Фитохимическое изучение и стандартизация лекарственных средств и биологически активных добавок из продуктов переработки винограда культурного (Vitis vinifera L.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 15.00.02, кандидат фармацевтических наук Еремина, Анастасия Викторовна

• Еремина, Анастасия Викторовна
• кандидат фармацевтических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат фармацевтических наук Еремина, Анастасия Викторовна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Химический состав жома плодов винограда.

1.1.1 Характеристика липофильного комплекса жома плодов винограда.

1.1.2 Характеристика полифенольного комплекса жома плодов винограда.

1.2 Химический анализ полифенолов винограда.

1.2.1 Катехины.

1.2.2 Проантоцианидины.

1.2.3.Феноловые кислоты.

1.3 Механизмы фармакологического действия флавоноидов.

1.4 Применение ЛП и БАД на основе экстрактов винограда в медицинской практике.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

ГЛАВА 2 Изучение возможности применения жома плодов винограда в качестве источника экстрактов с выраженной биологической активностью

2.1 Получение образцов сухого экстракта жома плодов винограда.

2.2 Изучение биологической активности экстрактов жома плодов и гребней винограда с помощью ферментных биотест-систем.

ГЛАВА 3 Скрининговый анализ полифенольных соединений в сухих экстрактах жома плодов и гребней винограда

3.1 Предварительный качественный анализ полифенольных соединений в анализируемых экстрактах.

3.2 Спектрофотометрический анализ экстрактов жома плодов и гребней винограда в УФ-области спектра.

3.3 ВЭЖХ-анализ полифенольных соединений в анализируемых экстрактах.

3.4 Хроматографический анализ полифенольных соединений в экстрактах жома плодов и гребней винограда в тонких слоях сорбента.

ГЛАВА 4 Разработка комплексного подхода к качественному и количественному анализу полифенольных соединений в сухих экстрактах жома плодов и гребней винограда

4.1 Качественный анализ полифенолов в анализируемых экстрактах.

4.2 Количественный анализ полифенолов в анализируемых экстрактах

ГЛАВА 5 Оценка полифенольного состава некоторых биологически активных добавок отечественного и зарубежного производства

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фитохимическое изучение и стандартизация лекарственных средств и биологически активных добавок из продуктов переработки винограда культурного (Vitis vinifera L.)»

Актуальность темы.

В настоящее время на Российском фармацевтическом рынке появляется большое количество лекарственных препаратов и биологически активных добавок (БАД) из лекарственных растений, не включенных в Государственную Фармакопею, но обладающих выраженной биологической активностью и полезными для здоровья человека эффектами. Ярким примером являются препараты на основе экстрактов Винограда культурного (Vitis vinifera L.,сем. Vitaceae).

Большая популярность препаратов винограда обусловлена их высокой фармакологической активностью и выраженными клиническими эффектами. История появления этих препаратов связана с изучением полезных свойств красного виноградного вина и явлением, получившим название «французский парадокс». Суть которого заключается в существенном снижении уровня сердечно-сосудистой заболеваемости в популяции на фоне традиционного потребления продуктов виноделия. Экстракты винограда содержат комплекс полифенольных соединений, обладающих очень мощным антиоксидантным действием, по силе превышающем аскорбиновую кислоту в 20 раз и а-токоферол в 50 раз, благодаря чему эти соединения названы самыми важными биологически активными добавками десятилетия [76].

Экстракты винограда получают из разных частей Винограда культурного. Так на основе семян винограда за рубежом созданы лекарственные препараты и биологически активные препараты, известные под различными торговыми названиям и представленные на российском рынке - «Эндоте-лон», «Пикногенол», «Grape seed», «Французский парадокс» и др. Основное фармакологическое действие этих препаратов — лечение и профилактика сердечно-сосудистых заболеваний.

У нас в стране начало изучения биологически активных соединений винограда связано с изучением водно-спиртового экстракта гребней винограда под названием «Каприм», разработанного около 30 лет назад в Тихоакеанском океанологическом институте АН СССР под руководством И.И. Брех-мана. Первые промышленные партии производились из отходов винограда, выращенного в Кахетии, отсюда и произошло название «Каприм» (Кахетия — Приморье).

Основное действие Каприма — повышение сопротивляемости организма токсическому действию алкоголя и сильные антиоксидантные свойства. На его основе до настоящего времени производится ряд БАД: «Корда-Парафарм», «Биомиллениум», «Нестарин» и др.

