возбудителя КБ идет с 1992г. (Солнцев И.Г., 1992; Солнцев И.Г., 1993; Горин О.З., 1996). В 1997г., под руководством 0.3. Горина, был установлен геновид боррелий из клеща, присасывание которого вызвало заболевание нейроборрелиозом. Это оказалась В. garinii (Горин О.З., 1998). С тех пор считалось, что возбудителем КБ на территории Иркутской области является В. garinii. Однако вопрос о существовании геновидового разнообразия боррелий в природных очагах Прибайкалья остался открытым.

Цель и задачи работы. Цель работы состояла в том, чтобы на основе анализа первичной структуры фрагментов генома установить геновидовую принадлежность боррелий в клещах и выяснить, существует ли генетическое разнообразие возбудителей КБ на территории Иркутской области.

Для этого необходимо было решить следующие задачи:

1. Выбрать участок генома, подходящий для установления геновидовой принадлежности боррелий;

2. Отработать метод полимеразной цепной реакции (ПЦР) для амплификации выбранных участков генома боррелий с целью обнаружения их в иксодовых клещах;

3. Проанализировать с помощью ПЦР на наличие ДНК боррелий клещей I. persulcatus, отловленных в природных очагах КБ;

4. С помощью ПЦР наработать из отловленных клещей и архивных материалов специфичные фрагменты генома боррелий в достаточных для дальнейших исследований количествах;

5. Установить первичную структуру ДНК полученных участков генома боррелий;

6. Проанализировать полученные последовательности с использованием филогенетичеких программ, установить геновидовую принадлежность боррелий в исследованых образцах и оценить их роль в эпидемическом процессе.

Научная новизна и практическая значимость работы. В представленной работе впервые на территории Иркутской области с помощью молекулярно-биологических методов было доказано обитание в природных сообществах двух различных геновидов боррелий, вызывающих заболевание человека клещевым боррелиозом - В. garinii и В. afzelii.

Впервые в Восточной Сибири в клещах I. persulcatus были обнаружены боррелии, по структуре ДНК фрагмента гена 16S рибосомальной РНК сходные с непатогенными геновидами В. lusitaniae и В. bissettii.

Впервые отработаны подходы к амплификации фрагментов ДНК и генотипированию боррелий из архивных материалов - фиксированных и окрашенных мазков содержимого кишечника клещей. 9

Установлена последовательность нуклеотидов фрагмента гена 16S рРНК длиной 337 нуклеотидов для шести образцов боррелий, обнаруженных в клещах I. persulcatus, отловленных на территории Иркутской области.

Использованные в работе праймеры и подходы к ПЦР-анализу могут послужить основой для создания ПЦР-тестсистемы для обнаружения ДНК боррелий в иксодовых клещах и клинических материалах.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. На территории Иркутской области, по данным молекулярно-генетических исследований, существует геновидовое разнообразие возбудителей клещевого боррелиоза.

2. В природных очагах клещевого боррелиоза в Иркутской области обитает два различных геновида боррелий, вызывающих заболевание человека клещевым боррелиозом - В. afzelii и В. garinii.

3. В клещах I. persulcatus, отловленных в Иркутской области, обнаружены боррелии не относящиеся к геновидам с доказанной патогенностью.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Хаснатинов, Максим Анатольевич

ВЫВОДЫ

1. Доказано, что в природных очагах КБ на территории Иркутской области существует геновидовое разнообразие возбудителей этого заболевания - боррелий комплекса В. burgdorferi sensu lato.

2. Определена первичная нуклеотидная последовательность фрагмента гена 16S рРНК длиной 337 п.н. из шести образцов ДНК боррелий, обнаруженных в клещах I. persulcatus, обитающих в биоценозах южной части Иркутской области.

3. Установлено, что, по данным филогенетического анализа шести прочитанных последовательностей, 3 образца относятся к геновиду В. garinii, четвертый образец относится к геновиду В. afzelii. Пятый образец формирует отдельную ветвь, близкую к кластеру В. afzelii. Шестой образец формирует отдельную ветвь, имеющую общее происхождение с кластерами геновидов В. garinii, В. tanukii, В. luisitaniae.

4. Доказано, что в природных очагах КБ на территории Иркутской области циркулирует по меньшей мере 2 вида боррелий, вызывающих заболевание человека КБ - В.garinii и В. afzelii.

5. Разработаны праймеры, фланкирующие вариабельный фрагмент гена флагеллина боррелий длиной 689 п.н., который позволяет генотипировать изоляты и штаммы боррелий с помощью анализа полиморфизма длины рестриктных фрагментов.

6. Разработаны схема ПЦР-анализа и праймеры, фланкирующие фрагмент гена 16S рРНК боррелий длиной 920 п.н., пригодные для детекции генетического материала боррелий в клещах с помощью ПЦР и дальнейшего его генотипирования.

92

ОТ АВТОРА

Автор выражает искреннюю благодарность своему первому научному руководителю и наставнику |Олегу Захаровичу Горину), который был инициатором и вдохновителем этой работы.

Автор также глубоко признателен директору ЛИН СО РАН, член-корр. РАН Грачеву М.А. за предоставление возможности выполнения молекулярно-генетической части исследования, С.А. Клеру за синтез олигонуклеотидов, О.В. Стронину за предоставление нетипированного изолята боррелий, а также О.В. Сунцовой, Г.А. Данчиновой, Л.И. Черногор, Н.В. Кулаковой, С.Э. Дигас, Л.А. Беликовой, И.М. Старицыну за помощь и поддержку, Н.Н. Деникиной, Ю.П. Джиоеву и И.В. Козловой за ценные замечания по тексту диссертации.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Цель нашей работы заключалась в том, чтобы установить, существует ли гетерогенность населения боррелий на территории Иркутской области. Необходимость подобной работы обусловлена целым рядом факторов. Клещевой боррелиоз широко распространен во всем мире, ежегодно только по России отмечается до 7,5 тысяч случаев заболевания человека. Возбудителями этого инфекционного заболевания являются спирохеты относящиеся к роду Borrelia и выделяемые в комплекс В. burgdorferi sensu lato. Существует 11 геновидов этих микроорганизмов. Они отличаются по биологическим, генетическим, антигенным свойствам и играют разную роль в эпидпроцессе КБ. Человеку возбудитель КБ передается при укусе иксодовых клещей. Учитывая то, что в Иркутской области основным переносчиком боррелий является I. persulcatus, а также то, что из 11 геновидов в тканях больных обнаруживали только три, было решено исследовать генетическое разнообразие именно боррелий, инфицирующих клещей I. persulcatus. Только в этом случае мы могли быть уверены в том, что охватим весь спектр геновидов, которые могут иметь значение для патологии человека. Ведь при исследовании боррелий от больных КБ мы не смогли бы выявить те геновиды, которые не вызывают острых форм заболевания, чья патогенность для человека до сих пор не установлена.

