Многообразие заражения патогенами популяций клещей Ixodes persulcatus на территориях с сильным антропогенным прессом тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, кандидат биологических наук Семенов, Александр Владимирович

• Семенов, Александр Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Семенов, Александр Владимирович

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Многообразие зараженности клещей Ixodes persulcatus и 17 V» антропогенный пресс (обзор литературы)

Глава 1.1. Антропогенный пресс и окружающая среда

Глава 1.2. Патогенные микроорганизмы иксодовых клещей

Глава 1.3. Генетический полиморфизм иксодовых клещей

Глава 2. Материалы и методы

Глава 3. Генетическая гетерогенность популяции I. persulcatus

Глава 4. Определение зараженности клещей I. persulcatus 65 патогенными для человека микроорганизмами

Глава 5. Аномалии развития экзоскелета, антропогенный пресс и 87 зараженность патогенными микроорганизмами

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Многообразие заражения патогенами популяций клещей Ixodes persulcatus на территориях с сильным антропогенным прессом»

Изучение и идентификация патогенов, населяющих иксодовых клещей, важно как с целью прогнозирования риска уже известных зооантропонозных заболеваний, так и выявления еще не идентифицированных микроорганизмов, представляющих интерес в плане изучения малоизвестных или неизвестных заболеваний, передаваемых иксодидами как человеку, так и домашним животным. Клещи рода Ixodes являются хозяевами множества патогенов из самых У* разных систематических групп животного царства: вирусов, бактерий, простейших, гельминтов, насекомых (Дубинина, Алексеев, 1999). Иксодовые клещи - многохозяинные эктопаразиты, длительно питаются на различных позвоночных животных, в том числе на перелетных птицах, что способствует поддержанию и распространению патогенных микроорганизмов на обширных территориях.

Известно, что таежный клещ Ixodes persulcatus Shulze является переносчиком не только возбудителя крайне опасного весенне-летнего клещевого энцефалита (Зильбер, 1939), но и целого ряда возбудителей других, не менее значимых зооантропонозов. Доказано, что таежный клещ заражает человека спирохетами рода Borrelia (в том числе и патогенными В. afzelii, В. garinii, В. burgdorferi sensu stricto) и риккетснеподобными внутриклеточными бактериями рода Ehrlichia, вызывающими гранулоцитарный и моноцитарный эрлихиозы человека (Ravyn М. D. et al., 1999).

Существенным фактом в пользу изучения многообразия паразито-хозяинных взаимоотношений I. persulcatus является возможность инфицирования клеща несколькими патогенами одновременно. Это явление представляет значительный практический интерес, поскольку подразумевает возможность одновременной передачи человеку возбудителей сразу нескольких инфекций. В случае подобной микстинфекции терапевтическая тактика медикаментозного лечения пациента должна подвергаться серьезной корректировке, поскольку известно, что течение микстинфекционного процесса значительно отличается от моноинфекции (Алексеев и др., 2001; Krause et al., 1996).

Взаимодействие патогенных микроорганизмов с организмами-переносчиками значительно усложняется не только многообразием передаваемых патогенов, но и гетерогенностью популяции самого хозяина. На примере I. ricinus, близкородственного к таежному клещу, описаны субпопуляции, отличающиеся по углеводному составу хитина (Estrada-Peña et al., 1996). Установлена связь между двигательной активностью клещей I. ricinus и наличием изоферментов глицерофосфатдегидрогеназы (Healey, 1979); показана генетическая гетерогенность этого вида клещей по малатдегидрогеназе (МДГ) и отмечена сезонная динамика встречаемости различных МДГ-генотипов (Jensen et al., 1998). Эти ферменты участвуют в процессах образования энергетических субстратов в организме клеща, что непосредственно влияет на двигательную активность и поиск прокормителя, и, следовательно, на процесс передачи клещевых патогенов человеку и животным.

Фенотипическая гетерогенность популяции таежного клеща I. persulcatus была отмечена впервые (Alekseev, Dubinina, 1993) в связи с изучением влияния антропогенного пресса на популяции клещей. Затем было установлено, что существуют и поведенческие различия в зависимости от присутствия в особях различных патогенов, а также и от степени зараженности боррелиями у фенотипически отличающихся клещей [с аномалиями экзоскелета и без них (Алексеев, Дубинина, 1997)]. Поэтому анализ генетической гетерогенности популяции I. persulcatus существенно дополняет картину взаимодействия клещей и их патогенов.

Влияние хозяйственной деятельности человека на окружающую среду приводит к созданию значительного антропогенного пресса на окружающие биоценозы, особенно в областях с интенсивной хозяйственно-экономической активностью, т. е. в крупных городах и на прилегающих к ним территориях (Дрейер, Лось, 1997). При этом происходит не только обеднение видового состава под влиянием антропогенного пресса, но и качественные изменения в самих организмах обитающих на этих территориях (Dubinina, Alekseev, 1994). Кроме того, зоны повышенного антропогенного пресса характеризуются максимальной численностью населения, что обусловлено экономической деятельностью человечества (Одум, 1987). Как следствие, именно в таких зонах, а также в непосредственной близости от них, и происходит максимальное число контактов человека и синантропных животных с клещами. При этом риск и частота передачи патогенных микроорганизмов человеку существенно возрастают, что увеличивает значимость изучения клещевых популяций на территориях с сильным антропогенным прессом, одной из которых является крупный мегаполис г. Санкт-Петербург и его окрестности.

Цели и задачи исследования:

Целью настоящего исследования является изучение многообразия заражения клещей патогенами в генетически гетерогенной популяции /. репикаШэ в окрестностях г. Санкт-Петербурга и идентификация У, отдельных патогенов.

Для достижения этой цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выявить маркер внутрипопуляционной гетерогенности по локусу малатдегидрогеназы.

2. Оценить встречаемость различных внутрипопуляционных групп в изучаемой популяции и сравнить ее с частотой встречаемости подобных генотипов в популяциях клеща I. persulcatus из других регионов ареала этого вида.

