Факторы роста из семейств факторов роста эндотелия сосудов и факторов роста фибробластов, Si-VEGF2 и Si-FGF, и их рецепторы в онтогенезе морского ежа Strongylocentrotus intermedius тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.03.04, кандидат наук Кипрюшина, Юлия Олеговна

• Кипрюшина, Юлия Олеговна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Кипрюшина, Юлия Олеговна

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Факторы роста и их рецепторы

1.1.1. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецептор

1.1.1.1. Фактор роста эндотелия сосудов

1.1.1.2. Рецептор фактора роста эндотелия сосудов

1.1.1.3. Биологические функции фактора роста эндотелия сосудов

1.1.2. Фактор роста фибробластов и его рецептор

1.1.2.1. Фактор роста фибробластов

1.1.2.2. Рецептор фактора роста фибробластов

1.1.2.3. Биологические функции фактора фибробластов

1.2. Строение и развитие морского ежа

1.2.1. Эмбриональное развитие морского ежа

1.2.2. Постэмбриональное развитие морского ежа

1.2.3. Строение взрослого морского ежа

1.2.4. Роль факторов роста в онтогенезе иглокожих

1.3. Сурамин - неспецифический ингибитор рецепторов факторов роста

1.4. Дифференцировка клеток морского ежа в культуре

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Нерест и искусственное оплодотворение морского ежа

2.2. Анализ экспрессии генов факторов роста и рецепторов факторов роста у морского ежа

2.2.1. Дизайн праймеров

2.2.2. Выделение РНК из эмбрионов, личинок, а также клеток, тканей и органов взрослых особей морского ежа

2.2.3. ОТ-ПЦР

2.2.4. Условия проведения ПЦР

2.2.5. ПЦР с быстрой амплификацией концов кДНК (З'-RACE и 5'-RACE ПЦР)

2.2.6. Электрофорез продуктов ПЦР-анализа

2.2.7. Секвенирование ДНК

2.3. Филогенетический анализ белков семейств VEGF и PDGF

2.4.Гибридизация in situ

2.4.1. Синтез зонда для гибридизации in situ

2.4.2. Фиксация материала и условия проведения гибридизации in situ

2.5. Эксперименты по ингибированию взаимодействия факторов роста и

их рецепторов в эмбриогенезе морского ежа

2.6. Световая микроскопия

2.7. Получение и анализ первичной культуры клеток из эмбрионов морского ежа

2.7.1. Получение первичной культуры клеток из эмбрионов морского

ежа и индукция спикулогенной дифференцировки

2.7.2 Определение активности щелочной фосфатазы

2.8. Статистический анализ полученных результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1. Филогенетический анализ белков из семейств VEGF и PDGF

3.2. Экспрессия генов Si-Veg/2 и Si-Vegfr в онтогенезе морского ежа S. intermedius

3.2.1. Экспрессия генов Si-Vegf2 и Si-Vegfr в раннем развитии морского ежа S. intermedius

3.2.2. Экспрессия генов Si-Vegf2 и Si-Vegfr в клетках, тканях и органах взрослого морского ежа S. intermedius

3.3. Экспрессия генов Si-Fgf и Si-Fgfr в онтогенезе морского ежа S.

intermedins

3.3.1. Экспрессия генов Si-Fgf и Si-Fgfr в раннем развитии морского

ежа S. intermedius

3.3.2. Экспрессия генов Si-Fgf и Si-Fgfr в клетках, тканях и органах

взрослого морского ежа S. intermedius

3.4. Влияние сурамина на раннее развитие морского ежа

3.5. Дифференцировка клеток морского ежа in vitro

ГЛАВА 4.0БСУЖДЕНИЕ

4.1. Экспрессия генов факторов роста и генов рецепторов факторов роста в онтогенезе морского ежа

4.2. Роль факторов роста в раннем развитии морского ежа

4.3.Влияние экзогенных факторов на дифференцировку клеток

морского ежа в культуре

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

а. к. - аминокислоты БСА - бычий сывороточный альбумин кДНК - комплементарная ДНК м.м. - молекулярная масса

ОТ-ПЦР - обратно-транскрипционная полимеразная цепная реакция

п.н. - пары нуклеотидов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

ТБЕ - буфер на основе ТРИСа и борной кислоты с добавлением ЭДТА ФБ - фосфатный буфер

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота ЭС - эмбриональная сыворотка dNTPs - смесь дезоксинуклеотидов

EGF - эпидермальный фактор роста (Epidermal growth factor)

FGF - фактор роста фибробластов (Fibroblast growth factor)

FGFR - рецептор фактора роста фибробластов (Fibroblast growth factor

receptor)

HSPG - сульфатированный протеогликан (Heparan sulfate proteoglycan) P1GF - фактор роста плаценты (Placental growth factor)

RACE - быстрая амплификация концов кДНК (Rapid amplification of cDNA ends)

RT - комнатная температура (room temperature) SSC - цитратный буфер

VEGF - фактор роста эндотелия сосудов (Vascular endothelial growth factor) VEGFR - рецептор фактора эндотелия сосудов (Vascular endothelial growth factor receptor)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Факторы роста из семейств факторов роста эндотелия сосудов и факторов роста фибробластов, Si-VEGF2 и Si-FGF, и их рецепторы в онтогенезе морского ежа Strongylocentrotus intermedius»

ВВЕДЕНИЕ

Одной из важнейших задач современной биологии является понимание молекулярных механизмов процессов развития. В многочисленных работах показано, что управление ключевыми событиями в раннем развитии животных происходит через сигнальные каскады, которые запускают факторы роста посредством связывания с соответствующими высокоспецифическими рецепторами. Факторы роста и их рецепторы представляют обширную группу белков, которые обнаружены у всех многоклеточных животных.

Среди морских беспозвоночных иглокожие занимают ключевое положение в филогенетическом древе (Wray, Lowe, 2000), являясь вторичноротыми животными, «сестринской» группой хордовых (Bromham, Degnan, 1999). Именно поэтому классическим объектом для эмбриологических и молекулярно-биологических исследований, в частности, для изучения сигнальных путей, давно стали эмбрионы и личинки морских ежей, которые достаточно просто получать и культивировать, с ними легко совершать различные манипуляции и, благодаря их прозрачности, можно целиком изучать под микроскопом. Известно, что нормальное эмбриональное развитие этих животных связано с включением специфических сигнальных каскадов, таких, как Notch, Hedgehog, Wnt и МАРК, в которых особую роль играют факторы роста. В последнее время появляется все больше работ, посвященных изучению тонких механизмов эмбриогенеза морских ежей (Armstrong et al., 1993; Kominami, Takata, 2004). Однако, работ, посвященных изучению роли факторов роста в процессе развития морских ежей, немного (Ramachandran et al., 1993; McCoon et al., 1996; McCoon et al., 1998; Duloquin et al., 2007; Rottinger et al., 2008), а данные об экспрессии генов факторов роста в различных тканях взрослых морских ежей представлены только в одной статье (McCoon et al., 1998). В связи с этим, исследование роли факторов роста и их рецепторов в онтогенезе морского ежа важно и актуально. Кроме фундаментальной значимости, такие работы могут

обладать и практической значимостью при разработке методов получения длительно переживающих или постоянных культур клеток морских беспозвоночных, а также при разработке методов направленной дифференцировки клеток иглокожих в культуре. Наибольший интерес представляет группа гепарин-связывающих факторов роста, участвующих в регуляции деления клеток - фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста тромбоцитов (PDGF), исследование которых в онтогенезе морских ежей - в центре нашего внимания.

Известно, что лимитирующим фактором при получении постоянных клеточных линий из тканей беспозвоночных является низкий уровень пролиферации их клеток в культуре (Rinkevich, 2005; 2011). Вероятно, причина этого явления связана с жестким генетическим контролем пролиферативных процессов у морских беспозвоночных. Усиление экспрессии генов факторов роста может привести к значительному увеличению числа клеток в культуре (Izadnegahdar et al., 1999). Конкретные задачи работы связаны с изучением экспрессии генов, участвующих в регуляции деления клеток и дифференцировке мезодермы в различные клеточные типы у морских ежей.

При дифференцировке клеток in vitro одновременно могут реализоваться многие потенции эмбриональных клеток, в результате чего продукты их дифференцировки будут представлять сложную смесь разных специализированных клеток вместе со слабо или недифференцированными клетками. Определив стадию эмбрионального развития, на которой происходит экспрессия факторов роста и их рецепторов, можно будет выделить данные клетки, ввести их в культуру и воздействовать на них специфическим фактором. Это позволит моделировать различные пути клеточной дифференцировки, реализуемые в организме.

В 2006 г. группой исследователей был секвенирован геном морского ежа Strongylocentrotus purpuratus (Sodergren et al., 2006). На основании этих

данных методами биоинформатики было предсказано существование трёх генов из семейства фактора роста эндотелия сосудов (Бр-Уе^, Бр-Уе£р> и Бр-Уе^З) и двух генов рецепторов фактора роста эндотелия сосудов {Бр-Уе$фг-7 и Бр-Уе^г-Ю) в геноме морского ежа (Ьаргаг е1 а1., 2006; Боёе^геп е1 а1., 2006). Функции гомолога Бр-Уе^ (Pl-Vegи гомолога Бр-Уе^г-Ю (Р1-Уе$фг) достаточно полно охарактеризованы в раннем развитии у морского ежа РагасеМгоШБ \ividus (Эи^ит е1 а1., 2007), однако информация о генах двух других факторов и рецептора, а также сведения о белках, которые они кодируют, в литературе полностью отсутствуют.

Кроме того, методами биоинформатики было предсказано существование одного гена из семейства фактора роста фибробластов (БОР) и двух генов из семейства рецепторов факторов роста фибробластов (Бр-Рф-1 и 8р-Е%[г2) (Ьаргаг е1 а1., 2006). Экспрессия генов семейства БОБ и его рецептора (Р^а и описана только в раннем развитии морского ежа Р.

\ividus (Ьаргаг е1 а1., 2006; ЯбШ^ег е1 а1., 2008), а гена - в раннем

развитии и некоторых тканях взрослых особей 5". ригригаШБ (МсСооп е1 а1., 1996; МсСооп е1 а1., 1998;). Учитывая, что экспрессия этих генов была исследована в ограниченном наборе тканей взрослых особей, а также то, что сроки появления определённой мРНК в онтогенезе могут различаться у разных видов морских ежей, необходимо исследовать экспрессию гомологов генов и в онтогенезе конкретного вида морского ежа, & intermedius.

Цель и задачи исследования. Цель работы - поиск и характеристика факторов роста, участвующих в регуляции пролиферации и дифференцировки клеток иглокожих.

Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи: 1. провести филогенетический анализ белков из семейств УЕОБ и РЭвР разных животных и на основании предсказанной аминокислотной последовательности фактора роста эндотелия сосудов морского ежа 5*. intermedius (81-Уе§0) определить его место на филогенетическом дереве;

2. охарактеризовать экспрессию гена Si-Veg/2 и гена его рецептора Si-Vegfr, а также гомологов генов Fgf и Fgfr, в онтогенезе морских ежей и установить локализацию Si-Vegf2 транскриптов в раннем эмбриональном и личиночном развитии;

3. определить возможные функции белков из семейств Vegf и Fgf в онтогенезе морских ежей;

4. выявить факторы, влияющие на реализацию программы спикулогенеза в культуре эмбриональных клеток морских ежей, и оценить их влияние на развитие спикулогенной дифференцировки.

Научная новизна и практическая значимость. Охарактеризована кДНК транскрипта Si-Vegf2, принадлежащего к семейству генов VEGF морского ежа S. intermedius. Данная последовательность депонирована в международную базу данных GenBank. С помощью методов ОТ-ГЩР и in situ гибридизации установлен временной паттерн экспрессии Si-Vegf2, а также описана локализация его транскриптов в процессе развития. Обнаружено, что после обособления популяции мезенхимных клеток, Si- Vegf2 экспрессируется только в клетках первичной мезенхимы эмбрионов и личинок морских ежей, а затем в различных клетках, тканях и органах у взрослых особей. Показано, что сигналы, опосредованные через взаимодействие факторов роста VEGF и FGF с их рецепторами, играют важную роль в раннем развитии морского ежа, регулируя образование архентерона, дифференцировку клеток первичной мезенхимы и в последующем - процессы спикулогенеза.

Определена роль некоторых факторов, влияющих на дифференцировку спикулогенных клеток эмбрионов морских ежей in vitro. Впервые установлено, что эмбриональную сыворотку можно заменить комплексом индивидуальных факторов роста и лектинов.

Результаты данной работы расширяют представления о механизмах контроля роста и дифференцировки у морских беспозвоночных животных. Полученные данные могут быть включены в курсы биологии развития, молекулярной биологии развития, и как раздел практического спецкурса

«Биотехнология морских организмов» в Дальневосточном федеральном университете.

Личный вклад автора. Материал, положенный в основу диссертационной работы, получен, обработан и проанализирован автором, в основном, самостоятельно. Автором в полном объеме выполнена экспериментальная часть исследования, а именно: выделение РНК, синтез кДНК, проведение ПЦР и электрофореза, гибридизация in situ, эксперименты с ингибированием развития морского ежа, а также получение первичных клеточных культур из эмбрионов морского ежа и анализ условий спикулогенной дифференцировки.

Апробация результатов. Результаты работы были представлены на 9 конференциях: на VIII региональной конференции по актуальным проблемам биологии, экологии и биохимии (Владивосток, Россия, 2009 г.), на отчетной конференции «Перспективные направления развития нанотехнологий в ДВО РАН» (Владивосток, Россия, 2009 г.), ежегодной конференции Американского общества клеточной биологии (Денвер, США, 2011 г.), II международной научно-практической конференции «Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине» (Новосибирск, Россия, 2011 г.), конференции Испанского общества биологии развития (Гранада, Испания, 2012 г.), международном симпозиуме «Культуры клеток морских беспозвоночных» (Конкарно, Франция, 2012), на ежегодных конференциях ИБМ ДВО РАН (2011, 2012, 2013 гг.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, из которых две статьи в реферируемых журналах, из списка, рекомендованного ВАК.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, списка литературы, включающего 201 цитируемую работу, а также приложение. Диссертация изложена на 128 страницах печатного текста, иллюстрирована 32 рисунками и содержит 2 таблицы. Данная работа частично выполнена в ЦКП "ХРОМАС" (Санкт-Петербург, Санкт-Петербургский государственный университет) и при

финансовой поддержке гранта компании ОПТЭК для молодых исследователей, грантов РФФИ (12-04-00363а, 14-04-31748), Президиума ДВО РАН (09-1-П22-04, 09-II-CO-06-001, 12-1-П6-07, 12-III-B-06-031 и 13-III-В-06-030) и Программы ДВФУ (№ 11 G34.31.0010).

Благодарности

Автор выражает искреннюю благодарность своему научному руководителю Нэлии Адольфовне Одинцовой за внимательное и конструктивное руководство; Константину Владимировичу Яковлеву (ИБМ ДВО РАН, Владивосток) за помощь в освоении молекулярно-генетических методов исследования, а также за конструктивную критику и обсуждение работы; Кулаковой Милане Анатольевне (СПбГУ, Санкт-Петербург) за помощь в освоении метода гибридизации in situ; Айздайчер Нине Александровне (ИБМ ДВО РАН, Владивосток) за предоставление одноклеточных водорослей для кормления личинок морских ежей. Автор благодарен всему коллективу лаборатории клеточных технологий ИБМ ДВО РАН за помощь, советы и моральную поддержку на всех этапах работы.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Факторы роста и их рецепторы

«Факторы роста» - такое название получила сборная группа белковых молекул, которые способны индуцировать синтез ДНК в клетке. Однако позднее было обнаружено, что спектр воздействий этих молекул на клетки гораздо шире - они способны к передаче сигналов между клетками, регулируя миграцию и дифференцировку клеток, а также переход клетки в апоптоз. Для запуска этих процессов необходимо, чтобы соответствующие факторы роста связались со своими рецепторами на поверхности клеточных мембран. Для факторов роста характерен эндокринный, аутокринный, юкстакринный и паракринный механизм действия (рис. 1).

Рис. 1. Факторы роста (обозначены чёрными кружками) синтезируются клетками и влияют на эти же клетки (аутокринновый и интракриновый механизм) либо на другие клетки (эндокринный, юкстакринный и паракринный механизм действия) посредством связывания с рецепторами. В случае эндокринного механизма факторы транспортируются по лимфатическим или кровеносным сосудам и воздействуют на клетки в удалённых частях тела (по McKlay, Leigh, 1993).

фЭндокринный ^

Учитывая, что не все факторы роста обладают митогенным действием на клетки, некоторые авторы отдают предпочтение другим названиям этих молекул, таким как цитокины, белковые регулирующие факторы или модификаторы биологического ответа (McKlay, Leigh, 1993).

В настоящее время описано не менее 130 различных факторов роста, которые разделяют на две больших группы - большие и малые белковые факторы, которые в свою очередь подразделяют на супер-семейства и семейства, основываясь на гомологии в их структуре (McKlay, Leigh, 1993). Супер-семейство больших белковых факторов насчитывает 20 семейств, которые включают белки, различающиеся по своей структуре, локализации и выполняемым функциям. Наиболее известные представители этого суперсемейства: эпидермальный фактор роста (EGF), фактор роста фибробластов (FGF), инсулиноподобный фактор роста (IGF), фактор роста нервов (NGF), тромбоцитарный фактор роста (PDGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF), трансформирующий фактор роста альфа (TGF а), трансформирующий фактор роста бета (TGF (3), семейство интерликинов 6 (IL-6), семейство интерлейкинов 2 (IL-2) и другие.

Факторы роста могут участвовать в регуляции различных событий в процессе развития, запуская сигнальные каскады. Первоначально обнаруженные у позвоночных, факторы роста и их рецепторы также существуют и у беспозвоночных животных, выполняя сходные функции. Показана их интегрирующая роль во время эмбриогенеза не только амфибий и млекопитающих, но и дрозофилы и нематоды (Cho et al., 2002; Popovici et al., 2002; Tarsitano et al., 2006). Структура данных молекул высококонсервативна, что доказывают многочисленные работы по использованию факторов роста позвоночных в различных клеточных системах беспозвоночных животных. Так, NGF, инсулин и TGF-P позвоночных способны индуцировать рост нейронов у брюхоногих моллюсков (Ridgway et al. 1991; Jonas et al. 1996; Zhang et al. 1997).

Сигнальные пути, запускаемые за счет взаимодействия факторов роста и их рецепторов, играют значительную роль в развитии всех многоклеточных организмов. Например, они регулируют миграцию клеток, детерминацию полярности эмбриона, формирование зародышевых листков и специализацию в различные клеточные типы. Каждый из сигнальных путей, таких как Notch (Croce, McClay, 2010; Ohguro et al., 2011), Hedgehog (Walton et al., 2009), Wnt (Croce et al., 2011; Wei et al., 2012; Range et al., 2013) и МАРК (Schwartz et al. 1995; Zhang et al., 2005) состоит из множества белков, некоторые из которых являются цитоплазматическими тирозин-киназами или серин/треонин киназами. Такие молекулы обнаружены только у многоклеточных животных и у их ближайших родственников из одноклеточных - хоанофлагелят (King, Carroll, 2001). Возможно, что сигналинг с участием фосфотирозин-киназ мог играть важную роль при переходе к многоклеточности (Hunter, Cooper, 1985; King, 2004).

У человека рецепторы факторов роста с тирозин-киназной активностью подразделяют на 7 суперсемейств, в зависимости от экзонно-интронной организации генов, сходства первичной последовательности киназного домена и строения внеклеточного домена (Kostich et al., 2002). Эти суперсемейства включают 19 семейств рецепторов факторов роста с тирозин-киназной активностью (Manning et al., 2002). Такие рецепторы взаимодействуют с белками по обе стороны цитоплазматической мембраны, участвуя в передаче сигнала за счет специальных белковых модулей.

У морских ежей обнаружено 20 белков, которые можно отнести к этим семействам; при этом, представители семейства рецепторов PDGF, также как и сами фаторы роста PDGF, у морских ежей не обнаружены (Lapraz et al., 2006).

Наибольший интерес представляет группа факторов роста, участвующих в регуляции деления клеток - фактор роста фибробластов (FGF), фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) и фактор роста тромбоцитов

(PDGF), исследование которых в онтогенезе морских ежей - в центре нашего внимания.

1.1.1. Фактор роста эндотелия сосудов и его рецептор 1.1.1.1. Фактор роста эндотелия сосудов

Факторы семейства VEGF (другие названия - факторы проницаемости сосудов или васкулотропины) - это мультифункциональные белки, выполняющие ряд важных биологических функций, реализация которых зависит от стадии развития и физиологических функций органа, в которых эскпрессируется фактор. Семейство VEGF включает гомо- и гетеродимеры с молекулярной массой 40 к Да (О ls son et al., 2006), в состав которых входит специфический мотив из 8 консервативно расположенных цистеинов, объединенных внутримолекулярными и межмолекулярными дисульфидными мостиками, - цистеиновый «узел» («cysteine-knot) (McDonald, Hendrickson, 1993; Sun, Davies, 1995). Мономеры VEGF соединены при помощи межмолекулярного дисульфидного мостика; эта димерная структура также стабилизирована гидрофобным коровым регионом каждого мономера (Muller et al., 1997; Wiesmann et al., 1997).