Геновиды боррелий выделяют на основе различий в структуре генома. Именно поэтому мы прибегли к молекулярно-генетическим методам исследований. Кроме того, использованная нами тактика ПЦР-амплификации характерных фрагментов генома позволяет анализировать микроорганизмы находящиеся в клещах, минуя дорогостоящую, трудоемкую стадию изоляции возбудителя.

На основе литературных данных для исследования были выбраны гены 16S рРНК и флагеллина. Сравнив опубликованные последовательности этих генов 11 геновидов боррелий комплекса В. burgdorferi sensu lato мы выбрали фрагменты, общие у всех боррелий и синтезировали комплементарные им праймеры. Далее мы проанализировали фланкированные этими праймерами фрагменты и выяснили, что они отражают геновидовые характеристики боррелий комплекса В. burgdorferi sensu lato. Затем в нескольких районах Иркутской области были отловлены клещи I. persulcatus а из материалов Центра диагностики и профилактики трансмиссивных инфекций при Институте эпидемиологии и микробиологии НЦМЭ ВСНЦ СО РАМН были отобраны препараты содержимого кишечника клещей и суспензии клещей после проведения иммуноферментного анализа на зараженность вирусом клещевого энцефалита, которые заведомо содержали боррелий. Из всех этих материалов выделяли суммарную ДНК. Далее проводили ПЦР-анализ этих образцов. Фрагменты ДНК ожидаемого размера выделяли, клонировали в плазмидном векторе и секвенировали. Полученные последовательности анализировали с помощью филогенетических методов.

В результате этой работы на территории Иркутской области выявлено генетическое разнообразие возбудителей КБ. Обнаружены боррелии, принадлежащие геновидам В. garinii (образцы 7Савватеевка, 3342, 17Б) и В. afzelii (1524). Результаты недавних исследований Н.Г. Косых (Косых Н.Г., 2001, 1998, 1999.) и Л.И. Черногор (Черногор, 1998), показывают, что в Иркутской области имеют место ярко выраженные региональные особенности клинического течения КБ. Эта инфекция в Прибайкалье характеризуется, прежде всего, преобладанием неврологических форм заболевания. Раньше это объясняли тем, что возбудителем КБ на территории области является только В. garinii (Черногор Л.И., Горин 0.3., Косых Н.Г., и т.д.). Однако наши исследования показали, что в природных очагах КБ в Иркутской области циркулируют и другие геновиды боррелий. Это прежде всего В. afzelii, который чаще других геновидов ассоциирован с поражениями кожных покровов. Полученные данные наводят на мысль о том, что спектр клинических проявлений КБ в Прибайкалье может быть гораздо шире, чем принято считать. С этой точки зрения целесообразными кажутся рекомендации клиницистов при диагностике КБ обращать внимание, прежде всего, на факт укуса больного клещом (Косых Н.Г., 2001). Также, на наш взгляд, необходимо тщательное обследование на КБ больных с хроническими заболеваниями кожных покровов.

Другим результатом нашей работы является то, что обнаружены боррелии, по своим генетическим свойствам сходные с геновидами боррелий, чье влияние на здоровье человека до сих пор не выяснено - В. japonica, В. lusitaniae, В. tanukii, В. bissettii. Это образцы 3746 и 2 Новоодинск. Первичная нуклеотидная структура фрагмента гена 16S рРНК этих образцов наводит на мысль о том, что, вероятно, на территории Иркутской области обитают либо ранее не отмечавшиеся в Северной Азии виды боррелий (например В.valaisiana), либо даже новые геновиды боррелий, эпидемическое значение которых совершенно не известно.

На возможность обитания ранее не известных геновидов боррелий в Восточно-Сибирском регионе косвенно указывают данные зарубежных исследователей. Так, в конце 90-х годолв XX века в Азии (Zhang, Z. F., 1997; Liang, J. G., 1996; Masuzawa T, 1999), Европе (Wang G2., 1999) и Северной Америке (Mathiesen D.A., 1997) был выделен ряд атипичных штаммов, некоторые из которых нельзя отнести ни к одному из 11 геновидов. По мнению G. Wang и др., это может означать, что по мере увеличения числа изолятов из разных географических мест и разных биологических источников число геновидов боррелий группы В. burgdorferi sensu lato будет увеличтваться (Wang G., 1999; Anthoissen F.M., 1994). Более точно определить вид подобных образцов и всесторонне их охарактеризовать можно лишь при культивировании этих бактерий. Для этого на территории Иркутской области необходимо проведение масштабных работ по изоляции боррелий, по крайней мере, из клещей. Особое внимание следует обратить на присаянские районы области -Ангарский, Зиминский, Иркутский. Помимо наших данных об обнаружении в клещах, отловленных в Ангарском районе, боррелий с нетипичной нуклеотидной структурой фрагментов гена 16S рРНК, эти районы характеризуются высокой напряженностью очагов КБ. По данным Л.И. Черногор, средняя многолетняя заболеваемость КБ в этих районах составляет 6,5 - 21,8 случаев на 100 тыс. населения (в среднем по области - 5,9). Территории этих районов отнесены к Присаянско-Ангарскому ландшафтно-эпидемиологическому району с высокой степенью опасности по КБ (Л.И. Черногор, 1998). Влияние гетерогенности населения боррелий на эпидпроцесс КБ в присаянских природных очагах этого заболевания неясно.