В качестве лекарственного растительного сырья для экстрактов винограда до недавнего времени отечественные производители использовали, как правило, гребни винограда. Недавно на российском рынке парафармацевти-ческих товаров появилась БАД «Иммортель», сырьём для получения которой служит сок плодов винограда. Помимо экстрактов винограда отечественные производители БАД начали выпускать «Экстракты красного виноградного вина» (Парафарм, Эвалар).

Отходом винодельческой промышленности помимо гребней является жом плодов винограда, который может стать перспективным сырьевым источником для получения обогащенных антиоксидантными веществами экстрактов.

Полифенольные соединения винограда представлены различными классами органических соединений, поэтому стандартизация препаратов на основе экстрактов винограда по показателям качественный состав и количественное содержание действующих веществ представляет собой очень сложный и трудоёмкий процесс, требующий применения современных физико-химических методов анализа. Разработка простых и легко воспроизводимых методик качественного и количественного анализа полифенольных соединений в сухих экстрактах винограда является актуальной.

Цель исследования и задачи исследования

Целью настоящей работы является совершенствование стандартизации различных экстрактов винограда, а также ЛП и БАД на их основе и изучение потенциальной возможности применения жома плодов винограда в качестве сырьевого источника для получения экстрактов с выраженной биологической активностью.

В соответствии с указанной целью было предусмотрено решение следующих задач:

1. Подобрать оптимальные технологические условия для получения экстрактов из жома плодов винограда.

2. Изучить биологическую активность полученных экстрактов жома плодов винограда при помощи ферментных биотест-систем in vitro.

3. Провести скрининговый анализ полифенольных соединений винограда в сухих экстрактах жома плодов и гребней винограда с помощью химических и физико-химических методов анализа с целью выявления л < ведущей группы биологически активных веществ для каждого вида экстракта.

4. Обосновать основные показатели, характеризующие качественный состав и количественное содержание фармакологически значимых полифенольных соединений в сухих экстрактах гребней и жома плодов винограда.

5. Провести анализ количественного содержания полифенольных соединений в некоторых БАД на основе экстрактов винограда отечественного и зарубежного производства с помощью разработанных нами методик.

Научная новизна

Впервые изучен полифенольный состав водно-спиртовых экстрактов из жома плодов сортовой смеси Винограда культурного (Ркацители и Молдова), произрастающего на территории РФ. Показано, что изучаемые экстракты обладают выраженной антиоксидантной активностью.

Проведён скрининговый химический и физико-химический анализ поли-фенольных соединений в промышленных образцах сухого экстракта гребней винограда и в изучаемых образцах экстрактов жома плодов винограда, по результатам которого выявлены ведущие группы биологически активных веществ для последующей стандартизации этих экстрактов. Показано наличие взаимосвязи между биологической активностью и содержанием определённых групп полифенольных соединений в различных экстрактах винограда.

На основании проведённых исследований разработан комплексный подход к стандартизации ЛП и БАД на основе различных экстрактов винограда и виноградного вина по показателям «подлинность» и «количественное определение».

Разработаны высокоспецифичные методики качественного анализа проан-тоцианидинов, позволяющие идентифицировать эти соединения в различных экстрактах винограда и виноградного вина, а также ЛП и БАД на их основе.

Разработаны методики количественного анализа проантоцианидинов и суммы полифенольных соединений в различных экстрактах винограда и виноградного вина, а также ЛП и БАД на их основе, обеспечивающие повышение требований к контролю их качества.

Положения, выносимые на защиту

На защиту выносятся результаты по изучению полифенольного состава и биологической активности экстрактов из сортовой смеси жома плодов винограда (Ркацители и Молдова), а также промышленных образцов экстракта гребней винограда; результаты исследований по разработке и обоснованию применения комплексного подхода к качественному и количественному анализу биологически значимых полифенольных соединений винограда в различных экстрактах, ЛП и БАД.

Практическая значимость работы и внедрение в практику

На основе результатов проведённого исследования, при перерегистрации БАД «Корда-Парафарм» внесены изменения в разделы «подлинность» и «количественное определение» биологически активных соединений ТУ 9176050-46865780-04, регламентирующих её качество.

Результаты исследований легли в основу разработки разделов «подлинность» и «количественное определение» биологически активных соединений нормативной документации (ТУ 9176-051-46865780-04) для БАД «Экстракт красного вина — Парафарм».

Методики количественного анализа полифенольных соединений винограда апробированы в ОАО «Красногорсклексредства».

Апробация работы

Основные положения диссертационной работы доложены на: XI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, апрель 2004 г.); II научной конференции «Биотехнология — охране окружающей среды». Школа для специалистов: «Биокорректоры — нелекарственные оздоровительные продукты. Фундаментальные и прикладные аспекты» (г. Москва, 25-26 мая 2004 г., МГУ им. М.В. Ломоносова, Биологический факультет); Конгрессе детских кардиологов (26 мая 2004 г); Научно-практическом семинаре «Новые технологии биологической медицины (фундаментальные и клинические аспекты проблемы)» (г. Москва, 11 июня РАСХ).