Впервые VEGF был обнаружен в культуре клеток карциномы человека, где был установлен его эффект на проницаемость клеточной мембраны, поэтому этот фактор был описан как «фактор проницаемости сосудов» (Senger et al., 1983). Несколько позднее обнаружены другие функции VEGF: регуляция ангиогенеза, стимуляция пролиферации и миграции эндотелиальных клеток, ингибирование апоптоза, поэтому данный фактор назвали «фактором роста эндотелия сосудов» (Leung et al., 1989). Последующие исследования показали, что эти два, как считали, разных фактора кодируются одним геном (Neufeld et al., 1999).

Семейство VEGF, которое объединяет гепарин - связывающие факторы, включает 7 основных членов: VEGF-A, VEGF-B, VEGF-C, VEGF-D, VEGF-E, VEGF-F и фактор роста плаценты (P1GF). За счет альтернативного сплайсинга образуется ещё большее разнообразие белков

семейства VEGF. Так, VEGF-A насчитывает 5 различных изоформ у человека: VEGF121, VEGF145, VEGF]65, VEGFi89 и VEGF2o6- Эти изоформы различаются по локализации, по своим физико-химическим и биологическим свойствам. Например, VEGF121 - это свободно растворенный белок, который не связывается с гепарином, в то время как более длинные изоформы могут связываться с протеогликанами внеклеточного матрикса, содержащими гепарин (Houck et al., 1992).

Ген VEGF состоит из восьми экзонов и семи интронов, и его размер составляет около 14 кБ (Houck et al., 1992). Благодаря альтернативному сплайсингу и процессингу npe-MPFHC, существует две группы изоформ, различающихся в С-конце белка. Эти группы названы VEGFxxx (про-ангиогенные) и VEGFxxxb (анти-ангиогенные), где ххх обозначает число аминокислот в полипептидной цепи. Показано, что VEGF165b ингибирует пролиферацию и миграцию, индуцированную VEGF 165 (Bates et al., 2002), a также ингибирует нормальный ангиогенез и канцерогенез (Woolard et al., 2004; Qiu et al., 2008). Однако эти эффекты анти-онкогенных VEGF доказаны только для процессов, регулируемых VEGF, так как VEGFxxxb не влияет на пролиферацию клеток, вызванную индукцией фактора роста фибробластов (Bates et al., 2002).

Экспрессия VEGF в основном регулируется на транскрипционном уровне, но может регулироваться и при помощи гипоксии. В последнем случае, гипоксия-индуцирующий фактор транскрипции (HIF-1 или HIF-2) связывается с гипоксия-чувствительным элементом, который находится в промоторе VEGF (Brusselmans et al., 2001; Pugh, Ratcliffe, 2003). Кроме этого, обнаружено, что другие факторы роста, такие как EGF, фактор роста тромбоцитов, трансформирующие факторы роста, а также некоторые цитокины (Neufeld et al., 1999), могу регулировать альтернативный сплайсинг пре-мРРЖ VEGF. Например, IGF-1 и TNF-a стимулируют экспрессию VEGFxxx, а TGF-01 может стимулировать экспрессию VEGFxxxb (Nowak et al., 2008).

1.1.1.2. Рецептор фактора роста эндотелия сосудов

Семейство рецепторов факторов роста эндотелия сосудов включает 3 основных белка: VEGFR-1, VEGFR-2, и VEGFR-3. Эти рецепторы относятся к группе тирозин-киназ, которые активируются после связывания с гомо- или гетеродимерами VEGF. Данные рецепторы присутствуют на эндотелиальных клетках, входящих в состав кровеносных и лимфатических сосудов, на гладких мыщцах, а также на мембранах других типов клеток, таких как моноциты и макрофаги, стволовые клетки крови, эпителиальные клетки, фибробласты, предшественники мышечных клеток (Olsson et al., 2006).

Рецептор VEGF имеет строение типичного тирозин-киназного рецептора и состоит из семи внеклеточных иммуноглобулин (^-подобных доменов, трансмембранного домена и внутриклеточного домена тирозинкиназы. Обычно рецепторы VEGF расположены на поверхности клеток, однако, установлено, что они могут существовать и в растворимой форме (sVEGFRl), образованной в результате альтернативного сплайсинга. В этом случае, в молекуле отсутствует трансмембранный и цитоплазматический домены, но сохраняется способность связывать VEGF (Kendall, Thomas, 1993).

Семейства белков VEGFR и PDGFR достаточно сходны по своему строению. Внеклеточный домен PDGFR состоит из 5 Ig - подобных доменов, a VEGFR - из 7 Ig - подобных доменов. У позвоночных описано 5 паралогов PDGFR и 3 паралога VEGFR. У дрозофилы есть только один ген PVR, который относится к обоим этим семействам, но в его состав входит 7 Ig-подобных доменов и он имеет значительно большее сходство с VEGFR, чем с PDGFR (Duchek et al., 2001). В геноме анемоны (Ciona intestinalis) был обнаружен ген VEGFR, а ортологи гена PDGFR не обнаружены (Satou et al., 2002). В результате филогенетического исследования семейств рецепторов факторов роста, Грассо с коллегами выдвинули предположение, согласно которому семейства рецепторов VEGFR и PDGFR произошли от одного общего предка в результате дупликации после расхождения первичноротых и

вторичноротых животных. Позже в эволюции позвоночных, вероятно, произошла ещё одна дупликация, которая привела к образованию различных паралогов. В геноме морских ежей обнаружено 2 гена VEGFR, отнесённых к этому семейству благодаря большему сходству с рецепторами VEGF позвоночных. Один из этих рецепторов содержит 7 Ig - подобных доменов и является ортологом VEGFR позвоночных (Sp-Vegfr7). Другой белок из этого семейства имеет в своём составе 10 Ig - подобных доменов (Sp-VegfrlO), что совершенно не характерно для белков семейства VEGFR позвоночных. Происхождение этого гена остаётся неизвестным.

В многочисленных исследованиях показано, что рецепторы семейства VEGFR обладают различным сродством к различным факторам роста. VEGF-А связывается с VEGFR2 и VEGFR 1; VEGF-C и VEGF-D связываются с VEGFR2 и VEGFR3; P1GF и VEGF-B взаимодействуют только с VEGFR 1; и VEGF-E связывается только с VEGFR2 (рис. 2А). Кроме того, описан ряд изоформ факторов роста, которые взаимодействуют с дополнительными рецепторами VEGF (так называемыми ко-рецепторами) - нейропиллинами, протеогликанами или интегринами, не обладающими тирозин-киназной активностью (рис. 2Б).

Нейропилины усиливают VEGF сигналинг посредством повышения фосфорилирования VEGFR. Другие ко-рецепторы VEGF, интегрины, регулируют адгезию клеток посредством специфического связывания с компонентами внеклеточного матрикса. Они могут формировать комплексы с рецепторами VEGF под воздействием разных членов семейства VEGF (Pampori et al., 1999; Zhang et al., 2005).

Рецепторы факторов роста выполняют различные функции в развитии, поэтому в процессе онтогенеза состав и количество таких рецепторов может варьировать на разных стадиях. Например, для нормального развития и функционирования мыши наличие VEGFR-1 не обязательно (Hiratsuka et al., 1998).

Экспрессия УЕСРШ и/или УЕОРЯ2 была обнаружена в гемопоэтических клетках (в том числе, моноцитах и стволовых клетках),

А Р!^ [УЕСРВ

УЕСР(*1

УЕСРШи

VECFR2 гетеродимер

УЕСРЯ2

УЕСРЯ2 и

УЕСР1*3 гетеродимер

УЕСРЯЗ

ч НБРС - --*

4- Нейролиллин

Клеточная мембрана

Рис. 2. Взаимодействие лигандов УЕвР с рецепторами УЕвР и ко-рецепторами. А. Представители семейства УЕОР млекопитающих (УЕвР АО и РЮР) связываются с тремя рецепторами УЕвР (УЕОРШ-З), что приводит к формированию гомо- или гетеродимеров УЕвРЯ. Б. УЕвРЯ сигналинг дополнительно модулируется различными ко-рецепторами -нейропиллинами и протеогликанами, которые также расположены на клеточной мембране (по ОЬбоп е1 а!., 2006).

эпителиальных клетках (пневмоцитах, гломерулярных подоцитах, клетках гранулёзы яичников, клетках семенников), нейрональных клетках, клетках

мезенхимного ряда (остеобластах, хондроцитах) и клетках половой линии (Tjwa et al., 2003).

1.1.1.3. Биологические функции фактора роста эндотелия сосудов

На клеточном уровне различные представители семейства VEGF регулируют пролиферацию, миграцию, проницаемость мембран и ингибируют апоптоз. Однако следует отметить два основных события, в которых факторы роста этого семейства играют важнейшую роль в нормальном развитии позвоночных животных, при регенерации и во многих патологических процессах, это - васкулогенез (формирование новых кровеносных сосудов de novo в результате дифференцировки ангиобластов) и ангиогенез (формирование новых кровеносных сосудов из уже существующих).

У млекопитающих экспрессия различных членов семейства VEGF была обнаружена практически во всех системах и органах взрослых особей. Так, в почках мыши VEGF экспрессируется в подоцитах, выстилающих гломерулярные кровеносные сосуды и регулирующих обмен воды и макромолекул (Maharaj et al., 2006). В легких факторы роста эндотелия сосудов присутствуют в специализированных клетках в области газообмена (клетки альвеолярного типа II) и в эпителиальных клетках бронхов (Maharaj et al., 2006). Показано, что VEGF стимулирует пролиферацию эпителия лёгких в культуре (Ohwada et al., 2003). Нарушение экспрессии VEGF или изменение в прохождении сигнала после его связывания с рецептором в лёгких приводит к апоптозу эпителиальных клеток за счет активации каспазы-3, а нарушения экспрессии VEGFR-2 приводят к разрушению стенки альвеол и расширению межклеточного пространства по всей паренхиме лёгких (Kasahara et al., 2000; Tang et al., 2004).