Использованные в нашей работе подходы можно применять для детекции боррелий в клещах I. persulcatus с помощью ПЦР-анализа с праймерами к гену 16S рРНК боррелий. В настоящее время в профилактике и диагностике КБ существует проблема выявления инфицированности боррелиями напитавшихся клещей. При использовании микроскопии (в любом варианте - темнопольная или окрашенных мазков) различить боррелий на фоне сплошного слоя клеток крови практически невозможно. Даже если клещ начал питание сравнительно недавно -несколько часов назад - в его кишечнике уже назходится достаточно крови, чтобы существенно затруднить обнаружение боррелий. В практике Центра диагностики и профилактики КЭ и КБ за сезон поступает до 500 таких клещей. Всем пострадавшим от их укусов назначается профилактический курс антибиотиков вне зависимости от инфицированности клеща боррелиями. 50-70% из них могли бы избежать этих мероприятий, если бы была надежная ПЦР-тестсистема для детекции ДНК боррелий в клещах. Результаты этой работы послужат основой для создания такой тестсистемы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Хаснатинов, Максим Анатольевич, 0 год

1. Акимов И.А., Небогаткин И.В. Иксодовые клещи и болезнь Лайма в Украине.//Вестн.зоол.- 1995.-№1.- С.73-75.

2. Алексеев А.Н., Арумова Е.А., Буренкова Л.А. и др. Об особенностях распространения возбудителя болезни Лайма и поведения зараженных им клещей рода Ixodes.// Паразитология, 1993.- Т. 27, вып. 6. С. 389-398.

3. Ананьева Л.П., Сотыбалдыев A.M., Скрипникова И.А. и др. Описание случая болезни Лайма в Восточной Сибири.// Мед. Паразитол. и паразитарные болезни.-1991.- №4.- С. 13-14,

4. Балашов Ю.С. Иксодовые клещи паразиты и переносчики инфекций.-СПб.: Наука, 1998.- 287С.

5. Балашов Ю.С. Место иксодовых клещей в лесных экосистемах.// Паразитология.- 1996.-Т.30 Вып.З.- С.193-203.

6. Васильева И.С., Наумов Р.Л. Паразитарная система болезни Лайма, состояние вопроса. Сообщение 1. Возбудители и переносчики.// Acarina.-1997.- 4 (1-2):53-75.

7. Горелова Н.Б., Коренберг Э.И., Ковалевский Ю.В., Постик Д., Барантон Г. Изоляция боррелий от клеща I. trianguliceps и возможное значение этого вида в эпизоотологии иксодовых клещевых боррелиозов.// Паразитология., 1996.-30, 1, С. 13-18.

8. Горин 0.3., Злобин В.И., Арбатская Е.В. и др. Актуальные проблемы эпидемиологии и профилактики трансмиссивных инфекций в Сибири // Журн. инфекционной патологии. Иркутск, 1996. - Т.З, №4. - С. 10-12.

9. Ю.Ковалевский Ю.В., Коренберг Э.И., Дауйотас С.В. Оценка различных способов приготовления витальных препаратов для выявления боррелий у иксодовых клещей.// Мед. Паразитол. и паразитарные болезни.-1990, №1.-С. 33-35.

10. Ковалевский Ю.В., Коренберг Э.И., Кутлина Т.В., Устинова О.А. Нормы просмотра препаратов при исследовании нимф иксодовых клещей методом темнопольной микроскопии в очагах боррелиозов.//, Мед. Паразитол. и паразитарные болезни. 1996, №4.- С.18-21.

11. Козлов С.С. Лайм-боррелиоз в Северо-Западном регионе России.// Автореф. Дис. Докт. Мед. Наук. СПб, 1999.- С.16-17.

12. Колчанова Л.П. Спонтанная зараженность клещей боррелиями истепень их индивидуальной инфицированности в различных ландшафтных подзонах Тюменской области.// Мед. Паразитол. И паразитарные болезни.- 1997.- №1.- С. 49-50.

13. Коренберг Э.И. Болезнь лайма.// Мед. паразитол. и паразитарные болезни. -1993,- №1.- С.48-51.

14. Коренберг Э.И. Границы ареала и его тип // Таежный клещ I. persulcatus.-Л.: Наука,1985.-С.188-199.

15. Коренберг Э.И. Инфекции группы Лайм боррелиоза иксодовые клещевые боррелиозы в России.// Мед. Паразитол. и паразитарные болезни.- 1996.- №3.- С. 14-18.

16. Коренберг Э.И., Горелова Н.Б., Постик Д. и др. Резервуарные хозяева и переносчики боррелий возбудителей иксодовых клещевых боррелиозов в России.// Журн. Микробиол. Эпидемиол. И Иммунол., 1997.- №6, С.36-38.

17. Коренберг Э.И., Ковалевский Ю.В. Кузнецова Р.И. и др. Выявление и первые результаты изучения болезни Лайма на Северо-западе СССР// Мед. Паразитол. и паразитарные болезни.- 1988.- №1.-С.45-48.

18. Косых Н.Г., Котова Н.В., Хабудаев В.Л. и др. Клиническая характеристика болезни Лайма в городе Иркутске.// В кн. "Актуальные вопросы инфекционной патологии". Иркутск, 1993.- №1.- С. 32-35.

19. Косых Н.Г., Эпидемиологические и клинико-патогенетические аспекты иксодового клещевого боррелиоза в Восточной Сибири.// Дис. канд. биол. Наук. Иркутск,- 2001.

20. Кулакова Н.В.,Беликов С.И.,Дигас С.Э., Валеева Д.С. Разработка ПЦР-диагностикума вируса краснухи. // Журнал инфекционной патологии.-Иркутск, 2001. Т.8. - №1. - С. 27-31.