Заключение диссертации по теме «Фармацевтическая химия и фармакогнозия», Еремина, Анастасия Викторовна

Общие выводы

1. Подобраны оптимальные технологические условия получения экстрактов жома плодов винограда; с помощью ферментных биотест-систем in vitro показано наличие максимальной антиоксидантной активности у экстракта, полученного с помощью 60% этанола.

2. Проведён скрининговый анализ полифенольных соединений в экстрактах жома плодов винограда и экстракте гребней винограда с помощью специфических химических реакций, ТСХ, УФ-спектрофотометрии и ВЭЖХ.

3. Подобраны оптимальные условия для ВЭЖХ-анализа, что позволило идентифицировать в экстракте гребней винограда галловую кислоту, кофейную кислоту, флавоноиды (апигенин, катехин, кверцетин, рутин, гесперидин); в экстрактах жома плодов винограда галловую кислоту, кофейную кислоту и катехин. Установлено, что галловая кислота является доминантным соединением для всех изучаемых экстрактов.

4. Предложены и обоснованы методики качественного и количественного анализа полифенольных соединений в анализируемых экстрактах жома плодов и гребней винограда, доступные для реализации в производственных условиях.

5. Проведён количественный анализ суммы флавоноидов, проантоцианидинов и свободных полифенолов в JIC и БАД, производимых на основе экстрактов из различных частей Винограда культурного.

6. Выявлены ведущие группы БАВ для различных экстрактов винограда, что позволило разработать комплексный подход, согласно которому стандартизацию экстрактов жома плодов, семян винограда, сухих экстрактов вина, экстрактов из свежих виноградных плодов и, соответственно, ЛС и БАД на их ос нове не обходимо пр оводить по двум показателям: содержание суммы проантоцианидинов, в пересчёте на цианидин и содержание суммы полифенольных соединений в пересчёте на галловую кислоту; экстракты гребней и листьев винограда, а также ЛС и БАД на их основе по показателям: содержание суммы флавоноидов в пересчёте на рутин и содержание суммы полифенольных соединений в пересчёте на галловую кислоту.

7. Полученные данные могут быть использованы для стандартизации и повышения контроля качества ЛС и БАД, содержащие экстракты винограда. На основании результатов проведённого исследования внесены изменения в соответствующие разделы нормативной документации, регламентирующей качество БАД «Корда-Парафарм» и «Экстракт красного вина - Парафарм».

Список литературы диссертационного исследования кандидат фармацевтических наук Еремина, Анастасия Викторовна, 2005 год

1. Андреев В.В., Сухомлина О.А. Перспективы промышленного производства и применения естественных пищевых красителей. -Кишинёв: Молд. НИИНТИ. 1971. - 46 с.

2. Антипенко Е.М., Кузнецов В.П., Полимерные адсорбенты аффинного типа в исследовании физиологически активных веществ VI. Перспективы ЖКХ дубильных веществ (обзор) // Химико-фармацевтический журнал. 1995. - 29, № 9.- С. 53-60.

3. Бандюкова В.А. Фенолокислоты растений, их эфиры и гликозиды // Химия природных соединений. — 1983. №3. - С. 263-273.

4. Барабой В. А. Закономерности и механизмы биологического действия некоторых растительных фенольных соединений: Автореферат дисс. доктора мед. наук. Москва, 1971. - 36 с.

5. Барабой В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений. Киев: Наукова думка, 1976. — 260 с.

6. Барабой В.А. Растительные фенолы и здоровье человека. М.: Наука, 1984. -160 с.

7. Бауер К.Х. Анализ органических соединений. -М.: Изд. ИЛ, 1953. -470 с.

8. Бездетко Г.Н., Хасина Э.И., Дардымов И.В. Адаптогенное действие каприма // Валеология: Диагностика, средства и практика обеспечения здоровья. Вып. 2, Владивосток: Дальнаука. 1995, С. 178 197.

9. Беленко E.JI. Абсолютное содержание и экстрагируемость липидов виноградной ягоды // Физиология растений. — 1984. — том 31, № 1. — С. 162-167.

10. Биохимия фенольных соединений. / Под. ред. Д. Харборна. М.: Мир. -1968.-451 с.

11. Блажей А., Шутый JL, Фенольные соединения растительного происхождения. М.: Мир, 1977. - 239 с.