Факторы роста семейства VEGF играют важную роль в нейрогенезе и важны для функционирования моторных нейронов. Кроме того, было показано, что они могут управлять ростом аксонов кортикальных нейронов

(Sondell et al., 2000; Sun et al., 2003). Мутации в гене VEGF y людей приводят к снижению экспрессии этого фактора на транскрипционном и посттранскрипционном уровнях и увеличивают риск амиотрофического склероза (Lambrechts et al., 2003).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Кипрюшина, Юлия Олеговна, 2013 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Иванова-Казас О.М. Сравнительная эмбриология беспозвоночных животных: иглокожие и полухордовые. М.: Наука. 1978. 168 с.

2. Исаева В.В. Клетки в морфогенезе. М.: Наука. 1994. 224 с.

3. Касьянов В.Л., Крючкова Г.А., Куликова В.А., Медведева В.А. Личинки морских двустворчатых моллюсков и иглокожих. М.: Наука. 1983. 216 с.

4. Керкис А.Ю., Исаева В.В. Электронно-микроскопическое исследование спикулогенеза в культуре эмбриональных клеток морского ежа Strongylocentrotus nudus II Онтогенез. 1984. Т. 15, № 1. С. 34-40.

5. Одинцова Н. А. Основы культивирования клеток морских беспозвоночных. Владивосток: Дальнаука. 2001. 162 с.

6. Целомоциты иглокожих и их роль в защитных реакциях: автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук: 03.00.25 / Магарламов Тимур Юсифович; [Институт биологии моря ДВО РАН]. Владивосток, 2004. 26 с.

7. Ageenko N.V., Kiselev K.V., Odintsova N.A. Expression of pigment cell-specific genes in the ontogenesis of the sea urchin Strongylocentrotus intermedius //Evid. Based Complement. Alternat. Med. 2011. Vol. 2011. Article ID 730356. DOI 10.1155/2011/730356.

8. Agrawal R., Jacobs H., Payne N., Conway G. Concentration of vascular endothelial growth factor released by cultured human luteinized granulosa cells is higher in women with polycystic ovaries than in women with normal ovaries // Fertil. Steril. 2002. Vol. 78, № 6. P. 1164-1169.

9. Akiyama S.K., Johnson M.D. Fibronectin in evolution: presence in invertebrates and isolation from Microcina porifera II Сотр. Biochem. Phys. B. 1983. Vol. 76. P. 687-694.

10. Alliegro M.C., Burdsal C.A., McClay D.R. Galactose-specific lectin from sea urchin embryos // Biochem. 1990. Vol. 29. P. 2135-2141.

11. Alliegro M.C., Alliegro M.A. The structure and activities of echinonectin: a developmentally regulated cell adhesion glycoprotein with galactose-specific lectin activity // Glycobiology. 1991. Vol. 1. P. 253-256.

12. Angerer L.M., Chambers S.A., Yang Q., Venkatesan M., Angerer R.C., Simpson R.T. Expression of a collagen gene in mesenchyme lineages of the Strongylocentrotus purpuratus embryo // Genes Dev. 1988. Vol. 2. P. 239-246.

13. Armelin H.A. Pituitary extracts and steroid hormones in the control of 3T3 cell growth//PNAS. 1973. Vol. 70. P. 2702-2706.

14. Armstrong N., Hardin J., McClay D.R. Cell-cell interactions regulate skeleton formation in the sea urchin embryo // Development. 1993. Vol. 119. № 3. P. 833-840.

15. Autiero M., Waltenberger J., Communi D., Kranz A., Moons L., Lambrechts

D., Kroll J., Plaisance S., De Mol M., Bono F., Kliche S., Fellbrich G., Ballmer-Hofer K., Maglione D., Mayr-Beyrle U., Dewerchin M., Dombrowski S., Stanimirovic D., Van Hummelen P., Dehio C., Hicklin D.J., Pérsico G., Herbert J.M., Communi D., Shibuya M., Collen D., Conway

E.M., Carmeliet P. Role of P1GF in the intra- and intermolecular cross talk between the VEGF receptors Fltl and Flkl // Nat. Med. 2003. Vol. 9, № 7. P. 936-943.

16. Baird A., Schubert D., Ling N., Guillemin R. Receptor- and heparin-binding domains of basic fibroblast growth factor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988. Vol. 85, № 7. P. 2324-2328.

17. Barber R.D., Harmer D.W., Coleman R.A., Clark B.J. GAPDH as a housekeeping gene: analysis of GAPDH mRNA expression in a panel of 72 human tissues // Physiol. Genomics. 2005. Vol. 21, № 3. P. 389-395.

18. Basilico C., Moscatelli D. The FGF family of growth factors and oncogenes //Adv. Cancer Res. 1992. Vol. 59. P. 115-165.

19. Bates D.O., Cui T.G., Doughty J.M., Winkler M., Sugiono M., Shields J.D., Peat D., Gillatt D., Harper S.J. VEGF165b, an inhibitory splice variant of

vascular endothelial growth factor, is down-regulated in renal cell carcinoma // Cancer Res. 2002. Vol. 62, № 14. p. 4123-4131.

20. Birnbaum D., Popovici C., Roubin R. A Pair as a Minimum: The two fibroblast growth factors of the nematode Caenorhabditis elegans // Dev. Dynamics. 2005. Vol. 232. P. 247-255.

21. Borland C.Z., Schutzman J.L., Stern M.J. Fibroblast growth factor signaling in Caenorhabditis elegans II Bioessays. 2001. Vol. 23. P. 1120-1130.

22. Böttcher R.T., Niehrs C. Fibroblast growth factor signaling during early vertebrate development // Endocr. Rev. 2005. Vol. 26, № 1. P. 63-77.

23. Bromham L.D., Degnan B.M. Hemichordates and deuterostome evolution: robust molecular phylogenetic support for a hemichordate + echinoderm clade II Evol. Dev. 1999. Vol. 1, № 3. P. 166-171.

24. Brusselmans K., Bono F., Maxwell P., Dor Y., Dewerchin M., Collen D., Herbert J.M., Carmeliet P. Hypoxia-inducible factor-2alpha (HIF-2alpha) is involved in the apoptotic response to hypoglycemia but not to hypoxia // J. Biol. Chem. 2001. Vol. 276, № 42. P. 39192-39196.

25. Brown L.F., Yeo K.T., Berse B., Morgentaler A., Dvorak H.F., Rosen S. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) is strongly expressed in the normal male genital tract and is present in substantial quantities in semen II J. Urol. 1995. Vol. 154, № 2. P. 576-579.

26. Burgess W.H., Maciag T. The heparin-binding (fibroblast) growth factor family of proteins // Annu. Rev. Biochem. 1989. Vol. 58. P. 575-606.

27. Calestani C., Rast J., Davidson E. Isolation of pigment cell specific genes in the sea urchin embryo by differential macroarray screening // Development. 2003. Vol. 130. P. 4587-4596.

28. Carmeliet P., Ferreira V., Breier G., Pollefeyt S., Kieckens L., Gertsenstein M., Fahrig M., Vandenhoeck A., Harpal K., Eberhardt C., Declercq C., Pawling J., Moons L., Collen D., Risau W., Nagy A. Abnormal blood vessel development and lethality in embryos lacking a single VEGF allele // Nature. 1996. Vol.380. P. 435^139.

29. Carmeliet P., Ng Y.S., Nuyens D., Theilmeier G., Brusselmans K., Cornelissen I., Ehler E., Kakkar V.V., Stalmans I., Mattot V., Perriard J.C., Dewerchin M., Flameng W., Nagy A., Lupu F., Moons L., Collen D., D'Amore P.A., Shima D.T. Impaired myocardial angiogenesis and ischemic cardiomyopathy in mice lacking the vascular endothelial growth factor isoforms VEGF164 and VEGF188 // Nat. Med. 1999. Vol. 5. P. 495-502.

30. Carmeliet P., Jain R.K. Angiogenesis in cancer and other diseases // Nature. 2000. Vol. 407. P. 249-257.

31. Carmeliet P., Moons L., Luttun A., Vincenti V., Compernolle V., De Mol M., Wu Y., Bono F., Devy L., Beck H., Scholz D., Acker T., DiPalma T., Dewerchin M., Noel A., Stalmans I., Barra A., Blacher S., VandenDriessche T., Ponten A., Eriksson U., Plate K.H., Foidart J.M., Schaper W., Charnock-Jones D.S., Hicklin D.J., Herbert J.M.,Collen D., Persico M.G. Synergism between vascular endothelial growth factor and placental growth factor contributes to angiogenesis and plasma extravasation in pathological conditions // Nat. Med. 2001. Vol. 7, № 5. p. 575-583.

32. Carmeliet P. Angiogenesis in life, disease and medicine // Nature. 2005. Vol. 438. P. 932-936.

33. Carson D.D., Farach M.C., Earles D.S., Decker G.L., Lennarz W.J. A monoclonal antibody inhibits calcium accumulation and skeleton formation in cultured embryonic cells of thesea urchin // Cell. 1985. Vol. 41, № 2. P. 639-648.

34. Chai N., Patel Y., Jacobson K., McMahon J., McMahon A., Rappolee D.A. FGF is an essential regulator of the fifth cell division in preimplantation mouse embryos // Dev. Biol. 1998. Vol. 198. P. 105-115.

35. Charnock-Jones D., Sharkey A., Rajput-Williams J., Burch D., Schofield J.P., Fountain S.A., Boocock C.A., Smith S.K. Identification and localization of alternately spliced mRNA's for vascular endothelial growth factorin human uterus and estrogen regulation in endometrial carcinoma cell lines // Biol. Reprod. 1993. Vol. 48. P. 1120-1128.

36. Cho N., Keyes L., Johnson E., Heller J., Ryner L., Karim F., Krasnow M.A. Developmental control of blood cell migration by the Drosophila VEGF pathway // Cell. 2002. Vol. 108, № 6. P. 865-876.

37. Coulier F., Pontarotti P., Roubin R., Hartung H., Goldfarb M., Birnbaum D. Of worms and men: an evolutionary perspective on the fibroblast growth factor (FGF) and FGF receptor families // J. Mol. Evol. 1997. Vol. 44, № 1. P. 43-56.

38. Croce J.C., McClay D.R. Dynamics of Delta/Notch signaling on endomesoderm segregation in the sea urchin embryo // Development. 2010. Vol. 137, № 1. P.83-91.

39. Croce J., Range R., Wu S.Y., Miranda E., Lhomond G., Peng J.C., Lepage T., McClay D.R. Wnt6 activates endoderm in the sea urchin gene regulatory network//Development. 2011. Vol. 138, № 15. P. 3297-3306.

40. Davidson L.A., Koehl M.A., Keller R., Oster G.F. How do sea urchins invaginate? Using biomechanics to distinguish between mechanisms of primary invagination// Development. 1995. Vol. 121. P. 2005-2018.