21. Кумарев В.П., Беликов С.И., Кобзев В.Ф., и др. Способ синтеза олиго(поли)нуклеотидов и устройство для его осуществления.// АС № 1773916.- 1992.- 11С.

22. Лесняк О.М., Клинико-эпидемиологические закономерности Лайм-боррелиоза на Среднем урале.// Автореф дисс.докт.мед. наук. М., 1995.- 51С.

23. Лобзин Ю.В., В.С.Антонов, С.С.Козлов. Болезнь Лайма клещевой боррелиоз. // Санкт-Петербург.- 1996.

24. Манниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование (пер. с англ.). М.: Мир, 1984.- 480 е., ил.

25. Методические указания по эпидемиологии, диагностике, клинике и профилактике болезни Лайма. Под ред. Коренберга Э.И. М., 1991.-61 С.

26. Москвитина Г.Г., Коренберг Э.И., Горбань JI.A. Присутствие боррелий в кишечнике и слюнных железах спонтанно зараженных взрослых клещей Ixodes persulcatus schulze при кровососании// Мед. Паразитол. И паразитарнные болезни.- 1995.-№3.- С.16-20.

27. ЗО.Остерман JI.A. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот.// М.: Наука, 1981.-285 С.

28. Солнцев И.Г., Горин О.З., Иванова Н.И. Результаты серологического исследования на Лайм-боррелиоз в Иркутской области.// Бюлл. Сиб. О. РАМН.- Новосибирск, 1993.- №4.- С.55-56.

29. Солнцев И.Г., Горин О.З., Лопина Н.И. Результаты исследований на Лайм-боррелиоз в Иркутской области.// Сб. науч. работ. -Иркутск, 1992.- С. 100102.

30. Тарасов В.Н., Г.Н. Бобровская, О.Н. Кондрашова, Э.В. Ульянченко, Н.Г. Оселедчик. Болезнь Лайма в Челябинской области (1991-1998).// Эпидемиология и инфекционные болезни, №4,2000, С.- 16-17.

31. Филипова Н.А. Иксодовые клещи подсемейства Ixodidae.// Паукообразные. Фауна СССР.- Л.: Наука, 1977.- Т.4, вып.4.- 396С.

32. Филиппова Н.А. Таксономические аспекты переноса возбудителя болезни Лайма.// Паразитология Т. 24, вып. 4. С.257-266.

33. Черногор Л.И. Эпидемиологические особенности клещевого боррелиоза в Предбайкалье. // Дис. канд. биол. Наук. Иркутск.- 1999, С.59.

34. Amerasinghe FP, Breisch NL, Azad AF, et al Distribution, density, and Lyme disease spirochete infection in Ixodes dammini (Acari: Ixodidae) on white-tailed deer in Maryland.// J Med Entomol, 1992 Jan.- 29(1):54-61.

35. Anderson, J. F. Epizootiology of Lyme borreliosis.// Scand. J. Infect. Dis., 1991.- Suppl. 77:23-34.

36. Angelov LL, Rakajeva ТА, Gancheva TR, et al. 1996. Non-transmission mechanism of infection in Lyme borreliosis.// VII Int. Congr. Lyme borreliosis. San Francisco. California. 1996.- Abstracts. P.l 12.

37. Anthoissen FM, M. De Kesel, PP Hoet, GH Bigaignon. Evidence for the involvment of different genospecies of Borrelia in the clinical outcome of Lyme disease in Belgium // 1994. Res. Microbiol. 145: 327-331.

38. Artsob H., Garvie M., Cawthorn RJ et al. Isolation of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi, from Ix. dammini (Acari: Ixodidae) collected at Prince Edward Island, Canada // J.Med.Entomol.- 1992.- Vol.29, №6.- P. 1063-1066.

39. Assous M, Postic D, Baranton G. Clnical and eidemiological implications of Borrelia burgdorferi sensu lato taxonomy.// In: Y. Yanagihara, T. Masuzawaed.), "Proceeding of the International Symposium on Lyme Disease in Japan".-p.148-162.

40. Assous M, Postic D,Paul G, Nevot P, Baranton G. Western blot analysis of sera from LB patients according to the genomic secies of the Borrelia strains used as antigens // Eur J Clin Microbiol Infect Dis., 1993 Apr.- 12(4):261-8.

41. Balmelli T, Piffaretti JC. Association between different clinical manifestations of Lyme disease and different species of Borrelia burgdorferi sensu lato.// Res Microbiol., 1995 May.- 146(4): 329-40.

42. Baranton G, Assous M, Postic D. Three bacterial species associated with Lyme borreliosis. CLinical and diagnostic implications.// Bull Acad Natl Med. 1992 Oct.- 176(7): 1075-85; discussion 1085-6. French.

43. Barbour AG Plasmid analysis of Borrelia burgdorferi, the Lyme disease agent.// J.Clin.Microbiol., 1988.- 26: 475 478

44. Barbour, A. G., and S. F. Hayes. Biology of Borrelia species.// Microbiol. Rev., 1986.- 50:381-400 121.

45. Barbour, A. G., Heiland R. A., and Howe T. R. Heterogeneity of major proteins in Lyme disease borreliae: a molecular analysis of North American and European isolates.// J. Infect. Dis., 1985.- 152:478-484.

46. Baumgarten BU, Rollinghoff M, Bogdan С Prevalence of Borrelia burgdorferi and granulocytic and monocytic ehrlichiae in Ixodes ricinus ticks from southern Germany.// J Clin Microbiol., 1999 Nov.- 37(11):3448-51.

47. Belfaiza, J., D. Postic, E. Bellenger, G. Baranton, and I. Saint Girons. Genomic fingerprinting of Borrelia burgdorferi sensu lato by pulsed-field gel electrophoresis.//J. Clin. Microbiol., 1993.-31:2873-2877.