12. Богачёв В.Ю. Системное лечение хронической венозной недостаточности нижних конечностей // CONSILIUM-PROVISORUM. -2002.-том 2, №2.-С. 21-26.

13. И.Брехман И.И. Что противопоставить вредному действию алкоголя. Владивосток: Дальпресс, 1994.- 70 с.

14. Виноградные семена: Характеристики и состав масла (перевод) / A.M.Gattuso et al. // J. Soc. Italiano de Scienze del Alimentaziona. 1983. -том 12, № 11.-С. 47-54.

15. Влияние влагосодержания и размера частиц на экстрагируемость масла из семян винограда при помощи надкритического СОг (перевод) / Snyder

16. J.M. et al. // J. American Oil Chem. Soc. 1984. - том 61, № 11. - С. 18511856.

17. Выделение и анализ природных биологически активных веществ. Под ред. Е.Е. Сироткиной. Томск. - 1987. - С. 138-157.

18. Георгиев В.И., Дурнев А.Д., Середенин С.Д. // Бюл. эксперим. биол. и мед. Вып. 9,1994, С. 270-273.

19. Гледин В.М. Разделение дубильных веществ смешанной группы на пирогалловые и пирокатехиновые танниды // Аптечное дело. 1958. -№3.-С. 70.

20. Городецкий Ф.Ф., Барабой В.А. Противолучевые свойства галлатов. Киев. 1963.- 126 с.

21. Государственная фармакопея СССР Х1-е изд. Вып. 2. — М.: Медицина.- 1990.-392 с.

22. Дремова Н.Б., Литвинова Т.М. лекарственные средства для лечения рака молочной железы // «В мире лекарств».- 2000.- № 4 www.medi.ru.

23. Египетское виноградное масло. Экстракция, константы, жирные кислоты и неомыляемые вещества (перевод) / Zeany В.A. et al. // Crasas у Aceites. 1982.- том 33, №3.- С. 158-161.

24. Егоров И.А., Родопуло А.К. Исследование эфирных масел в некоторых сортах винограда // Виноделие и виноградарство СССР. 1978. - № 14. С. 36-38.

25. Жеребин Ю.Л., Колесник A.A. Токоферолы виноградной ягоды // Химия природных соединений. 1983. - № 2. - С. 247-248.

26. Жеребин Ю.Л., Колесник A.A. Триацилглицериды виноградной ягоды // Химия природных соединений. 1983. - № 4. — С. 525-526.

27. Жеребин Ю.Л., Колесник A.A. Каротиноиды виноградной ягоды // Химия природных соединений. 1984. - № 1. - С. 111-113.

28. Жеребин Ю.Л., Колесник A.A. Фосфолипиды виноградной ягоды // Химия природных соединений. 1984. - № 2. - С. 165-168.

29. Зозуля Ю.Л., Барабой В.А., Сутковой Д.А. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная защита мозга при патологии головного мозга. М: Знание. 2000. - 344 с.

30. Кения М.В., Лукаш А.И., Гуськов Е.П. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе // Успехи современной биологии. 1993. - Том 13, вып.4 - С. 456-470.

31. Кириенко А.И., Григорян P.A., Богачев В.Ю. Фармакотерапия хронической венозной недостаточности нижних конечностей // CONSILIUM-MEDICUM. 2000,- № 4 www.consilium-medicum.com.

32. Теселкин Ю.О., Бабенкова И.В. Антиоксидантная активность сыворотки крови // Вестник РАМН. 1999. -№2. - С. 15-22.

33. Клышев Л.К., Бандюкова В.А„ Алюкина Л.С. Флавоноиды растений. -Алма-Ата: Наука Каз.ССР. 1978. - 220 с.

34. Косман М.В. Идентификация фенольных соединений растительного происхождения методом обращённо-фазовой высокоэффективной хроматографии: Дисс. канд. фарм. наук. — Москва, 1997. 148 с.

35. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Гордейчук Т.Н. и др. Влияние Каприма на состояние этанолокисляющей системы // Валеология: Диагностика, средства и практика обеспечения здоровья. — Владивосток: Дальнаука, 1995.-вып. 2.-С. 162-168.

36. Кушнерова Н.Ф., Фоменко С.Е., Гордейчук Т.Н. Антиоксидантный эффект пищевой добавки Коррда-К при алкогольной интоксикации // V Международная конференция «Биоантиоксидант». Тез. докл. Москва. — 1998.-С. 312-313.

37. Литвинова Л.Б., Федорченко Т.Б. Влияние растительных масел на женскую репродуктивную систему // Экспер. и клин, фармакология. — 1984. -57, №4. -С. 49-59.