3. Оценить частоту встречаемости клещей I. persulcatus зараженных вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита (RSSE) и микроорганизмами рода Borrelia и Ehrlichia, а также простейшими рода Babesia, с использованием различных методов детекции патогенов (микроскопию, иммунолюминесцентный анализ, иммуноферментный анализ, полимеразную цепную реакцию).

4. Установить взаимосвязь между зараженностью I. persulcatus различными патогенами и генетически различающимися группами внутри -популяции клещей на территории с сильным антропогенным прессом.

5. Определить распространенность аномалий развития хитинового экзоскелета и взаимосвязь между встречаемостью особей /. persulcatus и зараженностью патогенными микроорганизмами в генетически гетерогенной популяции таежного клеща на территории с сильным антропогенным прессом.

Актуальность:

Уточнение этиологии выявляемых случаев заболеваний, передаваемых иксодовыми клещами, является одной из актуальнейших проблем в деле борьбы с природно-очаговыми инфекционными заболеваниями. Для получения более достоверной оценки риска распространения зооантропонозных инфекций, связанных с присасыванием клещей, крайне важно иметь максимально полную информацию о спектре- патогенов, циркулирующих в клещевой популяции. Это особенно важно тогда, когда эта популяция обитает на территории с сильным антропогенным прессом, где вероятность нападения клещей на человека значительно выше, чем на территориях, где такой пресс отсутствует и где плотность населения в несколько раз ниже.

Принципиальная возможность заражения таежного клеща несколькими патогенами одновременно обуславливает необходимость оценить, насколько часто встречается это явление. Важность и актуальность такой оценки заключается в необходимости рассчитать риск появления случаев с одновременным заражением больных несколькими инфекционными агентами, что возможно даже при присасывании одного клеща. В случае высокого риска микстинфицирования человека возникает острая необходимость в разработке новых алгоритмов клинико-диагностического обследования в специализированных медицинских учреждениях, а также, что особенно важно, принятия мер по корректировке терапевтической тактики лечения в подобных случаях.

Установление -взаимосвязи между различными внутрипопуляционными группал- даваемыми ими патогенами позволит не только оценить риск заражения человека при укусе клещом, но и послужит основой для разработки профилактических мероприятий по снижению этого риска. малатдегидрогеназы (МДГ). Выявленные 6 генотипов встречаются в популяциях из различных частей ареала обитания таежного клеща. Различные популяции отличаются по встречаемости генотипов и степени генетической гетерогенности. Генотип МДГ определяет

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Популяция клещей I. регьЫсаШз является гетерогенной по локусу зараженность клещей патогенными для человека боррелиями и эрлихиями.

Таежный клещ I. persulcatus является переносчиком не только ранее описанных вируса весеннее-летнего клещевого энцефалита В. afzelii, В. garinii, но также В. burgdorferi sensu stricto, возбудителя моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ), возбудителя гранулоцитарного эрлихиоза человека (ГЭЧ) и Ва. microtii. Одновременное инфицирование I. persulcatus двумя и даже тремя патогенными микроорганизмами является распространенным явлением.

Распространенность микстинфицированных особей в исследованной популяции (около 20% проанализированных клещей) свидетельствует о необходимости изменения алгоритмов обследования людей, подвергшихся нападению клещей в клинико-диагностических учреждениях. Следует анализировать клинический материал не только на клещевой энцефалит и клещевой боррелиоз, но также на эрлихиоз и бабезиоз.

Наличие аномалий развития экзоскелета, возникающих в процессе онтогенеза, характерно для клещей рода Ixodes. Аномалии распространены по всему ареалу обитания /. persulcatus. Частота встречаемости аномалий коррелирует с антропогенным прессом на территории обитания клещей и может служить показателем интенсивности антропогенного пресса. Клещи с аномалиями развития экзоскелета представляют большую опасность как переносчики трансмиссивных клещевых заболеваний, поскольку значительно чаще моно- и полиинфицированы патогенными микроорганизмами по сравнению с нормальными особями I. 11 persulcatus.

Научная новизна работы:

Впервые выявлена и описана генетическая гетерогенность популяции I. persulcatus по локусу малатдегидрогеназы. Оценена встречаемость описанных МДГ-генотипов в популяциях клещей в районе гг. Санкт-Петербурга, Новгорода и Новосибирска. Выявлено наибольшее значение некоторых генотипов, обуславливающих максимальную опасность принадлежащих к ним клещей в качестве переносчиков.

Впервые обнаружены на территории Российской Федерации такие патогены I. persulcatus как Borrelia burgdorferi sensu stricto, возбудитель человеческого гранулоцитарного эрлихиоза (ГЭЧ), представители рода Babesia - Ва. microtii.

Г,

Впервые выявлена взаимосвязь между различными геногруппами клещей и передаваемыми ими возбудителями. Установлена связь между генотипом клеща и уровнем зараженности особи патогенными для человека боррелиями.

Проведена оценка встречаемости различных патогенов в популяции I. persulcatus и оценена вероятность передачи патогенных микроорганизмов в виде микстинфекции в разные периоды сезона активности клещей и в течение суток.

Доказана высокая частота микстинфицирования клещей I. persulcatus и, следовательно, опасность заражения несколькими патогенами одновременно, даже в случае присасывания одиночного клеща.

Показано повсеместное распространение аномалий развития экзоскелета I. persulcatus и I. ricinus, а также взаимосвязь частоты встречаемости аномалий и антропогенного пресса. Выявлена повышенная частота инфицирования и микстинфицирования клещей с аномалиями развития экзоскелета, т.е. повышение угрозы передачи трансмиссивных клещевых заболеваний в регионах с интенсивной природохозяйственной деятельностью.

Практическая значимость работы:

Выявлена гетерогенность клещевой популяции I. рекикшт по гену малатдегидрогеназы на территории с сильным антропогенным прессом и установлена связь между различными МДГ-генотипами и интенсивностью заражения клещей I. регБгйсаЫз патогенными для человека боррелиями, что позволяет использовать определение МДГ-генотипов для оценки риска передачи боррелиоза в различных популяциях.

Определен уровень зараженности клещей патогенными для человека бактериями (боррелиями и эрлихиями) и вирусом весенне-летнего клещевого энцефалита. Впервые показана возможность заражения людей возбудителями гранулоцитарного эрлихиоза и принципиальная возможность заражения бабезиями при присасывании таежных клещей I. регБиЬаШБ.