48. Belfaiza, J., Postic, D., and G. Baranton. 1994. Molecular fingerprinting and phylogeny of Borrelia burgdorferi sensu lato.// In: Y. Yanagihara, and T.

49. Masuzawa (ed.), Proceeding of the International Symposium on Lyme Disease in Japan 1994.- p. 133-147.

50. Berglund, J., R. Eitrem, K. Ornstein, A. Lindberg, A. Ringer, H. Elmrud, M. Carlsson, A. Runehagen, C. Svanborg, and R. Norrby. An epidemiologic study of Lyme disease in southern Sweden.//N. Engl. J. Med., 1995.- 333:1319-1327

51. Bergmann J., Liebisch A., Pohlmeyer K. Borreliose Zum Vor Kommen der einheimischen Moor.// Vet.,1992.-Vol.7, №2.- P. 12-15.

52. Boye K, Hogdall E, Borre M.Identification of bacteria using two degenerate 16S rDNA sequencing primers.// Microbiol Res., 1999 May.- 154(l):23-6.

53. Bretz AG, Ryffel K, Hutter P, Dayer E, Peter O. Specificities and sensitivities of four monoclonal antibodies for typing of Borrelia burgdorferi sensu lato isolates.// Clin Diagn Lab Immunol., 2001 Mar.- 8(2):376-84.

54. Christen, H. J., F. Hanefeld, H. Eiffert, and R. Thomssen. Epidemiology and clinical manifestations of Lyme borreliosis in childhood. A prospective multicentre study with special regard to neuroborreliosis.// Acta Paediatr. Suppl. 1993.-386:1-75.

55. Cimmino, M. A. 1998. Relative frequency of Lyme borreliosis of its clinical manifestations in Europe. Infection 26:298-300.

56. Clover JR, Lane RS Evidence implicating nymphal Ixodes pacificus (Acari: ixodidae) in the epidemiology of Lyme disease in California.// Am J Trop Med Hyg 1995 Sep.- 53(3):237-40.

57. Doby JM, Chevrier S., Covatarmanach A. La spirochetose a tignes par Borrelia burgdorferi chez les chines dans Louset de la France.// Rec. Med. Vet., 1988.-Vol. 164, №5.-P.365-377.

58. Doyle, J.J., and Dickson E. reservation of plant sampels for DNA restriction endonuclease analysis.//Taxon. 36,1987.- C.715-722

59. Dressier F, Ackermann R, Steer AC. Antibody responses to the three genomic groups of Borrelia burgdorferi in European Lyme borreliosis // J. Infect. Dis., 1994, 169: 313-318.

60. Dykhuizen, D. E., D. S. Polin, J. J. Dunn, B. Wilske, V. Preac-Mursic, R. J. Dattwyler, and B. J. Luft. Borrelia burgdorferi is clonal: implications for taxonomy and vaccine development.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1993.90:10163-10167.

61. Fish D., Dowles R.S., Host associations of ticks (Acari: Ixodidae) parasiting medium-sized mammals in a Lyme disease endemic area of southern New York.// J Med Entomol. 1989 May.- 26(3):200-9.

62. Fraser, С. M., S. Casjens, W. M. Huang, G. Et al. Genomic sequence of a Lyme disease spirochaete, Borrelia burgdorferi./! Nature, 1997.- 390:580-586.

63. Fukunaga M. , A. Hamase, K. Okada, and M. Nakao. Borrelia tanukii sp. nov. and Borrelia turdae sp. nov. found from ixodid ticks in Japan: rapid species identification by 16S rRNA gene-targeted PCR analysis.// Microbiol. Immunol., 1996.- 40:877-881.

64. Fukunaga M.3, Okada К, Nakao M. Phylogenetic analysis of Borrelia species based on Flagellin gene sequences and its application for molecular typing of Lyme Disease Borreliae.// Int.J.Syst.Bacteriol., Oct. 1996, p. 898-905.

65. Fukunaga M4, Y Koreki, A phylogenetic analysis of Borrelia burgdorferi Sensu Lato isolates associated with Lyme disease in Japan by Flagellin gene sequence determination.// Int J Sys Bacterid., Apr 1996.- Vol 46, №2, p.416-421.

66. Fukunaga, M., M. Sohnaka, and Y. Yanagihara. Analysis of Borrelia species associated with Lyme disease by rRNA gene restriction fragment length polymorphism.//J. Gen. Microbiol., 1993,- 139:1141-1146.

67. Fukunaga, M., Y. Yanagihara, and M. Sohnaka. The 23S/5S ribosomal RNA genes (rrl/rrf) are separate from the 16S ribosomal RNA gene (rrs) in Borrelia burgdorferi, the aetiological agent of Lyme disease.// J. Gen. Microbiol. 1992.138:871-877.

68. GenBankhttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=Nucleotide

69. Gorelova N.B., Postic D., Korenberg E.I., et al. 1996. Borrelia genospecies mixture in ticks and small mammals from natural foci.// VII Int. Congr. Lyme borreliosis. San Francisco. California. 1996.- Abstracts. P. 20.

70. Gorelova, N. В., Korenberg, E. I., Postic, D., Iunicheva, I. V., Riabova Т.Е. The first isolation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in Russia.// Zh Mikrobiol Epidemiol Immunobiol, 2001 Jul-Aug.- №4 p. 10-12.

71. Grandstorm M. Tick-borne zoonoses in Europe.// J.Clin.Microbiol. and Infection., 1997.- Vol.3, № 2.- P. 156-169.

72. Guillemette J.G. and Lewis P.N. Detection of subnanogram quantities of DNA and RNA on native and denaturing polyacrylamide and agarose gels by silver staining.//Electrophoresis 1983.- №4, P.92-94.

73. Guy EC, Stanec G. Detection of Borrelia burgdorferi in patients with Lyme disease by the polymerase chain reaction. J Clin Pathol. 1991 Jul;44(7):610-1.