38. Масло семян винограда и возможность его использования (перевод) / Malik F., Sohmidt S. et al II Vinphrad. 1985. - том 23, № 9. - С. 207-208.

39. Мееров Я.С., Кошевой Е.П., Масликов В.А. Анализ возможностей получения и использования виноградных семян масложировойпромышленностью Северного Кавказа // Труды НИИ Пищ. Промышленности. 1969. - том 5. - 58 с.

40. Миронова А.Н., Козлова В.Л., Волкова З.Д. Химический состав и биологические свойства масла из семян винограда // Вопросы питания. -1990.-№5.-С. 35-37.

41. Нестерова О.В. Фармакогностическое изучение видов пищевого растительного сырья с целью получения биологически активных веществ липидной природы: Дисс. докт. фарм. наук. — Москва, 1997.

42. Подколзин A.A., Мегреладзе А.Г., Донцов В.И. Система антиоксидантной защиты организма и старение // Профилактика старения. 2000. - № 3. - С. 5-26.

43. Пономарёв В.Д. Экстрагирование лекарственного растительного сырья. М.: Медицина. 1976. - 125с.

44. Родопуло А.К. Ароматообразующие вещества винограда и виноградного сока // Виноделие и виноградарство СССР. 1987. - № 4. - С. 53-55.

45. Сапронова H.H., Сорокина A.A. Формулы биологически активных соединений: Учеб. пособие. М., 2000. - 56 с.

46. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф. и соавт. Стресс протективное действие диприма// Экспер. и клинич. фармакология. - 2002. - № 4 www.folium.ru.

47. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф. Метод оценки и стандартизации олигомерных проантоцианидиновых, полученных из различных видов растительного сырья // Химико-фармацевтический журнал. 2002. - 36, №3. - С. 31-35.

48. Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф. Калина новый нетрадиционный источник олигомерных проантоцианидинов// Химико-фармацевтический журнал. - 2004. - 38, №2. - С. 41-45.

49. Танчев С.С. Антоцианы в плодах и овощах. М.: Пищевая промышленность, 1980. — 249 с.

50. Фармакогнозия: Учебник. Д.А. Муравьёва. 3-е изд., перераб. и доп. - \ М.: Медицина, - 1991. - 560 с.

51. Холмгрин Е., Литвак В. О пользе вина для здоровья человека // Виноград и вино России. 1998. - № 6. - С. 34-35.

52. Хроматография. Практическое приложение метода. Под ред. Э Хофтман. В 2-х ч. М.: Мир, 1986. - 336 с.

53. Шмидт О. Биологические методы анализа растений. М.: Изд. ИЛ. 1960. - 542 с.

54. Acker S.A., Tromp M.N., Haenen G. R. et al. Flavonoids as scaveringers of nitric oxide radical //Biochem. Biophys. Reserch Commun. 1995. - 85. -P.755-759.

55. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen T.M. Oxidants, anthioxidants and the degenerative diseases of aging // Proc. Natl.Acad.Sci. — 1993. vol. 90. - P. 7915-7922.

56. Amic D., Davidovic D., Beslo D. Structure-radical scavenging activity relationships of flavonoids // Croatica Chemica Acta. 2003. - 76, №1. - C. 55-61.

57. Arai Y., Watanabe S. Kimira M et al. Dietary intakes of flavonols, flavones and isoflavones by Japanese woman and the correlation between quercetin intake and plasma LDL cholesterol consentration // J. Nutrition. 2000. -130, P. 2243-2250.

58. Ascorbic acid and proanthocyanidin composition for topical application to human skin: Заявка 323095 США, МКИ A 61 К 6/00, A 61 К 31/34A 61 К31/355. Sheldon Lerner, San Diego, Calif. № 5470874; Заявл. 14.10.94; Опубл. 28.11.05.

59. Bagchi D., Bagchi M., Stohs S. et al. Free radicals and grape seed proanthocyanidins extract: importance in human health and disease prevention //Toxicology. 2000. - 148, № 2-3. - P. 187-197.

60. Bate-Smith E.C. Tannins of Herbaceous Leguminosae // Phytochemistry. -1973. 12, №7. - C. 1809-1812.

61. Bate-Smith E.C. Haemanalysis of tannins: The concept of relative astringency // Phytochemistry. 1973.- 12, №4. - P. 907-912.

62. Bate-Smith E.C. Phytochemistry of proanthocyanidins // Phytochemistry. — 1975.- 14.-C. 1107-1113.

63. Boukharta M., Girardin M., Metche M. Procyanidols oligomeres des sarments de vigne, cepage Carignan // Vitis. -1994. 33,№ 1. - P. 5-10.