41. Davidson E.H., Cameron R.A., Ransick A. Specification of cell fate in the sea urchin embryo: summary and some proposed mechanisms // Development. 1998. Vol. 125. P. 3269-3290.

42. Decker G.L., Lennarz W.J. Skeletogenesis in the sea urchin embryo // Development. 1988a. Vol. 103. P. 231-247.

43. Decker G.L., Lennarz W.J. Growth of linear specules in cultured primary mesenchymal cells of sea urchin embryos is bidirectional // Dev. Biol. 1988b. Vol. 126. P. 433^436.

44. Decker G.L., Morrill J.B., Lennarz W.J. Characterization of sea urchin primary mesenchyme cells and spicules during biomineralization in vitro // Development. 1987. Vol. 101. P. 297-312.

45. Dereeper A., Guignon V., Blanc G., Audic S., Buffet S., Chevenet F., Dufayard J.F., Guindon S., Lefort V., Lescot M., Claverie J.M., Gascuel

O. Phylogeny.fr: robust phylogenetic analysis for the non-specialist // Nucleic Acids Res. 2008. Vol. 36. W465^169.

46. DeVore D.L., Horvitz H.R., Stern M.J. An FGF receptor signaling pathway is required for the normal cell migrations of the sex myoblasts in C. elegans hermaphrodites. Cell. 1995. Vol. 83, № 4. P. 611-620.

47. Do C.B., Mahabhashyam M.S.P., Brudno M., Batzoglou S. ProbCons: probabilistic consistency-based multiple sequence alignment // Genome Res. 2005. Vol. 15. P. 330-340.

48. Drawbridge J. The color purple: analyzing alkaline phosphatase expression in experimentally manipulated sea urchin embryos in an undergraduate developmental biology course // Int. J. Dev. Biol. 2003. Vol. 47. P. 161-164.

49. Duchek P., Somogyi K., Jekely G., Jekely G., Rorth P. Guidance of cell migration by the Drosophila PDGF/VEGF receptor // Cell. 2001. Vol. 107, № 1. P. 17-26.

50. Duloquin L., Lhomond G., Gache C. Localized VEGF signaling from ectoderm to mesenchyme cells controls morphogenesis of the sea urchin embryo skeleton // Development. 2007. Vol. 134. P. 2293-2302.

51. Edelman G.M. Cell adhesion and morphogenesis: the regulation hypothesis //Proc. Nat. Acad. Sci. USA. 1984. Vol. 81. P. 1460-1464.

52. Edelman G.M. Modulation mechanisms in cell-cell recognition // Trends Pharmacol. Sci. 1985. Vol. 6. P. 208-214.

53. Eremina V., Sood M., Haigh J., Nagy A., Lajoie G., Ferrara N., Gerber H.P., Kikkawa Y., Miner J.H., Quaggin S.E. Glomerular-specific alterations of VEGF-A expression lead to distinct congenital and acquired renal diseases // J. Clin. Invest. 2003. Vol. 111, № 5. P. 707-716.

54. Ettensohn C.A., McClay D.R. A new method for isolating primary mesenchyme cells of the sea urchin embryo: panning on wheat germ agglutinin-coated dishes. // Exp.Cell Res. 1987. Vol. 168. P. 431^138.

55. Ettensohn C.A., Kitazawa C., Cheers M.S., Leonard J.D., Sharma T. Gene regulatory networks and developmental plasticity in the early sea urchin

embryo: alternative deployment of the skeletogenic gene regulatory network //Development. 2007. Vol. 134. P. 3077-3087.

56. Ettensohn C.A. Lessons from a gene regulatory network: echinoderm skeletogenesis provides insights into evolution, plasticity and morphogenesis //Development. 2009. Vol. 136. P. 11-21.

57. Farach M.C., Valdizan M., Park H.R., Decker G.L., Lennarz W.J. Developmental expression of a cell-surface protein involved in calcium uptake and skeleton formation in sea urchin embryos // Dev. Biol. 1987. Vol. 122. P. 320-331.

58. Ferrara N., Carver-Moore K., Chen H., Dowd M., Lu L., O'Shea K.S., Powell-Braxton L., Hillan K.J., Moore M.W. Heterozygous embryonic lethality induced by targeted inactivation of the VEGF gene // Nature. 1996. Vol. 380. P. 439^142.

59. Ferrara N., Chen H., Davis-Smyth T., Gerber H., Nguyen T., Peers D., Chisholm V., Hillan K.J., Schwall R.H. Vascular endothelial growth factor is essential for corpus luteum angiogenesis // Nat. Med. 1998. Vol. 4. P. 336340.

60. Folkman J., Klagsbrun M. Vascular physiology. A family of angiogenic peptides //Nature. 1987. Vol. 329, № 6141. P. 671-672.

61. Gerber H.P., McMurtrey A., Kowalski J., Yan M., Keyt B.A., Dixit V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor regulates endothelial cell survival through the phosphatidylinositol 3'-kinase/Akt signal transduction pathway. Requirement for Flk-l/KDR activation // J. Biol. Chem. 1998. Vol. 273. P. 30336-30343.

62. Goede V., Schmidt T., Kimmina S., Kozian D., Augustin H.G. Analysis of blood vesselmaturation processes during cyclic ovarian angiogenesis // Lab. Invest. 1998. Vol. 78, № 11. P. 1385-1394.

63. Gospodarowicz D. Localization of a fibroblast growth factor and its effect alone and with hydrocortisone on 3T3 cell growth // Nature. 1974. Vol. 249. P. 123-127.

64. Grant S.R., Farach M.C., Decker G.L., Woodward H.D., Farach H.A., Lennarz W.J. Developmental expression of cell-surface (glyco)proteins involved in gastrulation and spicule formation in sea urchin embryos // Cold Spring Harb. Symp. Quant. Biol. 1985. Vol. 50. P. 91-98.

65. Growth factors: a practical approach // edited by I. McKlay and I. Leigh (Practical approach series) Oxford University Press Inc., New Work. 1993. 272 p.

66. Gustafson T., Hasselberg I. Alkaline phosphatase activity in developing sea urchin eggs // Exp. Cell Res. 1950. Vol.1, №3. P. 371-375.

67. Itoh N. The Fgf Families in Humans, Mice, and Zebrafish: Their evolutional processes and roles in development, metabolism, and disease // Biol. Pharm. Bull. 2007. Vol. 30, № 10. P. 1819-1825.

68. Hansen E.L. A cell line from embryos of Biomphalaria glabrata (Pulmonata): Establishment and characteristics. Invertebrate Tissue Culture, Reseach Apprication, Academic Press, London and N.Y. 1976. P.75-99.

69. Hiratsuka S., Minowa O., Kuno J., Noda T., Shibuya M. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. Vol. 95, № 16. P. 9349-9354.

70. Hosang M. Suramin binds to platelet-derived growth factor and inhibits its biological activity // J. Cell Biochem. 1985. Vol. 29. P. 265-273.

71. Hou J.Z., Kan M.K., McKeehan K., McBride G., Adams P., McKeehan W.L. Fibroblast growth factor receptor from liver in three structural dmains. // Science. 1991. Vol. 251. P. 665-668.

72. Houck K.A., Ferrara N., Winer J., Cachianes G., Li B., Leung D.W. The vascular endothelial growth factor family: identification of a fourth molecular species and characterization of alternative splicing of RNA // Mol. Endocrinol. 1991. Vol. 12. P. 1806-1814.

73. Hunter T., Cooper J.A. Protein-tyrosine kinases // Annu. Rev. Biochem. 1985. Vol. 54. P. 897-930.

74. Hynes R.O. Fibronectins. NewYork: Springer, 1990. 546 p.

75. lilies M.R., Peeler M.T., Dechtiaruk A.M., Ettensohn C.A. Identification and developmental expression of new biomineralization proteins in the sea urchin Strongylocentrotus purpuratus II Dev. Genes. Evol. 2002. Vol. 9. P. 419-431.

76. Iwata M., Nakano E. Fibronectin from ovary of the sea urchin, Pseudocentrotus depressus. Wilhelm Roux's Arch. Dev. Biol. 1981. Vol. 190. P. 83-86.

77. Iwata M., Nakano E. A large calcium-binding protein associated with the larval spicules of the sea urchin embryo // Cell Differ. 1986. Vol. 19, № 4. P. 229-236.

78. Izadnegahdar M.F., Rathanaswami P., Shah R.M. Effects of EGF and TGFbetal on c-myc gene expression and DNA synthesis in embryonic hamster palate mesenchymal cells // Anat. Rec. 1999. Vol. 254, № 4. P. 453464.

79. Johnson D.E., Lu J., Chen H., Werner S., Williams L.T. The human fibroblast growth factor receptor genes: a common structural arrangement underlies the mechanisms for generating receptor forms that differ in their third immunoglobulin domain // Mol. Cell. Biol. 1991. Vol. 11, № 9. P. 4627^1634.

80. Johnson D.E., Williams L.T. Structural and functional diversity in the FGF receptor multigene family // Adv. Cancer Res. 1993. Vol. 60. P. 1—41.

81. Jonas E.A., Knox R.J., Kaczmarek L.K., Schwartz J.H., Solomon D.H. Insulin receptor in Aplysia neurons: Characterization, molecular cloning, and modulation of ion currents // J. Neurosci.1996. Vol. 16. P. 1645-1658.

82. Kamalia N., McCulloch C.A.G., Tenenbaum H.C., Limeback H. Direct flow cytometric quantification of alkaline phosphatase activity in rat bone marrow stromal cells // J. Histochem. Cytochaniary. 1992. Vol. 40, № 7. p. 10591065.

83. Kaneko H., Kawahara Y., Okamoto M. Study on the nature of starfish larval muscle cells in vitro//Zoolog. Sci. 1997. Vol. 14. P. 287-296.

84. Kasahara Y., Tuder R.M., Taraseviciene-Stewart L., Le Cras T.D., Abman S., Hirth P.K., Waltenberger J., Voelkel N.F. Inhibition of VEGF receptors causes lung cell apoptosis and emphysema // J. Clin. Invest. 2000. Vol. 106, № 11. P. 1311-1319.

85. Katow H., Aizu G. Essential role of growth factor receptor-mediated signal transduction through the mitogen-activated protein kinase pathway in early embryogenesis of the echinoderm // Dev. Growth Differ. 2002. Vol. 44. P. 437—455.

86. Keegan K., Johnson D.E., Williams L.T., Hayman M.J. Characterization of the FGFR-3 gene and its gene product // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1991. Vol. 638. P. 400^102.

87. Kendall R.L., Thomas K.A. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. Vol. 90, № 22. P. 10705-10709.

88. Killian C.E., Croker L., Wilt F.H. SpSM30 gene family expression patterns in embryonic and adult biomineralized tissues of the sea urchin, Strongylocentrotus purpuratus II Gene Expr. Patterns. 2010. Vol. 10. P. 135139.