Обнаружена высокая частота встречаемости микстинфицированных особей в популяции клещей I. регяикаШз, что свидетельствует о высоком риске одновременной передачи нескольких возбудителей при нападении клеща на человека. Полученные данные делают необходимой и оправданной практику обследования в клинико-диагностических лабораториях клещей, снятых с пострадавших от укуса людей, не только на наличие вируса клещевого энцефалита и патогенных боррелий, но и I ч> эрлихий. Редкое, однако, существующее, присутствие в микстинфицированных клещах бабезий делает актуальным в медицинской практике • углубленный анализ на бабезиоз спленэктомированных пациентов, для которых иксодовый клещевой бабезиоз является смертельным заболеванием.

Показана взаимосвязь между антропогенным прессом на среду обитания клещей и частотой появления аномалий развития экзоскелета в различных популяциях I. persulcatus, что позволяет использовать мониторинг частоты встречаемости аномалий экзоскелета как показатель интенсивности антропогенного пресса на среду обитания клещей. ц> Установлена повышенная частота моно- и микстинфицирования клещей с аномалиями экзоскелета по сравнению с нормальными особями I. persulcatus. В условиях сильного антропогенного пресса, повышающего частоту развития аномалий среди клещей /. persulcatus, значительно возрастает риск одновременной передачи нескольких патогенов при присасывании аномального клеща. t

Апробация работы:

Основные результаты работы доложены на 3-ей международной конференции «Ticks and tick-borne pathogens: into the 21 century»

Словакия, 1999); биеннале «7th Biennial meeting of the European Tick Study Group» (Великобритания, 2000); международной конференции «VIII European multicolloquium of parasitology» (Польша, 2000); международном симпозиуме «Ecological parasitology on the turn of Millennium» (Санкт-Петербург, 2000); республиканской конференции «Роль кровососущих насекомых и клещей в лесных экосистемах России» (Великий Новгород, 2000); международной научной конференции «Образование в решении экологических проблем» (Курск, 2001); XXIX межвузовской научно-практической конференцией по проблемам биологии и медицинской паразитологии посвященной памяти акад. Е. Н. Павловского (Санкт-Петербург, 2002); ежегодной отчетной сессии ЗИН РАН (Санкт-Петербург, 2002).

По теме диссертации опубликовано 19 работ из них 9 в отечественных и 10 в зарубежных изданиях.

Структура и объем диссертации:

Диссертация изложена на 136 страницах машинописного текста, состоит из введения, 5 глав (обзора литературы, материалов и методов, 3 глав с экспериментальными данными), заключения, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, включающего 164

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Семенов, Александр Владимирович

выводы

Изучение популяции таежного клеща I. persulcatus позволило сделать следующие выводы:

1. Генетическая гетерогенность по локусу МДГ является характерной для Ixodes persulcatus. Выявленные генотипы встречаются в различных частях ареала обитания вида. Популяции значительно отличаются по встречаемости генотипов и генетической гетерогенности.

2. Проведенные исследования позволили выявить, помимо ранее описанных в таежном клеще вируса клещевого энцефалита (RSSEV) и двух видов боррелий, еще и возбудителя собственно болезни Лайма - Borrelia burgdorferi sensu stricto, возбудителя моноцитарного эрлихиоза человека (МЭЧ), возбудителя гранулоцитарного эрлихиоза человека (ГЭЧ) и Babesia microtii.

3. Зараженность клещей патогенными для человека боррелиями и эрлихиями зависит от геногруппы клещей. Представители геногруппы 1 заражены боррелиями в 2 раза интенсивнее, чем клещи геногруппы 2. При оценке частоты встречаемости зараженных патогенными эрлихиями клещей также обнаружено, что клещи геногруппы 1 в 2 раза чаще заражены, чем клещи геногруппы 2.

4. Одновременное заражение Ixodes persulcatus двумя и тремя патогенными микроорганизмами широко распространено в исследованной популяции (почти 20% особей). Следовательно, риск микстинфицирования человека при нападении клеща существенно выше, чем представлялось ранее.

5. Для клещей рода Ixodes в очагах, подвергающихся антропогенному прессу, характерно наличие повсеместно распространенных аномалий развития экзоскелета. Частота встречаемости аномалий коррелирует с антропогенным прессом на территорию обитания клещевой популяции.

6. Клещи с аномалиями развития экзоскелета значительно более подвержены инфицированию и микстинфицированию.

7. Широкая распространенность полиинфицированных клещей, увеличивающаяся под антропогенным прессом, делает рациональным изменение алгоритмов лабораторной диагностики и терапии в клинико-диагностических учреждениях, занимающихся профилактикой и лечением клещевых трансмиссивных инфекций.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Оценка генетической гетерогенности клещей I. persulcatus по локусу МДГ позволяет косвенно оценить зараженность популяции патогенными микроорганизмами.

2. Выявленный спектр патогенных микроорганизмов в популяции таежных клещей делает оправданным повсеместное внедрение в деятельность клинико-диагностических учреждений дополнительных схем обследования пациентов, подвергшихся нападению клещей, и самих клещей, извлеченных из мест укуса. Следует исследовать биологический материал не только на присутствие вируса клещевого энцефалита и иксодового клещевого боррелиоза, но и на присутствие обеих групп патогенных эрлихий и на клещевой бабезиоз.

3. Значительная частота встречаемости микстинфекций патогенными для человека микроорганизмами в популяции клещей предполагает более вероятный характер возникновения клещевых трансмиссивных микстинфекций. Следовательно, представляется целесообразным углубленное ознакомление практических врачей-инфекционистов с особенностями диагностики и течения микстинфекционных клещевых инфекций.

4. Зависимость частоты встречаемости аномалий развития хитинового экзоскелета клещей /. persulcatus от антропогенного пресса, вызванного природохозяйственной деятельностью человека, позволяет использовать эту величину для косвенной оценки степени антропогенного пресса на территорию обитания клещевой популяции.