64. Bourzeix M., Weyland D., Heredia N. Etude des catechines et des procyanidols de la grappe de raisin du vin et d'autees derives de la vigne // Bull. O.I.V. 1986. - 59, № 669-670. - P. 1171 - 1254.

65. Carando S., Tessedre P-L. et al. Levels of flavan-3-ols in French wines // J. Agric. Food Chem. 1999. - 47. - P. 4161-4166.

66. Carando S., Tessedre P-L., Cabanis J.C. Estimation de Г apport en catechines et procyanidins relative a une consommation moderee et reguliere de vins en France // Bulletin O.I.V. 1999. - 72. - P. 73-86.

67. Constant J. Alcohol, ishemic heart disease and the French paradox // Clin. Cardiol. 1997. - 2, № 5. - P. 420-424.

68. Cos P., Ging L., Colomme M. et al. Structure, activity, relationship and classification of Flavonoids as inhibitors of xanthine oxidase and superoxide scavengers // J. Nat. Prod. 1998. - 61. - P. 71-76.

69. Dunnick J.K., Hailey J.R. Toxicity and carcinogenicity studies of quercetin and naturals components of food // Fundam. Appl. Toxicol. 1992. - 19. - P. 423-431.

70. Escribano M.T., Guerra M.T. et al. Proanthocyanidin composition in skin and seed from grapes // Polyphenols. 1994. - 23. - C. 223-226.

71. Formica J.V., Regelson W. Review of the biology of quercetine and related bioflavonoids // Food Chem. Toxicol. 1995. - 33. - 1061-1080.

72. Fotsis T., Repper M., Aktas E. et al. Flavonoids, dietary-derived inhibitors of cell proliferation and in vitro angiogenesis // Cancer Res. — 1997. 57. - P. 2916-2921.

73. Hair-growing agent comprised of proanthocyanidins: Заявка 08/765634 США, МКИ A 61 К 7/06, A 61 К 35/78. Tomoya Takahashi, Yoshinori Kobayashi, Michio Kawamura et al., Tokio. № 6126940; Заявл. 30.06.95; Опубл. 03.10.2000.

74. Hammerstone J.F., Lazarus S.A., Mitchell A.E. et al. Identification of procyanidins in cocoa (Theobroma cacao) and chocolate using HighPerformance Liquid Chromatography/Mass Spectrometry // J. Agric. Food Chem. 1999. - 47. - P. 490-496.

75. Hertog M.G., Kromhout D., Aravanis C. et al. Flavonoids intake and long-term risk of coronary heart disease and cancer in seven countries study // Arch. Inter. Med. 1995. - 155. - P. 381-386.

76. Hmamouchi M. et al. Quantitative and qualitative analysis for cluster proanthocyanidins of four grape varieties issuing from Morocco // Bull. O.I.V.- 1994. v. 67, № 765/766. - P. 901-915.

77. Hradzina G. Anthocyanins. The flavonoids: advances in research // Ed. J. B. Harborn. London. New-York. 1982. - P. 135-188.

78. Kallay M., Kerenyi Z. Occurrence and identification of procyanidins in Hungarian grapes and wines //Hungarian Agricaltural Research. 1999. - 8, №4. -P. 17-20.

79. Kallithraka S., Garcia-Viguerra C., Bakker J., Bridle P. Extraction techniques and HPLC analysis of phenolic compounds from grape seeds // Polyphenols. — 1994. № 23-27. -P.226-228.

80. Kantz K., Singleton V. Isolation and determination of polymeric Polyphenols using Sephadex LH-20 and analysis of grape tissue extracts // Am. J. Enol. Vitic. 1990. -41, № 3. - P. 223-228.

81. Kaul T.N., Middleton E.J., Ogra P.L. Antiviral effects of flavonoids on human viruses // J. Med. Virol. 1985. - 15. - P. 71-79.

82. Kerry N.L., Abbey M. Red wine and fractionated phenolic compounds prepared from red wine inhibit low density lipoprotein oxidation in vitro //Atherosclerosis. 1997. - 135. - P.93-102.

83. Kiraly-Veghely Z., Tyihak E. et al. Identification and measurement of Resveratrol and formaldehyde in parts of white and blue grape berries // Acta biologica Hungarica. 1998. - 49, № 2-4. - C. 281-289.

84. Knekt P., Jarvinen R., Seppanen R. et al. Dietary Flavonoids and the risk of lung canser and other malignant neoplasms //Am. J. Epidemiol. 1997. - 146. -P. 223-230.