74. Halperin, J. J. North American Lyme neuroborreliosis.// Scand. J. Infect. Dis. Suppl. 1991.- 77:74-80.

75. Hanahan D, Techniques for transformation of E. coli.// DNA cloning, V.l/ Ed.M.Glover.- Oxford, Washington DC:IRL. Press,1985.- P109-136.

76. Hayes S.F., Burgdorfer W. Ultrastructure of Borrelia burgdorferi.// In: Aspects of Lyme borreliosis, Weber K., Burgdorfer W (Eds.) Springer-Verlag, Berlin Heidelberg, 1993.- p.29-43.

77. Heiman M., Webcutter.// 1997, http://www.firstmarket.com/cutter/cut2.html.

78. Hendson M, Lane RS Genetic characteristics of Borrelia coriaceae isolates from the soft tick Ornithodoros coriaceus (Acari: Argasidae).// J Clin Microbiol. 2000 Jul.-38 (7):2678-82.

79. Hu CM, Leuba-Garcia S, Kramer MD, Aeschlimann A, Gern L Comparison in the immunological properties of Borrelia burgdorferi isolates from Ixodes ricinus derived from three endemic areas in Switzerland.// Epidemiol Infect 1994 Jun.- 112(3):533-42.

80. Ни, С. M., L. Gern, and A. Aeschlimann. Changes in the protein profile and antigenicity of different Borrelia burgdorferi strains after reintroduction to Ixodes ricinus ticks.//Parasite Immunol., 1992.- 14:415-427.

81. Hubalek, Z., and J. Halouzka. Distribution of Borrelia burgdorferi sensu lato genomic groups in Europe, a review.// Eur. J. Epidemiol. 1997.- 13:951-957.

82. Hudson BJ, Stewart M, Lennox VA, Fukunaga M, Yabuki M, Macorison H, Kitchener-Smith J.// Culture-positive Lyme borreliosis., 1998.- Med.J.Aust. Vol 168, №10 p.500-502.

83. Hulinska D, Votypka J, Valesova M. Persistence of Borrelia garinii and Borrelia afzelii in patients with Lyme arthritis.// Zentralbl Bakteriol., 1999 Jul.-289(3):301-18.

84. Humair, P. F., D. Postic, R. Wallich, and L. Gern. An avian reservoir (Turdus merula) of the Lyme borreliosis spirochetes.// Zentbl. Bakteriol., 1998.287:521-538.

85. Ishiguro F, Takada N, Masuzawa T, Fukui T. Prevalence of Lyme disease Borrelia spp. in ticks from migratory birds on the Japanese mainland.// Appl Environ Microbiol. 2000 Mar.- 66(3):982-6.

86. Johnson, R. C. 1984 Borrelia burgdorferi sp. nov.: etiological agent of Lyme disease.// Int. J. Syst. Bacteriol. 34:496-497.

87. Junttila Jula и др. Prevalence of В. burgdorferi in selected tick populations in Finland // Scand. J. Infect. Dis.- 1994.-26,№3.- C.349-355.

88. Junttila Jula и др. Prevalence of В. burgdorferi in selected tick populations in Finland // Scand. J. Infect. Dis.- 1994.- 26, №3.- C.349-355.

89. Kimura M. A simple method for estimating evolutionary rates of base substitutions through comparative studies of nucleotide sequences.// J. Mol. Evol. 1980.- №16, pi 11-120.

90. Kraiczy P., Acker G., Brade V. Characteristics of the pathogen.// In: Lyme borreliosis and tick-borne encephalitis. P. Oschmann, P. Kraiczy, J. Halperin, V. Brade. 1999.- Bremen, Germany.- P. 20-30.

91. Lane RS, Piesman J, Burgdorfer W. Lyme borreliosis relation of its causative agent to its vectors and hosts in North America and Europe.// Annu. Rew. Entomol., 1991.- Vol.36, P.587-609.

92. Lawrence RH, Bradburi R, Cullin JS. Lyme disease on the NSW central coast letter.//Med.J.Aust 1986; 145:364.

93. Le Fleche, A., D. Postic, K. Girardet, O. Peter, and G. Baranton. Characterization of Borrelia lusitaniae sp. nov. by 16S ribosomal DNA sequence analysis.// Int. J. Syst. Bacteriol, 1997.- 47:921-925.

94. Lesnyak O, Laikovakaya E, Kufko I, et al. Clinical features of Lyme borreliosis in the middle Urals and distribution of Borrelia burgdorferi sensu lato species in local Ixodes persulcatus ticks.// Zentralbl. Bakteriol. 1998 Jul.-288(1): 111-9.

95. Liang JG, Zhang ZF. Analisis of rRNA gene restriction pattern of Borrelia burgdorferi isolated in China.// VII Int. Congr. Lyme borreliosis. San Francisco. California. 1996.- Abstracts. P.9.

96. Liang, J. G., and Z. F. Zhang. Analysis of rRNA gene restriction fragment length polymorphism of B. burgdorferi sensu lato isolated in China.// Chin. J. Microbiol. Immunol. 1996.- 16:359-362.

97. Liebisch, G., B. Sohns, and W. Bautsch. Detection and typing of Borrelia burgdorferi sensu lato in Ixodes ricinus ticks attached to human skin by PCR.// J. Clin. Microbiol., 1998.- 36:3355-3358.

98. Liveris, D., A. Gazumyan, and I. Schwartz. Molecular typing of Borrelia burgdorferi sensu lato by PCR-restriction fragment length polymorphism analysis.// J. Clin. Microbiol., 1995.- 33:589-595.

99. Magnareili LA, Anderson JF, Ticks and biting insects infected with etiologic agent of Lyme disease Borrelia burgdorferi.// J Clin Microbiol. 1988 Vol 26. №8. P. 1482-1486.

100. Magnareili, L. A. Current status of laboratory diagnosis for Lyme disease.// Am. J. Med. 1995.- 98:10S-12S.

101. Magnareili, L. A., J. N. Miller, J. F. Anderson, and G. R. Riviere. Cross-reactivity of nonspecific treponemal antibody in serologic tests for Lyme disease.//J. Clin. Microbiol., 1990.- 28:1276-1279.