5. Возрастание числа микстинфицированных особей среди клещей с наличием аномалий развития экзоскелета, увеличивающее риск возникновения инфекционных заболеваний, и прямая зависимость частоты встречаемости самих аномалий от антропогенного пресса на окружающую среду делают жизненно важной задачей повсеместное внедрение ресурсосберегающих и природоохранных мероприятий, что позволит снизить антропогенный пресс на среду обитания.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Семенов, Александр Владимирович, 2003 год

1. Алексеев А. Н. Система клещ-возбудитель и ее эмерджентные свойства. СПб., 1993. 204 с.

2. Алексеев А. Н., Дубинина Е. В. Симбиотические отношения в сложной системе переносчик-возбудитель болезней// ДАН. 1994. - Т.338. - №2. -С.259-261.

3. Алексеев А. Н., Дубинина Е. В. Мониторинг состояния систем «клещи-микрорганизмы» в составе биоты под влиянием вариаций антропогенного пресса// Мониторинг биоразнообразия. М. - 1997. - С. 195-201.

4. Алексеев А. Н., Дубинина Е. В., Вашукова М. А., Волкова Л. И. Боррелии как вероятные антагонисты вируса клещевого энцефалита: паразитологический и клинический аспекты проблемы // Мед. паразитол. -2001. № 3. — С.3-11.

5. Будыко М.И. Климат в прошлом и будущем. Л.: Гидрометеоиздат, 1980.308 с.1. К'

6. Владимиров В.В. Расселение и экология. М.: Стройиздат, 1996. 376 с.

7. Государственный доклад о состоянии окружающей природной среды Российской Федерации в 1995 году. М.: ЭКОС-информ. 1996. 103 с.

8. Дрейер O.K., Лось В.А. Экология и устойчивое развитие. Ч Екатеринбург: Изд-во УРАО. 1997. 268 с.

9. Дубинина Е. В., Алексеев А. Н. Динамика биоразнообразия возбудителей болезней переносимых клещами рода Ixodes: анализ многолетних данных// Мед. паразитол. 1999. № 2. С. 13-19.

10. Журавлев В.П., Серпокрылов Н.С., Пущенко C.JI. и др. Охрана окружающей среды в строительстве: Учебник для вузов. М.: Изд-во АСВ, 1995.328 с.

11. Зильбер J1. А. Весенний (весенне-летний) эндемический клещевой энцефалит // Арх. биол. наук. 1939. - Т.56. - вып. 2. - С. 9-37.

12. Зюзя Ю. Р., Ефимова И. С., Воробьева И. Н., Клицунова Н. В., Гостева В. Я. Клинико-морфологические особенности проявлений мигрирующей эритемы у больных иксодовым клещевым боррелиозом // Мед. паразитол. -1999. -№4. -С. 39-41.

13. Кононович Ю.В. Тепловой режим зданий массовой застройки. М.: Стройиздат, 1996.481 с.

14. Коренберг Э. И. Эрлихиозы — новая для России проблема инфекционной патологии // Мед. паразитол. 1999. - № 4. - С. 10-16.

15. Кульпин Э.С. Бифуркация Запад Восток: Введение в социоестественную историю. М.: «Мысль», 1996. 452 с.

16. Лукин Е. П., Грабарев П. А. Экологические аспекты патогенных для человека эрлихий и бартонелл// Мед. паразитол. 2000. - №4. - С. 17-22.

17. Мельникова О. В., Ботвинкин О. Д., Данчинова Г. А. // Журн. инфекц. патологии. 1996. -Т.З. -№1. - С. 14-18.

18. Методы экологической и экономической регламентации хозяйственной деятельности / под ред. Н.П. Тихомиров, Т.А. Моисеенкова и др., М.: Изд-во РЭА им. Г.В. Плеханова, 1994. 355 с.

19. Небел Б. Наука об окружающей среде: Как устроен мир. Т. 1, 2. М.: Мир, 1993.415 с.

20. Одум Ю. Экология. Т. 1, 2. М.: Мысль, 1987. 261+151с.

21. Оценка и регулирование качества окружающей природной среды: Учеб. пос. для инженера-эколога/ А.Ф. Порядина, А.Д. Ховданского (ред.) М.: НУМЦ Минприроды России. Издат. Дом "Прибой", 1996. 108 с.

22. Павловский Е. Н. Природная очаговость трансмиссивных болезней. -М.-Л.: Наука, 1964.212 с. '

23. Павловский Е. Н., Соловьев В. Д. Экспериментальное исследование над циркуляцией вируса клещевого энцефалита в организме клеща-переносчика (.Ixodes persulcatus)// Арх. биол. наук. 1940. - Т.59, вып. 1-2. -№7-8. С.111-117.

24. Павловский Е. Н. Уродства и аномалии в клещах Ixodoidea// Журн. Празитол. 1939. - Т.7 - № 1 - С. 7-44.

25. Первомайский Г. С. 1954. Изменчивость пастбищных клещей (Acarina, Ixodidae) и ее значение для систематики //Труды Всес. энтомол. об-ва. № 44. - С.62-201.

26. Проектирование городского хозяйства: Учеб. пос. для вузов / под ред.: Э.Я. Турчихин, M.J1. Крупицкий, Ф.Г. Таги-Заде и др. М.: Стройиздат, 1983. 317 с.

27. Пупырев Е.И. Опыты конструктивной экологии. М.: Изд-во Прима -пресс, 1997. 288 с.

28. Реймерс Н.Ф. Экология (теории, законы, правила, принципы и гипотезы). М.: Россия молодая, 1994. 159 с.

29. Alekseev A. N., Dubinina Е. V. Abnormalities in Ixodes ticks (Ixoidea, Ixodina)//Acarina. 1993. - Vol.l. -N.l. - P.73-85.

30. Alekseev A.N., Dubinina E.V., Schouls L.M. First determination of Ehrlichia infected ticks among the primary vector of the tick-born encephalitis and borreliosis in the Russian Baltic region// Bull. Scand. Soc. Parasitol. 1998a. -Vol.8.-N.2.-P.88-91.