89. King N., Carroll S.B. A receptor tyrosine kinase from choanoflagellates: molecular insights into early animal evolution // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. Vol. 98. P. 15032-15037.

90. King N. The unicellular ancestry of animal development // Developmental Cell. 2004. Vol. 7. P. 313-325.

91. Kingsley R.J., Watabe N. Calcium uptake in the gorgorian Leptogorgia virgulata. The effects of ATPase inhibitors // Comp. Biochem.Physiol. 1984. Vol. 79A. P. 487^91.

92. Kitajima T. Differentiation of sea urchin micromeres: Correlation between specific protein synthesis and spicule formation // Develop. Growth Differ. 1986. Vol. 28. P. 233-242.

93. Kiyomoto M., Zito F., Sciarrino S., Matranga V. Commitment and response to inductive signals of primary mesenchyme cells of the sea urchin embryo // Dev. Growth. Differ. 2004. Vol. 46, № 1. P. 107-114.

94. Kiyomoto M., Izum-Kurotani A., Eguchi H., Yamaguchi M. The effect of hypergravity on the spicule formation in the sea urchin development // Space Utiliz Res. 2007. Vol. 27. P. 332-333.

95. Knapp R.T., Wu C.H., Mobilia K.C., Joester D. Recombinant sea urchin vascular endothelial growth factor directs single-crystal growth and branching in vitro II J. Am. Chem. Soc. 2012. Vol. 134. P. 17908-17911.

96. Kominami T., Takata H. Gastrulation in the sea urchin embryo: a model system for analyzing the morphogenesis of a monolayered epithelium // Dev. Growth. Differ. 2004. Vol. 46, № 4. P. 309-326.

97. Kondo K., Hiratsuka S., Subbalakshmi E., Matsushime H., Shibuya M. Genomic organization of the fit-1 gene encoding for vascular endothelial growth factor (VEGF) receptor-1 suggests an intimate evolutionary relationship between the 7-Ig and the 5-Ig tyrosine kinase receptors // Gene. 1998. Vol. 208, № 2. P. 297-305.

98. Korpelainen E.I., Karkkainen M.J., Tenhunen A., Lakso M., Rauvala H., Vierula M., Parvinen M., Alitalo K. Overexpression of VEGF in testis and epididymis causes infertility in transgenic mice: evidence for nonendothelial targets for VEGF // J. Cell Biol. 1998. Vol. 143, № 6. P. 1705-1712.

99. Kostich M., English J., Madison V., Gheyas F., Wang L., Qiu P., Greene J., M. Laz T. Human members of the eukaryotic protein kinase family // Genome Biol. 2002. Vol. 3, № 9. research0043.1-research0043.12.

100. Kubota Y., Itoh K. Chemotactic migration of mesencephalic neural crest cells in the mouse // Dev. Dyn. 2000. Vol. 217. P. 170-179.

101. Lambrechts D., Storkebaum E., Morimoto M., Del-Favero J., Desmet F., Marklund S.L., Wyns S., Thijs V., Andersson J., van Marion I., Al-Chalabi A., Bornes S., Musson R., Hansen V., Beckman L., Adolfsson R., Pall H.S., Prats H., Vermeire S., Rutgeerts P., Katayama S., Awata T., Leigh N., Lang-Lazdunski L., Dewerchin M., Shaw C., Moons L., Vlietinck R., Morrison K.E., Robberecht W., Van Broeckhoven C., Collen D., Andersen P.M., Carmeliet P. VEGF is a modifier of amyotrophic lateral sclerosis in mice and humans and protects motoneurons against ischemic death // Nat. Genet. 2003. Vol. 34, № 4. P. 383-394.

102. Lapraz F., Rottinger E., Duboc V., Range R., Duloquin L., Walton K., Wu S.Y., Bradham C., Loza M.A., Hibino T., Wilson K., Poustka A., McClay D., Angerer L., Gache C., Lepage T. RTK and TGF-beta signaling pathways genes in the sea urchin genome // Dev. Biol. 2006. Vol. 300, № l.P. 132-152.

103. Latham V.H., Herrera S., Rostamiani K., Chun H., Oppenheimer S.B. Rapid identification of lectin receptors and their possible function in sea urchin cell systems // Acta Histochem. 1995. Vol. 97, № 4. P. 373-382.

104. Lemmon M.A., Schlessinger J. Regulation of signal transduction and signal diversity by receptor oligomerization // Trends in Biochem. Sci. 1994. Vol. 19. P. 459^163.

105. Lesser M.P., Carleton K.L., Bottger S.A., Barry T.M., Walker C.W. Sea urchin tube feet are photosensory organs that express a rhabdomeric-like opsin andPAX6 //Proc. R. Soc. B 2011. Vol. 278. P. 3371-3379.

106. Leung D.W., Cachianes G., Kuang W.J., Goeddel D.V., Ferrara N. Vascular endothelial growth factor is a secreted angiogenic mitogen // Science. 1989. Vol. 246, № 4935. P. 1306-1309.

107. Li E., Materna S.C., Davidson E.H. Direct and indirect control of oral ectoderm regulatory gene expression by Nodal signaling in the sea urchin embryo // Dev. Biol. 2012. Vol. 369, № 2. P. 377-385.

108. Lin X. Functions of heparan sulfate proteoglycans in cell signaling during development // Development. 2004. Vol. 131. P. 6009-6021.

109. Luo H., Kimura K., Aoki M., Hirako M. Effect of vascular endothelial growth factor on maturation, fertilization and developmental competence of bovine oocytes // J. Vet. Med. Sci. 2002. Vol. 64, № 9. P. 803-806.

110. Maharaj A.S., Saint-Geniez M., Maldonado A.E., D'Amore P.A. Vascular endothelial growth factor localization in the adult // Am. J. Pathol. 2006. Vol. 168. P. 639-648.

111. Manning G., Whyte D.B., Martinez R., Hunter T., Sudarsanam S. The protein kinase complement of the human genome // Science. 2002. Vol. 298, № 5600. P. 1912-1934.

112. Masui M., Kominami T. Change in the adhesive properties of blastomeres during early cleavage stages in sea urchin embryo // Develop. Growth Differ. 2001. Vol. 43. P. 43-53.

113. Matranga V., Di Ferro D., Cervello M., Zito F., Nakano E. Adhesion of sea-urchin embryonic cells to substrata coated with cell adhesion molecules // Biol. Cell. 1991. Vol. 71, № 3. P. 289-291.

114. Matz M., Shagin D., Bogdanova E., Britanova O., Lukyanov S., Diatchenko L., Chenchik A. Amplification of cDNA ends based on template-switching effect and step-out PCR // Nucleic Acids Res. 1999. Vol. 27. P. 1558-1560.

115. McCoon P.E., Angerer R.C., Angerer L.M. SpFGFR, a new member of the fibroblast growth factor receptor family, is developmentally regulated during early sea urchin development // J. Biol. Chem. 1996. Vol. 271, № 33. P. 20119-20125.

116. McCoon P.E., Blackstone E., Angerer R.C., Angerer L.M. Sea urchin FGFR muscle-specific expression: posttranscriptional regulation in embryos and adults // Dev. Biol. 1998. Vol. 200, № 2. P. 171-181.

117. McDonald N.Q., Hendrickson W.A. A structural superfamily of growth factors containing a cystine knot motif // Cell. 1993. Vol. 73, № 3. P. 421^124.

118. Mintz G.R., Lennarz W.J. Spicule formation by cultured embryonic cells from the sea urchin // Cell Diff. 1982. Vol. 11. P. 331-333.

119. Mitrani E., Gruenbaum Y., Shohat H., Ziv T. Fibroblast growth factor during mesoderm induction in the early chick embryo // Development. 1990. Vol. 109. P. 387-393.

120. Morino Y., Koga H., Tachibana K., Shoguchi E., Kiyomoto M., Wada H. Heterochronic activation of VEGF signaling and the evolution of the skeleton in echinoderm pluteus larvae // Evol. Dev. 2012. Vol. 14, № 5. P. 428-436.

121. Moscatelli D. High and low affinity binding sites for basic fibroblast growth factor on cultured cells: absence of a role for low affinity binding in the stimulation of plasminogen activator production by bovine capillary endothelial cells // J. Cell Physiol. 1987. Vol. 131, № 1. P. 123-130.

122. Muller Y.A., Christinger H.W., Keyt B.A., de Vos A.M. The crystal structure of vascular endothelial growth factor (VEGF) refined to 1.93 A resolution: multiple copy flexibility and receptor binding // Structure. 1997. Vol. 5, № 10. P. 1325-1338.

123. Nalbandian A., Dettin L., Dym M., Ravindranath N. Expression of vascular endothelial growth factor receptors during male germ cell differentiation in the mouse // Biol. Reprod. 2003. Vol. 69, № 3. P. 985-994.

124. Neufeld G., Cohen T., Gengrinovitch S., Poltorak Z. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors // FASEB J. 1999. Vol. 13, № 1. P. 9-22.

125. Nowak D.G., Woolard J., Amin E.M., Konopatskaya O., Saleem M.A., Churchill A.J., Ladomery M.R., Harper S.J., Bates D.O. Expression of pro- and anti-angiogenic isoforms of VEGF is differentially regulated by splicing and growth factors // J. Cell Sci. 2008. Vol. 121. P. 3487-3495.

126. Obermair A., Obruca A., Pohl M., Kaider A., Vales A., Leodolter S., Wojta J., Feichtinger W. Vascular endothelial growth factor and its receptors in male fertility // Fertil. Steril. 1999. Vol. 72, № 2. P. 269-275.

127. Odintsova N.A., Belogortseva N.I., Ermak A.V. Molchanova V.I., Luk'yanov P.A. Adhesive and growth properties of lectin from the ascidian Didemnum ternatanum on cultivated marine invertebrate cells // BBA-Mol. Cell Biol. 1999. Vol. 1448, № 3. P. 381-389.

128. Ohguro Y., Takata H., Kominami T. Involvement of Delta and Nodal signals in the specification process of five types of secondary mesenchyme cells in embryo of the sea urchin, Hemicentrotus pulcherrimus II Dev. Growth Differ. 2011. Vol. 53, № 1. P. 110-123.

129. Ohwada A., Tsutsumi-Ishii Y., Yoshioka Y., Iwabuchi K., Nagaoka I., Fukuchi Y. Acid exposure potentiates intercellular adhesion molecule-1 and e-cadherin expression on A549 alveolar lining epithelial cells // Exp. Lung Res. 2003. Vol. 29, № 6. P. 389^100.