102. Marconi, R. Т., L. Lubke, W. Hauglum, and C. F. Garon. Species-specific identification of and distinction between Borrelia burgdorferi genomic groups by using 16S rRNA-directed oligonucleotide probes.// J. Clin. Microbiol. 1992.30:628-632.

103. Martin C. J. Maiden, Jae A. Bygraves, Edward Feil, et al. Multilocus sequence typing: A portable approach to the identification of clones within populations of pathogenic microorganisms.// Microbiology, 1998, March 17.-Vol. 95, Issue 6, 3140-3145.

104. Masuzava, Т., Naumov, R. L., Kudeken, M., Kharitonenkov, I. G. Detection of Borrelia burgdorferi sensu stricto in the Moscow region, Russia.// Med Parazitol (Mosk)., 2001.- Apr-Jun 2 52.

105. Masuzawa T, Pan MJ, Kadosaka T, Kudeken M, Takada N, Yano Y, Imai Y, Yanagihara Y.Characterization and identification of Borrelia isolates as Borrelia valaisiana in Taiwan and Kinmen Islands.// Microbiol Immunol. 2000; 44(12): 1003-9.л

106. Masuzawa T , Pan MJ, Kadosaka T, Kudeken M, Takada N, Yano Y, Imai Y, Yanagihara Y. Characterization and identification of Borrelia isolates as Borrelia valaisiana in Taiwan and Kinmen Islands.// J Clin Microbiol, 1999 Sep 33:1392-1394.

107. Masuzawa, Т., A. Iwaki, Y. Sato, K. Miyamoto, E. I. Korenberg, and Y. Yanagihara. Genetic diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato isolated in far eastern Russia.// Microbiol. Immunol. 1997.- 41:595-600.

108. Masuzawa, Т., H. Suzuki, H. Kawabata, F. Ishiguro, N. Takada, Y. Yano, and Y. Yanagihara. Identification of spirochetes isolated from wild rodents in Japan as Borreliajaponica.ll J. Clin. Microbiol. 1995.- 33:1392-1394.

109. Mathiesen, D. A., J. H. Oliver, Jr., C. P. Kolbert, et al. Genetic heterogeneity of Borrelia burgdorferi in the United States.// J. Infect. Dis. 1997., 175:98-107.

110. Misonne M. C., and P. P. Hoet. Species-specific plasmid sequences for PCR identification of the three species of Borrelia burgdorferi sensu lato involved in Lyme disease.// J. Clin. Microbiol., 1998.- 36:269-272.

111. Nadelman RB, Nowakowski J, Forester G, Goldberg NS, Bittker S, Cooper D, Aguero-Rosenfeld M, Wormster GP. The clinical spectrum of early Lyme borreliosis in patients with culture-confirmed erythema migrans.// Am.J.Med.,1996.- 100: 502-508.

112. Nakao M, Miyamoto K, Uchikava К et al. Characterization of Borrelia burgdorferi isolated from I. persulcatus and I. ovatus ticks in Japan.// Am. J. Trop. Med. Hyg.,1992.- 47(4)-P.505-511.

113. Nakao Minoru, Myamoto Kenji. Susceptibility of I. persulcatus and I. ovatus to Lyme disease spirochetes isolated from humans in Japan.// G. Med. Entomol., 1994.-31.- №3.- C. 467-473.

114. CTConnel S. Lyme disease in the UK: epidemiology, clinical presentations and diagnosis.// J Med Microbiol., 1994.- Vol.40, №2 p.77-78.

115. Oliver, J. H. Lyme borreliosis in the southern United States: a review.// J. Parasitol., 1996.- 82:926-935.

116. Orloski KA, Hayes EB, Campbell GL, Dennis DT Surveillance for Lyme disease-United States, 1992-1998.// Мог Mortal Wkly Rep CDC Surveill Summ 2000 Apr 28;49(3): 1-11.

117. Osada Y, Saito R, Tomita M.Analysis of base-pairing potentials between 16S rRNA and 5' UTR for translation initiation in various prokaryotes. Bioinformatics. 1999 Jul-Aug;15(7-8):578-81.

118. Piesman J. Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi). // 1989, Exp. Appl. Acarol. Vol7. №1. P.71-80.

119. Piesman J. Vector competence of ticks for the Lyme disease spirochaete (Borrelia burgdorferi).// I Int. Conf. Tick-Borne pathogens at the host-vector interface: an agenda for research. Proc. and abstracts. Saint Paul. Minnesota U.S.A. 1992, P.130-134.

120. Postic D., Assous M.V., Grimont P.A.D., Baranton G. Diversity of Borrelia burgdorferi sensu lato evidenced by restriction fragment length polymorphism of rrf (5S)-rrl (23S) intergenic spacer amplicons, Int.J.Syst.Bacteriol. 44 (1994) 743-752.

121. Postic, D., N. M. Ras, R. S. Lane, M. Hendson, and G. Baranton. 1998. Expanded Diversity among California Borrelia isolates and description of Borrelia bissettii sp. nov. (formerly Borrelia group DN127).

122. Ralph, D., D. Postic, G. Baranton, C. Pretzman, and M. McClelland. Species of Borrelia distinguished by restriction site polymorphisms in 16S rRNA genes.//FEMS Microbiol. Lett., 1993.- 111:239-244.

123. Roessler, D., U. Hauser, and B. Wilske. Heterogeneity of BmpA (P39) among European isolates of Borrelia burgdorferi sensu lato and influence of interspecies variability on serodiagnosis.// J. Clin. Microbiol., 1997.- 35:27522758.

124. Ryder JW, Ringer RR, Glaney T. Inability of I. cookei and A. americanum nymphs to transmit Borrelia burgdorferi// 1992. J. Med. Entomol. Vol.23, №3, P.525-530.

125. Saint G.I., Gern L, Gray JS, Guy EC, Korenberg E, Nuttall PA, Rijpkema SG, Schonberg A, Stanek G, Postic D. Identification of B. burgdorferi sensu lato species in Europe.// Zentbl. Bakteriol. 287: 190-195.