31. Alekseev A.N., Dubinina E.V., Van de Pool I., Schouls L.M. Identification of Ehrlichia spp. and Borrelia burgdorferi in Ixodes in the Baltic regions of Russia// J. Clin. Microbiol. 2001. - Vol. 39. - N.6 - P.2237-2242.

32. Alekseev A. N., Semenov A. V., Dubinina H. V. Evidence of Babesia microtii infection in multi-infected Ixodes persulcatus ticks in Russia// Exp. Appl. Acarol. 2003. - Vol. 27. - P. 101-109.

33. Allsopp M.T.E.P., Hattingen C. M., Voleg S.W., Allsopp B.A. Comparivate evaluation of 16S, map 1 and pCS20 probes for the detection of Cowdria and Ehrlichia species in ticks // Ann. New-York. Acad. Sc. 1998. - Vol.849. - P.78-84.

34. Alvares J.A., Buening G.M., Figueroa J.V. Detection of Babesia bovis in ticks by the PCR assay // Conf. Res. Workers Anim. Dis. : Abstracts of the 77th Annual Meeting, IL. Chicago, 1996. - P.69.

35. Anderson B.E., Sumner J.W., Dawson J.E., Tzianabos T., Greene C.R., et. al. Detection of the etiologic agent of human ehrlichiosis by PCR // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30. - P.775-780.

36. Anderson B.E., Sims K.G., Olson J.G., Childs J.E., Piesman J.F., et. al. Ambliyomma americanum: a potential vector of human ehrlichiosis // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol.49. - P.239-244.

37. Armstrong, P.M., Katavolos, P., Caporale, D.A., Smith, R.P., Spielman, A. and Telford III, S.R. Diversity of Babesia infecting deer ticks (Ixodes dammini)// -Am. J. Trop. Med. Hyg. 1998. - Vol. 58 -P.739-742.

38. Ayala F. J., Tracey M. L., Barr L. G., McDonald J. F., Perez-Salas S. Genetic variation in natural population of five Drosophila species and the hypothesis of the selective neutrality of protein polymorphisms // Genetics. 1974. - Vol.77.-P.343-384.

39. Barbet A.F., Allerd D.R. The mspß multigene family of Anaplasma marginale : nucleotide sequence analysis of an expressed copy // J. Infect. Immun. 1991.- Vol.59. -P.971-976.

40. Barthold S.W. Spirochetes, ticks and DNA // Parasitol. Today. 1998. -Vol.14. -P.444.

41. Basta J., Pich J., Hulinska D. Incidence of Borrelia burgdorferi s.l. and its genomospecies in ticks {Ixodes ricinus) collected in Prague 1994-1997// IV Int. Conf.: Urban Pests and Control. Prague. 1998. P.471-475.

42. Bergstrom S., Bundoc V. G., Barbour A. G. Molecular analysis of linear plasmid-encoded major surface proteins, OspA and OspB, of the Lyme disease spirochaete Borrelia burgdorferi // Mol. Microbiol. 1989. - Vol.3. - P.479-486.

43. Chang Y.-F., Novosel V., Chang C.-F., Kim J.B., Shin S.L., Lein D.H. Detection of human granulocytic ehrlichiosis agent and Borrelia burgdorferi in ticks by polymerase chain reaction // J. Vet. Diagn. Invest. 1998. - Vol.10. -P.56-59.

44. Chen S.-H., Dumler J.S., Bakken J.S., Walker D.H. Identification of a granulocytotropic Ehrlichia species as the etiological agent of human disease // J. Clin. Microbiol. 1994. - Vol.32. - P.589-595.

45. Chu F. K. Rapid and sensitive PCR-based detection and identification of aetiologic agents of human granulocytotropic and monocytotropic ehrlichiosis // Molecular and Celular Probes. 1998. - Vol. 12. - P.93-99.'

46. Cinco M., Murgia R., Bonin S., Padovan D., Stanta G. Detection of the three species of Borrilia burgdorferi in Ixodes ricinus with the polymerase chain reaction in northern Italy // Alpe Adria Microbiol. J. 1996. - Vol.5. - P.253-256.

47. Daniel M., Cerny V. Occurrence of the tick Ixodes ricinus (L.) under the conditions of antropopressure// Folia parasitoligica. 1990. — Vol.37. — N.2. — P.183-186.

48. Daniels T.J., Falco R.C., Schwartz I., Varde S., Robbins R.G. Deer tick (Ixodes scapularis) and the agents of Lyme disease and human granulocytic ehrlichiosis in a New York City park// Emerging Infectious Diseases. 1997. -Vol.3. -P.353-355.

49. Demaerschalck I., Ben Messaoud A., De kesel M., Hoyois B., Lobet Y., et. al. Simultaneous presence 'of different Borrelia burgdorferi genospecies in biological fluids of Lyme disease patients // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol.33. -P.602-608.

50. Dubinina H. V., Alekseev A. N. Skeleton changes in the oribatid mites under the influence of the heavy metal ions accumulation // Acarina. 1994. - Vol. 2(1-2). -N.1.-P.81-93.

51. Duh, D., Petrovec, M. and Avsic-Zupanc, T. Diversity of Babesia infecting European sheep ticks (Ixodes ricinus)// J. Clin. Microbiol. 2001 — Vol.39 -P.3395 - 3397.

52. Dumler J.S., Bakken J.S. Ehrlichial diseases of humans: emerging tick-borne infections // Clin. Infect. Dis. 1995. - Vol.20. - P. 1102-1110.

53. Eiffert H., Ohlenbusch A., Christen HJ., Thomssen R., Spielman A., Matuschka F.R. Nondefferentiation between Lyme disease spirochetes from vector ticks and human cerebrospinal fluid // J. Infect. Dis. 1995. - Vol.171. - P.476-479.

54. Eremeeva M., Beati L., Makarova V.A., Fetisova N.F., et. al. Astrachan fever rickettsiae : antigenic and genotypic analysis of isolates obtained from human and Rhipicephalus pumilio ticks // Am. J. Trop. Med. 1994b. -Vol.51. - P.697-706.

55. Estrada-Peña A., Gray J. S., Kahl O. Variability of cutucular hydrocarbons and phenotype discrimination of Ixodes ricinus population (Acariña: Ixodidae) from Europe// Exp. Appl. Acarol. 1996. - Vol.20. - P.457-467.