85. Kopp P. Resveratrol a phytoestrogen found in red wine // Eur. J. Endocrinol.- 1998. 138, № 6. - P. 619-620.

86. Korkina L.G., Afanas'ev I.B. Antioxidant and chelating properties of flavonoids//Adv. Pharmacol. 1997.-38.-P. 151-163.

87. Lamuela-Raventos R.M., Waterhouse A. L. A direct HPLC separation of wine phenolics // Am. J. Enol. Vitic. 1994. - 45,№ 1. - P. 1-4.

88. Lang F., Wilhelm E. Quantitative determination of proanthocyanidins in Ginkgo biloba special extracts // Pharmazie. 1996. - 51, №10. - C. 734-737.

89. Lardos A., Kreuter M.H., Examine the red vine leaf and its therapeutic potential in the field of vascular diseases // Ingredient research. 2002 e. [e-mail].

90. Lea A.G. Reversed phase gradient HPLC of proanthocyanidins and their oxidation products in cider, wines, optimized by snyder's procedure // J. Chromatography. - 1980. - 194. - P. 62-68.

91. Lea A.G., Bridle P., Timberlake C.F. et al. The procyanidins of white grapes and wines // Am. J. Enol. Vitic. 1979. - 30. - P. 289-230.

92. Lee C.Y., Oszmianski J. Isolation and HPLC-determination of phenolic compounds in red grapes // Am. J. Enol. Vitic. 1990. - 41, № 1. - P. 87-89.

93. Lee C.Y., Jaworski A.W. Identification of some phenolics in white grapes // Am. J. Enol. Vitic. 1990. - 41, № 3. - P. 204-206.

94. Lipoprotein lowering agent, cholesterol lowering agent and medicaments comprising these agents respectively: Заявка 95118644 Япония, МКИ A 61 К 35/78. Kondo Kazuo, Itakira Hiroshige, Koda Hirofumi. Заявл. 27.11.95; Опубл. 29.05.96.

95. Madhavi D.L., Deshpande S.S., Salunkhe D.K. Food Antioxidants: Technological, Toxicological and Health Perspectives. New York: Marcel Dakker, 1996.-479 p.

96. Method for extraction of proanthocyanidins from plant material: Заявка 08/919805 США, МКИ С 07 D 311/62, С 07 D 15/00. Karim Nafisi-Movaghar, Tomas Т. Svanoe, William A. Seroy et al.; Concord Calif., № 5912363; Заявл. 29.09.97; Опубл. 15.06.99.

97. Middleton E.Jr. Flavonoids in the living system. New York: Plenum Press, 1998.-179 p.

98. Moroney M.A., Alcaraz M.J., Forder R.A. et al. Selectivity of neutrophil 5-lipoxygenase and cyclo-oxygenase inhibition by an anti-inflammatory flavonoids glucoside and related aglycone flavonoids // J. Pharm. Pharmacol. 1998.-40.-P. 787-792.

99. Mulkay P., Tounilaux R., Jerimanis J. Proanthocyanidins of barley: separation and identification // J. Chromatography. 1981. - 208. - P. 419423.

100. Nagao A., Seki M.,Kobayashi H. Inhibition of xanthine oxidase by Flavonoids // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1999. - 63. - P. 1787-1790.

101. Nigdikar S.V. Consumption of red wine polyphenols redused the susceptibility of low-density lipoproteins to oxidation in vivo // Am. J. Clin. Nutr.- 1998.-68.-P. 258-265.

102. Pace-Asciak C.R. et al. The red wine phenolics trans-resveratrol and quercetin block human platelets aggregation and eicosanoid synthesis: Implication for protection against coronary heart disease // Clinica Chemica Acta. 1995. - 235. - P. 207-219.

103. Pataki Т., Bäk I et al. Grape seed proanthocyanidins improved cardic recovery during reperfusion after ischemia in isolated rat hearts // Amer. J. Clin. Nutr. 2002. - 75, № 5. - P. 894-899.

104. Peri C., Pompei C. An assay of different phenolic fractions in wines // Am. J. Enol. Vitic. 1971. - 22. - C. 55-58.

105. Porter L.J., Hurstich L.N., Chan B.G. The conversion procyanidins and prodelphinidins to cyanidins and delphinidins // Phytochemistry. 1986. - 1.- C. 223-230.

106. Pryor W.A. Cigarette smoke radicals and the role of the free radicals in chemical carcinogenicity // Environ Health Perspect. 1997. - 105. - P. 875882.

107. Renaud S., Longeril M. Wine, alcohol, platelets and the French paradox for coronary heart disease // Lancet. 1992. - 339, № 8808. - C. 1523-1526.