126. Saitou N., Nei M. The neighbor-joining method: a new method for reconstructing phylogenetic trees. 1987, Mol. Biol. Evol. 4,406-425.

127. SatoY, Konishi T, Hashimoto Y, et al Rapid diagnosis of Lyme disease: flagellin gene based nested Polymerase Chain Reaction for identification of causative Borrelia species.// Int.J.Infect.Dis. 1997, 2:64-73.

128. Schouls LM, Van De Pol I, Rijpkema SG, Schot CS. Detection and identification of Ehrlichia, Borrelia burgdorferi sensu lato, and Bartonella species in Dutch Ixodes ricinus ticks. J Clin Microbiol. 1999 Jul;37(7):2215-22.

129. Schwan, T. G., W. Burgdorfer, and C. F. Garon. 1988. Changes in infectivity and plasmid profile of the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi, as a result of in vitro cultivation. Infect. Immun. 56:1831-1836.

130. Schwartz D.C., and C. R. Cantor. Separation of yeast chromosome-sized DNAs by pulsed field gradient gel electrophoresis.// Cell 1984, 37:67-75.

131. Schwartz J.J., A. Gazumyan, and I. Schwartz. 1992. rRNA gene organization in the Lyme disease spirochete, Borrelia burgdorferi. J. Bacteriol. 174:3757-3765.

132. Shobha Varde, John Beckley, and Ira Schwartz. Prevalence of Tick-Borne Pathogens in Ixodes scapularis in a Rural New Jersey County// Emerg. Infect. Dis.- 1998, Jan-Mar; 4(l):97-9.

133. Sonenshine DE, Ratzlaff RE, Troyer J, et al. Borrelia burgdorferi in eastern Virginia: comparison between a coastal and inland locality.// Am J Trop Med Hyg 1995 Aug;53(2): 123-3334.

134. Stanek G, Klein J, Bittner R, Glodar D. Isolation of B. burgdorferi from the myocardium of a patient with longstanding cardiomyopathy. // N. Engl. J. Med. 322: 249-252; Steere, A. C. 1989. Lyme disease. N. Engl. J. Med. 263:201-205

135. Stanek G., Burger I., Hirschl A. et al. Borrelia transfer by ticks during their life cycle.// Zbl.Bakteriol., Microbiol, und Hyg. Bd.A 1986, 263.№1-2. S. 2933.

136. Steere A. C. Lyme disease.//N. Engl. J. Med., 1989.- 263:201-205.

137. Steere, A. C., R. T. Schoen, and E. Taylor. The clinical evolution of Lyme arthritis.// Ann. Intern. Med., 1987.- 107:725-731.

138. Stevenson, В., and S. W. Barthold. Expression and sequence of outer surface protein С among North American isolates of Borrelia burgdorferi.// FEMS Microbiol. Lett., 1994.- 124:367-372.

139. Studier J.A., Keppler K.J. A note on the neighbor-joining algorithm of Saitou and Nei.// Mol. Biol. Evol., 1988.- 5, 729-731.

140. Takada N, Ishiguro F, Fujita H, Wang HP, Wang JC, Masuzawa T. Lyme disease spirochetes in ticks from northeastern China.// J Parasitol., 1998.-Jun;84(3): 499-504.

141. Van de Peer Y.// 1997.-http://www.plantgenetics.rug.ac.be/bioinformatics/yvdp/treeconw.html.

142. Wang G, AP van Dam, I Schwartz, J Dankert. Molecular tying of Borrelia burgdorferi sensu lato: taxonomic, epidemiological, and clinical implications// Clinical Microbiological Rewiews, 1999, Oct, Vol. 12, №4.- p. 633-653.

143. Wang G, van Dam AP, Dankert J. Phenotypic and genetic characterization of a novel Borrelia burgdorferi sensu lato isolate from a patient with lyme borreliosis.// 37 Microbiol Immunol 2000; 44(12): 1003-9.

144. Wang I.N.-l, Dykhuisen D.E., Qin W.G., et al. Genetic diversity of ospC in a local population of Borrelia burgdorferi sensu stricto.// Genetics 151 (1999) 15-30.

145. Wang, G., A.P. van Dam, A. Le Fleche, D. Postic, O. Peter, G. Baranton, R. de Boer, L. Spanjaard, and J. Dankert. Genetic and phenotypic analysis of

146. Borrelia valaisiana sp. nov. (Borrelia genomic groups VS116 and M19). Int. J. Syst. Bacterid.// 1997, 47:926-932.л

147. Wang, G. , A. P. van Dam, and J. Dankert. Phenotypic and genetic characterization of a novel Borrelia burgdorferi sensu lato isolate from a patient with Lyme borreliosis.// J. Clin. Microbiol. 1999, 37:3025-3028.

148. Wendelin I, Gasser R, Reisinger EC. Temperature sensivity of Borrelia burgdorferi genotypes a possible reason for distinect clinical manifgestations of Lyme borreliosis.// VI Int. Conf. Lyme Borreliosis. Bologna, Italy, 1994. Program u Abstracts.

149. Xu, Y., and R. C. Johnson. Analysis and comparison of plasmid profiles of Borrelia burgdorferi sensu lato strains.// J. Clin. Microbiol. 1995.- 33:26792685.

150. Xu, Y., C. Kodner, L. Coleman, and R. C. Johnson. Correlation of plasmids with infectivity of Borrelia burgdorferi sensu stricto type strain B31.// Infect. Immun. 1996.- 64:3870-3876.

151. Yanagihara, Y., and T. Masuzawa. Lyme disease (Lyme borreliosis).// FEMS Immunol. Med. Microbiol. 1997.- 18:249-261.

152. Zhang, Z. F., K. L. Wan, and J. S. Zhang. Studies on epidemiology and etiology of Lyme disease in China.// Chin. J. Epidemiol. 1997.- 18:8-11.