56. Estrada-Peña A., Daniel M., Frandsen F., Gern L., Gettinby G., Gray J. S., Jaenson T. G. T., Jongejan F., Kahl O., Korenberg E., Mehl R., Nuttal P. A. Ixodes ricinus strains in Europe// Zentr. Bl. Bakteriol. 1998. -Bd.287. - S.185-189.

57. Fahrimal Y., Goff W.L., Jasmer D.P. Detection of Babesia bovis carrier cattle by using polymerase chain reaction amplification of parasite DNA // J. Clin. Microbiol. -1992. Vol.30. - P. 2091-2096.

58. Faruki H. DNA amplification systems for Borrelia burgdorferi. In PCR-based Diagnostics in Infectious Disease, G.D. Ehrilich and S J. Greenberg (eds.), 1994., pp. 521-536. Blackwell, Boston.

59. Feir D., Santanello C.R., Li B.W., Xie C.S., Masters E., Marconi R., Weil G. Evidence supporting the presence of Borrelia burgdorferi in Missouri // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1994. - Vol.51. -P.475-482.

60. Figueroa J.V., Hernandez R., Buening G.M. Use of polymerase chain reaction assay to detect Babesia bigemina in the tick Boophilus microplus// Abstracts 73rd Annual Meeting, Conf. Res. Workers Anim. Dis., Chicago, IL, November, 1992, p.25

61. Figueroa J.V., Chieves L.P., Johnson G.S., Buening G.M. Multiplex polymerase chain reaction based assay for the detection Babesia bigemina, Babesia bovis and Anaplasma marginale DNA in bovine blood // Vet. Parasitol. 1993. — Vol.50.-P.69-81.

62. Frankie G.W. Ecology of insects in urban environment // Ann. Rev. Entomol. 1978. - Vol. 23. ^P.367-387.

63. Gern L., Estrada-Pena A., Frandsen F., Gray J.S., Jaenson T.G., et. al. European reservoir hosts of Borrelia burgdorferi sensu lato // Zentralbl. Bacteriol.- 1998. Vol.287. - P. 196-204.

64. Gosteva V.V., Klitsunova N.V., Rehacek J., Kocianova E., Popov V.L., Tarasevich I.V. Mixed Rickettsia-virus infection in Dermacentor reticulatus imago // Acta Virol. 1991. - Vol.35. - P. 174-186.

65. D.E. Multiple infections of Ixodes scapularis ticks by Borrelia burgdorferi asrevealed by single-strand conformation polymorphism analysis // J. Clin. Microbiol. 1996. - Vol.34. - P.652-656.

66. Guy E.C., Stanek G. Detection of Borrelia burgdorferi in patients with Lyme disease by the polymerase chain reaction // J. Clin. Pathol. 1991. - Vol.44.1 -P.610-611.-j

67. Harris H. The principles of human biochemical genetics.- 1975. -2na Ed.

68. North Holland, Amsterdam., 402 p.

69. Higgins J.A., Azad A.F. Use of polymerase chain reaction to detect bacteria in arthropods: A review // J. Med. Entomol. 1995. - Vol.32. - P.213-222.

70. Hopkinson D. A., Harris H. Recent work on isoenzymes in man // Ann. Rev. Genet. 1971. - Vol.5. - P.5-16.

71. Hu C.M., Humair P.-F., Wallich R., Gern L. Apodemus sp. rodents, reservoirs hosts for Borrelia afzelii in an endemic area in Switzerland // Zentralbl. Bact. 1997. - Vol.285. - P.558-564.

72. Hubalec Z., Halouzka J. Prevalence rates of Borrelia burgdorferi sensu lato in host-seeking Ixodes ricinus ticks in Europe // Parasitol. Res. 1998. - Vol.84. -P. 167-172.

73. Hubbard M.J., Cann K.L., Wright D.J.M. Validation and rapid extraction of nucleic acids from alcohol-preserved ticks // Exp. Appl. Acarol. 1995. - Vol.19. -P.473-478.

74. Hubbard M.J., Baker A.S., Cann K.L. Distribution of Borrelia burgdorferi s. 1. Spirochaete DNA in British ticks (Argasidae and Ixodidae) since the 19th century, assessed by PCR //Med. Vet. Entomol. 1998. - Vol.12. -P.89-97.

75. Johnson B.J.B., Happ C.M., Mayer L.W., Piesman J. Detection of B. burgdorferi in ticks by species-specific amplification of the flagellin gene // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1991. - Vol.47. - P.730-741.

76. Kahl O., Gern L., Gray J.S., Guy E.C., et.al. Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato in ticks: immunofluoresense assay versus polymerase chain reaction // Zbl. Bacteriol. 1998. - Vol.287. - P.205-210.

77. Kawabata H., Masuzawa T., Yanagihara Y. Genomic analysis of Borrelia japonica sp. nov. isolated from Ixodes ovatus in Japan // J. Microbiol. Immunol. -1993.-Vol.37.-P.843-848.

78. Kirsten F., Rijpkema S., Molkenboer M., Gray J.S. The distribution and prevalence of Borrelia burgdorferi genomic groups in Ixodes ricinus ticks in Ireland II Eur. J. Epidemiol. 1997. - Vol.13. - P. 67-72.

79. Kitto G. B., Wassarman P. G., Kaplan N. O. Enzymatically active conformers of mitochondrial malate dehydrohenase // Proc. Natl. Acad. Sei. -1966. Vol.56. - P.578-589.

80. Klausnitzer B. Verstaterung von Tierren. Vittenberg: Zimesen Verlag. 315 pp., 1988.

81. Korenberg E.I., Cerny V., Daniel M. Occurrence of Ixodid tick the main vectors of tick-borne encephalitis virus in urbanized territory// Folia Parasitológica. - 1984. -Vol.31. -P.365-370.

82. Kozuch O., Gurycova D., Lysy J., Labuda M. Mixed natural focus of tickborne encephalitis, tularemia and hemorrhagic fever with renal syndrome in west Slovakia II Acta Virol. 1995. - Vol.39. - P.95-98.