108. Renaud S. et al. Alcohol and mortality in middle aged men from eastern France // Epidemiology. - 1998. -9. - P. 184-188.

109. Ricardo Da Silva J.M., Rosec J-P., Bourzeix. M., Heredia N. Separation and quantitative determination of grape and wine procyanidins by HPRFLC // Sci. Food Agric. 1990. - 53. - P. 85-92.

110. Ricardo Da Silva J.M., Belchior A.P., Spranger M.I., Bourzeix. M. Oligomeric procyanidins of three grapevine varieties and wines from Portugal // Sciences des aliments. 1992. - 12. - P. 223-237.

111. Robak J., Gryglewsky R. Bioactivity of flavonoids // Pol. J. Pharmacol. — 1996.-48.-P. 554-564.

112. Romer J., Lund L. Grapes/wine containing phytoestrogen // Nature Medicine. 1997.- 3. - P. 1195-1196.

113. Saito V., Hosoyama H., Agira T. et al. Antiulcer activiti of grape seed extract and procyanidins // J. Agric. Food Chem. 1998. - 46. - C. 14601464.

114. Shoskes D.A. Effects of bioflavonoids quercetin and curcumin on ischemic renal injurity: a new class of renoprotective agents // Transplantation. 1998. -66.-P/ 147-152.

115. Shutenko Z., Henry Y., Pinard E. et al. Influence of the antioxidant quercetin in vivo on the level of nitric oxide concentration in ischemia-reperfusion injurity: an experimental study // Br. J. Surgery. 1998. - 85. - 1080-1085.

116. Singleton V.L., Rossi J.A. Colorimetry of total phenolics with phosphomolybdic-phosphotungstic acid reagents // Am. J. Enol. Vitic. 1969.- 19.-P. 144-158.

117. Singleton V.L., Orthofer R., Lamuela-Raventos R.M. Analysis of total phenols and other oxidation substrates and antioxidants by means of Folin-Ciocalteu reagent // Oxidants and Antioxidants, 1999. №3. - P. 152-178.

118. Siemann E., Creasy L. Consentration of the phytoalexin resveratrol in wine // Am. J. Enol. Vitic. 1992. -34. - P. 49-52.

119. Soleas G.J., Diamandis E.P., Goldberg D.M. Wine as a biological fluid: history, production and role in disease prevention // J. Clin. Lab. Anal. 1997. - 11, № 5. - C. 287-313.

120. Soleas G.J., Goldberg D.M., Grass L., Levesque M., Diamandis P. Do wine Polyphenols modulate p53 gene expression in human cancer cell lines? // Clinical Biochemistry.- 2001. 34. - P. 415-420.

121. Souquet J-M., Labarte B. et al. Phenolic composition of grape stems // J. Agric. Food Chem. 2000. - 48. - P. 1076-1080.

122. Sun B., Leandro C., Ricardo da Silva J.M., Spranger I. Separation of grape and wine proanthocyanidins according to their degree of polymerization // J. Agric. Food Chem. 1998. - 46. - P. 1390-1396.

123. Sun B., Ricardo-da-Silva J.M., Spranger I. Critical factors of vanillin assay for catechins and proanthocyanidins // J. Agric. Food Chem. 1998. - 46. - P. 4267-4274.

124. Swain T., Hillis W. The phenolics constituents of Prunus Pomestica L. — The quantitative analysis of phenolics constituents // J. Sci. Food Agric. -1959. 10, №1. - C. 63-68.

125. Tzeng S.H., Ko W.S., Ko F.N. et al. Inhibition of platelets aggregation by some flavonoids // Thromb. Res. 1991. - 64. - P. 91-100.

126. Takashi T., Gen-ichiro N., Takashi S. et al. // Chem. Pharm. Bull. 1990. -38, №8.-p. 2151-2156.

127. Thorngate J.H., Singleton V.L. Localization of procyanidins in grape seeds // Am. J. Enol. Vitic. 1994. - 45, № 2. - P. 259-262.

128. Vlietinck A.J., De Bruyne I., Apers S. et al. Plant derived leading compound for chemotherapy of human immunodeficiency virus (HIV) infection //Planta Med. // 1998. - 64. - P. 97-109.

129. Wang J-N., Hano Y., Nomura T., Chen Y-J. Procyanidins from seeds of Vitis amurensis II Photochemistry. 2000. - 53. - P. 1097-1102.

130. Zhu B.T., Ezell E.T., Liehr J.G. Catechol-O-methyl trasnsferase catalysis rapid O-methylation of mutagenic Flavonoids. Metabolic inactivation as a possible reason for their lack of carcinogenicity in vivo // J. Biol. Chem. — 2001.-269.-P. 292-299.