130. Okazaki K. Spicule formation by isolated micromers of sea urchin embryo // Amer. Zool. 1975. Vol. 15, № 3. P. 567-582.

131. Olfert I.M., Howlett R.A., Tang K., Dalton N.D., Gu Y., Peterson K.L., Wagner P.D., Breen E.C. Muscle-specific VEGF deficiency greatly reduces exercise endurance in mice // J. Physiol. 2009. Vol. 587. P. 17551767.

132. Oliveri P., Carrick D.M., Davidson E.H. A gene regulatory network that directs micromere specification in the sea urchin embryo // Dev. Biol. 2002. Vol. 246. P. 209-228.

133. Olsson A.K., Dimberg A., Kreuger J., Claesson-Welsh L. VEGF receptor signalling—in control of vascular function // Nat. Rev. Mol. Cell Biol. 2006. Vol. 7. P. 359-371.

134. Ornitz D., Itoh N. Fibroblast growth factors // Genome Biol. 2001. Vol. 2, № 3. P 3005.1-3005.12.

135. Ozeki Y., Matsui T., Titani K. Cell adhesive activity of two animal lectins through different recognition mechanisms // FEBS Lett. 1991. Vol. 30. P. 2391-2394.

136. Pampori N., Hato T., Stupack D.G., Aidoudi S., Cheresh D.A., Nemerow G.R., Shattil S.J. Mechanisms and consequences of affinity modulation of integrin alpha(V)beta(3) detected with a novel patch-engineered monovalent ligand // J. Biol. Chem. 1999. Vol. 274, № 31. P. 21609-21616.

137. Page L., Benson S. Analysis of competence in cultured sea urchin micromeres // Exp. Cell Res. 1992. Vol. 203, № 2. P. 305-311.

138. Peled-Kamar M., Hamilton P., Wilt F.H. Spicule matrix protein LSM34 is essential for biomineralization of the sea urchin spicule // Exp. Cell Res. 2002. Vol. 272, № 1. P. 56-61.

139. Pfohl R.J. Changes in alkaline phosphatase during the early development of the sea urchin, Arbacia punctulata II Exp. Cell Res. 1965. Vol. 39. P. 496-503.

140. Popovici C., Isnardon D., Birnbaum D., Roubin R. Caenorhabditis elegans receptors related to mammalian vascular endothelial growth factor receptors are expressed in neural cells // Neurosci. Lett. 2002. Vol. 329, № 1. P.116—120.

141. Popovici C., Roubin R., Coulier F., Birnbaum D. An evolutionary history of the FGF superfamily // BioEssays. 2005. Vol. 27. P.849-857.

142. Powers C.J., McLeskey S.W., Wellstein A. Fibroblast growth factors, their receptors and signaling // Endocr. Relat. Cancer. 2000. Vol. 7. P. 165— 197.

143. Pugh C.W., Ratcliffe P.J. Regulation of angiogenesis by hypoxia: role of the HIF system // Nat. Med. 2003. Vol. P. 9677-9684.

144. Qiu Y., Bevan H., Weeraperuma S., Wratting D., Murphy D., Neal C.R., Bates D.O., Harper S.J. Mammary alveolar development during

lactation is inhibited by the endogenous antiangiogenic growth factor isoform, VEGF165b // FASEB J. 2008. Vol. 22. P. 1104-1112.

145. Ramachandran R.K., Seid C.A., Lee H., Tomlinson C.R. PDGF-BB and TGF-alpha rescue gastrulation, spiculogenesis, and LpSl expression in collagen-disrupted embryos of the sea urchin genus Lytechinus II Mech. Dev. 1993. Vol. 44. P. 33-40.

146. Ramachandran R.K., Govindarajan V., Seid C.A., Patil S., Tomlinson C.R. Role for platelet-derived growth factor-like and epidermal growth factor-like signaling pathways in gastrulation and spiculogenesis in the Lytechinus sea urchin embryo // Dev. Dyn. 1995. Vol. 204, № 1. P. 77-88.

147. Ramachandran R.K., Wikramanayake A.H., Uzman J. A., Govindarajan V., Tomlinson C.R. Disruption of gastrulation and oral-aboral ectoderm differentiation in the Lytechinus pictus embryo by a dominant/negative PDGF receptor // Development. 1997. Vol. 124. P. 23552364.

148. Range R.C., Angerer R.C., Angerer L.M. Integration of canonical and noncanonical Wnt signaling pathways patterns the neuroectoderm along the anterior-posterior axis of sea urchin embryos // PLoS Biol. 2013. Il(l):el001467. doi: 10.1371/journal.pbio. 1001467.

149. Ridgway R.L., Syed N.I., Lukowiak K., Bulloch A.G. Nerve growth factor (NGF) induces sprouting of specific neurons of the snail, Lymnaea stagnalis II J. Neurobiol. 1991. Vol. 22, № 4. P. 377-390.

150. Rinkevich B. Marine invertebrate cell cultures: new millennium trends //Mar. Biotechnol. 2005. Vol. 7, № 5. P. 429^139.

151. Rinkevich B. Cell cultures from marine invertebrates: new insights for capturing endless sternness // Mar. Biotechnol. 2011. Vol. 13. P. 345-354.

152. Robinson M. An Essential Role for FGF Receptor signaling in lens development // Semin. Cell Dev. Biol. 2006. Vol. 17, № 6. P. 726-740.

153. Ronquist F., Huelsenbeck J.P. MrBayes 3: Bayesian phylogenetic inference under mixed models // Bioinformatics. 2003. Vol. 9. P. 15721574.

154. Ronquist F., Teslenko M, van der Mark P., Ayres D.L., Darling A., Hohna S., Larget B., Liu L., Suchard M.A., Huelsenbeck J.P. MrBayes 3.2: efficient Bayesian phylogenetic inference and model choice across a large model space // Syst. Biol. 2012. Vol. 61. P. 539-542.

155. Rottinger E., Saudemont A., Duboc V., Besnardeau L., McClay D., Lepage T. FGF signals guide migration of mesenchymal cells, control skeletal morphogenesis and regulate gastrulation during sea urchin development // Development. 2008. Vol. 135, № 2. P. 353-365.

156. Rousseau F., Bonaventure J., Legeai-Mallet L., Pelet A., Rozet J.M., Maroteaux P., Le Merrer M., Munnich A. Mutations in the gene encoding fibroblast growth factor receptor-3 in achondroplasia // Nature. 1994. Vol. 371, № 6494. P. 252-254.

157. Rubin J.S., Osada H., Finch P.W., Taylor W.G., Rudikoff S., Aaronson S.A. Purification and characterization of a newly identified growth factor specific for epithelial cells // PNAS. 1989. Vol. 86. P. 802-806.

158. Ruoslahti E., Pierschbacher M.D. New perspectives in cell adhesion: RGD and integrins // Science. 1987. Vol. 238. P. 491^497.

159. Runnstrom J. The vitelline membrane and cortical particles in sea urchin eggs and their function in maturation and fertilization // Advanc. Morphog. 1966. Vol. 5. P. 221-324.

160. Schlessinger J., Plotnikov A.N., Ibrahimi O.A., Eliseenkova A.V., Yeh B.K., Yayon A., Linhardt R.J., Mohammadi M. Crystal structure of a ternary FGF-FGFR-heparin complex reveals a dual role for heparin in FGFR binding and dimerization. Mol. Cell. 2000. Vol. 3. P. 743-750.

161. Schwartz M.A., Schaller M.D., Ginsberg M.H. Integrins: Emerging paradigms of signal transduction // Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 1995. Vol. 11. P. 549-599.

162. Seipel K., Eberhardt M., Muller P., Pescia E., Yanze N., Schmid V. Homologs of vascular endothelial growth factor and receptor, VEGF and VEGFR, in the jellyfish Podocoryne carnea II Dev. Dyn. 2004. Vol. 231. P. 303-312.

163. Senger D.R., Galli S.J., Dvorak A.M., Perruzzi C.A., Harvey V.S., Dvorak H.F. Tumor cells secrete a vascular permeability factor that promotes accumulation of ascites fluid // Science. 1983. Vol. 219. P. 983985.

164. Seto J., Zhang Y., Hamilton P., Wilt F. The localization of occluded matrix proteins in calcareous spicules of sea urchin larvae // J. Struct. Biol. 2004. Vol. l.P. 123-130.

165. Shiomi K., Yamaguchi M. Expression patterns of three Par-related genes in sea urchin embryos // Gene Expr. Patterns. 2008. Vol. 8, № 5. P. 323-330.

166. Slack J.M., Darlington B.G., Heath J.K., Godsave S.F. Mesoderm induction in early Xenopus embryos by heparin-binding growth factors // Nature. 1987. Vol. 326, № 6109. P. 197-200.

167. Sea Urchin Genome Sequencing Consortium, Sodergren E., Weinstock G.M., Davidson E.H., Cameron R.A., Gibbs R.A., Angerer R.C., Angerer L.M., Arnone M.I.,Burgess D.R., Burke R.D., Coffman J.A., Dean M., Elphick M.R., Ettensohn C.A., Foltz K.R., Hamdoun A., Hynes R.O., Klein W.H., Marzluff W., McClay D.R., Morris R.L., Mushegian A., Rast J.P., Smith L.C., Thorndyke M.C., Vacquier V.D., Wessel G.M., Wray G., Zhang L., Elsik C.G., Ermolaeva O., Hlavina W., Hofmann G., Kitts P., Landrum M.J., Mackey A.J., Maglott D., Panopoulou G., Poustka A.J., Pruitt K., Sapojnikov V., Song X., Souvorov A., Solovyev V., Wei Z., Whittaker C.A., Worley K., Durbin K.J., Shen Y., Fedrigo O., Garfield D., Haygood R., Primus A., Satija R., Severson T., Gonzalez-Garay M.L., Jackson A.R., Milosavljevic A., Tong M., Killian C.E., Livingston B.T., Wilt F.H.,Adams N., Belle

R., Carbonneau S., Cheung R., Cormier P., Cosson B., Croce J., Fernandez-Guerra A., Geneviére A.M., Goel M., Kelkar H., Morales J., Mulner-Lorillon O., Robertson A.J., Goldstone J.V., Cole B., Epel D., Gold