83. Kurtenbach K., Sewel H.S., Ogden N.H., Randolph S.E., Nuttal P.A. Serum complement sensitivity as a key factor in Lyme disease ecology // Infect. Immun. — 1998a. Vol.66. - P. 1248-1251.

84. Kurtenbach K., Peacey M., Pijpkema S.G.T., Hoodless A.N., Nuttal P.A.,

85. Randolph S.E. Differential transmission of the genospecies of Borrelia burgdorferi- 1998b. Vol.64. - P. 1169-1174.

86. Lacombe E., Rand P. W., Smith R. P., Vary C. P. Disparity of Borrelia burgdorferi infection rates of adult Ixodes dammini on deer and vegetation// V Int. Conf. Lyme Borreliosis. Program and abstract. Arlington., Va., USA. 1992. -P.49A

87. Labuda M., Danilova V., Jones L.D., Nuttal P.A. Amplification of tickborne encephalitis virus infection during co-feeding of ticks // Med. Vet. Entomol.- 1993.-Vol.7.-P.339-342.

88. Lebech A.M., Hinderson P., Vuust J., Hansen K. Comparison of in vitro culture and polymerase chain reaction for detection of Borrelia burgdorferi in tissue from experimentally infected animals // J. Clin. Microbiol. 1991. — Vol.29. -P.731-737.

89. Le Fleche A., Postic D., Girardet K., Peter O., Baranton G. Characterization of Borrelia luisitaniae sp. nov. By 16S ribosomal DNA sequence analysis // Int. J. Syst. Bacteriol. 1997. - Vol. 47. - P.921-925.

90. Liebisch G., Sohns B., Bautsch W. Detection and typing of Borrelia burgdorferi sensu lato in Ixodes ricinus ticks attached to human skin by PCR // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol.36. - P.3355-3358.

91. Liveris D., Gazuman A., Schwartz I. Molecular typing of Borrelia burgdorferi sensu lato by PCR-restriction fragment lenght polymorphism analysis // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol.33. - 589-595.

92. Livesley M.A., Carey D., Gern L., Nuttall P.A. Problems of isolating Borrelia burgdorferi from ticks collected in United Kingdom foci of Lyme disease // Med. Vet. Entomol. 1994. - Vol.8. - P. 172-178.

93. Ludwig M., Kratzmenn M., Alberti G., Kozlicci M. Accumulation of heavy metal in two oribatid mites// Modern acarology. Vol.1. (Eds: F. Dushbabek, V. Bukva). Prague: Academia.1991. P. 431-437.

94. Magnarelli I.A., Denicola A., Stafford K.C. III., Anderson J.F. Borrelia burgdorferi in an urban environment: white-tailed deer with infected ticks and antibodies//!. Clin. Microbiol. 1995.-Vol.33.-P.541-544.

95. Marconi R.T., Garon C.F. Development of PCR primer sets for diagnosis of Lyme disease and for species-specific identification of Lyme disease isolates by 16S rRNA signature nucleotide analysis // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30. -P.2830-2834.

96. Matushka F.R., Endepols S., Richter D., Ohlenbusch A. II., Eiffert A., Spielman A. Risk of urban Lyme disease enhanced by the presence of rats// J. Infect. Dis. 1996. - Vol.174. - P.l 108-1111.

97. Matushka F.R., Endepols S., Richter D., Spielman A. Competence of urban rats as reservoir hosts for Lyme disease spirochetes// J. Med. Entomol. 1997. -Vol.34.-N.4.-P.489-493.

98. Misonne M.-C., Hoet.P. Species-specific plasmid sequences for the PCR identification of the three species of Borrelia burgdorferi sensu lato involved in Lyme disease // J. Clin. Microbiol. 1998a. - Vol.36. - P.269-272.

99. Misonne M.-C., Van Impe G., Hoet P. Genetic heterogeneity of Borrelia burgdorferi sensu lato in Ixodes ricinus ticks collected in Belgium // J. Clin. Microbiol. 1998b. - Vol.36. - P.3352-3354.

100. Mitchell G.B.B., Smith I.W. Lyme disease in Scotland: result of a serological study in sheep//Vet. Res. 1993.-Vol.133.-P.66-67.

101. Murphy G.L., Ewing S.A., Whitworth L.C., Fox J.C., Kocan A.A. A molecular and serological survey of Ehrlichia canis, E. chafeensis, and E. ewingii in dogs and ticks from Oklahoma // Vet. Parasitol. 1998. - Vol.79. - P.325-339.

102. Nakao M., Miyamoto K., Fukunaga M. Lyme disease spirochetes in Japan: enzootic transmission cycles in birds, rodents, and Ixodes persulcatus ticks // J. Infect. Dis. 1994. - Vol. 170. - P.878-882.

103. Nakao M., Miyamoto K. Mixed infection of different Borrelia species among Apodemus speciosus mice in Hokkaido, Japan // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol.33. -P.490-492.

104. Olsen B., Jaenson T.G.T., Noppa L., Bunikis J., Bergstrom S. A. Lyme borreliosis cycle in seabirds and Ixodes uriae ticks // Nature. 1993. — Vol.362. -P.340-342.

105. Olsen B., Jaenson T.G.T., Bergstrom S. A. Prevalence of Borrelia burgdorferi sensu lato-infected ticks on migrating birds // Appl. Environ. Microbiol. 1995. - Vol.61. - P.3082-3087.

106. Persing D.H., Mathiesen D., Marshall W.F., Telford S.R., Spielman A., Thomford J.W., Conrad P.A. Detection of Babesia microti by polymerase chain reaction // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol.30. - P.2097-2103.

107. Pichon B., Godfroid E», Hoyois B., Rodhain F., Perez-Eid C. Simultaneousinfection of Ixodes ricinus nymphs by two Borrelia burgdorferi sensu lato species:possible implications for clinical manifestations // Emerg. Infect. Dis. 1995. -Vol.1. -P.89-90.

108. Piesman J., Hicks T. C., Sinsky R. J., Obiri G. Simultaneous transmission of Borrelia burgdorferi and Babesia microtii by individual nymphal Ixodes dammini ticks // J. Clin. Microbiol. 1987. - Vol.25. - P. 2012-2013.

109. Postic D., Korenberg E., Gorelova N., Kovalevski Y.V., Bellenger E., Baranton G. Borrelia burgdorferi sensu lato in Russia and neighboring countries:k. >high incidence of mixed isolates // Res. Microbiol. 1997. - Vol.148. - P.691-702.

110. Pusteria N., Leutenegger C.M., Huder J.B., Weber R., Braun U., Lutz H. Evidence of the human granulocytic ehrlichiosis agent in Ixodes ricinus ticks in Switzerland // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol.37. - P. 1332-1334.

111. Radda A. Die Zeckenenzephalitis in Europa: Geographische Verbreitung V und Ökologie des Virus// Z. Angew. Zool. 1973. - Vol.60. - P. 409-461.

112. Ramelow C., Suss J., Berndt D., Roggendorf M., Schreirer E. Detection of tick-borne encephalitis virus RNA in ticks {Ixodes ricinus) by the PCR // J. Virol. Methods. 1993. - Vol.45. —P.115-119.

113. Ravyn M. D., Korenberg E. I., Oeding J. A., Kovalevskii Y. V., Johnson R. C. Monocytic Ehrlichia in Ixodes persulcatus ticks from Perm, Russia// Lancet. -1999. Vol.353. - P.722-723.

114. Rettich F. Occurrence of mosquitoes Culex pipens molestus in Prague // Folia Parasitológica. 1983. - Vol. 30. - P.384.

115. Richter Jr.P.J., Kimsey R.B., Madigan J.E., Barlough J.E., Dumler J.S., Brooks D.L. Ixodes pacificus (Acari: Ixodidae) as a vector of Ehrlichia equi (Rickettsiales: Ehrlichieae) // J. Med. Entomol. 1996. - Vol.33. - P. 1-5.

116. Robinson W. H. Urban entomology. London: Chapman and Hall. 430 pp. 1996.

117. Rosa P.A., Schwan T.G. A specific and sensitive assay for the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi sensu lato using the polymerase chain reaction // J. Infect. Dis. 1989. - Vol. 160. - P. 1018-1029.

118. Rosa P.A., Hogan D., Schwan T.G. Polymerase chain reaction analysis identify two distinct classes of Borrelia burgdorferi II J. Clin. Microbiol — 1997 -Vol.29. -P.524-532.

119. Rupes V. Ants (in Czech). In: How to control pests in households. V. Rupes (ed.) P. 38-47. Prague, Hermes, 1998.

120. Saint Girons I., Gern L., Gray J.S., Guy E.C., Korenberg E., Nuttall P.A., Rijpkema S.G.T., Schonberg A., Stanek G., Postic D. Identification of Borrelia burgdorferi sensu lato species in Europe // Zentralbl. Bacteriol. 1998. — Vol.287. — P.190-195.

121. Schouls L.M., van de Pol I., Rijpkema S.G.T., Schot C.S. Detection and identification of Ehrlichia, Borrelia burgdorferi sensu lato, and Bartonella species in Dutch Ixodes ricinus ticks // J.Clin. Microbiol 1999. - Vol.37. - P.2215-2222.

122. Schwartz I., Varde S., Nadelman R.B., Wormser G.P., Fish D. Inhibition of efficient polymerase chain reaction amplification of Borrelia burgdorferi DNA in blood-fed ticks // Am. J. Trop. Med. Hyg. 1997. - Vol.56. - P.339-342.

123. Shiu S.Y.W., Ayres M.D., Gould E.A. Genomic sequence of the structural of the structural proteins of louping ill virus: comparative analysis with tick-borne encephalitis virus // Virology 1991. - Vol. 180. - P.411-415.

124. Sparagano O. A. E., Allsopp M. T. E. P., Mank R.A., Rijpkema S.G.T., Figeuroa J.V., Jongejan F. Molecular detection of pathogen in ticks (Acari: Ixodidae): a review// Exp. Appl. Acarol. 1999. - Vol. 23. - P.929-960.

125. Steere A.C., Malawista S.E., Snydman D.R., Shope R.E., Andiman W.A., Ross M.R., Steele F.M. Lyme arthritis: an epidemic of oligoarticular arthritis in children and adult in three Connecticut communities // Arthritis Rheum. 1997. -Vol.20.-P.7-17.

126. Steere A.C. Lyme disease // New Engl. J. Med.- 1989. Vol.321. - P.586-596.

127. Stejskal V., Verner P. H. Long term changes of cockroach infestations in Czech and Slovak food-processing plants // Med. and Vet. Entomol. 1996. - Vol. 10. - P.103-104.

128. Stejskal V., Honek A. Climatic determination of synanthropic pest arthropod performance: species richness, pesticide resistance and control strategies.// Med. and Vet. Entomol. 1999. - Vol.16. - P.539-550.

129. Suss J., Beziat P., Ramelow C., Kahl O. Tick-borne encephalitis virus (TBEV)-specific RT-PCR for characterization of natural foci of TBE and for other applications//Zentrabl. Bacterid- 1998.-Vol.286.-P. 125-138.

130. Wagner G., Cruz D., Holman P., Waghela S., Perrone J., Shompole S., Rurangirwa F. Non-immunologic methods of diagnosis of babesiosis // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. 1992. - Vol.87. - P. 193-199.

131. Ward V.K., Marriott A.C., "Booth T.F., EL-Ghorr A.A., Nuttal P.A. Detection of an arbovirus in an invertebrate and a vertebrate host using the PCR // J. Virol. Methods. 1990. - Vol.30. - P.291-300.

132. Wilson K.H., Blitchington R.B., Greene R.C. Amplification of bacterial 16S ribosomal DNA with polymerase chain reaction // J. Clin. Microbiol. 1990. -Vol.28.-P.1942-1946.

133. Wittenbrink M.M., Thiele D., Krauss H. Comparison of dark-field microscopy, culture, and polymerase chain reaction (PCR) for detection of Borrelia burgdorferi in field-collected Ixodes ricinus ticks // Zentrabl. Bacteriol. -1994.-Vol.281.-P.183-191.