B., Hahn M.E., Howard-Ashby M., Scally M., Stegeman J.J., Allgood E.L., Cool J., Judkins K.M., McCafferty S.S., Musante A.M., Obar R.A., Rawson A.P., Rossetti B.J., Gibbons I.R., Hoffman M.P., Leone A., Istrail S., Materna S.C., Samanta M.P., Stole V., Tongprasit W., Tu Q., Bergeron K.F., Brandhorst B.P., Whittle J., Berney K., Bottjer D.J., Calestani C., Peterson K., Chow E., Yuan Q.A., Elhaik E., Graur D., Reese J.T., Bosdet I., Heesun S., Marra M.A.,Schein J., Anderson M.K., Brockton V., Buckley K.M., Cohen A.H., Fugmann S.D., Hibino T., Loza-Coll M., Majeske A.J., Messier C., Nair S.V., Pancer Z., Terwilliger D.P.,Agca C., Arboleda E., Chen N., Churcher A.M., Hallböök F., Humphrey G.W., Idris M.M., Kiyama T., Liang S., Meilott D., Mu X., Murray G., Olinski R.P., Raible F., Rowe M., Taylor J.S., Tessmar-Raible K., Wang D., Wilson K.H., Yaguchi S., Gaasterland T., Galindo B.E., Gunaratne H.J., Juliano C., Kinukawa M., Moy G.W., Neill A.T., Nomura M., Raisch M., Reade A., Roux M.M., Song J.L., Su Y.H., Townley I.K., Voronina E., Wong J.L., Amore G., Branno M., Brown E.R,. Cavalieri V., Duboc V., Duloquin L., Flytzanis C.,Gache

C., Lapraz F., Lepage T., Locascio A., Martinez P., Matassi G., Matranga V., Range R., Rizzo F., Röttinger E., Beane W., Bradham C., Byrum C., Glenn T., Hussain S., Manning G., Miranda E., Thomason R., Walton K., Wikramanayke A., Wu S.Y., Xu R., Brown C.T., Chen L., Gray R.F., Lee P.Y., Nam J., Oliveri P., Smith J., Muzny D., Bell S., Chacko J., Cree A., Curry S., Davis C., Dinh H., Dugan-Rocha S., Fowler J., Gill R., Hamilton C., Hernandez J., Hiñes S, Hume J., Jackson L., Jolivet A., Kovar C., Lee S., Lewis L., Miner G., Morgan M., Nazareth L.V., Okwuonu G., Parker D., Pu L.L., Thorn R., Wright R. The genome of

the sea urchin Strongylocentrotus purpuratus II Science. 2006. Vol. 314, № 5801. P. 941-952.

168. Sondell M., Sundler F., Kanje M. Vascular endothelial growth factor is a neurotrophic factor which stimulates axonal outgrowth through the flk-1 receptor // Eur. J. Neurosci. 2000. Vol. 12. P. 4243^1254.

169. Stalmans I., Ng Y.S., Rohan R., Fruttiger M., Bouché A., Yuce A., Fujisawa H., Hermans B., Shani M., Jansen S., Hicklin D., Anderson D.J., Gardiner T., Hammes H.P., Moons L., Dewerchin M., Collen D., Carmeliet P., D'Amore P.A. Arteriolar and venular patterning in retinas of mice selectively expressing VEGF isoforms // J. Clin. Invest. 2002. Vol. 109, № 3. P. 327-336.

170. Stein C.A. Suramin: a novel antineoplastic agent with multiple potential mechanisms of action // Cancer Res. 1993. Vol. 53. P. 2239-2248.

171. Stark K.L., McMahon J.A., McMahon A.P. FGFR-4, a new member of the fibroblast growth factor receptor family, expressed in the definitive endoderm and skeletal muscle lineages of the mouse // Development. 1991. Vol. 113, №2. P. 641-651.

172. Sun P.D., Davies D.R. The cystine-knot growth-factor superfamily // Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct. 1995. Vol. 24. P. 269-291.

173. Sun Y., Jin K., Xie L., Childs J., Mao X.O., Logvinova A., Greenberg D.A. VEGF-induced neuroprotection, neurogenesis, and angiogenesis after focal cerebral ischemia // J. Clin. Invest. 2003. Vol. Ill, № 12. P. 18431851.

174. Tanabe J., Fujita H., Iwamatsu A., Mohri H., Ohkubo T. Fibronectin inhibits platelet aggregation independently of RGD-sequence // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 27143-27147.

175. Tang K., Breen E.C., Gerber H.P., Ferrara N.M., Wagner P.D. Capillary regression in vascular endothelial growth factor-deficient skeletal muscle // Physiol. Genomics. 2004. Vol. 18, № 1. P. 63-69.

176. Tarsitano M., De Falco S., Colonna V., McGhee J.D., Persico M.G. The C. elegans pvf-1 gene encodes a PDGF/VEGF-like factor able to bind mammalian VEGF receptors and to induce angiogenesis // FASEB J. 2006. Vol. 20, № 2. P. 227-233.

177. Tettamanti G., Grimaldi A., Valvassori R., Rinaldi L., de Eguileor M. Vascular endothelial growth factor is involved in neoangiogenesis in Hirudo medicinalis (Annelida, Hirudinea) // Cytokine. 2003. Vol. 22. P. 168-179.

178. Thisse C., Thisse B. High resolution in situ hybridization on whole-mount zebrafish embryo // Nat. Protoc. 2008. Vol. 3. P. 59-69.

179. Tjwa M., Luttun A., Autiero M., Carmeliet P. VEGF and P1GF: two pleiotropic growth factors with distinct roles in development and homeostasis // Cell Tissue Res. 2003. Vol. 314, № 1. P. 5-14.

180. Torry D.S., Holt V.J., Keenan J.A., Harris G., Caudle M.R., Torry R.J. Vascular endothelial growth factor expression in cycling human endometrium // Fertil. Steril. 1996. Vol. 66, № 1. P. 72-80.

181. Traver D., Zon L.I. Walking the walk: migration and other common themes in blood and vascular development // Cell. 2002. Vol. 108, № 6. P. 731-734.

182. Venkatasubramanian K., Solursh M. Adhesive and migratory behavior of normal and sulfate-deficient sea urchin cells in vitro // Exp. Cell Res. 1984. Vol. 154, № 2. P. 421^131.

183. Walton K.D., Warner J., Hertzler P.H., McClay D.R. Hedgehog signaling patterns mesoderm in the sea urchin // Dev Biol. 2009. Vol. 331, № l. p. 26-37.

184. Waterhouse A.M., Procter J.B., Martin D.M., Clamp M., Barton G.J. Jalview Version 2 - a multiple sequence alignment editor and analysis workbench. Bioinformatics. 2009. Vol. 25. P. 1189-1191.

185. Webb S.E., Lee K.K., Tang M.K., Ede D.A. Fibroblast growth factors 2 and 4 stimulate migration of mouse embryonic limb myogenic cells // Dev. Dyn. 1997. Vol. 209, № 2. P. 206-216.

186. Wessel G.M., McClay D.R. Sequential expression of germ-layer specific molecules in the sea urchin embryo // Dev. Biol. 1985. Vol. Ill, № 2. P. 451—463.

187. Wei Z., Range R., Angerer R., Angerer L. Axial patterning interactions in the sea urchin embryo: suppression of nodal by Wntl signaling // Development. 2012. Vol. 139, № 9. P. 1662-1669.

188. Wiedlocha A., Falnes P.O., Madshus I.H., Sandvig K., Olsnes S. Dual mode of signal transduction by externally added acidic fibroblast growth factor// Cell. 1994. Vol. 76. P. 1039-1051.

189. Wiesmann C., Fuh G., Christinger H.W., Eigenbrot C., Wells J.A., de Vos A.M. Crystal structure at 1.7 A resolution of VEGF in complex with domain 2 of the Flt-1 receptor // Cell. 1997. Vol. 91, № 5. P. 695-704.

190. Wilt F.H. Matrix and mineral in the sea urchin larval skeleton // J. Struct. Biol. 1999. Vol. 126. № 3. P. 216-226.

191. Wilt F.H. Biomineralization of the spicules of sea urchin embryos // Zoolog. Sci. 2002. Vol. 3. P. 253-261.

192. Wilt F.H., Ettensohn C A. The morphogenesis and biomineralization of the sea urchin larval skeleton // In Handbook of Biomineralization (ed. E. Bauerlein), Weinheim: Wiley-VCH Press. 2007. P. 183-210.

193. Woolard J., Wang W.Y., Bevan H.S., Qiu Y., Morbidelli L., Pritchard-Jones R.O., Cui T.G., Sugiono M., Waine E., Perrin R., Foster R., Digby-Bell J., Shields J.D., Whittles C.E., Mushens R.E., Gillatt D.A., Ziche M., Harper S.J., Bates D.O. VEGF165b, an inhibitory vascular endothelial growth factor splice variant: mechanism of action, in vivo effect on angiogenesis and endogenous protein expression // Cancer Res. 2004. Vol. 64, №21. P. 7822-7835.

194. Wray G.A., Lowe C.J. Developmental regulatory genes and echinoderm evolution// Syst. Biol. 2000. Vol. 49, № 1. P. 28-51.

195. Xiao L., Yuan X., Sharkis S.J. Activin A maintains self-renewal and regulates fibroblast growth factor, Wnt, and bone morphogenic protein

pathways in human embryonic stem cells // Stem Cells. 2006. Vol. 24, № 6. P. 1476-1486.

196. Yajima M., Kiyomoto M. Study of larval and adult skeletogenic cells in developing sea urchin larvae // Biol. Bull. 2006. Vol. 211. P. 183-192.

197. Yan G., Fucabori Y., McBride G., Nikolaropolous S., McKeehan W.L. Exon switching and activation of stromal and embryonic fibroblast growth factor (FGF)-FGF receptor genes in prostate epithelial cells accompany stromal independence and malignancy // Mol. Cell. Biol. 1993. Vol. 13. P. 4513^4522.

198. Zhang X., Groopman J.E., Wang J.F. Extracellular matrix regulates endothelial functions through interaction of VEGFR-3 and integrin alpha5betal // J. Cell Physiol. 2005. Vol. 202, №1.P. 205-214.

199. Zhang J.M., Hoffmann R., Sieber-Blum M. Mitogenic and antiproliferative signals for neural crest cells and the neurogenic action of TGF-betal // Dev. Dyn. 1997. Vol. 208. P. 375-386.

200. Zhuang L., Karotki A.V., Bruecker P., Trueb B. Comparison of the receptor FGFRL1 from sea urchins and humans illustrates evolution of a zinc binding motif in the intracellular domain // BMC Biochem. 2009. Vol. 10: 33.

201. Zhang W.L., Huitorel P., Glass R., Fernandez-Serra M., Arnone M.I., Chiri S., Picard A., Ciapa B. A MAPK pathway is involved in the control of mitosis after fertilization of the sea urchin egg // Dev. Biol. 2005. Vol. 282, № l.P. 192-206.

Последовательность кДНК Si-Vegf2

124